CN113521085A - 亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用 - Google Patents

亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用，属于生物医药技术领域。多囊卵巢综合征大鼠模型试验证明，亚麻木酚素干预后，多囊卵巢综合征大鼠的动情周期节律紊乱及卵巢损伤得到改善，并且肠道菌群和生殖道菌群发生改变，说明亚麻木酚素能够通过调节肠道/生殖道菌群来改善多囊卵巢综合征。因此，可将亚麻木酚素用作制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物，以缓解多囊卵巢综合征病程的发展。

Description

亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的 药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用。
背景技术
多囊卵巢综合征(Polycystic ovarian syndrome，PCOS)是育龄期女性最常见的内分泌疾病，患者主要表现为生殖障碍、内分泌和代谢紊乱，包括高雄激素血症、高胰岛素血症、血脂异常、胰岛素抵抗(Insulin resistance，IR)、排卵功能障碍、月经不规律和多囊卵巢。最近研究发现，遗传、环境因素和生活方式是多囊卵巢综合征的主要诱因，但确切病因和发病机制仍不能完全明确。流行病学调查结果显示，我国多囊卵巢综合征的总体发病率约为5-10％，如果不及时治疗，可能会增加患2型糖尿病(Type 2diabetes mellitus，T2DM)、心血管疾病(Cardiovascular disease，CVD)、代谢综合征(Metabolic syndrome，MS)和子宫内膜癌等疾病的风险。
肠道是人体与外界环境进行物质和能量交换的重要场所。肠道菌群占人体菌群的80％以上，在食物消化、能量代谢和免疫调控等方面都扮演着重要角色，肠道菌群与多囊卵巢综合征的发生发展密切相关。近年来，研究发现女性生殖道微生物与上皮组织形成黏膜屏障，在女性生殖健康中发挥关键作用。健康育龄期女性的生殖道菌群主要由乳酸杆菌主导，该菌能够促进阴道上皮细胞分泌乳酸，降低pH值以维持阴道的酸性环境，抑制病原菌的增殖，维护机体健康。
目前，主要通过调整月经周期、降低雄激素水平和改善IR治疗多囊卵巢综合征。最常见的方式是采用药物和外科手术治疗，药物多为降雄激素的药物，然而激素治疗存在诸多副作用；外科手术存在有创损伤且并发症较多。因此，寻找新的治疗多囊卵巢综合征的方法具有重大意义。
亚麻木酚素主要以开环异落叶松酚二葡萄糖苷(Secoisolariciresinol diglucoside，SDG)形式存在。研究证实，亚麻木酚素具有缓解机体氧化应激损伤、降低局部炎症、调节胆固醇和葡萄糖代谢、抑制血栓形成的作用。但目前尚未有亚麻木酚素可以调节多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的用途报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：
本发明提供了亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用。
优选的，所述亚麻木酚素通过调节肠道菌群改善多囊卵巢综合征。
优选的，所述肠道菌群包括Firmicutes(厚壁菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)、Parasutterella(副萨特氏菌属)、Bacteroides(拟杆菌属)、Bifidobacterium(双歧杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)、Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)和Allobaculum(异杆菌属)，所述亚麻木酚素能够降低Firmicutes/Bacteroidetes(厚壁菌门/拟杆菌门)的比值，降低Bacteroidetes(拟杆菌门)和Parasutterella(副萨特氏菌属)的相对丰度比例，增加Allobaculum(异杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)、Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)和Bifidobacterium(双歧杆菌属)的相对丰度比例。
优选的，所述亚麻木酚素通过调节生殖道菌群改善多囊卵巢综合征。
优选的，所述生殖道菌群包括Proteobacteria(变形杆菌属)、Lactobacillus(乳酸杆菌属)、Bacteroidetes(拟杆菌门)和Faecalibacterium(粪杆菌属)，所述亚麻木酚素能够降低Proteobacteria(变形杆菌属)和Lactobacillus(乳酸杆菌属)的相对丰度比例，增加Bacteroidetes(拟杆菌门)和Faecalibacterium(粪杆菌属)的相对丰度比例。
一种改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物，所述药物主要由有效量的亚麻木酚素和药学上可接受的辅料制备而成。
优选的，所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、洗剂、搽剂或软膏剂。
由上述技术方案可知，本发明的有益效果是：本发明提供了亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用。本发明证实了亚麻木酚素能够调节多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群。多囊卵巢综合征大鼠模型试验证明，亚麻木酚素干预后，多囊卵巢综合征大鼠的动情周期节律紊乱及卵巢损伤得到改善，并且肠道菌群和生殖道菌群发生改变，说明亚麻木酚素能够通过调节肠道或生殖道菌群来改善多囊卵巢综合征。因此，可将亚麻木酚素用作制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物，以缓解多囊卵巢综合征病程的发展。
附图说明
图1为亚麻木酚素干预对多囊卵巢综合征大鼠的动情周期的影响，注：A-D中原始放大倍数为100×；E-H中纵坐标中1表示动情间期，2表示动情前期，3表示动情期，4表示动情后期。
图2为亚麻木酚素对多囊卵巢综合征大鼠卵巢损伤的影响，注：数据用均数±标准差表示，*P＜0.05，**P＜0.01。
图3为多样性分析亚麻木酚素对多囊卵巢综合征大鼠肠道菌群组成的影响。
图4为亚麻木酚素对多囊卵巢综合征大鼠肠道菌群群落结构的影响。
图5为各组肠道菌群中差异菌的相对丰度比例柱状图，注：数据用均数±标准差表示，*P＜0.05，**P＜0.01。
图6为多样性分析亚麻木酚素对于多囊卵巢综合征大鼠生殖道菌群组成的影响。
图7为亚麻木酚素对多囊卵巢综合征大鼠生殖道菌群群落结构的影响。
图8为各组生殖道菌群中差异菌的相对丰度比例柱状图，注：数据用均数±标准差表示，*P＜0.05，**P＜0.01。
具体实施方式
以下结合本发明的附图，对本发明的技术方案以及技术效果做进一步的详细阐述。
本发明提供了亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用。
进一步的，所述亚麻木酚素通过调节肠道菌群改善多囊卵巢综合征。
进一步的，所述肠道菌群包括Firmicutes(厚壁菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)、Parasutterella(副萨特氏菌属)、Bacteroides(拟杆菌属)、Bifidobacterium(双歧杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)、Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)和Allobaculum(异杆菌属)，所述亚麻木酚素能够降低Firmicutes/Bacteroidetes(厚壁菌门/拟杆菌门)的比值，降低Bacteroidetes(拟杆菌门)和Parasutterella(副萨特氏菌属)的相对丰度比例，增加Allobaculum(异杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)、Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)和Bifidobacterium(双歧杆菌属)的相对丰度比例。
进一步的，所述亚麻木酚素通过调节生殖道菌群改善多囊卵巢综合征。
进一步的，所述生殖道菌群包括Proteobacteria(变形杆菌属)、Lactobacillus(乳酸杆菌属)、Bacteroidetes(拟杆菌门)和Faecalibacterium(粪杆菌属)，所述亚麻木酚素能够降低Proteobacteria(变形杆菌属)和Lactobacillus(乳酸杆菌属)的相对丰度比例，增加Bacteroidetes(拟杆菌门)和Faecalibacterium(粪杆菌属)的相对丰度比例。
一种改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物，所述药物主要由有效量的亚麻木酚素和药学上可接受的辅料制备而成。
进一步的，所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、洗剂、搽剂或软膏剂。
通过下述试验例证实亚麻木酚素的效果：
试验例中用到的亚麻木酚素为市售获得。
试验例1、亚麻木酚素对来曲唑诱导的大鼠多囊卵巢综合征的影响
1.分组给药及多囊卵巢综合征大鼠模型建立
6周龄SPF级雌性SD大鼠(体重193±10g)由宁夏医科大学试验动物中心提供(许可证号：SCXK(宁)2005-0001)，并饲养于该动物中心。相关动物试验通过了宁夏医科大学伦理委员会的审核批准(No.2016-017)。所有大鼠适应性饲养一周后随机分为4组(8只/组，4只/笼)，分别为：阴性对照组(PF/CON)，模型组(PF/MOD)，亚麻木酚素对照组(SDG/CON)，亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)。采用来曲唑造模法建立多囊卵巢综合征大鼠模型。首先，模型组(PF/MOD)，亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)给予来曲唑溶液(2mL/kg/day)灌胃给药21天，阴性对照组(PF/CON)和亚麻木酚素对照组(SDG/CON)灌胃等量1％CMC溶液。造模成功后，阴性对照组(PF/CON)和模型组(PF/MOD)灌胃生理盐水2mL/kg/day，持续8周，亚麻木酚素对照组(SDG/CON)和亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)灌胃SDG溶液2mL/kg/day。
2、亚麻木酚素干预对多囊卵巢综合征大鼠的动情周期的影响
从造模第一天开始到干预结束，每天上午9:00收集各组大鼠阴道涂片并立即进行瑞氏-吉姆萨染色。首先，一人用大拇指和食指固定大鼠的颈部，其余手指固定大鼠背部，另一人提起大鼠尾巴尽可能暴露阴道口。随后用75％的酒精消毒阴道口周围，待其干燥后将无菌棉签用生理盐水浸湿后缓慢插入大鼠阴道，沿阴道侧壁轻轻旋转一周后取出，沿同一方向均匀涂抹在防脱载玻片上，自然风干后快速过火焰固定，以防止细胞变形。瑞氏-吉姆萨染色步骤如下：滴加A液(瑞氏-吉姆萨染色液)约0.5mL于涂片上(1分钟)→滴加B液1mL(磷酸盐缓冲液)，以洗耳球轻轻吹该液面使其充分混合(3-10分钟)→流水冲洗，待其干燥后直接镜检。
结果：为了评估来曲唑造模是否成功，以及亚麻木酚素对多囊卵巢综合征大鼠动情周期的影响，采集大鼠阴道涂片进行瑞氏-吉姆萨染色。结果如图1所示，图1中A为动情前期阴道涂片，B为动情期阴道涂片，C为动情后期阴道涂片，D为动情间期阴道涂片。涂片结果显示，动情前期是大量圆形的有核上皮细胞、少量无核的角化上皮细胞，动情期几乎全为大而扁平无核的角化上皮细胞、少量有核上皮细胞，动情后期有核上皮细胞、角化上皮细胞及白细胞均可见，动情间期为大部分白细胞和少量黏液。进一步绘制了各组大鼠动情周期变化图，如图1E-H所示，E为阴性对照组(PF/CON)大鼠阴道涂片动情周期变化结果，F为模型组(PF/MOD)大鼠阴道涂片动情周期变化结果，G为亚麻木酚素对照组(SDG/CON)大鼠阴道涂片动情周期变化结果，H为亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)大鼠阴道涂片动情周期变化结果。结果显示，阴性对照组(PF/CON)和亚麻木酚素对照组(SDG/CON)大鼠阴道涂片可见周期性变化，一个周期约为4-5天，提示有排卵。在亚麻木酚素干预18天后，模型组(PF/MOD)和亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)大鼠动情周期紊乱，处于持续的动情间期。在亚麻木酚素干预27天后，亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)大鼠逐渐恢复规律的动情周期，在显微镜下观察到了从有核上皮细胞到角化上皮细胞再到白细胞、有核上皮细胞和角化上皮细胞共存的周期性变化，表明亚麻木酚素可以改善来曲唑诱导的多囊卵巢综合征大鼠的动情周期节律紊乱。
3、亚麻木酚素对多囊卵巢综合征大鼠卵巢损伤的影响
为了评估亚麻木酚素对来曲唑诱导的多囊卵巢综合征大鼠卵巢损伤的影响，分别取各组大鼠的卵巢组织制备卵巢石蜡切片,然后将卵巢石蜡切片置于65℃烘干箱中2小时，随后进行HE染色。HE染色具体操作方法如下：
①脱蜡至水：二甲苯I(10分钟)→二甲苯II(10分钟)→100％酒精I(10分钟)→100％酒精II(10分钟)→95％酒精(6分钟)→90％酒精(6分钟)→80％酒精(6分钟)→70％酒精(6分钟)，ddH2O水(3分钟)。
②染色：苏木素染色(8分钟)→自来水流水冲洗(3分钟)→1％盐酸酒精分化(5秒钟)→ddH2O水洗(3分钟)→0.2％氨水反蓝(30秒钟)→水洗(2分钟)→1％伊红染色(4分钟)→ddH2O水(1-2秒钟)。
③梯度脱水：70％酒精(3秒钟)→80％酒精(3秒钟)→90％酒精(3秒钟)→95％酒精(5分钟)→100％酒精II(5分钟)→100％酒精I(5分钟)→二甲苯II(5分钟)→二甲苯I(5分钟)。
④封片及晾片：滴1滴中性树胶在组织中央盖上盖玻片进行封片，确保组织上无气泡后将片子常温、水平放置进行晾片，晾干后在载玻片磨砂处做好标记，注明染色日期及方法。
结果：请参看图2，图2中A-D为原始放大倍数为40×的各组大鼠卵巢HE染色图，E-H为原始放大倍数为100×的各组大鼠卵巢HE染色图，I为各组黄体个数统计图，J为各组囊性卵泡个数统计图。从图中可知，阴性对照组(PF/CON)和亚麻木酚素对照组(SDG/CON)可见各期卵泡，颗粒细胞形态完整、排列整齐，有多个黄体生成，成熟卵泡内可见卵母细胞及放射冠；模型组(PF/MOD)卵巢可见卵泡囊性扩张，卵泡内卵母细胞及放射冠消失，颗粒细胞层变薄甚至消失；亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)卵巢囊性扩张的卵泡数量减少，有多个黄体及正常卵泡生成，颗粒层增厚。总的来说，与阴性对照组(PF/CON)相比，模型组(PF/MOD)黄体数量显著减少，囊性卵泡个数明显增多(P均＜0.01)，表明来曲唑诱导的多囊卵巢综合征大鼠模型排卵功能明显受损。亚麻木酚素干预后增加了黄体的形成，减少了囊性卵泡的数量(P均＜0.05)，说明亚麻木酚素干预在一定程度上减轻了卵巢损伤，部分恢复了排卵功能。
试验例2、亚麻木酚素对于多囊卵巢综合征大鼠肠道菌群的影响
用无RNA酶的EP管收集各组大鼠粪便，采用16S rRNA进行肠道菌群的检测。具体步骤如下：
1.基因组DNA的提取：采用十六烷基三甲基溴化铵法(Cetyl trimethyl ammoniumbromide，CTAB)提取大鼠粪便中基因组DNA。具体步骤如下：
(1)吸取1,000μL CTAB裂解液置于2mL离心管中，加入适量溶菌酶及待测样本混匀后置于65℃水浴锅中，直至样品完全裂解。
(2)离心后吸取上清，加入苯酚、氯仿、异戊醇(三者比例为25:24:1)混匀，4℃13,000×g离心10分钟。
(3)取上清，加入氯仿、异戊醇(二者比例为24:1)混匀，13,000×g离心10分钟。
(4)取上清，加入等体积的异丙醇充分混匀，置于-20℃条件下沉淀2h。
(5)13,000×g离心10分钟，弃上清留沉淀，用1mL75％乙醇洗涤DNA并沉淀2次。
(6)将洗涤后的DNA在室温下风干。
(7)加入蒸馏水溶解DNA样品，可在65℃水浴锅中加速溶解。
(8)在溶解后的样品中加入1μL RnaseA(核糖核酸酶A)消化RNA，37℃孵育15分钟。
(9)通过1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度和浓度。
(10)取适量样品于离心管中，用无菌水将稀释样品至1ng/μL用于后续试验。
2.PCR扩增
(1)模板：稀释后的1ng/μL基因组DNA。
(2)引物：选择16S V3-V4区进行测序分析，使用的引物为F341和R806。341F(5’-CCTAYGGGRBGCASCAG-3’)，806R(5’-GGACTACNNGGGTATCTAAT-3’)。
(3)酶和缓冲液：使用New England Biolabs公司的
Figure BDA0003219174230000092
High-Fide lityPCR Master Mix with GC Buffer。使用高效和高保真酶进行PCR以确保扩增效率和准确性。
表1 PCR反应体系和程序(30μL)
Figure BDA0003219174230000091
反应程序：98℃预变性1分钟；30个循环包括(98℃，10s；50℃，30s；72℃，30s)；72℃，5分钟。
(4)PCR仪：Bio-Rad T100梯度PCR仪。
(5)使用2％浓度的琼脂糖凝胶进行电泳检测PCR产物。
3.PCR产物的混样和纯化:根据PCR产物的浓度进行等质量混样，充分混匀后使用1×TAE浓度、2％琼脂糖胶电泳纯化PCR产物，选择分子量在400bp-450bp之间的目标条带进一步试验。使用Thermo Fisher Scientific公司GeneJ ETTM胶回收试剂盒进行PCR产物纯化。
4.文库构建和上机测序:使用Thermo Fisher Scientific公司Ion Plus Fragment Library Kit 48rxns建库试剂盒进行文库构建，构建好的文库经过Qubit 2.0@Fluorometer定量和文库检测合格后，再经IonS5 TM XL平台上机测序，以产生400/450bp单端读数。
5.信息分析流程:为了使信息分析结果更加准确、可靠，首先对原始数据进行质控、过滤、去嵌合体，得到有效数据。利用Uparse软件(Uparse v7.0.1 001；Tiburon，CA)对每个样本有效数据进行聚类，以≥97％Identity序列聚类成为操作分类单元(Operationaltaxonomic units，OTUs)。基于有效数据进行OTUs聚类和物种分类分析，并将OTUs和物种注释结合，从而得到每个样品的OTUs和分类谱系的基本分析结果。再对OTUs进行丰度、多样性指数等分析，同时对物种注释在各个分类水平上进行群落结构的统计分析。最后，在以上分析基础上进行一系列的基OTUs、物种组成的聚类分析，主坐标分析(Principal Co-ordinates Analysis，PCoA)和无度量多维标定法(Non-Metric Multi-DimensionalScaling，NMDS)统计比较分析，挖掘样品之间的物种组成差异。
结果：请参看图3，首先，利用多样性分析各组肠道微生物群落的构成，并通过PCoA分析和NMDS分析进行评估。图3中A-C为各组间PCoA分析结果，A为PF/CON与PF/MOD，B为PF/MOD与SDG/MOD，C为SDG/CON与SDG/MOD。PCoA分析将群落相似度高的样本聚集在一起，群落结构差异大的样品则会远远分开。PCoA结果显示，模型组(PF/MOD)样本分别与阴性对照组(PF/CON)、亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)距离较远，表明模型组(PF/MOD)大鼠粪便的物种结构组成与阴性对照组(PF/CON)、亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)差别较大，提示模型组(PF/MOD)肠道菌群发生了显著变化，推测肠道菌群稳态被破坏，而给予亚麻木酚素干预后很大程度上影响了肠道菌群的组成。亚麻木酚素对照组(SDG/CON)样本与亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)距离拉近，部分样本聚集在一起，说明亚麻木酚素干预后的肠道菌群物种结构组成逐渐趋于正常，但仍存在较小的差异。NMDS作为非线性模型能够克服线性模型PCoA的缺点，更好地反映生态学数据的非线性结构，通过点与点间的距离反映样本的组间和组内差异。图3中D-F为各组间NMDS分析结果，其中D为PF/CON与PF/MOD，E为PF/MOD与SDG/MOD，F为SDG/CON与SDG/MOD。NMDS结果显示的趋势与PCoA类似。综上，PCoA和NMDS分析结果均表明，模型组(PF/MOD)大鼠肠道菌群组成和比例发生了明显改变，亚麻木酚素干预后可以显著改变模型组(PF/MOD)大鼠肠道菌群，同时不会引起阴性对照组(PF/CON)肠道菌群的大幅度偏移。
图3中G为各组大鼠粪便样本基于OTU的韦恩图，韦恩图结果显示，各组共有的OTUs为636个，阴性对照组(PF/CON)特有的OTUs为83个，模型组(PF/MOD)特有的OTUs为11个，亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)特有的OTUs为52个。亚麻木酚素干预组较模型组OTUs增多，表明亚麻木酚素干预后增加了PCOS大鼠肠道的细菌多样性。图3中H为稀释曲线，稀疏曲线可以直接反映测序数据量的合理性，并间接反映样品中物种的丰富度，当曲线趋向平坦时，说明测序数据量合理。从稀疏曲线可知，当序列数增加到10,000后，各组样本曲线逐渐趋向平坦，说明此次样本测序数据量是合理的。
为了进一步探讨亚麻木酚素对多囊卵巢综合征大鼠肠道菌群物种丰度的作用，分别对门水平和属水平的肠道菌群物种丰度做了分析。请参看图4，图4中A为门水平上的物种相对丰度图，B为属水平上的物种相对丰度图。结果表明，Firmicutes(厚壁菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)和Unidentified_Bacteria(未明确细菌)为优势菌，占全部菌群丰度的90％以上。接着对各组肠道菌群中的差异菌进行分析，如图5所示，图5中A为Firmicutes/Bacteroidetes(厚壁菌门/拟杆菌门)的比值，B为Bacteroides(拟杆菌属)，C为Parasutterella(副萨特氏菌属)，D为Bifidobacterium(双歧杆菌属)，E为Butyrivibrio(丁酸弧菌属)，F为Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)，G为Allobaculum(异杆菌属)。与阴性对照组(PF/CON)相比，模型组(PF/MOD)大鼠肠道菌群中Firmicutes/Bacteroidetes(厚壁菌门/拟杆菌门)的比值降低，Parasutterella(副萨特氏菌属)和Bacteroides(拟杆菌属)的相对丰度比例显著升高(P均＜0.05)，Bifidobacterium(双歧杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)和Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)的相对丰度比例显著降低。与模型组(PF/MOD)相比较，亚麻木酚素干预后降低了Firmicutes/Bacteroidetes(厚壁菌门/拟杆菌门)的比值，降低了Bacteroidetes(拟杆菌门)和Parasutterella(副萨特氏菌属)的相对丰度比例，增加了All obaculum(异杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)、Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)和Bifidobacterium(双歧杆菌属)的相对丰度比例。上述结果说明，通过亚麻木酚素干预可以调节多囊卵巢综合征大鼠肠道菌群。
试验例3、亚麻木酚素对于多囊卵巢综合征大鼠生殖道菌群的影响
用无RNA酶的EP管收集各组大鼠阴道分泌物，采用16S rRNA进行肠道菌群的检测。生殖道菌群的检测方法同试验例2中肠道菌群的检测方法相同。
结果：请参看图6，首先采用多样性分析亚麻木酚素对于多囊卵巢综合征大鼠生殖道菌群组成的影响，并通过PCoA分析和NMDS分析进行评估。图6中A-C为各组间PCoA分析结果，A为PF/CON与PF/MOD，B为PF/MOD与SDG/MOD，C为SDG/CON与SDG/MOD。PCoA分析结果显示，模型组(PF/MOD)样本分别与阴性对照组(PF/CON)和亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)距离较远，说明模型组大鼠生殖道菌群结构组成与阴性对照组、亚麻木酚素干预模型组有很大差异，提示模型组生殖道菌群结构发生了明显改变，并且在给予亚麻木酚素干预后很大程度上再一次改变了其菌群结构。亚麻木酚素对照组(SDG/CON)样本与亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)部分样本融合在一起，说明亚麻木酚素干预后的生殖道菌群有向正常菌群改变的趋势。NMDS分析结果(图6D-F)与PCoA结果类似。PCoA和NMDS分析结果均表明，模型组(PF/MOD)大鼠肠道菌群组成和比例发生了明显改变，亚麻木酚素干预后可以显著改变模型组(PF/MOD)大鼠生殖道菌群。
图6中G为各组大鼠阴道分泌物样本基于OTU的韦恩图，韦恩图结果显示，各组共有的OTUs数目为675个，模型组(PF/MOD)特有的OTUs为103个，亚麻木酚素干预模型组(SDG/MOD)特有的OTUs为375个，表明亚麻木酚素干预后增加了多囊卵巢综合征大鼠生殖道的细菌多样性。此外，稀释曲线结果(图6H)表明该样本测序数据量是合理的。
进一步的，分析了各组大鼠生殖道菌群在门水平和属水平的差异。结果如图7所示，图7中A为门水平上的物种相对丰度图，B为属水平上的物种相对丰度图。接着对肠道菌群中的差异菌进行分析，如图8所示，图8中A为Proteobacteria(变形杆菌属)，B为Bacteroidetes(拟杆菌门)，C为Faecalibacterium(粪杆菌属)，D为Lactobacillus(乳酸杆菌属)，E为Streptococcus(链球菌属)。与阴性对照组(PF/CON)相比，模型组(PF/MOD)Bacteroidetes(拟杆菌门)和Lactobacillus(乳酸杆菌属)的相对丰度比例显著降低(P＜0.05)，Streptococcus(链球菌属)的相对丰度比例显著升高(P＜0.05)。和模型组(PF/MOD)相比，亚麻木酚素干预后大鼠生殖道菌群中Bacteroidetes(拟杆菌门)和Faecalibacterium(粪杆菌属)的相对丰度均显著升高(P＜0.05)，Proteobacteria(变形杆菌属)和Lactobacillus(乳酸杆菌属)的相对丰度降低(P＜0.05)。说明亚麻木酚素能够调节多囊卵巢综合征生殖道菌群。
综上，由上述试验例可知，本发明采用来曲唑造模法建立多囊卵巢综合征大鼠模型，使用亚麻木酚素进行干预，通过瑞氏-吉姆萨染色和HE染色检测多囊卵巢综合征大鼠动情周期情况和卵巢损伤情况，发现亚麻木酚素能够改善多囊卵巢综合征大鼠动情周期的节律紊乱及减轻卵巢损伤；进一步通过16s rRNA检测分析肠道菌群和生殖道菌群的丰度和多样性，发现亚麻木酚素能够使肠道菌群中Firmicutes/Bacteroidete(厚壁菌门/拟杆菌门)的比值降低，Bacteroidetes(拟杆菌门)和Parasutterella(副萨特氏菌属)的相对丰度比例降低，Allobaculum(异杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)、Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)和Bifidobacterium(双歧杆菌属)的相对丰度比例增加，并且亚麻木酚素能够使多囊卵巢综合征大鼠生殖道菌群中Proteobacteria(变形杆菌属)和Lactobacillus(乳酸杆菌属)的相对丰度比例降低，Bacteroidetes(拟杆菌门)和Faecaliba cterium(粪杆菌属)的相对丰度比例增加，说明亚麻木酚素能够通过调节肠道或生殖道菌群来改善多囊卵巢综合征。因此，可将亚麻木酚素用作制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物，以缓解多囊卵巢综合征病程的发展。所述药物主要由有效量的亚麻木酚素和药学上可接受的辅料按常规制备方法制备而成。药物的剂型可以是片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、洗剂、搽剂或软膏剂。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。

Claims (7)

1.亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用，其特征在于：所述亚麻木酚素通过调节肠道菌群改善多囊卵巢综合征。
3.如权利要求2所述的亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用，其特征在于：所述肠道菌群包括Firmicutes(厚壁菌门)、Bacteroidetes(拟杆菌门)、Parasutterella(副萨特氏菌属)、Bacteroides(拟杆菌属)、Bifidobacterium(双歧杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)、Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)和Allobaculum(异杆菌属)，所述亚麻木酚素能够降低Firmicutes/Bacteroidetes(厚壁菌门/拟杆菌门)的比值，降低Bacteroidetes(拟杆菌门)和Parasutterella(副萨特氏菌属)的相对丰度比例，增加Allobaculum(异杆菌属)、Butyrivibrio(丁酸弧菌属)、Ruminiclostridium(瘤胃梭菌属)和Bifidobacterium(双歧杆菌属)的相对丰度比例。
4.如权利要求1所述的亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用，其特征在于：所述亚麻木酚素通过调节生殖道菌群改善多囊卵巢综合征。
5.如权利要求4所述的亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用，其特征在于：所述生殖道菌群包括Proteobacteria(变形杆菌属)、Lactobacillus(乳酸杆菌属)、Bacteroidetes(拟杆菌门)和Faecalibacterium(粪杆菌属)，所述亚麻木酚素能够降低Proteobacteria(变形杆菌属)和Lactobacillus(乳酸杆菌属)的相对丰度比例，增加Bacteroidetes(拟杆菌门)和Faecalibacterium(粪杆菌属)的相对丰度比例。
6.一种改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物，其特征在于：所述药物主要由有效量的亚麻木酚素和药学上可接受的辅料制备而成。
7.如权利要求6所述的改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物，其特征在于：所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、洗剂、搽剂或软膏剂。
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