CN113797240B - 一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用 - Google Patents

一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113797240B
CN113797240B CN202111225725.7A CN202111225725A CN113797240B CN 113797240 B CN113797240 B CN 113797240B CN 202111225725 A CN202111225725 A CN 202111225725A CN 113797240 B CN113797240 B CN 113797240B
Authority
CN
China
Prior art keywords
extract
extraction
total polyphenol
ethyl acetate
medicament
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111225725.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113797240A (zh
Inventor
王志尧
王韬
林显光
常霞
王伟
姜晓
陈飞
罗远情
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan Napu Biotechnology Co ltd
Henan Academy of Sciences
Original Assignee
Henan Napu Biotechnology Co ltd
Henan Academy of Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan Napu Biotechnology Co ltd, Henan Academy of Sciences filed Critical Henan Napu Biotechnology Co ltd
Priority to CN202111225725.7A priority Critical patent/CN113797240B/zh
Publication of CN113797240A publication Critical patent/CN113797240A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113797240B publication Critical patent/CN113797240B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/47—Euphorbiaceae (Spurge family), e.g. Ricinus (castorbean)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/15—Preparation or pretreatment of starting material involving mechanical treatment, e.g. chopping up, cutting or grinding
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/17—Preparation or pretreatment of starting material involving drying, e.g. sun-drying or wilting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/35—Extraction with lipophilic solvents, e.g. Hexane or petrol ether
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用，属于药物技术领域。本发明意外发现白桐树总多酚提取物可以抑制L‑型电压门控性钙离子通道活性，能用于治疗钙通道依赖性心律失常、心绞痛、高血压等疾病。本发明还提供了所述白桐树总多酚提取物的制备方法，其制备工艺简单、方便。

Description

一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的 应用
技术领域
本发明属于药物技术领域，具体涉及一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用。
背景技术
白桐树Claoxylon indicum(Reinw.ex Bl.)Hassk.，又名丢了棒、刁了棒、追风棍、咸鱼头大叶大青、赶风债、赶风柴、追风根、美巧怀，为大戟科(Euphorbiac eae)白桐树属(Claoxylon A.Juss.)植物，主产于广东、海南、广西、云南等地，味辛微苦，有小毒，性平，归脾、肾经，功效祛风除湿，消肿止痛，《生草药性备要》记载其“祛风湿脚痛，敷跌打，消肿痛”，可用于风湿类风湿性关节炎，腰腿痛，跌打肿痛，脚气水肿，还可以用于治烧、烫伤，外伤出血，作为一种壮族药物，在民间多用于风湿类风湿骨病的治疗。《中国药典》(1977年版)、《广西壮族自治区壮药质量标准》、《湖南中药饮片炮制规范》(2010年版)、《甘肃省中药饮片炮制规范》(1980年版)等法定规范中均有收载白桐树作为临床药物使用，在治疗风湿类风湿性关节炎及其骨病方面白桐树均有使用，如中华跌打丸(中国药典2010年版一部)、中华跌打酒(卫生部药品标准中药成方制剂第十九册)、伤筋正骨酊(国家中成药标准汇编骨伤科分册)、新力正骨喷雾剂(国家中成药标准汇编骨伤科分册)、驳骨水(卫生部药品标准中药成方制剂第十一册)等多种中成药处方及许多壮族药方都运用了白桐树这味药。
钙离子通道广泛分布于机体的脑、心脏、平滑肌以及内分泌细胞等组织中,并在基因表达、肌肉收缩和荷尔蒙的释放等多种生命活动中扮演着重要角色，也与多种疾病有关，钙通道活性抑制剂或激活剂在心血管疾病、冠心病、动脉粥样硬化、晚期肾衰竭、神经疾病、慢性疼痛、急性疼痛或炎性疾病的治疗中发挥着重要作用。根据激活方式不同，钙通道分为电压依赖式钙通道和受体操纵式钙通道，其中电压依赖式钙通道是Ca2+内流的主要途径。而根据电生理和药理学特性不同，电压依赖式钙通道分为L、T、N、P/Q和R等亚型，不同亚型的通道在电压和时间依赖性、电导和药理等方面的特性各不相同，其中L-型钙通道，是细胞兴奋时外钙内流的主要途径。Ca2+作为重要的细胞内第二信使，通过L-型钙通道调节许多细胞反应与活动，并参与肌肉收缩、心血管系统功能调节等。
目前，尚没有研究表明白桐树总多酚提取物对钙离子通道的抑制作用。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用。
本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明提供白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用，特别是在制备抑制L-型电压门控性钙离子通道药物中的应用。
所述的抑制钙离子通道药物为治疗钙通道依赖性心律失常、心绞痛、高血压、风湿、类风湿等疾病的药物。
所述白桐树总多酚提取物中多酚含量为：70％～80％，优选为71％～75％。
优选地，所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、溶液剂、气雾剂、喷雾剂、软膏剂或膜剂中的任意一种。
优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
优选地，所述辅料包括稀释剂、调味剂、粘合剂或填充剂中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合例如粘合剂和稀释剂的组合、粘合剂和调味剂的组合、粘合剂和填充剂的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
所述白桐树总多酚提取物制备方法，包含以下步骤：
(1)将白桐树植物原料加入溶剂进行提取获得提取液，提取液减压浓缩获得浸膏，所述溶剂为甲醇、乙醇或水中的任意一种或至少两种的组合；
(2)将步骤1所得浸膏加水分散至相对密度1.05～1.20(室温时测定值)，得水分散液，加入石油醚萃取，收集水相部分，再用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯部分，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物；
(3)将步骤2所得乙酸乙酯萃取物经聚酰胺柱层析分离纯化得所述白桐树总多酚提取物；
作为本发明的优先方案，本发明中步骤1中白桐树植物原料在提取前还包括前处理步骤，所述前处理为取白桐树植物原料，烘干或晒干，粉碎至20～80目；所述白桐树植物原料为白桐树根、杆或枝中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤1提取中白桐树植物原料与溶剂的质量体积比为1:8～20，进一步优选为1:8～13，单位为g/ml，所述原料与溶剂的质量体积比是指原料的质量与溶剂的体积之比，例如，每g原料采用8～20ml的溶剂进行提取。
优选地，步骤1所述提取中溶剂为水；
优选地，步骤1中所述提取方法选自热回流提取、超声提取或超声辅助热回流提取中的一种或至少两种的组合；
优选地，所述超声提取，超声功率为20KHz～40KHz，优选为20KHz～30KHz，超声时间为1～3h，优选为1.5～2.5h，提取次数为1～4次；
优选地，所述热回流提取，温度为50～100℃，时间1～3h，优选2～3h,提取1～4次；
优选地，所述超声辅助热回流提取，超声功率为20KHz～40KHz，优选为20KHz～30KHz，超声时间为1～3h，优选为1.5～2h，温度为50～100℃，提取次数为1～4次。
优选地，步骤1中，所述减压浓缩为浓缩至无有机溶剂气味且相对密度在1.20以下(室温时测定值)。
优选地，步骤2中，所述石油醚萃取中，水分散液与石油醚的体积比为1:1～3，进一步优选为1:1，经石油醚萃取可以除去大部分小极性脂溶性杂质成分。
优选地，步骤2中，所述乙酸乙酯萃取中，水相部分与乙酸乙酯的体积比为1:1～3，进一步优选为1:1，经乙酸乙酯萃取保留酚类成分，水溶性强极性杂质成分则留在水层而被除去。
优选地，步骤3中，所述聚酰胺柱为粒径为30～200目的聚酰胺，优选60～100目；所述乙酸乙酯萃取物与聚酰胺填料的质量比为1:50～100，如55倍、60倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍或95倍等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用；所述聚酰胺柱的高径比为5～10:1，如6:1、7:1、8:1或9:1等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
优选地，步骤3所述聚酰胺柱层析分离纯化用洗脱溶剂为乙醇水溶液，洗脱流速为5～20ml/min，洗脱方式为梯度洗脱：先用25vol％～30vol％乙醇洗脱5～8个柱体积除去杂质，再用60vol％～75vol％乙醇洗脱3～6个柱体积，收集洗脱液，最后用95vol％乙醇冲洗柱子。
优选地，步骤3所述洗脱在5～20bar的中低压色谱条件下进行。
本发明中上述步骤所述减压浓缩的温度均为50～65℃，如50℃、55℃、60℃或65℃等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用；所述减压浓缩的真空度均为-0.08～-0.1Mpa，如-0.08Mpa、-0.085Mpa、-0.09Mpa或-0.095Mpa等，但并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
本发明的有益效果：
本发明以白桐树为研究对象，意外地发现了白桐树总多酚提取物可以抑制L-型电压门控性钙离子通道活性，可以用于制备抑制钙离子通道的药物，在钙通道依赖性心律失常、心绞痛、高血压等疾病的治疗中具有广泛的应用前景。本发明还提供了所述提取物的制备方法，还方法工艺简单、易于实现。
附图说明
图1为白桐树总多酚提取物中总多酚含量测定标准曲线
图2为不同电压刺激下DRG细胞钙电流密度随时间的变化关系图
图3为白桐树总多酚提取物对钙通道活性的影响图
图4为白桐树总多酚提取物对钙通道I-V曲线的影响图
具体实施例
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。各实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另有说明，本说明书中使用的全部专业术语和科学用语的含义均与本发明所属技术领域的技术人员一般理解的含义相同。但如有冲突，以包含定义的本说明书为准。
白桐树药材购自昆明植分生技术有限公司。
SD雄性大鼠购自湖北省实验动物研究中心。
EPC-10双通道膜片钳放大器为德国HEKA，P-97电极拉制仪为美国SUTTER
制备例1白桐树总多酚提取物的制备
(1)白桐树干燥枝8.0kg，加100L水提超声提取，提取时间为2h，超声功率为30KHz,提取4次，合并提取液，减压浓缩(温度60℃、压力-0.095MPa)回收溶剂得浸膏269.4g。
(2)将步骤(1)所得浸膏加水分散至相对密度1.15(测定温度26℃)得水分散液，加入1倍体积石油醚萃取脱脂，收集水相部位，在用3倍体积乙酸乙酯萃取，萃取1次，合并乙酸乙酯部分，减压浓缩(温度60℃、压力-0.090MPa)得乙酸乙酯萃取物浸膏(73.2g)；
(3)将步骤(2)所得乙酸乙酯萃取物通过聚酰胺柱层析(乙酸乙酯萃取物与聚酰胺填料的质量比为1:100，型号60-100目，柱高径比为：10：1)，压力5～15ba，流速10ml/min，以乙醇-水溶液梯度洗脱，先用28vol％乙醇洗脱8个柱体积，再用60vol％乙醇洗脱3个柱体积，最后用95％乙醇冲洗柱子，收集60vol％乙醇洗脱液，减压浓缩(温度60℃、压力-0.090MPa)回收溶剂得白桐树总多酚提取物15.3g，多酚含量74.28％。
多酚含量测定方法如下：
(1)标准曲线的测定
精密称量没食子酸对照品5.43mg，加蒸馏水定容至50mL，得到了浓度为0.108mg/mL的标准溶液。
分别吸取标准溶液0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL、2.0ml于10mL容量瓶中，再量取6mL蒸馏水，摇匀后再用移液枪吸取0.5mL福林酚试剂，摇匀并等待一分钟，再用移液枪吸取1.5mL的碳酸钠溶液(75g/L)，混匀后用蒸馏水定容至刻度线。在75℃下加热10分钟，待冷却后在760nm下测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线(见图1)，回归方程：Abs＝0.9987×C+0.02642R2＝0.9987。
(2)样品含量测定
称量总多酚提取物10mg至锥形瓶中，加入25mL的蒸馏水超声30min，用蒸馏水定容至50mL。吸取1mL至10mL容量瓶中，再加入6mL水，0.5mL福林酚试剂混匀，1min后加入1.5mL碳酸钠试剂(75g/L)混匀后定容，在75℃加热十分钟冷却后在760nm下测量后吸光度。根据标准曲线，计算浓度。最后根据浓度计算多酚含量。
制备例2白桐树总多酚提取物制备
(1)白桐树干燥枝7.6kg，加100L水100℃热回流提取，时间为2h，提取3次，合并提取液，减压浓缩(温度55℃、压力-0.09MPa)回收溶剂得浸膏(226g)。
(2)将步骤(1)所得浸膏加水分散至相对密度1.09(测定温度27℃)得水分散液，加入1倍体积石油醚萃取脱脂，收集水相部位，在用1倍体积乙酸乙酯萃取，萃取5次，合并乙酸乙酯部分，减压浓缩(温度55℃、压力-0.09MPa)得乙酸乙酯萃取物(83.3g)；
(3)将步骤(2)所得乙酸乙酯萃取物通过聚酰胺柱层析(乙酸乙酯萃取物与聚酰胺填料的质量比为1:80，型号60-100目，柱高径比为10：1)，压力5～10ba，流速5ml/min，以乙醇-水溶液梯度洗脱，先用30vol％乙醇洗脱6个柱体积，再用70vol％乙醇水溶液洗脱5个柱体积，最后用95vol％乙醇冲洗柱子，收集70vol％乙醇洗脱液，减压浓缩(温度55℃、压力-0.09MPa)回收溶剂得白桐树总多酚粗品(16.9g)，多酚含量72.49％(多酚含量测定方法同制备例1)；
制备例3白桐树总多酚提取物制备
(1)白桐树干燥枝8.0kg，加65L75％乙醇提超声提取，提取时间为2h，超声功率为30KHz,提取4次，合并提取液，减压浓缩(温度60℃、压力-0.095MPa)回收溶剂得浸膏269.4g。
(2)将步骤(1)所得浸膏加水分散至相对密度1.15(测定温度26℃)得水分散液，加入1倍体积石油醚萃取脱脂，收集水相部位，在用3倍体积乙酸乙酯萃取，萃取1次，合并乙酸乙酯部分，减压浓缩(温度60℃、压力-0.090MPa)得乙酸乙酯萃取物浸膏(73.2g)；(3)将步骤(2)所得乙酸乙酯萃取物通过聚酰胺柱层析(乙酸乙酯萃取物与聚酰胺填料的质量比为1:100，型号60-100目，柱高径比为：10：1)，压力5～15ba，流速10ml/min，以乙醇-水溶液梯度洗脱，先用28vol％乙醇洗脱8个柱体积，再用60vol％乙醇洗脱3个柱体积，最后用95％乙醇冲洗柱子，收集60vol％乙醇洗脱液，减压浓缩(温度60℃、压力-0.090MPa)回收溶剂得白桐树总多酚粗品(15.3g)，多酚含量71.82％(多酚含量测定方法同制备例1)。
实验例1全细胞膜片钳实验
(1)DRG细胞(神经元细胞)的急性分离
一月龄的SD雄性大鼠击昏、断头后，快速提取腰段L4～L6段的背根神经节，将其置于4℃含氧饱和的DMEM培养液(pH＝7.4)中，剪断多余的神经纤维后，置于2mL含1mg·mL-1胶原酶I和0.3mg·mL-1胰蛋白酶的DRG消化酶中，恒温水浴锅(37℃)消化约20min，期间用移液枪轻轻吹打数次，得到DRG细胞悬液，在细胞悬液中加入等量含胰蛋白酶抑制剂的细胞培养液，终止消化，将DRG细胞悬液放入低速离心机中离心(1000r·min-1)3min后，吸出上清液，加入细胞培养液，将细胞吹散，移至直径为35mm的玻片上，待细胞贴壁后进行全细胞膜片钳记录，实验室温控制在22～25℃。
(2)样品溶液配制
样品溶液：取制备例1制备所得白桐树总多酚提取物10mg置于棕色玻璃瓶中，用1ml二甲基亚砜(DMSO)溶解，即得10mg/ml的母液，存放于4℃冰箱中备用，使用前以细胞外液稀释至10ug/ml。
(3)全细胞膜片钳记录
全细胞膜片钳实验参数的设置和数据采集均由Patch Master软件控制。细胞内液成分：CsCl 130mM，MgCl2 1mM，EGTA 5mM，HEPES 10mM，MgATP 4mM，Na2GTP 0.03mM；tetraethylammonium 15mM，用CsOH调整PH到7.2。细胞外液成分：NaCl 150mM，CsCl 5.4mM，CaCl2 1.8mM，MgCl2 1.2mM，glucose 10mM，HEPES 10mM，用NaOH调整pH到7.4。用充灌细胞内液的玻璃电极进行测量，该电极使用外径1.5mm，内径0.89mm，长100mm内置导液丝的硼硅玻璃管拉制而成，在上述内外液环境下电阻为3-5MΩ，然后选取细胞直径较小的DRG细胞(＜25μm)记录ASIC电流，在电极与细胞膜之间形成1-5GΩ封接之后，负压破膜，同时给予适当的电容补偿，将电压钳制在-60mV后，进行全细胞膜片钳实验记录。
a、不同电压刺激对DRG钙通道电流的影响
从-60mV(静息态)～+50mV给予细胞300ms的阶跃电压刺激，每次测试电压升高10mV，记录不同电压刺激下钙电流密度随时间的变化关系。
结果见图2，可以看出随着电压逐渐提升，钙通道会开放介导钙离子流入，-10mV的电压刺激可以获得最大钙电流。说明其为L-型电压门控性钙离子通道，该通道是目前最具药理学意义的一类钙通道。其激活电位为-10mV，激活需要较强的去极化，通道被激活后开放时间长、失活慢，是细胞兴奋过程中外钙离子内流的主要途径。
b、白桐树总多酚提取物对钙通道的活性影响
将白桐树总多酚提取物加入细胞外液中(浓度为10μg/ml)，使用-10mV的电压进行刺激，记录钙电流密度随时间的变化关系，以未加白桐树总多酚提取物的空白细胞外液作为对照。
实验结果见图3，可以看出与对照组相比，加入白桐树总多酚提取物后钙电流密度显著降低，说明白桐树总多酚提取物可以抑制钙离子通道活性。
c、白桐树总多酚提取物对钙通道I-V曲线的影响
将白桐树总多酚提取物加入细胞外液中(浓度为10μg/ml)，使用-60mV至+40mV，步阶电压为+10mV的电压进行电压刺激，记录钙通道电流情况，以获得电流峰值对测试电压做I-V曲线，以未加白桐树总多酚提取物的空白细胞外液作为对照。
实验结果见图4，可以看出与对照组相比，白桐树总多酚提取物组DRG细胞的I-V曲线明显上移，说明DRG细胞L型钙通道开放减弱，加入白桐树总多酚提取物抑制了钙离子通道开放。
申请人声明，以上所述，仅是本申请的几个实施例，并非对本申请做任何形式的限制，虽然本申请以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限制本申请，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本申请技术方案的范围内，利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于技术方案范围内。

Claims (8)

1.一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用，其特征在于，所述抑制钙离子通道药物为抑制L-型电压门控性钙离子通道的药物，所述抑制钙离子通道药物为治疗钙通道依赖性心律失常、心绞痛、高血压的药物，所述白桐树总多酚提取物中多酚含量为70%～80%，所述白桐树总多酚提取物是由包含以下步骤的制备方法制备得到：
（1）将白桐树植物原料加入溶剂进行提取获得提取液，提取液减压浓缩获得浸膏，所述溶剂为甲醇、乙醇或水中的任意一种或至少两种的组合；
（2）将步骤1所得浸膏加水分散至相对密度在室温时测定值为1.05～1.20，得水分散液，加入石油醚萃取，收集水相部分，再用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯部分，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物；
（3）将步骤2所得乙酸乙酯萃取物经聚酰胺柱层析分离纯化得所述白桐树总多酚提取物。
2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、溶液剂、气雾剂、喷雾剂、软膏剂或膜剂中的任意一种。
3.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述辅料包括稀释剂、调味剂、粘合剂或填充剂中的任意一种或至少两种的组合。
5.如权利要求1所述应用，其特征在于，步骤1中所述提取中白桐树植物原料与溶剂的质量体积比为1:8～20，单位为g/ml；所述提取方法为热回流提取、超声提取或超声辅助热回流提取中的任意一种或至少两种的组合；提取次数为1～4次，合并多次提取液，减压浓缩回收溶剂得浸膏。
6.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述超声提取，超声功率为20KHz～40KHz，超声时间为1～3h；所述热回流提取，温度为50~100℃，时间为1～3h；
所述超声辅助热回流提取，超声功率为20KHz～40KHz，超声时间为1～3h，温度为50~100℃。
7.如权利要求1所述应用，其特征在于，步骤2中所述石油醚萃取中水分散液与石油醚的体积比为1:1～3；所述乙酸乙酯萃取中，水相部分与乙酸乙酯的体积比为1:1～3。
8.根据权利要求1所述应用，其特征在于，步骤3中所述聚酰胺柱填料为粒径30～200目的聚酰胺；柱层析洗脱溶剂为乙醇水溶液，洗脱流速为5～20ml/min，洗脱方式为梯度洗脱：先用25vol％～30vol％乙醇洗脱5～8个柱体积除去杂质，再用60vol％～75vol％乙醇洗脱3～6个柱体积，收集洗脱液，最后用95vol％乙醇冲洗柱子。
CN202111225725.7A 2021-10-21 2021-10-21 一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用 Active CN113797240B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111225725.7A CN113797240B (zh) 2021-10-21 2021-10-21 一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111225725.7A CN113797240B (zh) 2021-10-21 2021-10-21 一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113797240A CN113797240A (zh) 2021-12-17
CN113797240B true CN113797240B (zh) 2022-07-12

Family

ID=78937722

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111225725.7A Active CN113797240B (zh) 2021-10-21 2021-10-21 一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113797240B (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2182114A1 (en) * 1994-01-26 1995-08-03 Bayer Corporation Inhibition of arthritis by l-type calcium channel antagonists
JPWO2007004390A1 (ja) * 2005-07-06 2009-03-05 建仁 河乃 悪液質改善製剤および悪液質改善食品
CN105232911A (zh) * 2015-10-12 2016-01-13 菏泽高新区尊桂堂科技有限公司 一种中药组合物
CN105535682A (zh) * 2016-01-14 2016-05-04 田均庆 治疗膝关节创伤性滑膜炎的外敷中药及制法
CN105727033A (zh) * 2016-03-30 2016-07-06 广州暨南生物医药研究开发基地有限公司 一种含艾叶的治疗自发性蛛网膜下腔出血症的药物制剂
WO2016130247A1 (en) * 2015-01-10 2016-08-18 Cibus Us Llc Mutated acetohydroxyacid synthase genes in euphorbiaceae and plant material comprising such genes
CN105918632A (zh) * 2016-05-01 2016-09-07 镇江荣邦生物科技有限公司 一种丢了棒提取物颗粒的制备方法
CN106805233A (zh) * 2015-12-01 2017-06-09 黑龙江省智诚医药科技有限公司 一种罗布麻清热下火咀嚼片及其制备方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3830960B1 (ja) * 2005-08-12 2006-10-11 建仁 河乃 育毛物質
CN104689283A (zh) * 2015-03-27 2015-06-10 李佃场 一种治疗脾虚湿蕴型黄褐斑的药物及其制备方法
CN106860728A (zh) * 2015-12-14 2017-06-20 天津植草园生物科技有限公司 一种反流性食管炎治疗药物
CN107056856B (zh) * 2017-04-13 2019-11-05 江西省药品检验检测研究院 一种环烯醚萜苷化合物及其制备方法和用途
CN107980491A (zh) * 2017-11-20 2018-05-04 蚌埠清菲农业科技有限公司 一种瓜蒌旱地种植方法
CN112546169A (zh) * 2020-12-21 2021-03-26 陆海松 一种治疗风湿和炎症的组合物、制备方法及其应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2182114A1 (en) * 1994-01-26 1995-08-03 Bayer Corporation Inhibition of arthritis by l-type calcium channel antagonists
JPWO2007004390A1 (ja) * 2005-07-06 2009-03-05 建仁 河乃 悪液質改善製剤および悪液質改善食品
WO2016130247A1 (en) * 2015-01-10 2016-08-18 Cibus Us Llc Mutated acetohydroxyacid synthase genes in euphorbiaceae and plant material comprising such genes
CN105232911A (zh) * 2015-10-12 2016-01-13 菏泽高新区尊桂堂科技有限公司 一种中药组合物
CN106805233A (zh) * 2015-12-01 2017-06-09 黑龙江省智诚医药科技有限公司 一种罗布麻清热下火咀嚼片及其制备方法
CN105535682A (zh) * 2016-01-14 2016-05-04 田均庆 治疗膝关节创伤性滑膜炎的外敷中药及制法
CN105727033A (zh) * 2016-03-30 2016-07-06 广州暨南生物医药研究开发基地有限公司 一种含艾叶的治疗自发性蛛网膜下腔出血症的药物制剂
CN105918632A (zh) * 2016-05-01 2016-09-07 镇江荣邦生物科技有限公司 一种丢了棒提取物颗粒的制备方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anti-arthritic activity of ethanol extract of Claoxylon indicum on Freund"s complete adjuvant-induced arthritis in mice;Chen Y，et al;《BMC Complement Altern Med》;20170131;第17卷(第01期);第1页"摘要"，第2页"Plant materials and preparation of extract" *
Combination of nifedipine and subtherapeutic dose of cyclosporin additively suppresses mononuclear cells activation of patients with rheumatoid arthritis and normal individuals via Ca2+-calcineurin-nuclear factor of activated T cells pathway;N-S,et al;《Clinical & Experimental Immunology》;20121231;第168卷(第01期);第78-86页 *
L-型电压依赖性钙通道α_1亚单位在兔膝骨关节炎软骨细胞基质代谢中的作用及其机制研究;常延超;《万方数据-学位》;20151231(第01期);第34-38页 *
丢了棒及其伪品的生药鉴定;陈世文，等;《中国中药杂志》;19830125;第15卷(第01期);第23-26页 *
民族药白桐树干枝的化学成分研究;陈飞，等;《河南科学》;20211130;第39卷(第11期);第1721-1725页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113797240A (zh) 2021-12-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9770479B2 (en) Extract of Rehmannia glutinasa Libosch for reducing blood sugar, reducing blood fat, treating leukemia, and preparation method and uses thereof
EP2829275B1 (en) Total flavone extract of abelmoschus manihot and preparation method thereof
CN103816296B (zh) 紫珠总苷提取物及其制备方法和用途
CN111018821B (zh) 双黄酮类化合物及其制备方法和用途
CN103127192A (zh) 一种鲜人参提取物的制备方法及其在ii型糖尿病中的应用
CN104435034B (zh) 一种三七总皂苷及其制备方法
WO2018133563A1 (zh) 一种人参属植物提取物及其药物组合物和应用
CN111377994A (zh) 七种来源于灯笼果的醉茄内酯类化合物及其制备方法和用途
CN113797240B (zh) 一种白桐树总多酚提取物在制备抑制钙离子通道药物中的应用
CN106822331A (zh) 以锁状多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备治疗高尿酸血症药物或保健品中的应用
CN112724192B (zh) 一种采用娑罗子提取制备七叶皂苷钠的方法
JP2013241356A (ja) Ｔｉｅ２活性化剤、血管新生抑制剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤、並びに医薬品組成物
CN112898131A (zh) 大麻二酚的提取工艺及大麻二酚或大麻提取物在制备预防或者治疗bph的药物中的应用
CN111110687A (zh) 一种抗脂代谢紊乱的合欢皮新木脂体化合物
CN105228638A (zh) 富含加兰他敏的凤蝶朱顶红的提取物
JP6969041B2 (ja) 血管内皮型一酸化窒素合成酵素産生促進剤及び経口用組成物
CN114681563B (zh) 含有灯盏细辛、人参、麦冬、五味子的药物组合物
CN107625774A (zh) 薏苡茎叶中环阿乔醇在抗肿瘤药物的应用及其提取方法
TWI466674B (zh) 臺灣梭羅木之生物活性組合物
CN107365316B (zh) 石松生物碱lycoplanineA及其药物组合物与其制备方法和应用
JPH0761993A (ja) 茶葉サポニン類の製造法及び茶葉サポニン類を含む薬剤
CN105906494A (zh) 西尼地平的药物组合物及其心肌保护的医药用途
CN108129437B (zh) 一种黄酮化合物及其制备方法与应用
TW201726153A (zh) 用於預防藥物毒性引起腎病變之組合物、其製備方法及其用途
CN113171362A (zh) 生物碱类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Wang Zhiyao

Inventor after: Wang Tao

Inventor after: Lin Xianguang

Inventor after: Chang Xia

Inventor after: Wang Wei

Inventor after: Jiang Xiao

Inventor after: Chen Fei

Inventor after: Luo Yuanqing

Inventor before: Wang Zhiyao

Inventor before: Wang Wei

Inventor before: Lin Xianguang

Inventor before: Chang Xia

Inventor before: Wang Tao

Inventor before: Jiang Xiao

Inventor before: Chen Fei

Inventor before: Luo Yuanqing

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant