CN113791210A - 一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条、装置及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种同时检测基质金属蛋白酶‑8和白细胞介素‑6的试剂条、装置及其应用。本发明通过选择特定的感染标记物基质金属蛋白酶‑8和白细胞介素‑6，进而制备同时检测这两种感染标志物的试剂条，该试剂条适合腹膜透析治疗患者感染腹膜炎的检测，检测及时，准确性高，肉眼即可判读结果，更加方便简洁、省时省力，可以实现家庭自检。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条、装置及其应用。
背景技术
腹膜透析是某些疾病患者维持透析的一种治疗方式，腹膜透析具有比较简洁，方便在家、易操作的优点。但是腹膜透析要在相对无菌的环境里面进行，如果腹膜透析操作失败，可能会导致腹膜透析相关性的腹膜炎；而且当长时间进行腹膜透析时，会导致腹膜的结构和功能发生显著变化，这时也容易导致腹膜炎的发生。因此需要及时检测腹膜透析液是否有腹膜炎的感染标记物，可以降低感染腹膜炎的风险。
目前，市场上腹膜炎检测多在医院进行，这种检测方式需要利用大型仪器设备，操作频繁且烦琐，而且还需要专业检测人员，费时费力；另外，患者天天奔走医院，在精力和体力上会造成很大的负担。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条、装置及其应用。本发明提供的试剂条适合腹膜透析治疗患者感染腹膜炎的检测，检测及时，准确性高，肉眼即可判读结果，更加方便简洁、省时省力，可以实现家庭自检。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条，包括金垫和硝酸纤维素膜，所述金垫包括第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和第一白细胞介素-6单克隆抗体；
所述硝酸纤维素膜包括两条检测线和一条质控线，其中检测线T1线包被第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体，检测线T2线包被第二白细胞介素-6单克隆抗体，质控线C线包被抗鼠IgG多克隆抗体；
所述第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体是配对抗体；
所述第一白细胞介素-6单克隆抗体和第二白细胞介素-6单克隆抗体是配对抗体。
优选的，所述配对抗体的相加指数AI≥95％。
优选的，所述金垫中第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体的浓度为25～35μg/mL，第一白细胞介素-6单克隆抗体的浓度为25～35μg/mL；
所述硝酸纤维素膜上的质控线C线包被抗鼠IgG多克隆抗体浓度为0.3～0.6mg/mL；检测线T1线包被第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体浓度为0.6～1.0mg/mL，检测线T2线包被第二白细胞介素-6单克隆抗体浓度为0.8～1.2mg/mL。
优选的，所述试剂条还包括底衬1、样品垫8和吸收垫3；在所述底衬1上依次粘贴吸收垫3、硝酸纤维素膜2、金垫4和样品垫8，所述金垫4的两端分别与所述硝酸纤维素膜2和样品垫8的部分重叠；所述硝酸纤维素膜2的两端分别与所述吸收垫3和金垫4的部分重叠。
本发明还提供了上述试剂条在制备检测腹膜炎装置中的应用。
本发明提供了一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的装置，所述检测装置包括：负压单元9和检测单元10；
所述负压单元9包括负压体11和密封件12；在所述密封件12上设有一个抽真空孔13和一个进样器14；
所述检测单元10包括：检测器25和样品棒18；
所述检测器25包括：上述的试剂条17；
所述样品棒18与所述试剂条17的样品垫8部分重叠，所述样品棒18压叠于样品垫8上。
优选的，所述检测器25还包括：外壳16；
所述外壳16包括可拆卸连接的壳体一19和壳体二20，所述壳体一19或壳体二20设有观察窗21，所述试剂条17设置在外壳16的壳内，所述试剂条17中的硝酸纤维素膜2上包被有两条检测线和一条质控线的一侧面向观察窗21。
优选的，所述密封件12还包括：在密封件12面向负压体11一侧设置有连接装置26；所述密封件12和检测单元10通过连接装置26连接。
本发明还提供了上述试剂条或上述装置在检测基质金属蛋白酶-8和/或白细胞介素-6中的应用。
本发明还提供了一种利用上述装置检测基质金属蛋白酶-8和/或白细胞介素-6的方法，包括以下步骤：
通过抽真空孔13将负压体11进行抽真空处理；将待测样本通过进样器14吸入负压体11中，当样品棒18暴露在外壳16部位的1/3～1/2浸入样本中时，停止进样，通过观察窗21观察结果；
判定结果如下：若质控线C线出现一条红色条带，同时T1线有一条红色条带，则检测样本中基质金属蛋白酶-8为阳性；
若质控线C线出现一条红色条带，同时T2线有一条红色条带，则检测样本中白细胞介素-6为阳性；
若质控线C线出现一条红色条带，同时T1线有一条红色条带，T2线有一条红色条带，则检测样本中基质金属蛋白酶-8与白细胞介素-6均为阳性；
若仅质控线C线出现一条红色条带，在T1线或T2线无红色条带出现，则检测样本中基质金属蛋白酶-8与白细胞介素-6均为阴性。
有益效果：
本发明提供了一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条，包括金垫和硝酸纤维素膜，所述金垫包括第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和第一白细胞介素-6单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜包括两条检测线和一条质控线，其中检测线T1线包被第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体，检测线T2线包被第二白细胞介素-6单克隆抗体，质控线C线包被抗鼠IgG多克隆抗体；所述第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体是配对抗体；所述第一白细胞介素-6单克隆抗体和第二白细胞介素-6单克隆抗体是配对抗体。本发明通过选择特定的感染标记物基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6，进而制备同时检测这两种感染标志物的试剂条，该试剂条适合腹膜透析治疗患者感染腹膜炎的检测，检测及时，准确性高，肉眼即可判读结果，更加方便简洁、省时省力，可以实现家庭自检。
附图说明
图1为实施例1制备的同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条的结构示意图；
图2为实施例2制备的同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的装置的结构示意图；
图3为实施例2制备的同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的装置中检测单元10的结构示意图，其中1为底衬，2为硝酸纤维素膜，3为吸收垫，4为金垫，5为检测线T1线，6为检测线T2线，7为质控线C线，8为样品垫，9为负压单元，10为检测单元，11为负压体，12为密封件，13为抽真空孔，14为进样器，15为开关夹，16为检测单元的外壳，17为试纸条；18为样品棒，19为壳体一，20为壳体二，21为观察窗，22为挂圈一，23为挂圈二，24为抽真空孔配套的连接盖，25为检测器，26为连接装置。
具体实施方式
本发明提供了一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条，包括金垫和硝酸纤维素膜，所述金垫包括第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和第一白细胞介素-6单克隆抗体；
所述硝酸纤维素膜包括两条检测线和一条质控线，其中检测线T1线包被第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体，检测线T2线包被第二白细胞介素-6单克隆抗体，质控线C线包被抗鼠IgG多克隆抗体；
所述第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体是配对抗体；
所述第一白细胞介素-6单克隆抗体和第二白细胞介素-6单克隆抗体是配对抗体。
在本发明中，所述配对抗体的制备方法优选均包括以下步骤：
采用杂交瘤技术和有限稀释法对细胞株进行克隆筛选，并在制备过程采用免疫抗原进行筛选，获得的杂交瘤细胞注射至小鼠体内取得腹水，腹水经ELISA检测要求效价均在4×105以上，选择亚型为IgG1、IgG2a和IgG2b的单克隆抗体；
以辛酸-硫酸铵法进行各单克隆抗体的纯化，得到纯化后蛋白含量为17.6～45.9mg/ml；
经ELISA相加试验检测筛选出各配对抗体，根据以下公式计算相加指数(AI)：AI＝[(2A1+2)/(A1+A2)-1]*100％，AI＞50％表示针对不同抗原决定簇，AI＜50％表示为同一抗原决定簇，本发明中各配对抗体相加指数AI优选均在95％以上，保证相互配对的两种单克隆抗体识别不同的抗原表位。本发明对所述杂交瘤技术、有限稀释法、辛酸-硫酸铵法和ELISA相加试验的操作方法没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的操作方法即可。本发明通过选择适宜效价和亚型的的单克隆抗体，选择的单克隆抗体相对稳定，表达量较高，更容易筛选出配对抗体。
在本发明中，所述金垫中第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体的浓度优选为25～35μg/mL，优选为27～33μg/mL，更优选为30μg/mL；所述金垫中第一白细胞介素-6单克隆抗体的浓度优选为25～35μg/mL，优选为27～33μg/mL，更优选为30μg/mL。
在本发明中，所述硝酸纤维素膜上的质控线C线包被抗鼠IgG多克隆抗体浓度优选为0.3～0.6mg/mL，更优选为0.5mg/mL；检测线T1线包被第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体浓度优选为0.6～1.0mg/mL，更优选为0.8mg/mL；检测线T2线包被第二白细胞介素-6单克隆抗体浓度为0.8～1.2mg/mL，更优选为1.0mg/mL；所述检测线T1线、检测线T2线和质控线C线的宽度独立优选为1mm；所述检测线T1线和检测线T2线的宽度优选为8mm；靠近质控线C线的检测线和质控线C线的宽度优选为8mm。本发明对所述抗鼠IgG多克隆抗体的来源没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。本发明通过在金垫和硝酸纤维素膜上包被适宜浓度的配对抗体，可以同时检测两种金标感染标志物基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6，优势互补，能全面检测腹膜透析液的炎症情况，更好更快地诊断感染，预防与感染相关的腹膜损伤。
在本发明中，所述试剂条优选还包括底衬、样品垫和吸收垫；所述硝酸纤维素膜(NC膜)2优选固定在所述底衬1上；所述金垫4优选设置在所述硝酸纤维素膜2和所述样品垫8之间；所述金垫4的一侧优选与所述硝酸纤维素膜2的部分重叠；所述硝酸纤维素膜2上的质控线7(C线)优选远离金垫；所述硝酸纤维素膜2上检测线5或6优选靠近金垫4；所述金垫4的另一侧优选与所述样品垫8的部分重叠；所述吸收垫3的一侧优选与所述硝酸纤维素膜2与金垫4重叠部分的另一侧部分重叠，具体结构示意图见图1。
本发明还提供了上述试剂条在制备检测腹膜炎试剂盒或装置中的应用。本发明提供的试纸条可以同时检测两种金标感染标志物基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6，优势互补，能全面检测腹膜透析液的炎症情况，更好更快地诊断感染，预防与感染相关的腹膜损伤。
本发明还提供了一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的装置。结合附图2～3对本发明提供的检测装置进行说明。
如图2所示，本发明提供的所述检测装置包括：负压单元9和检测单元10。
本发明提供的检测装置中负压单元9包括负压体11和密封件12。在本发明中，所述负压体11优选采用可视的负压瓶，可视负压瓶既可以便于观察负压瓶内的样本量，避免样本吸入过多污染检测单元10，也可以观察负压瓶内的检测单元10的检测结果；制备所述负压体的材料优选包括塑料；本发明对所述负压体的形状没有特殊要求，优选具有瓶颈形状的瓶体，此形状瓶体既有利于抽取真空，又利于水位的读取；所述密封件12优选为可拆卸部件，可拆卸的密封件可以更换检测单元10和清洗负压单元9，从而循环利用，节约成本；制备所述密封件12的材料优选包括聚丙烯(PP)。在本发明中，所述密封件12上设有一个抽真空孔13和一个进样器14，所述进样器14优选采用进样管，所述进样管的管径优选为4～6mm；制备所述进样器14的材料优选包括硅胶。在本发明中，所述密封件12优选还包括连接装置26，本发明的连接装置26可以将检测单元10连接在密封件12上，避免样本污染检测单元10；所述连接装置26优选包括挂圈一22和挂圈二23；所述挂圈一22优选设置在密封件12面向负压塑料瓶9的一侧；所述挂圈二23优选设置在检测单元10上；所述挂圈23和所述密封件的挂圈22优选采用塑料自锁式尼龙扎带连接。在本发明中，所述抽真空孔13优选还包括配套连接盖24；所述进样器14上优选还设置一个开关夹15，本发明的开关夹15可以控制负压体11中的样本量。
如图2和3所示，本发明提供的检测装置中检测单元10包括：检测器25和样品棒18。在本发明中，所述检测器25包括：上述的试剂条17。在本发明中，所述样品棒18与上述的试剂条的样品垫8部分重叠，所述样品棒18压叠于样品垫8上。在本发明中，所述所述检测器25优选还包括外壳16；所述外壳16优选包括可拆卸连接的壳体一19和壳体二20，二者拼合即构成完整外壳；所述壳体一19或壳体二20优选设有观察窗21；所述试剂条17优选设置在外壳16的壳内，更优选将试纸条17固定壳体一19或壳体二20上；在所述试剂条17中的硝酸纤维素膜2上包被有两条检测线和一条质控线的一侧优选面向观察窗21。在本发明中，所述样品棒18优选通过外壳16固定在样品垫8的上方，更优选通过壳体一19和壳体二20的挤压固定在样品垫8的上方，样品棒优选要有部分漏在壳体外边；以挤压固定样品垫8的部位为壳体一19或壳体二20的头部，所述挂圈二23优选设置在壳体一19或壳体二20的尾部。本发明通过将样品棒设置在样品垫的上方可以省去加样步骤，使检测操作更简洁方便。
在本发明中，制备所述壳体一19或制备所述壳体二20的材料均优选包括HIPS塑料。在本发明中，制备所述样品棒18的材料优选包括玻璃纤维膜。
在本发明中，所述进样器14在负压体内长度L1优选大于或等于检测单元外壳16长度和连接装置26长度之和L2；。在本发明中，所述进样器14在负压体内长度L1优选小于检测单元外壳16长度、连接装置26长度和样品棒18暴露在外壳16外的部分中2/3的长度之和L3。本发明通过限定进样器14在瓶内长度，通过控制进液量不淹没进样器14，可以防止进液时液体对检测单元的污染，保证检测结果的准确性。
本发明提供的负压单元通过抽真空孔将负压体进行抽真空处理，得到的负压单元能自动吸取腹膜透析废液，减少手动取液容易洒落的尴尬和容易导致污染的风险，同时为患者解放双手。
本发明还提供了上述试剂条或上述装置在检测基质金属蛋白酶-8和/或白细胞介素-6中的应用。
本发明提供了一种利用上述装置检测基质金属蛋白酶-8和/或白细胞介素-6的方法，包括以下步骤：
通过抽真空孔13将负压体11进行抽真空处理；将待测样本通过进样器14吸入负压体11中，当样品棒18暴露在外壳16部位的1/3～1/2浸入样本中时，停止进样，通过观察窗21观察结果；
判定结果如下：若质控线C线出现一条红色条带，同时T1线有一条红色条带，则检测样本中基质金属蛋白酶-8为阳性；
若质控线C线出现一条红色条带，同时T2线有一条红色条带，则检测样本中白细胞介素-6为阳性；
若质控线C线出现一条红色条带，同时T1线有一条红色条带，T2线有一条红色条带，则检测样本中基质金属蛋白酶-8与白细胞介素-6均为阳性；
若仅质控线C线出现一条红色条带，在T1线或T2线无红色条带出现，则检测样本中基质金属蛋白酶-8与白细胞介素-6均为阴性。
在本发明中，所述样本优选包括腹膜透析液；当所述样本为腹膜透析液时，本发明优选将进样器14插入腹膜透析引流袋的出液口，打开进样器14的开关夹15，使样本通过进样器14吸入负压体11中，当样品棒18暴露在外壳16部位的1/3～1/2浸入样本中时，关闭进样器14的开关夹15。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条、装置及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种同时检测基质金属蛋白酶-8(MMP-8)和白细胞介素-6(IL-6)的试剂条，由以下结构组成：底衬1、硝酸纤维素膜2、金垫4、样品垫8和吸收垫3；
所述硝酸纤维素膜2固定在所述底衬1上；所述硝酸纤维素膜(NC膜)2固定在所述底衬1上；所述金垫4设置在所述硝酸纤维素膜2和所述样品垫8之间；所述金垫4的一侧与所述硝酸纤维素膜2的部分重叠；所述硝酸纤维素膜2上的质控线7(C线)远离金垫；所述硝酸纤维素膜2上检测线5或6靠近金垫；所述金垫4的另一侧与所述样品垫8的部分重叠；所述吸收垫的一侧与所述硝酸纤维素膜2与金垫4重叠部分的另一侧部分重叠，具体结构示意图见图1。
该试剂条的制备，由以下步骤组成：
1)采用杂交瘤技术和有限稀释法对细胞株进行克隆筛选，并在制备过程采用免疫抗原进行筛选，获得的杂交瘤细胞注射至小鼠体内取得腹水，腹水经ELISA检测要求效价均在4×105以上，选择亚型为IgG1、IgG2a和IgG2b的单克隆抗体；
2)以辛酸-硫酸铵法进行各单克隆抗体的纯化，得到纯化后蛋白含量为17.6～45.9mg/ml；
3)经ELISA相加试验检测筛选出各配对抗体，根据以下公式计算相加指数(AI)：AI＝[(2A1+2)/(A1+A2)-1]*100％，AI＞50％表示针对不同抗原决定簇，AI＜50％表示为同一抗原决定簇，选择相加指数AI均在95％以上的配对抗体，选择的配对抗体为：鼠抗第一基质金属蛋白酶-8(MMP-8)单克隆抗体1B5D3E4G7与第二基质金属蛋白酶-8(MMP-8)单克隆抗体5C8D6B9F3配对，鼠抗第一白细胞介素-6(IL-6)单克隆抗体2A6F3G10与第二白细胞介素-6(IL-6)单克隆抗体3E11D3B6C7配对；
4)将步骤3)筛选得到的鼠抗第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和鼠抗第一白细胞介素-6单克隆抗体与胶体金标记形成结合物并喷涂于玻璃纤维膜上，得到所述金垫；每毫升胶体金标记鼠抗第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和鼠抗第一白细胞介素-6单克隆抗体的质量分别为30μg；
5)将步骤3)筛选得到的鼠抗第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体、鼠抗第二白细胞介素-6单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体分别在硝酸纤维膜上划线并依次形成检测线T1线5、检测线T2线6和质控线C线7制得所述硝酸纤维素膜；其中检测线T1线包被鼠抗第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体浓度为0.8mg/mL，检测线T2线包被鼠抗第二白细胞介素-6单克隆抗体浓度为1.0mg/mL，质控线C线包被抗鼠IgG浓度为0.5mg/mL，抗鼠IgG多克隆抗体使用市售品；所述检测线T1线、检测线T2线和质控线C线的宽度独立为1mm；所述检测线T1线和检测线T2线的宽度为8mm；检测线T2和质控线C线的宽度为8mm；
6)将底衬1、硝酸纤维素膜2、金垫4、样品垫8和吸收垫3按图1所示进行组装，得到所述试剂条。
实施例2
一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的装置，由负压单元9(负压塑料瓶)和检测单元10(检测笔)组成，具体结构示意图见图2和图3；
所述负压单元9(负压塑料瓶)由负压体11(瓶体)和密封件12(密封盖)组成；在密封件12(密封盖)上设有一个抽真空孔13和一个进样器14(进样管)；所述抽真空孔13含有一个配套连接盖24；所述进样器14(进样管)上设置一个开关夹15；
所述检测单元10(检测笔)由以下部件组成：外壳16、实施例1制备的的试剂条17和样品棒18；
所述外壳16包括可拆卸连接的壳体一19和壳体二20，所述壳体一设有观察窗21，上述的试剂条17设置在壳体二20上；在所述试剂条17中的硝酸纤维素膜2上包被有两条检测线和一条质控线的一侧面向观察窗21；
所述样品棒与上述的试剂条的样品垫8部分重叠，所述样品棒18压叠于样品垫8上；
所述密封件12(密封盖)面向负压塑料瓶9一侧设有一个悬挂所述检测单元10(检测笔)的挂圈一22；所述检测单元10(检测笔)的壳体二20尾部(以挤压固定样品垫8的部位为壳体一19或壳体二20的头部)设有一个和所述密封盖的挂圈连接的挂圈二23；所述挂圈一22和挂圈二23采用塑料自锁式尼龙扎带连接；
所述进样器14在瓶内长度大于或等于检测单元外壳16长度和连接装置26长度之和；所述进样器14在负压体内长度小于检测单元外壳16长度、连接装置26长度和样品棒18暴露在外壳16部分2/3的长度之和。
该装置的制备，由以下步骤组成：
按图2和图3所示的结构图将上述各部件组装好，关闭开关夹15，打开连接盖24，从抽真空孔13进行抽真空处理，关闭连接盖24，得到所述装置。
应用例1
利用实施例1制备的试剂条和实施例2制备的装置对腹膜透析患者透析废液吸取量进行试验验证，具体验证过程如下：
进样管口连接患者透析袋，打开进样管的开关，透析液利用负压作用流入装置内；当样品棒浸入液体中，开始计时，5分钟后，在检测窗口肉眼判读结果；通过控制进样管开关使不同样本检测时的负压瓶进液量在100～200mL，根据刻度线记录进液量；与此同时，取一定量透析液到盛装容器内，插入配套检测笔，18秒后取出平放，计时5分钟肉眼判读结果。检测结果见表1。
表1不同处理样本的检测结果
由表1可知，本发明实施例2制备的装置中负压塑料瓶进液量能保证在100～200mL范围内检测的准确性，也能防止污染内置检测笔。
应用例2
利用实施例2制备的装置对腹膜透析患者透析废液检验结果进行试验验证，具体验证过程如下：
进样管口连接患者透析袋，打开进样管的开关，透析液利用负压作用流入装置内；当样品棒暴露在检测笔外壳部位的1/3～1/2浸入液体中，关闭进样管开关，开始计时，5分钟后，在检测窗口肉眼判读结果；与此同时，取一定量透析液用临床生化仪器进行检测，两者检测结果进行对照。检测结果见表2。
表2不同检测方法的检测结果比较
注：临床统计数据标准：腹膜炎患者腹膜透出液中WBC>100个/微升，中性粒细胞>50％。
由表2可知，首先临床检验需要在医院进行，生化仪器需要专业检测人员操作，检测结果需要专业人员判断。本发明装置简单：仅需要肉眼观察有无检测线即可判读阴阳性结果；快速：5分钟出结果；即使在如此简单快速的试验情况下，也能够保证结果的准确性。
综上所述，本发明提供的检测装置，通过利用负压塑料瓶取样，通过选择金垫上胶体金标记结合物的抗体物质，及硝酸纤维素膜上检测线T1线、检测线T2线及质控线C线的抗体物质，实现了对腹膜透析废液中MMP-8与IL-6的联合检测，提供了一种快速、更加便捷的检测方法，以利于腹膜透析患者的辅助诊断。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的试剂条，包括金垫和硝酸纤维素膜，其特征在于，所述金垫包括第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和第一白细胞介素-6单克隆抗体；
所述硝酸纤维素膜包括两条检测线和一条质控线，其中检测线T1线包被第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体，检测线T2线包被第二白细胞介素-6单克隆抗体，质控线C线包被抗鼠IgG多克隆抗体；
所述第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体和第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体是配对抗体；
所述第一白细胞介素-6单克隆抗体和第二白细胞介素-6单克隆抗体是配对抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂条，其特征在于，所述配对抗体的相加指数AI≥95％。
3.根据权利要求1或2所述的试剂条，其特征在于，所述金垫中第一基质金属蛋白酶-8单克隆抗体的浓度为25～35μg/mL，第一白细胞介素-6单克隆抗体的浓度为25～35μg/mL；
所述硝酸纤维素膜上的质控线C线包被抗鼠IgG多克隆抗体浓度为0.3～0.6mg/mL；检测线T1线包被第二基质金属蛋白酶-8单克隆抗体浓度为0.6～1.0mg/mL，检测线T2线包被第二白细胞介素-6单克隆抗体浓度为0.8～1.2mg/mL。
4.根据权利要求1或2所述的试剂条，其特征在于，所述试剂条还包括底衬(1)、样品垫(8)和吸收垫(3)；在所述底衬(1)上依次粘贴吸收垫(3)、硝酸纤维素膜(2)、金垫(4)和样品垫(8)，所述金垫(4)的两端分别与所述硝酸纤维素膜(2)和样品垫(8)的部分重叠；所述硝酸纤维素膜(2)的两端分别与所述吸收垫(3)和金垫(4)的部分重叠。
5.权利要求1～4任一项所述试剂条在制备检测腹膜炎装置中的应用。
6.一种同时检测基质金属蛋白酶-8和白细胞介素-6的装置，其特征在于，所述检测装置包括：负压单元(9)和检测单元(10)；
所述负压单元(9)包括负压体(11)和密封件(12)；在所述密封件(12)上设有一个抽真空孔(13)和一个进样器(14)；
所述检测单元(10)包括：检测器(25)和样品棒(18)；
所述检测器(25)包括：权利要求1～4任一项所述的试剂条(17)；
所述样品棒(18)与所述试剂条(17)的样品垫(8)部分重叠，所述样品棒(18)压叠于样品垫(8)上。
7.根据权利要求6所述的装置，其特征在于，所述检测器(25)还包括：外壳(16)；
所述外壳(16)包括可拆卸连接的壳体一(19)和壳体二(20)，所述壳体一(19)或壳体二(20)设有观察窗(21)，所述试剂条(17)设置在外壳(16)的壳内，所述试剂条(17)中的硝酸纤维素膜(2)上包被有两条检测线和一条质控线的一侧面向观察窗(21)。
8.根据权利要求6所述的装置，其特征在于，所述密封件(12)还包括：在密封件(12)面向负压体(11)一侧设置有连接装置(26)；所述密封件(12)和检测单元(10)通过连接装置(26)连接。
9.权利要求1～4任一项所述试剂条或权利要求6～8任一项所述装置在检测基质金属蛋白酶-8和/或白细胞介素-6中的应用。
10.一种利用权利要求6～8任一项所述装置检测基质金属蛋白酶-8和/或白细胞介素-6的方法，其特征在于，包括以下步骤：
通过抽真空孔(13)将负压体(11)进行抽真空处理；将待测样本通过进样器(14)吸入负压体(11)中，当样品棒(18)暴露在外壳(16)部位的1/3～1/2浸入样本中时，停止进样，通过观察窗(21)观察结果；
判定结果如下：若质控线C线出现一条红色条带，同时T1线有一条红色条带，则检测样本中基质金属蛋白酶-8为阳性；
若质控线C线出现一条红色条带，同时T2线有一条红色条带，则检测样本中白细胞介素-6为阳性；
若质控线C线出现一条红色条带，同时T1线有一条红色条带，T2线有一条红色条带，则检测样本中基质金属蛋白酶-8与白细胞介素-6均为阳性；
若仅质控线C线出现一条红色条带，在T1线或T2线无红色条带出现，则检测样本中基质金属蛋白酶-8与白细胞介素-6均为阴性。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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