CN113774020A - 一种脂肪间充质干细胞库的构建方法 - Google Patents
一种脂肪间充质干细胞库的构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113774020A CN113774020A CN202110972670.XA CN202110972670A CN113774020A CN 113774020 A CN113774020 A CN 113774020A CN 202110972670 A CN202110972670 A CN 202110972670A CN 113774020 A CN113774020 A CN 113774020A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- adipose
- mesenchymal stem
- cells
- derived mesenchymal
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 77
- 238000010276 construction Methods 0.000 title abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 97
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 32
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 30
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 3
- XMGQYMWWDOXHJM-JTQLQIEISA-N (+)-α-limonene Chemical compound CC(=C)[C@@H]1CCC(C)=CC1 XMGQYMWWDOXHJM-JTQLQIEISA-N 0.000 claims description 26
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 18
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 18
- XKLMZUWKNUAPSZ-UHFFFAOYSA-N N-(2,6-dimethylphenyl)-2-{4-[2-hydroxy-3-(2-methoxyphenoxy)propyl]piperazin-1-yl}acetamide Chemical compound COC1=CC=CC=C1OCC(O)CN1CCN(CC(=O)NC=2C(=CC=CC=2C)C)CC1 XKLMZUWKNUAPSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229960000213 ranolazine Drugs 0.000 claims description 14
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 13
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 12
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 11
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims description 10
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 claims description 10
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims description 9
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 9
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 claims description 9
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 claims description 9
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 9
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 9
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 claims description 9
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 claims description 9
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 claims description 9
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 241000220451 Canavalia Species 0.000 claims description 6
- 235000010520 Canavalia ensiformis Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 6
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims description 5
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 claims description 5
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims 1
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 35
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 3
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 3
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N Glycerol-phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(O)CO XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000897400 Homo sapiens CD59 glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003679 aging effect Effects 0.000 description 1
- RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N alizarin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC=C3C(=O)C2=C1 RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种脂肪间充质干细胞库的构建方法，包括以下步骤：（1）对选取的合格离体脂肪样本供体建立登记档案；（2）取离体的脂肪组织经消化、分离得到脂肪间充质干细胞；（3）将步骤（2）分离得到脂肪间充质干细胞接种在纯化培养基上，培养至细胞汇合度达到80‑85%时消化，离心，向细胞中加入纯化培养基重悬，记为P0代细胞；（4）将P0代细胞采用上述纯化培养基进行传代培养，取传代培养得到的P3代细胞进行冻存，构建脂肪间充质干细胞库；本发明还具体限定了纯化培养基的组成。本发明提供的细胞库的构建方法可以充分满足脂肪间充质干细胞的科研和临床应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种细胞库的构建方法，尤其涉及一种人脂肪间充质干细胞库的构建方法。
背景技术
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据发育阶段的不同，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞虽然能分化为多种不同的组织，但在细胞分化调节和伦理上局限性限制了其临床应用。间充质干细胞是目前备受关注的一类具有多向分化潜能的成体干细胞。
脂肪间充质干细胞是从脂肪组织获得的一类有多向分化潜能的间充质干细胞，其在特定诱导条件下可以向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞，甚至神经细胞分化。和骨髓来源的间充质干细胞相比，脂肪干细胞更具有稳定性和不易衰老性，是组织工程中不可多得的优质种子细胞；脂肪间充质干细胞(ADSCs)作为来源于脂肪的间充质干细胞，具有取材容易、少量组织即可获取大量干细胞，适宜大规模培养，并且取材过程对机体损伤小。脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞相比，具有更低的免疫源性，移植的时候不会被机体当作外来物而排斥，适宜自体移植、安全性能高，脂肪间充质干细胞库的建立逐渐成为近年来新的研究热点之一。
现有的脂肪间充质干细胞库的建立过程繁琐，在细胞获取过程中加入的胎牛血清等外源性血清影响细胞库中脂肪间充质干细胞的质量，因此极大的限制了脂肪间充质干细胞的临床应用。随着各个领域对干细胞需求量的增加，有必要对脂肪间充质干细胞库的建立过程进行改进，提高脂肪间充质干细胞库的建立效率，促进脂肪间充质干细胞在各个领域的广泛应用。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种脂肪间充质干细胞库的构建方法，有效提高细胞库中细胞的纯度和活性，为脂肪间充质干细胞的临床应用提供保障。
本发明的目的采用如下技术方案实现：
一种脂肪间充质干细胞库的构建方法，包括以下步骤：
（1）对选取的合格离体脂肪样本供体建立登记档案；
（2）取离体的脂肪组织经消化、分离得到脂肪间充质干细胞；
（3）将步骤（2）分离得到脂肪间充质干细胞接种在纯化培养基上，培养至细胞汇合度达到80-85%时吸弃培养基，加入0.25%胰酶进行消化，加入PBS稀释后离心，向细胞中加入纯化培养基重悬，记为P0代细胞；
（4）将P0代细胞采用上述纯化培养基按照1：2-3的比例进行传代培养，取传代培养得到的P3代细胞进行冻存，构建脂肪间充质干细胞库；
所述纯化培养基的组成为：基础培养基和添加在基础培养基中的以下成分：谷胱甘肽、D-柠檬烯、雷诺嗪、刀豆蛋白A、维生素C、亚硒酸钠、L-精氨酸。
进一步地，所述纯化培养基的组成为：基础培养基DMEM/F12，添加在DMEM/F12培养基中各成分以终浓度计：谷胱甘肽20-25μg/mL、D-柠檬烯8.5-11.5ng/mL、雷诺嗪5.8-7.2ng/mL、刀豆蛋白A 6.5-8.9ng/mL、维生素C 1-5μg/mL、亚硒酸钠2.5-4.5ng/mL、L-精氨酸5-10μg/mL。
进一步地，所述添加在DMEM/F12培养基中各成分以终浓度计：谷胱甘肽23μg/mL、D-柠檬烯10ng/mL、雷诺嗪6.5ng/mL、刀豆蛋白A 7.4ng/mL、维生素C2.5μg/mL、亚硒酸钠3ng/mL、L-精氨酸8μg/mL。
进一步地，步骤（2）将脂肪样本离心后取上层的脂肪组织，用PBS清洗后再次离心，向离心后的脂肪组织中加入1%Ⅱ型胶原酶震荡消化30min，消化完成后加入PBS稀释后离心，沉淀即为脂肪间充质干细胞。
进一步地，所述步骤（3）中分离得到的脂肪间充质干细胞在纯化培养基中的密度为1-5×106个/mL，细胞在37℃，5%CO2的培养箱中进行培养，培养过程中每2天更换一次培养基。
进一步地，步骤（3）中P0代细胞在纯化培养基中重悬后的密度为1-5×105个/mL。
进一步地，步骤（4）中取培养至融合度70-80%的P3代细胞用0.25%胰酶消化后加入PBS稀释，取部分细胞进行计数，测定细胞活率，检测细胞增殖活性、纯度及多向分化能力，将剩余细胞离心后分离上清液和细胞分离，向离心后的细胞中加入冻存液进行重悬，细胞密度为1-8×107个/mL，将冻存液分装在2mL的冻存管中，每管1mL，标记冻存日期及细胞信息档案后在液氮中进行冷冻保存。
进一步地，所述冻存液为向纯化培养基中添加1-5%的DMSO制备得到。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明提供一种脂肪间充质干细胞库的构建方法，在细胞库的构建过程中，为保证细胞库中细胞的质量，本发明采用的纯化培养基中添加雷诺嗪、D-柠檬烯、刀豆蛋白A等成分，一方面，雷诺嗪可有效的筛选出脂肪间充质干细胞，提高脂肪间充质干细胞的纯度，无需经过多次传代扩增即能收获大量纯度较高的脂肪间充质干细胞；另一方面，添加的D-柠檬烯和刀豆蛋白A一起协同作用提高脂肪间充质干细胞的活性，经培养可获得大量有较高增殖活性和分化潜能的脂肪间充质干细胞，并且整个过程无需添加动物血清，充分保证了脂肪间充质干细胞库中的细胞质量。
本发明的纯化培养基仅需添加1-5%含量的DMSO即可作为冻存液使用，降低了冻存液中DMSO的用量，有效的保证冻存效率。
具体实施方式
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
实施例1
一种脂肪间充质干细胞库的构建方法，包括以下步骤：
（1）对选取的合格离体脂肪样本供体建立登记档案，年龄在20-35岁之间，包括排除有既往病史、家族遗传史、传染病史以及其他健康异常情况，并对以下项目进行体检：梅毒螺旋抗体、乙肝表面抗原、丙型肝炎抗体、转氨酶、艾滋病抗体，检查合格者方可作为脂肪组织的供体；
（2）取离体的脂肪组织分装在50mL的离心管中，1500r/min离心10min，取上层的脂肪组织，加入等体积的 PBS清洗后在1000r/min离心10min，向离心后的脂肪组织中加入1%Ⅱ型胶原酶在37℃震荡消化30min，消化完成后加入PBS稀释后再次在1000r/min离心10min，沉淀即为脂肪间充质干细胞；
（3）将步骤（1）分离得到脂肪间充质干细胞以3×106个/mL的密度接种在T75培养瓶的纯化培养基上，在37℃，5%CO2的培养箱中进行培养，培养过程中每2天更换一次培养基，培养至细胞汇合度达到80%时吸弃培养基，加入0.25%胰酶进行消化，加入PBS稀释后离心，向细胞中加入纯化培养基重悬，重悬后的密度为2×105个/mL，记为P0代细胞，
（4）将上述P0代细胞采用上述纯化培养基按照1：2的比例进行传代培养，取培养至融合度75%的P3代细胞用0.25%胰酶消化后加入PBS稀释，取部分细胞进行计数，测定细胞活率，检测细胞的增殖能力及多向分化能力，剩余细胞离心将上清液和细胞分离，向离心后的细胞中加入冻存液进行重悬，冻存液为向纯化培养基中添加3%的DMSO制备得到，冻存液中细胞密度为5×107个/mL，将冻存液分装在2mL的冻存管中，每管1mL，在液氮中进行冷冻保存构建脂肪间充质干细胞库，标记冻存日期及细胞信息档案，便于检索查询；
所述纯化培养基的组成为：基础培养基DMEM/F12，添加在DMEM/F12培养基中各成分以终浓度计：谷胱甘肽23μg/mL、D-柠檬烯10ng/mL、雷诺嗪6.5ng/mL、刀豆蛋白A 7.4ng/mL、维生素C2.5μg/mL、亚硒酸钠3ng/mL、L-精氨酸8μg/mL。
实施例2
一种脂肪间充质干细胞库的构建方法，包括以下步骤：
（1）对选取的合格离体脂肪样本供体建立登记档案，年龄在20-35岁之间，包括排除有既往病史、家族遗传史、传染病史以及其他健康异常情况，并对以下项目进行体检：梅毒螺旋抗体、乙肝表面抗原、丙型肝炎抗体、转氨酶、艾滋病抗体，检查合格者方可作为脂肪组织的供体；
（2）取离体的脂肪组织分装在50mL的离心管中，1500r/min离心10min，取上层的脂肪组织，加入等体积的 PBS清洗后在1000r/min离心10min，向离心后的脂肪组织中加入1%Ⅱ型胶原酶在37℃震荡消化30min，消化完成后加入PBS稀释后再次在1000r/min离心10min，沉淀即为脂肪间充质干细胞；
（3）将步骤（1）分离得到脂肪间充质干细胞以1×106个/mL的密度接种在T75培养瓶的纯化培养基上，在37℃，5%CO2的培养箱中进行培养，培养过程中每2天更换一次培养基，培养至细胞汇合度达到85%时吸弃培养基，加入0.25%胰酶进行消化，加入PBS稀释后离心，向细胞中加入纯化培养基重悬，重悬后的密度为1×105个/mL，记为P0代细胞，
（4）将上述P0代细胞采用上述纯化培养基按照1：3的比例进行传代培养，取培养至融合度70%的P3代细胞用0.25%胰酶消化后加入PBS稀释，取部分细胞进行计数，测定细胞活率，检测细胞的增殖能力及多向分化能力，剩余细胞离心将上清液和细胞分离，向离心后的细胞中加入冻存液进行重悬，冻存液为向纯化培养基中添加3%的DMSO制备得到，冻存液中细胞密度为1×107个/mL，将冻存液分装在2mL的冻存管中，每管1mL，在液氮中进行冷冻保存构建脂肪间充质干细胞库，标记冻存日期及细胞信息档案，便于检索查询；
所述纯化培养基的组成为：基础培养基DMEM/F12，添加在DMEM/F12培养基中各成分以终浓度计：谷胱甘肽20μg/mL、D-柠檬烯8.5ng/mL、雷诺嗪5.8ng/mL、刀豆蛋白A 6.5ng/mL、维生素C1μg/mL、亚硒酸钠2.5ng/mL、L-精氨酸5μg/mL。
实施例3
一种脂肪间充质干细胞库的构建方法，包括以下步骤：
（1）对选取的合格离体脂肪样本供体建立登记档案，年龄在20-35岁之间，包括排除有既往病史、家族遗传史、传染病史以及其他健康异常情况，并对以下项目进行体检：梅毒螺旋抗体、乙肝表面抗原、丙型肝炎抗体、转氨酶、艾滋病抗体，检查合格者方可作为脂肪组织的供体；
（2）取离体的脂肪组织分装在50mL的离心管中，1500r/min离心10min，取上层的脂肪组织，加入等体积的 PBS清洗后在1000r/min离心10min，向离心后的脂肪组织中加入1%Ⅱ型胶原酶在37℃震荡消化30min，消化完成后加入PBS稀释后再次在1000r/min离心10min，沉淀即为脂肪间充质干细胞；
（3）将步骤（1）分离得到脂肪间充质干细胞以5×106个/mL的密度接种在T75培养瓶的纯化培养基上，在37℃，5%CO2的培养箱中进行培养，培养过程中每2天更换一次培养基，培养至细胞汇合度达到80%时吸弃培养基，加入0.25%胰酶进行消化，加入PBS稀释后离心，向细胞中加入纯化培养基重悬，重悬后的密度为5×105个/mL，记为P0代细胞，
（4）将上述P0代细胞采用上述纯化培养基按照1： 3的比例进行传代培养，取培养至融合度80%的P3代细胞用0.25%胰酶消化后加入PBS稀释，取部分细胞进行计数，测定细胞活率，检测细胞的增殖能力及多向分化能力，剩余细胞离心将上清液和细胞分离，向离心后的细胞中加入冻存液进行重悬，冻存液为向纯化培养基中添加5%的DMSO制备得到，冻存液中细胞密度为8×107个/mL，将冻存液分装在2mL的冻存管中，每管1mL，在液氮中进行冷冻保存构建脂肪间充质干细胞库，标记冻存日期及细胞信息档案，便于检索查询；
所述纯化培养基的组成为：基础培养基DMEM/F12，添加在DMEM/F12培养基中各成分以终浓度计：谷胱甘肽25μg/mL、D-柠檬烯11.5ng/mL、雷诺嗪7.2ng/mL、刀豆蛋白A8.9ng/mL、维生素C5μg/mL、亚硒酸钠4.5ng/mL、L-精氨酸10μg/mL。
对比例1
对比例1提供脂肪间充质干细胞库的构建方法，和实施例1的区别为省去纯化培养基中的雷诺嗪，其余均和实施例1相同。
对比例2
对比例2提供脂肪间充质干细胞库的构建方法，和实施例1的区别为省去纯化培养基中的D-柠檬烯，其余均和实施例1相同。
对比例3
对比例3提供脂肪间充质干细胞库的构建方法，和实施例1的区别为省去纯化培养基中的刀豆蛋白A，其余均和实施例1相同。
对比例4
对比例4提供脂肪间充质干细胞库的构建方法，和实施例1的区别为省去纯化培养基中的雷诺嗪、D-柠檬烯和刀豆蛋白A，其余均和实施例1相同。
试验例
细胞活率检测：取冻存前的P3代脂肪间充质干细胞，采用台盼蓝染色法统计细胞的活率，结果如表1所示。
表1
| 组别 | 存活率 |
| 实施例1 | 99.28% |
| 对比例1 | 97.46% |
| 对比例2 | 84.97% |
| 对比例3 | 86.72% |
| 对比例4 | 79.83% |
由表1可以看出，实施例1中细胞的存活率高于对比例1至4，复符合细胞库对细胞活性的要求，对比例1至4中分别调整了纯化培养基的组成，细胞活性有不同程度的下降。
细胞纯度检测：取收集的P3代细胞流式检测结果如表2所示。
表2
| 检测指标阳性率 | CD105 | CD90 | CD73 | CD59 | CD44 | CD13 | CD34 | CD14 |
| 实施例1 | 99.89% | 99.94% | 99.82% | 99.95% | 99.76% | 99.87% | 0.32% | 0.18% |
| 对比例1 | 98.05% | 97.69% | 98.21% | 97.96% | 97.64% | 98.09% | 2.04% | 2.11% |
| 对比例2 | 99.85% | 99.92% | 99.87% | 99.91% | 99.79% | 99.83% | 0.33% | 0.17% |
| 对比例3 | 99.80% | 99.91% | 99.93% | 99.88% | 99.81% | 99.72% | 0.35% | 0.21% |
| 对比例4 | 97.86% | 97.73% | 98.19% | 97.92% | 97.71% | 98.11% | 2.05% | 2.09% |
由表2可以看出：实施例1和对比例2、对比例3中细胞纯度较高，细胞表面阳性抗原表达率均高于99%，阴性抗原表达率均低于1%。对比例1和对比例4中细胞纯度和实施例1相比有一定程度的降低，这是因为对比例1和对比例4中省去了雷诺嗪，该成分的添加可以提高脂肪间充质干细胞的纯度。
细胞增殖能力检测：取实施例1，对比例1至4中收获的P3代脂肪间充质干细胞分解加入纯化培养基，吹打成细胞悬液，调整细胞悬液的密度为1×105个/mL，分别接种于12孔板中，置于37℃、5%CO2的培养箱中进行培养连续培养7天，各取3孔用台盼兰染色进行细胞计数，取平均值，结果如表3所示。
表3
| 组别 | 细胞数量（×10<sup>5</sup>个） |
| 实施例1 | 26.24 |
| 对比例1 | 22.51 |
| 对比例2 | 17.48 |
| 对比例3 | 19.65 |
| 对比例4 | 15.49 |
由表4可以看出经过相同的培养过程后，实施例1中的收获细胞数量最多，说明实施例1中的脂肪间充质干细胞的增殖活性最好。
脂肪间充质干细胞成骨能力检测：将实施例1，对比例1至4中收获的P3代细胞接种在12孔板中的成骨诱导培养基中（DMEM/F12培养基＋10%FBS+地塞米松80nM+胰岛素2nM+磷酸甘油10mM），细胞密度为1×105个/mL，在37℃，5%CO2的培养箱中诱导培养，培养过程中每3天进行全量换液，培养14天后弃去培养基，PBS清洗后，用4%的多聚甲醛在4℃固定过夜，弃去多聚甲醛，再用PBS清洗2次，用0.5%的茜素红染色10min，弃去染色液，水洗3遍，用显微镜观察染色情况，统计钙化面积百分比，结果如表4所示。
表4
| 组别 | 钙化面积 |
| 实施例1 | 42.17% |
| 对比例1 | 38.41% |
| 对比例2 | 30.77% |
| 对比例3 | 32.59% |
| 对比例4 | 28.84% |
由表4可以看出实施例1的中的脂肪间充质干细胞的成骨能力较好，对比例1至4中的细胞和实施例1相比成骨能力均有不同程度的下降。
综上可知，本发明细胞库中的脂肪间充质干细胞活性好、纯度高，增殖能力强，并且具有分化潜能，可以充分满足脂肪间充质干细胞的各项科研和临床应用。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (8)
1.一种脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）对选取的合格离体脂肪样本供体建立登记档案；
（2）取离体的脂肪组织经消化、分离得到脂肪间充质干细胞；
（3）将步骤（2）分离得到脂肪间充质干细胞接种在纯化培养基上，培养至细胞汇合度达到80-85%时吸弃培养基，加入0.25%胰酶进行消化，加入PBS稀释后离心，向细胞中加入纯化培养基重悬，记为P0代细胞；
（4）将P0代细胞采用上述纯化培养基按照1：2-3的比例进行传代培养，取传代培养得到的P3代细胞进行冻存，构建脂肪间充质干细胞库；
所述纯化培养基的组成为：基础培养基和添加在基础培养基中的以下成分：谷胱甘肽、D-柠檬烯、雷诺嗪、刀豆蛋白A、维生素C、亚硒酸钠、L-精氨酸。
2.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，所述纯化培养基的组成为：基础培养基DMEM/F12，添加在DMEM/F12培养基中各成分以终浓度计：谷胱甘肽20-25μg/mL、D-柠檬烯8.5-11.5ng/mL、雷诺嗪5.8-7.2ng/mL、刀豆蛋白A 6.5-8.9ng/mL、维生素C 1-5μg/mL、亚硒酸钠2.5-4.5ng/mL、L-精氨酸5-10μg/mL。
3.根据权利要求2所述脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，所述添加在DMEM/F12培养基中各成分以终浓度计：谷胱甘肽23μg/mL、D-柠檬烯10ng/mL、雷诺嗪6.5ng/mL、刀豆蛋白A 7.4ng/mL、维生素C2.5μg/mL、亚硒酸钠3ng/mL、L-精氨酸8μg/mL。
4.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，步骤（2）将脂肪样本离心后取上层的脂肪组织，用PBS清洗后再次离心，向离心后的脂肪组织中加入1%Ⅱ型胶原酶震荡消化30min，消化完成后加入PBS稀释后离心，沉淀即为脂肪间充质干细胞。
5.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，所述步骤（3）中分离得到的脂肪间充质干细胞在纯化培养基中的密度为1-5×106个/mL，细胞在37℃，5%CO2的培养箱中进行培养，培养过程中每2天更换一次培养基。
6.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，步骤（3）中P0代细胞在纯化培养基中重悬后的密度为1-5×105个/mL。
7.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，步骤（4）中取培养至融合度70-80%的P3代细胞用0.25%胰酶消化后加入PBS稀释，取部分细胞进行计数，测定细胞活率，检测细胞增殖活性、纯度及多向分化能力，将剩余细胞离心后分离上清液和细胞分离，向离心后的细胞中加入冻存液进行重悬，细胞密度为1-8×107个/mL，将冻存液分装在2mL的冻存管中，每管1mL，标记冻存日期及细胞信息档案后在液氮中进行冷冻保存。
8.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞库的构建方法，其特征在于，所述冻存液为向纯化培养基中添加1-5%的DMSO制备得到。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110972670.XA CN113774020B (zh) | 2021-08-24 | 2021-08-24 | 一种脂肪间充质干细胞库的构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110972670.XA CN113774020B (zh) | 2021-08-24 | 2021-08-24 | 一种脂肪间充质干细胞库的构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113774020A true CN113774020A (zh) | 2021-12-10 |
| CN113774020B CN113774020B (zh) | 2023-04-14 |
Family
ID=78838980
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110972670.XA Active CN113774020B (zh) | 2021-08-24 | 2021-08-24 | 一种脂肪间充质干细胞库的构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113774020B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114651812A (zh) * | 2022-02-22 | 2022-06-24 | 杨明 | 一种脂肪间充质干细胞冻存保护液及冻存方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000031238A2 (en) * | 1998-11-25 | 2000-06-02 | Genetica, Inc. | Methods and reagents for increasing proliferative capacity and preventing replicative senescence |
| US20140023623A1 (en) * | 2012-07-23 | 2014-01-23 | Gamida Cell Ltd. | Methods of Culturing and Expanding Mesenchymal Stem Cells and Isolated Cell Populations Generated Thereby |
| WO2014203269A2 (en) * | 2013-06-17 | 2014-12-24 | Kasiak Research Pvt. Ltd. | Method for isolation, purification and industrial scale expansion of canine adipose tissue derived mesenchymal stem cells |
| WO2016022947A1 (en) * | 2014-08-07 | 2016-02-11 | The Johns Hopkins University | Nanoparticle modification of human adipose-derived mesenchymal stem cells for treating brain cancer and other neurological diseases |
| CN113201489A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-08-03 | 达瑟儿(上海)生命科技有限公司 | 一种脂肪间充质干细胞工作细胞库的制备方法 |
-
2021
- 2021-08-24 CN CN202110972670.XA patent/CN113774020B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000031238A2 (en) * | 1998-11-25 | 2000-06-02 | Genetica, Inc. | Methods and reagents for increasing proliferative capacity and preventing replicative senescence |
| US20140023623A1 (en) * | 2012-07-23 | 2014-01-23 | Gamida Cell Ltd. | Methods of Culturing and Expanding Mesenchymal Stem Cells and Isolated Cell Populations Generated Thereby |
| WO2014203269A2 (en) * | 2013-06-17 | 2014-12-24 | Kasiak Research Pvt. Ltd. | Method for isolation, purification and industrial scale expansion of canine adipose tissue derived mesenchymal stem cells |
| WO2016022947A1 (en) * | 2014-08-07 | 2016-02-11 | The Johns Hopkins University | Nanoparticle modification of human adipose-derived mesenchymal stem cells for treating brain cancer and other neurological diseases |
| CN113201489A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-08-03 | 达瑟儿(上海)生命科技有限公司 | 一种脂肪间充质干细胞工作细胞库的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 李旭等: "丹酚酸B及丹参酮ⅡA诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞", 《中国组织工程研究》 * |
| 王宇等: "三磷酸胞苷二钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究", 《中国现代医学杂志》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114651812A (zh) * | 2022-02-22 | 2022-06-24 | 杨明 | 一种脂肪间充质干细胞冻存保护液及冻存方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113774020B (zh) | 2023-04-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhu et al. | Manual isolation of adipose-derived stem cells from human lipoaspirates | |
| EP1733027B1 (en) | Method for obtaining mesenchymal stem cells | |
| CN102639694B (zh) | 制备间充质干细胞、组合物和其试剂盒的方法 | |
| CN104164403B (zh) | 一种提取及培养脂肪干细胞的方法 | |
| CN103966162B (zh) | 一种经血来源间充质干细胞分离方法 | |
| Li et al. | Donor's age dependent proliferation decrease of human bone marrow mesenchymal stem cells is linked to diminished clonogenicity | |
| CN109234229B (zh) | 从胎盘血管分离间充质干细胞的方法和所用消化酶组合物 | |
| WO2016049986A1 (zh) | 一种脐带间充质干细胞的分离方法 | |
| CN113249317A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞的分离培养扩增方法及系统 | |
| CN105238748A (zh) | 一种胎盘源壁蜕膜间充质干细胞分离冷冻的制备方法 | |
| CN102433301A (zh) | 一种提取扩增单克隆间充质干细胞的方法及所用培养液 | |
| CN109706115B (zh) | 一种小鼠骨髓间充质干细胞细胞系的构建方法 | |
| CN105039248B (zh) | 树鼩骨髓间充质干细胞培养系统 | |
| CN115058391B (zh) | 一种低氧型脐带间充质干细胞的培养方法 | |
| Moreira et al. | Successful use of human AB serum to support the expansion of adipose tissue-derived mesenchymal stem/stromal cell in a microcarrier-based platform | |
| Hassan et al. | Isolation of umbilical cord mesenchymal stem cells using human blood derivatives accompanied with explant method | |
| CN109628388B (zh) | 用消化酶组合物从胎盘血管分离间充质干细胞 | |
| CN106011052A (zh) | 一种高纯度经血来源干细胞的制备方法 | |
| CN113774020B (zh) | 一种脂肪间充质干细胞库的构建方法 | |
| CN106119191A (zh) | 一种胎盘绒毛板间充质干细胞及临床化制备方法 | |
| CN103013912A (zh) | 密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞的方法 | |
| CN107236705B (zh) | 一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞培养体系 | |
| CN100453640C (zh) | 一种从脐带血中分离多能成体祖细胞的方法 | |
| Kadkhoda et al. | Assessment of surface markers derived from human periodontal ligament stem cells: an in vitro study | |
| CN115125192B (zh) | 一种骨髓上清液及其在细胞培养中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20230327 Address after: Floor 3, No. 14, No. 19, Hexie Street, Economic Development Zone, Handan City, Hebei Province, 056000 Applicant after: Hebei Penghe Biotechnology Co.,Ltd. Address before: No. 60, group 8, Yanying village, Sanxing Town, Haimen City, Nantong City, Jiangsu Province, 226100 Applicant before: NANTONG MEVID LIFE SCIENCE Co.,Ltd. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |