CN113773360B - 一种从罗汉果中分离罗汉果醇的方法 - Google Patents

Abstract

一种从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，包括以下步骤：（1）提取、水解：将罗汉果碾破，破壳但不破籽，加入酸水，加热提取并水解，得罗汉果总皂苷水解液；（2）罗汉果总皂苷水解物的制备：将所述罗汉果总皂苷水解液冷却至室温，用碱液中和，静置沉淀，离心过滤，取滤饼干燥，得罗汉果总皂苷水解物；（3）硅胶拌样；（4）湿法装柱及干法上样；（5）梯度洗脱；（6）浓缩、结晶、干燥，即得罗汉果醇产品。本发明不需要以高含量的罗汉果甜苷成品或罗汉果提取物为原料，将罗汉果甜苷提取和水解过程合二为一，罗汉果总苷损耗低，罗汉果醇收率高，产品中的罗汉果醇含量高。

Description

一种从罗汉果中分离罗汉果醇的方法

技术领域

本发明涉及一种分离罗汉果醇的方法，具体涉及一种从罗汉果中分离罗汉果醇的方法。

背景技术

罗汉果是我国特有的药食同源罗汉果藤本植物结的果实，其中所含的罗汉果皂苷是一种葫芦烷型三萜皂苷，具有高甜度（蔗糖甜度的300～400倍）、低热量的特点，同时具有重要的药理活性，在食品、保健品及医药等领域具有广泛的应用价值。研究发现，罗汉果中含有数十种罗汉果皂苷，它们的分子结构都以四环三萜结构为母核，并与1～6个葡萄糖分子连接。

罗汉果醇（Mogrol）是罗汉果甜苷ⅠA1、ⅠE1、ⅡE、Ⅲ、 Ⅳ、ⅣE、Ⅴ和赛门苷I等的苷元；11-O-罗汉果醇（11-O-Mogrol）则是11-O-罗汉果苷V的苷元。

近些年来，有文献报道，罗汉果醇对于老年性痴呆（阿尔茨海默症，AD）以及缺血性脑痴呆引起的空间认知障碍和学习记忆功能下降，具有明显的改善作用。罗汉果醇能够增加老年性痴呆大鼠大脑皮层抑制性氨基酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸的含量，降低兴奋性谷氨酸的毒性，并能减少AD大鼠大脑海马组织中β-AP的产生，对于脑缺血引起的学习记忆功能下降也具有明显改善作用。罗汉果醇还能明显改善NaNO₂所致的小鼠记忆障碍，具有明显的抗老年痴呆的作用，可以作为临床药物开发使用（参见CN201610657939.4号发明专利申请说明书）。

CN101033244B公开了一种罗汉果醇的提纯制备方法，是以罗汉果干果为原料，将罗汉果干果粉碎，再通过乙醇回流提取、乙酸乙酯萃取、盐酸水解、中和、硅胶柱层析、氯仿、甲醇洗脱和重结晶等步骤，得到纯度大于95%的罗汉果醇。该方法在粉碎过程中，是将原料罗汉果干果的果壳、果肉和果籽不加区分，一并粉碎，这会影响后续操作步骤的顺利进行，降低罗汉果醇的收率；使用的原料中，罗汉果醇的含量极低，这也不可避免的存在原料处理量大、罗汉果醇产品得率低的弊端；酸的浓度和用量过大，部分罗汉果醇在高浓度强酸和高温环境中易被分解；且使用了大量易燃易爆、有毒有害的化工溶剂氯仿和甲醇，对环境污染严重，不适宜工业化生产。

CN105832748A公开了一种从罗汉果总皂苷中制备罗汉果醇新型衍生物的方法，是以含罗汉果总皂苷的罗汉果提取物为原料，通过酸性醇水溶液加热水解、碱中和、浓缩、萃取、硅胶柱分离等步骤，得到罗汉果醇及其衍生物。该方法由于原料使用罗汉果总皂苷，生产成本必然较高；水解方式为常压加热酸水解方式，且酸的用量过少，因此水解反应的副反应多，无法得到罗汉果醇纯品的同时，罗汉果醇衍生物的收率极低。

CN105950695A公开了一种酶水解与氧化裂解联用制备罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇的方法，是以罗汉果皂苷为原料，通过水解酶酶解、高碘酸钠氧化开裂、硼氢化钠还原、酸水解、萃取、硅胶柱层析等步骤，得到罗汉果醇和11-氧化-罗汉果醇。该方法也是以价格昂贵的罗汉果皂苷为原料，且步骤繁琐、对设备和操作水平的要求高、使用了大量有毒有害的化工试剂，成本高昂，产品得率低，不适宜工业化生产。

CN111187328A公开了一种制备罗汉果醇的方法，是以罗汉果提取物为原料，经加压水解、上柱吸附、梯度洗脱、浓缩干燥、精制等步骤，得到罗汉果醇精品。但该方法所用的原料，同样依赖罗汉果醇含量相对较高价格较贵的罗汉果提取物，同时，收率偏低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种不需要以高含量的罗汉果甜苷成品或罗汉果提取物为原料，工艺操作简便，罗汉果总苷损耗低，罗汉果醇收率高，产品中的罗汉果醇含量高，对设备要求低，对环境污染小，适宜于工业化生产的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，包括以下步骤：

（1）提取、水解：将罗汉果碾破，破壳但不破籽，加入酸水，加热提取并水解，然后粗过滤除去果壳及果籽，得罗汉果总皂苷水解液；

（2）罗汉果总皂苷水解物的制备：将步骤（1）所得的罗汉果总皂苷水解液冷却至室温，用碱液中和，静置沉淀，离心过滤，取滤饼干燥，得罗汉果总皂苷水解物；

（3）硅胶拌样：将步骤（2）所得的罗汉果总皂苷水解物用无水甲醇或乙醇分散，加入柱层析硅胶，搅拌，混合均匀，干燥，得拌样硅胶；

（4）湿法装柱及干法上样：往层析柱中先加入乙酸乙酯，再倒入柱层析硅胶，最后将步骤（3）所得的拌样硅胶覆盖，得硅胶层析柱；

（5）梯度洗脱：依次用洗脱剂I和洗脱剂II对步骤（4）所得的硅胶层析柱进行梯度洗脱，收集洗脱剂II洗脱所得的洗脱液II；

（6）浓缩、结晶、干燥：将步骤（5）所得的洗脱液II减压浓缩，得浓缩液，将浓缩液冷冻降温，搅拌析晶，抽滤，真空干燥，即得罗汉果醇产品。

优选地，步骤（1）中，所述的酸水为盐酸或硫酸的水溶液；所述酸水的质量百分比浓度为0.5%～5.0%；所述酸水的体积用量为罗汉果原料重量的5～10倍（L/kg）。

优选地，步骤（1）中，所述加热的温度为95～120℃；所述加热提取并水解的时间为4～6小时。使用酸水并加热的目的之一，是将罗汉果原料中的总皂苷浸出并将其水解为苷元（罗汉果醇、11-O-罗汉果醇）；目的之二是将罗汉果原料中的果胶、蛋白质等水溶性大分子水解为单糖、氨基酸等小分子，便于后续步骤除去。若酸水的质量百分比浓度过低、酸水的用量过少、加热的温度过低或加热的时间过短，都将无法充分的达到上述目的，造成罗汉果醇的收率偏低；若酸水的质量百分比浓度过高、酸水的用量过多、加热的温度过高或加热的时间过长，不但会造成物料和能源的浪费，还可能导致罗汉果总皂苷苷元的分子结构被破坏，同样会造成罗汉果醇的收率偏低。

本发明中，仅将罗汉果原料碾破，破壳但不破籽，而不是将罗汉果原料果壳、果肉、果籽一并破碎，是因为研究表明，罗汉果果籽中并不含有罗汉果总皂苷，但是含有较多的油脂、黄酮类化合物和色素等杂质，因此，在罗汉果原料破壳但不破籽的状态下，用酸水加热提取并水解，既可以确保罗汉果总皂苷被充分浸出并水解，又可以防止杂质被大量浸出，降低后续分离纯化步骤的难度。

优选地，步骤（2）中，所述的碱液为氢氧化钠或氢氧化钾水溶液；所述中和的pH值为6～8。中和、静置的目的是将水解液中的罗汉果总苷苷元充分沉降，形成沉淀。

本发明中，水解液中和、静置后再离心过滤的目的之一是除去水解液中原有来源于罗汉果的小分子物质（包括果糖、葡萄糖、无机盐、水溶性色素等）；目的之二是除去提取水解过程中产生的小分子物质（包括果胶、蛋白质、多酚的水解产物等）。这些小分子物质为罗汉果总皂苷水解液的主要组成成分，但是由于具有共同的特点——易溶于水，因此可以通过简单的离心过滤，将其与罗汉果总皂苷水解物分离。

优选地，步骤（3）中，所述无水甲醇或无水乙醇的体积用量为罗汉果总皂苷水解物重量的1～3倍（L/kg）。

优选地，步骤（3）中，所述柱层析硅胶的用量为罗汉果总皂苷水解物重量的2～4倍。将罗汉果总皂苷水解物分散并拌入硅胶的目的，是使罗汉果总苷苷元与柱层析硅胶充分接触、黏附并混合均匀。

优选地，步骤（4）中，所述柱层析硅胶的用量为罗汉果总皂苷水解物重量的8～10倍。

优选地，步骤（3）中和步骤（4）中，所述柱层析硅胶的粒度规格为100～400目。

优选地，步骤（4）中，所述硅胶层析柱的高径比为6～10：1。

优选地，步骤（5）中，所述洗脱剂I为乙酸乙酯-甲醇/乙醇混合溶液，其中甲醇/乙醇的体积占比为洗脱剂I总体积的1%～5%。

优选地，步骤（5）中，所述洗脱剂I的用量为2～4BV，所述洗脱剂I洗脱的流速为0.5～2BV/小时。使用洗脱剂I的目的，是将硅胶层析柱中的少量的低极性杂质（来源于提取并水解过程，如脂类成分）洗脱，但是不会将罗汉果醇洗脱。若洗脱剂I的用量过少、甲醇/乙醇的体积占比过小或洗脱的流速过快，都将无法充分的达到上述目的，导致低极性杂质去除不彻底，造成罗汉果醇产品的含量偏低；若洗脱剂I的用量过多、甲醇/乙醇的体积占比过大或洗脱的流速过慢，则有可能将部分罗汉果醇洗脱，造成罗汉果醇产品的收率偏低。

优选地，步骤（5）中，所述洗脱剂II为乙酸乙酯-甲醇/乙醇混合溶液，其中甲醇/乙醇的体积占比为洗脱剂II总体积的10%～20%。

优选地，步骤（5）中，所述洗脱剂II的用量为2～4BV，所述洗脱剂II洗脱的流速为0.5～2BV/小时。使用洗脱剂II的目的，是将硅胶层析柱中的罗汉果醇洗脱，但是不会将高极性的杂质（来源于提取并水解过程，如黄酮苷元等）洗脱，使其继续保留在硅胶柱中。若洗脱剂II的用量过少、甲醇/乙醇的体积占比过小或洗脱的流速过快，都将无法将罗汉果醇充分洗脱，造成罗汉果醇产品的收率偏低；若洗脱剂II的用量过多、甲醇/乙醇的体积占比过大或洗脱的流速过慢，在将罗汉果醇充分洗脱的同时，还有可能将部分高极性的杂质洗脱，造成罗汉果醇产品的含量偏低。

优选地，步骤（6）中，所述浓缩液的固形物含量为10%～15%。

优选地，步骤（6）中，所述冷冻的温度为-5～5℃；所述搅拌的速度为30～90r/min；所述析晶的时间为12～24小时。冷冻、搅拌析晶的目的，是将浓缩液中的罗汉果醇充分析出，同时抑制和减少杂质（尤其是11-O-罗汉果醇）的析出，确保罗汉果醇产品的收率和含量。若冷冻的温度过高、搅拌的速度过快或析晶的时间过短，都将导致罗汉果醇析出不充分，造成罗汉果醇产品的收率偏低；若冷冻的温度过低、搅拌的速度过慢或析晶的时间过长，都将导致杂质的析出，造成罗汉果醇产品的含量偏低。

本发明方法中，1 BV=1个柱体积。

所述室温是指室内环境温度。

本发明原理是：鉴于研究表明，罗汉果果籽中并不含有罗汉果总皂苷，但是含有较多的油脂、黄酮类化合物和色素等杂质，因此，在罗汉果原料破壳但不破籽的状态下，用酸水加热提取并水解，可以确保罗汉果总皂苷被充分浸出并水解，从而有利于提高罗汉果醇的收率；还可以防止杂质被大量浸出，降低后续分离纯化步骤的难度，简化工艺流程，减少罗汉果醇在后续步骤中的流失几率，从而也间接提高罗汉果醇的收率；罗汉果原料在酸水加热提取的过程中，同时会伴随各类水解反应的发生，罗汉果总苷被水解为苷元（罗汉果醇、11-O-罗汉果醇）、果胶被水解为单糖、蛋白质被水解为氨基酸，多酚被水解为酚酸，等等；水溶性水解产物和罗汉果中原有的水溶性成分可以通过离心过滤的方式简易除去；不溶于水的水解产物（包括罗汉果醇等）以及无法水解的细小植物木质纤维，混合在一起组成了罗汉果总皂苷水解物；该水解物通过硅胶柱分离、结晶等工艺处理，可以得到纯度较高的罗汉果醇产品。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

（1）本发明不需要使用高含量的罗汉果甜苷成品或罗汉果提取物作原料，对原料处理，只破壳但不破籽；将罗汉果甜苷提取和水解过程合二为一，减小了罗汉果总苷分离过程中的损耗，简化了工艺流程，罗汉果醇的回收率高（可高达90.64%）；同时也提高了罗汉果总苷的利用率；

（2）本发明工艺简单，对设备要求低，不使用有毒、有害的化工溶剂，对环境污染小，生产成本低，可操作性强，适宜于工业化生产；

（3）本发明罗汉果醇收率高的同时，所得罗汉果醇产品中，罗汉果醇含量高（可高达99.11%），换言之，所得罗汉果醇产品的杂质含量少，纯度高，更适于作为临床药物使用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

本发明实施例所使用的罗汉果鲜果原料购于广西永福县，罗汉果鲜果原料中的罗汉果总苷的含量为0.56%，11-O-罗汉果苷V的含量为0.04%，经理论值换算，该原料中罗汉果醇的折算含量约为0.192%；本发明实施例所用的柱层析硅胶购于青岛海洋化工有限公司；本发明实施例所使用的辅料或化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。

本发明实施例中，采用高效液相色谱（HPLC）外标法检测罗汉果总苷、罗汉果醇和11-O-罗汉果醇的含量。

实施例1

本实施例从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，包括以下步骤：

（1）提取、水解：取罗汉果鲜果100kg，碾破，破壳但不破籽，加入1000L酸水（质量百分比浓度为2.0%的盐酸水溶液），加热至98℃，保温提取并水解4小时，粗过滤除去果壳及果籽，得罗汉果总皂苷水解液；

（2）罗汉果总皂苷水解物的制备：将步骤（1）所得的罗汉果总皂苷水解液冷却至室温，用氢氧化钠水溶液中和至pH为6.8，静置沉淀，离心过滤，取滤饼干燥，得罗汉果总皂苷水解物1.10kg；

（3）硅胶拌样：将步骤（2）所得的罗汉果总皂苷水解物用1.5L无水甲醇分散，加入2.8kg柱层析硅胶，搅拌混合均匀，干燥，得拌样硅胶；

（4）湿法装柱及干法上样：往层析柱中先加入乙酸乙酯，再匀速倒入10kg干净的柱层析硅胶（柱层析硅胶的规格为300～400目）并使之沉降紧实，最后将步骤（3）所得的拌样硅胶覆盖其上，得硅胶层析柱（高径比为8.1：1）；

（5）梯度洗脱：先用3BV洗脱剂I（乙酸乙酯-甲醇混合溶液，甲醇的体积占比为3%）对步骤（4）所得的硅胶层析柱进行洗脱，洗脱的流速为1BV/小时；再用3.5BV洗脱剂II（乙酸乙酯-甲醇混合溶液，甲醇的体积占比为12%），洗脱的流速为1BV/小时，收集洗脱剂II洗脱所得的洗脱液II；

（6）浓缩、结晶、干燥：将步骤（5）所得的洗脱液II减压浓缩至固形物含量为11.9%，得浓缩液，将浓缩液冷冻降温至0℃，以45r/min的速度搅拌，析晶16小时，抽滤，真空干燥，得高含量的罗汉果醇产品174.3g。

经高效液相色谱（HPLC）外标法检测，本实施例所得罗汉果醇产品中，罗汉果醇的含量为99.11%，罗汉果醇的收率为89.97%。

实施例2

本实施例从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，包括以下步骤：

（1）提取、水解：取罗汉果鲜果100kg，碾破，破壳但不破籽，加入900L酸水（质量百分比浓度为1.8%的硫酸水溶液），加热至100℃，保温提取并水解5.5小时，粗过滤除去果壳及果籽，得罗汉果总皂苷水解液；

（2）罗汉果总皂苷水解物的制备：将步骤（1）所得的罗汉果总皂苷水解液冷却至室温，用氢氧化钾水溶液中和至pH为7.5，静置沉淀，离心过滤，取滤饼干燥，得罗汉果总皂苷水解物1.15kg；

（3）硅胶拌样：将步骤（2）所得的罗汉果总皂苷水解物用1.8L无水甲醇分散，加入3kg柱层析硅胶，搅拌混合均匀，干燥，得拌样硅胶；

（4）湿法装柱及干法上样：往层析柱中先加入乙酸乙酯，再匀速倒入10.5kg干净的柱层析硅胶（柱层析硅胶的规格为200～300目）并使之沉降紧实，最后将步骤（3）所得的拌样硅胶覆盖其上，得硅胶层析柱（高径比为8.3：1）；

（5）梯度洗脱：先用2.5BV洗脱剂I（乙酸乙酯-甲醇混合溶液，甲醇的体积占比为5%）对步骤（4）所得的硅胶层析柱进行洗脱，洗脱的流速为1.2BV/小时；再用3BV洗脱剂II（乙酸乙酯-甲醇混合溶液，甲醇的体积占比为15%），洗脱的流速为1BV/小时，收集洗脱剂II洗脱所得的洗脱液II，；

（6）浓缩、结晶、干燥：将步骤（5）所得的洗脱液II减压浓缩至固形物含量为13.4%，得浓缩液，将浓缩液冷冻降温至5℃，以30r/min的速度搅拌，析晶24小时，抽滤，真空干燥，得高含量的罗汉果醇产品179.1g。

经高效液相色谱（HPLC）外标法检测，本实施例所得罗汉果醇产品中罗汉果醇的含量为97.17%，罗汉果醇的收率为90.64%。

实施例3

本实施例从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，包括以下步骤：

（1）提取、水解：取罗汉果鲜果100kg，碾破，破壳但不破籽，加入800L酸水（质量百分比浓度为2.0%的硫酸水溶液），加热至102℃，保温提取并水解5小时，粗过滤除去果壳及果籽，得罗汉果总皂苷水解液；

（2）罗汉果总皂苷水解物的制备：将步骤（1）所得的罗汉果总皂苷水解液冷却至室温，用氢氧化钠水溶液中和至pH为7.0，静置沉淀，离心过滤，取滤饼干燥，得罗汉果总皂苷水解物1.19kg；

（3）硅胶拌样：将步骤（2）所得的罗汉果总皂苷水解物用2L无水乙醇分散，加入3.2kg柱层析硅胶，搅拌混合均匀，干燥，得拌样硅胶；

（4）湿法装柱及干法上样：往层析柱中先加入乙酸乙酯，再匀速倒入11kg干净的柱层析硅胶（柱层析硅胶的规格为100～200目）并使之沉降紧实，最后将步骤（3）所得的拌样硅胶覆盖其上，得硅胶层析柱（高径比为8.6：1）；

（5）梯度洗脱：先用3.5BV洗脱剂I（乙酸乙酯-乙醇混合溶液，乙醇的体积占比为4%）对步骤（4）所得的硅胶层析柱进行洗脱，洗脱的流速为1.5BV/小时；再用4BV洗脱剂II（乙酸乙酯-乙醇混合溶液，乙醇的体积占比为12%），洗脱的流速为1.5BV/小时，收集洗脱剂II洗脱所得的洗脱液II；

（6）浓缩、结晶、干燥：将步骤（5）所得的洗脱液II减压浓缩至固形物含量为12.1%，得浓缩液，将浓缩液冷冻降温至2℃，以60r/min的速度搅拌，析晶20小时，抽滤，真空干燥，得高含量的罗汉果醇产品170.2g。

经高效液相色谱（HPLC）外标法检测，本实施例所得罗汉果醇产品中罗汉果醇的含量为98.03%，罗汉果醇的收率为86.90%。

对比例

本对比例从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，包括以下步骤：

（1）加压水解：取罗汉果鲜果10kg，碾破，破壳但不破籽，加入40L纯水，加入硫酸，使酸水溶液中酸（H+）的摩尔浓度为0.5mol/L，在温度为145℃、压力为0.4Mpa的条件下加压水解1h，冷却至室温得水解液；

（2）低醇上柱吸附：往水解液中加入乙醇，制成低醇溶液，低醇溶液中乙醇的体积百分比浓度为18%，过滤除去醇沉产生的絮状沉淀物。将过滤后的低醇溶液通过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂的用量为2000ml，聚酰胺树脂柱的高径比为6:1，上柱的流速为0.7BV/h；

（3）梯度洗脱：先用5BV纯水将树脂柱冲洗至中性（流速1BV/h），再用2BV体积百分比浓度为25%的低度乙醇洗脱（流速1BV/h），最后用2.5BV体积百分比浓度为65%的高度乙醇洗脱（流速1BV/h），收集高度乙醇洗脱液；

（4）浓缩、干燥：将高度乙醇洗脱液减压浓缩，干燥，得罗汉果醇粗品20.77g；

（5）精制：将罗汉果醇粗品用400ml异丙醇加热溶解，加入2.5g活性炭，加热回流0.5h，冷却至室温，过滤，将滤液减压浓缩至固形物含量为25%。将浓缩液冷却至温度为5℃，以30 r/min搅拌速度，析晶24小时，抽滤，干燥，得罗汉果醇精品15.1g。

经高效液相色谱（HPLC）外标法检测，本实施例所得罗汉果醇粗品中，罗汉果醇的含量为70.25%；本实施例所得罗汉果醇精品中，罗汉果醇的含量为82.53%，罗汉果醇的收率仅64.91%。

罗汉果鲜果的加压水解反应液，即使可以用醇沉和过滤的方式，一方面使罗汉果醇完全溶解，另一方面可以除去不能水解或醇沉析出的固体杂质，但是不能除去同样溶解于低级醇溶液的杂质，比如糖类、氨基酸、无机盐、黄酮苷元、酚酸和水溶性色素等。研究表明，尽管糖类、氨基酸和无机盐不会被聚酰胺树脂吸附，但是黄酮苷元、单宁酸和水溶性色素等杂质会同罗汉果醇、11-O-罗汉果醇一起，被聚酰胺吸附，从而导致树脂杂质吸附过多，罗汉果醇的收率偏低，梯度洗脱的效果也欠佳，对成罗汉果醇粗品含量也有负面影响。

Claims (18)

1.一种从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取、水解：将罗汉果碾破，破壳但不破籽，加入酸水，加热提取并水解，然后粗过滤除去果壳及果籽，得罗汉果总皂苷水解液；

（2）罗汉果总皂苷水解物的制备：将步骤（1）所得的罗汉果总皂苷水解液冷却至室温，用碱液中和，静置沉淀，离心过滤，取滤饼干燥，得罗汉果总皂苷水解物；

（3）硅胶拌样：将步骤（2）所得的罗汉果总皂苷水解物用无水甲醇或乙醇分散，加入柱层析硅胶，搅拌，混合均匀，干燥，得拌样硅胶；

（4）湿法装柱及干法上样：往层析柱中先加入乙酸乙酯，再倒入柱层析硅胶，最后将步骤（3）所得的拌样硅胶覆盖，得硅胶层析柱；

（5）梯度洗脱：依次用洗脱剂I和洗脱剂II对步骤（4）所得的硅胶层析柱进行梯度洗脱，收集洗脱剂II洗脱所得的洗脱液II；

（6）浓缩、结晶、干燥：将步骤（5）所得的洗脱液II减压浓缩，得浓缩液，将浓缩液冷冻降温，搅拌析晶，抽滤，真空干燥，即得罗汉果醇产品；

步骤（1）中，所述酸水为盐酸或硫酸的水溶液；所述酸水的质量百分比浓度为0.5%～5.0%；所述酸水的体积用量为罗汉果原料重量的5～10倍L/kg；

步骤（5）中，所述洗脱剂I为乙酸乙酯-甲醇/乙醇混合溶液，其中甲醇/乙醇的体积占比为洗脱剂I总体积的1%～5%；所述洗脱剂I的用量为2～4BV，所述洗脱剂I洗脱的流速为0.5～2.0BV/小时；所述洗脱剂II为乙酸乙酯-甲醇/乙醇混合溶液，其中甲醇/乙醇的体积占比为洗脱剂II总体积的10%～20%；所述洗脱剂II的用量为2～4BV，所述洗脱剂II洗脱的流速为0.5～2.0BV/小时。

2.根据权利要求1所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述加热的温度为95～120℃；所述加热提取并水解的时间为4～6小时。

3.根据权利要求1或2所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的碱液为氢氧化钠或氢氧化钾水溶液；所述中和的pH值为6～8。

4.根据权利要求1或2所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述无水甲醇或无水乙醇的体积用量为罗汉果总皂苷水解物重量的1～3倍L/kg；所述柱层析硅胶的用量为罗汉果总皂苷水解物重量的2～4倍。

5.根据权利要求3所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述无水甲醇或无水乙醇的体积用量为罗汉果总皂苷水解物重量的1～3倍L/kg；所述柱层析硅胶的用量为罗汉果总皂苷水解物重量的2～4倍。

6.根据权利要求1或2所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述柱层析硅胶的用量为罗汉果总皂苷水解物重量的8～10倍；步骤（3）和步骤（4）中，所述柱层析硅胶的粒度规格为100～400目；步骤（4）中，所述硅胶层析柱的高径比为6～10:1。

7.根据权利要求3所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述柱层析硅胶的用量为罗汉果总皂苷水解物重量的8～10倍；步骤（3）和步骤（4）中，所述柱层析硅胶的粒度规格为100～400目；步骤（4）中，所述硅胶层析柱的高径比为6～10:1。

8.根据权利要求4所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述柱层析硅胶的用量为罗汉果总皂苷水解物重量的8～10倍；步骤（3）和步骤（4）中，所述柱层析硅胶的粒度规格为100～400目；步骤（4）中，所述硅胶层析柱的高径比为6～10:1。

9.根据权利要求1或2所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述浓缩液的固形物含量为10%～15%。

10.根据权利要求3所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述浓缩液的固形物含量为10%～15%。

11.根据权利要求4所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述浓缩液的固形物含量为10%～15%。

12.根据权利要求6所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述浓缩液的固形物含量为10%～15%。

13.根据权利要求1或2所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述冷冻的温度为-5～5℃；所述搅拌的速度为30～90r/min；所述析晶的时间为12～24小时。

14.根据权利要求3所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述冷冻的温度为-5～5℃；所述搅拌的速度为30～90r/min；所述析晶的时间为12～24小时。

15.根据权利要求4所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述冷冻的温度为-5～5℃；所述搅拌的速度为30～90r/min；所述析晶的时间为12～24小时。

16.根据权利要求6所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述冷冻的温度为-5～5℃；所述搅拌的速度为30～90r/min；所述析晶的时间为12～24小时。

17.根据权利要求9所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述冷冻的温度为-5～5℃；所述搅拌的速度为30～90r/min；所述析晶的时间为12～24小时。

18.根据权利要求12所述的从罗汉果中分离罗汉果醇的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述冷冻的温度为-5～5℃；所述搅拌的速度为30～90r/min；所述析晶的时间为12～24小时。