CN113762379B - 一种基于免疫组化生成训练数据的方法和存储设备 - Google Patents
一种基于免疫组化生成训练数据的方法和存储设备 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及计算机技术领域，特别涉及一种基于免疫组化生成训练数据的方法和存储设备。所述一种基于免疫组化生成训练数据的方法，包括步骤：通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色；根据染色结果对所述目标对象进行标注；根据标注结果生成训练数据。以上方法不需要病理医生通过H&E切片并结合组织形态学进行标注，就能够快速、便捷地标注出目的组织或细胞，且由于该组织或细胞是基于金标准的免疫组化技术标注的，较人工通过H&E切片并结合组织形态学进行标注更准确。
Description
技术领域
本发明涉及计算机技术领域，特别涉及一种基于免疫组化生成训练数据的方法和存储设备。
背景技术
目前，病理学AI软件均是基于H&E染色和形态学的数据训练，需要资深病理医生结合形态学对H&E染色切片进行大量的标注工作，形成可供AI学习的数据集，用于AI软件的开发和应用。这对病理医生的学识和精力均形成挑战，特别是当有大量的染色切片需要标注而资深的病理医生数量又不足时，则将导致标注工作无法及时完成，影响后续的AI软件学习进度。
发明内容
为此，需要提供一种基于免疫组化生成训练数据的方法，用以解决现有技术病理学AI软件均是基于H&E染色和形态学的数据训练，需要资深病理医生配合，效率低人工成本要求高等技术问题。具体技术方案如下：
一种基于免疫组化生成训练数据的方法，包括步骤：
通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色；
根据染色结果对所述目标对象进行标注；
根据标注结果生成训练数据。
进一步的，所述“通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色”，具体还包括步骤：
对处理后的乳腺癌组织第一待染色切片，滴加CK8/18一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色8-20分钟,PBS冲洗2×3分钟；
在同一张组织切片上滴加CK5/6一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟,PBS冲洗2×3分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片。
进一步的，所述“根据染色结果对所述目标对象进行标注”，具体还包括步骤：
CK5/6一抗定位于基底细胞细胞质，呈红色，CK8/18一抗定位于乳腺正常腺上皮或肿瘤细胞的细胞质，呈棕黄色，细胞核经苏木素复染后呈蓝色；
根据CK8/18和CK5/6两种抗体在乳腺癌组织中的分布状态区分原位癌、浸润癌及微浸润癌区域，并将相关信息进行标注。
进一步的，所述“通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色”，具体还包括步骤：
对处理后的胃癌组织待染色切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗，进行抗原修复，切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟，滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟；
甩干切片，滴加CD8抗体试剂，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色5-15分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，水性封片剂封片；
抗体定位于肿瘤细胞膜上，并呈红色染色，获取CD8抗体染色后的组织切片的数字病理图像；
将所述染色后的组织切片浸泡于二甲苯中，将封片剂洗掉后，将切片浸泡于95％酒精中，将红色染色洗去；
甩干红色染色洗去后的组织切片，进行抗原修复，滴加PD-L1，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片；
PD-L1抗体定位于肿瘤细胞细胞膜和免疫细胞的细胞膜、细胞质上，并呈棕黄色染色，细胞核经苏木素复染后呈蓝色，获取PD-L1抗体染色后的组织切片的数字病理图像。
进一步的，所述“根据染色结果对所述目标对象进行标注”，具体还包括步骤：
将CD8抗体染色后的组织切片的数字病理图像与PD-L1抗体染色后的组织切片的数字病理图像进行重叠比对，将CD8和PD-L1均为阳性的细胞在PD-L1抗体染色后的病理图像中标注出来。
进一步的，所述“通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色”，具体还包括步骤：
对处理后的前列腺组织待染色切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗，进行抗原修复，然后将切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟，滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟；
甩干切片，滴加即用型混合型一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用DAB显色液显色3-10分钟，PBS冲洗2×3分钟，用AP-Red显色液显色8-20分钟，流水冲洗，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，中性树胶封片；
获取染色后的组织切片的数字病理图像。
进一步的，所述目标对象包括以下中的一种或多种：目标组织、目标细胞。
进一步的，所述“通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色”前，具体还包括步骤：
对待染色切片进行处理；
所述“对待染色切片进行处理”，具体还包括步骤：
取乳腺癌组织蜡块修片后进行连续切片，厚度定为3μm，将连续切片漂在凉水中,让其自然展开，再将分开的切片转移到45℃的温水中展片30秒，用经多聚赖氨酸处理过的载玻片裱贴切片，将制成的组织芯片放入65℃烤箱内烤片2小时，取出室温冷却，放入-4℃冰箱保存。
为解决上述技术问题，还提供了一种存储设备，具体技术方案如下：
一种存储设备，其中存储有指令集，所述指令集用于执行：获取不同抗体对目标对象进行免疫组化染色后的数字病理图像；
在所述数字病理图像上对所述目标对象进行标注；
根据标注结果生成训练数据。
进一步的，所述数字病理图像通过如下方式获取；
对处理后的乳腺癌组织第一待染色切片，滴加CK8/18一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色8-20分钟,PBS冲洗2×3分钟；
在同一张组织切片上滴加CK5/6一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟,PBS冲洗2×3分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片；
或
对处理后的胃癌组织待染色切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗，进行抗原修复，切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟，滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟；
甩干切片，滴加CD8抗体试剂，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色5-15分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，水性封片剂封片；
抗体定位于肿瘤细胞膜上，并呈红色染色，获取CD8抗体染色后的组织切片的数字病理图像；
将所述染色后的组织切片浸泡于二甲苯中，将封片剂洗掉后，将切片浸泡于95％酒精中，将红色染色洗去；
甩干红色染色洗去后的组织切片，进行抗原修复，滴加PD-L1，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片；
或
对处理后的前列腺组织待染色切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗，进行抗原修复，然后将切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟，滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟；
甩干切片，滴加即用型混合型一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用DAB显色液显色3-10分钟，PBS冲洗2×3分钟，用AP-Red显色液显色8-20分钟，流水冲洗，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，中性树胶封片。
本发明的有益效果是：一种基于免疫组化生成训练数据的方法，包括步骤：通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色；根据染色结果对所述目标对象进行标注；根据标注结果生成训练数据。以上方法不需要病理医生通过H&E切片并结合组织形态学进行标注，就能够快速、便捷地标注出目的组织或细胞，且由于该组织或细胞是基于金标准的免疫组化技术标注的，较人工通过H&E切片并结合组织形态学进行标注更准确。
附图说明
图1为具体实施方式所述一种基于免疫组化生成训练数据的方法的流程图；
图2a为具体实施方式所述染色后的乳腺癌组织示意图一；
图2b为具体实施方式所述染色后的乳腺癌组织示意图二；
图3为具体实施方式所述染色后的胃癌组织示意图；
图4a为具体实施方式所述正常前列腺示意图；
图4b为具体实施方式所述染色后的前列腺示意图一；
图4c为具体实施方式所述染色后的前列腺示意图二；
图5为具体实施方式所述一种存储设备的模块示意图。
附图标记说明：
500、存储设备。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。
请参阅图1至图4c，在本实施方式中，一种基于免疫组化生成训练数据的方法可应用在存储设备上，所述存储设备包括但不限于：个人计算机、服务器、通用计算机、专用计算机、网络设备、嵌入式设备、可编程设备等。
具体实施方式如下：
步骤S101：通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色。
步骤S102：根据染色结果对所述目标对象进行标注。
步骤S103：根据标注结果生成训练数据。
以上方法不需要病理医生通过H&E切片并结合组织形态学进行标注，就能够快速、便捷地标注出目的组织或细胞，且由于该组织或细胞是基于金标准的免疫组化技术标注的，较人工通过H&E切片并结合组织形态学进行标注更准确。
以下以三个不同的实施例对以上方法具体展开一一说明：
实施例1：
实施例1的核心在于：首先在一张切片上对特定组织区域/细胞的特异生物标志物进行多重免疫组化检测，对特定区域进行标注，而后对同一张切片进行目标生物标志物的免疫组化检测，确定目标生物标志物的判读范围。
以下以乳腺癌组织进行说明：
根据《2019版中国乳腺癌HER2检测指南》的要求，在进行HER2免疫组化检测的结果判读时需先进行“观察程序”，即应首先在低倍镜下观察整张切片，判断染色是否满意及是否存在HER2表达的异质性。正常乳腺上皮不应出现强的细胞膜着色。只评定浸润癌的着色情况，原位癌的着色不能作为评定对象。当原位癌伴有微浸润时，若IHC切片中能判断微浸润癌的HER2状态，应予以报告。若IHC切片中微浸润病灶过少，难以评估HER2状态时可予以备注。因此，区分乳腺癌组织中的原位癌、浸润癌及微浸润癌区域显得十分关键，特别是难以辨别的微浸润癌区域。通过免疫组化染色将原位癌、浸润癌及微浸润癌区域进行区分，并标注出来供AI学习，可达到利用AI软件基于免疫组化染色结果将原位癌、浸润癌及微浸润癌区域进行准确、快速区分的目的。本实例利用CK8/18和CK5/6两种抗体试剂对乳腺癌组织进行双染，其中CK8/18可染色乳腺正常或肿瘤组织中的单层上皮或腺上皮细胞(红色)，而CK5/6则可染色肌上皮细胞(棕黄色)，根据CK8/18和CK5/6两种抗体在乳腺癌组织中的分布状态区分原位癌、浸润癌及微浸润癌区域，并将该信息作为AI数据集进行标注。
所述“通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色”前，具体还包括步骤：
对待染色切片进行处理，其中乳腺癌组织切片的处理如下：
1、乳腺癌组织连续切片制备
取乳腺癌组织蜡块修片后进行连续切片，厚度定为3μm，将连续切片漂在凉水中,让其自然展开，再将分开的切片转移到45℃的温水中展片30秒，按切片顺序用经多聚赖氨酸处理过的载玻片裱贴切片，将制成的组织芯片放入65℃烤箱内烤片2小时，取出室温冷却，放入-4℃冰箱保存。
2、免疫组化双重染色和扫描
取1张乳腺癌切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗。进行抗原修复，然后将切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟。滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟。
所述“通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色”，具体还包括步骤：
甩干处理后的乳腺癌组织第一待染色切片，对处理后的乳腺癌组织第一待染色切片，滴加CK8/18一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色8-20分钟,PBS冲洗2×3分钟；
在同一张组织切片上滴加CK5/6一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟,PBS冲洗2×3分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片。
其中CK5/6定位于基底细胞细胞质，呈红色，而CK8/18定位于乳腺正常腺上皮或肿瘤细胞的细胞质，呈棕黄色，细胞核经苏木素复染后呈蓝色。经组织切片扫描仪扫描形成数字病理图像。本实施方式中室温指25℃。
3、乳腺癌目标区域AI数据集标注
根据CK8/18和CK5/6两种抗体在乳腺癌组织中的分布状态区分原位癌、浸润癌及微浸润癌区域，并将该信息作为AI数据集进行标注。
乳腺正常组织和原位癌区域正常腺上皮和肿瘤细胞呈红色，腺体周围肌上皮呈棕黄色围绕于腺上皮外周，如图2a和2b所示。
浸润癌区域肿瘤细胞呈红色如图2a所示，腺体周围肌上皮完全缺失(棕黄色染色完全缺失)。
根据上述免疫组化染色信息进行标注，即可供AI数据集的构建，后续即可在下一张连续切片中对上述指南所要求的目标区域内进行HER2状态的判读。如下表所示。
实施例2：
由于胃癌PD-L1判读规则除了需要计算PD-L1阳性肿瘤细胞数,还需要计算包括T淋巴细胞在内的PD-L1阳性肿瘤相关免疫细胞数，但是不包括粒细胞、浆细胞等免疫细胞，因此，识别正常的PD-L1阳性的T淋巴细胞是AI软件的开发的关键影响因素，而在PD-L1免疫组化染色切片上仅借助相应区域的另一张切片的H&E染色切片对PD-L1阳性T淋巴细胞进行标注时，病理医生的常识，精力以及等等因素均可影响到标注的准确性。因此，在本实施方式中，通过多重染色，在同一张切片中对同时出现T淋巴细胞标志物染色和PD-L1阳性染色的细胞即为需要标注的PD-L1阳性T淋巴细胞，结果更直观且客观准确。
1、胃癌组织切片制备
取胃癌组织蜡块修片后进行连续切片，厚度定为3μm，将连续切片漂在凉水中,让其自然展开，再将分开的切片转移到45℃的温水中展片30秒，用经多聚赖氨酸处理过的载玻片裱贴切片，将制成的组织芯片放入65℃烤箱内烤片2小时，取出室温冷却，放入-4℃冰箱保存。
2、T淋巴细胞标志物(CD8)免疫组化染色和扫描
取一张切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗。进行抗原修复，然后将切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟。滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟。
甩干切片，滴加适当比例稀释的CD8抗体试剂，室温(25℃)孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色5-15分钟。苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒。水性封片剂封片。抗体定位于肿瘤细胞膜上，并呈红色染色。用组织切片扫描仪对组织切片进行扫描，形成数字病理图像，细胞膜阳性(呈红色)的细胞即为T淋巴细胞。
2.2脱色
将组织切片浸泡于二甲苯中，将封片剂洗掉后，将切片浸泡于95％酒精中，将红色染色洗去。
2.3PD-L1免疫组化染色和扫描
甩干切片，进行抗原修复，滴加适当比例稀释的一抗(PD-L1)，室温(25℃)孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟。苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒。按照85％(3分钟)-95％(3分钟)-100％(3分钟)-100％(3分钟)的酒精梯度依次脱水，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片。PD-L1抗体定位于肿瘤细胞细胞膜和免疫细胞的细胞膜、细胞质上，并呈棕黄色染色。细胞核经苏木素复染后呈蓝色。用组织切片扫描仪对组织切片进行扫描，形成数字病理图像。如图3所示。
3、PD-L1阳性的淋巴细胞的标注
利用图像重叠比对的方法，PD-L1免疫组化染色切片中将CD8和PD-L1均为阳性的细胞标注出来，即为PD-L1阳性的T淋巴细胞，用于后续AI数据集的构建。
实施例3：
前列腺病变组织免疫组化双染检测试剂盒采用组合式单克隆抗体和双酶标记方法，在一张前列腺组织切片中同时检测三种抗原：AMACR/p504s、p63、CK(HMW)。AMACR在前列腺癌中高表达，正常前列腺组织不表达或极弱阳性，但在前列腺上皮内瘤变(PIN)及不典型增生(AAH)组织中可有散在表达。p63和CK(HMW)分别标记前列腺基底细胞的细胞核和细胞质，二者组合可提高基底细胞的识别能力。正常前列腺腺体有两层细胞(基底细胞和腺上皮细胞)，而前列腺癌则没有或仅残留少量基底细胞，这样采用三种组合式抗体就能在同一张切片中直接观察各种病变，便于比较，有利于前列腺癌、PIN和AAH的诊断和鉴别诊断。在本实施方式中通过不同颜色细胞的标注，利用AI软件对前列腺病变组织免疫组化双染切片进行AI辅助判读，减轻病理医生工作负担。
1、前列腺病变组织切片制备
取前列腺病变组织蜡块修片后进行连续切片，厚度定为3μm，将连续切片漂在凉水中,让其自然展开，再将分开的切片转移到45℃的温水中展片30秒，用经多聚赖氨酸处理过的载玻片裱贴切片，将制成的组织芯片放入65℃烤箱内烤片2小时，取出室温冷却，放入-4℃冰箱保存。
2、前列腺病变组织免疫组化双染和扫描
取一张切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗。进行抗原修复，然后将切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟。滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟。
甩干切片，滴加即用型混合型一抗，室温(25℃)孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用DAB显色液显色3-10分钟，PBS冲洗2×3分钟，用AP-Red显色液显色8-20分钟，流水冲洗。苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒。中性树胶封片。用组织切片扫描仪对组织切片进行扫描，形成数字病理图像。如图4a、4b和4c所示。
不同表达模型的标注
根据不同特异性生物标志物在组织或细胞上的不同定位情况，在同一张组织切片上来标注特定类型的组织或细胞，前列腺病变组织的标注模型可分为3类，见下表。
表前列腺病变组织的标注模型分类说明
一种基于免疫组化生成训练数据的方法，包括步骤：通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色；根据染色结果对所述目标对象进行标注；根据标注结果生成训练数据。以上方法不需要病理医生通过H&E切片并结合组织形态学进行标注，就能够快速、便捷地标注出目的组织或细胞，且由于该组织或细胞是基于金标准的免疫组化技术标注的，较人工通过H&E切片并结合组织形态学进行标注更准确。
请参阅图5，在本实施方式中，一种存储设备500的具体实施方式如下：
一种存储设备500，其中存储有指令集，所述指令集用于执行：获取不同抗体对目标对象进行免疫组化染色后的数字病理图像；
在所述数字病理图像上对所述目标对象进行标注；
根据标注结果生成训练数据。
进一步的，所述数字病理图像通过如下方式获取；
对处理后的乳腺癌组织第一待染色切片，滴加CK8/18一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色8-20分钟,PBS冲洗2×3分钟；
在同一张组织切片上滴加CK5/6一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟,PBS冲洗2×3分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片；
或
对处理后的胃癌组织待染色切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗，进行抗原修复，切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟，滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟；
甩干切片，滴加CD8抗体试剂，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色5-15分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，水性封片剂封片；
抗体定位于肿瘤细胞膜上，并呈红色染色，获取CD8抗体染色后的组织切片的数字病理图像；
将所述染色后的组织切片浸泡于二甲苯中，将封片剂洗掉后，将切片浸泡于95％酒精中，将红色染色洗去；
甩干红色染色洗去后的组织切片，进行抗原修复，滴加PD-L1，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟。苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片；
或
对处理后的前列腺组织待染色切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗，进行抗原修复，然后将切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟，滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟；
甩干切片，滴加即用型混合型一抗，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用DAB显色液显色3-10分钟，PBS冲洗2×3分钟，用AP-Red显色液显色8-20分钟，流水冲洗，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，中性树胶封片。
通过上述存储设备500的指令集执行对应步骤，使得不需要病理医生通过H&E切片并结合组织形态学进行标注，就能够快速、便捷地标注出目的组织或细胞，且由于该组织或细胞是基于金标准的免疫组化技术标注的，较人工通过H&E切片并结合组织形态学进行标注更准确。
需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围之内。
Claims (2)
1.一种基于免疫组化生成训练数据的方法，其特征在于，包括步骤：
通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色；
根据染色结果对所述目标对象进行标注；
根据标注结果生成训练数据；
所述“通过不同抗体对目标对象进行免疫组化染色”，具体还包括步骤：
对处理后的胃癌组织待染色切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗，进行抗原修复，切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟，滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟；
甩干切片，滴加CD8抗体试剂，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色5-15分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，水性封片剂封片；
抗体定位于肿瘤细胞膜上，并呈红色染色，获取CD8抗体染色后的组织切片的数字病理图像；
将所述染色后的组织切片浸泡于二甲苯中，将封片剂洗掉后，将切片浸泡于95％酒精中，将红色染色洗去；
甩干红色染色洗去后的组织切片，进行抗原修复，滴加PD-L1，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片；
PD-L1抗体定位于肿瘤细胞细胞膜和免疫细胞的细胞膜、细胞质上，并呈棕黄色染色，细胞核经苏木素复染后呈蓝色，获取PD-L1抗体染色后的组织切片的数字病理图像；
所述“根据染色结果对所述目标对象进行标注”，具体还包括步骤：
将CD8抗体染色后的组织切片的数字病理图像与PD-L1抗体染色后的组织切片的数字病理图像进行重叠比对，将CD8和PD-L1均为阳性的细胞在PD-L1抗体染色后的病理图像中标注出来。
2.一种存储设备，其中存储有指令集，其特征在于，所述指令集用于执行：获取不同抗体对目标对象进行免疫组化染色后的数字病理图像；
在所述数字病理图像上对所述目标对象进行标注；
根据标注结果生成训练数据；所述数字病理图像通过如下方式获取：
对处理后的胃癌组织待染色切片，常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗，进行抗原修复，切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟，滴加3％H2O2孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟；
甩干切片，滴加CD8抗体试剂，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的AP-Red显色液显色5-15分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，水性封片剂封片；
抗体定位于肿瘤细胞膜上，并呈红色染色，获取CD8抗体染色后的组织切片的数字病理图像；
将所述染色后的组织切片浸泡于二甲苯中，将封片剂洗掉后，将切片浸泡于95％酒精中，将红色染色洗去；
甩干红色染色洗去后的组织切片，进行抗原修复，滴加PD-L1，室温孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85％-95％-100％-100％的酒精梯度依次脱水3分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片；
PD-L1抗体定位于肿瘤细胞细胞膜和免疫细胞的细胞膜、细胞质上，并呈棕黄色染色，细胞核经苏木素复染后呈蓝色，获取PD-L1抗体染色后的组织切片的数字病理图像；
所述“在所述数字病理图像上对所述目标对象进行标注”，具体还包括步骤：
将CD8抗体染色后的组织切片的数字病理图像与PD-L1抗体染色后的组织切片的数字病理图像进行重叠比对，将CD8和PD-L1均为阳性的细胞在PD-L1抗体染色后的病理图像中标注出来。
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| 深度卷积神经网络对≤3cm的亚实性肺腺癌CT图像病理学分型预测的可视化研究;蒋蓓蓓等;《上海交通大学学报（医学版）》;20190930;第39卷(第9期);1046-1051页 * |
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| WO2023035728A1 (zh) | 2023-03-16 |
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