CN113740450B - 一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法 - Google Patents

一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及兽药残留检测领域，涉及一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，将禽肉、猪肉或禽蛋依次经过乙腈提取，正己烷脱脂，提取液经过HLB固相萃取柱净化，洗脱液经氮气吹干浓缩；在浓缩干后的样品中加入吡啶和乙酸酐，衍生反应后过滤后，滤液采用GC‑MS/MS检测。本发明采用液‑液萃取、固相萃取和凝胶色谱相结合的提取方法所得到的衍生产物的峰型良好，干扰杂质峰少，而且样品衍生产物的响应值高。

Description

一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法
技术领域
本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种检测禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的柱前衍生-气相色谱-串联质谱确证分析方法。
背景技术
目前，国内外有关动物性食品中替米考星残留的前处理方法主要有液-液萃取法和固相萃取法，提取试剂有乙腈、卤代烷、酯和醚等有机溶剂等。由于替米考星的分子量较高、极性强，直接利用气相色谱法或气相色谱-质谱法检测是不可行的。因此本发明采用氢溴酸进行水解，减小药物分子量，然后用乙酸酐作为衍生试剂，对替米考星进行衍生化。到目前为止，有关从禽肉、猪肉及禽蛋中提取替米考星残留并与乙酸酐进行衍生化反应，生成替米考星衍生产物是三乙酰-1,2,4-三羟基-3-二甲氨基-1,5-环氧己烷的研究国内外尚未见报道。
国内外关于替米考星残留的检测方法主要有薄层色谱法、微生物测定法、紫外分光光度法、免疫测定法、液相色谱法和液相色谱-串联质谱法等，曾有文献报道利用GC-MS法检测牛肉和猪肉中的红霉素、竹桃霉素、吉他霉素、螺旋霉素和泰乐菌素，方法的检测结果良好、可靠，是一种实用的确证检测方法。而有关应用GC-MS检测动物性食品中替米考星残留以及应用GC-MS/MS检测禽肉、猪肉及禽蛋中的替米考星残留的方法国内外尚未见报道。与上述文献报道的GC-MS相比较，本试验的前处理方法简单，节省试验成本。该方法定性、定量更准确，准确度和灵敏度好，回收率高，重复性好，填补了国内外关于禽肉、猪肉及禽蛋中替米考星残留GC-MS/MS检测方法的空白。
发明内容
为解决从禽肉、猪肉及禽蛋中提取和净化替米考星残留并衍生化的问题。本试验采用液-液萃取、固相萃取和凝胶色谱法来提取禽肉、猪肉及禽蛋中替米考星的残留；用氢溴酸水解与氢化处理样品，乙酸酐进行替米考星的衍生化，替米考星的衍生反应方程式如下：
为了能够应用气相色谱-串联质谱法检测禽肉、猪肉和禽蛋中替米考星的残留，本发明提供了一种柱前衍生-气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法。经过方法学参数验证，该方法能够实现准确的定性和定量，且回收率和准确度高，灵敏度好，满足兽药残留检测的要求。
一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，
将禽肉、猪肉或禽蛋依次经过乙腈提取，正己烷脱脂，提取液经过HLB固相萃取柱净化，洗脱液经氮气吹干浓缩；
在浓缩干后的样品中加入吡啶和乙酸酐，衍生反应后过滤，滤液采用GC-MS/MS检测。
进一步的，所述禽肉为鸡肌肉、鹅肌肉或鸭肌肉；所述禽蛋为鸡蛋、鹅蛋或鸭蛋。
进一步的，GC-MS/MS检测的气相色谱条件为：以TG-1MS为毛细管色谱柱；高纯氦气为载气，载气柱流速为1.0mL/min。
进一步的，GC-MS/MS检测的程序升温步骤为：初始温度100℃，保持1min；30℃/min升至220℃，保持1min；30℃/min升至290℃，保持5min。
进一步的，GC-MS/MS检测的质谱条件为：电子轰击离子源；70eV电离能；高纯氩气为碰撞气；离子源温度为280℃；传输线温度为280℃；溶剂延迟时间为5.0min；以全扫描方式定性，选择反应监测方式定量。
进一步的，HLB固相萃取柱净化的步骤为：将提取液匀速全部过柱后，用5％甲醇溶液淋洗1次，去除杂质，待淋洗液全部流出后，抽干1min，然后用甲醇进行洗脱。
进一步的，GC-MS/MS检测前进行柱前衍生，柱前衍生的步骤为：将经过氮气吹干浓缩后的洗脱液加入吡啶和乙酸酐，密封，在室温条件下避光反应8～10h，反应结束后将衍生产物溶液过滤，滤液供GC-MS/MS检测分析。
进一步的，将经过HLB固相萃取柱净化后洗脱液置于氮吹仪中35℃吹干，然后经过氢气氢化、0.3mol/L氢溴酸的水解和凝胶色谱处理后，再次用氮气吹干。
进一步的，采用GC-MS/MS检测的峰面积计算禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留量。
进一步的，鸡肌肉、鹅肌肉、鸭肌肉、猪肉、鸡蛋、鹅蛋及鸭蛋的检测公式分别为：
将禽肉(鸡肌肉、鹅肌肉、鸭肌肉)、猪肉和禽蛋样品通过液-液萃取、固相萃取和凝胶色谱法进行提取和净化，乙酸酐和吡啶衍生，衍生产物(三乙酰-1,2,4-三羟基-3-二甲氨基-1,5-环氧己烷)用GC-MS/MS检测。气相色谱条件：以TG-1MS(30.0m×0.25μm×0.25mmi.d.)为毛细管色谱柱；高纯氦气(>99.999％，60psi)为载气，载气柱流速为1.0mL/min。程序升温步骤为初始温度100℃，保持1min；30℃/min升至220℃，保持1min；30℃/min升至290℃，保持5min。进样口温度为280℃；不分流进样模式；分流流量为50.0mL/min；不分流时间为1.0min；恒流模式；载气流速为1.0mL/min；2min后开阀，载气节省时间为2min，载气节省流量为20.0mL/min；进样体积：1.0μL。质谱条件：电子轰击离子源(EI)；70eV电离能；高纯氩气(>99.999％，40psi)为碰撞气；离子源温度为280℃；传输线温度为280℃；溶剂延迟时间为5.0min；以全扫描(SCAN)方式定性，选择反应监测(Auto SRM)方式定量。
一种从禽肉、猪肉及禽蛋中提取和净化替米考星残留并衍生化的方法，包括液-液萃取、固相萃取净化、硅胶色谱、乙酸酐为衍生试剂进行柱前衍生。提取和净化过程分三步：第一步乙腈提取，第二步正己烷脱脂，第三步提取液经过HLB固相萃取柱(60cc/200mg)净化，洗脱液经氮气吹干浓缩。衍生化反应过程：氮气吹干浓缩后的样品与乙酸酐和吡啶在室温条件下密封进行避光反应8～10h进行替米考星衍生化，并通过气相色谱-串联质谱法对衍生产物进行了确证分析，确证替米考星衍生产物是三乙酰-1,2,4-三羟基-3-二甲氨基-1,5-环氧己烷。
提取和净化的步骤是：准确称取(2.5±0.02)g均质好的样品放于10mL聚丙烯离心管中，加入乙腈5mL，涡旋混匀5min，然后超声波振荡萃取20min后，在4℃下，以6000r/min的速度高速离心10min，重复萃取一次，合并上清液并转移至10mL聚丙烯离心管中；再次用涡旋混合器涡旋混匀5min，在相同的转速下高速离心10min，收集上清液于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL正己烷脱脂，涡旋混匀5min后离心，将上层正己烷液体弃去，吸取下层液体于50mL聚丙烯离心管中备用。
固相萃取净化步骤：将上述收集的提取液经过HLB固相萃取柱(60cc/200mg)净化，先将提取液匀速全部过柱后，用5mL的5％甲醇溶液淋洗1次，去除杂质，待淋洗液全部流出后，抽干1min，然后用3mL甲醇进行洗脱，洗脱液用10mL离心管收集。
综上所述，筛选出最佳前处理条件：样品质量为2.5g时，提取试剂乙腈为10mL，氢化时间为35min，采用0.3mol/L氢溴酸作为酸水解试剂，酸水解的时间为30min。
乙酸酐为衍生试剂进行柱前衍生的步骤：将洗脱液置于氮吹仪中35℃吹干，然后经过氢化、酸水解和凝胶色谱处理后，再次用氮气吹干。然后加入500μL吡啶和250μL乙酸酐，密封，在室温条件下避光反应8～10h，反应结束后衍生产物溶液经过0.22μm有机相针头式滤器过滤，滤液供GC-MS/MS检测分析。
有益效果
本发明对比了液液萃取、固相萃取和凝胶色谱法相结合对于结果的影响。结果发现，采用液-液萃取、固相萃取和凝胶色谱相结合的提取方法所得到的衍生产物的峰型良好，干扰杂质峰少，而且样品衍生产物的响应值高。同时也对比了0.1％的甲酸乙腈水溶液和乙腈对禽肉(鸡肌肉、鹅肌肉、鸭肌肉)、猪肉和禽蛋(鸡蛋、鹅蛋和鸭蛋)中目标物提取效果的影响，详见表1。结果表明，禽肉、猪肉和禽蛋以乙腈为提取剂时，提取结果的回收率最高。因此本试验最终选择以乙腈为提取试剂，以液液萃取、固相萃取和凝胶色谱相结合的方法提取和净化禽肉、猪肉和禽蛋中替米考星的残留。
表1不同提取试剂对禽肉、猪肉和禽蛋中替米考星回收率的影响(％)(n＝6)
本发明中采用TG-1MS(30.0m×0.25μm×0.25mm i.d.)毛细管色谱柱，采用全扫描(SCAN)方式定性，选择反应监测(Auto SRM)方式定量，最终所得替米考星衍生产物的色谱峰峰形良好(即灵敏度高)，分析物保留时间适中，无其他杂质峰干扰。
本发明提供了一种利用柱前衍生-气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测替米考星残留的方法。该方法回收率、精密度和灵敏度高，重复性好，适合在批量样品分析中应用与推广。经过方法学参数验证，该方法能够实现准确的定性和定量，且回收率和准确度高，灵敏度好，满足兽药残留检测的要求。
附图说明
图1空白鸡肌肉样品(A)和空白鸡肌肉样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)；
图2空白鹅肌肉样品(A)和空白鹅肌肉样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)；
图3空白鸭肌肉样品(A)和空白鸭肌肉样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)；
图4空白猪肉样品(A)和空白猪肉样品添加100.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)；
图5空白鸡蛋样品(A)和空白鸡蛋样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)；
图6空白鹅蛋样品(A)和空白鹅蛋样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)；
图7空白鸭蛋样品(A)和空白鸭蛋样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)；
图8空白鸡肌肉基质中添加替米考星标准曲线；
图9空白鹅肌肉基质中添加替米考星标准曲线；
图10空白鸭肌肉基质中添加替米考星标准曲线；
图11空白猪肉基质中添加替米考星标准曲线；
图12空白鸡蛋基质中添加替米考星标准曲线；
图13空白鹅蛋基质中添加替米考星标准曲线；
图14空白鸭蛋基质中添加替米考星标准曲线。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
(一)实验畜禽的饲养和样品采集
本试验的进行已获得扬州大学、江苏京海禽业集团有限公司、江苏天歌鹅业发展有限公司和常州康乐农牧有限公司伦理委员会的批准。随机选取70日龄海扬黄鸡(江苏京海禽业集团有限公司)、140日龄高邮鸭(江苏高邮鸭集团)、70日龄扬州鹅(扬州天歌鹅业发展有限公司)公、母各5只；选取6月龄三元(杜×长×大)杂交猪(常州康乐农牧有限公司)公、母各4头。单笼(栏)饲养，试验期间全部饲喂无任何添加药物的全价饲料(江苏京海禽业集团有限公司饲料厂和扬州市扬大饲料厂提供)，自由饮水。饲养15日后屠宰，分别采集鸡、鸭、鹅的两侧胸肌肉以及猪臀部肌肉作为试验样品，分装，密封，置于-34℃冰柜中保存备用。
随机选取35只31周龄产蛋京海黄鸡(江苏京海禽业集团有限公司)，35只28周龄产蛋高邮鸭(江苏高邮鸭集团)，50只32周龄产蛋扬州鹅(江苏天歌鹅业发展有限公司)，试验前预饲15天，第16天开始收集禽蛋。预饲期间和试验期间全部饲喂无任何添加药物的全价饲料(江苏京海禽业集团有限公司饲料厂和扬州市扬大饲料厂提供)，自由饮水，单笼饲养，于每天16:00～17:00左右收集禽蛋，连续收集两周，收获的鸡蛋、鹅蛋和鸭蛋分别匀浆后，分装在不同的离心管中，密封，贴好标签，作为禽蛋空白样品，放置在-34℃冰柜中保存。
(二)本发明提取、净化、浓缩和衍生化步骤
(1)准确称取(2.5±0.02)g均质好的空白样品放于10mL聚丙烯离心管中，加入乙腈5mL，涡旋混合5min后，超声波萃取20min，以6000r/min的速率在4℃下高速离心10min，重复萃取两次，合并上清液至10mL聚丙烯离心管中，再次以6000r/min的速度在4℃下高速离心10min，上清液转移到50mL聚丙烯离心管中；加入10mL正己烷脱脂，放置涡旋混合仪上涡旋混匀5min，再以6000r/min的速率在4℃下高速离心10min，将上层液体弃去，吸取下层液体于50mL聚丙烯离心管中备用。
(2)将上述收集的提取液经过HLB固相萃取柱(60cc/200mg)净化，先将提取液匀速全部过柱后，再用5mL的5％甲醇溶液淋洗1次，去除杂质，待淋洗液全部流出后，抽干1min，然后用3mL甲醇进行洗脱，洗脱液用10mL离心管收集，置于氮吹仪中35℃吹干，待用。
(3)经过氢气氢化、0.3mol/L氢溴酸的水解和凝胶色谱处理后，再次用氮气吹干。在浓缩干后的样品中加入500μL吡啶和250μL乙酸酐，涡旋混匀1min，密封，在室温条件下避光反应8-10h，反应结束后涡旋混匀1min，经过0.22μm有机相针头式滤器过滤，滤液供GC-MS/MS检测分析。
(三)GC-MS/MS分析条件
1.气相色谱条件
毛细管色谱柱：TG-1MS(30.0m×0.25μm×0.25mm i.d.)；载气：高纯氦气(>99.999％，60psi)，载气柱流速：1.0mL/min。程序升温步骤：初始温度100℃，保持1min；30℃/min升至220℃，保持1min；30℃/min升至290℃，保持5min；详见表2。进样口温度：280℃；分流模式：不分流进样；分流流量：50.0mL/min；不分流时间：1.0min；载气模式：恒流模式；载气流速：1.0mL/min；2min后开阀，载气节省时间2min，载气节省流量20.0mL/min；进样体积：1.0μL。
表2程序升温步骤
2.质谱条件
电离模式：电子轰击离子源(EI)；电子束能量(电离能)：70eV；碰撞气：高纯氩气(>99.999％，40psi)；离子源温度：280℃；传输线温度：280℃；溶剂延迟：5.0min；采集数据模式：全扫描(SCAN)方式定性，选择反应监测(Auto SRM)方式定量。替米考星衍生物的分子量和质谱参数见表3。
表3替米考星衍生产物的保留时间和相关质谱参数
注：*定量离子对
(四)定量方法
1.标准曲线的绘制
分别准确称取6份(2.5±0.02)g均质好的空白鸡蛋、鹅蛋和鸭蛋样品，按(二)中的方法对以上空白样品进行前处理，制备鸡蛋、鹅蛋和鸭蛋基质提取液，置于低温冰箱中备用。分别移取适量的空白样品基质提取液将标准工作液稀释成一系列浓度，按(二)中的方法衍生化，使得最终对应在空白鸡蛋、鹅蛋和鸭蛋中替米考星的添加浓度为LOQ、25.0、50.0、100.0、150.0、200.0、400.0μg/kg。
将上述处理的各浓度样品在优化好的GC-MS/MS方法下依次进行检测分析。每个浓度重复6次，取平均值。以替米考星标准工作液在不同空白基质中添加浓度为横坐标(x)，替米考星衍生产物的定量离子对m/z 149.0＞121.0*的峰面积为纵坐标(y)，绘制基质标准曲线并作为待测样品的定量曲线。
由表4和附图8-14可见，替米考星在空白禽肉和禽蛋样品基质提取液中的添加浓度在LOQ～400.0μg/kg范围内，替米考星在空白猪肉样品基质提取液中的添加浓度在LOQ～300.0μg/kg范围内，替米考星衍生产物的定量离子对m/z149.0＞121.0*的峰面积(y轴)与浓度(x轴)呈现良好的线性关系，其线性回归方程、决定系数及线性范围见表4。如果分析的浓度超过样品的线性范围，需将分析的浓度稀释至该范围内，检测出的结果乘以稀释倍数得到原样品的浓度。
表4禽肉、猪肉和禽蛋中替米考星线性回归方程、决定系数及线性范围(n＝6)
2.回收率及精密度的测定
准确称取(2.5±0.02)g均质好的空白鸡肌肉、鹅肌肉、鸭肌肉及猪肉样品，根据(二)的方法将空白样品进行处理，然后加入替米考星标准工作液适量，使其最终在每个空白样品中的添加浓度为LOQ、0.5MRL、1.0MRL、2.0MRL，每个添加浓度设6个平行，再分别经(二)中的方法对空白样品进行净化、水解及衍生，所得滤液供GC-MS/MS检测，然后将检测结果带入空白基质标准曲线中求得浓度，与实际添加的分析物的浓度相比求得样品加标回收率。
空白鸡肌肉样品(A)和空白鸡肌肉样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)见图1；空白鹅肌肉样品(A)和空白鹅肌肉样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)见图2；空白鸭肌肉样品(A)和空白鸭肌肉样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)见图3；空白猪肉样品(A)和空白猪肉样品添加100.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)见图4；空白鸡蛋样品(A)和空白鸡蛋样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)见图5；空白鹅蛋样品(A)和空白鹅蛋样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)见图6；空白鸭蛋样品(A)和空白鸭蛋样品添加150.0μg/kg替米考星标准品(B)的总离子流色谱图(TIC)和定量、定性离子的质量色谱图(MC)见图7。
日内(批内)精密度：在同一天不同时间点对4个添加浓度(LOQ、0.5MRL、1.0MRL、2.0MRL)的样品利用同一台仪器和同一标准曲线进行测定分析，每个添加浓度重复检测6次得到的RSD。
日间(批间)精密度：在一周内不同天，对4个添加浓度(LOQ、0.5MRL、1.0MRL、2.0MRL)的样品用同一台仪器和不同标准曲线(每天都绘制标准曲线)进行测定分析，每个添加浓度重复检测6次得到的RSD。
在此条件下，本发明方法提取禽组织、禽蛋及猪肉中替米考星的添加回收率及精密度见表5、表6。
表5空白禽肉和猪肉中替米考星的添加回收率和精密度(n＝6)
注：α.最高残留限量
表6空白禽蛋中替米考星的添加回收率和精密度(n＝6)
注：α.最高残留限量
3.检测限及定量限的确定
准确称取(2.5±0.02)g均质好的空白样品，按六(二)中的方法制取空白基质提取液。用空白基质提取液逐级稀释低浓度的替米考星标准工作液，按照已建立好的GC-MS/MS方法进行检测。每个浓度重复分析6次，计算信噪比(S/N)的平均值。当S/N≥3时所对应的青霉素G浓度即为检测限(LOD)；当S/N≥10时所对应的青霉素G浓度即为定量限(LOQ)。
根据上述6个平行空白样品的添加回收试验，得到在现有条件下，替米考星在鸡肌肉、鹅肌肉、鸭肌肉、猪肉、鸡蛋、鹅蛋和鸭蛋中的LOD分别为3.3、3.6、4.4、2.3、3.8、4.6、5.6μg/kg，LOQ分别为7.5、8.6、9.8、6.2、8.4、9.6、10.5μg/kg。

Claims (4)

1.一种禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，其特征在于，
将禽肉、猪肉或禽蛋依次经过乙腈提取，正己烷脱脂，提取液经过HLB固相萃取柱净化，洗脱液经氮气吹干浓缩；
在浓缩干后的样品中加入吡啶和乙酸酐，衍生反应后过滤，滤液采用GC-MS/MS检测；GC-MS/MS检测的气相色谱条件为：以TG-1MS为毛细管色谱柱；高纯氦气为载气，载气柱流速为1.0 mL/min；GC-MS/MS检测的程序升温步骤为：初始温度100 ℃，保持1 min；30 ℃/min升至220 ℃，保持1 min；30 ℃/min升至290 ℃，保持5 min；GC-MS/MS检测的质谱条件为：电子轰击离子源；70 eV电离能；高纯氩气为碰撞气；离子源温度为280 ℃；传输线温度为280 ℃；溶剂延迟时间为5.0 min；以全扫描方式定性，选择反应监测方式定量；
HLB固相萃取柱净化的步骤为：将提取液匀速全部过柱后，用5%甲醇溶液淋洗1次，去除杂质，待淋洗液全部流出后，抽干1 min，然后用甲醇进行洗脱；
GC-MS/MS检测前进行柱前衍生，柱前衍生的步骤为：将经过氮气吹干浓缩后的洗脱液加入吡啶和乙酸酐，密封，在室温条件下避光反应8~10 h，反应结束后将衍生产物溶液过滤，滤液供GC-MS/MS检测分析；
将经过HLB固相萃取柱净化后洗脱液置于氮吹仪中35 ℃吹干，然后经过氢气氢化、0.3mol/L氢溴酸的水解和凝胶色谱处理后，再次用氮气吹干。
2.根据权利要求1所述的禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，其特征在于，所述禽肉为鸡肌肉、鹅肌肉或鸭肌肉；所述禽蛋为鸡蛋、鹅蛋或鸭蛋。
3.根据权利要求1所述的禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，其特征在于，采用GC-MS/MS检测的峰面积计算禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留量。
4. 根据权利要求2所述的禽肉、猪肉或禽蛋中替米考星残留的定量检测方法，其特征在于，鸡肌肉、鹅肌肉、鸭肌肉、猪肉、鸡蛋、鹅蛋及鸭蛋的线性回归方程分别为：
基质 线性回归方程 线性范围
峰面积/y轴；浓度/x轴 决定系数/R2 µg/kg
鸡肌肉 y=4519.2x-5663.5 0.9992 7.5~400.0
鹅肌肉 y=4986.3x+9011.2 0.9990 8.6~400.0
鸭肌肉 y=5953x-17218 0.9990 9.8~400.0
猪肉 y=4508.8x+5424 0.9991 6.2~300.0
鸡蛋 y=4870.8x-11963 0.9991 8.4~400.0
鹅蛋 y=3735.3x+7420.8 0.9991 9.6~400.0
鸭蛋 y=4044.1x+1830.9 0.9990 10.5~400.0。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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纳鹏军 等.肉食品中常见4种抗生素残留的高效液相色谱分析.分析测试技术与仪器.2011,第17卷(第2期),65-68. *

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