CN113730558A - 一种卵巢内卵细胞修复组合物及其制备方法 - Google Patents

一种卵巢内卵细胞修复组合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及卵巢修复技术领域，公开了一种卵巢内卵细胞修复组合物及其制备方法。以期解决当前卵巢衰老治疗方法副作用大，疗效不明确的技术问题。本发明提供了一种卵巢内卵巢细胞修复组合物，包括益母草提取物、葛根提取物、射干提取物、牡丹根提取物、海藻提取物、酵母提取物、苹果果实细胞培养物提取物、金黄洋甘菊提取物、北美金缕梅提取物、蜂王浆冻干粉、胶原蛋白、大豆异黄酮、黄原胶、卡波姆、甘草酸二钠、壳多糖、辅酶A。本发明还提供一种所述卵巢内卵细胞修复组合物的制备方法。本发明的组合物可促进女性荷尔蒙平衡，调理女性生殖系统，促进盆腔血液循环增强卵巢免疫力，使卵巢分泌健康卵子，达到有效修复卵巢内卵细胞的目的。

Description

一种卵巢内卵细胞修复组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及卵巢修复技术领域，特别是涉及一种卵巢内卵细胞修复组合物及其制备方法。
背景技术
卵巢是女性重要的性腺器官，女性的生长、发育、生殖等均与卵巢功能和卵细胞的质量密切相关。随着社会发展，生活的压力和环境的污染，卵巢衰老的发病呈年轻化趋势，且发病率持续上升。卵巢衰老主要表现为月经周期和激素分泌异常，卵细胞质量下降，导致女性生育力降低、内分泌功能紊乱。
卵巢衰老病因复杂，包括基于染色体或遗传的卵细胞减少，医源性药物引起的卵巢损伤，自身免疫引起功能失调等。鉴于卵巢衰老的发病因素多样化，尚无能够修复卵巢功能的明确有效方法。目前，卵巢衰老多采用激素治疗、免疫治疗、辅助生殖治疗和心理治疗等方法。但是，卵巢衰老兵役复杂，常用的激素治疗甚至有致癌风险；免疫治疗副作用大，且效果不明显；辅助生殖治疗患者的接受度差；心理治疗疗效不确切。上述方法不能从根本上解决卵巢衰老造成的内分泌问题和排卵功能。
因此，为了有效保护妇女的生殖功能和权益，维护妇女的家庭和谐，研发疗效确切、使用安全的治疗卵巢衰老的治疗药物成为妇科生殖的研究重点之一。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种卵巢内卵细胞修复组合物及其制备方法，旨在解决当前卵巢衰老治疗方法副作用大，疗效不明确的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种卵巢内卵巢细胞修复组合物，按质量份数计，所述卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10-15份、葛根提取物10-15份、射干提取物10-15份、牡丹根提取物10-15份、海藻提取物5-10份、酵母提取物10-20份、苹果果实细胞培养物提取物4-6份、金黄洋甘菊提取物4-5份、北美金缕梅提取物4-6份、蜂王浆冻干粉5-8份、胶原蛋白4-8份、大豆异黄酮2-2.5份、黄原胶0.2-0.3份、卡波姆0.1-0.2份、甘草酸二钠0.2-0.4份、壳多糖0.2-0.5份、辅酶A 0.5-1份。
优选的，按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物10份、射干提取物12份、牡丹根提取物10份、海藻提取物5份、酵母提取物20份、苹果果实细胞培养物提取物4.7份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物5份、蜂王浆冻干粉6份、胶原蛋白8份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A 1份。
优选的，所述益母草提取物、葛根提取物、射干提取物、牡丹根提取物中的任一种所述提取物的制备方法为：
取益母草、葛根、射干、牡丹根中的任一种中药药材，粉碎后过100-200目筛，加5-6倍体积的水覆盖药材过夜浸泡；200-250kHz超声波破碎2-4h，过50-80目筛，按干燥药材重量加入3-5mg/g纤维素酶，调pH为4.5-5.5，50-55℃酶解6-8h，过30-50目筛，95-100℃灭酶1-2h，浓缩成浸膏，干燥，即得。
优选的，所述海藻提取物中所用海藻包括墨角藻和/或奥氏海藻。
优选的，所述海藻提取物的制备方法为：
取新鲜海藻，快速冰冻后研磨粉碎至粒径不大于3mm；加4-6倍体积的水覆盖粉碎物，溶解至室温后10000-15000rpm离心；取上清液，浓缩、干燥，即得。
优选的，所述酵母提取物中所用酵母为啤酒酵母。
优选的，所述酵母提取物的制备方法为：
取干燥酵母10-15g，加入蒸馏水100-150ml，调pH至6.5-7.5，按所述干燥酵母重量加入80-100mg/g的蛋白酶，在50-55℃下酶解8-10h，过30-50目筛，95-100℃灭酶1-2h，浓缩，烘干，即得。
优选的，所述苹果果实细胞培养物提取物的制备方法为：
取苹果果肉，反复冲洗，在无菌环境下切成小块果肉组织；置于诱导培养基上在25-28℃、光照<1000lux条件下培养14-18天，得愈伤组织；将所述愈伤组织转移到生长培养基，振荡通气培养得单细胞；将所述单细胞接种于生长培养基中进行扩大培养25-28d；6000-8000rpm离心去沉淀，加5-6倍体积的水在200-250kHz超声波破碎1-2h，浓缩、干燥，即得。
优选的，所述金黄洋甘菊提取物或北美金缕梅的鲜花提取物的制备方法为：
将金黄洋甘菊或北美金缕梅鲜花烘干，粉碎，加入体积5-6倍的水，在30-50kHz下超声逆流提取20-30min，过30-50目筛，滤液浓缩，烘干，即得。
另提供一种所述卵巢内卵细胞修复组合物的制备方法：
取所述重量份数的所述益母草提取物、葛根提取物、射干提取物、牡丹根提取物、海藻提取物、酵母提取物、苹果果实细胞培养物提取物、金黄洋甘菊提取物、北美金缕梅提取物、蜂王浆冻干粉、胶原蛋白、大豆异黄酮、黄原胶、卡波姆、甘草酸二钠、壳多糖、辅酶A，混合均匀，即成。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明的组合物可促进女性荷尔蒙平衡，调理女性生殖系统，疏通卵巢部位的淤堵，促进盆腔血液循环增强卵巢免疫力，使卵巢分泌健康卵子，从而达到平衡自体荷尔蒙，恢复卵细胞，达到有效修复卵巢内卵细胞的目的。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
在本发明的描述中，应当理解的是，所涉及的仪器设备如无特别说明，均为常规仪器设备；所涉及的原料或化合物如无特别说明，均为市售常规试原料或化合物；所涉及的水，均为无菌水；所涉及的方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例1：一种卵巢内卵细胞修复组合物
(1)按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物10份、射干提取物12份、牡丹根提取物10份、海藻提取物5份、酵母提取物20份、苹果果实细胞培养物提取物4.7份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物5份、蜂王浆冻干粉6份、胶原蛋白8份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A1份。
其中，中药益母草、葛根、射干和牡丹根的药理和功效如下：
益母草为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鲜或干燥地上部分。有活血调经，利尿消肿，清热解毒之功效。用于月经不调，痛经经闭，恶露不尽，水肿尿少，疮疡肿毒。
葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。甘、辛，凉。有解肌退热，透疹，生津止渴，升阳止泻之功。常用于表证发热，项背强痛，麻疹不透，热病口渴，阴虚消渴，热泻热痢，脾虚泄泻。
射干为鸢尾科射干属Belamcanda chinensis(L.)Redouté多年生草本味苦、性寒、微毒。能清热解毒、散结消炎、消肿止痛，用于治疗腰痛等症。
牡丹根为野牡丹科植物野牡丹Melastoma candidum D.Don的根。具有健脾利湿，活血止血之功效。用于消化不良，食积腹痛，泻痢，便血，衄血，月经不调，风湿痹痛，头痛，跌打损伤。
以上中药提取物的制备方法为：
分别取上述中药药材干燥，粉碎后过100目筛，加5倍体积的水覆盖药材过夜浸泡；200kHz超声波破碎2h，过50目筛，按干燥药材重量加入3mg/g纤维素酶，调pH为5.0左右，50℃酶解8h，过30目筛，95℃灭酶2h，浓缩成浸膏，干燥后得中药提取物。
其中，海藻提取物所用海藻包括墨角藻Fucus vesiculosus和奥氏海藻Cladosiphon okamuranus。
海藻提取物的制备方法为：
取新鲜海藻，快速冰冻后研磨粉碎，使粉碎颗粒粒径不大于3mm；加4倍体积的水覆盖粉碎物，溶解至室温后15000rpm离心；取上清液，浓缩、干燥得海藻提取物。
其中，酵母提取物所用酵母为啤酒酵母，如酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae。
酵母提取物的制备方法为：
取干燥酵母10g，加入蒸馏水100ml，调pH至7.0左右，按干燥酵母重量加入80mg/g的蛋白酶，在50℃下酶解10h，过30目筛，95℃灭酶2h，浓缩，烘干后得酵母提取物。
其中，苹果果实细胞培养物提取物的制备方法为：
取苹果的果肉用无菌水反复冲洗后，在无菌环境下切成小块果肉组织；置于诱导培养基上在25℃、光照<1000lux条件下培养14天，引发切口表层愈伤层的产生，迭代培养分离；将分离出的愈伤组织转移到生长培养基，振荡通气培养获得单细胞；将单细胞接种于生长培养基中进行扩大培养25d；6000rpm离心去沉淀，加5倍体积的无菌水在200kHz超声波破碎2h，浓缩、干燥，得到苹果果实细胞培养物提取物。
其中，金黄洋甘菊提取物或北美金缕梅的鲜花提取物的制备方法为：
将金黄洋甘菊或北美金缕梅鲜花烘干，粉碎，加入体积5倍的水，在30kHz下超声逆流提取30min，过滤，过30目筛，滤液浓缩，烘干后得鲜花提取物。
其中，蜂王浆冻干粉含有免疫球蛋白、王浆酸和丰富的维生素，能为人体提供丰富的营养物质，改善人体营养不均衡的状态，增强人体的免疫力。
其中，胶原蛋白含氨基酸种类丰富，蛋白质含量高，不含脂肪，可增加细胞的储水能力，增强和维持肌肉良好的弹性，增强体质。
其中，大豆异黄酮来源于豆科植物的荚豆类，作为植物雌激素作用可影响激素分泌、代谢生物学活性、蛋白质合成、生长因子活性。
其中，食品添加剂包括黄原胶、卡波姆、甘草酸二钠、壳多糖、辅酶A。黄原胶是由野油菜黄单胞杆菌Xanthomnas campestris以碳水化合物为主要原料经发酵工程生产的一种作用广泛的微生物胞外多糖。卡波姆为丙烯酸键合烯丙基蔗糖或季戊四醇烯丙醚的高分子聚合物。甘草酸二钠盐是一种天然食品甜味剂，从天然植物甘草中提取经特殊工艺加工而成，具有抗炎、增强免疫力的作用。壳多糖来自动物纤维，安全性好，作为食品添加剂可活化免疫机能、增加肠道有益菌。辅酶A作为细胞内酶的催化剂，促进糖代谢，促进卵巢内激素分泌。
(2)该卵巢内卵细胞修复组合物的制备方法包括以下步骤：
取上述重量份数的益母草提取物、葛根提取物、射干提取物、牡丹根提取物、海藻提取物、酵母提取物、苹果果实细胞培养物提取物、金黄洋甘菊提取物、北美金缕梅提取物；蜂王浆冻干粉、胶原蛋白、大豆异黄酮、黄原胶、卡波姆、甘草酸二钠、壳多糖、辅酶A，混合均匀，即成。
实施例2：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物12份、射干提取物13份、牡丹根提取物15份、海藻提取物7.7份、酵母提取物15份、苹果果实细胞培养物提取物5.5份、金黄洋甘菊提取物4份、北美金缕梅提取物4份、蜂王浆冻干粉5份、胶原蛋白5份、大豆异黄酮2.5份、黄原胶0.2份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.3份、壳多糖0.2份、辅酶A0.5份。
实施例3：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物15份、葛根提取物10份、射干提取物10份、牡丹根提取物15份、海藻提取物8.6份、酵母提取物10份、苹果果实细胞培养物提取物6份、金黄洋甘菊提取物4份、北美金缕梅提取物6份、蜂王浆冻干粉8份、胶原蛋白4份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.2份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.2份、壳多糖0.4份、辅酶A0.5份。
实施例4：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物12份、葛根提取物14份、射干提取物15份、牡丹根提取物10份、海藻提取物5.2份、酵母提取物15份、苹果果实细胞培养物提取物5份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物4份、蜂王浆冻干粉5份、胶原蛋白6份、大豆异黄酮2.5份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.2份、壳多糖0.2份、辅酶A0.5份。
对比例1：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
海藻提取物5份、酵母提取物20份、苹果果实细胞培养物提取物4.7份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物5份、蜂王浆冻干粉6份、胶原蛋白8份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A1份。
对比例2：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物10份、射干提取物12份、牡丹根提取物10份、酵母提取物20份、苹果果实细胞培养物提取物4.7份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物5份、蜂王浆冻干粉6份、胶原蛋白8份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A1份。
对比例3：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物10份、射干提取物12份、牡丹根提取物10份、海藻提取物5份、苹果果实细胞培养物提取物4.7份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物5份、蜂王浆冻干粉6份、胶原蛋白8份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A1份。
对比例4：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物10份、射干提取物12份、牡丹根提取物10份、海藻提取物5份、酵母提取物20份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物5份、蜂王浆冻干粉6份、胶原蛋白8份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A1份。
对比例5：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物10份、射干提取物12份、牡丹根提取物10份、海藻提取物5份、酵母提取物20份、苹果果实细胞培养物提取物4.7份、蜂王浆冻干粉6份、胶原蛋白8份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A1份。
对比例6：一种卵巢内卵细胞修复组合物
与实施例1不同之处在于：
按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物10份、射干提取物12份、牡丹根提取物10份、海藻提取物5份、酵母提取物20份、苹果果实细胞培养物提取物4.7份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物5份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A1份。
试验例：
确定动情周期相同的33只6月龄雌性SD大鼠随机分为11组，1组为空白对照组，喂普通饲料；4组为实验组，分别将实施例1-4的组合物混入普通饲料饲喂；6组为对照组，分别将对比例1-6的组合物混入普通饲料饲喂，混入量为6g/300g，连续饲喂28d。
选择大鼠处于动情期时禁食不禁水12h后，乙醚吸入式麻醉，腹主动脉取血，离心分离后采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清中促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)及抗苗勒氏管激素(AMH)含量，取平均值。
检测结果如下：
表1检测结果
Figure BDA0003254697880000091
Figure BDA0003254697880000101
可知，实验组大鼠血清中促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)含量明显高于空白对照组和对照组，雌二醇(E2)及抗苗勒氏管激素(AMH)含量明显低于空白对照组和对照组。
综上，本发明实施例提供的卵巢内卵细胞修复组合物可促进女性荷尔蒙平衡，调理女性生殖系统，疏通卵巢部位的淤堵，促进盆腔血液循环增强卵巢免疫力，使卵巢分泌健康卵子，从而达到平衡自体荷尔蒙，恢复卵细胞，达到有效修复卵巢内卵细胞的目的。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通计数人员来说，在不脱离本发明计数原理的前提下，还可以做出若干改进和替换，这些改进和替换也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，按质量份数计，所述卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10-15份、葛根提取物10-15份、射干提取物10-15份、牡丹根提取物10-15份、海藻提取物5-10份、酵母提取物10-20份、苹果果实细胞培养物提取物4-6份、金黄洋甘菊提取物4-5份、北美金缕梅提取物4-6份、蜂王浆冻干粉5-8份、胶原蛋白4-8份、大豆异黄酮2-2.5份、黄原胶0.2-0.3份、卡波姆0.1-0.2份、甘草酸二钠0.2-0.4份、壳多糖0.2-0.5份、辅酶A0.5-1份。
2.依据权利要求1所述的卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，按质量份数计，该卵巢内卵细胞修复组合物由以下原料组成：
益母草提取物10份、葛根提取物10份、射干提取物12份、牡丹根提取物10份、海藻提取物5份、酵母提取物20份、苹果果实细胞培养物提取物4.7份、金黄洋甘菊提取物5份、北美金缕梅提取物5份、蜂王浆冻干粉6份、胶原蛋白8份、大豆异黄酮2份、黄原胶0.3份、卡波姆0.1份、甘草酸二钠0.4份、壳多糖0.5份、辅酶A 1份。
3.依据权利要求1或2所述的卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，所述益母草提取物、葛根提取物、射干提取物、牡丹根提取物中的任一种所述提取物的制备方法为：
取益母草、葛根、射干、牡丹根中的任一种中药药材，粉碎后过100-200目筛，加5-6倍体积的水覆盖药材过夜浸泡；200-250kHz超声波破碎2-4h，过50-80目筛，按干燥药材重量加入3-5mg/g纤维素酶，调pH为4.5-5.5，50-55℃酶解6-8h，过30-50目筛，95-100℃灭酶1-2h，浓缩成浸膏，干燥，即得。
4.依据权利要求1或2所述的卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，所述海藻提取物中所用海藻包括墨角藻和/或奥氏海藻。
5.依据权利要求1或2所述的卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，所述海藻提取物的制备方法为：
取新鲜海藻，快速冰冻后研磨粉碎至粒径不大于3mm；加4-6倍体积的水覆盖粉碎物，溶解至室温后10000-15000rpm离心；取上清液，浓缩、干燥，即得。
6.依据权利要求1或2所述的卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，所述酵母提取物中所用酵母为啤酒酵母。
7.依据权利要求1或2所述的卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，所述酵母提取物的制备方法为：
取干燥酵母10-15g，加入蒸馏水100-150ml，调pH至6.5-7.5，按所述干燥酵母重量加入80-100mg/g的蛋白酶，在50-55℃下酶解8-10h，过30-50目筛，95-100℃灭酶1-2h，浓缩，烘干，即得。
8.依据权利要求1或2所述的卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，所述苹果果实细胞培养物提取物的制备方法为：
取苹果果肉，反复冲洗，在无菌环境下切成小块果肉组织；置于诱导培养基上在25-28℃、光照<1000lux条件下培养14-18天，得愈伤组织；将所述愈伤组织转移到生长培养基，振荡通气培养得单细胞；将所述单细胞接种于生长培养基中进行扩大培养25-28d；6000-8000rpm离心去沉淀，加5-6倍体积的水在200-250kHz超声波破碎1-2h，浓缩、干燥，即得。
9.依据权利要求1或2所述的卵巢内卵细胞修复组合物，其特征在于，所述金黄洋甘菊提取物或北美金缕梅的鲜花提取物的制备方法为：
将金黄洋甘菊或北美金缕梅鲜花烘干，粉碎，加入体积5-6倍的水，在30-50kHz下超声逆流提取20-30min，过30-50目筛，滤液浓缩，烘干，即得。
10.权利要求1或2所述卵巢内卵细胞修复组合物的制备方法，其特征在于，取所述重量份数的所述益母草提取物、葛根提取物、射干提取物、牡丹根提取物、海藻提取物、酵母提取物、苹果果实细胞培养物提取物、金黄洋甘菊提取物、北美金缕梅提取物、蜂王浆冻干粉、胶原蛋白、大豆异黄酮、黄原胶、卡波姆、甘草酸二钠、壳多糖、辅酶A，混合均匀，即成。
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