CN113729226A - 一种用于肿瘤治疗的益生菌复合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于肿瘤治疗的益生菌复合物及其制备方法，该益生菌复合物包括八种益生菌和三种益生元，本发明同时提供了一种益生菌复合物的制备方法，1.将几种益生菌和益生元分别按配比称量；2.把称量好的物料进行混合；3.将混合好的物料进行肠溶胶囊灌装。本发明将所述益生菌与益生元进行科学的配比，有效提高了益生菌的功效，更好的保留了活菌数量，增强了益生菌发挥功效的时间，耐酸和耐胆盐的能力较市场上的其他产品好，相关研究表明该产品中包含的益生菌可以有效促进肿瘤放化疗和免疫治疗响应，降低肿瘤放化疗副作用等。本产品适合人群主要为肿瘤放化疗和免疫治疗患者。

Description

一种用于肿瘤治疗的益生菌复合物及其制备方法
本发明涉及一种益生菌复合物，具体地说是一种益生菌复合物及其制备方法，属于复合益生菌领域。
背景技术根据2014版国际益生菌和益生元科学协会的定义，益生菌是指“当给予足够数量时能对宿主发挥有益健康作用的活的微生物”。益生菌的3个核心特征是：①足够数量②活菌状态③有益健康功能。益生菌最主要核心特征在于有益健康的功能属性，这是建立在科学严谨的临床试验评价和循证医学证据基础上的。
益生菌的功效作用：（1）生物屏障作用，益生菌通过磷壁酸与肠黏膜上皮细胞紧密结合，与其他厌氧菌一起共同占据肠黏膜表面，形成生物屏障，阻止各种致病菌、条件致病菌的入侵；（2）增强人体免疫力，益生菌进入肠道内，一方面可以在肠道内定殖，维持肠道微生物菌群的平衡；另一方面是益生菌可以直接作用于宿主的免疫系统，诱发肠道免疫，并刺激胸腺，脾脏等免疫器官，促进巨噬细胞活性，通过增强B、T淋巴细胞对抗原刺激的反应性，发挥特异性免疫活性，从而增强机体的免疫功能；（3）预防癌症和抑制肿瘤的生长，益生菌可以产生一些抑制肿瘤生长的代谢产物，如多糖、细菌素及乳酸等，通过抑制转化致癌物质的酶的产生，激活机体免疫系统，特别是巨噬细胞、NK细胞、B淋巴细胞的活性以及抑制细胞突变等方式，以及降低肠道内的PH值，刺激肠道蠕动，使肠道内的致病菌毒素和致癌物质排除体外，降低致癌的可能性；（4）缓解过敏反应，研究发现，正常人肠道中益生菌越多，罹患过敏性疾病的机会也就越小。益生菌可以诱导T细胞产生大量的IL-12，能够抑制Ig E的产生，有效地预防过敏发生；（5）抗衰老，随着人的衰老，机体消除自由基功能减退，体内自由基增加却不能被清除，抗氧化活性下降。益生菌能增加血液中超氧化物歧化酶的活性以及含量，在体内协调自由基的氧化反应使其减少，从而达到抗氧化的效果。
已有大量研究表明，益生菌在肿瘤治疗中扮演着重要作用。一项研究报告称，干酪乳杆菌可增强NK细胞和T细胞的活性，改善巨噬细胞的吞噬活性，抑制癌症进展[1]；一项发表在《PNAS》上的新研究，发现益生菌对肠外肿瘤（特别是肝细胞癌HCC）具有免疫调节作用，与对照组动物相比，小鼠的肿瘤重量和体积减少了百分之40[2]；来自美国德克萨斯大学西南医学中心和芝加哥大学的研究团队发现，双旗杆局可以在肿瘤内积聚，帮助改善免疫治疗的效果[3]；来自美国俄亥俄州立大学的研究人员深入分析了化疗的中枢神经毒性机制，结果发现化疗造成的肠道菌群紊乱可能是其毒副反应的重要机制，这项研究为防治化疗的中枢神经毒性提供了一个新思路——调节肠道菌群[4]；由桑福德·伯纳姆·普雷比斯医院的研究人员领导的40多名科学家和三所医院组成的研究团队发现了11种细菌的混合物，这种细菌混合物可以激活小鼠的免疫系统并减缓黑色素瘤的生长速度[5]; 来自法国Gustave Roussy癌症研究所的Laurence Zitvogel教授团队发现特定的肠道微生物可以提高化疗药物环磷酰胺的效果[6]; 一项于2019年发表的一项荟萃研究-Cochrane，共1508名受试者，与安慰剂相比，益生菌显着降低了放疗引起的腹泻的发生率约40%;来自法国的团队发现嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）可以促进肺癌、肾癌和膀胱癌患者对免疫治疗的反应[7]；来自美国的两项针对皮肤癌的研究也证实临床上响应免疫治疗的患者，肠道菌群组成和其它患者是不同的,移植响应患者的“好菌群”给老鼠，能增强免疫治疗的效果，反之，则没有效果[8、9]。以上这些研究都表明益生菌针对肿瘤治疗有着重要辅助作用。
目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。
益生菌从菌种的筛选、产品包装、产品运输、购买食用整个过程过中，益生菌的活力以及活菌数目在逐渐降低，尤其进入人的体内，益生菌经过胃酸、胆汁等极端环境到达肠道，此时益生菌的活力已是大幅降低，因而益生菌种类合理配比以及提高益生菌的耐酸、耐胆汁的效果显得尤为重要。
益生元是指是一种不易被机体消化，不被有害菌利用，可被有益菌利用增殖的物质。市面上的应用比较广泛的益生元有菊粉、洋车前子粉、低聚果糖、低聚甘露糖等。
目前市面上的益生菌复合物虽然有益生菌、益生元等的结合，但益生菌的种类较少，也没有一个科学的配方配比，发挥作用时间长，功效差，而且没有专门针对肿瘤治疗的配方益生菌复合物。
发明内容
上述技术问题也是目前益生菌产品普遍存在的问题，目前市场上的益生菌产品都是由一种或两种构成，但很少八种以上的益生菌按照一定的配比而成，并且没有专门用于辅助肿瘤治疗的。而且现有的益生菌产品由于原料和生产工艺的原因，成品的活菌数量会减少，同时这些产品耐酸和耐胆盐的能力较差。
本发明提供一种益生菌复合物，包括益生菌和益生元，所述益生菌复合物包含八种及以上益生菌以及四种及以上益生元。本发明是根据益生菌促进肿瘤放化疗或免疫治疗效果或降低放化疗副作用等的相关研究和人体肠道益生菌构成进行的复配，大大缩短了益生菌发生功效所需时间。
优选的是，所述益生菌与益生元的质量比为2:3。
上述任一方案优选的是，所述益生菌包括鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌。
上述任一方案优选的是，所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌的质量比为1:1:0.5:1:0.5:0.5:0.5:1。
上述任一方案优选的是，所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌含量相同。
上述任一方案优选的是，所述嗜酸乳杆菌、嗜热链球杆菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌含量相同。
上述任一方案优选的是，所述益生元包括菊粉、洋车前子粉、低聚果糖、低聚甘露糖。
上述任一方案优选的是，所述菊粉、洋车前子粉、低聚果糖、低聚甘露糖的质量比为1:1:1:1。
上述任一方案优选的是，所述益生菌复合物中活菌量为109-1010CFU/g。
上述任一方案优选的是，其特征在于所述益生菌为粉剂。
本发明的原料：
双歧杆菌：可以维护肠道正常细菌菌群平衡，抑制病原菌的生长，防止便秘，下痢和胃肠障碍等；抗肿瘤；在肠道内合成维生素、氨基酸和提高机体对钙离子的吸收；降低血液中胆固醇水平，防治高血压；改善乳制品的耐乳糖性，提高消化率；增强人体免疫机能，预防抗生素的副作用，抗衰老，延年益寿；增强机体的非特异和特异性免疫反应；控制内毒素血症的作用；提高宿主对放射线的耐受性。
干酪乳杆菌：具有良好的耐酸及胆汁抗性，可降低血浆胆固醇，增强宿主对微生物病原体的非特异性抵抗力，加快清除肠道内病原体，治疗肠道菌群紊乱和增强肠道透性，从而防止食物过敏和急性腹泻。此外，干酪乳杆菌还可使抗低密度氧化脂抗体和淋巴细胞增加，使粒细胞的噬菌作用明显增强，对宿主进行免疫调节，防止肿瘤的产生。
鼠李糖乳杆菌：具有高效降胆固醇，促进细胞分裂，可起到调节肠道菌群、预防和治疗腹泻、排除毒素、预防龋齿、提高机体免疫力及抗癌等重要的生理保健功能。
嗜酸乳杆菌：具有降血压；促进钙铁吸收；调整肠道菌群；抑制癌细胞增殖；增强免疫力；改善睡眠；抗氧化等作用。
嗜热链球菌：能使艰难梭菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌的菌落直径减少约30%；能使金黄葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、产气荚膜梭菌的菌落直径减少约20%；降低肠道pH值，促进肠蠕动防止病原菌定植，分泌细菌素抑制病原菌的生长。生成的多糖、细菌素、乳酸等具有抗肿瘤活性的作用，通过激活机体免疫系统，抑制细胞的突变来抵抗肿瘤的发生。产生超氧化物歧化酶(SOD)可以清除体内代谢过程中产生的过量超氧阴离子自由基，延缓衰老。嗜热链球菌在PH=6.8的酸性溶液中的存活率是100%，在PH=4的酸性溶液中的存活率约是75%，在PH=3的酸性溶液中的存活率约是70%。能够在较高浓度的胆汁中生存，所以应该可以在体内免受胆汁的损害而到达小肠的远端。
嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）：参与恢复肠道黏蛋白，延缓衰老、降脂减肥、抑制神经退行性疾病，促进肿瘤免疫治疗疗效。
菊粉：调节肠道菌群平衡，促进免疫，防治与肠道相关疾百病；促进部分维生素合成，凝胶作用、膜作用等，预防代谢相关疾病，比如糖尿病；
洋车前子粉：洋车前子纤维主要由半纤维素组成，这种半纤维素是一种复合的碳水化合物，广泛存在于谷物、水果和蔬菜中。半纤维素不能被人体消化，但是可以在结肠内部分分解，并有益于肠内益生菌。洋车前子粉可以发挥解毒剂的作用。通过大吸收水分和其他有害物质，增大粪便体积，使重金属和其他有害化学毒素被吸附在粪便团块内，从而降低致癌物或有害物质之浓度；同时，促进肠道蠕动，加速其排出，减少与肠壁粘膜接触的时间。因而可预防或降低结肠癌、大肠炎等肠道疾患之罹患机率。
低聚果糖：肠内双歧杆菌的活化增殖因子，可减少和抑制肠内腐败物质的产生，抑制有害细菌的生长，调节肠道内平衡；能促进微量元素铁、钙的吸收与利用，以防止骨质疏松症；可减少肝脏毒素，能在肠中生成抗癌的有机酸，有显著的防癌功能。
低聚甘露糖：具有不被人体胃肠道消化，但可以促进生物体内以双歧杆菌为代表的肠道益生菌群的特异性增殖并抑制有害菌的生长，减少有毒代谢产物的生成，改善人体肠道功能的作用，防止便秘，保护肝脏，抗肿瘤及增强免疫力，可用作食品或饲料添加剂及保健食品。
本发明还提供上述中任一方案所述的益生菌复合物的制备方法，具体步骤如下：
步骤一：所有原料进行称量；
步骤二：把称量好的物料进行混合；
步骤三：将混合好物料，进行肠溶胶囊灌装。
其中主料为：按配比混合的益生菌复合物。
上述任一方案优选的是，步骤三中，进行肠溶胶囊灌装时，要求益生菌复合物净含量达到 0.36-0.4克之间。
上述任一方案中优选的是，所述步骤二中混合时温度14℃。
上述任一方案中优选的是，所述步骤二中混合时进行搅拌，搅拌速度为20转/分。
本发明提供的益生菌是根据世界肿瘤治疗研究数据和健康人体肠道益生菌构成模式进行复配的，采用科学的配方配比，功效好，发挥作用所需时间短，活菌量多。耐酸和耐胆盐的能力较市场上的其他产品好。
附图说明：
图1是肠道菌群干预前，干预后的对比。图2是使用后腹泻改善率。图3是实施例和对照例活菌检测量对比。
具体实施方式
以下是对发明的具体实施例，是对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。
实施例1
本实施例中提供的益生菌复合物包括益生菌和益生元，益生菌与益生元的质量配比为2:3。所述益生菌为鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌的质量比为1:1:0.5:1:0.5:0.5:0.5:1。
实施例2
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为3:2:1:1:1:1:1:1。
实施例3
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为1:1:0.5:0.5:0.5:0.5:0.5:0.5。
实施例4
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为2:1.5:0.75:0.75:0.75:0.75:0.75:0.75。
实施例5
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为3:2.5:0.75:0.5:0.75:0.5:0.75:0.75。
实施例6
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为3:2.5:0.75:0.5:0.75:0.5:0.75:0.5。
实施例7
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的质量比为1:2:1。
实施例8
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的质量比为1:2:2。
实施例9
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的质量比为1:2:3。
实施例10
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的质量比为1:2:4。
对比例1
本对比例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为5:4:1.5:1.5:1.5:1.5:1.5:1.5。
对比例2
本对比例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为0.5:1:1:1:1:1:1:1。
对比例3
本对比例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为0.8:1:1:1:1:1:1:1。
对比例4
本对比例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为1:4:1:1:1:1:1:1。
对比例5
本对比例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为1:0.5:1:1:1:1:1:1。
对比例6
本对比例的益生菌复合物与实施例1不同的是所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌（Akk菌）、长双歧杆菌，其质量比为1:0.5:1:1:1:1:1:1。
对比例7
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的质量比为4:1:1。
对比例8
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的质量比为5:1:1。
对比例9
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的质量比为1:4:1。
对比例10
本实施例的益生菌复合物与实施例1不同的是鼠李糖乳杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的质量比为1:5:1。
检测方法：采用平板计数法对总活菌数进行检测。
检测结果：见附图3。
从附图3中可以看出在本发明提供的质量配比范围内的益生菌复合物(实施例)，其活菌数可以达到109-1010CFU/g，而未落入本发明的质量配比范围内的益生菌复合物(对比例) CFU/g，其活菌数为107-108CFU/g。可见本发明提供的益生菌复合物大大增加了益生菌的活菌总数，有效降低了益生菌发挥作用所用的时间，从而能够有效改善肿瘤治疗患者等并发胃肠道疾病。
肿瘤化疗患者肠道腹泻改善效果评价
评价方法：选择肿瘤化疗患者人群200人，男女各100人，分成2组，一组为实验组，一组为对照组，其中每组中20岁以下10人，20-40岁20人，41-60岁30人，61-80岁20人，81岁以上20 人。受试人群在保持其原有的生活、作息习惯等的情况下，服用实施例1制成的益生菌复合物，对照组不服用益生菌复合物。统计并记录反馈的数据。服用方法:一天三次，一次2粒，温水送服。测其使用后的情况，周期为四周。
评价标准：连续每天1到2次排便，判定为腹泻改善，如使用4周的腹泻改善率为从开始服用后第一次排便后连续每天排便1-2次的人数占该组总受试人数的比例。以及服用前后菌群改善情况。
评价结果：见附图1和附图2
从附图1和附图2中可以看出，实验组在使用一周之后腹泻便有了明显改善，改善率为75％，经过两周改善率提高到了87％，三周后的改善率提高到了93％，4周后改善为为98％。而对照组在没有服用益生菌复合物的情况下与服用前相比没有任何改善。同时肠道菌群结构也有改善。
尽管以上已经对本发明的各种优选实施方式进行了描述，但在不脱离本发明的目的和宗旨的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明做出许多变化、补充、改变和删减。以上结合本发明的具体实施例做的详细描述，并非是对本发明的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改，均仍属于本发明技术方案的范围。
参考文献：
[1] Probiotics and Their Potential Preventive and Therapeutic Role forCancer, High Serum Cholesterol, and Allergic and HIV Diseases.
[2] Probiotics dramatically modulate liver cancer growth in mice.
[3] Intratumoral accumulation of gut microbiota facilitates CD47-basedimmunotherapy via STING signaling.
[4] Chemotherapy-induced neuroinflammation is associated with disruptedcolonic and bacterial homeostasis in female mice.
[5] Gut microbiota dependentanti-tumor immunity restricts melanoma growthin Rnf5−/−mice.
[6] Enterococcus hirae and Barnesiella intestinihominis FacilitateCyclophosphamide-Induced Therapeutic Immunomodulatory Effects.
[7] Gut microbiome influences efficacy of PD-1-based immunotherapyagainst epithelial tumors.
[8] Gut microbiome modulates response to anti-PD-1 immunotherapy inmelanoma patients.
[9] The commensal microbiome is associated with anti-PD-1 efficacy inmetastatic melanoma patients.

Claims (8)

1.一种益生菌复合物，包括益生菌和益生元，其特征在于：所述益生菌复合物包含八种益生菌以及三种益生元。
2.根据权利要求1所述的益生菌复合物，其特征在于：所述益生菌与益生元的质量比为2:3。
3.根据权利要求1所述的益生菌复合物，其特征在于：所述益生菌包括鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌(Akk菌)、长双歧杆菌。
4.根据权利要求1所述的益生元，其特征在于：所述益生元包括菊粉、洋车前子粉、低聚果糖、低聚甘露糖。
5.根据权利要求3所述的益生菌复合物，其特征在于：所述鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜黏蛋白阿卡曼氏菌(Akk菌)、长双歧杆菌的质量比为1:1:0.5:1:0.5:0.5:0.5:1。
6.根据权利要求4所述的益生元，其特征在于：所述菊粉、洋车前子粉、低聚果糖、低聚甘露糖的质量比为1:1:1:1的益生菌复合物。
7.根据权利要求1-8中任一权利要求所述的益生菌复合物，其特征在于所述益生菌复合物为粉末。
8.一种如权利要求1-8中任一项所述的益生菌复合物的制备方法，具体步骤如下：步骤一：所有原料进行称量；
步骤二：把称量好的物料进行混合；
步骤三：将混合好物料，进行肠溶胶囊灌装。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114886930A (zh) * 2022-04-04 2022-08-12 博吉弘康(嘉兴)生物医药有限公司 一种具有辅助治疗肿瘤效果的益生菌复合物及其用途

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