CN113728013A - Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物 - Google Patents

Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物 Download PDF

Info

Publication number
CN113728013A
CN113728013A CN202180002753.4A CN202180002753A CN113728013A CN 113728013 A CN113728013 A CN 113728013A CN 202180002753 A CN202180002753 A CN 202180002753A CN 113728013 A CN113728013 A CN 113728013A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gly
pro
leu
conjugate
ser
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202180002753.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113728013B (zh
Inventor
吴心乐
邹海霞
张媛媛
吴博
郭威
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Zhipeptide Biomedical Technology Co ltd
Original Assignee
Beijing Zhipeptide Biomedical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Zhipeptide Biomedical Technology Co ltd filed Critical Beijing Zhipeptide Biomedical Technology Co ltd
Priority to CN202210573902.9A priority Critical patent/CN115322794A/zh
Publication of CN113728013A publication Critical patent/CN113728013A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113728013B publication Critical patent/CN113728013B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/90—Fusion polypeptide containing a motif for post-translational modification
    • C07K2319/915—Fusion polypeptide containing a motif for post-translational modification containing a motif for acylation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本公开提供了包含GLP‑1、多肽接头和FGF21的多肽的缀合物。还提供了包含其的药物组合物和治疗疾病的方法。

Description

GLP-1和FGF21的融合蛋白的缀合物
发明领域
本发明涉及融合蛋白的缀合物、其药物组合物和使用此类物质预防和/或治疗疾病的方法。
背景技术
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的主要生物活性片段是衍生自胰高血糖素原肽的翻译后加工的30或31个氨基酸的肽片段(GLP-1的氨基酸7-36或7-37)。最初的GLP-1产品GLP-1刺激胰岛素合成和分泌，并且已显示预防糖尿病，尤其2型糖尿病中的高血糖症。然而，内源性GLP-1仅具有大致2分钟的半衰期，这导致GLP-1的空腹血浆水平仅为0-15pmol/L。
成纤维细胞生长因子21(FGF 21)，成纤维细胞生长因子(FGF)家族的成员，是若干代谢活性器官中合成的激素，并且调节葡萄糖和脂质稳态。FGF21因在多个靶器官中的多样代谢功能的缘故，其生物学在本质上复杂。已报道FGF21在器官，如肝、脂肪细胞、胰腺、下丘脑和肌肉组织中起作用(Fisher FM,《生理学年度评论(Annu Rev Physiol)》,2016,78:223)。
代谢病症通常与胰岛素抵抗、内脏肥胖、致动脉粥样硬化血脂异常等相关，其在世界范围内构成重大且不断升级的公共卫生和临床挑战。然而，代谢疾病的现有治疗面临如半衰期短和/或功效低的问题。
因此，需要用于治疗代谢疾病的改进的治疗方案。
发明内容
本文提供融合蛋白的缀合物，以及用于治疗/预防代谢病症的药物组合物和使用方法。
在一个方面，本公开提供一种多肽缀合物，其包含与至少一个清除率降低部分(CRM)缀合的融合多肽，
其中所述融合多肽从N端到C端包含GLP-1、多肽接头和FGF21或基本上由其组成；
其中所述融合多肽进一步包含与CRM缀合的至少一个可缀合残基，并且其中第一可缀合残基在FGF21中；并且
其中所述多肽接头的长度为至少0-120个氨基酸残基。
在某些实施方式中，多肽接头的长度为至少4、5、8、10、20、30、40、48、50、60、70、80、90、100、110或120个氨基酸残基。
在某些实施方式中，多肽缀合物不包含抗体片段(例如Fc)。
在某些实施方式中，融合多肽进一步包含第二可缀合残基。
在某些实施方式中，融合多肽包含至多一个可缀合残基或至多两个可缀合残基。
在某些实施方式中，第二可缀合残基存在于GLP-1或多肽接头中。
在某些实施方式中，FGF21包含与SEQ ID NO:36具有至少90％序列同一性的氨基酸序列并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性，和/或GLP-1包含与SEQ ID NO:50具有至少70％序列同一性的氨基酸序列并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性。
在某些实施方式中，GLP-1相对于SEQ ID NO:50包含不超过9、8、7、6、5、4、3个突变并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性，和/或FGF21相对于SEQ ID NO:36包含不超过12、11、10、9、8、7个突变并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性。
在某些实施方式中，FGF21中的第一可缀合残基处于选自相对于SEQ ID NO:36的位置170、171、172、173、174、180、181和182的位置处。
在某些实施方式中，FGF21中的第一可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
在某些实施方式中，可缀合残基选自下组：赖氨酸、半胱氨酸和非天然氨基酸。
在某些实施方式中，FGF21中的第一可缀合残基为赖氨酸。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170K、P171K、S172K、Q173K、G174K、A180K、S181K和ins182K。
在某些实施方式中，FGF21在选自相对于SEQ ID NO:36的K56、K59、K69和K122位置处进一步包含一个或多个突变，所述突变是突变为不可缀合残基。
在某些实施方式中，不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
在某些实施方式中，FGF21包含K56R、K59R、K69R和K122R的突变。
在某些实施方式中，FGF21在选自相对于SEQ ID NO:36的位置121、168、171、180和181的位置处进一步包含一个或多个额外突变，其条件是第一可缀合残基未进一步突变。
在某些实施方式中，FGF21中的一个或多个额外突变选自N121Q、M168L、P171G、A180E和del181S。
在某些实施方式中，FGF21包含至多一个可缀合残基。
在某些实施方式中，FGF21相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：
1)121Q、168L、180K、171G、56R、59R、69R和122R；
2)121Q、168L、171K、56R、59R、69R和122R；
3)121Q、168L、174K、171G、56R、59R、69R和122R；
4)121Q、168L、171K、56R、59R、69R、122R和180E；
5)121Q、168L、174K、171G、56R、59R、69R、122R和180E；
6)121Q、168L、180K、56R、59R、69R和122R；
7)121Q、168L、180K、171G、56R、59R、69R、122R和del181S；
8)121Q、168L、170K、56R、59R、69R和122R；
9)121Q、168L、170K、56R、59R、69R、122R和180E；
10)121Q、168L、170K、171G、56R、59R、69R、122R和180E；
11)121Q、168L、180E、171G、56R、59R、69R、122R和181K；以及
12)121Q、168L、180E、171G、56R、59R、69R、122R和ins182K。
在某些实施方式中，FGF21包含选自SEQ ID NO:37-46和118-119的氨基酸序列。
在某些实施方式中，GLP-1不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。
在某些实施方式中，第二可缀合残基在GLP-1中。
在某些实施方式中，GLP-1中的第二可缀合残基为赖氨酸。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含以下或由以下组成：相对于SEQ IDNO:50的K26或K34。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基通过选自下组的取代引入：相对于SEQID NO:50的E27K和R36K。
在某些实施方式中，GLP-1进一步包含将K26和/或K34取代为不可缀合残基，条件是如果K26或K34为可缀合残基，则其不被取代。
在某些实施方式中，不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
在某些实施方式中，K26的取代选自K26R和K26Q，和/或K34处的取代选自K34R和K34Q。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含半胱氨酸或非天然氨基酸或由其组成。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26、K34、E27和R36。
在某些实施方式中，GLP-1在选自下组的位置处进一步包含一个或多个额外突变：相对于SEQ ID NO:50的A8、G22、K34、R36和H7或其任何组合，其条件是如果K34为可缀合残基，则其未进一步突变。
在某些实施方式中，GLP-1中的一个或多个额外突变选自下组：H7IA、H7IPA、A8G、G22E、K34R和R36G，或其任何组合。
在某些实施方式中，GLP-1包含氨基酸序列X7X8EGTFTSDVSSYLEX22QAAX26X27FIAWLVX34GX36G(SEQ ID NO:51)，
其中：X7为H、咪唑-4-乙酸(IA)或咪唑丙酸(IPA)；X8为A、G、S、V、Aib、T、I或L；X22为G或E；X26为K、R或C；X27为E、K或C；X34为R、K或C，并且X36为K、R、G或C，其条件是GLP-1包含至多一个可缀合残基或不包含可缀合残基。
在某些实施方式中，X7为H，X8为G，X22为E；X26为K或R；X27为E；X34为R，并且X36为G。
在某些实施方式中，GLP-1包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:52、53和115。
在某些实施方式中，多肽接头包含重复序列的一个或多个单元。
在某些实施方式中，重复序列由不超过4、5或6种类型的选自下组的氨基酸残基组成：G、Q、A、E、P和S。
在某些实施方式中，重复序列包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：GaSb、SEQID NO:65(GAQP)、SEQ ID NO:92(GQEP)、SEQ ID NO:93(GEQP)、SEQ ID NO:94(GPQE)、SEQID NO:95(GPEQ)、SEQ ID NO:96(GSEP)、SEQ ID NO:97(GESP)、SEQ ID NO:98(GPSE)、SEQID NO:99(GPES)、SEQ ID NO:100(GQAP)、SEQ ID NO:101(GPAQ)、SEQ ID NO:102(GPQA)、SEQ ID NO:103(GSQP)、SEQ ID NO:104(GASP)、SEQ ID NO:105(GPAS)、SEQ ID NO:106(GPSA)、SEQ ID NO:107(GGGS)、SEQ ID NO:108(GSGS)、SEQ ID NO:57(GGGGS)以及GS，其中a和b独立地为选自1到5的整数。
在某些实施方式中，多肽接头不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。
在某些实施方式中，多肽接头包含选自SEQ ID NO:54-65、109-113、3和47-49的氨基酸序列。
在某些实施方式中，第二可缀合残基在多肽接头中。
在某些实施方式中，多肽接头中的可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
在某些实施方式中，多肽接头中的可缀合残基是多肽接头的最C端残基，或与FGF21的最N端残基相距至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个残基(包括可缀合残基)。
在某些实施方式中，包含第二可缀合残基的多肽接头包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:66-75和89-91。
在某些实施方式中，融合多肽包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4-22、24、26-35、77-88和116-117。
在另一方面，本公开提供一种多肽缀合物，其包含与至少一个清除率降低部分(CRM)缀合的融合多肽，
其中所述融合多肽从N端到C端包含GLP-1、多肽接头和FGF21或基本上由其组成；
其中所述至少一个CRM与所述融合多肽中的至少一个可缀合残基缀合；并且
其中所述多肽接头的长度为至少0-120个氨基酸残基。
在某些实施方式中，多肽接头的长度为至少4、5、8、10、20、24、28、30、40、48、50、60、70、80、90、100、110或120个氨基酸残基。
在某些实施方式中，多肽缀合物不包含抗体片段(例如Fc)。
在某些实施方式中，融合多肽包含至多一个可缀合残基或至多两个可缀合残基。
在某些实施方式中，融合多肽包含与CRM缀合的第一可缀合残基，并且其中第一可缀合残基在FGF21中、在多肽接头中或在GLP-1中。在某些实施方式中，第一可缀合残基在FGF21中。
在某些实施方式中，融合多肽包含第一可缀合残基和第二可缀合残基，其中：
1)两个可缀合残基均存在于多肽接头中，
2)两个可缀合残基均存在于FGF21中，
3)两个可缀合残基均存在于GLP-1中，
4)第一可缀合残基存在于FGF21中并且第二可缀合残基存在于多肽接头中，
5)第一可缀合残基存在于GLP-1中并且第二可缀合残基存在于FGF21中，或
6)第一可缀合残基存在于GLP-1中并且第二可缀合残基存在于多肽接头中。
在某些实施方式中，第一可缀合残基为赖氨酸、半胱氨酸或非天然氨基酸残基，或第一可缀合残基和第二可缀合残基均为赖氨酸、半胱氨酸或非天然氨基酸残基。
在某些实施方式中，FGF21包含与SEQ ID NO:36具有至少90％序列同一性的氨基酸序列并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性，和/或GLP-1包含与SEQ ID NO:50具有至少70％序列同一性的氨基酸序列并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性。
在某些实施方式中，GLP-1相对于SEQ ID NO:50包含不超过9、8、7、6、5、4、3个突变并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性，和/或FGF21相对于SEQ ID NO:36包含不超过12、11、10、9、8、7个突变并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性。
在某些实施方式中，FGF21在选自相对于SEQ ID NO:36的位置121、168、171、180和181的位置处包含一个或多个突变。
在某些实施方式中，FGF21中的一个或多个额外突变选自N121Q、M168L、P171G、A180E和del181S，或其任何组合。
在某些实施方式中，FGF21不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基处于选自相对于SEQ ID NO:36的位置71、170、171、172、173、174、180、181和182的位置处。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基为赖氨酸。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170K、P171K、S172K、Q173K、G174K、A180K、S181K、S71K和ins182K。
在某些实施方式中，FGF21在选自相对于SEQ ID NO:36的K56、K59、K69和K122位置处进一步包含一个或多个突变，所述突变是突变为不可缀合残基。
在某些实施方式中，不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
在某些实施方式中，FGF21包含K56R、K59R、K69R和K122R的突变。
在某些实施方式中，FGF21相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：
1)121Q、168L、180K、171G、56R、59R、69R和122R；
2)121Q、168L、171K、56R、59R、69R和122R；
3)121Q、168L、174K、171G、56R、59R、69R和122R；
4)121Q、168L、171K、56R、59R、69R、122R和180E；
5)121Q、168L、174K、171G、56R、59R、69R、122R和180E；
6)121Q、168L、180K、56R、59R、69R和122R；
7)121Q、168L、180K、171G、56R、59R、69R、122R和del181S；
8)121Q、168L、170K、56R、59R、69R和122R；
9)121Q、168L、170K、56R、59R、69R、122R和180E；
10)121Q、168L、170K、171G、56R、59R、69R、122R和180E；
11)121Q、168L、180E、171G、56R、59R、69R、122R和181K；
12)121Q、168L、180E、171G、56R、59R、69R、122R和ins182K；
13)71K、121Q、168L、56R、59R、69R和122R；
14)71K、121Q、168L、171G、56R、59R、69R和122R；以及
15)71K、121Q、168L、171G、56R、59R、69R、122R、180E。
在某些实施方式中，FGF21包含选自SEQ ID NO:37-46和118-119的氨基酸序列。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基为半胱氨酸。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170C、P171C、S172C、Q173C、G174C、A180C、S181C、S71C和ins182C。
在某些实施方式中，FGF21相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：
1)121Q、168L、171C、180E；
2)121Q、168L、171G、174C、180E；
3)121Q、168L、171G、180C；
4)121Q、168L、171G、180E；
5)71C、121Q、168L、171G、180E以及
6)121Q、168L、180E、171G、ins 182C。
在某些实施方式中，FGF21包含选自SEQ ID NO:136-140和171的氨基酸序列。
在某些实施方式中，GLP-1包含选自下组的位置处的一个或多个突变：相对于SEQID NO:50的A8、G22、K34、R36和H7或其任何组合。
在某些实施方式中，一个或多个突变选自下组：H7IA、H7IPA、A8G、G22E、K34R和R36G，或其任何组合。
在某些实施方式中，GLP-1不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基为赖氨酸。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含以下或由以下组成：相对于SEQ IDNO:50的K26或K34。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基通过选自下组的取代引入：相对于SEQID NO:50的E27K和R36K。在此类实施方式中，GLP-1进一步包含将K26和/或K34取代为不可缀合残基。
在某些实施方式中，不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
在某些实施方式中，K26的取代选自K26R和K26Q，和/或K34处的取代选自K34R和K34Q。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含半胱氨酸或非天然氨基酸或由其组成。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26、K34、E27和R36。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含半胱氨酸或由其组成，并且是通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26C、K34C、E27C和R36C。
在某些实施方式中，GLP-1包含氨基酸序列X7X8EGTFTSDVSSYLEX22QAAX26X27FIAWLVX34GX36G(SEQ ID NO:51)，
其中：X7为H、咪唑-4-乙酸(IA)或咪唑丙酸(IPA)；X8为A、G、S、V、Aib、T、I或L；X22为G或E；X26为K、R或C；X27为E、K或C；X34为R、K或C，并且X36为K、R、G或C。
在某些实施方式中，X7为H，X8为G，X22为E；X26为K或R；X27为E；X34为R，并且X36为G。
在某些实施方式中，GLP-1包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:52、53和115。
在某些实施方式中，GLP-1包含SEQ ID NO:120或52的氨基酸序列。
在某些实施方式中，多肽接头包含重复序列的一个或多个单元(例如3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个)。在某些实施方式中，多肽接头包含两个或更多个不同重复序列。
在某些实施方式中，重复序列由不超过4、5或6种类型的选自下组的氨基酸残基组成：G、Q、A、E、P、T和S。
在某些实施方式中，重复序列包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：GaSb、SEQID NO:65(GAQP)、SEQ ID NO:92(GQEP)、SEQ ID NO:93(GEQP)、SEQ ID NO:94(GPQE)、SEQID NO:95(GPEQ)、SEQ ID NO:96(GSEP)、SEQ ID NO:97(GESP)、SEQ ID NO:98(GPSE)、SEQID NO:99(GPES)、SEQ ID NO:100(GQAP)、SEQ ID NO:101(GPAQ)、SEQ ID NO:102(GPQA)、SEQ ID NO:103(GSQP)、SEQ ID NO:104(GASP)、SEQ ID NO:105(GPAS)、SEQ ID NO:106(GPSA)、SEQ ID NO:107(GGGS)、SEQ ID NO:108(GSGS)、SEQ ID NO:57(GGGGS)、SEQ ID NO:143(GSAPGSPAGSPTGSAPGSPA)以及GS，其中a和b独立地为选自1到5的整数。
在某些实施方式中，多肽接头包含选自SEQ ID NO:54-65、109-113、3、47-49和141-147的氨基酸序列。
在某些实施方式中，多肽接头不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基，或至多两个可缀合残基。
在某些实施方式中，多肽接头中的可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
在某些实施方式中，多肽接头中的可缀合残基是多肽接头的最C端残基，或与FGF21的最N端残基相距至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、40、50、60、70个残基(包括可缀合残基)。
在某些实施方式中，多肽接头中的可缀合残基为赖氨酸，并且多肽接头包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:66-75和89-91。
在某些实施方式中，多肽接头中的可缀合残基为半胱氨酸，并且多肽接头包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:122-132。
在某些实施方式中，多肽接头包含两个可缀合残基并且包含SEQ ID NO:133或134的氨基酸序列。
在某些实施方式中，可缀合残基为赖氨酸，并且融合多肽包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4-22、24、26-35、77-88、116-117。
在某些实施方式中，可缀合残基为半胱氨酸，并且融合多肽包含选自下组的氨基酸序列：148-165、168-170、1、23、25和76。
在本文所公开的任一方面的某些实施方式中，CRM包含*-A-B-C-D-E的结构，其中A、B、C、D和E通过酰胺键互连，并且A的*端连接到多肽复合物上可缀合残基，并且其中：
A选自键、
Figure BDA0003289128460000111
a、b、c和d独立地为0到4的整数，R1为氢或-COOH；
B选自键、
Figure BDA0003289128460000112
e为1到4的整数，
C为键或
Figure BDA0003289128460000113
R2为-CH2SO3H或-COOH，f为1到4的整数，n为1到25的整数；
D选自键、
Figure BDA0003289128460000114
g和h独立地为0或1，并且R3为H或-CH2COOH；
E为具有下式的酸性基团：
Figure BDA0003289128460000115
其中W表示-(CR4R5)l-，
R4和R5独立地选自下组：氢、卤素、氰基、羟基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羟烷基、氨基、氨基烷基、羧基、羧基烷基、烷氧基、芳氧基和羧酰胺，
R6选自羟基或NR7R8；
R7和R8独立地选自下组：氢、烷基、羟基和
Figure BDA0003289128460000121
并且
l为10到20的整数，
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方式中，CRM与融合多肽中的至少一个赖氨酸残基缀合。
在某些实施方式中，A为键，B为键，并且C为键。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000122
并且B为
Figure BDA0003289128460000123
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000124
并且B为键。
在某些实施方式中，CRM包含下式结构：
Figure BDA0003289128460000125
在某些实施方式中，CRM与融合多肽中的至少一个半胱氨酸残基缀合。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000126
并且B为
Figure BDA0003289128460000127
Figure BDA0003289128460000128
在某些实施方式中，CRM包含下式结构：
Figure BDA0003289128460000129
Figure BDA0003289128460000131
在另一方面，本公开提供一种药物组合物，其包含本文所公开的多肽缀合物和药学上可接受的载剂。
在另一方面，本公开提供一种预防或治疗有需要的受试者的代谢病症的方法，其包括施用治疗有效量的本文所公开的多肽缀合物或本文所公开的药物组合物。
在一些实施方式中，代谢病症为糖尿病、肥胖症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、心血管如血脂异常、动脉硬化、酒精性脂肪性肝炎(ASH)、糖尿病肾病、妊娠期糖尿病、代谢综合征如代谢综合征X、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、终末期肝病、肝脂肪变性(脂肪肝)、肝硬化或原发性胆汁性肝硬化(PBC)。
在另一方面，本公开提供一种多核苷酸，其编码如本文所描述的融合多肽。
在另一方面，本公开提供一种载体，其包含本文所公开的多核苷酸。
在另一方面，本公开提供一种宿主细胞，其包含本文所公开的载体。
在另一方面，本公开提供一种用于产生如本文所描述的融合多肽的方法，其包括在允许本文所公开的多核苷酸表达的条件下培养本文所公开的宿主细胞。
在另一方面，本公开提供一种用于产生本文所公开的多肽缀合物的方法，其包括将清除率降低部分与如本文所描述的融合多肽缀合。
在整个本公开中，冠词“一(a/an)”和“所述”在本文中用于指所述冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法对象。举例来说，“融合多肽”意指一个融合多肽或多于一个融合多肽。
在本申请中出现一系列叙述的数值的所有情况下，应理解，任何叙述的数值可以是数值范围的上限或下限。应进一步理解，本发明涵盖所有此类数值范围，即，具有数值上限和数值下限的组合的范围，其中上限和下限中的每一者的数值可以是本文中叙述的任何数值。本文所提供的范围理解为包括范围内的所有值。举例来说，1-10理解为包括所有值1、2、3、4、5、6、7、8、9和10，以及适当时分数值。类似地，由“至少”限定的范围理解为包括提供的下限值和所有更高的数字。
如本文所用，“约”理解为包括在平均值的三个标准差内或在特定技术中的标准公差范围内。在某些实施方式中，约理解为不超过0.5的变化。
冠词“一”在本文中用于指所述冠词的一个或多于一个(即，指至少一个)语法对象。举例来说，“一元件”意指一个元件或多于一个元件。
术语“包括”在本文中用以意指短语“包括但不限于”且可与所述短语互换使用。类似地，“如”在本文中用以意指短语“如但不限于”且可与所述短语互换使用。
除非上下文另外明确指示，否则术语“或”在本文中包含地使用以意指术语“和/或”且可与所述术语互换使用。
除非另外指示，否则如“包含”的术语将理解为开放式术语(即，意指“包括但不限于”)。
术语“基本上由……组成”暗示排除所有、大部分或全部但可忽略量的其它要素，或其允许未明确叙述的要素，但排除在现有技术中发现或影响基本或新颖特性的要素。当多肽称为“基本上由”氨基酸序列“组成”时，这意味着多肽主要由所述氨基酸序列构成，在多肽的一端或两端具有不超过10个(例如不超过6、5、4、3、2或1个)额外氨基酸残基。
附图说明
图1A-1F显示融合蛋白缀合物的体内活性。为了评估融合蛋白缀合物对体重的影响，将10周龄雄性C57BL/6J小鼠每天用30nmol/kg融合蛋白缀合物(如图例中所示)、索马鲁肽(Semaglutide)或媒剂对照皮下给药，持续6、10或14天。每天测量体重。图1A显示在第1天到第11天处理后的体重减轻。图1B显示第11天的体重减轻。与媒剂对照相比：*，p<0.05；***，p<0.001，与索马鲁肽(JP51144)相比：##，p<0.01；###，p<0.001。图1C显示在第1天到第15天的蛋白质处理后的体重减轻。图1D显示第15天的体重减轻。与媒剂对照相比：***，p<0.001；ns，非统计显著；与索马鲁肽(JP51144)相比：#，p<0.05；##，p<0.01；###，p<0.001。图1E显示在第1天到第11天的蛋白质处理后的体重减轻。图1F显示第11天的体重减轻。与媒剂对照相比：***，p<0.001。所有数据表示为平均值和标准误差(SEM)。
图2显示融合蛋白缀合物的药代动力学测量。将每种融合蛋白缀合物皮下注射到C57BL/6小鼠(n＝3/组)中一次，并且在设计的时间点收集血浆样品且通过ELISA方法分析。血浆浓度指示为平均值和标准误差(SEM)。
图3A-3B显示DIO小鼠中的体内功效。为了评估融合蛋白对体重的影响，将17周龄DIO小鼠(高脂肪饮食持续13周的C57BL/6小鼠)每天用不同浓度的化合物皮下给药，持续21天。图3A显示10nmol/kg下的体重减轻。图3B显示30nmol/kg下对体重的影响。数据表示为平均值和标准误差(SEM)。对于每个处理组，n＝5。
图4A-4F显示DIO小鼠中的体内功效。为了评估化合物对体重、血糖、血浆胰岛素和血浆甘油三酯的体内影响，将17周龄DIO小鼠(高脂肪饮食持续13周的C57BL/6小鼠)每天用不同浓度的化合物皮下给药，持续21天。图4A显示蛋白质处理后的体重减轻。与媒剂对照相比：*，p<0.05，**，p<0.01***，p<0.001，****，p<0.0001；与索马鲁肽(JP51144)相比：#，p<0.05。图4B显示第22天的体重变化。图4C显示处理后的空腹血糖变化。图4D显示第22天的终末血浆中的胰岛素浓度。图4E显示第22天的终末血浆中的血浆甘油三酯浓度。图4F显示第22天的肝甘油三酯水平。数据表示为平均值和标准误差(SEM)。对于每个处理组，n＝5。
图5显示本公开中公开的所有序列。
具体实施方式
以下对本发明的描述仅旨在说明本发明的各种实施方式。如此，所讨论的具体修改不应被解释为对本发明范围的限制。对本领域的技术人员将显而易见的是，可以在不脱离本发明的范围的情况下作出各种等效物、变化和修改，并且应理解，此类等效实施方式将包括在本文中。本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利和专利申请，均以全文引用的方式并入本文中。
定义
“序列同一性百分比(％)”定义为在比对序列并在必要时引入空位以实现最大数目的相同氨基酸(或核酸)之后，候选序列中的氨基酸(或核酸)残基与参考序列中的氨基酸(或核酸)残基相同的百分比。换句话说，氨基酸序列(或核酸序列)的序列同一性百分比(％)可以通过将相对于其比较的参考序列相同的氨基酸残基(或碱基)的数目除以候选序列或参考序列中氨基酸残基(或碱基)的总数(以较短者为准)来计算。氨基酸残基的保守取代不视为相同残基。出于确定氨基酸(或核酸)序列同一性百分比的目的进行的比对可例如使用可公开获得的工具，如BLASTN、BLASTp(可在美国国家生物技术信息中心(U.S.National Center for Biotechnology Information，NCBI)的网站上获得，另参见Altschul S.F.等人,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》,215:403-410(1990)；Stephen F.等人,《核酸研究(NucleicAcids Res.)》,25:3389-3402(1997))、ClustalW2(可在欧洲生物信息研究所(European Bioinformatics Institute)网站上获得，另参见Higgins D.G.等人,《酶学方法(Methods in Enzymology)》,266:383-402(1996)；Larkin M.A.等人,《生物信息学(Bioinformatics)》(英格兰牛津(Oxford,England)),23(21):2947-8(2007))和ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件实现。本领域的技术人员可使用所述工具提供的默认参数，或可自定义适于比对的参数，例如通过选择合适算法进行。
关于氨基酸序列的“保守取代”是指用具有相似生理化学特性的侧链的不同氨基酸残基置换氨基酸残基。举例来说，可在具有疏水性侧链的氨基酸残基(例如Met、Ala、Val、Leu和Ile)间、具有中性亲水性侧链的残基(例如Cys、Ser、Thr、Asn和Gln)间、具有酸性侧链的残基(例如Asp、Glu)间、具有碱性侧链的氨基酸(例如His、Lys和Arg)间或具有芳香族侧链的残基(例如Trp、Tyr和Phe)间进行保守取代。如本领域中已知，保守取代通常不会引起蛋白质构象结构的显著变化，并且因此可保留蛋白质的生物活性。
如本文所用，术语“功能形式”是指亲本分子的不同形式(如变体、片段、融合体、衍生物和模拟物)，其尽管在氨基酸序列或化学结构中具有差异，但仍保留亲本分子的基本生物活性。如本文所用，表述“保留基本生物活性”意指展现亲本分子的生物活性的至少一部分(例如不小于约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％)或全部。亲本多肽的功能形式可包括天然存在的变体形式和非天然存在的形式，如通过重组方法或化学合成获得的那些。功能形式可含有非天然氨基酸残基。
如本文所用，术语“变体”是指与亲本多肽具有至少70％序列同一性并且保留亲本多肽的至少部分功能的多肽。变体与亲本多肽的不同之处可在于一个或多个氨基酸残基。举例来说，变体可具有亲本多肽的一个更多氨基酸残基的取代、添加、缺失、插入或截短。
如本文所用，术语“片段”是指任何长度的亲本多肽的部分序列。片段仍可保留亲本多肽的至少部分功能。
如本文所用，术语“衍生物”是指化学修饰的多肽或融合多肽，其中一个或多个明确限定的取代基已共价连接到多肽或融合多肽的一个或多个特定氨基酸残基。示范性化学修饰可以是例如一个或多个氨基酸的烷基化、酰化、酯化、酰胺化、磷酸化、糖基化、标记、甲基化或与一个或多个部分缀合。
如本文所用，术语“模拟物”是指充当氨基酸、肽、多肽或融合多肽的替代物的分子结构。举例来说，如本文所用，氨基酸模拟物可以是合成结构(已知或未知)，其可为或可不为氨基酸，但保留亲本氨基酸的功能特征，同时氨基酸模拟物的结构不同于亲本氨基酸的结构。实施例包括酰胺的甲基丙烯酰基或丙烯酰基衍生物、β-、γ-、δ-亚氨基酸(如哌啶-4-甲酸)等。
如本文所用，病况的“治疗(treating/treatment)”包括预防或减轻病况，减缓病况的发作或发展速率，降低罹患病况的风险，预防或延迟与病况相关的症状的发展，减少或结束与病况相关的症状，产生病况的完全或部分消退，治愈病况或其某一组合。
如本文所用，术语“载体”是指可以将编码蛋白质的多核苷酸可操作地插入其中以引起所述蛋白质表达的媒介物。载体可用于转化、转导或转染宿主细胞，以使其携带的遗传元件在宿主细胞内表达。载体的实施例包括质粒；噬菌粒；粘粒；人工染色体，如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1衍生的人工染色体(PAC)；噬菌体，如λ噬菌体或M13噬菌体；和动物病毒。用作载体的动物病毒的类别包括逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒和乳多空病毒(例如SV40)。载体可以含有多种用于控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、可选择元件和报告基因。另外，载体可以含有复制起点。载体还可以包括有助于其进入细胞的材料，包括但不限于病毒颗粒、脂质体或蛋白质包膜。载体可以是表达载体或克隆载体。本公开提供载体(例如表达载体)，其含有本文所提供的编码融合多肽的核酸序列、可操作地连接到所述核酸序列的至少一个启动子(例如SV40、CMV、EF-1α)和至少一个选择标记。载体的实施例包括但不限于逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳多空病毒(例如SV40)、λ噬菌体和M13噬菌体、质粒pcDNA3.3、pMD18-T、pOptivec、pCMV、pEGFP、pIRES、pQD-Hyg-GSeu、pALTER、pBAD、pcDNA、pCal、pL、pET、pGEMEX、pGEX、pCI、pEGFT、pSV2、pFUSE、pVITRO、pVIVO、pMAL、pMONO、pSELECT、pUNO、pDUO、Psg5L、pBABE、pWPXL、pBI、p15TV-L、pPro18、pTD、pRS10、pLexA、pACT2.2、pCMV-SCRIPT.RTM.、pCDM8、pCDNA1.1/amp、pcDNA3.1、pRc/RSV、PCR 2.1、pEF-1、pFB、pSG5、pXT1、pCDEF3、pSVSPORT、pEF-Bos等。
如本文所用，短语“宿主细胞”是指已将外源多核苷酸和/或载体引入其中的细胞。
术语“药学上可接受的”指示，指定载剂、媒剂、稀释剂、赋形剂和/或盐一般在化学上和/或物理上与构成配制物的其它成分相容，并且在生理上与其接受者相容。
如本文所用，术语“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”是指需要诊断、预后、改善、预防和/或治疗疾病或病症的人或非人动物，包括哺乳动物或灵长类动物。哺乳动物受试者包括人、家畜、农畜，以及动物园、体育或玩赏动物，如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、猪、牛、熊等。
在一个方面，本公开提供一种多肽缀合物，其包含与至少一个清除率降低部分(CRM)缀合的融合多肽，其中融合多肽从N端到C端包含GLP-1、多肽接头和FGF21或基本上由其组成，其中至少一个CRM与融合多肽中的至少一个可缀合残基缀合。在某些实施方式中，多肽接头的长度为至少0-120个氨基酸残基。
在另一方面，本公开提供一种多肽缀合物，其包含与至少一个清除率降低部分(CRM)缀合的融合多肽，其中融合多肽从N端到C端包含GLP-1、多肽接头和FGF21或基本上由其组成；其中融合多肽进一步包含与CRM缀合的至少一个可缀合残基，并且其中第一可缀合残基在FGF21中；并且其中多肽接头的长度为至少0-120个氨基酸残基。
融合多肽
当用于氨基酸序列(例如肽、多肽或蛋白质)时，术语“融合(fusion/fused)”是指例如通过化学键结或重组方式将两个或更多个氨基酸序列组合成不天然存在的单一氨基酸序列。融合氨基酸序列可以通过两个编码多核苷酸序列的遗传重组产生，并且可以通过将含有重组多核苷酸的构建体引入到宿主细胞中的方法表达。
术语“蛋白质”、“肽”和“多肽”在本文中可互换使用，并且是指通过如肽键的共价键连接的氨基酸残基的聚合物。如本文所提供的蛋白质或多肽可包含天然存在的氨基酸残基或非天然氨基酸残基，或两者。本文所提供的多肽、肽和蛋白质可包含任何合适长度的氨基酸残基，例如长度为至少3、4、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或更多个氨基酸残基。
如本文所用，术语“天然存在的”氨基酸残基是指在天然蛋白质或肽中发现的氨基酸残基，如果其结构允许D和L立体异构体形式，则均呈此类立体异构形式。天然存在的氨基酸残基的实施例包括但不限于20种标准氨基酸，包括甘氨酸(Gly或G)、丙氨酸(Ala或A)、缬氨酸(Val或V)、亮氨酸(Leu或L)、异亮氨酸(Ile或I)、丝氨酸(Ser或S)、半胱氨酸(Cys或C)、苏氨酸(Thr或T)、蛋氨酸(Met或M)、脯氨酸(Pro或P)、苯丙氨酸(Phe或F)、酪氨酸(Tyr或Y)、色氨酸(Trp或W)、组氨酸(His或H)、赖氨酸(Lys或K)、精氨酸(Arg或R)、天冬氨酸(Asp或D)、谷氨酸(Glu或E)、天冬酰胺(Asn或N)和谷氨酰胺(Gln或Q)，以及其天然类似物，如刀豆氨酸、吡咯赖氨酸(PYL)、硒代半胱氨酸、吡咯啉-羧基-赖氨酸(PCL)、肌氨酸、β-丙氨酸、磷酸丝氨酸、γ-羧基谷氨酸和鸟氨酸。呈D立体异构体的天然存在的氨基酸残基的实施例包括例如D-天冬氨酸、D-丝氨酸、D-半胱氨酸、D-丙氨酸、D-谷氨酸等。
“氨基酸类似物”是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(即，与氢、羧基、氨基以及R基团结合的α碳)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基(例如正亮氨酸)或修饰的肽主链，但将保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。
如本文所用，“非天然”氨基酸残基是指未在自然界中发现的任何氨基酸残基，包括但不限于修饰的氨基酸残基和/或氨基酸模拟物，氨基酸模拟物不是已知天然存在的氨基酸中的一者，但以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。修饰的氨基酸残基或模拟物可通过添加化学实体(如碳水化合物基团、磷酸基、法呢基、异法呢基、脂肪酸基和用于缀合的接头)、官能化或其它修饰等来产生。非天然氨基酸还可指通过化学合成制造的氨基酸。示范性非天然氨基酸包括但不限于2-氨基异丁酸(Aib)、咪唑-4-乙酸(IA)、咪唑丙酸(IPA)、α-氨基丁酸(Abu)、叔丁基甘氨酸(Tle)、3-氨基甲基苯甲酸、邻氨基苯甲酸、去氨基组氨酸(缩写为DesaminoHis，别名咪唑丙酸，缩写为lmpr)、如β-丙氨酸的氨基酸β类似物、2-氨基-组氨酸、β-羟基-组氨酸、高组氨酸、Nα-乙酰-组氨酸、α-氟-甲基-组氨酸、α-甲基-组氨酸、α,α-二甲基-谷氨酸、间CF3-苯丙氨酸、α,β-二氨基丙酸(缩写为Dap)、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸、(1-氨基环丙基)羧酸、(1-氨基环丁基)-羧酸、(1-氨基环戊基)羧酸、(1-氨基环己基)羧酸、(1-氨基环庚基)羧酸以及(1-氨基环辛基)羧酸。
将非天然氨基酸引入到融合多肽、多肽片段和/或多肽复合物中可通过以下中描述的技术实现：Wang等人,《科学(Science)》292:498-500,2001；Deiters等人,《美国化学会志(JAm Chem Soc)》125:11782-11783,2003；Wang和Schultz,《科学》301:964-967,2003；Zhang等人,《科学》303:371-373,2004或美国专利第7,083,970号。简单来说，这些表达系统中的一些涉及定点诱变以将终止密码子(如琥珀(UAG)、赭石(UAA)和蛋白石(UGA)密码子)引入到编码本公开的融合多肽的开放阅读框中。也可将其它密码子，如四碱基密码子(例如AGGA、AGGU、CGGU、CGCU、CGAU、CCCU、CUCU、CUAU和GGGU)、五碱基密码子、六碱基密码子等引入到非天然氨基酸的表达系统中。然后将此类表达载体引入到可利用对引入的终止密码子或其它密码子具特异性且携带所选非天然氨基酸的tRNA的宿主中。
GLP-1
如本文所用，术语“胰高血糖素样肽-1”或“GLP-1”旨在广泛涵盖天然GLP-1肽和其所有功能形式，如其功能变体、片段、融合体、衍生物和模拟物。
如本文所用，术语“天然GLP-1肽”是指天然人胰高血糖素样肽-1(GLP-1(7-37))，其序列在SEQ ID NO:50中列出。GLP-1中的残基编号参考SEQ ID NO:50的序列，其以位置7处的His开始并且以位置37处的Gly结束。
天然GLP-1肽的功能形式能够以与天然GLP-1肽的水平相当，或不低于其约20％(或不低于30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％)的水平激活GLP-1受体。GLP-1受体的激活典型地启动信号转导通路，产生促胰岛素作用或如本领域中已知的其它生理效应。GLP-1肽的许多功能形式是本领域中已知的，例如但不限于利拉鲁肽(liraglutide)、索马鲁肽(semaglutide)、杜拉鲁肽(dulaglutide)、阿必鲁肽(albiglutide)，以及WO2000055203A1、WO 98/08871、WO 2006/097537、WO2007139589A1、WO1998019698A1、WO2001098331A2、WO2003040309A2、WO2005000892A2、WO2015000942A1、WO2016083499A1中所公开的那些，所述专利的公开内容全文并入本文中。
在某些实施方式中，本文所提供的GLP-1包含与SEQ ID NO:50具有至少70％(例如至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％)序列同一性的氨基酸序列，并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性。
在某些实施方式中，GLP-1相对于SEQ ID NO:50包含不超过9、8、7、6、5、4、3或2个取代，并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性。在某些实施方式中，GLP-1相对于SEQ IDNO:50包含至少2、3、4、5、6、7、8或9个取代，并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性。
在某些实施方式中，GLP-1进一步包含一个或多个突变。本领域的普通技术人员应了解，可在本文所描述的任何多肽的序列中进行各种氨基酸取代，例如保守氨基酸取代，而不必定降低其活性。氨基酸取代的实施例包括将L-氨基酸取代为其对应的D-氨基酸，将半胱氨酸取代为高半胱氨酸或具有含硫醇侧链的其它非天然氨基酸，将赖氨酸取代为高赖氨酸、二氨基丁酸、二氨基丙酸、鸟氨酸或具有含氨基侧链的其它非天然氨基酸，或将丙氨酸取代为正缬氨酸等。
已将各种取代引入到天然GLP-1肽中，并且已显示所述取代能够保留或甚至改善其生物活性。在某些实施方式中，GLP-1包含选自下组的位置处的一个或多个突变：相对于SEQ ID NO:50的A8、G22、K34、R36和H7，和或其任何组合。举例来说，据信A8处的取代适用于防止残基处的DPP4酶促裂解，G22处的取代合乎改善活性和溶解度的需要，并且R36处的取代适用于降低免疫原性。这些位置处的取代的实施例包括但不限于H7IA、H71IPA、A8G、A8S、A8V、A8Aib、A8T、A8I、A8L、G22E、K34R、R36G或其任何组合，以及美国专利第8,273,854号中所描述的取代，所述专利全文并入本文中。在某些实施方式中，一个或多个额外取代包含保守取代。
在某些实施方式中，GLP-1包含A8的取代，其选自下组：A8G、A8S、A8V、A8Aib、A8T和A8L。在某些实施方式中，GLP-1包含G22E的取代。在某些实施方式中，GLP-1包含R36G的取代。在某些实施方式中，GLP-1包含H7的取代为H7IA或H7IPA。在某些实施方式中，GLP-1包含K34的取代，其为K34R。
在某些实施方式中，GLP-1包含选自下组的一个或多个取代或由其组成：A8G、K26R、K34R、G22E和R36G。在某些实施方式中，GLP-1包含选自下组的一个或多个取代或由其组成：A8G、K34R、G22E和R36G。
FGF21
如本文所用，术语“成纤维细胞生长因子21”或“FGF21”旨在广泛涵盖天然人FGF21以及其功能变体、片段、融合体、衍生物或模拟物。天然人FGF21由209个氨基酸残基组成(Uniprot数据库，登录号Q9NSA1)，其中氨基酸残基1-28为信号多肽并且氨基酸残基29-209为181个残基的成熟多肽。本公开中所提供的FGF21可为成熟多肽功能或其功能变体、片段、融合体、衍生物或模拟物。FGF21的成熟多肽以SEQ ID NO:36包括在本文中。如本文所用，FGF21中的残基编号参考SEQ ID NO:36的序列，其以位置1处的His和位置181处的Ser开始。
FGF21的成熟多肽的功能形式能够以与天然人FGF21的成熟多肽的水平相当，或不低于其约20％(或不低于30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％)的水平激活FGF21受体。FGF21受体的激活可引起生物活性，例如激活脂肪细胞中葡萄糖摄取的能力、降低血糖和甘油三酯水平的能力或减轻体重的能力(Tezze C等人,《生理学前沿(Front Physiol.)》2019,10:419)。FGF21的成熟多肽的许多功能形式是本领域中已知的，例如但不限于WO2019043457A2、WO2018088838A1、WO2018039081A1、WO2017220706A1、WO2017180988A2、WO2017116207A1、WO2017093465、WO2017059371A1、WO2016102562A1、WO2016065326A、WO2013173158A1、WO2013052311A1、WO2013033452A2、WO2012066075A1、WO2012059873A2、WO2012010553A1、WO2011140086A2、WO2010084169A2、WO2010065439A1、WO2008121563A2、WO2006028595A2、WO2006028714A1、WO2005113606A2、WO2016102562A中所公开的那些，所述专利的公开内容全文并入本文中。
在某些实施方式中，本文所提供的FGF21包含与SEQ ID NO:36具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性。
在某些实施方式中，FGF21相对于SEQ ID NO:36包含不超过12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个取代，并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性。在某些实施方式中，FGF21相对于SEQ ID NO:36包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个取代，并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性。
在某些实施方式中，FGF21包含一个或多个突变。在某些实施方式中，一个或多个突变包含保守取代。在某些实施方式中，一个或多个突变在选自相对于SEQ ID NO:36的位置121、168、171、180和181的位置处。在某些实施方式中，FGF21中的一个或多个突变选自N121Q、M168L、P171G、A180E和del181S。如本文所用，“del181S”是指在FGF21的181位置处的丝氨酸缺失。
接头
如本文所用，术语“多肽接头”可以是能够与至少两个待连接的实体(例如多肽)反应，从而连接实体形成一个分子，或维持实体足够紧密以保持缔合状态的任何合适多肽。多肽接头可整合在连接得到的分子或结构中。在某些实施方式中，多肽接头将GLP-1和FGF21分开，而基本上不干扰GLP-1和FGF21各自的生物活性。多肽接头可由通过肽键连接在一起的氨基酸残基构成。多肽接头可进一步包含一个或多个非天然氨基酸。
在某些实施方式中，多肽接头的长度为至少4、8、10、20、24、28、30、40、48、50、60、70、80、90、100、110、120个或更多个氨基酸残基。在某些实施方式中，多肽接头的长度为至多4、8、10、20、24、28、30、40、48、50、60、70、80、90、100、110或120个氨基酸残基。在某些实施方式中，多肽接头的长度为0-120、1-120、4-120、8-120、10-120、20-120、20-110、20-100、20-90或20-80个氨基酸残基。不希望受任何理论束缚，据信多肽接头的合适长度可进一步改善所连接的多肽分子的生物活性或稳定性或药代动力学参数。
可使用任何合适的多肽接头。举例来说，多肽接头可包含选自以下的氨基酸残基或由其组成：氨基酸甘氨酸(G)、丝氨酸(S)、丙氨酸(A)、蛋氨酸(M)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、半胱氨酸(C)、脯氨酸(P)、谷氨酸(E)、苏氨酸(T)和赖氨酸(K)。在一些实施方式中，多肽接头可由大部分非空间位阻的氨基酸，如甘氨酸和丙氨酸构成。
在一些实施方式中，接头为聚甘氨酸、聚丙氨酸、甘氨酸和丙氨酸的组合(如聚(Gly-Ala))或甘氨酸和丝氨酸的组合(如聚(Gly-Ser))。
在某些实施方式中，多肽接头包含重复序列的一个或多个重复或由其组成。在某些实施方式中，多肽接头包含以下或由以下组成：重复序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个重复，或在由以上所列的任何两个数字限定的任何数值范围内。
在某些实施方式中，重复序列包含不超过4、5或6种类型的选自下组的氨基酸残基或由其组成：G、Q、A、E、P、T和S。在某些实施方式中，重复序列包含Q。在某些实施方式中，重复序列由不超过3、4或5种类型的选自下组的氨基酸残基组成：G、A、S、Q和P。在某些实施方式中，重复序列由G、A、Q和P组成。在某些实施方式中，重复序列由G、A、E和P组成。在某些实施方式中，重复序列由G、A、S和P组成。在某些实施方式中，重复序列不包含带负电的氨基酸残基。
在某些实施方式中，重复序列包含氨基酸残基G和S或基本上由其组成。在某些实施方式中，重复序列包含选自以下的氨基酸序列或基本上由其组成：GS、GGSG、GaSb、SaGb，其中a和b独立地选自1到5的整数。在某些实施方式中，多肽接头包含以下或基本上由以下组成：(GS)n、(GGSG)n、(GaSb)n、(SaGb)n，其中a和b独立地选自1到5的整数，并且n选自1到60的整数。
在某些实施方式中，重复序列包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：GaSb、SEQID NO:65(GAQP)、SEQ ID NO:92(GQEP)、SEQ ID NO:93(GEQP)、SEQ ID NO:94(GPQE)、SEQID NO:95(GPEQ)、SEQ ID NO:96(GSEP)、SEQ ID NO:97(GESP)、SEQ ID NO:98(GPSE)、SEQID NO:99(GPES)、SEQ ID NO:100(GQAP)、SEQ ID NO:101(GPAQ)、SEQ ID NO:102(GPQA)、SEQ ID NO:103(GSQP)、SEQ ID NO:104(GASP)、SEQ ID NO:105(GPAS)、SEQ ID NO:106(GPSA)、SEQ ID NO:107(GGGS)、SEQ ID NO:108(GSGS)、SEQ ID NO:57(GGGGS)、SEQ ID NO:143(GSAPGSPAGSPTGSAPGSPA)以及GS，其中a和b独立地为选自1到5的整数。
在某些实施方式中，多肽接头包含选自下组的序列或由其组成：SEQ ID NO:54-65、109-113、3、47-49和141-147。
在某些实施方式中，多肽接头包含多于一个重复序列或由其组成。举例来说，多肽接头包含2、3或4个不同重复序列或由其组成。在某些实施方式中，多肽接头包含不同重复序列的顺序或串联重复或由其组成。每个重复序列的重复数可独立地选自下组：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多。
在某些实施方式中，融合多肽从N端到C端包含GLP-1、多肽接头和FGF21。在某些实施方式中，融合多肽是单链多肽。单链多肽仍可在分子内具有链内键，但不包括由一个或多个链间键形成的复合物。
在某些实施方式中，融合多肽从N端到C端基本上由GLP-1、多肽接头和FGF21组成。
在某些实施方式中，多肽缀合物不包含抗体片段(例如Fc)。抗体为具有特异性结合特定抗原的能力的免疫球蛋白分子。抗体包含两个功能独立的部分，结合抗原的称为“Fab”的可变结构域，和称为“Fc”的恒定结构域，其包含非抗原结合片段并且与如补体激活和由吞噬细胞攻击的效应功能有关。Fc结构域具有长血清半衰期。
可缀合残基
本文所提供的融合多肽进一步包含与CRM缀合的至少一个可缀合残基。
如本文所用，术语“可缀合残基”是指融合多肽内特定位置处的氨基酸残基，其不仅具有能够与化学部分化学或酶促缀合的官能团，而且其在融合多肽中的位置允许其易于在所述特定官能团的缀合反应中进行此类缀合。如本文所用，“缀合”是指将两个分子接合在一起以形成一个物理实体的反应。举例来说，可在缀合中形成连接两个分子的共价键。
技术人员将理解，残基是否为可缀合残基将取决于给定缀合反应和/或待缀合的官能团。如果待缀合的官能团是氨基和/或缀合反应对氨基具有特异性或选择性，则半胱氨酸残基(即在其侧链中不具有氨基官能团)将不为可缀合基团，无关于其在多肽中的位置，而特定位置处的赖氨酸残基可为可缀合基团。类似地，如果待缀合的官能团是硫醇基和/或缀合反应对硫醇基具有特异性或选择性，则赖氨酸(即在其侧链中不具有硫醇基官能团)将不为可缀合残基，无关于其位置，而未形成二硫键(无论是链内键还是链间键)的未配对半胱氨酸残基可为可缀合残基。
在某些实施方式中，融合多肽包含对氨基或胺具有特异性或选择性的缀合反应(例如酰化反应)的可缀合残基。在某些实施方式中，融合多肽包含对硫醇基具有特异性或选择性的缀合反应(例如顺丁烯二酰亚胺反应或用于二硫键形成的反应)的可缀合残基。
当提及氨基酸残基时，表述“可缀合”打算意指融合多肽中的特定位置处的残基对于缀合足够可接近。举例来说，作为二硫桥键的一部分的半胱氨酸残基在本公开中不是可缀合残基。
可缀合残基可以是天然氨基酸残基、非天然氨基酸残基、修饰的氨基酸残基或氨基酸模拟物。可缀合残基的实施例包括但不限于赖氨酸、半胱氨酸或非天然氨基酸残基。
本文所提供的融合多肽包含与CRM缀合的至少一个可缀合残基。在某些实施方式中，融合多肽包含至多一个可缀合残基。在某些实施方式中，融合多肽包含至多两个可缀合残基。
在某些实施方式中，融合多肽包含与CRM缀合的第一可缀合残基。在某些实施方式中，第一可缀合残基在FGF21中、在多肽接头中或在GLP-1中。在某些实施方式中，第一可缀合残基在FGF21中。
在某些实施方式中，融合多肽包含第一可缀合残基和第二可缀合残基。在某些实施方式中，第一和第二可缀合残基都存在于融合多肽的相同构成组分中。举例来说，第一和第二可缀合残基都存在于FGF21中、多肽接头中或GLP-1中。在某些实施方式中，第一和第二可缀合残基存在于融合多肽的不同构成组分中。举例来说，第一可缀合残基存在于FGF21中而第二可缀合残基存在于多肽接头中，第一可缀合残基存在于GLP-1中而第二可缀合残基存在于FGF21中，或第一可缀合残基存在于GLP-1中而第二可缀合残基存在于多肽接头中。本文所用的术语“第一”和“第二”仅用于指定两个可缀合残基中的一者，并且其决不暗示在第一和第二可缀合残基之间按任何次序进行缀合。
在某些实施方式中，可缀合残基可以是天然FGF21序列中发现的天然存在的残基，或天然GLP-1序列中发现的天然存在的残基。在某些实施方式中，此类天然存在的残基是天然存在的赖氨酸残基。
在某些实施方式中，当天然GLP-1或天然FGF21具有多于一个天然存在的可缀合残基时，可例如通过突变去除一个或多个此类天然存在的可缀合残基。举例来说，天然GLP-1具有两个天然存在的赖氨酸残基，并且天然FGF21具有四个天然存在的赖氨酸残基，并且其中的至少一些或其全部可突变，而不显著降低融合多肽的生物活性。
在某些实施方式中，可缀合残基可替代地为引入的残基，例如通过将不可缀合残基取代为可缀合残基，或通过插入可缀合残基。术语“不可缀合残基”是指融合多肽中对于给定官能团和/或给定缀合反应而言并不是可缀合残基的氨基酸残基。举例来说，当赖氨酸为可缀合残基时，如果任何氨基酸残基不含氨基和/或在对氨基具有特异性或选择性的缀合反应中不反应，则其可视为不可缀合残基。
在某些实施方式中，此类引入的可缀合残基为赖氨酸残基。在某些实施方式中，此类引入的可缀合残基为半胱氨酸残基。
在某些实施方式中，第一和第二可缀合残基两者具有相同化学属性。举例来说，第一和第二可缀合残基都是赖氨酸、都是半胱氨酸或都是非天然氨基酸残基。
FGF21中的可缀合残基
在某些实施方式中，FGF21包含第一可缀合残基。在某些实施方式中，FGF21不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基是引入的残基，任选地是通过取代或插入。此类引入的可缀合残基可引入到不显著降低FGF21的生物活性的位置。在某些实施方式中，FGF21中引入的可缀合残基为FGF21的C端区，例如在与最C端残基相距不超过15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基的位置处，或相对于SEQ ID NO:36的最C端残基的位置处，或在从相对于SEQ ID NO:36的最C端残基延伸的位置处。FGF21的C端延伸可参考SEQ ID NO:36通过从作为SEQ ID NO:36中的最C端残基的第181残基继续编号来描述。相对于SEQ ID NO:36的位置182意指从SEQ ID NO:36的第181残基，即从C端延伸的第一残基。类似地，位置183意指从C端延伸的第二残基，以此类推。举例来说，相对于SEQ ID NO:36的“ins182K”是指在相对于SEQ ID NO:36的位置182处连接或插入的赖氨酸残基。在某些实施方式中，FGF21中引入的可缀合残基选自相对于SEQ ID NO:36的位置170、171、172、173、174、180、181、71和182处。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基包含赖氨酸或由其组成。在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170K、P171K、S172K、Q173K、G174K、A180K、S181K、S71K和ins182K。
在某些实施方式中，FGF21中天然存在的赖氨酸残基已去除，通过例如用不可缀合残基取代天然存在的赖氨酸残基或缺失天然存在的赖氨酸残基，或防止天然存在的赖氨酸残基的侧链在给定缀合反应中反应的任何其它手段。
在某些实施方式中，FGF21在选自相对于SEQ ID NO:36的K56、K59、K69和K122位置处包含一个或多个突变，所述突变是突变为不可缀合残基。在某些实施方式中，不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。在某些实施方式中，FGF21包含K56的取代，其选自下组：K56R、K56Q、K56A、K56G、K56H、K56S和K56T。在某些实施方式中，FGF21包含或进一步包含K59的取代，其选自下组：K59R、K59Q、K59A、K59G、K59H、K59S和K59T。在某些实施方式中，FGF21包含或进一步包含K69的取代，其选自K69R、K69Q、K69A、K69G、K69H、K69S和K69T。在某些实施方式中，FGF21包含或进一步包含K122的取代，其选自K122R、K122Q、K122A、K122G、K122H、K122S和K122T。在某些实施方式中，FGF21包含K56R、K59R、K69R和K122R的突变。
在某些实施方式中，FGF21相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：
1)N121Q、M168L、A180K、P171G、K56R、K59R、K69R和K122R；
2)N121Q、M168L、P171K、K56R、K59R、K69R和K122R；
3)N121Q、M168L、G174K、P171G、K56R、K59R、K69R和K122R；
4)N121Q、M168L、P171K、K56R、K59R、K69R、K122R和A180E；
5)N121Q、M168L、G174K、P171G、K56R、K59R、K69R、K122R和A180E；
6)N121Q、M168L、A180K、K56R、K59R、K69R和K122R；
7)N121Q、M168L、A180K、P171G、K56R、K59R、K69R、K122R和del181S；
8)N121Q、M168L、G170K、K56R、K59R、K69R和K122R；
9)N121Q、M168L、G170K、K56R、K59R、K69R、K122R和A180E；
10)N121Q、M168L、G170K、P171G、K56R、K59R、K69R、K122R和A180E；
11)N121Q、M168L、A180E、P171G、K56R、K59R、K69R、K122R和S181K；
12)N121Q、M168L、A180E、P171G、K56R、K59R、K69R、K122R和ins182K；
13)71K、121Q、168L、56R、59R、69R和122R；
14)71K、121Q、168L、171G、56R、59R、69R和122R；以及
15)71K、121Q、168L、171G、56R、59R、69R、122R、180E。
在某些实施方式中，FGF21包含选自下组的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:37-46和118-119。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基包含半胱氨酸或由其组成。
不希望受任何理论束缚，但据信FGF21中相对于SEQ ID NO:36的位置75和93处的半胱氨酸残基为不可缀合残基。两个半胱氨酸残基在成熟FGF21中形成分子内二硫键，并且因此对于缀合反应中缀合剂不可接近。因此，仅在75和93位置处具有半胱氨酸残基的FGF21视为不包含硫醇基缀合反应的可缀合残基。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170C、P171C、S172C、Q173C、G174C、A180C、S181C、S71C和ins182C。
在某些实施方式中，FGF21中的可缀合残基包含非天然氨基酸或由其组成。非天然氨基酸可含有多种官能团或反应性基团，其可提供额外功能和/或反应性。有益于将部分缀合到本公开的融合多肽的目的的特定非天然氨基酸包括带具有叠氮、炔烃、烯烃、环炔烃或卤基的侧链的非天然氨基酸。
在某些实施方式中，FGF21相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：
1)121Q、168L、171C、180E；
2)121Q、168L、171G、174C、180E；
3)121Q、168L、171G、180C；
4)121Q、168L、171G、180E；
5)S71C、121Q、168L、171G、180E；以及
6)121Q、168L、180E、171G、ins 182C。
在某些实施方式中，FGF21不包含可缀合残基。在某些实施方式中，FGF21包含相对于SEQ ID NO:36的突变121Q、168L、171G和180E。
在某些实施方式中，FGF21包含选自下组的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:136-140和171。
GLP-1中的可缀合残基
在某些实施方式中，GLP-1不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。在某些实施方式中，FGF21包含第一可缀合残基，并且GLP-1包含第二可缀合残基。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基为天然存在的氨基酸残基。在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含赖氨酸或由其组成。
如SEQ ID NO:50中列出的天然GLP-1肽具有两个天然存在的赖氨酸(K)残基，即K26和K34。在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基是天然GLP-1肽中发现的天然存在的残基，例如K26或K34。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含引入的残基，例如通过将不可缀合残基取代为可缀合残基，或通过插入可缀合残基(例如在GLP-1的N端或C端处或在GLP-1序列内)。GLP-1中的任何不可缀合残基可被可缀合残基取代，只要此类取代基本上不降低GLP-1或融合多肽的生物活性即可。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基通过相对于SEQ ID NO:50的GLP-1中E27和R36处的取代引入。在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基通过选自下组的取代引入：E27K和R36K。在此类实施方式中，GLP-1进一步包含将K26和/或K34取代为不可缀合残基。
在某些实施方式中，GLP-1中天然存在的赖氨酸残基中的一者或两者已去除，通过例如用不可缀合残基取代天然存在的赖氨酸残基或缺失天然存在的赖氨酸残基，或防止天然存在的赖氨酸残基的侧链在给定缀合反应中反应的任何其它手段。
在某些实施方式中，GLP-1进一步包含K26和/或K34取代为不可缀合残基。在某些实施方式中，对于赖氨酸缀合反应，不可缀合残基任选地选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
在某些实施方式中，GLP-1包含K26的取代，其选自下组：K26R、K26Q、K26A、K26G、K26H、K26S和K26T。在某些实施方式中，GLP-1包含或进一步包含K34的取代，其选自下组：K34R、K34Q、K34A、K34G、K34H、K34S和K34T。在某些实施方式中，K26的取代选自K26R和K26Q，和/或K34处的取代选自K34R和K34Q。在某些实施方式中，GLP-1相对于SEQ ID NO:50包含K26R和/或K34R。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基包含半胱氨酸残基。
在某些实施方式中，GLP-1中的可缀合残基为非天然氨基酸残基(NNAA)。
在某些实施方式中，GLP-1中的半胱氨酸残基或NNAA通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26、K34、E27和R36。在某些实施方式中，GLP-1中的半胱氨酸残基或NNAA通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26、E27和R36。
在某些实施方式中，GLP-1包含氨基酸序列X7X8EGTFTSDVSSYLEX22QAAX26X27FIAWLVX34GX36G(SEQ ID NO:51)，其中：X7为H、IA或IPA；X8为A、G、S、V、Aib、T、I或L；X22为G或E；X26为K、R或C；X27为E、K或C；X34为R、K或C，并且X36为K、R、G或C，其条件是GLP-1在氨基酸序列中具有至多一个赖氨酸残基(K)或至多一个半胱氨酸(C)。
在某些实施方式中，X7为H，X8为G，X22为E；X26为K、R或C；X27为E、K或C；X34为R、K或C，并且X36为K、R、C或G，其条件是GLP-1在氨基酸序列中具有至多一个赖氨酸残基(K)或至多一个半胱氨酸残基(C)。
在某些实施方式中，X7为H，X8为G，X22为E；X26为K或R；X27为E；X34为R，并且X36为K或G，其条件是GLP-1在氨基酸序列中具有至多一个赖氨酸残基(K)。
在某些实施方式中，GLP-1包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:52、53和115。
在某些实施方式中，GLP-1包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:120或52。
在某些实施方式中，GLP-1不包含可缀合残基。在某些实施方式中，GLP-1不包含赖氨酸、不包含半胱氨酸和/或不包含非天然氨基酸残基。
接头中的可缀合残基
在某些实施方式中，多肽接头包含至多一个或至多两个可缀合残基，并且FGF21或GLP-1不包含可缀合残基。在某些实施方式中，FGF21包含第一可缀合残基，并且多肽接头包含第二可缀合残基。
可缀合残基可通过例如取代或插入引入到接头序列中。在某些实施方式中，多肽接头中的不可缀合氨基酸残基被可缀合残基取代。在某些实施方式中，可缀合残基插入到多肽接头中。举例来说，第二可缀合残基可插入重复序列的一个重复内、重复序列的两个重复之间或插入多肽接头的N端或C端。
在某些实施方式中，可缀合残基在多肽接头中的任何合适位置处引入。在某些实施方式中，在与FGF21的最N端残基相距至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、40、50、60、70个残基(包括可缀合残基)的位置处，将可缀合残基引入到多肽接头中。在某些实施方式中，在与FGF21的最N端残基相距至多2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、40、50、60、70个残基(包括可缀合残基)的位置处，将可缀合残基引入到多肽接头中。在某些实施方式中，在多肽接头的最C端残基的位置处将可缀合残基引入到多肽接头中。在某些实施方式中，在与GLP-1的最C端残基相距至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个残基(包括可缀合残基)的位置处，将可缀合残基引入到多肽接头中。在某些实施方式中，在与GLP-1的最C端残基相距至多2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个残基(包括可缀合残基)的位置处，将可缀合残基引入到多肽接头中。
在一个实施方式中，多肽接头包含用可缀合残基进行的取代，所述可缀合残基为赖氨酸。可替代地，多肽接头包含用可缀合残基进行的取代，所述可缀合残基为半胱氨酸或非天然氨基酸残基。在一个实施方式中，多肽接头中的可缀合残基为在多肽接头的最C端残基的位置处通过取代引入的赖氨酸残基。
在某些实施方式中，多肽接头中的可缀合残基为赖氨酸，并且多肽接头包含选自下组的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:66-75和89-91。可替代地，这些示范性多肽接头(即SEQ ID NO:66-75和89-91)中的每一者中的赖氨酸残基可被半胱氨酸或非天然氨基酸残基取代。
在某些实施方式中，多肽接头中的可缀合残基为半胱氨酸，并且多肽接头包含选自下组的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:121-134。在某些实施方式中，多肽接头包含两个可缀合残基，并且多肽接头包含选自下组的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:133或134。可替代地，这些示范性多肽接头(即SEQ ID NO:121-134)中的每一者中的半胱氨酸残基可被赖氨酸或非天然氨基酸残基取代。
在某些实施方式中，融合多肽包含至多一个可缀合残基。在一些实施方式中，单一可缀合残基在FGF21中选自相对于SEQ ID NO:36的位置170、171、172、173、174、180、181、71和182位置处。在一些实施方式中，单一可缀合残基在多肽接头中，例如在与GLP-1的最C端残基相距至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个残基(包括可缀合残基)的位置处。
在某些实施方式中，融合多肽包含至多两个可缀合残基。在此类实施方式中，第一可缀合残基在FGF21中选自相对于SEQ ID NO:36的位置170、171、172、173、174、180、181、71和182的位置处，并且第二可缀合残基在多肽接头中多肽接头的最C端残基的位置处，或与GLP-1的最C端残基相距至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个残基(包括可缀合残基)，或在GLP-1中选自相对于SEQ ID NO:50的位置26、34、27和36的位置处。在一些实施方式中，第一可缀合残基在多肽接头中且在多肽接头的C端处，并且第二可缀合残基也在多肽接头中，在与FGF21的最N端残基相距至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、40、50、60、70个残基(包括可缀合残基)的位置处。在一些实施方式中，第一可缀合残基在多肽接头中且在多肽接头的C端处，并且第二可缀合残基也在多肽接头中，在处于或接近于多肽接头的中心的位置处。在一些实施方式中，第一和第二可缀合残基都在多肽接头中，并且独立地在与GLP-1的最C端残基相距至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个残基(包括可缀合残基)的位置处。
在某些实施方式中，本文所提供的融合多肽包含选自下组的氨基酸序列：SEQ IDNO:2、4-22、24、26-35、77-88和116-117，其中缀合残基为赖氨酸。下表1A显示SEQ ID NO示范性融合多肽序列，以及融合多肽中所含的FGF21、多肽接头和GLP-1序列的SEQ ID NO。下表1A还显示GLP-1和FGF21中的突变，以及多肽接头序列中的重复序列和重复数。
表1A.示范性融合多肽序列
Figure BDA0003289128460000331
Figure BDA0003289128460000341
Figure BDA0003289128460000351
Figure BDA0003289128460000361
**：GLP-1中的突变意指相对于SEQ ID NO:50的突变；
#：FGF21中的突变意指相对于SEQ ID NO:36的突变；
在某些实施方式中，本文所提供的融合多肽包含选自下组的氨基酸序列：148-165、168-170、1、23、25和76，其中可缀合残基为半胱氨酸。下表1B显示SEQ ID NO示范性融合多肽序列，以及融合多肽中所含的FGF21、多肽接头和GLP-1序列的SEQ ID NO。下1B还显示GLP-1和FGF21中的突变，以及多肽接头序列中的重复序列和重复数。
表1B.示范性融合多肽序列
Figure BDA0003289128460000362
Figure BDA0003289128460000371
Figure BDA0003289128460000381
**：GLP-1中的突变意指相对于SEQ ID NO:50的突变；
#：FGF21中的突变意指相对于SEQ ID NO:36的突变；
§具有SEQ ID NO:166和167的氨基酸序列的融合多肽包含无活性GLP-1或无活性FGF21，并且充当阴性对照。
清除率修饰部分
本公开提供一种多肽缀合物，其包含与至少一个清除率降低部分(CRM)缀合的本文所提供的融合多肽。
如本文所用，术语“缀合物”是指作为两个或更多个分子接合在一起以形成一个物理实体的结果的化合物。举例来说，本公开的多肽缀合物意指作为融合多肽与一个或多个清除率修饰部分接合在一起的结果的化合物。分子可通过共价键、非共价键、接头、化学修饰或蛋白质融合或通过本领域的技术人员已知的任何手段连接在一起。优选地，分子可通过共价键连接在一起。连接可以是永久性的或可逆的。在一些实施方式中，可包括某些可裂解或不可裂解接头。
如本文所用，术语“清除率修饰部分”或“CRM”是指可改变一种或多种药代动力学(PK)特性(例如延长体内半衰期)的部分。CRM的实施例可包括但不限于聚乙二醇(PEG)、葡萄糖醛酸或其它基于糖的接头，极性、带正电或负电的基团，其可提高丁二酰亚胺基环的水解速率并且降低或最小化反向迈克尔(Michael)反应的速率，并且因此降低或最小化融合多肽的损失速率。
在某些实施方式中，CRM包含血浆蛋白结合部分、聚合物、人血清白蛋白(HSA)和其功能片段、Xten序列或PAS序列。在某些实施方式中，Xten序列为具有以下中所描述的氨基酸序列的延伸重组多肽序列：WO2007103515、WO2009023270、WO2010091122、WO2011123813、WO2013130683、WO2017146979、WO2011084808、WO2013040093、WO2013122617、WO2014011819、WO2013184216、WO2014164568、WO2015023891、WO2016077505和WO2017040344，其公开内容已全文并入。在某些实施方式中，术语“PAS”(也可与术语“APS”互换使用)是指由Ala、Ser和Pro残基组成的氨基酸重复，如US8563521B2中所描述，其公开内容已全文并入。
在某些实施方式中，CRM包含白蛋白结合部分。术语“白蛋白结合部分”是指能够以足够的特异性，优选非共价地结合白蛋白(例如人血清白蛋白)或其任何功能片段的任何功能部分。连接到治疗性融合多肽、多肽或多肽复合物的白蛋白结合部分对人血清白蛋白的亲和力典型地低于10μM，并且优选低于1pM。白蛋白结合部分可包括但不限于白蛋白结合结构域、来自合成肽的白蛋白结合序列以及白蛋白结合化学部分。举例来说，白蛋白结合部分选自来自链球菌蛋白G的白蛋白结合结构域、来自大消化链球菌(Peptostreptococcusmagnus)蛋白质PAB的白蛋白结合结构域、具有核心序列DICLPRWGCLW(SEQ ID NO:114)的白蛋白结合肽。《生物化学杂志(J.Biol Chem.)》277,38(2002)35035-35043中已描述许多作为白蛋白结合部分的小肽。再例如，白蛋白结合部分选自含有4-40个碳原子的直链和支链亲脂部分，具有环戊并菲骨架的化合物等。举例来说，白蛋白结合部分为式CH3(CH2)vCO-NHCH(COOH)(CH2)2CO-的基团，其中v为10到24的整数。
在某些实施方式中，白蛋白结合部分包含以下结构：*-A-B-C-D-E，其中A、B、C、D和E通过酰胺键互连，并且A的*端连接到多肽复合物上的可缀合残基，并且其中：
A选自键、
Figure BDA0003289128460000391
a、b、c和d独立地为0到4的整数，R1为氢或-COOH；
B选自键、
Figure BDA0003289128460000392
e为1到4的整数，
C为键或
Figure BDA0003289128460000393
R2为-CH2SO3H或-COOH，f为1到4的整数，n为1到25的整数；
D选自键、
Figure BDA0003289128460000394
g和h独立地为0或1，并且R3为H或-CH2COOH；
E为具有下式的酸性基团：
Figure BDA0003289128460000401
其中W表示-(CR4R5)l-，
R4和R5独立地选自下组：氢、卤素、氰基、羟基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羟烷基、氨基、氨基烷基、羧基、羧基烷基、烷氧基、芳氧基和羧酰胺，
R6选自羟基或NR7R8；
R7和R8独立地选自下组：氢、烷基、羟基和
Figure BDA0003289128460000402
并且l为10到20的整数。
在某些实施方式中，CRM与赖氨酸残基缀合，任选地赖氨酸残基在多肽接头中或在GLP-1中或在FGF21中。
在某些实施方式中，A为键。
在某些实施方式中，A为键，并且B为键或
Figure BDA0003289128460000403
其中e为1、2或3。
在某些实施方式中，A为键，B为
Figure BDA0003289128460000404
并且C为
Figure BDA0003289128460000405
其中e为1、2或3，f为1、2或3，并且n为1或2。在某些实施方式中，D为键，并且E为具有下式的酸性基团：
Figure BDA0003289128460000406
在某些实施方式中，R2为-COOH，并且R6为羟基。在某些实施方式中，W表示-(CR4R5)l-，R4和R5独立地为氢，l为10到20的整数。
在某些实施方式中，A为键，B为键，并且C为键。
在某些实施方式中，A为键，B为键，并且C为
Figure BDA0003289128460000407
其中f为1、2或3，并且n为1或2。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000411
其中a为1、2或3，b为1、2或3，并且c为1或2。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000412
并且B为
Figure BDA0003289128460000413
其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，并且e为1、2或3。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000414
B为
Figure BDA0003289128460000415
并且C为
Figure BDA0003289128460000416
其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，e为1、2或3，f为1、2或3，并且n为1或2。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000417
B为
Figure BDA0003289128460000418
并且C为键，其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，并且e为1、2或3。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000419
并且B为键，其中a为1、2或3，b为1、2或3，并且c为1或2。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA00032891284600004110
B为键，并且C为
Figure BDA00032891284600004111
其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，f为1、2或3，并且n为1或2。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA00032891284600004112
B为键，并且C为键，其中a为1、2或3，b为1、2或3，并且c为1或2。
在某些实施方式中，D为键。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA00032891284600004113
B为
Figure BDA00032891284600004114
C为
Figure BDA0003289128460000421
并且D为键，其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，e为1、2或3，f为1、2或3，并且n为1或2。
在某些实施方式中，D为
Figure BDA0003289128460000422
其中g为0或1，并且h为0或1。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000423
B为
Figure BDA0003289128460000424
或键，C为键，并且D为
Figure BDA0003289128460000425
其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，e为1、2或3，g为0或1，并且h为0或1。
在某些实施方式中，D为
Figure BDA0003289128460000426
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000427
B为
Figure BDA0003289128460000428
C为键或
Figure BDA0003289128460000429
并且D为
Figure BDA00032891284600004210
其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，e为1、2或3，f为1、2或3，并且n为1或2。
在某些实施方式中，CRM包含下式结构(也称为-OOC-(CH2)16-CO-gGlu-2XADO，其中2XADO意指两个连续ADO部分，并且ADO为8-氨基-3,6-二氧杂辛酸的缩写)：
Figure BDA00032891284600004211
在某些实施方式中，CRM与融合多肽中的至少一个半胱氨酸残基缀合。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000431
并且B为
Figure BDA0003289128460000432
Figure BDA0003289128460000433
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000434
B为
Figure BDA0003289128460000435
Figure BDA0003289128460000436
并且C为
Figure BDA0003289128460000437
其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，d为1、2或3，f为1、2或3，并且n为1或2。在某些实施方式中，D为键，并且E为具有下式的酸性基团：
Figure BDA0003289128460000438
在某些实施方式中，R2为-COOH，并且R6为羟基。在某些实施方式中，W表示-(CR4R5)l-，R4和R5独立地为氢，l为10到20的整数。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA0003289128460000439
B为
Figure BDA00032891284600004310
C为
Figure BDA00032891284600004311
并且D为键，其中a为1、2或3，b为1、2或3，c为1或2，d为1、2或3，f为1、2或3，并且n为1或2。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA00032891284600004312
并且B为
Figure BDA00032891284600004313
其中d为1、2或3，并且e为1、2或3。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA00032891284600004314
B为
Figure BDA00032891284600004315
并且C为键，其中d为1、2或3，并且e为1、2或3。
在某些实施方式中，A为
Figure BDA00032891284600004316
B为
Figure BDA00032891284600004317
C为键，并且D为
Figure BDA0003289128460000441
其中d为1、2或3，e为1、2或3，g为0或1，并且h为0或1。
在某些实施方式中，CRM包含下式结构：
Figure BDA0003289128460000442
通过赖氨酸残基的示范性融合多肽缀合物示于以下表2A和表2B中
表2A示范性融合多肽缀合物
Figure BDA0003289128460000443
Figure BDA0003289128460000451
Figure BDA0003289128460000461
**A基团是指HOOC-(CH2)16-CO-gGlu-2XADO或
Figure BDA0003289128460000462
表2B示范性融合多肽缀合物
Figure BDA0003289128460000463
Figure BDA0003289128460000471
Figure BDA0003289128460000481
**B基团是指HOOC-(CH2)20-CO-gGlu-2XADO-EDA-CO-CH2或
Figure BDA0003289128460000482
§具有SEQ ID NO:166和167的氨基酸序列，包含无活性GLP-1或无活性FGF21的融合多肽充当阴性对照。
在某些实施方式中，本文所提供的缀合物包含融合多肽，其包含选自SEQ ID NO:6-15的氨基酸序列，并且一个CRM与融合多肽中的可缀合赖氨酸残基连接。可替代地，选自SEQ ID NO:6-15的融合多肽中的可缀合赖氨酸残基可被半胱氨酸或非天然氨基酸取代，并且CRM与此类半胱氨酸或非天然氨基酸缀合。
在某些实施方式中，本文所提供的缀合物包含融合多肽，其包含选自SEQ ID NO:25的氨基酸序列，并且一个CRM与融合多肽中的可缀合半胱氨酸残基连接。
在某些实施方式中，本文所提供的缀合物包含融合多肽，其包含选自SEQ ID NO:2、4-5、16-22、24、26-35、77-88和116-117的氨基酸序列，分别与融合多肽中的可缀合赖氨酸残基连接的两个CRM。可替代地，选自SEQ ID NO:2、4-5、16-22、24、26-35、77-88和116-117的融合多肽中的可缀合赖氨酸残基可被半胱氨酸或非天然氨基酸取代，并且两个CRM分别与此类半胱氨酸或非天然氨基酸残基缀合。
在某些实施方式中，本文所提供的缀合物包含融合多肽，其包含选自SEQ ID NO:2、4-5、16-22、24、26-35、77-88和116-117的氨基酸序列，以及两个CRM，其中的每一者与融合多肽中的可缀合赖氨酸残基中的一者连接。在某些实施方式中，第一CRM与FGF21中的可缀合赖氨酸残基缀合，并且第二CRM与GLP-1或多肽接头中的可缀合赖氨酸残基缀合。
在某些实施方式中，本文所提供的缀合物包含融合多肽，其包含选自SEQ ID NO:148-165、168-170、1、23和76的氨基酸序列，分别与融合多肽中的可缀合半胱氨酸残基连接的两个CRM。在某些实施方式中，第一CRM与FGF21中的可缀合半胱氨酸残基缀合，并且第二CRM与多肽接头中的可缀合半胱氨酸残基缀合。在某些实施方式中，第一和第二CRM都与多肽接头中的可缀合半胱氨酸残基缀合。
在某些实施方式中，本公开提供多肽缀合物，其包含与CRM或其药学上可接受的盐缀合的融合多肽，其中所述融合多肽包含SEQ ID NO:N的氨基酸序列，以及与所述融合多肽中以N端到C端方向计数的第m残基(其为赖氨酸，即mK)共价连接的CRM，其中：
1)N为6，m为222，mK为222K(此类缀合物分子也称为化合物6)，
2)N为7，m为221，mK为221K(此类缀合物分子也称为化合物7)，
3)N为8，m为225，mK为225K(此类缀合物分子也称为化合物8)，
4)N为9，m为231，mK为231K(此类缀合物分子也称为化合物9)，
5)N为10，m为222，mK为222K(此类缀合物分子也称为化合物10)，
6)N为11，m为221，mK为221K(此类缀合物分子也称为化合物11)，
7)N为12，m为225，mK为225K(此类缀合物分子也称为化合物12)，
8)N为13，m为222，mK为222K(此类缀合物分子也称为化合物13)，
9)N为14，m为222，mK为222K(此类缀合物分子也称为化合物14)，或
10)N为15，m为231，mK为231K(此类缀合物分子也称为化合物15)，并且
其中所述CRM具有下式结构：
Figure BDA0003289128460000491
在某些实施方式中，本公开提供多肽缀合物，其包含与CRM或其药学上可接受的盐缀合的融合多肽，
其中所述融合多肽包含SEQ ID NO:N的氨基酸序列，以及与所述融合多肽中以N端到C端方向计数的第m残基(其为半胱氨酸，即mC)共价连接的CRM，并且其中：
1)N为25，m为51，mC为51C(此类缀合物分子也称为化合物76)，
其中所述CRM具有下式结构：
Figure BDA0003289128460000501
或其药学上可接受的盐。
在某些实施方式中，本公开提供多肽缀合物，其包含与第一CRM和第二CRM或其药学上可接受的盐缀合的融合多肽，
其中所述融合多肽包含SEQ ID NO:X的氨基酸序列，以及分别与所述融合多肽中以N端到C端方向计数的第p残基和第q残基(其均为赖氨酸，即pK或qK)共价连接的所述第一CRM和所述第二CRM，其中一个CRM与一个残基连接，其中：
1)X为2，p为20，pK为20K，q为231，qK为231K(此类缀合物分子也称为化合物2)，
2)X为4，p为51，pK为51K，q为231，qK为231K(此类缀合物分子也称为化合物4)，
3)X为5，p为51，pK为51K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物5)，
4)X为16，p为20，pK为20K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物16)，
5)X为17，p为20，pK为20K，q为221，qK为221K(此类缀合物分子也称为化合物17)，
6)X为18，p为20，pK为20K，q为225，qK为225K(此类缀合物分子也称为化合物18)，
7)X为19，p为51，pK为51K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物19)，
8)X为20，p为51，pK为51K，q为221，qK为221K(此类缀合物分子也称为化合物20)，
9)X为21，p为51，pK为51K，q为225，qK为225K(此类缀合物分子也称为化合物21)，
10)X为22，p为51，pK为51K，q为231，qK为231K(此类缀合物分子也称为化合物22)，
11)X为24，p为51，pK为51K，q为221，qK为221K(此类缀合物分子也称为化合物24)，
12)X为26，p为36，pK为36K，q为210，qK为210K(此类缀合物分子也称为化合物26)，
13)X为27，p为41，pK为41K，q为215，qK为215K(此类缀合物分子也称为化合物27)，
14)X为28，p为71，pK为71K，q为245，qK为245K(此类缀合物分子也称为化合物28)，
15)X为29，p为111，pK为111K，q为285，qK为285K(此类缀合物分子也称为化合物29)，
16)X为30，p为51，pK为51K，q为225，qK为225K(此类缀合物分子也称为化合物30)，
17)X为31，p为79，pK为79K，q为253，qK为253K(此类缀合物分子也称为化合物31)，
18)X为32，p为71，pK为71K，q为245，qK为245K(此类缀合物分子也称为化合物32)，
19)X为33，p为39，pK为39K，q为213，qK为213K(此类缀合物分子也称为化合物33)，
20)X为34，p为35，pK为35K，q为209，qK为209K(此类缀合物分子也称为化合物34)，
21)X为35，p为20，pK为20K，q为221，qK为221K(此类缀合物分子也称为化合物35)，
22)X为77，p为36，pK为36K，q为207，qK为207K(此类缀合物分子也称为化合物37)，
23)X为78，p为41，pK为41K，q为212，qK为212K(此类缀合物分子也称为化合物38)，
24)X为79，p为71，pK为71K，q为242，qK为242K(此类缀合物分子也称为化合物39)，
25)X为80，p为111，pK为111K，q为282，qK为282K(此类缀合物分子也称为化合物40)，
26)X为81，p为79，pK为79K，q为250，qK为250K(此类缀合物分子也称为化合物41)，
27)X为82，p为71，pK为71K，q为242，qK为242K(此类缀合物分子也称为化合物42)，
28)X为83，p为39，pK为39K，q为210，qK为210K(此类缀合物分子也称为化合物43)，
29)X为84，p为35，pK为35K，q为206，qK为206K(此类缀合物分子也称为化合物44)，
30)X为85，p为46，pK为46K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物45，
31)X为86，p为41，pK为41K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物46)，
32)X为87，p为36，pK为36K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物47)，
33)X为88，p为51，pK为51K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物48)，
34)X为116，p为51，pK为51K，q为232，qK为232K(此类缀合物分子也称为化合物49)，或
35)X为117，p为51，pK为51K，q为233，qK为233K(此类缀合物分子也称为化合物50)，并且
其中所述CRM具有下式结构：
Figure BDA0003289128460000531
在某些实施方式中，本公开提供多肽缀合物，其包含与第一CRM和第二CRM或其药学上可接受的盐缀合的融合多肽，
其中所述融合多肽包含SEQ ID NO:X的氨基酸序列，以及分别与所述融合多肽中以N端到C端方向计数的第p残基和第q残基(其均为半胱氨酸，即pC或qC)共价连接的所述第一CRM和所述第二CRM，其中一个CRM与一个残基连接，其中：
1)X为148，p为51，pC为51C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物51)，
2)X为149，p为51，pC为51C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物52)，
3)X为150，p为51，pC为51C，q为233，qC为233C(此类缀合物分子也称为化合物53)，
4)X为151，p为51，pC为51C，q为231，qC为231C(此类缀合物分子也称为化合物54)，
5)X为152，p为51，pC为51C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物55)，
6)X为153，p为51，pC为51C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物56)，
7)X为154，p为51，pC为51C，q为231，qC为231C(此类缀合物分子也称为化合物57)，
8)X为155，p为55，pC为55C，q为229，qC为229C(此类缀合物分子也称为化合物58)，
9)X为156，p为59，pC为59C，q为233，qC为233C(此类缀合物分子也称为化合物59)，
10)X为157，p为51，pC为51C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物60)，
11)X为158，p为46，pC为46C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物61)
12)X为159，p为41，pC为41C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物62)，
13)X为160，p为51，pC为51C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物63)，
14)X为161，p为46，pC为46C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物64)，
15)X为162，p为41，pC为41C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物65)，
16)X为163，p为51，pC为51C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物66)，
17)X为164，p为46，pC为46C，q为235，qC为235C(此类缀合物分子也称为化合物67)，
18)X为165，p为51，pC为51C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物68)，
19)X为168，p为52，pC为52C，q为282，qC为282C(此类缀合物分子也称为化合物71)，
20)X为169，p为62，pC为62C，q为282，qC为282C(此类缀合物分子也称为化合物72)，
21)X为170，p为42，pC为42C，q为282，qC为282C(此类缀合物分子也称为化合物73)，
22)X为1，p为51，pC为51C，q为122，qC为122C(此类缀合物分子也称为化合物74)，
23)X为23，p为40，pC为40C，q为51，qC为51C(此类缀合物分子也称为化合物75)，或
24)X为76，p为50，pC为50C，q为71，qC为71C(此类缀合物分子也称为化合物77)，并且
其中所述CRM具有下式结构：
Figure BDA0003289128460000551
或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本公开提供一种产生本文所提供的缀合物的方法，其包括将清除率降低部分与本文所提供的融合多肽缀合。
CRM可通过共价结合、亲和力结合、嵌入、配位结合、复合、缔合、共混或添加等方法连接到融合多肽或多肽复合物。
在某些实施方式中，融合多肽可直接或例如通过另一部分或通过偶联剂间接连接到CRM。
融合多肽可通过合适的缀合反应在例如赖氨酸残基、半胱氨酸残基或非天然氨基酸处缀合。
举例来说，具有可缀合残基(如赖氨酸)的融合多肽可与氨基反应性试剂反应。在某些实施方式中，CRM在酰化反应中通过酰基与可缀合赖氨酸残基缀合。酰化反应的示范性方法描述于例如WO2009083549和WO2010029159中，其内容全文并入本文中。待在酰化反应中缀合的CRM可含有羧酸基、α,ω-脂肪二酸残基、活化酯或活化N-羟基酰亚胺酯等。活化酯的实施例包括O-丁二酰亚胺试剂，如N-羟基丁二酰亚胺基(NHS)或磺基-NHS酯和酰亚胺酯化合物，如特劳特氏试剂(Traut's reagent)，其可与可缀合赖氨酸残基的ε-氨基反应以形成酰胺或脒键。合适的氨基反应性试剂的额外实施例包括O-酰基异脲、N-羟基三唑酯、酸酐、苯基活性酯、P-异羟肟活性酯、酰基咪唑、酰基苯并三唑、酰基叠氮化物、酰卤、鏻盐、铵/脲阳离子盐。
再例如，具有可缀合残基(如半胱氨酸)的融合多肽可连接到硫醇反应性试剂。在某些实施方式中，CRM通过顺丁烯二酰亚胺或碘乙酰胺与可缀合半胱氨酸残基缀合以形成碳-硫键。在某些实施方式中，CRM通过二硫化物与可缀合半胱氨酸残基缀合以形成二硫键。合适的硫醇反应性基团的额外实施例包括包括二烯基砜、α-卤酰基或其它硫醇反应性缀合搭配物。关于细节，参见Haugland,2003,《分子探针公司荧光探针与研究化合物手册(Molecular Probes Handbook ofFluorescent Probes and Research Chemicals)》,分子探针公司(Molecular Probes,Inc.)；Brinkley,1992,《生物缀合化学(BioconjugateChem.)》3:2；Garman,1997,《非放射性标记：实践方法(Non-Radioactive Labelling:APractical Approach)》,学术出版社(Academic Press),伦敦(London)；Means(1990)《生物缀合化学》1:2；Hermanson,G.在《生物缀合技术(Bioconjugate Techniques)》(1996)学术出版社,圣迭戈(San Diego),第40-55,643-671页中。
举例来说，具有可缀合残基(如NNAA)的融合多肽可与CRM缀合，使得可在融合多肽的NNAA与CRM之间形成稳定连接。举例来说，含酮基或醛或β-二酮部分的NNAA可与含酰肼或O-烷基羟胺、羟胺的试剂反应以形成腙或O-烷基化肟键。再例如，含有叠氮基的NNAA可与炔衍生物反应，通过铜(I)催化的[3+2]环加成形成稳定三唑接头(且反之亦然)。再例如，含有叠氮基的NNAA可与适当的水溶性含膦试剂连接，通过施陶丁格连接(Staudingerligation)形成酰胺键。此外，NNAA中的硫酯部分可与含胺试剂反应以形成酰胺键。并入NNAA的本文所提供的融合多肽可通过环加成反应与试剂缀合，如二烯与亲二烯物之间的(4+2)环加成(狄尔斯-阿尔德反应(Diels-Alder reaction))、通过1,3-偶极胡伊斯根环加成(Huisgen cycloaddition)的(3+2)环加成以及通过硝酮-烯烃环加成的(3+2)环加成。适用于抗体缀合的环加成方法已描述于例如WO05003294、US20120004183、WO06009901、WO07130453和美国专利6,737,236中。
再例如，融合多肽可与生物素缀合，接着与CRM间接缀合，所述CRM与抗生物素蛋白缀合。再例如，融合多肽可连接到偶联剂，所述偶联剂进一步连接到CRM。偶联剂的实施例包括双官能部分，如N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)、丁二酰亚胺基-4-(N-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨基酯的双官能衍生物(如二亚胺代己二酸二甲酯盐酸盐)、活性酯(如辛二酸二丁二酰亚胺酯)、醛(如戊二醛)、双叠氮基化合物(如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(如双-(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如2,6-二异氰酸甲苯酯)以及双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。尤其优选的偶联剂包括N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)(Carlsson等人,《生物化学杂志(Biochem.J.)》173:723-737(1978))和N-丁二酰亚胺基-4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)以提供二硫键。
用于将CRM与融合多肽缀合的额外方法发现于例如美国专利第5,208,020号；美国专利第6,4411,163号；WO2005037992；WO2005081711；和WO2006/034488中，其以全文引用的方式并入本文中。制备本公开的缀合物的方法的具体实施例也包括于本公开的实验部分中。
本文所提供的融合多肽和其缀合物具有两种作用机制的组合益处，并且具有抗糖尿病/NASH的协同效应以及额外益处。本文所提供的融合多肽和其缀合物在少得多的全身暴露的情况下提供比单独的索马鲁肽和FGF21更好的功效，指示潜在更好的安全概况和潜在改善的治疗指数。
药物组合物
在另一方面，本公开还提供一种药物组合物，其包含本文所提供的融合多肽缀合物和药学上可接受的载剂。
术语“药学上可接受的”指示，指定载剂、媒剂、稀释剂、赋形剂和/或盐一般在化学上和/或物理上与构成配制物的其它成分相容，并且在生理上与其接受者相容。
“药学上可接受的载剂”是指药物调配物中除了活性成分以外的生物活性可接受且对受试者无毒的成分。用于本文所公开的药物组合物的药学上可接受的载剂可包括例如药学上可接受的液体、凝胶或固体载剂、水性媒剂、非水性媒剂、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、麻醉剂、悬浮/分散剂、螯合(sequestering/chelating)剂、稀释剂、佐剂、赋形剂或无毒辅助物质、本领域中已知的其它组分或其各种组合。
合适的组分可包括例如抗氧化剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、润滑剂、调味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂或稳定剂，如糖和环糊精。合适的抗氧化剂可包含例如蛋氨酸、抗坏血酸、EDTA、硫代硫酸钠、铂、过氧化氢酶、柠檬酸、半胱氨酸、硫代甘油、硫代乙醇酸、硫代山梨糖醇、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯和/或没食子酸丙酯。如本文所公开，在本文所提供的药物组合物中包括一种或多种抗氧化剂(如蛋氨酸)减少多肽复合物或双特异性多肽复合物的氧化。这种氧化的减少防止或减少了结合亲和力的损失，从而提高了蛋白质的稳定性并最大限度地延长了保存期。因此，在某些实施方式中，提供了包含本文所公开的融合多肽、多肽复合物或缀合物以及一种或多种抗氧化剂(如蛋氨酸)的组合物。
为了进一步说明，药学上可接受的载剂可包括例如水性媒剂，如氯化钠注射液、林格氏注射液(Ringer's injection)、等渗右旋糖注射液、无菌水注射液、或右旋糖和乳酸林格氏注射液；非水性媒剂，如植物来源的非挥发性油、棉籽油、玉米油、芝麻油或花生油；抑制细菌或抑制真菌浓度的抗微生物剂；等渗剂，如氯化钠或右旋糖；缓冲剂，如磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂；抗氧化剂，如硫酸氢钠；局部麻醉剂，如盐酸普鲁卡因(procainehydrochloride)；悬浮剂和分散剂，如羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；乳化剂，如聚山梨醇酯80(TWEEN-80)；螯合剂，如乙二胺四乙酸(EDTA)或乙二醇四乙酸(EGTA)、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。用作载剂的抗微生物剂可添加到多剂量容器中的药物组合物中，所述抗微生物剂包括苯酚或甲酚、汞剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵(benzalkoniumchloride)和苄索氯铵(benzethonium chloride)。合适的赋形剂可包括例如水、生理盐水、右旋糖、甘油或乙醇。合适的无毒辅助物质可包括例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、溶解性增强剂或如乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯或环糊精等试剂。
药物组合物可以是液体溶液、悬浮液、乳液、丸剂、胶囊、片剂、持续释放配制物或散剂。口服配制物可包括标准载剂，如药物级甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。
在实施方式中，药物组合物被配制成可注射组合物。可注射的药物组合物可以任何常规形式制备，例如液体溶液、悬浮液、乳液或适合于产生液体溶液、悬浮液或乳液的固体形式。注射用制剂可包含可立即用于注射的无菌和/或无热原质溶液；仅在使用之前与溶剂组合的无菌干燥可溶性产品，如冻干粉，包含皮下片剂；可立即用于注射的无菌悬浮液；仅在使用之前与媒剂组合的无菌干燥不溶性产品；以及无菌和/或无热原质乳液。溶液可以是水性或非水性的。
在某些实施方式中，单位剂量的肠胃外制剂被包装在安瓿、小瓶或带针头的注射器中。用于肠胃外施用的所有制剂都应是无菌且无热原质的，正如本领域中已知和实践的那样。
在某些实施方式中，无菌冻干粉是通过将如本文所公开的融合多肽、多肽复合物或缀合物溶解于合适的溶剂中来制备。溶剂可含有提高粉末或由粉末制备的复原溶液的稳定性或其它药理学组分的赋形剂。可使用的赋形剂包括但不限于水、右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它合适的试剂。溶剂可以含有缓冲剂，如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾、或本领域的技术人员已知的其它此类缓冲剂，在一个实施方式中，缓冲剂呈约中性pH。随后无菌过滤溶液，接着在本领域技术人员已知的标准条件下冻干，得到所需配制物。在一个实施方式中，将所得溶液分配到小瓶中进行冻干。每个小瓶可含有单剂量或多剂量的本文所提供的融合多肽、多肽复合物或缀合物或其组合物。小瓶过填充超出一次剂量或一组剂量所需的较少量(例如约10％)是可接受的，以便于精确地抽取样品并精确地给药。冻干粉可以在适当的条件下存储，如在约4℃到室温下存储。
用注射用水复原冻干粉提供了用于肠胃外施用的配制物。在一个实施方式中，为进行复原，将无菌和/或无热原质水或其它液态合适载剂添加到冻干粉中。精确量取决于给定的所选疗法，并且可以凭经验确定。
如本文所描述的药物组合物的施用可以通过普通技术医师已知有效的任何途径进行。一个实施例为通过无菌注射器或某一其它机械装置(如输液泵)进行外周肠胃外施用。在某些实施方式中，外周肠胃外途径为静脉内、肌肉内、皮下或腹膜内施用途径。
在某些实施方式中，本文所描述的融合多肽、多肽复合物或缀合物以适用于非肠胃外途径施用，如口服、直肠、鼻或下呼吸道途径施用的形式配制。
在某些实施方式中，本文所描述的融合多肽、多肽复合物或缀合物配制于固体配制物中，如冻干或喷雾干燥，然后将其在施用之前在合适的稀释剂溶液中复原。可采用标准药物配制技术，如《雷明顿：药学科学与实践(Remington:The Science and Practice ofPharmacy)》(D.B.Troy编,第21版,Lippincott,Williams&Wilkins,2006)中所描述的那些。可替代地，本文所描述的融合多肽、多肽复合物或缀合物可被配制成用于通过以下施用：舌、舌下、颊内、口中、口腔、胃和肠中、鼻、肺(例如通过细支气管和肺泡或其组合)、表皮、真皮、经皮、阴道、直肠、眼(例如通过结膜)、输尿管、经皮或肺途径。作为又另一选项，本文所描述的融合多肽、多肽复合物或缀合物可被配制成用于通过经皮施用来施用，例如通过无针注射或通过贴剂(任选地为离子电渗贴剂)，或经粘膜，例如含服。
治疗方法
在另一方面，本公开提供一种预防或治疗有需要的受试者的代谢病症的方法，其包括施用治疗有效量的本文所提供的多肽缀合物或药物组合物。
还提供治疗方法，其包括：向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所提供的多肽缀合物或药物组合物，从而治疗或预防病况或病症。在某些实施方式中，受试者已鉴别为患有可能对本文所提供的多肽缀合物或药物组合物起反应的病症或病况。
在某些实施方式中，代谢病症为糖尿病、肥胖症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、心血管如血脂异常、动脉硬化、酒精性脂肪性肝炎(ASH)、糖尿病肾病、妊娠期糖尿病、代谢综合征如代谢综合征X、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、终末期肝病、肝脂肪变性(脂肪肝)、肝硬化或原发性胆汁性肝硬化(PBC)。
举例来说，可使用本文所提供的多肽缀合物或药物组合物治疗或改善的代谢病况或病症包括人受试者的空腹血糖水平为125mg/dL或更大，例如130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200或大于200mg/dL的病况。可在进食或禁食状态下或随机确定血糖水平。代谢病况或病症还可包含受试者罹患代谢病况的风险增加的病况。对于人受试者，此类病况包括100mg/dL的空腹血糖水平。
本文所提供的多肽缀合物或药物组合物的治疗有效量将取决于本领域中已知的各种因素，例如受试者的体重、年龄、既往病史、目前的药物治疗、健康状况和交叉反应的可能性、过敏、敏感性和不良副作用，以及施用途径和疾病发展的程度。本领域普通技术人员(例如医生或兽医)可如这些和其它情况或要求所指示按比例减少或增加剂量。治疗有效量可为本文所提供的多肽缀合物或药物组合物引发研究人员、医生或其它临床医师寻求的组织系统、动物或人的生物或医学反应的量，所述反应包括减轻或改善所治疗的疾病或病症的症状，即，支持可观察水平的一种或多种所需生物或医学反应，例如降低血糖、胰岛素、甘油三酯或胆固醇水平；减轻体重；或改善葡萄糖耐量、能量消耗或胰岛素敏感性的量。
在某些实施方式中，本文所提供的多肽缀合物或药物组合物可以约0.01mg/kg到约100mg/kg(例如约0.01mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg或约100mg/kg)的治疗有效剂量施用。在这些实施方式中的某些中，本文所提供的多肽缀合物或药物组合物以约50mg/kg或更低的剂量施用，并且在这些实施方式中的某些中，剂量是10mg/kg或更低、5mg/kg或更低、1mg/kg或更低、0.5mg/kg或更低或0.1mg/kg或更低。在某些实施方式中，施用剂量可在治疗过程中改变。例如，在某些实施方式中，初始施用剂量可以高于后续施用剂量。在某些实施方式中，取决于受试者的反应，施用剂量可在治疗过程中改变。
可以调整剂量方案以提供最优的期望反应(例如治疗反应)。举例来说，可施用单次剂量，或可随时间推移施用若干分次剂量。
本文所提供的多肽缀合物或药物组合物可通过本领域中已知的任何途径施用，例如肠胃外(例如皮下、腹膜内、静脉内(包括静脉内输注)、肌肉内或皮内注射)或非肠胃外(例如口服、鼻内、眼内、舌下、直肠或局部)途径。
多肽缀合物或药物组合物可单独或与一种或多种额外治疗手段或药剂组合施用。
在某些实施方式中，当用于治疗代谢疾病时，本文所提供的多肽缀合物或药物组合物可与用于治疗代谢疾病或相关的任何医学病症的任何其它治疗剂组合施用。如本文所用，“组合施用”包括作为相同药物组合物的部分同时施用、作为独立组合物同时施用或作为独立组合物在不同时间施用。如短语“组合”在本文中所用，在另一药剂之前或之后施用的组合物视为与所述药剂“组合”施用，即使组合物和第二药剂通过不同途径使用。在可能的情况下，与本文所提供的融合多肽、多肽复合物或缀合物组合施用的额外治疗剂是根据额外治疗剂的产品信息表单中所列的时程，或根据《医师案头参考(Physicians'DeskReference)》(《医师案头参考》,第70版(2016))或本领域中众所周知的方案施用。
制备方法
本公开提供编码如本文所描述的融合多肽的分离的核酸或多核苷酸。
如本文所用，术语“核酸”或“多核苷酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)和其聚合物。除非明确限制，否则所述术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物的多核苷酸，所述类似物具有与参照核酸类似的结合特性并且以与天然存在的核苷酸类似的方式代谢。除非另外指示，否则特定多核苷酸序列还隐含地涵盖其保守修饰变体(例如简并密码子取代)、等位基因、直系同源物、SNP和互补序列，以及明确指示的序列。具体来说，简并密码子取代可以通过产生其中一个或多个选定(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(参见Batzer等人,《核酸研究》19:5081(1991)；Ohtsuka等人,《生物化学杂志》260:2605-2608(1985)；和Rossolini等人,《分子细胞探针(Mol.Cell.Probes)》8:91-98(1994))。
编码本文所描述融合多肽的核酸或多核苷酸可使用重组技术构建。为此目的，可获得编码GLP-1多肽的DNA和编码FGF21多肽的DNA并且将其可操作地连接，以允许在宿主细胞中转录和表达以产生融合多肽。还可操作地连接编码多肽接头的多核苷酸序列以允许表达所需产物。
编码多核苷酸序列可进一步可操作地连接到一个或多个调控序列，任选地在表达载体中，使得融合多肽的表达或产生可行并且在适当控制下。
可使用本领域中已知的重组技术将编码多核苷酸序列插入到载体中以用于进一步克隆(DNA扩增)或表达。许多载体是可供使用的。载体组件一般包括但不限于以下中的一者或多者：信号序列、复制起点、一个或多个标记基因、增强子元件、启动子(例如原核启动子，如T7、T7lac、Sp6、araBAD、trp、lac、tac、pLm、A3、lac、lpp、npr、pac、syn、trc和T3，或真核启动子，如SV40、CMV和EF-1α)以及转录终止序列。
载体和宿主细胞
在另一方面，本公开提供一种载体，其包含本文所提供的多核苷酸。
可将包含本文所提供的多核苷酸序列的载体引入到宿主细胞中进行克隆或基因表达。如本文所用，短语“宿主细胞”是指已将外源多核苷酸和/或载体引入其中的细胞。在其它实施方式中，载体是染色体外的。必要时，可分离宿主细胞。在某些实施方式中，宿主细胞是原核细胞或真核细胞。
适用于克隆或表达本文载体中的DNA的宿主细胞主要是原核生物。用于此目的的合适原核生物包含真细菌，如革兰氏阴性(Gram-negative)或革兰氏阳性(Gram-positive)生物体，例如肠内菌科(Enterobacteriaceae)，如埃希氏菌属(Escherichia)，例如大肠杆菌；肠杆菌属(Enterobacter)；欧文氏菌属(Erwinia)；克雷伯氏菌属(Klebsiella)；变形杆菌属(Proteus)；沙门氏菌属(Salmonella)，例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)；沙雷氏菌属(Serratia)，例如粘质沙雷氏菌(Serratia marcescans)；和志贺杆菌属(Shigella)，以及芽孢杆菌属(Bacilli)，如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)；假单胞菌属(Pseudomonas)，如绿脓杆菌(P.aeruginosa)；和链霉菌属(Streptomyces)。在一些实施方式中，宿主细胞为真核生物，如酵母和哺乳动物细胞(例如永生化哺乳动物细胞)。
可使用本领域的技术人员已知的任何合适方法，例如转化、转染或转导，将包含本文所提供的多核苷酸序列的载体引入到宿主细胞中。在一个实施例中，可将编码融合多肽的多核苷酸序列亚克隆到表达载体中，其在宿主细胞中表达为包涵体。载体可为病毒载体，并且在这一能力中可使用任何合适病毒载体。
在另一方面，本公开提供一种宿主细胞，其包含本文所提供的载体。宿主细胞是原核细胞或真核细胞。用上述表达或克隆载体转化的宿主细胞可在常规营养培养基中培养，所述培养基视需要经修饰以诱导启动子、选择转化体或扩增克隆载体。
在另一方面，本公开提供一种产生如本文所描述的融合多肽的方法，其包括在允许如本文所描述的融合多肽表达的条件下培养本文所提供的宿主细胞。
为了产生如本文所描述的融合多肽，可在多种培养基中培养用表达载体转化的宿主细胞。市售细菌生长培养基，如Terrific肉汤、LB肉汤、LB琼脂、M9基本培养基、MagiaMedia培养基以及ImMedia培养基(赛默飞世尔(ThermoFisher))适用于培养细菌宿主细胞。市售培养基，如Ham's F10(西格玛(Sigma))、最小必需培养基(MEM)(西格玛)、RPMI-1640(西格玛)以及杜尔贝科氏改良型伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle'sMedium，DMEM)，西格玛)适用于培养真核宿主细胞。这些培养基中的任一种都可以视需要补充激素和/或其它生长因子(如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐(如氯化钠、钙盐、镁盐和磷酸盐)、缓冲剂(如HEPES)、核苷酸(如腺苷和胸苷)、抗生素(如GENTAMYCINTM药物)、微量元素(定义为通常以微摩尔范围内的最终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等效能量源。也可以本领域的技术人员已知的适当浓度包括任何其它必需的补充剂。培养条件(如温度、pH等)是先前与选择用于表达的宿主细胞一起使用的条件，并且对普通技术人员来说将是显而易见的。
在一个方面，本公开提供一种表达如本文所描述的融合多肽的方法，其包括在表达如本文所描述的融合多肽的条件下培养本文所提供的宿主细胞。
在某些实施方式中，融合多肽表达为包涵体。在某些实施方式中，所述方法进一步包括从包涵体复性融合多肽。
当使用重组技术时，如本文所描述的融合多肽可以在细胞内、周质空间中产生，或直接分泌到培养基中。如果产物在细胞内产生，那么作为第一步，例如通过离心或超滤去除宿主细胞或裂解片段的微粒碎片。Carter等人,《生物技术(Bio/Technology)》10:163-167(1992)描述了一种用于分离分泌到大肠杆菌的周质空间的蛋白质的程序。简单来说，将细胞糊状物在乙酸钠(pH 3.5)、EDTA和苯甲基磺酰氟(PMSF)的存在下经约30min解冻。细胞碎片可通过离心去除。在产物被分泌到培养基中的情况下，一般首先使用市售的蛋白质浓缩过滤器，例如艾米康(Amicon)或密理博(Millipore)Pellicon超滤单元浓缩来自此类表达系统的上清液。可在前述任一步骤中包括蛋白酶抑制剂，如PMSF，以抑制蛋白水解，且可以包括抗生素以防止外来污染物的生长。
在某些实施方式中，所述方法进一步包括分离融合多肽。
由细胞制备的如本文所描述的融合多肽可使用例如羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析、DEAE-纤维素离子交换色谱、硫酸铵沉淀、盐析以及亲和色谱纯化。
用于蛋白质纯化的其它技术，如离子交换柱分级分离、乙醇沉淀、反相HPLC、硅胶色谱、肝素SEPHAROSETM色谱、阴离子或阳离子交换树脂(如聚天冬氨酸柱)色谱、色谱焦聚、SDS-PAGE以及硫酸铵沉淀也是可用的，取决于待回收的蛋白质。
试剂盒
还提供用于实践所公开方法的试剂盒。此类试剂盒可包含如本文所描述的药物组合物，其可提供于无菌容器中。任选地，还可包括关于如何使用所提供的药物组合物治疗代谢病症的说明书，或使患者或医疗服务提供者可获得所述说明书。
在一个方面，试剂盒包含(a)药物组合物，其包含治疗有效量的融合多肽缀合物；和(b)用于药物组合物的一个或多个容器。此类试剂盒还可包含其用途的说明书；所述说明书可根据所治疗的精确代谢病症进行定制。说明书可描述试剂盒中所提供的材料的用途和性质。在某些实施方式中，试剂盒包括患者进行施用以治疗代谢病症的说明书，所述代谢病症如葡萄糖水平升高、胰岛素水平升高、糖尿病、肥胖症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、心血管如血脂异常、动脉硬化、酒精性脂肪性肝炎(ASH)、糖尿病肾病、妊娠期糖尿病、代谢综合征如代谢综合征X、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、终末期肝病、肝脂肪变性(脂肪肝)、肝硬化或原发性胆汁性肝硬化(PBC)。
说明书可以印刷在基材(如纸或塑料等)上，并且可以作为包装插页存在于试剂盒中，存在于试剂盒的容器或其组件的标签中(即与包装相关联)等。在其它实施方式中，说明书作为存在于合适的计算机可读存储介质(例如CD-ROM、软盘等)上的电子存储数据文件存在。在又一其它实施方式中，实际说明书不存在于试剂盒中，而是提供用于如通过互联网从远程源获得说明书的手段。此实施方式的一个实施例是包括网址的试剂盒，在所述网址上可以查看说明书和/或可以从所述网址下载说明书。通常希望将试剂盒的一些或所有组件包装在合适的包装中以维持无菌。试剂盒的组件可以包装在试剂盒容纳元件中以制造单个易于处置的单元，其中试剂盒容纳元件(例如盒子或类似结构)可为或可不为气密容器，例如以进一步保持试剂盒的一些或全部组件的无菌性。
实施例
实施例1：融合蛋白的重组表达
表1中列出的GLP-1/FGF21融合蛋白使用BL21(DE3)衍生菌株，由细菌大肠杆菌表达系统产生。编码GLP-1/FGF21融合前体的DNA针对大肠杆菌表达进行密码子优化，从头合成并且亚克隆到PET衍生表达载体(Novagen)中。氨基酸取代通过修饰相应遗传密码实现。当在Terrific肉汤(TB)培养基中细胞密度到达2.0的OD600时，用0.5mM异丙基b-d-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GLP-1/FGF21前体作为包涵体的过表达。在37℃下进行蛋白质诱导20-22小时之后收集细胞。用显微成像分析包涵体的质量。
实施例2：再折叠和纯化
收集细胞且将其通过细胞粉碎机(900巴，两次)裂解。收集含有融合蛋白的不溶性部分，并且通过离心(8,000×g，30min)洗涤两次。然后使用6M尿素以及10mM DTT缓冲液来溶解包涵体。0.5小时后，将溶液用再折叠缓冲液稀释并且在室温下搅拌12小时。在通过蛋白酶去除标签之后，将蛋白质装载到使用Q琼脂糖凝胶快速流动树脂(通用电气医疗集团(GE healthcare))的阴离子交换色谱上，并且通过使用SuperQ-5PW树脂(东曹(TOSOH))的阴离子交换色谱进行进一步精制。每个步骤中的样品通过LC/MS表征以确认正确分子量。
实施例3：融合蛋白缀合物的制备
向GLP1/FGF21融合蛋白(75mg)于NaOH或Tris缓冲液中的溶液中逐滴添加有机溶剂中的CRM试剂(即HOOC-(CH2)16-CO-gGlu-2XADO、HOOC-(CH2)16-CO-gGlu-2XADO-EDA-CO-CH2或HOOC-(CH2)20-CO-gGlu-2XADO-EDA-CO-CH2)(6mg或12mg)。将反应物在室温下搅拌1h。然后将产物施加到使用Source 30Q树脂(通用电气医疗集团)的阴离子交换色谱。
遵循供应商手册，使用针对不同缀合物优化的条件，用沃特世(Waters)BioAccordLC-MS系统通过LC-MS方法，或用沃特世Acquity UPLC系统通过UPLC检测并表征缀合的融合蛋白(如表2所示)。
实施例4：示范性融合蛋白缀合物的体外活性。
方法：
使用过表达人GLP-1受体和CRE荧光素酶报告子的BHK细胞系测量一些示范性融合蛋白缀合物的体外GLP-1活性。测试融合蛋白缀合物在1nM最高浓度下以3倍连续稀释测量。用融合蛋白缀合物处理细胞4小时之后，通过Steadylite plus试剂盒(珀金埃尔默(PerkinElmer)，6066751)测量荧光素酶活性。索马鲁肽作为对照在平行条件下测试。索马鲁肽购自诺和诺德公司(Novo Nordisk)，批次JP51144。根据产品标签，索马鲁肽为在第26残基(赖氨酸)处与HOOC-(CH2)16-CO-gGlu-2XADO缀合的人GLP-1类似物。
使用过表达人β-克洛素(Klotho)的HEK293细胞系评定示范性融合蛋白缀合物的体外FGF21活性。测试融合蛋白缀合物在200nM最高浓度下以3倍连续稀释测量。在用融合蛋白缀合物处理细胞5min之后，通过p-ERK试剂盒(Cisbio，64ERKPEH)测量p-ERK水平。
每种示范性融合蛋白缀合物的活性由从非线性回归分析导出的EC50表示。
结论：
示范性融合蛋白缀合物显示出比索马鲁肽效力低3-9倍的GLP-1活性，和与天然FGF21相比相似或相同量级的FGF21活性(表3)。
表3：示范性融合蛋白缀合物的体外活性。
Figure BDA0003289128460000661
Figure BDA0003289128460000671
实施例5：示范性融合蛋白缀合物的体内活性。
方法：
将10周龄雄性C57BL/6小鼠每天用30nmol/kg示范性融合蛋白缀合物皮下注射，持续10或14天(n＝5)。每天监测每只个别动物的体重。第1天和第10天(或第14天)是分子剂量的第一天和最后一天。BW减轻％＝100*(第n天的BW-第1天的BW)/(第1天的BW)。数据指示为平均值和标准误差(SEM)或合并值。通过单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计分析。表5中第11天的体重减轻通过-1*(BW减轻％-媒剂组的BW减轻％)计算。
表5第11天C57BL/6小鼠的体重减轻
Figure BDA0003289128460000672
Figure BDA0003289128460000681
结论：
在10天给药时段期间，与索马鲁肽相比，所有测试示范性融合蛋白缀合物(化合物4、5和10)展现更加增强和持续的体重减轻(图1A-1B)。在14天给药时段期间，与索马鲁肽相比，所有测试示范性融合蛋白缀合物(化合物2和9-15)展现更加增强和持续的体重减轻(图1C-1D)。与媒剂对照相比，所有测试示范性融合蛋白缀合物(化合物19-22)展现持续体重减轻(图1E-1F)。表5中的所有测试分子显示比索马鲁肽更好的体重减轻功效。然而，与化合物10和13相比，化合物14展现较低体重减轻功效，指示带有负电荷的接头可对融合蛋白活性具有不利影响。
实施例6：示范性融合蛋白缀合物的药代动力学测量
方法：
将6-8周龄雄性C57BL/6小鼠以30nmol/kg示范性融合蛋白缀合物(化合物4、9、10、19、63)或非酰化融合蛋白(即化合物3，其具有与化合物2相同的氨基酸序列但不具有任何缀合)的单一皮下剂量施用(n＝3/组)。在剂量前(-5min)，注射后0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时和24小时收集血浆样品。对于化合物3，血浆收集时间点为-5min、0.25h、0.5h、1h、2h、4h和6h。通过ELISA分析测量血浆中融合蛋白缀合物或非酰化融合蛋白的浓度，所述分析具有针对C端FGF21和GLP-1的完整N端两者的免疫反应性。基于显示每种蛋白质的血浆浓度与皮下注射后时间的图，通过WinNonlin计算药代动力学参数。
结论：
包括化合物4、9、10、19和63的酰化融合蛋白缀合物显示比非酰化融合蛋白(即化合物3)更长的T1/2和更大的AUC，表明CRM缀合改良药代动力学概况。此外，与单酰化分子相比，双酰化显著延长蛋白质缀合物的半衰期(双酰化化合物4和19相比于单酰化化合物9和10)。化合物4和19还显示比索马鲁肽更好的药代动力学特性(图2和表4)。
表4：药代动力学参数。
Figure BDA0003289128460000691
通过WinNonlin软件分析药代动力学数据。计算每种分子的Tmax、Cmax、T1/2、AUC和MRT。
实施例7.GLP-1/FGF21融合蛋白缀合物与单独GLP1和单独FGF21的比较。
方法：
将17周龄DIO雄性C57BL/6小鼠(约45g)每天皮下注射指定蛋白质(即化合物63、69和70)，持续21天。每天测量体重，并且每个处理组使用五只动物。第1天和第21天是分子剂量的第一天和最后一天。BW减轻％＝100*(第n天的BW-第1天的BW)/(第1天的BW)。数据指示为平均值和标准误差(SEM)。
结论：
如图3A-3B中所示，在10nmol/kg和30nmol/kg两者下的化合物63显示比单独GLP1(化合物70)和单独FGF21(化合物69)更好的体重控制，指示当组合GLP1与FGF21时存在累加或协同效应。
实施例8疾病模型中的功效研究
在疾病动物模型(DIO小鼠、db/db小鼠、NASH模型等)中评定所选融合蛋白缀合物，以确定体重、食物摄入量、葡萄糖功效与剂量反应。还测量一些生物标记，包括空腹胰岛素、血浆甘油三酯和肝甘油三酯。
方法：
将17周龄DIO雄性C57BL/6小鼠(约45g)每天皮下注射指定蛋白质(即化合物63)，持续21天。每天测量体重，并且每个处理组使用五只动物。还在指定日监测空腹血糖。监测每只个别动物的体重和葡萄糖。第1天和第21天是分子剂量的第一天和最后一天。BW减轻％＝100*(第n天的BW-第1天的BW)/(第1天的BW)。收集终末血液，并且制备EDTA-2k血浆且将其在-80℃中冷冻以供生物标记测量。还收集肝并且将其在液氮中冷冻且储存在-80℃中。
数据指示为平均值和标准误差(SEM)。通过单因素方差分析进行统计分析。
结论：
图4A-4F显示30nmol/kg化合物63得到比30nmol/kg索马鲁肽更好的体重和血糖控制和血脂谱。当比较10nmol/kg和30nmol/kg结果时还观察到剂量依赖性功效。
实施例9：非人灵长类动物中的PK研究。
分别通过皮下和静脉内注射在猴中评定所选融合蛋白缀合物的药代动力学。
实施例10：稳定性研究。
为了测试稳定性，将不同缀合融合蛋白配制于具有不同组成(pH 6、7、7.4和8.0)的缓冲液中，并且在4℃下储存2-4周。通过尺寸排阻色谱法(SEC)-HPLC分析HMWP％和LMW％。通过反相(RP)-UPLC和LC/MS分析浓度和修饰。
实施例11：免疫原性评定。
还通过计算机模拟(iTope和TCED方法)和离体(EpiScreen)方法评定所选融合蛋白缀合物的免疫原性。
序列表
<110> 北京质肽生物医药科技有限公司
（BEIJING QL BIOPHARMACEUTICAL CO., LTD.）
<120> GLP-1和FGF21的融合蛋白的缀合物
<130> 074585-8002CN01
<150> PCT/CN2020/130515
<151> 2020-11-20
<150> PCT/CN2020/071566
<151> 2020-01-11
<160> 171
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 1
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Cys Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 2
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 2
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Lys Ser
225 230
<210> 3
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 3
Gly Pro Ala Ser Gly Pro Ala Ser Gly Pro Ala Ser Gly Pro Ala Ser
1 5 10 15
Gly Pro Ala Ser
20
<210> 4
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 4
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Lys Ser
225 230
<210> 5
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 5
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Ala Ser
225 230
<210> 6
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 6
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Ala Ser
225 230
<210> 7
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 7
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Ala Ser
225 230
<210> 8
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 8
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Ala Ser
225 230
<210> 9
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 9
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Lys Ser
225 230
<210> 10
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 10
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 11
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 11
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 12
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 12
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 13
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 13
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 14
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 14
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gln Glu Pro Gly Gln Glu Pro Gly Gln Glu Pro Gly Gln Glu Pro Gly
35 40 45
Gln Glu Pro His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 15
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 15
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Pro Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Lys Ser
225 230
<210> 16
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 16
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 17
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 17
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 18
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 18
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 19
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 19
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 20
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 20
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 21
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 21
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 22
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 22
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Lys
225 230
<210> 23
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 23
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 24
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 24
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 25
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 25
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 26
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 26
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe
35 40 45
Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln
50 55 60
Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala
65 70 75 80
Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro
85 90 95
Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln
100 105 110
Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala
115 120 125
Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln
130 135 140
Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro
145 150 155 160
His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro
165 170 175
Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln
180 185 190
Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser
195 200 205
Gln Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
210 215
<210> 27
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 27
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser
35 40 45
Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr
50 55 60
Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly
65 70 75 80
Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu
85 90 95
Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser
100 105 110
Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His
115 120 125
Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly
130 135 140
Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro
145 150 155 160
Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg
165 170 175
Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly
180 185 190
Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser
195 200 205
Leu Val Gly Gly Ser Gln Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
210 215 220
<210> 28
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 28
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu
65 70 75 80
Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp
85 90 95
Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val
100 105 110
Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala
115 120 125
Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe
130 135 140
Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn
165 170 175
Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln
180 185 190
Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu
195 200 205
Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu
210 215 220
Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val
225 230 235 240
Gly Gly Ser Gln Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
245 250
<210> 29
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 29
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
65 70 75 80
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
85 90 95
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys His
100 105 110
Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg
115 120 125
Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu
130 135 140
Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro
145 150 155 160
Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile
165 170 175
Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala
180 185 190
Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu
195 200 205
Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly
210 215 220
Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala
225 230 235 240
Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala
245 250 255
Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly
260 265 270
Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Lys Arg Ser Pro
275 280 285
Ser Tyr Glu Ser
290
<210> 30
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 30
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 31
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 31
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys His
65 70 75 80
Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg
85 90 95
Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu
100 105 110
Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro
115 120 125
Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile
130 135 140
Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala
145 150 155 160
Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu
165 170 175
Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly
180 185 190
Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala
210 215 220
Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly
225 230 235 240
Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Lys Arg Ser Pro
245 250 255
Ser Tyr Glu Ser
260
<210> 32
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 32
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu
65 70 75 80
Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp
85 90 95
Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val
100 105 110
Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala
115 120 125
Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe
130 135 140
Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn
165 170 175
Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln
180 185 190
Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu
195 200 205
Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu
210 215 220
Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val
225 230 235 240
Gly Gly Ser Gln Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
245 250
<210> 33
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 33
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu
35 40 45
Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp
50 55 60
Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val
65 70 75 80
Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala
85 90 95
Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe
100 105 110
Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp
115 120 125
Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn
130 135 140
Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln
145 150 155 160
Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu
165 170 175
Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu
180 185 190
Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val
195 200 205
Gly Gly Ser Gln Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
210 215 220
<210> 34
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 34
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
35 40 45
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
50 55 60
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
65 70 75 80
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
85 90 95
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
100 105 110
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
115 120 125
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
130 135 140
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
145 150 155 160
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
165 170 175
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
180 185 190
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
195 200 205
Lys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
210 215
<210> 35
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 35
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 36
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 36
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Ala Ser
180
<210> 37
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 37
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Lys Ser
180
<210> 38
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 38
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Ala Ser
180
<210> 39
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 39
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Ala Ser
180
<210> 40
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 40
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Lys Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Ala Ser
180
<210> 41
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 41
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser
180
<210> 42
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 42
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser
180
<210> 43
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 43
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Lys Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser
180
<210> 44
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 44
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Lys Ser
180
<210> 45
<211> 180
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 45
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Lys
180
<210> 46
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 46
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Lys Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser
180
<210> 47
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 47
Gly Pro Ser Ala Gly Pro Ser Ala Gly Pro Ser Ala Gly Pro Ser Ala
1 5 10 15
Gly Pro Ser Ala
20
<210> 48
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 48
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 49
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 49
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ser
20
<210> 50
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 50
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
20 25 30
<210> 51
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa为His、咪唑-4-乙酸（IA）或咪唑丙酸（IPA）。
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa为Ala、Gly、Ser、Val、Aib、Thr、Ile或Leu。
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> Xaa为Gly或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa为Lys、Arg或Cys。
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> Xaa为Glu、Lys或Cys。
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)..(28)
<223> Xaa为Arg、Lys或Cys。
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa为Lys、Arg、Gly或Cys。
<400> 51
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa
1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Xaa Phe Ile Ala Trp Leu Val Xaa Gly Xaa Gly
20 25 30
<210> 52
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 52
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly
20 25 30
<210> 53
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 53
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly
20 25 30
<210> 54
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 54
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 55
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 55
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro
20
<210> 56
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 56
Gly Gln Glu Pro Gly Gln Glu Pro Gly Gln Glu Pro Gly Gln Glu Pro
1 5 10 15
Gly Gln Glu Pro
20
<210> 57
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 57
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 58
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 59
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 59
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40
<210> 60
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
50 55 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
65 70 75 80
<210> 61
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 61
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 62
<211> 48
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 62
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
<210> 63
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 63
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 64
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5
<210> 65
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 65
Gly Ala Gln Pro
1
<210> 66
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 66
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Lys
20
<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 67
Gly Gly Gly Gly Lys
1 5
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 68
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys
1 5 10
<210> 69
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 69
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys
35 40
<210> 70
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 70
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
50 55 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys
65 70 75 80
<210> 71
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 71
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys
20
<210> 72
<211> 48
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 72
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys
35 40 45
<210> 73
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 73
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys
35 40
<210> 74
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 74
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys
1 5
<210> 75
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 75
Gly Ala Gln Lys
1
<210> 76
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 76
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu
65 70 75 80
Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp
85 90 95
Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val
100 105 110
Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala
115 120 125
Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe
130 135 140
Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn
165 170 175
Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln
180 185 190
Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu
195 200 205
Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu
210 215 220
Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val
225 230 235 240
Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
245 250
<210> 77
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 77
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe
35 40 45
Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln
50 55 60
Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala
65 70 75 80
Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro
85 90 95
Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln
100 105 110
Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala
115 120 125
Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln
130 135 140
Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro
145 150 155 160
His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro
165 170 175
Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln
180 185 190
Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser
195 200 205
Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
210 215
<210> 78
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 78
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser
35 40 45
Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr
50 55 60
Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly
65 70 75 80
Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu
85 90 95
Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser
100 105 110
Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His
115 120 125
Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly
130 135 140
Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro
145 150 155 160
Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg
165 170 175
Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly
180 185 190
Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser
195 200 205
Leu Val Gly Lys Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
210 215 220
<210> 79
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 79
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu
65 70 75 80
Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp
85 90 95
Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val
100 105 110
Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala
115 120 125
Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe
130 135 140
Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn
165 170 175
Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln
180 185 190
Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu
195 200 205
Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu
210 215 220
Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val
225 230 235 240
Gly Lys Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
245 250
<210> 80
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 80
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
65 70 75 80
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
85 90 95
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys His
100 105 110
Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg
115 120 125
Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu
130 135 140
Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro
145 150 155 160
Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile
165 170 175
Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala
180 185 190
Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu
195 200 205
Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly
210 215 220
Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala
225 230 235 240
Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala
245 250 255
Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly
260 265 270
Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln Gly Arg Ser Pro
275 280 285
Ser Tyr Glu Ser
290
<210> 81
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 81
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys His
65 70 75 80
Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg
85 90 95
Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu
100 105 110
Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro
115 120 125
Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile
130 135 140
Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala
145 150 155 160
Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu
165 170 175
Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly
180 185 190
Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala
195 200 205
Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala
210 215 220
Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly
225 230 235 240
Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln Gly Arg Ser Pro
245 250 255
Ser Tyr Glu Ser
260
<210> 82
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 82
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu
65 70 75 80
Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp
85 90 95
Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val
100 105 110
Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala
115 120 125
Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe
130 135 140
Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn
165 170 175
Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln
180 185 190
Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu
195 200 205
Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu
210 215 220
Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val
225 230 235 240
Gly Lys Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
245 250
<210> 83
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 83
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu
35 40 45
Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp
50 55 60
Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val
65 70 75 80
Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala
85 90 95
Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe
100 105 110
Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp
115 120 125
Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn
130 135 140
Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln
145 150 155 160
Arg Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu
165 170 175
Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu
180 185 190
Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val
195 200 205
Gly Lys Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
210 215 220
<210> 84
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 84
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
35 40 45
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
50 55 60
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
65 70 75 80
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
85 90 95
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
100 105 110
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
115 120 125
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
130 135 140
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
145 150 155 160
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
165 170 175
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
180 185 190
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
195 200 205
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
210 215
<210> 85
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 85
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 86
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 86
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 87
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 87
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 88
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 88
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Lys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 89
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 89
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 90
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 90
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 91
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 91
Gly Gly Gly Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 92
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 92
Gly Gln Glu Pro
1
<210> 93
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 93
Gly Glu Gln Pro
1
<210> 94
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 94
Gly Pro Gln Glu
1
<210> 95
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 95
Gly Pro Glu Gln
1
<210> 96
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 96
Gly Ser Glu Pro
1
<210> 97
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 97
Gly Glu Ser Pro
1
<210> 98
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 98
Gly Pro Ser Glu
1
<210> 99
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 99
Gly Pro Glu Ser
1
<210> 100
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 100
Gly Gln Ala Pro
1
<210> 101
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 101
Gly Pro Ala Gln
1
<210> 102
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 102
Gly Pro Gln Ala
1
<210> 103
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 103
Gly Ser Gln Pro
1
<210> 104
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 104
Gly Ala Ser Pro
1
<210> 105
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 105
Gly Pro Ala Ser
1
<210> 106
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 106
Gly Pro Ser Ala
1
<210> 107
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 107
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 108
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 108
Gly Ser Gly Ser
1
<210> 109
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 109
Gly Gln Ala Pro Gly Gln Ala Pro Gly Gln Ala Pro Gly Gln Ala Pro
1 5 10 15
Gly Gln Ala Pro
20
<210> 110
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 110
Gly Ser Gln Pro Gly Ser Gln Pro Gly Ser Gln Pro Gly Ser Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ser Gln Pro
20
<210> 111
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 111
Gly Pro Ala Gln Gly Pro Ala Gln Gly Pro Ala Gln Gly Pro Ala Gln
1 5 10 15
Gly Pro Ala Gln
20
<210> 112
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 112
Gly Pro Gln Ala Gly Pro Gln Ala Gly Pro Gln Ala Gly Pro Gln Ala
1 5 10 15
Gly Pro Gln Ala
20
<210> 113
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 113
Gly Ala Ser Pro Gly Ala Ser Pro Gly Ala Ser Pro Gly Ala Ser Pro
1 5 10 15
Gly Ala Ser Pro
20
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 114
Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp
1 5 10
<210> 115
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 115
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Lys Gly
20 25 30
<210> 116
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 116
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Lys
225 230
<210> 117
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 117
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Lys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser Lys
225 230
<210> 118
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 118
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Lys
180
<210> 119
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 119
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Arg Ala Leu Arg Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Arg Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Arg Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser Lys
180
<210> 120
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 120
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly
20 25 30
<210> 121
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 121
Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu Gln Ala
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly
20 25
<210> 122
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 122
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Cys
20
<210> 123
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 123
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Cys
20
<210> 124
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 124
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Cys
20
<210> 125
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 125
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Cys
20 25
<210> 126
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 126
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 127
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 127
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 128
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 128
Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Gly Ser Ala Pro
1 5 10 15
Gly Ser Pro Cys
20
<210> 129
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 129
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 130
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 130
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Cys Gln Ala Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
50 55 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
65 70 75 80
<210> 131
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 131
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Gln Cys Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
50 55 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
65 70 75 80
<210> 132
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 132
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Gln Cys Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
50 55 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
65 70 75 80
<210> 133
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 133
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Cys
20
<210> 134
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 134
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Cys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys
35 40
<210> 135
<211> 168
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 135
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Cys
165
<210> 136
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 136
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser
180
<210> 137
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 137
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Cys Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser
180
<210> 138
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 138
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Cys Ser
180
<210> 139
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 139
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser
180
<210> 140
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 140
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser Cys
180
<210> 141
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 141
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20
<210> 142
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 142
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25
<210> 143
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 143
Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Gly Ser Ala Pro
1 5 10 15
Gly Ser Pro Ala
20
<210> 144
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 144
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 145
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 145
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Gln Ala Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
50 55 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
65 70 75 80
<210> 146
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 146
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Gln Ala Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
50 55 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
65 70 75 80
<210> 147
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 147
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Gln Ala Pro Gly Ala Gln Pro
1 5 10 15
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
20 25 30
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
35 40 45
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
50 55 60
Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro
65 70 75 80
<210> 148
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 148
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 149
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 149
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Cys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 150
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 150
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser Cys
225 230
<210> 151
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 151
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Cys Ser
225 230
<210> 152
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 152
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 153
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 153
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Cys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 154
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 154
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Cys Ser
225 230
<210> 155
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 155
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu
50 55 60
Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp
65 70 75 80
Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val
85 90 95
Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala
100 105 110
Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe
115 120 125
Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp
130 135 140
Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn
145 150 155 160
Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln
165 170 175
Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu
180 185 190
Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu
195 200 205
Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val
210 215 220
Gly Gly Ser Gln Cys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230 235
<210> 156
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 156
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Cys His Pro Ile Pro Asp
50 55 60
Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu
65 70 75 80
Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu
85 90 95
Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu
100 105 110
Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys
115 120 125
Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser
130 135 140
Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu
145 150 155 160
Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His
165 170 175
Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro
180 185 190
Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro
195 200 205
Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro
210 215 220
Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Cys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230 235 240
<210> 157
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 157
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Cys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 158
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 158
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Cys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 159
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 159
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Cys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 160
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 160
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 161
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 161
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 162
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 162
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 163
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 163
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Gly Ser Ala Pro Gly
35 40 45
Ser Pro Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Cys Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 164
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 164
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser His Pro Ile
50 55 60
Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg
65 70 75 80
Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile
85 90 95
Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser
100 105 110
Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly
115 120 125
Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr
130 135 140
Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu
145 150 155 160
Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro
165 170 175
Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg
180 185 190
Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro
195 200 205
Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser
210 215 220
Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Cys Arg Ser Pro Ser Tyr
225 230 235 240
Glu Ser
<210> 165
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 165
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Gly Ser Ala Pro Gly
35 40 45
Ser Pro Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln
210 215 220
Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 166
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 166
Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu Gln Ala
1 5 10 15
Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
35 40 45
Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln
50 55 60
Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala
65 70 75 80
His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln
85 90 95
Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile
100 105 110
Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp
115 120 125
Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe
130 135 140
Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala
145 150 155 160
His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp
165 170 175
Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro
180 185 190
Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp
195 200 205
Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln Gly Arg
210 215 220
Ser Pro Ser Tyr Glu Ser
225 230
<210> 167
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 167
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Cys His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly
50 55 60
Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr
65 70 75 80
Glu Ala His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala
85 90 95
Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly
100 105 110
Val Ile Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg
115 120 125
Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys
130 135 140
Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser
145 150 155 160
Glu Ala His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His
165 170 175
Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly
180 185 190
Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro
195 200 205
Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Cys
210 215
<210> 168
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 168
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Cys Gln Ala Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
65 70 75 80
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
85 90 95
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro His
100 105 110
Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg
115 120 125
Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu
130 135 140
Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro
145 150 155 160
Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile
165 170 175
Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala
180 185 190
Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu
195 200 205
Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly
210 215 220
Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala
225 230 235 240
Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala
245 250 255
Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly
260 265 270
Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln Gly Arg Ser Pro
275 280 285
Ser Tyr Glu Ser
290
<210> 169
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 169
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Gln Cys Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
65 70 75 80
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
85 90 95
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro His
100 105 110
Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg
115 120 125
Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu
130 135 140
Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro
145 150 155 160
Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile
165 170 175
Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala
180 185 190
Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu
195 200 205
Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly
210 215 220
Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala
225 230 235 240
Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala
245 250 255
Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly
260 265 270
Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln Gly Arg Ser Pro
275 280 285
Ser Tyr Glu Ser
290
<210> 170
<211> 292
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 170
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Gln Cys Pro Gly Ala Gln Pro Gly
35 40 45
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
50 55 60
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
65 70 75 80
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly
85 90 95
Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro Gly Ala Gln Pro His
100 105 110
Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg
115 120 125
Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu
130 135 140
Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro
145 150 155 160
Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile
165 170 175
Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala
180 185 190
Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu
195 200 205
Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly
210 215 220
Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala
225 230 235 240
Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala
245 250 255
Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly
260 265 270
Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Cys Ser Gln Gly Arg Ser Pro
275 280 285
Ser Tyr Glu Ser
290
<210> 171
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成物
<400> 171
His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val
1 5 10 15
Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His
20 25 30
Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Lys Thr Cys Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly
65 70 75 80
Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg
85 90 95
Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His
100 105 110
Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Gln Lys Ser Pro His Arg Asp Pro
115 120 125
Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val
145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Leu Val Gly Gly Ser Gln Gly Arg Ser
165 170 175
Pro Ser Tyr Glu Ser
180

Claims (75)

1.一种多肽缀合物，其包含与至少一个清除率降低部分(CRM)缀合的融合多肽，
其中所述融合多肽从N端到C端包含GLP-1、多肽接头和FGF21或基本上由其组成；
其中所述至少一个CRM与所述融合多肽中的至少一个可缀合残基缀合；并且
其中所述多肽接头的长度为至少0-120个氨基酸残基。
2.根据权利要求1所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头的长度为至少4、5、8、10、20、24、28、30、40、48、50、60、70、80、90、100、110或120个氨基酸残基。
3.根据权利要求1所述的多肽缀合物，其中所述多肽缀合物不包含抗体片段(例如Fc)。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽缀合物，其中所述融合多肽包含至多一个可缀合残基或至多两个可缀合残基。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽缀合物，其中所述融合多肽包含与CRM缀合的第一可缀合残基，并且其中所述第一可缀合残基在所述FGF21中、在所述多肽接头中或在所述GLP-1中。
6.根据权利要求4所述的多肽缀合物，其中所述融合多肽包含第一可缀合残基和第二可缀合残基，其中：
1)两个可缀合残基均存在于所述多肽接头中，
2)两个可缀合残基均存在于所述FGF21中，
3)两个可缀合残基均存在于所述GLP-1中，
4)所述第一可缀合残基存在于所述FGF21中并且所述第二可缀合残基存在于所述多肽接头中，
5)所述第一可缀合残基存在于所述GLP-1中并且所述第二可缀合残基存在于所述FGF2中，或
6)所述第一可缀合残基存在于所述GLP-1中并且所述第二可缀合残基存在于所述多肽接头中。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽缀合物，其中所述第一可缀合残基为赖氨酸、半胱氨酸或非天然氨基酸残基，或所述第一可缀合残基和所述第二可缀合残基均为赖氨酸、半胱氨酸或非天然氨基酸残基。
8.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21包含与SEQ ID NO:36具有至少90％序列同一性的氨基酸序列同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性，和/或所述GLP-1包含与SEQ ID NO:50具有至少70％序列同一性的氨基酸序列同时保留SEQ IDNO:50的基本生物活性。
9.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1相对于SEQ ID NO:50包含不超过9、8、7、6、5、4、3个突变并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性，和/或所述FGF21相对于SEQ ID NO:36包含不超过12、11、10、9、8、7个突变并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性。
10.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21在选自相对于SEQID NO:36的121、168、171、180和181的位置处包含一个或多个突变。
11.根据权利要求10所述的多肽缀合物，其中FGF21中的所述一个或多个突变选自N121Q、M168L、P171G、A180E和del181S，或其任何组合。
12.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。
13.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基位于选自相对于SEQ ID NO:36的位置170、171、172、173、174、180、181、71和182的位置。
14.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
15.根据权利要求14所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基为赖氨酸。
16.根据权利要求15所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170K、P171K、S172K、Q173K、G174K、A180K、S181K、S71K和ins182K。
17.根据权利要求15或16所述的多肽缀合物，其中所述FGF21在选自相对于SEQ ID NO:36的K56、K59、K69和K122位置处进一步包含一个或多个突变，所述突变是突变为不可缀合残基。
18.根据权利要求17所述的多肽缀合物，其中所述不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
19.根据权利要求18所述的多肽缀合物，其中所述FGF21包含K56R、K59R、K69R和K122R的突变。
20.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：
1)121Q、168L、180K、171G、56R、59R、69R和122R；
2)121Q、168L、171K、56R、59R、69R和122R；
3)121Q、168L、174K、171G、56R、59R、69R和122R；
4)121Q、168L、171K、56R、59R、69R、122R和180E；
5)121Q、168L、174K、171G、56R、59R、69R、122R和180E；
6)121Q、168L、180K、56R、59R、69R和122R；
7)121Q、168L、180K、171G、56R、59R、69R、122R和del181S；
8)121Q、168L、170K、56R、59R、69R和122R；
9)121Q、168L、170K、56R、59R、69R、122R和180E；
10)121Q、168L、170K、171G、56R、59R、69R、122R和180E
11)121Q、168L、180E、171G、56R、59R、69R、122R和181K；
12)121Q、168L、180E、171G、56R、59R、69R、122R和ins182K
13)71K、121Q、168L、56R、59R、69R和122R；
14)71K、121Q、168L、171G、56R、59R、69R和122R；以及
15)71K、121Q、168L、171G、56R、59R、69R、122R、180E。
21.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21包含选自SEQ IDNO:37-46和118-119的氨基酸序列。
22.根据权利要求14所述的多肽缀合物，其中FGF21中的所述可缀合残基为半胱氨酸。
23.根据权利要求22所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170C、P171C、S172C、Q173C、G174C、A180C、S181C、S71C和ins182C。
24.根据权利要求12、22和23中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21相对于SEQID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：
1)121Q、168L、171C、180E；
2)121Q、168L、171G、174C、180E；
3)121Q、168L、171G、180C；
4)121Q、168L、171G、180E；
5)71C、121Q、168L、171G、180E；以及
6)121Q、168L、180E、171G、ins 182C。
25.根据权利要求12和22至24中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21包含选自SEQ ID NO:136-140和171的氨基酸序列。
26.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1在选自下组的位置处包含一个或多个突变：A8、G22、K34、R36和H7，或其任何组合，相对于SEQ ID NO:50。
27.根据权利要求26所述的多肽缀合物，其中所述一个或多个突变选自下组：H7IA、H7IPA、A8G、G22E、K34R和R36G，或其任何组合。
28.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。
29.根据权利要求28所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1中的所述可缀合残基为赖氨酸。
30.根据权利要求29所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1中的所述可缀合残基包含以下或由以下组成：K26或K34，相对于SEQ ID NO:50。
31.根据权利要求29所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1中的所述可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
32.根据权利要求26所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1中的所述可缀合残基通过选自下组的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的E27K和R36K。
33.根据权利要求30至32中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1进一步包含将K26和/或K34取代为不可缀合残基，条件是如果K26或K34为所述可缀合残基，则其不被取代。
34.根据权利要求33所述的多肽缀合物，其中所述不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。
35.根据权利要求33或34所述的多肽缀合物，其中K26的取代选自K26R和K26Q，和/或K34处的取代选自K34R和K34Q。
36.根据权利要求28所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1中的所述可缀合残基包含半胱氨酸或非天然氨基酸或由其组成。
37.根据权利要求36所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1中的所述可缀合残基通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26、K34、E27和R36。
38.根据权利要求37所述的融合多肽，其中所述GLP-1中的所述可缀合残基包含半胱氨酸或由其组成，并且是通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26C、K34C、E27C和R36C。
39.根据权利要求26至38中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1包含氨基酸序列X7X8EGTFTSDVSSYLEX22QAAX26X27FIAWLVX34GX36G(SEQ ID NO:51)，其中：X7为H、咪唑-4-乙酸(IA)或咪唑丙酸(IPA)；X8为A、G、S、V、Aib、T、I或L；X22为G或E；X26为K、R或C；X27为E、K或C；X34为R、K或C，并且X36为K、R、G或C。
40.根据权利要求39所述的多肽缀合物，其中X7为H，X8为G，X22为E；X26为K或R；X27为E；X34为R，并且X36为G。
41.根据权利要求26至35、39和40中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:52、53和115。
42.根据权利要求36至40中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP-1包含SEQ ID NO:120或52的氨基酸序列。
43.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头包含重复序列的一个或多个单元。
44.根据权利要求43所述的多肽缀合物，其中所述重复序列由不超过4、5或6种类型的选自下组的氨基酸残基组成：G、Q、A、E、P、T和S。
45.根据权利要求43所述的多肽缀合物，其中所述重复序列包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：GaSb、SEQ ID NO:65(GAQP)、SEQ ID NO:92(GQEP)、SEQ ID NO:93(GEQP)、SEQID NO:94(GPQE)、SEQ ID NO:95(GPEQ)、SEQ ID NO:96(GSEP)、SEQ ID NO:97(GESP)、SEQID NO:98(GPSE)、SEQ ID NO:99(GPES)、SEQ ID NO:100(GQAP)、SEQ ID NO:101(GPAQ)、SEQID NO:102(GPQA)、SEQ ID NO:103(GSQP)、SEQ ID NO:104(GASP)、SEQ ID NO:105(GPAS)、SEQ ID NO:106(GPSA)、SEQ ID NO:107(GGGS)、SEQ ID NO:108(GSGS)、SEQ ID NO:57(GGGGS)、SEQ ID NO:143(GSAPGSPAGSPTGSAPGSPA)以及GS，其中a和b独立地为选自1到5的整数。
46.根据权利要求43至45中任一项所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头包含选自SEQID NO:54-65、109-113、3、47-49和141-147的氨基酸序列。
47.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基，或至多两个可缀合残基。
48.根据权利要求47所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头中的所述可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。
49.根据权利要求48所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头中的所述可缀合残基是所述多肽接头的最C端残基，或与所述GLP-1的最C端残基相距至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个残基(包括可缀合残基)。
50.根据权利要求48或49所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头中的所述可缀合残基为赖氨酸，并且所述多肽接头包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:66-75和89-91。
51.根据权利要求48或49所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头中的所述可缀合残基为半胱氨酸，并且所述多肽接头包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:122-132。
52.根据权利要求51所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头包含两个可缀合残基并且包含SEQ ID NO:133或134的氨基酸序列。
53.根据权利要求1至21、26至35、39至41、43至50中任一项所述的多肽缀合物，其中所述可缀合残基为赖氨酸，并且所述融合多肽包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4-22、24、26-35、77-88、116-117。
54.根据权利要求1至14、22至28、36至40、42至49、51和52中任一项所述的多肽缀合物，其中所述可缀合残基为半胱氨酸，并且所述融合多肽包含选自下组的氨基酸序列：148-165、168-170、1、23、25和76。
55.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，
其中所述CRM包含*-A-B-C-D-E的结构，并且
其中：
A选自键、
Figure FDA0003289128450000071
a、b、c和d独立地为0到4的整数，R1为氢或-COOH；
B选自键、
Figure FDA0003289128450000072
e为1到4的整数，
C为键或
Figure FDA0003289128450000073
R2为-CH2SO3H或-COOH，f为1到4的整数，n为1到25的整数；
D选自键、
Figure FDA0003289128450000074
g和h独立地为0或1，并且R3为H或-CH2COOH；
E为具有下式的酸性基团：
Figure FDA0003289128450000075
其中W表示-(CR4R5)l-，
R4和R5独立地选自下组：氢、卤素、氰基、羟基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羟烷基、氨基、氨基烷基、羧基、羧基烷基、烷氧基、芳氧基和羧酰胺，
R6选自羟基或NR7R8；
R7和R8独立地选自下组：氢、烷基、羟基和
Figure FDA0003289128450000081
并且
l为10到20的整数，
或其药学上可接受的盐。
56.根据权利要求55所述的缀合物，其中所述CRM与所述融合多肽中的至少一个赖氨酸残基缀合。
57.根据权利要求56所述的多肽缀合物，其中A为键，B为
Figure FDA0003289128450000082
C为
Figure FDA0003289128450000083
D为键，并且E为具有下式的酸性基团：
Figure FDA0003289128450000084
其中e为1、2或3，f为1、2或3，并且n为1或2，并且R6、R2和W如权利要求48中所定义。
58.根据权利要求57所述的多肽缀合物，其中R2为-COOH，并且R6为羟基且W在权利要求48中定义。
59.根据权利要求58所述的多肽缀合物，其中W表示-(CR4R5)l-，R4和R5独立地为氢，l为10到20的整数。
60.根据权利要求56所述的多肽缀合物，其中所述CRM包含下式结构：
Figure FDA0003289128450000085
61.根据权利要求55所述的多肽缀合物，其中所述CRM与所述融合多肽中的至少一个半胱氨酸残基缀合。
62.根据权利要求61所述的多肽缀合物，其中A为
Figure FDA0003289128450000091
并且B为
Figure FDA0003289128450000092
63.根据权利要求62所述的多肽缀合物，其中所述CRM包含下式结构：
Figure FDA0003289128450000093
64.一种多肽缀合物，其包含与CRM缀合的融合多肽，其中所述融合多肽包含SEQ IDNO:N的氨基酸序列，以及与所述融合多肽中以N端到C端方向计数的第m残基(其为赖氨酸，即mK)共价连接的所述CRM，并且其中：
1)N为6，m为222，mK为222K(此类缀合物分子也称为化合物6)，
2)N为7，m为221，mK为221K(此类缀合物分子也称为化合物7)，
3)N为8，m为225，mK为225K(此类缀合物分子也称为化合物8)，
4)N为9，m为231，mK为231K(此类缀合物分子也称为化合物9)，
5)N为10，m为222，mK为222K(此类缀合物分子也称为化合物10)，
6)N为11，m为221，mK为221K(此类缀合物分子也称为化合物11)，
7)N为12，m为225，mK为225K(此类缀合物分子也称为化合物12)，
8)N为13，m为222，mK为222K(此类缀合物分子也称为化合物13)，
9)N为14，m为222，mK为222K(此类缀合物分子也称为化合物14)，或
10)N为15，m为231，mK为231K(此类缀合物分子也称为化合物15)，
其中所述CRM具有下式结构：
Figure FDA0003289128450000101
或其药学上可接受的盐。
65.一种多肽缀合物，其包含与CRM缀合的融合多肽，其中所述融合多肽包含SEQ IDNO:N的氨基酸序列，以及与所述融合多肽中以N端到C端方向计数的第m残基(其为半胱氨酸，即mC)共价连接的所述CRM，并且其中：
1)N为25，m为51，mC为51C(此类缀合物分子也称为化合物76)，
其中所述CRM具有下式结构：
Figure FDA0003289128450000102
或其药学上可接受的盐。
66.一种多肽缀合物，其包含与第一CRM和第二CRM缀合的融合多肽
其中所述融合多肽包含SEQ ID NO:X的氨基酸序列，以及分别与所述融合多肽中以N端到C端方向计数的第p残基和第q残基(其均为赖氨酸，即pK或qK)共价连接的所述第一CRM和所述第二CRM，其中一个CRM与一个残基连接，其中：
1)X为2，p为20，pK为20K，q为231，qK为231K(此类缀合物分子也称为化合物2)，
2)X为4，p为51，pK为51K，q为231，qK为231K(此类缀合物分子也称为化合物4)，
3)X为5，p为51，pK为51K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物5)，
4)X为16，p为20，pK为20K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物16)，
5)X为17，p为20，pK为20K，q为221，qK为221K(此类缀合物分子也称为化合物17)，
6)X为18，p为20，pK为20K，q为225，qK为225K(此类缀合物分子也称为化合物18)，
7)X为19，p为51，pK为51K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物19)，
8)X为20，p为51，pK为51K，q为221，qK为221K(此类缀合物分子也称为化合物20)，
9)X为21，p为51，pK为51K，q为225，qK为225K(此类缀合物分子也称为化合物21)，
10)X为22，p为51，pK为51K，q为231，qK为231K(此类缀合物分子也称为化合物22)，
11)X为24，p为51，pK为51K，q为221，qK为221K(此类缀合物分子也称为化合物24)，
12)X为26，p为36，pK为36K，q为210，qK为210K(此类缀合物分子也称为化合物26)，
13)X为27，p为41，pK为41K，q为215，qK为215K(此类缀合物分子也称为化合物27)，
14)X为28，p为71，pK为71K，q为245，qK为245K(此类缀合物分子也称为化合物28)，
15)X为29，p为111，pK为111K，q为285，qK为285K(此类缀合物分子也称为化合物29)，
16)X为30，p为51，pK为51K，q为225，qK为225K(此类缀合物分子也称为化合物30)，
17)X为31，p为79，pK为79K，q为253，qK为253K(此类缀合物分子也称为化合物31)，
18)X为32，p为71，pK为71K，q为245，qK为245K(此类缀合物分子也称为化合物32)，
19)X为33，p为39，pK为39K，q为213，qK为213K(此类缀合物分子也称为化合物33)，
20)X为34，p为35，pK为35K，q为209，qK为209K(此类缀合物分子也称为化合物34)，
21)X为35，p为20，pK为20K，q为221，qK为221K(此类缀合物分子也称为化合物35)，
22)X为77，p为36，pK为36K，q为207，qK为207K(此类缀合物分子也称为化合物37)，
23)X为78，p为41，pK为41K，q为212，qK为212K(此类缀合物分子也称为化合物38)，
24)X为79，p为71，pK为71K，q为242，qK为242K(此类缀合物分子也称为化合物39)，
25)X为80，p为111，pK为111K，q为282，qK为282K(此类缀合物分子也称为化合物40)，
26)X为81，p为79，pK为79K，q为250，qK为250K(此类缀合物分子也称为化合物41)，
27)X为82，p为71，pK为71K，q为242，qK为242K(此类缀合物分子也称为化合物42)，
28)X为83，p为39，pK为39K，q为210，qK为210K(此类缀合物分子也称为化合物43)，
29)X为84，p为35，pK为35K，q为206，qK为206K(此类缀合物分子也称为化合物44)，
30)X为85，p为46，pK为46K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物45，
31)X为86，p为41，pK为41K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物46)，
32)X为87，p为36，pK为36K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物47)，
33)X为88，p为51，pK为51K，q为222，qK为222K(此类缀合物分子也称为化合物48)，
34)X为116，p为51，pK为51K，q为232，qK为232K(此类缀合物分子也称为化合物49)，或
35)X为117，p为51，pK为51K，q为233，qK为233K(此类缀合物分子也称为化合物50)，并且
其中所述CRM具有下式结构：
Figure FDA0003289128450000131
或其药学上可接受的盐。
67.一种多肽缀合物，其包含与第一CRM和第二CRM缀合的融合多肽
其中所述融合多肽包含SEQ ID NO:X的氨基酸序列，以及分别与所述融合多肽中以N端到C端方向计数的第p残基和第q残基(其均为半胱氨酸，即pC或qC)共价连接的所述第一CRM和所述第二CRM，其中一个CRM与一个残基连接，其中：
1)X为148，p为51，pC为51C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物51)，
2)X为149，p为51，pC为51C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物52)，
3)X为150，p为51，pC为51C，q为233，qC为233C(此类缀合物分子也称为化合物53)，
4)X为151，p为51，pC为51C，q为231，qC为231C(此类缀合物分子也称为化合物54)，
5)X为152，p为51，pC为51C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物55)，
6)X为153，p为51，pC为51C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物56)，
7)X为154，p为51，pC为51C，q为231，qC为231C(此类缀合物分子也称为化合物57)，
8)X为155，p为55，pC为55C，q为229，qC为229C(此类缀合物分子也称为化合物58)，
9)X为156，p为59，pC为59C，q为233，qC为233C(此类缀合物分子也称为化合物59)，
10)X为157，p为51，pC为51C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物60)，
11)X为158，p为46，pC为46C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物61)
12)X为159，p为41，pC为41C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物62)，
13)X为160，p为51，pC为51C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物63)，
14)X为161，p为46，pC为46C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物64)，
15)X为162，p为41，pC为41C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物65)，
16)X为163，p为51，pC为51C，q为225，qC为225C(此类缀合物分子也称为化合物66)，
17)X为164，p为46，pC为46C，q为235，qC为235C(此类缀合物分子也称为化合物67)，
18)X为165，p为51，pC为51C，q为222，qC为222C(此类缀合物分子也称为化合物68)，
19)X为168，p为52，pC为52C，q为282，qC为282C(此类缀合物分子也称为化合物71)，
20)X为169，p为62，pC为62C，q为282，qC为282C(此类缀合物分子也称为化合物72)，
21)X为170，p为42，pC为42C，q为282，qC为282C(此类缀合物分子也称为化合物73)，
22)X为1，p为51，pC为51C，q为122，qC为122C(此类缀合物分子也称为化合物74)，
23)X为23，p为40，pC为40C，q为51，qC为51C(此类缀合物分子也称为化合物75)，或
24)X为76，p为50，pC为50C，q为71，qC为71C(此类缀合物分子也称为化合物77)，并且
其中所述CRM具有下式结构：
Figure FDA0003289128450000151
或其药学上可接受的盐。
68.一种药物组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物和药学上可接受的载剂。
69.一种预防或治疗有需要的受试者的代谢病症的方法，其包括施用治疗有效量的根据权利要求1至67中任一项所述的多肽缀合物或根据权利要求68所述的药物组合物。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述代谢病症为糖尿病、肥胖症、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、心血管如血脂异常、动脉硬化、酒精性脂肪性肝炎(ASH)、糖尿病肾病、妊娠期糖尿病、代谢综合征如代谢综合征X、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、终末期肝病、肝脂肪变性(脂肪肝)、肝硬化或原发性胆汁性肝硬化(PBC)。
71.一种多核苷酸，其编码如权利要求1至67中任一项所定义的融合多肽。
72.一种载体，其包含根据权利要求71所述的多核苷酸。
73.一种宿主细胞，其包含根据权利要求72所述的载体。
74.一种用于产生如权利要求1至67中任一项所定义的融合多肽的方法，其包括在允许根据权利要求71所述的多核苷酸表达的条件下培养根据权利要求73所述的宿主细胞。
75.一种用于产生如权利要求1至67中任一项所定义的多肽缀合物的方法，其包括将清除率降低部分与根据权利要求1至67中任一项所述的融合多肽缀合。
CN202180002753.4A 2020-01-11 2021-01-08 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物 Active CN113728013B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210573902.9A CN115322794A (zh) 2020-01-11 2021-01-08 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2020071566 2020-01-11
CNPCT/CN2020/071566 2020-01-11
CN2020130515 2020-11-20
CNPCT/CN2020/130515 2020-11-20
PCT/CN2021/070766 WO2021139744A1 (en) 2020-01-11 2021-01-08 Conjugates of fusion proteins of glp-1 and fgf21

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210573902.9A Division CN115322794A (zh) 2020-01-11 2021-01-08 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113728013A true CN113728013A (zh) 2021-11-30
CN113728013B CN113728013B (zh) 2022-06-14

Family

ID=76787757

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180002753.4A Active CN113728013B (zh) 2020-01-11 2021-01-08 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物
CN202210573902.9A Pending CN115322794A (zh) 2020-01-11 2021-01-08 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210573902.9A Pending CN115322794A (zh) 2020-01-11 2021-01-08 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物

Country Status (3)

Country Link
US (1) US11510990B2 (zh)
CN (2) CN113728013B (zh)
WO (1) WO2021139744A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114874314A (zh) * 2021-12-28 2022-08-09 北京惠之衡生物科技有限公司 一种长效glp-1衍生物
WO2023035817A1 (zh) 2021-09-08 2023-03-16 北京志道生物科技有限公司 一种fgf21突变蛋白及其应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2023008330A (es) 2021-01-20 2024-01-18 Viking Therapeutics Inc Agonistas del receptor dual gip/glp-1 de molécula pequeña, composiciones farmacéuticas y preparación de las mismas para usarse en el tratamiento de trastornos metabólicos y hepáticos.
CN117241821B (zh) * 2022-03-25 2024-04-09 北京质肽生物医药科技有限公司 多肽缀合物的药物组合物及其使用方法
WO2023186003A1 (en) * 2022-03-30 2023-10-05 Beijing Ql Biopharmaceutical Co., Ltd. Liquid pharmaceutical compositions of polypeptide conjugates and methods of uses thereof

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102361647A (zh) * 2009-01-23 2012-02-22 诺沃-诺迪斯克有限公司 具有白蛋白结合剂a-b-c-d-e-的fgf21衍生物及其应用
CN104024273A (zh) * 2011-09-26 2014-09-03 诺华股份有限公司 用于治疗代谢疾病的双功能蛋白
CN108570109A (zh) * 2017-03-14 2018-09-25 广东东阳光药业有限公司 包含免疫球蛋白Fc部分的双靶点融合蛋白
CN108602869A (zh) * 2015-12-02 2018-09-28 赛诺菲 Fgf21变体
CN110028587A (zh) * 2018-01-11 2019-07-19 安源生物科技(上海)有限公司 用于调节血糖和脂质的增效型双功能蛋白
CN110087671A (zh) * 2016-12-22 2019-08-02 赛诺菲 具有优化的活性比率的fgf21化合物/glp-1r激动剂组合
CN110128525A (zh) * 2018-02-08 2019-08-16 广东东阳光药业有限公司 Fgf21变体、融合蛋白及其应用

Family Cites Families (84)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US7235627B2 (en) 1996-08-30 2007-06-26 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
MA24129A1 (fr) 1996-08-30 1997-10-01 Novozymes As Procede pour deformer une matiere textile cellulosique
UA65549C2 (uk) 1996-11-05 2004-04-15 Елі Ліллі Енд Компані Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція
EP0968223B1 (en) 1997-01-08 2016-12-21 Sigma-Aldrich Co. LLC Bioconjugation of macromolecules
US6444788B1 (en) 1999-03-15 2002-09-03 Novo Nordisk A/S Ion exchange chromatography of GLP-1, analogs and derivatives thereof
US7459540B1 (en) 1999-09-07 2008-12-02 Amgen Inc. Fibroblast growth factor-like polypeptides
US20020081663A1 (en) 2000-01-05 2002-06-27 Conklin Darrell C. Novel FGF homolog ZFGF11
ATE424413T1 (de) 2000-06-16 2009-03-15 Lilly Co Eli Analoge des glucagon-ähnlichen peptids-1
WO2002085923A2 (en) 2001-04-19 2002-10-31 The Scripps Research Institute In vivo incorporation of unnatural amino acids
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US20040259780A1 (en) 2001-07-30 2004-12-23 Glasebrook Andrew Lawrence Method for treating diabetes and obesity
AR036711A1 (es) 2001-10-05 2004-09-29 Bayer Corp Peptidos que actuan como agonistas del receptor del glp-1 y como antagonistas del receptor del glucagon y sus metodos de uso farmacologico
US7041646B2 (en) 2001-10-05 2006-05-09 Bayer Pharmaceuticals Corporation Methods of treating type 2 diabetes with peptides acting as both GLP-1 receptor agonists and glucagon receptor antagonists
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
KR100758755B1 (ko) 2003-06-12 2007-09-14 일라이 릴리 앤드 캄파니 Ｇｌｐ-1 유사체 융합 단백질
DE602004011770T2 (de) 2003-06-12 2009-02-05 Eli Lilly And Co., Indianapolis Fusionsproteine
US7993872B2 (en) 2003-06-18 2011-08-09 The Scripps Research Institute Unnatural reactive amino acid genetic code additions
SG10201701737XA (en) 2003-11-06 2017-04-27 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005061712A1 (en) 2003-12-10 2005-07-07 Eli Lilly And Company Muteins of fibroblast growth factor 21
EP1727559A1 (en) 2004-01-26 2006-12-06 Eli Lilly And Company Use of fgf-21 and a thiazolidinedione for treating type 2 diabetes
US20070265200A1 (en) 2004-03-17 2007-11-15 Eli Lilly And Company Glycol Linked Fgf-21 Compounds
SI1751184T1 (sl) 2004-05-13 2010-01-29 Lilly Co Eli Fgf-21 fuzijski proteini
AU2005265163B2 (en) 2004-06-18 2009-10-01 Ambrx, Inc. Novel antigen-binding polypeptides and their uses
US7534763B2 (en) 2004-07-02 2009-05-19 Bristol-Myers Squibb Company Sustained release GLP-1 receptor modulators
EP1789443A1 (en) 2004-09-02 2007-05-30 Eli Lilly And Company Muteins of fibroblast growth factor 21
DK1789442T3 (da) 2004-09-02 2009-11-16 Lilly Co Eli Muteiner af fibroblastvækstfaktor 21
ES2579805T3 (es) 2004-09-23 2016-08-16 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
TWI372629B (en) 2005-03-18 2012-09-21 Novo Nordisk As Acylated glp-1 compounds
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
US20080096819A1 (en) 2006-05-02 2008-04-24 Allozyne, Inc. Amino acid substituted molecules
BRPI0809583B1 (pt) 2007-03-30 2022-02-22 Ambrx, Inc Polipeptídeo fgf-21 modificado, composição compreendendo o mesmo, método para produzir o referido polipetídeo fgf-21 e célula compreendendo um polinucleotídeo
EA021222B8 (ru) 2007-06-21 2015-11-30 ИксЭль-ПРОТЕИН ГМБХ Биологически активные белки, имеющие повышенную стабильность in vivo и/или in vitro
EP3260129A1 (en) 2007-08-03 2017-12-27 Eli Lilly and Company An fgf-21 compound and a glp-1 compound for use in the treatment of obesity
JP2010536341A (ja) 2007-08-15 2010-12-02 アムニクス， インコーポレイテッド 生物学的に活性なポリペプチドの特性を改変するための組成物および方法
US20100317057A1 (en) 2007-12-28 2010-12-16 Novo Nordisk A/S Semi-recombinant preparation of glp-1 analogues
US8637647B2 (en) 2008-09-12 2014-01-28 Novo Nordisk A/S Method of acylating a peptide or protein
WO2010065439A1 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Eli Lilly And Company Variants of fibroblast growth factor 21
DK2393828T3 (en) 2009-02-03 2017-01-23 Amunix Operating Inc Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same
EP2440235A1 (en) 2009-06-11 2012-04-18 Novo Nordisk A/S Glp-1 and fgf21 combinations for treatment of diabetes type 2
CN101993496B (zh) 2009-08-20 2013-06-05 重庆富进生物医药有限公司 双重调节血糖血脂融合蛋白及其制法和用途
CN101993485B (zh) 2009-08-20 2013-04-17 重庆富进生物医药有限公司 促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途
US20110312881A1 (en) 2009-12-21 2011-12-22 Amunix, Inc. Bifunctional polypeptide compositions and methods for treatment of metabolic and cardiovascular diseases
EP2460527A1 (en) 2010-01-21 2012-06-06 Sanofi Pharmaceutical composition for treating a metabolic syndrome
WO2011123830A2 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Amunix Operating Inc. Alpha 1-antitrypsin compositions and methods of making and using same
TW201138808A (en) 2010-05-03 2011-11-16 Bristol Myers Squibb Co Serum albumin binding molecules
CN103124562A (zh) * 2010-06-08 2013-05-29 诺沃—诺迪斯克有限公司 Fgf21的类似物和衍生物
JP6069198B2 (ja) 2010-07-20 2017-02-01 ノヴォ ノルディスク アー／エス Ｎ末端が修飾されたｆｇｆ２１化合物
CN103282055A (zh) 2010-11-05 2013-09-04 CovX科技爱尔兰有限公司 抗糖尿病化合物
US9023791B2 (en) 2010-11-19 2015-05-05 Novartis Ag Fibroblast growth factor 21 mutations
PE20141727A1 (es) 2011-07-01 2014-11-26 Ngm Biopharmaceuticals Inc Composiciones, usos y metodos para tratamiento de trastornos y enfermedades metabolicas
EP2548570A1 (en) 2011-07-19 2013-01-23 Sanofi Pharmaceutical composition for treating a metabolic syndrome
US20140213512A1 (en) 2011-08-31 2014-07-31 Amgen Inc. Method of Treating or Ameliorating Type 1 Diabetes Using FGF21
US20160137711A1 (en) 2011-09-12 2016-05-19 Amunix Operating Inc. Glucagon-like peptide-2 compositions and methods of making and using same
AR087973A1 (es) 2011-10-04 2014-04-30 Lilly Co Eli Variantes del factor 21 del crecimiento de fibroblastos
US9163227B2 (en) 2011-12-22 2015-10-20 Covx Technologies Ireland Limited Anti-diabetic compounds
SG11201404885RA (en) 2012-02-15 2014-09-26 Amunix Operating Inc Factor viii compositions and methods of making and using same
EP3406347A3 (en) 2012-02-27 2019-02-13 Amunix Operating Inc. Xten conjugate compositions and methods of making same
PE20142432A1 (es) 2012-05-15 2015-01-22 Lilly Co Eli Usos terapeuticos de proteinas del factor de crecimiento del fibroblasto 21
BR112014030404A2 (pt) 2012-06-05 2017-06-27 Amunix Operating Inc proteína de fusão hgh-xten e seu uso no tratamento da deficiência de hormônio do crescimento
SG11201500045RA (en) 2012-07-11 2015-02-27 Amunix Operating Inc Factor viii complex with xten and von willebrand factor protein, and uses thereof
AR092076A1 (es) 2012-08-22 2015-03-18 Lilly Co Eli Proteinas homodimericas
BR112015004734A2 (pt) 2012-09-07 2017-11-21 Sanofi Sa proteínas de fusão para tratar uma síndrome metabólica
US9273107B2 (en) 2012-12-27 2016-03-01 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Uses and methods for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
SG11201506732YA (en) 2013-03-11 2015-09-29 Amunix Operating Inc Treatment of pediatric growth hormone deficiency with human growth hormone analogues
BR112015032875A2 (pt) 2013-07-04 2017-11-07 Novo Nordisk As derivados de peptídeos do tipo glp-1, e usos dos mesmos
US10548953B2 (en) 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
US10398758B2 (en) 2014-05-28 2019-09-03 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants of FGF19 polypeptides and uses thereof for the treatment of hyperglycemic conditions
US10456449B2 (en) 2014-06-16 2019-10-29 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods and uses for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
CN114805533A (zh) 2014-10-24 2022-07-29 百时美施贵宝公司 修饰的fgf-21多肽及其用途
MX2017006016A (es) 2014-11-11 2017-06-19 Amunix Operating Inc Composiciones conjugadas de xten direccionadas y metodos para producir las mismas.
EP3226906B1 (en) 2014-11-27 2019-06-12 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives and uses thereof
MX2017007458A (es) 2014-12-23 2017-08-10 Novo Nordisk As Derivados del factor 21 de crecimiento de fibroblastos (fgf21) y sus usos.
KR20180038560A (ko) 2015-08-28 2018-04-16 아뮤닉스 오퍼레이팅 인코포레이티드 키메라 폴리펩티드 조립체와 이의 제조 및 사용 방법
MA42985A (fr) 2015-10-01 2018-08-22 Amgen Inc Traitement de troubles liés à l'acide biliaire
AU2016346870B2 (en) 2015-10-28 2021-04-22 Yuhan Corporation Dual function proteins and pharmaceutical composition comprising same
WO2017116207A1 (ko) 2015-12-31 2017-07-06 한미약품 주식회사 Fgf21 아날로그, fgf21 결합체, 및 이의 용도
AR107560A1 (es) 2016-02-24 2018-05-09 Lilly Co Eli Compuesto que disminuye la glucosa en la sangre
EP3442997A2 (en) 2016-04-15 2019-02-20 Indiana University Research & Technology Corporation Fgf21 c-terminal peptide optimization
WO2017220706A1 (en) 2016-06-22 2017-12-28 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical compositions of fgf21 derivatives and uses thereof
CN109689079A (zh) 2016-08-22 2019-04-26 伊兰科美国公司 牛成纤维细胞生长因子21和乳畜中的酮病
BR112019009581A2 (pt) 2016-11-10 2019-10-08 Yuhan Corp composição farmacêutica para evitar ou tratar hepatite, fibrose hepática, e cirrose hepática que compreende proteínas de fusão
DK3678687T3 (da) 2017-09-04 2022-11-14 89Bio Ltd Mutant fgf-21 peptidkonjugater og anvendelser deraf
CN109836486B (zh) 2019-01-30 2020-09-08 北京双因生物科技有限公司 成纤维生长因子21变体、其融合蛋白及其用途

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102361647A (zh) * 2009-01-23 2012-02-22 诺沃-诺迪斯克有限公司 具有白蛋白结合剂a-b-c-d-e-的fgf21衍生物及其应用
CN104024273A (zh) * 2011-09-26 2014-09-03 诺华股份有限公司 用于治疗代谢疾病的双功能蛋白
CN108602869A (zh) * 2015-12-02 2018-09-28 赛诺菲 Fgf21变体
CN110087671A (zh) * 2016-12-22 2019-08-02 赛诺菲 具有优化的活性比率的fgf21化合物/glp-1r激动剂组合
CN108570109A (zh) * 2017-03-14 2018-09-25 广东东阳光药业有限公司 包含免疫球蛋白Fc部分的双靶点融合蛋白
CN110028587A (zh) * 2018-01-11 2019-07-19 安源生物科技(上海)有限公司 用于调节血糖和脂质的增效型双功能蛋白
CN110128525A (zh) * 2018-02-08 2019-08-16 广东东阳光药业有限公司 Fgf21变体、融合蛋白及其应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023035817A1 (zh) 2021-09-08 2023-03-16 北京志道生物科技有限公司 一种fgf21突变蛋白及其应用
CN114874314A (zh) * 2021-12-28 2022-08-09 北京惠之衡生物科技有限公司 一种长效glp-1衍生物

Also Published As

Publication number Publication date
CN113728013B (zh) 2022-06-14
US20220016254A1 (en) 2022-01-20
WO2021139744A1 (en) 2021-07-15
US11510990B2 (en) 2022-11-29
CN115322794A (zh) 2022-11-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113728013B (zh) Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物
US20220249614A1 (en) Methods of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (gdf-15)
CN113597434B (zh) Glp-1和gdf15的融合蛋白以及其缀合物
CN114729060B (zh) 多肽缀合物和使用方法
CN116848243B (zh) 多肽缀合物的液体药物组合物和其使用方法
WO2023186003A1 (en) Liquid pharmaceutical compositions of polypeptide conjugates and methods of uses thereof
CN117241821B (zh) 多肽缀合物的药物组合物及其使用方法
US20240181016A1 (en) Polypeptide conjugates and methods of uses
CN116635402B (zh) 用于代谢病症的融合多肽

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant