CN113721028A - 一种go@cs@zif-8泡沫材料的合成方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明具体涉及一种GO@CS@ZIF‑8泡沫材料的合成方法及应用。制备步骤1:将氧化石墨烯溶于溶剂中,超声分散,搅拌加入壳聚糖、戊二醛水溶液,反应完后进行冷冻干燥;步骤2:步骤1中产物加入六水合硝酸锌的甲醇溶液中,搅拌加入2‑甲基咪唑的甲醇溶液,将所得混合溶液在室温条件下搅拌反应,得到GO@CS@ZIF‑8泡沫材料。用于糖肽和磷酸化肽富集与质谱检测方法,包括步骤1:将目标蛋白溶解在NH4HCO3溶液中酶解16h;步骤2:将GO@CS@ZIF‑8泡沫材料用缓冲液配制分散液;步骤3:分散液中加入目标肽,混合震荡富集;步骤4:分散液离心,去除上清液,用缓冲液洗涤;步骤5:洗脱液洗脱目标肽;步骤6:洗脱后的洗脱液进质谱分析。
Description
技术领域
本发明属于新型多孔泡沫基底材料的制备及在同时糖肽和磷酸化肽中的应用,具体涉及一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成及应用方法。
背景技术
蛋白质的糖基化和磷酸化是最重要的两种蛋白质翻译后修饰,它参与许多生命活动,例如细胞间反应,信号转导和代谢。因此,异常的翻译后修饰会导致蛋白质结构和功能的变化,会改变蛋白质和其它分子的作用,进而引起生物过程的变化,如当前尚不能治愈的癌症与蛋白质糖基化和磷酸化修饰异常有关,且越来越多的研究表明癌症与蛋白质翻译后修饰异常有关。
因此,磷酸化和糖基化蛋白质的准确鉴定对更有效地发现生物标志物是至关重要的。质谱(MS)因其具有快速,高精度和高通量的特点,是目前蛋白质组学研究中应用最广泛的技术。但是,由于实际生物样品的复杂性,内源性糖肽和磷酸化肽的低丰度、低电离效率使得直接利用质谱进行分析面临着巨大的挑战。因此,在质谱分析之前,通过有效的手段对内源性糖肽和磷酸化肽进行分离提纯是必不可少的。
迄今为止,研究者们发展了多种可有效富集N-糖肽和磷酸肽的分离提纯方法。对于糖肽的富集,已经开发了多种策略,例如硼酸亲和色谱法(BAAC),肼化学法,凝集素亲和色谱法和亲水相互作用色谱法(HILIC)。其中,与其他富集策略相比,HILIC因其合成工艺简便,富集效率更高,成为通用性更高的策略之一。对于磷酸化肽的富集,固定金属离子亲和色谱法(IMAC)和金属氧化物亲和色谱法(MOAC)较为常用,其主要依赖于金属氧化物或金属离子与磷酸基团之间的亲和力对磷酸化肽进行富集。
尽管在多种细胞活性中,糖肽和磷酸化肽往往同时起着重要的作用,虽然研究者们目前已经开发出许多材料可以分别高效地富集糖肽或磷酸肽,但用同一平台同时从实际生物样品中富集低丰度肽段-糖肽和磷酸肽的材料十分少见。目前,用于同时富集的材料有,磁性二氧化钛,钛纳米探针,磁性石墨烯,多面体低聚倍半硅氧烷,金属有机骨架(MOF)及其衍生物。
在这些材料中,具有HILIC和IMAC/MOAC组合特性的MOF由于其固有的孔隙率,高表面积和丰富的结合位点等独特特性而备受关注。但是,很难开发出可靠且可重现的方法来实现具有定制结构的稳健MOF。因此,探索一种简便的方法来设计基于有机框架的材料,并将其应用于糖肽和磷酸肽的同时富集是非常必要的。
作为MOF家族中的一员,ZIF-8不仅具有MOF的优点,而且具有合成简单,易于修饰和可控组装的优点,但纯ZIF-8颗粒因富集微环境呈酸性易溶解而不能直接广泛应用,且纯ZIF-8颗粒因其本身性质的限制,对糖肽的富集效果较差,在实际样品中的应用有限,而单纯的亲水材料又不能实现磷酸化肽的富集。因此,通过给ZIF-8提供一个亲水性较强且在酸性环境下无损失的载体使ZIF-8在同时富集糖肽和磷酸化肽中的应用中展现出更优异的性能。
发明内容
针对上述存在的技术问题,本发明提供了一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成以及应用于糖肽和磷酸化肽富集与质谱检测方法,可以实现糖肽和磷酸化肽的选择性富集,糖肽和磷酸化肽在富集、洗脱过程中损失变小。在复杂的实际生物样品中体现出对糖肽和磷酸化肽的良好的富集提纯能力。
本发明采用的技术方案是:
一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成方法,包括如下步骤:
步骤1:将氧化石墨烯溶于溶剂中,超声分散半小时,在搅拌条件下依次加入壳聚糖、25%戊二醛水溶液,搅拌12小时,反应完毕后进行冷冻干燥;
步骤2:将步骤1中所得产物加入六水合硝酸锌的甲醇溶液中,搅拌10分钟,加入2-甲基咪唑的甲醇溶液,然后在25℃下搅拌反应4小时;
步骤3:将步骤2得到的产物用纯甲醇洗涤后在60℃下真空干燥12h,得到GO@CS@ZIF-8泡沫材料。
优选地,所述步骤1中的溶剂为1%的乙酸。
优选地,所述壳聚糖与25%戊二醛水溶液的质量比为25:4。
优选地,所述步骤2中2-甲基咪唑与六水合硝酸锌的摩尔比为40:3。
一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的应用,将GO@CS@ZIF-8泡沫材料应用于糖肽或磷酸化肽富集与质谱检测中。
将GO@CS@ZIF-8泡沫材料应用于糖肽或磷酸化肽富集与质谱检测中,包括以下步骤:
步骤1:将糖蛋白或磷酸化蛋白溶解在NH4HCO3溶液中酶解16h,得到含糖肽或磷酸化肽的酶解液;
步骤2:将GO@CS@ZIF-8泡沫材料用缓冲液配制成分散液;
步骤3:在步骤2配置的分散液中加入糖肽或磷酸化肽或糖肽与磷酸化肽的混合肽,混合并在室温下震荡富集;
步骤4:将步骤3富集的分散液离心,去除上清液,并用步骤2中的缓冲液洗涤;
步骤5:用洗脱液洗脱步骤4洗涤后的含肽分散液;
步骤6:将步骤5洗脱后的洗脱液进质谱分析。
优选地,所述洗脱液为ACN/H2O/TFA(30/69/1,v/v/v)或0.4M氨水。
优选地,所述ACN/H2O/TFA(30/69/1,v/v/v)洗脱糖肽,所述0.4M氨水洗脱磷酸化肽或糖肽与磷酸化肽的混合肽。
优选地,所述缓冲液为ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)或ACN/H2O/TFA(90/8/2,v/v/v)。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
(1)本发明制备的GO@CS@ZIF-8泡沫材料在分离提纯糖肽和磷酸化肽时表现出了高选择性、高灵敏等特点,可以实现糖肽和磷酸化肽的选择性富集。
(2)本发明制备的GO@CS@ZIF-8泡沫材料的大比表面积以及孔结构有利于捕获更多的糖肽和磷酸化肽,且25%戊二醛水溶液的添加使得材料在富集过程中损失减小,进而使得该材料在复杂的实际生物样品中体现出对糖肽和磷酸化肽的良好的富集提纯能力。材料强度增加,糖肽和磷酸化肽在富集、洗脱过程中损失变小。
(3)本发明制备的GO@CS@ZIF-8泡沫材料应用在蛋白的糖基化和磷酸化翻译后修饰研究中,结合亲水相互作用色谱法和固定金属离子亲和色谱法能够同时富集提纯复杂实际生物样品中的糖肽和磷酸化肽两种翻译后修饰肽段,同时结合nano-LC MS/MS、搜库等手段能够大规模鉴定糖基化和磷酸化修饰的蛋白且能够准确判定糖基化和磷酸化修饰位点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明制备GO@CS@ZIF-8泡沫材料的流程图。
图2(a)为实施例一未加ZIF-8的GO@CS@ZIF-8泡沫材料的扫描电子显微镜图片,图2(b)为实施例一添加ZIF-8原位生长之后的GO@CS@ZIF-8泡沫材料的扫描电子显微镜图片。
图3为实施例一的GO@CS@ZIF-8泡沫材料的透射电子显微镜图片。
图4为实施例一的GO@CS@ZIF-8泡沫材料的X射线能谱图片。
图5为实施例一的GO@CS@ZIF-8泡沫材料对标准糖蛋白辣根过氧化物酶(HRP)酶解产物中糖基化肽段分离富集的质谱图。图5A为富集之前的HRP糖基化肽段的质谱图,图5B为经GO@CS@ZIF-8泡沫材料富集HRP中糖基化肽段之后的质谱图。
图6为实施例一的GO@CS@ZIF-8泡沫材料对标准磷酸化蛋白β-酪蛋白(β-casein)酶解产物中糖基化肽段分离富集的质谱图。图6A为富集之前的β-casein磷酸化肽段的质谱图,图6B为经GO@CS@ZIF-8泡沫材料富集β-casein中磷酸化肽段之后的质谱图。
图7为实施例一的GO@CS@ZIF-8泡沫材料对标准糖基化蛋白HRP和磷酸化蛋白β-casein混合酶解产物中糖基化肽段磷酸化肽段分离富集的质谱图。图7A为富集之前的HRP糖基化肽段和β-casein磷酸化肽段的质谱图,图7B为经GO@CS@ZIF-8泡沫材料富集HRP糖基化肽段和β-casein中磷酸化肽段之后的质谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
因此,以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围,而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成方法,包括如下步骤:
步骤1:将氧化石墨烯溶于1%乙酸溶液中,超声分散半小时,其中氧化石墨烯含有羟基、羧基以及环氧官能团,能够与壳聚糖通过氢键和酰胺反应结合,进而通过冰模板法形成3D结构。
然后在搅拌条件下依次加入壳聚糖、25%戊二醛水溶液,搅拌12小时,反应完毕后将其进行冷冻干燥;本发明添加壳聚糖是因为其表面有大量氨基,可以增强基底材料的亲水性,从而提高对糖肽的富集效果。壳聚糖添加量过多会使得氧化石墨烯和壳聚糖之间的结合过强,不利于后期的分散,添加量过少会导致亲水性不佳,不利于糖肽的富集。本发明加入25%戊二醛增强了壳聚糖与壳聚糖之间的结合,戊二醛水溶液添加量过多同样会使材料强度过大,不利于分散,添加量过少会导致材料强度低,过于分散。氧化石墨烯在酸性溶液中会质子化,进而与壳聚糖之间通过静电作用结合。壳聚糖在酸性条件下作为聚阳离子聚合物基底,与经过超声分散的氧化石墨烯结合,通过冷冻干燥法将水分子去除掉,形成3D结构,与氧化石墨烯和戊二醛的结合,增强了壳聚糖的强度,减少了壳聚糖的损失。壳聚糖上面含有大量亲水基团,能够通过氢键与糖肽结合,增强材料的亲水性。
步骤2:将步骤1中所得产物加入六水合硝酸锌的甲醇溶液中,搅拌10分钟,可以让锌离子先附着于GO@CS表面,加入2-甲基咪唑的甲醇溶液,其中2-甲基咪唑与六水合硝酸锌的摩尔比为40:3,将所得混合溶液在室温条件下搅拌反应4小时,得到的产物用纯甲醇充分洗涤后在60℃下过夜真空干燥,即所要合成的ZIF-8修饰的复合材料-GO@CS@ZIF-8泡沫材料。
一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料应用于糖肽或磷酸化肽的富集与质谱检测中的方法,包括以下步骤:
步骤1:将糖蛋白或磷酸化蛋白溶解在NH4HCO3溶液中酶解16h,得到糖肽或磷酸化肽;
步骤2:将GO@CS@ZIF-8泡沫材料用缓冲液ACN/H2O/TFA配制成分散液;
步骤3:在步骤2配置的分散液中加入糖肽或磷酸化肽或糖肽与磷酸化肽的混合肽,混合并在室温下震荡富集;
步骤4:将步骤3富集的分散液离心,去除上清液,并用步骤2中的缓冲液ACN/H2O/TFA洗涤;
步骤5:用洗脱液洗脱步骤4洗涤后的含肽分散液;
步骤6:将步骤5洗脱后的洗脱液进质谱分析。
所述洗脱液为ACN/H2O/TFA(30/69/1,v/v/v)或0.4M氨水。
所述ACN/H2O/TFA(30/69/1,v/v/v)洗脱糖肽,所述0.4M氨水洗脱磷酸化肽或糖肽与磷酸化肽的混合肽。
所述缓冲液为ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)或ACN/H2O/TFA(90/8/2,v/v/v)。
实施例1:
一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成方法,包括:步骤1:将10mg氧化石墨烯溶于1%乙酸溶液中,超声分散半小时,在搅拌条件下依次加入40mg壳聚糖、24μL 25%的戊二醛水溶液,搅拌12小时,反应完毕后冷冻干燥。
步骤2:将步骤1中所得产物加入六水合硝酸锌的甲醇溶液中,搅拌10分钟,加入2-甲基咪唑的甲醇溶液,将所得混合溶液在室温条件下搅拌反应4小时;
步骤3:将步骤2得到的产物用纯甲醇充分洗涤后在60℃下经过12h真空干燥,即合成GO@CS@ZIF-8泡沫材料。
将制备所得的GO@CS@ZIF-8泡沫材料用高分辨扫描电子显微镜检测,高分辨扫描电子显微镜型号为JEM2100,GO@CS@ZIF-8泡沫材料均匀涂抹在导电胶上且经过喷金操作后进行SEM表征,从图2(a)中可以看出在没有修饰ZIF-8时,氧化石墨烯/壳聚糖基底表面呈现出光滑表面,修饰ZIF-8之后,如图2(b)所示,氧化石墨烯/壳聚糖基底表面形貌发生变化,有清晰的晶体结构出现。
将制备所得的GO@CS@ZIF-8泡沫材料用高分辨透射电子显微镜检测,高分辨透射电子显微镜型号为Talos F200x,将GO@CS@ZIF-8泡沫材料分散在乙醇溶液中并将分散液滴在铜网上面,钨灯干燥后进行高分辨透射电子显微镜观察,检测结果如图3所示,并测量得到ZIF-8晶体大小约为100nm。
将制备所得的GO@CS@ZIF-8泡沫材料用高分辨透射电子显微镜进行x射线能谱分析检测,高分辨透射电子显微镜型号为Talos F200x,将合成所得的复合材料分散在乙醇溶液中并将分散液滴在铜网上面,钨灯干燥后进行x射线能谱分析,能谱检测结果如图4所示:从图中可以看出,合成所得的复合材料含有以下几种元素:C、Zn、O、N,证明成功合成GO@CS@ZIF-8泡沫材料。
实施例2:
将实施例1中制得的GO@CS@ZIF-8泡沫材料作为固定萃取剂,用于标准糖蛋白辣根过氧化物酶(HRP)酶解肽段混合物中糖基化肽段的分离富集提纯。
步骤1:将1mgHRP在1mL 50mM NH4HCO3溶液中酶解16小时,温度为37℃,得到含有糖肽的HRP酶解液;
步骤2:将500μg GO@CS@ZIF-8泡沫材料用200μL缓冲液ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)配制成分散液;
步骤3:取6μL 663fmol步骤1制备HRP酶解液加入到步骤2配置的分散液中,混合并在室温下震荡富集30分钟;
步骤4:将步骤3富集的分散液离心,去除上清液,并用200μL步骤2中的缓冲液ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)洗涤三次;
步骤5:然后用10μL洗脱液ACN/H2O/TFA(30/69/1,v/v/v)洗脱20分钟;
步骤6:将步骤5洗脱后的洗脱液进质谱分析,取1μLDHB点靶,自然干燥后取1μL步骤5中的洗脱液点靶,自然干燥,然后进行质谱分析,质谱图如图4所示。
结果分析:由图4可以看出,本发明的GO@CS@ZIF-8泡沫材料能够富集大部分来自HRP酶解产物的糖肽,酶解液中的非糖肽干扰急剧减少,几乎观察不到非糖肽的峰,说明材料能够特异性富集糖肽。
实施例3:
将实施例1中合成的GO@CS@ZIF-8泡沫材料作为固相萃取剂用于磷酸化蛋白β-casein酶解液混合物中目标磷酸化肽段的分离富集。
步骤1:将1mg的β-casein在200μL50mM NH4HCO3溶液中酶解16小时,温度为37℃,得到含有磷酸化肽的β-casein酶解液;
步骤2:将500μg GO@CS@ZIF-8泡沫材料用200μL缓冲液ACN/H2O/TFA(90/8/2,v/v/v)配制成分散液;
步骤3:取2.27pmol步骤1制备的β-casein酶解液加入到步骤2配置的分散液中,混合并在室温下震荡富集30分钟;
步骤4:将步骤3富集的分散液离心,去除上清液,并用200μL步骤2中的缓冲液ACN/H2O/TFA(90/8/2,v/v/v)洗涤三次;
步骤5:然后用10μL0.4 M NH3.H2O洗脱20分钟;
步骤6:将步骤5洗脱后的洗脱液进质谱分析,取1μLDHB点靶,自然干燥后取1μL步骤5中的洗脱液点靶,自然干燥,然后进行质谱分析,质谱图如图5所示。
分析结果:由图5可以看出,GO@CS@ZIF-8泡沫材料能够富集大部分来自β-casein酶解产物的磷酸化肽,酶解液中的非磷酸化肽干扰急剧减少,几乎观察不到非磷酸化肽的峰,说明材料能够特异性富集磷酸化肽。
实施例4:
将实施例1中合成的GO@CS@ZIF-8泡沫材料作为固相萃取剂用于糖蛋白HRP、磷酸化蛋白β-casein酶解液混合物中目标糖基化肽段、磷酸化肽段的同时分离富集。
步骤1:将1mg的β-casein在200μL50mM NH4HCO3溶液中酶解16小时,得到含有糖肽的HRP酶解液,将1mgHRP在1mL 50mM NH4HCO3溶液中酶解16小时,温度均为37℃,得到含有磷酸化肽段的β-casein酶解液;
步骤2:将500μg GO@CS@ZIF-8泡沫材料用200μL缓冲液ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)配制成分散液;
步骤3:分别取100fmol步骤1的HRP酶解产物和100fmolβ-casein酶解产物加入到步骤2配制的分散液中,混合并在室温下震荡富集30分钟;
步骤4:将步骤3富集的分散液离心,去除上清液,并用200μL步骤2中的缓冲液ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)洗涤三次;
步骤5:然后用10μL0.4 M NH3.H2O洗脱20分钟;
步骤6:将步骤5洗脱后的洗脱液进质谱分析,取1μLDHB点靶,自然干燥后取1μL步骤5中的洗脱液点靶,自然干燥,然后进行质谱分析,质谱图如图6所示。
分析结果:由图6可以看出,来自糖蛋白HRP酶解产物中的目标糖肽和来自磷酸化蛋白β-casein酶解产物中的磷酸化肽段均被捕获,说明本材料能够高效地同时分离富集糖肽和磷酸化肽。
实施例5:
将实施例1中合成的泡沫材料作为固相萃取剂用于健康人血清中目标糖基化肽段和磷酸化肽段的同时分离富集。
10μL人体血清溶于40μL 50mM NH4HCO3溶液,于沸水中变性10分钟;加入5μL 200mMDTT并在37℃条件下还原1小时,后加入10μL400mM IAA在暗处反应1小时以进行烷基化反应。紧接着按照蛋白/胰蛋白酶质量比为40:1的比例加入25μL 1mg/mL的胰蛋白酶,在37℃条件下孵育16小时,冻干并存放于-80℃待用。
5mg亲水性泡沫材料均匀分散在800μL缓冲液ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)中,后转移至含有5μL血清酶解产物冻干粉的离心管中,室温下孵育30分钟。离心去上清液并用200μL上样缓冲液ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)洗涤样品三次。随后用100μL0.4 M的NH3.H2O洗脱20分钟,洗涤三次,混合三次洗脱液并冻干。
糖肽和磷酸化肽质谱分析:
Nano-LC MS/MS:将步骤2中所得的冻干粉用50μLA相(0.1%FA+H2O)。该实验在EASY-nLC1000纳升高效液相系统的Q Exactive plus Orbitrap MS质谱上面进行。取5μL肽段混合溶液根据线性梯度在90分钟内从6%B相(0.1%FA+ACN)到20%B相随流动相进入分析柱(C18,50μmx15cm),流速为350nL/min。全扫描和二级质谱都是数据依赖采集模式。电喷雾电压为2.1kV,全扫描质荷比范围为200-3000,分辨率为70000,二级分辨率为35000,HCD碰撞能量为27%。从质谱得到的数据于Proteome Discoverer software(赛默飞,2.4)搜库,碎片离子质量数容忍偏差度为0.05Da,错误率(FDR)小于1%。对糖肽搜库时,将半胱氨酸上的氨基甲酰氨基(C,+57.0125)设置为固定修饰。将蛋氨酸氧化和天冬酰胺脱酰胺设置为可变修饰。只有具有N-糖基化共有序列(N-!P-S/T/C)的糖肽才被认为是可靠的。对于磷酸肽,半胱氨酸上的氨基甲酰氨基被设置为固定修饰。将蛋氨酸上的氧化和丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸的磷酸化设置为可变修饰。结果显示,在5μL血清中,能够富集到23个磷酸化肽段,对应14个磷酸化蛋白,347个糖肽,对应120个糖蛋白。
以上所述,仅用以说明本发明的技术方案而非限制,本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其它修改或者等同替换,只要不脱离本发明技术方案的精神和范围,均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (9)
1.一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤1:将氧化石墨烯溶于溶剂中,超声分散半小时,在搅拌条件下依次加入壳聚糖、25%戊二醛水溶液,搅拌12小时,反应完毕后进行冷冻干燥;
步骤2:将步骤1中所得产物加入六水合硝酸锌的甲醇溶液中,搅拌10分钟,加入2-甲基咪唑的甲醇溶液,然后在25℃下搅拌反应4小时;
步骤3:将步骤2得到的产物用纯甲醇洗涤后在60℃下真空干燥12h,得到GO@CS@ZIF-8泡沫材料。
2.根据权利要求1所述的一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成方法,其特征在于:所述步骤1中的溶剂为1%的乙酸。
3.根据权利要求1所述的一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成方法,其特征在于:所述壳聚糖与25%戊二醛水溶液的质量比为25:4。
4.根据权利要求2所述的一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的合成方法,其特征在于:所述步骤2中2-甲基咪唑与六水合硝酸锌的摩尔比为40:3。
5.根据权利要求1-4任一项合成的一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的应用,其特征在于:将GO@CS@ZIF-8泡沫材料应用于糖肽或磷酸化肽富集与质谱检测中。
6.根据权利要求5所述的一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的应用,其特征在于:将GO@CS@ZIF-8泡沫材料应用于糖肽或磷酸化肽富集与质谱检测中,包括以下步骤:
步骤1:将糖蛋白或磷酸化蛋白溶解在NH4HCO3溶液中酶解16h,得到含糖肽或磷酸化肽的酶解液;
步骤2:将GO@CS@ZIF-8泡沫材料用缓冲液配制成分散液;
步骤3:在步骤2配置的分散液中加入糖肽或磷酸化肽或糖肽与磷酸化肽的混合肽,混合并在室温下震荡富集;
步骤4:将步骤3富集的分散液离心,去除上清液,并用步骤2中的缓冲液洗涤;
步骤5:用洗脱液洗脱步骤4洗涤后的含肽分散液;
步骤6:将步骤5洗脱后的洗脱液进质谱分析。
7.根据权利要求6所述的一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的应用,其特征在于:所述洗脱液为ACN/H2O/TFA(30/69/1,v/v/v)或0.4M氨水。
8.根据权利要求7所述的一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的应用,其特征在于:所述ACN/H2O/TFA(30/69/1,v/v/v)洗脱糖肽,所述0.4M氨水洗脱磷酸化肽或糖肽与磷酸化肽的混合肽。
9.根据权利要求6所述的一种GO@CS@ZIF-8泡沫材料的应用,其特征在于:所述缓冲液为ACN/H2O/TFA(90/9/1,v/v/v)或ACN/H2O/TFA(90/8/2,v/v/v)。
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