CN1137064A - 富含天冬氨酰胺酶水溶液的生产工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种富含天冬氨酰胺酶水溶液的生产工艺，它是将畜类瘦肉(或肝脏)经四级发酵，再经灭菌处理而得，本发明与现有技术相比，具有工艺简单，原料及能源消耗低等优点，由于采用了天然组合多菌种和酶联合分阶段连贯式发酵的独特工艺，不需要提纯菌种和酶，不需要单独生产ATP、天冬氨酰胺等多种中间产物，因此生产成本可大大降低。有利于天冬氨酰胺酶作为重要的抗癌药物的推广应用。

Description

富含天冬氨酰胺酶水溶液的生产工艺

本发明涉及一种抗癌药物的生产工艺，属于微生物发酵领域。

癌症是本世纪威胁人类生命最严重的疾病之一，目前主要的治疗手段还是依赖外科手续及放疗、化疗。这些手段虽能起到一定的疗效，但其副作用极大，患者一般都愿意用药物治疗。

在众多抗癌药物中，天冬氨酰胺酶是一种重要的抗癌药物，由于它能分解某些肿瘤细胞繁殖所必需的天冬氨酰胺，从而抑制了这些肿瘤细胞的繁殖，但对正常细胞则无损害，对白血病、急性淋巴肿瘤有较好的疗效。

本发明的目的在于：提供一种用微生物发酵的方法来生产富含

天冬氨酰胺酶的水溶液，从而可大大降低生产成本，提供给人们较廉价的抗癌、防癌疗效食品。

本发明是这样构成的：它是将畜类瘦肉(或肝脏)经四级发酵，再经灭菌处理而得，具体工艺如下：

①、一级发酵处理：选畜类瘦肉(或肝脏)为原料，天然根瘤菌类菌体，灭菌大豆浆；

将根瘤菌类菌体清洗、消毒、粉碎后，制成悬液，按1∶10的比例将悬液注入大豆浆培养液中，在PH5、30℃～40℃的条件下发酵2小时，制成一级菌种；如此再反复做两次，制成三级菌种；

将畜类瘦肉磨成肉浆，高温高压作灭菌及蛋白质变性处理；然后将等量三级菌种注入到等量肉浆中，在PH5、40℃条件下发酵2小时；再将发酵物高压加热15分钟，杀灭全部微生物；

②、二级发酵处理：制备畜、禽胃肠腺菌酶混合三级菌种(方法与制备上述三级菌种相同)；

按生大豆浆1：熟碗豆浆3：熟天门冬浆2的比例混合制成培养基，倾注入一级发酵物中；

将混合三级菌种按0.5∶1的比例注入肉浆一级发酵物中；按每公斤加入10毫克VB5、2毫克VB2，在PH5.8、温度40℃条件下发酵1小时；

③、三级发酵处理：

制备原料1/2量的生牛肉浆，倒入二级发酵物中，加入1.2％黄芪浆，在PH6，37℃条件下发酵1小时；每千克加入5毫克VB2，升温至45℃发酵1小时；加入熟葡萄甜酒，反应10分钟，高压加热20分钟，杀灭全部微生物；

④、四级发酵处理：

制取0.5倍三级发酵物的葡萄糖水溶液，将畜、禽胃肠腺菌酶混合悬液按1∶10的比例倒入葡萄糖培养液中，加入37％黄芪浆，在PH6、37℃下发酵24小时，得到高浓度大肠杆菌；

将三级发酵物与高浓度大肠杆菌混合，在PH8.5、37℃条件下发酵2小时；

最后经过过滤、杀灭大肠杆菌及酵母，即得成品。

本发明与现有技术相比，具有工艺简单，原料及能源消耗低等优点，由于采用了天然组合多菌种和酶联合分阶段连贯式发酵的独特工艺，不需要提纯菌种和酶，不需要单独生产ATP、天冬氨酰胺等多种中间产物，因此生产成本可大大降低。有利于天冬氨酰胺酶作为重要的抗癌药物的推广应用。

本发明的实施例：

菌种：a.天然根瘤类菌体菌种，

  b.畜、禽胃肠腺分泌物，

  c.自制高浓度大肠杆菌；原料：瘦牛肉培养基：大豆浆、豌豆浆、天门冬浆、葡萄糖溶液；

催化剂：VB6、黄芪浆、VB2；

①、一级发酵处理：

将2克根瘤菌类菌体清洗、消毒、粉碎后，制成悬液，将悬液注入到20克灭菌大豆浆(含水90％)培养液中，在PH5、30℃～40℃的条件下发酵2小时，制成一级菌种；如此再反复做两次，制成2公斤三级菌液；

将瘦牛肉磨成2公斤肉浆(含水50％)，在蒸汽压力每平方厘米1公斤、温度121.6℃条件下加热20分钟，作灭菌及蛋白质变性处理；然后将三级菌液注入到肉浆中，在PH5、40℃条件下发酵2小时，再将发酵物在上述蒸汽压力下加热15分钟，杀灭全部微生物，然后冷却至40℃；

②、二级发酵处理：

将2克畜、禽胃肠腺分泌物菌酶混合悬液注入20克大豆浆培养液中，在PH5、40℃条件下发酵2小时，制成一级菌种，如此再反复做两次，制成2公斤三级菌种；

将2公斤生大豆浆、6公斤熟豌豆浆、4公斤熟天门冬浆(均含水90％)制成混合培养基，再加入180毫克VB6，在PH5.8、40℃条件下发酵1小时；

③、三级发酵处理：

制取1公斤生牛肉浆(含水50％)，注入二级发酵物中，加入230克黄芪浆，在PH6，37℃条件下发酵1小时，加入97毫克VB2，升温至45℃，发酵1小时，加入970克熟葡萄甜酒，反应10分钟，在蒸汽压力每平方厘米1公斤，121.6℃条件下，加热20分钟，杀灭全部微生物，然后冷却至37℃；

④、四级发酵处理：

制取10公斤葡萄糖水溶液，将1公斤畜、禽胃肠腺菌酶混合悬液注入葡萄糖培养液中，加入3.7公斤黄芪浆，在PH6、37℃下发酵24小时，得到高浓度大肠杆菌13.7公斤，将三级发酵物与高浓度大肠杆菌混合，在PH8.5、37℃条件下发酵2小时；

将全部发酵物用多层纱布过滤，得到富含L-天冬氨酰胺酶的水溶液；将天冬氨酰胺酶的水溶液恢复至PH8.5，缓慢加热至45℃，立即置于-10℃温度下，杀灭大肠杆菌，用800千赫/秒超声波处理该溶液10分钟，杀灭酵母，冷冻保存。

Claims (1)

1、一种富含天冬氨酰胺酶水溶液的生产工艺，它是将畜类瘦肉(或肝脏)经四级发酵，再经灭菌处理而得，其特征在于：

①、一级发酵处理：选畜类瘦肉(或肝脏)为原料，天然根瘤菌类菌体，灭菌大豆浆；

将根瘤菌类菌体清洗、消毒、粉碎后，制成悬液，按1∶10的比例将悬液注入大豆浆培养液中，在PH5、30℃～40℃的条件下发酵2小时，制成一级菌种；如此再反复做两次，制成三级菌种；

将畜类瘦肉磨成肉浆，高温高压作灭菌及蛋白质变性处理；然后将等量三级菌种注入到等量肉浆中，在PH5、40℃条件下发酵2小时；再将发酵物高温高压加热15分钟，杀灭全部微生物；

②、二级发酵处理：制备畜、禽胃肠腺菌酶混合三级菌种(方法与制备上述三级菌种相同)；

按生大豆浆1：熟碗豆浆3：熟天门冬浆2的比例混合制成培养基，倾注入一级发酵物中；

将混合三级菌种按0.5∶1的比例注入肉浆一级发酵物中；按每公斤加入10毫克VB6、2毫克VB2，在PH5.8、温度40℃条件下发酵1小时；

③、三级发酵处理：

制备原料1/2量的生牛肉浆，倒入二级发酵物中，加入1.2％黄芪浆，在PH6，37℃条件下发酵1小时；每千克加入5毫克VB2，升温至45℃再发酵1小时，加入5％熟葡萄甜酒，反应10分钟，高压加热20分钟，杀灭全部微生物；

④、四级发酵处理：

制取0.5倍三级发酵物的葡萄糖水溶液，将畜、禽胃肠腺菌酶混合悬液按1∶10的比例倒入葡萄糖培养液中，加入37％黄芪浆，在PH6、37℃下发酵24小时，得到高浓度大肠杆菌；

将三级发酵物与高浓度大肠杆菌混合，在PH8.5、37℃条件下发酵2小时；最后经过过滤、杀灭大肠杆菌及酵母，即得成品。