CN113697955A - 采用B.licheniformis促进P.stutzeri好氧反硝化的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供采用B.licheniformis促进P.stutzeri好氧反硝化的方法，通过以接种量比例为1:0.1～1:5.0将B.licheniformis接种到好氧反硝化微生物P.stutzeri的反硝化体系中实现，体系中的电子供体和受体分别是葡萄糖和硝酸盐，将好氧瓶置于20～35℃的摇床中培养。本发明中培养基的碳氮比为1～15，于溶解氧为4.0～8.0O2mg/L下对硝酸盐进行去除。本发明利用B.licheniformis提高P.stutzeri的膜转运能力促进好氧反硝化脱氮，成本低，无二次污染，硝酸盐去除效果明显提高，减少了亚硝酸盐和一氧化二氮的积累，提高总氮去除效率。

Description

采用B.licheniformis促进P.stutzeri好氧反硝化的方法
技术领域
本发明属于环境保护技术领域，具体涉及采用B.licheniformis促进P.stutzeri好氧反硝化的方法。
背景技术
传统观点认为硝化和反硝化因为对分子氧的需求不同而不能同时发生，这使得污水脱氮过程工艺中需要分别设置硝化池和反硝化池。好氧反硝化的发现突破了这一观点，使得同步硝化反硝化，即硝化、反硝化和COD去除在同一个反应器内发生成为可能。同步硝化反硝化的优势在于能够有效维持反应器中pH值稳定，无需酸碱中和，减少外加碳源，节省反应器体积，缩短反应时间等。然而，实际的好氧反硝化效率不高，而且还会存在一些硝酸盐还原过程中间产物的积累，如亚硝酸盐和一氧化二氮。亚硝酸盐的存在不仅会危害水生生物的生存和人类的健康，它的积累还会影响污水处理系统中的功能微生物的正常运行。一氧化二氮则是潜在的温室气体，其所具有的温室效应潜能值是二氧化碳的300倍，同时一氧化二氮还是非常重要的臭氧消耗源，以目前的一氧化二氮排放量增长趋势(7％左右)进行估算，其会成为21世纪最大的臭氧消耗物质。由此可见，微生物好氧反硝化效率的高低直接影响到同步好氧反硝化的应用，也对水体的水质安全化以及气候变化等都有密切的联系。因此，寻求促进好氧反硝化过程高速进行、且无中间产物积累的方法是十分必要的。
发明内容
目的是针对好氧反硝化脱氮速度较慢的问题。提出利用B.licheniformis促进好氧反硝化微生物P.stutzeri的膜转运能力这一技术进行解决。其实施步骤是：将预先培养好的好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis接种到好氧反硝化培养基中，并控制好氧反硝化体系中P.stutzeri和B.licheniformis的接种比、碳氮比、温度和溶解氧。置于摇床上，进行好氧反硝化。
本发明提供如下技术方案：采用B.licheniformis促进P.stutzeri好氧反硝化的方法，所述方法采用添加B.licheniformis提高好氧反硝化微生物P.stutzeri的膜转运能力促进好氧反硝化脱氮，包括以下步骤：
1)好氧反硝化体系的构建：预先在有氧条件下用灭菌的LB培养基培养好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，所述好氧反硝化体系的培养基的成分含有8.11mM的KNO3、10.66mM的NH4Cl、0.41mM的MgSO4·7H2O、17.93mM的KH2PO4、32.76mM的Na2HPO4和1mL的微量元素溶液；用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，分装100mL好氧反硝化体系的培养基于锥形瓶中，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6；
2)将1mL预先培养好的好氧反硝化微生物P.stutzeri接种到所述步骤1)构建的好氧反硝化体系的培养基中，再接种0.1～5.0mL的B.licheniformis；微生物P.stutzeri、B.licheniformis分别单独接种到反硝化培养基作为对照，置于20℃～35℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为4.0O2mg/L～8.0O2mg/L进行好氧反硝化实验。
进一步地，所述步骤2)构建的好氧反硝化体系中P.stutzeri和B.licheniformis的接种比为1:0.1～1:5.0。
进一步地，所述步骤1)构建的好氧反硝化体系中碳氮比为1～15。
进一步地，所述步骤2)构建的好氧反硝化体系中P.stutzeri和B.licheniformis的接种比为1:0.5。
进一步地，所述步骤1)构建的好氧反硝化体系中碳氮比为10；所述步骤2)中进行好氧反硝化的温度为30℃；溶解氧为6.0O2mg/L。
进一步地，所述步骤1)构建的好氧反硝化体系的培养基中微量元素溶液中含有7.30g/L的Na2-EDTA、2.50g/L的FeSO4·7H2O、0.02g/L的MnCl2·4H2O、0.242g/L的Na2MoO4·2H2O、0.135g/L的CuCl2·2H2O和0.34g/L的ZnCl2。
本发明的有益效果为：
1、本发明提供的促进好氧反硝化方法为采用添加B.licheniformis提高好氧反硝化效率的方法，通过将B.licheniformis加入到好氧反硝化微生物P.stutzeri的反硝化体系中实现。电子供体和受体分别是葡萄糖和硝酸盐，将好氧瓶置于20～35℃的摇床中培养。该方法对好氧反硝化微生物P.stutzeri与B.licheniformis接种量比为1:0.1～1:5.0，培养基碳氮比为1～15，溶解氧为4.0～8.0O2mg/L下的硝酸盐进行了去除，保证在不同接种量、不同碳氮比，不同pH和不同溶解氧条件下的有效性。本发明的有益效果是：利用B.licheniformis提高好氧反硝化微生物P.stutzeri对碳源和硝酸盐的膜转运速率，促进好氧反硝化脱氮，成本低，无二次污染，硝酸盐去除效果明显提高，减少了亚硝酸盐和一氧化二氮的积累，提高总氮去除效率。
2、本发明通过将B.licheniformis添加至好氧反硝化微生物P.stutzeri的反硝化体系中实现好氧反硝化，突破了以往认为硝化和反硝化因为对分子氧的需求不同而不能同时发生的传统观点，使得同步反硝化，即硝化、反硝化和COD去除在同一个反应器内发生成为可能，避免了传统的污水脱氮过程工艺中需要分别设置硝化池和反硝化池。好氧反硝化的优势在于能够有效维持反应器中pH值稳定，无需酸碱中和，减少外加碳源，节省反应器体积，缩短反应时间等。然而，实际的好氧反硝化效率不高，而且还会存在一些硝酸盐还原过程中间产物的积累，如亚硝酸盐和一氧化二氮。本专利通过加入微生物提高好氧反硝化效率，削减亚硝酸盐和一氧化二氮积累，提高总氮去除效率，具有生态环保，成本低，不会造成二次污染，长期有效的优势。其实施门槛较低，只要将B.licheniformis加入到微生物好氧反硝化体系即可。
附图说明
在下文中将基于实施例并参考附图来对本发明进行更详细的描述。其中：
图1是本发明实施例1提供的方法培养结束时葡萄糖的膜转运速率。
图2是本发明实施例1提供的方法培养结束时硝酸盐的膜转运速率。
图3是本发明实施例1提供的方法培养过程中硝态氮浓度的变化。
图4是本发明实施例1提供的方法培养结束时亚硝酸盐的累积浓度。
图5是本发明实施例1提供的方法培养结束时一氧化二氮的累积浓度。
图6是本发明实施例1提供的方法培养结束时总氮的去除效率。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明采用的地衣芽孢杆菌B.licheniformis来源于ATCC 14580，斯氏假单胞菌P.stutzeri来源为ATCC 17588。
实施例1
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，好氧反硝化体系的培养基成分为：8.11mM KNO3，10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O，17.93mM KH2PO4，32.76mM Na2HPO4，微量元素1mL；微量元素构成(g/L)：Na2-EDTA(7.30)、FeSO4·7H2O(2.50)、MnCl2·4H2O(0.02)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、CuCl2·2H2O(0.135)和ZnCl2(0.34)；向含有100mL好氧反硝化体系的培养基的无菌锥形瓶中，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6，设置碳氮比为10；
将预先培养好的反硝化微生物P.stutzeri 1mL接种到上述好氧反硝化培养基中，再接种B.licheniformis，使P.stutzeri和B.licheniformis的接种量比为1:0.5；好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis单独接种到好氧反硝化培养基作为对照，置于30℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为6.0O2mg/L，进行好氧反硝化。好氧反硝化体系中微生物对葡萄糖的膜转运能力(图1)和对硝酸盐的膜转运能力(图2)，好氧反硝化体系中硝酸盐浓度变化(图3)、亚硝酸盐累积浓度(图4)、一氧化二氮累积浓度(图5)和总氮去除效率(图6)的结果表明，B.licheniformis的加入将好氧反硝化体系葡萄糖的膜转运能力提高了42.5％、硝酸盐的膜转运能力提高了46.7％、硝酸盐去除效率提高了45.0％，亚硝酸盐积累量减少了98.8％，一氧化二氮积累减少了83.5％，总氮的去除效率提高了76.3％。
实施例2
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，好氧反硝化体系的培养基成分为：8.11mM KNO3，10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O，17.93mM KH2PO4，32.76mM Na2HPO4，微量元素1mL；微量元素构成(g/L)：Na2-EDTA(7.30)、FeSO4·7H2O(2.50)、MnCl2·4H2O(0.02)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、CuCl2·2H2O(0.135)和ZnCl2(0.34)；向含有100mL好氧反硝化体系的培养基的无菌锥形瓶中，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6，设置碳氮比为5；
将预先培养好的反硝化微生物P.stutzeri 1mL接种到上述好氧反硝化培养基中，再接种B.licheniformis，使P.stutzeri和B.licheniformis的接种量比为1:0.1；好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis单独接种到好氧反硝化培养基作为对照，置于20℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为4.0O2mg/L，进行好氧反硝化。好氧反硝化体系中微生物对葡萄糖的膜转运能力和对硝酸盐的膜转运能力，好氧反硝化体系中硝酸盐浓度变化、亚硝酸盐累积浓度、一氧化二氮累积浓度和总氮去除效率的结果表明，B.licheniformis的加入将好氧反硝化体系葡萄糖的膜转运能力提高了32.7％、硝酸盐的膜转运能力提高了23.5％、硝酸盐去除效率提高了24.1％，亚硝酸盐积累量减少了65.2％，一氧化二氮积累减少了46.3％，总氮的去除效率提高了41.2％。
实施例3
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，好氧反硝化体系的培养基成分为：8.11mM KNO3，10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O，17.93mM KH2PO4，32.76mM Na2HPO4，微量元素1mL；微量元素构成(g/L)：Na2-EDTA(7.30)、FeSO4·7H2O(2.50)、MnCl2·4H2O(0.02)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、CuCl2·2H2O(0.135)和ZnCl2(0.34)；向含有100mL好氧反硝化体系的培养基的无菌锥形瓶中，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6，设置碳氮比为10；
将预先培养好的反硝化微生物P.stutzeri 1mL接种到上述好氧反硝化培养基中，再接种B.licheniformis，使P.stutzeri和B.licheniformis的接种量比为1:0.5；好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis单独接种到好氧反硝化培养基作为对照，置于25℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为6.0O2mg/L，进行好氧反硝化。好氧反硝化体系中微生物对葡萄糖的膜转运能力和对硝酸盐的膜转运能力，好氧反硝化体系中硝酸盐浓度变化、亚硝酸盐累积浓度、一氧化二氮累积浓度和总氮去除效率的结果表明，B.licheniformis的加入将好氧反硝化体系葡萄糖的膜转运能力提高了29.4％、硝酸盐的膜转运能力提高了26.7％、硝酸盐去除效率提高了33.6％，亚硝酸盐积累量减少了61.8％，一氧化二氮积累减少了70.9％，总氮的去除效率提高了59.4％。
实施例4
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，好氧反硝化体系的培养基成分为：8.11mM KNO3，10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O，17.93mM KH2PO4，32.76mM Na2HPO4，微量元素1mL；微量元素构成(g/L)：Na2-EDTA(7.30)、FeSO4·7H2O(2.50)、MnCl2·4H2O(0.02)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、CuCl2·2H2O(0.135)和ZnCl2(0.34)；向含有100mL好氧反硝化体系的培养基的无菌锥形瓶中，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6，设置碳氮比为15；
将预先培养好的反硝化微生物P.stutzeri 1mL接种到上述好氧反硝化培养基中，再接种B.licheniformis，使P.stutzeri和B.licheniformis的接种量比为1:1；好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis单独接种到好氧反硝化培养基作为对照，置于30℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为8.0O2mg/L，进行好氧反硝化。好氧反硝化体系中微生物对葡萄糖的膜转运能力和对硝酸盐的膜转运能力，好氧反硝化体系中硝酸盐浓度变化、亚硝酸盐累积浓度、一氧化二氮累积浓度和总氮去除效率的结果表明，B.licheniformis的加入将好氧反硝化体系葡萄糖的膜转运能力提高了31.6％、硝酸盐的膜转运能力提高了29.8％、硝酸盐去除效率提高了43.6％，亚硝酸盐积累量减少了68.2％，一氧化二氮积累减少了73.6％，总氮的去除效率提高了68.5％。
实施例5
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，好氧反硝化体系的培养基成分为：8.11mM KNO3，10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O，17.93mM KH2PO4，32.76mM Na2HPO4，微量元素1mL；微量元素构成(g/L)：Na2-EDTA(7.30)、FeSO4·7H2O(2.50)、MnCl2·4H2O(0.02)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、CuCl2·2H2O(0.135)和ZnCl2(0.34)；向含有100mL好氧反硝化体系的培养基的无菌锥形瓶中，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6，设置碳氮比为1；
将预先培养好的反硝化微生物P.stutzeri 1mL接种到上述好氧反硝化培养基中，再接种B.licheniformis，使P.stutzeri和B.licheniformis的接种量比为1:2；好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis单独接种到好氧反硝化培养基作为对照，置于35℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为6.0O2mg/L，进行好氧反硝化。好氧反硝化体系中微生物对葡萄糖的膜转运能力和对硝酸盐的膜转运能力，好氧反硝化体系中硝酸盐浓度变化、亚硝酸盐累积浓度、一氧化二氮累积浓度和总氮去除效率的结果表明，B.licheniformis的加入将好氧反硝化体系葡萄糖的膜转运能力提高了28.6％、硝酸盐的膜转运能力提高了20.7％、硝酸盐去除效率提高了25.6％，亚硝酸盐积累量减少了31.7％，一氧化二氮积累减少了44.3％，总氮的去除效率提高了37.1％。
实施例6
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，好氧反硝化体系的培养基成分为：8.11mM KNO3，10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O，17.93mM KH2PO4，32.76mM Na2HPO4，微量元素1mL；微量元素构成(g/L)：Na2-EDTA(7.30)、FeSO4·7H2O(2.50)、MnCl2·4H2O(0.02)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、CuCl2·2H2O(0.135)和ZnCl2(0.34)；向含有100mL好氧反硝化体系的培养基的无菌锥形瓶中，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6，设置碳氮比为5；
将预先培养好的反硝化微生物P.stutzeri 1mL接种到上述好氧反硝化培养基中，再接种B.licheniformis，使P.stutzeri和B.licheniformis的接种量比为1:5；好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis单独接种到好氧反硝化培养基作为对照，置于20℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为4.0O2mg/L，进行好氧反硝化。好氧反硝化体系中微生物对葡萄糖的膜转运能力和对硝酸盐的膜转运能力，好氧反硝化体系中硝酸盐浓度变化、亚硝酸盐累积浓度、一氧化二氮累积浓度和总氮去除效率的结果表明，B.licheniformis的加入将好氧反硝化体系葡萄糖的膜转运能力提高了29.4％、硝酸盐的膜转运能力提高了15.6％、硝酸盐去除效率提高了34.5％，亚硝酸盐积累量减少了40.9％，一氧化二氮积累减少了46.9％，总氮的去除效率提高了33.8％。
实施例7
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，好氧反硝化体系的培养基成分为：8.11mM KNO3，10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O，17.93mM KH2PO4，32.76mM Na2HPO4，微量元素1mL；微量元素构成为(g/L)：Na2-EDTA(7.30)、FeSO4·7H2O(2.50)、MnCl2·4H2O(0.02)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、CuCl2·2H2O(0.135)和ZnCl2(0.34)；向含有100mL好氧反硝化体系的培养基的无菌锥形瓶中，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6，设置碳氮比为5；
将预先培养好的反硝化微生物P.stutzeri 1mL接种到上述好氧反硝化培养基中，再接种B.licheniformis，使P.stutzeri和B.licheniformis的接种量比为1:1；好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis单独接种到好氧反硝化培养基作为对照，置于35℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为4.0O2mg/L，进行好氧反硝化。好氧反硝化体系中微生物对葡萄糖的膜转运能力和对硝酸盐的膜转运能力，好氧反硝化体系中硝酸盐浓度变化、亚硝酸盐累积浓度、一氧化二氮累积浓度和总氮去除效率的结果表明，B.licheniformis的加入将好氧反硝化体系葡萄糖的膜转运能力提高了23.6％、硝酸盐的膜转运能力提高了28.6％、硝酸盐去除效率提高了16.8％，亚硝酸盐积累量减少了27.6％，一氧化二氮积累减少了33.8％，总氮的去除效率提高了29.6％。
实施例8
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，好氧反硝化体系的培养基成分为：8.11mM KNO3，10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O，17.93mM KH2PO4，32.76mM Na2HPO4，微量元素1mL；微量元素构成(g/L)：Na2-EDTA(7.30)、FeSO4·7H2O(2.50)、MnCl2·4H2O(0.02)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、CuCl2·2H2O(0.135)和ZnCl2(0.34)；向含有100mL好氧反硝化体系的培养基的无菌锥形瓶中，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6，设置碳氮比为15；
将预先培养好的反硝化微生物P.stutzeri 1mL接种到上述好氧反硝化培养基中，再接种B.licheniformis，使P.stutzeri和B.licheniformis的接种量比为1:5；好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis单独接种到好氧反硝化培养基作为对照，置于25℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为8.0O2mg/L，进行好氧反硝化。好氧反硝化体系中微生物对葡萄糖的膜转运能力和对硝酸盐的膜转运能力，好氧反硝化体系中硝酸盐浓度变化、亚硝酸盐累积浓度、一氧化二氮累积浓度和总氮去除效率的结果表明，B.licheniformis的加入将好氧反硝化体系葡萄糖的膜转运能力提高了33.6％、硝酸盐的膜转运能力提高了20.8％、硝酸盐去除效率提高了29.7％，亚硝酸盐积累量减少了35.6％，一氧化二氮积累减少了48.2％，总氮的去除效率提高了44.9％。
以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
此外，本领域的技术人员能够理解，尽管在此的一些实施例包括其它实施例中所包括的某些特征而不是其它特征，但是不同实施例的特征的组合意味着处于本发明的范围之内并且形成不同的实施例。例如，在上面的权利要求书中，所要求保护的实施例的任意之一都可以以任意的组合方式来使用。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本发明的总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

Claims (6)

1.采用B.licheniformis促进P.stutzeri好氧反硝化的方法，所述方法采用添加B.licheniformis提高好氧反硝化微生物P.stutzeri的膜转运能力促进好氧反硝化脱氮，其特征在于，包括以下步骤：
1)好氧反硝化体系的构建：预先在有氧条件下用灭菌的LB培养基培养好氧反硝化微生物P.stutzeri和B.licheniformis到OD600均为2；好氧反硝化体系的构建于锥形瓶中进行，所述好氧反硝化体系的培养基的成分含有8.11mM的KNO3、10.66mM的NH4Cl、0.41mM的MgSO4·7H2O、17.93mM的KH2PO4、32.76mM的Na2HPO4和1mL的微量元素溶液；用NaOH和HCl调节体系的pH为7.2，分装100mL好氧反硝化体系的培养基于锥形瓶中，纱布密封，121℃下灭菌15min；冷却后，加入过滤除菌的碳源C6H12O6；
2)将1mL预先培养好的好氧反硝化微生物P.stutzeri接种到所述步骤1)构建的好氧反硝化体系的培养基中，再接种0.1～5.0mL的B.licheniformis；微生物P.stutzeri、B.licheniformis分别单独接种到反硝化培养基作为对照，置于20℃～35℃摇床上，设置摇床转速使得溶解氧浓度为4.0O2 mg/L～8.0O2 mg/L进行好氧反硝化实验。
2.根据权利要求1所述的促进好氧反硝化的方法，其特征在于，所述步骤2)构建的好氧反硝化体系中P.stutzeri和B.licheniformis的接种比为1:0.1～1:5.0。
3.根据权利要求1所述的促进好氧反硝化的方法，其特征在于，所述步骤1)构建的好氧反硝化体系中碳氮比为1～15。
4.根据权利要求1所述的促进好氧反硝化的方法，其特征在于，所述步骤2)构建的好氧反硝化体系中P.stutzeri和B.licheniformis的接种比为1:0.5。
5.根据权利要求1所述的促进好氧反硝化的方法，其特征在于，所述步骤1)构建的好氧反硝化体系中碳氮比为10；所述步骤2)中进行好氧反硝化的温度为30℃；溶解氧为6.0O2mg/L。
6.根据权利要求1所述的促进好氧反硝化的方法，其特征在于，所述步骤1)构建的好氧反硝化体系的培养基中微量元素溶液中含有7.30g/L的Na2-EDTA、2.50g/L的FeSO4·7H2O、0.02g/L的MnCl2·4H2O、0.242g/L的Na2MoO4·2H2O、0.135g/L的CuCl2·2H2O和0.34g/L的ZnCl2。
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