CN113661252A - 压电型机械敏感离子通道组件1(piezo1)变体及其用途 - Google Patents

压电型机械敏感离子通道组件1(piezo1)变体及其用途 Download PDF

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Abstract

本文提供了治疗患有静脉曲张的患者的方法、鉴定具有增加的发展静脉曲张的风险的受试者的方法以及诊断人受试者的静脉曲张的方法，所述方法包括检测来自所述患者或受试者的生物样品中压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)预测的功能丧失变体核酸分子和多肽的存在。

Description

压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)变体及其用途
序列表的引用
本申请包括作为文本文件电子提交的序列表，所述文本文件命名为18923802502SEQ，于2020年2月5日创建，大小为132千字节。所述序列表以引用的方式并入本文。
技术领域
本公开提供了治疗患有静脉曲张的患者的方法、鉴定具有增加的发展静脉曲张的风险的受试者的方法以及诊断人受试者的静脉曲张的方法，所述方法包括检测来自患者或受试者的生物样品中PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子和多肽的存在。
背景技术
静脉曲张是一种遗传驱动因素很大程度上未知的常见多因素疾病，常见于患有慢性静脉功能不全的患者，与慢性静脉功能不全共同归类为慢性静脉疾病。静脉瓣膜功能障碍与静脉曲张、静脉高压和血栓形成相关联。若干种过程，诸如血流动力的变化、内皮激活、炎症、缺氧和基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的失调，都与静脉曲张发展相关联。静脉曲张的风险因素包括年龄增加、女性、怀孕次数、肥胖、深静脉血栓形成史和站立职业。静脉曲张也与淋巴引流不足和慢性静脉功能不全有关。此外，若干项全基因组关联研究(GWAS)显示约18.5％的静脉曲张遗传率。
PIEZO1由位于16q24.3的70kb基因编码，并且存在于五种潜在的同工型中。PIEZO1蛋白的长度为2,521个氨基酸，并且是一种286kDa的跨膜蛋白，其包含38个跨膜结构域并作为同源四聚体起作用。PIEZO1编码进化上保守的内皮机械敏感阳离子通道，其产生特征在于线性电流-电压关系的电流，所述通道对钌红和钆敏感。PIEZO1遍在表达，并通过R-Ras募集到内质网(最有可能处于其激活状态)以及随后刺激钙蛋白酶信号传导来维持整联蛋白激活而在上皮细胞粘附中发挥作用。在脉管系统中，PIEZO1参与内皮细胞迁移和出芽式血管生成。具体地，PIEZO1充当血流相关剪切应力的传感器，并促进内皮细胞组织和沿血流方向排列，从而确保适当的血管形成、重塑和成熟。PIEZO1似乎也是淋巴瓣形成所需要的。其他报告的功能包括血压调节、尿液渗透压、红细胞完整性、压力感应和集合管渗透压调节。
发明内容
本公开提供了鉴定具有增加的发展静脉曲张的风险的人受试者的方法，其中所述方法包括确定或已经确定从所述受试者获得的生物样品中存在或不存在：压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)预测的功能丧失变体基因组核酸分子；PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子；由所述mRNA分子产生的PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子；或PIEZO1预测的功能丧失变体多肽；其中：不存在PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽表明受试者不具有增加的发展静脉曲张的风险；并且存在PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽表明受试者具有增加的发展静脉曲张的风险。
本公开还提供了诊断人受试者的静脉曲张的方法，其中所述方法包括检测从所述受试者获得的样品中存在或不存在：压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)预测的功能丧失变体基因组核酸分子；PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子；由所述mRNA分子产生的PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子；或PIEZO1预测的功能丧失变体多肽；其中当所述受试者具有PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽，并且具有静脉曲张的一种或多种症状时，则所述受试者被诊断为患有静脉曲张。
本公开还提供了用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂治疗患者的方法，其中所述患者罹患静脉曲张或具有增加的发展静脉曲张的风险，所述方法包括以下步骤：通过以下确定患者是否具有编码人压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)多肽的PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子：从患者获得或已经获得生物样品；以及对所述生物样品进行或已经进行基因分型测定以确定所述患者是否具有包含PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的基因型；并且当所述患者是PIEZO1参考时，则以标准剂量量向所述患者施用或继续施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂；并且当患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的或纯合的时，则以等于或大于标准剂量量的量向患者施用或继续施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂；其中存在具有编码人PIEZO1多肽的PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的基因型表明患者具有增加的发展静脉曲张的风险。
附图说明
并入本说明书且构成其一部分的附图示出若干个方面，并连同描述一起用于解释本公开的原理。
图1示出了UKB 50k WES中个体对的IBD共享的代表性分布；在所有UKB 50k外显子组参与者的对中，不具有血统相同(IBD)等位基因对具有1个IBD等位基因的WES基因型的估计比例。
图2示出了所有常染色体变体和通过功能预测观察到的位点频谱(SFS)；将UKB50k外显子组随机下采样到水平轴上指定的个体数量；在垂直轴上绘制含有至少图例中指定计数的LOF AAF<1％的基因的数量；常染色体基因的最大数量为18,272。
图3示出了UK Biobank 500k和50k中的大陆血统；n＝488,377个体的主成分1和2可从UK Biobank数据展示获得；图的三个预先定义区域代表非洲(蓝色)、东亚(绿色)和欧洲(红色)血统。
图4示出了PIEZO1中65个pLOF变体的单点和聚合结果。
图5示出了PIEZO1的LD评估。
具体实施方式
与本公开的各方面相关的各种术语在整个说明书和权利要求书中使用。除非另外指明，否则此类术语将被赋予其在本领域中的普通含义。其他特定定义的术语将以与本文提供的定义一致的方式来解释。
除非另外明确陈述，否则决不意图将本文阐述的任何方法或方面理解为要求按特定顺序执行其步骤。因此，在权利要求书或说明书中，当方法权利要求没有明确地说明步骤是限于特定顺序时，在任何方面决不意图推断顺序。这适用于任何可能的未表达的解释原则，包括关于步骤安排或操作流程的逻辑事项、从语法组织或标点符号得到的明显含义，或者说明书中描述的各方面的数量或类型。
除非上下文另外明确指出，否则如本文所用，单数形式“一个(种)(a/an)”和“所述(the)”包括复数对象。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换使用。受试者可以包括任何动物，包括哺乳动物。哺乳动物包括但不限于农场动物(诸如像马、牛、猪)、伴侣动物(例如像，狗、猫)、实验室动物(例如像，小鼠、大鼠、兔)和非人灵长类动物。在一些实施方案中，受试者是人。
如本文所用，“核酸”、“核酸分子”、“核酸序列”、“多核苷酸”或“寡核苷酸”可以包括任何长度的核苷酸的聚合物形式，可以包括DNA和/或RNA，并且可以是单链的、双链的或多链的。核酸的一条链还指其互补序列。
如本文所用，在特定实施方案中，根据需要，术语“包含”可替换为“由……组成”或“基本上由……组成”。
如本文所用，当在特定氨基酸或核苷酸序列或位置的编号的上下文中使用时，短语“对应于”或其语法变体是指当特定氨基酸或核苷酸序列与参考序列(例如，本文的参考序列是(野生型)PIEZO1核酸分子或多肽)相比时，指定参考序列的编号。换言之，特定聚合物的残基(例如，氨基酸或核苷酸)号或残基(例如，氨基酸或核苷酸)位置相对于参考序列来指定，而非通过残基在特定氨基酸或核苷酸序列内的实际编号位置来指定。例如，特定氨基酸序列可以通过引入缺口以优化两个序列之间的残基匹配来与参考序列对齐。在这些情况下，虽然存在缺口，但是对特定氨基酸或核苷酸序列中的残基的编号相对于它所对齐的参考序列来进行。
根据本公开，已观察到PIEZO1中的某些变异与发展静脉曲张的风险相关联。据信，PIEZO1基因或蛋白质的变体与人类中静脉曲张没有任何已知的联系。因此，可以治疗具有与静脉曲张相关联的PIEZO1变化的人受试者，使得抑制静脉曲张，减轻其症状，和/或抑制症状的发展。因此，本公开提供了用于利用受试者中此类变体的鉴定来鉴定或分层此类受试者中发展静脉曲张的风险，或将受试者诊断为患有静脉曲张的方法，使得可以治疗处于风险中的受试者或患有活动性疾病的受试者。
出于本公开的目的，可以将任何特定的人归类为具有以下三种PIEZO1基因型中的一种：i)PIEZO1参考；ii)对于PIEZO1预测的功能丧失变体是杂合的，和iii)对于PIEZO1预测的功能丧失变体是纯合的。当一个人不具有PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的拷贝时，所述人是PIEZO1参考。当一个人具有PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的单个拷贝时，所述人对于PIEZO1预测的功能丧失变体是杂合的。PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是编码具有部分功能丧失、完全功能丧失、预测的部分功能丧失或预测的完全功能丧失的PIEZO1多肽的任何PIEZO1核酸分子(诸如基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)。具有部分功能丧失(或预测的部分功能丧失)的PIEZO1多肽的人对于PIEZO1是亚效的。PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是本文所述的变体核酸分子中的任一种。当一个人具有PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子中的任一种的两个拷贝时，所述人对于PIEZO1预测的功能丧失变体是纯合的。
对于对PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子基因分型或确定为杂合或纯合的人受试者或患者，此类人受试者或患者具有增加的发展静脉曲张的风险。对于对PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子基因分型或确定为杂合或纯合的人受试者或患者，此类人受试者或患者可以用有效治疗静脉曲张的药剂治疗。
本公开提供了鉴定具有增加的发展静脉曲张的风险的人受试者的方法，其中所述方法包括确定或已经确定从所述受试者获得的生物样品中存在或不存在PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子(诸如基因组核酸分子、mRNA分子和/或cDNA分子)或多肽；其中不存在PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子或多肽表明受试者不具有增加的发展静脉曲张的风险；并且存在PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽表明受试者具有增加的发展静脉曲张的风险。
本公开还提供了鉴定具有增加的发展静脉曲张的风险的人受试者的方法，其中所述方法包括确定或已经确定从所述受试者获得的生物样品中存在或不存在：i)PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子；ii)PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子；iii)由所述mRNA分子产生的PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子；或iv)PIEZO1预测的功能丧失变体多肽；其中：不存在PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽表明受试者不具有增加的发展静脉曲张的风险；并且存在PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽表明受试者具有增加的发展静脉曲张的风险。
本公开还提供了鉴定具有增加的发展静脉曲张的风险的人受试者的方法，其中所述方法包括：确定或已经确定从所述受试者获得的生物样品中存在或不存在编码人PIEZO1多肽的PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子(诸如基因组核酸分子、mRNA分子和/或cDNA分子)或多肽；其中：i)当所述人受试者缺乏PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子时(即，所述人受试者在基因型上被归类为PIEZO1参考)，则所述人受试者不具有增加的发展静脉曲张的风险；并且ii)当所述人受试者具有PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子时(即，所述人受试者被归类为对于PIEZO1预测的功能丧失变体是杂合的或对于PIEZO1预测的功能丧失变体是纯合的)，则所述人受试者具有增加的发展静脉曲张的风险。
在本文所述的实施方案中的任一项中，PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是编码具有部分功能丧失、完全功能丧失、预测的部分功能丧失或预测的完全功能丧失的PIEZO1多肽的任何PIEZO1核酸分子(例如像，基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)。例如，PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是本文所述的PIEZO1变体核酸分子中的任一种。
确定人受试者是否在生物样品中具有PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可通过本文所述的方法中的任一种进行。在一些实施方案中，这些方法可以在体外进行。在一些实施方案中，这些方法可以原位进行。在一些实施方案中，这些方法可以在体内进行。在这些实施方案中的任一项中，核酸分子可以存在于从人受试者获得的细胞内。
在本文所述的实施方案中的任一项中，静脉曲张可以是早期静脉曲张(例如，根据CEAP(临床、病因、解剖学和病理生理学)分类的C0)。在一些实施方案中，静脉曲张可以是晚期静脉曲张(例如，根据CEAP分类的C6)。在一些实施方案中，静脉曲张可以处于任何疾病分期(例如，根据CEAP分类的C0-C6)。在一些实施方案中，人受试者是女性。
在一些实施方案中，当人受试者被鉴定为具有增加的发展静脉曲张的风险时，所述人受试者进一步用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂治疗，如本文所述。例如，当人受试者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的或纯合的，并且因此具有增加的发展静脉曲张的风险时，向人受试者施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂。在一些实施方案中，当患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是纯合的时，向患者施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂，其剂量量等于或大于向对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的患者施用的标准剂量量。在一些实施方案中，患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的。在一些实施方案中，患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是纯合的。
本公开提供了诊断人受试者的静脉曲张的方法，其中所述方法包括在从所述受试者获得的样品中检测PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子(诸如基因组核酸分子、mRNA分子和/或cDNA分子)或多肽的存在或不存在；其中当所述受试者具有PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽，并且具有静脉曲张的一种或多种症状时，则所述受试者被诊断为患有静脉曲张。
本公开还提供了诊断人受试者的静脉曲张的方法，其中所述方法包括检测从所述受试者获得的样品中存在或不存在：i)PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子；ii)PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子；iii)由所述mRNA分子产生的PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子；或iv)PIEZO1预测的功能丧失变体多肽；其中当所述受试者具有PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽，并且具有静脉曲张的一种或多种症状时，则所述受试者被诊断为患有静脉曲张。
本公开还提供了诊断人受试者的静脉曲张的方法，其中所述方法包括在从所述受试者获得的样品中检测编码人PIEZO1多肽的PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子(诸如基因组核酸分子、mRNA分子和/或cDNA分子)的存在或不存在；其中当受试者具有PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽(即，人受试者被归类为对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合或纯合的)，并且具有静脉曲张的一种或多种症状时，则所述受试者被诊断为患有静脉曲张。
在本文所述的实施方案中的任一项中，PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是编码具有部分功能丧失、完全功能丧失、预测的部分功能丧失或预测的完全功能丧失的PIEZO1多肽的任何PIEZO1核酸分子(例如像，基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)。例如，PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是本文所述的PIEZO1变体核酸分子中的任一种。
检测从受试者获得的样品中存在或不存在PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可通过本文所述的方法中的任一种进行。在一些实施方案中，这些方法可以在体外进行。在一些实施方案中，这些方法可以原位进行。在一些实施方案中，这些方法可以在体内进行。在这些实施方案中的任一项中，核酸分子可以存在于从人受试者获得的细胞内。
在本文所述的实施方案中的任一项中，静脉曲张可以是早期静脉曲张(例如，根据CEAP(临床、病因、解剖学和病理生理学)分类的C0)。在一些实施方案中，静脉曲张可以是晚期静脉曲张(例如，根据CEAP分类的C6)。在一些实施方案中，静脉曲张可以是任何疾病分期(例如，根据CEAP分类的C0-C6)。在一些实施方案中，人受试者是女性。
在一些实施方案中，当人受试者被诊断为患有静脉曲张时，所述人受试者进一步用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂治疗，如本文所述。例如，当人受试者被确定为对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的或纯合的，并且具有静脉曲张的一种或多种症状时，向人受试者施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂。在一些实施方案中，当患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是纯合的时，向患者施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂，其剂量量等于或大于向对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的患者施用的标准剂量量。在一些实施方案中，患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的。在一些实施方案中，患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是纯合的。
本公开还提供了用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂治疗患者的方法，其中所述患者罹患静脉曲张或具有增加的发展静脉曲张的风险，所述方法包括以下步骤：通过以下确定患者是否具有编码人PIEZO1多肽的PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子：从患者获得或已经获得生物样品；以及对所述生物样品进行或已经进行基因分型测定以确定所述患者是否具有包含PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的基因型；并且当所述患者是PIEZO1参考时，则以标准剂量量向所述患者施用或继续施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂；并且当患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的或纯合的时，则以等于或大于标准剂量量的量向患者施用或继续施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂；其中存在具有编码人PIEZO1多肽的PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的基因型表明患者具有增加的发展静脉曲张的风险。在一些实施方案中，患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的。在一些实施方案中，患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是纯合的。
在本文所述的实施方案中的任一项中，PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是编码具有部分功能丧失、完全功能丧失、预测的部分功能丧失或预测的完全功能丧失的PIEZO1多肽的任何PIEZO1核酸分子(例如像，基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)。例如，PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是本文所述的PIEZO1变体核酸分子中的任一种。
确定患者是否具有编码人PIEZO1多肽的PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的基因分型测定可以通过本文所述的方法中的任一种进行。在一些实施方案中，这些方法可以在体外进行。在一些实施方案中，这些方法可以原位进行。在一些实施方案中，这些方法可以在体内进行。在这些实施方案中的任一项中，核酸分子可以存在于从人受试者获得的细胞内。
在一些实施方案中，当患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是纯合的时，向患者施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂，其剂量量等于或大于向对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的患者施用的标准剂量量。
本公开还提供了用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂治疗患者的方法，其中所述患者罹患静脉曲张或具有增加的发展静脉曲张的风险，所述方法包括以下步骤：通过以下确定患者是否具有PIEZO1预测的功能丧失变体多肽：从患者获得或已经获得生物样品；以及对所述生物样品进行或已经进行测定以确定所述患者是否具有PIEZO1预测的功能丧失变体多肽；并且当患者不具有PIEZO1预测的功能丧失变体多肽时，则以标准剂量量向所述患者施用或继续施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂；并且当患者具有PIEZO1预测的功能丧失变体多肽时，则以等于或大于标准剂量量的量向患者施用或继续施用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂；其中存在PIEZO1预测的功能丧失变体多肽表明患者具有增加的发展静脉曲张的风险。在一些实施方案中，患者具有PIEZO1预测的功能丧失变体多肽。在一些实施方案中，患者不具有与PIEZO1预测的功能丧失变体多肽。
确定患者是否具有PIEZO1预测的功能丧失变体多肽的测定可以通过本文所述的方法中的任一种进行。在一些实施方案中，这些方法可以在体外进行。在一些实施方案中，这些方法可以原位进行。在一些实施方案中，这些方法可以在体内进行。在这些实施方案的任一个中，多肽可以存在于从人受试者获得的细胞内。
在本文所述的实施方案中的任一项中，PIEZO1预测的功能丧失变体多肽可以是具有部分功能丧失、完全功能丧失、预测的部分功能丧失或预测的完全功能丧失的任何PIEZO1多肽。例如，PIEZO1预测的功能丧失变体多肽可以是本文所述的PIEZO1变体多肽中的任一种。
在本文所述的实施方案中的任一项中，静脉曲张可以是早期静脉曲张(例如，根据CEAP(临床、病因、解剖学和病理生理学)分类的C0)。在一些实施方案中，静脉曲张可以是晚期静脉曲张(例如，根据CEAP分类的C6)。在一些实施方案中，静脉曲张可以是任何疾病分期(例如，根据CEAP分类的C0-C6)。在一些实施方案中，人受试者是女性。
静脉曲张的症状包括但不限于腿部沉重，受影响腿部出现蜘蛛状静脉(毛细血管扩张症)，脚踝肿胀(尤其是在晚上)，受影响静脉附近的棕黄色闪亮皮肤变色，皮肤区域发红、干燥和发痒(称为淤滞性皮炎或静脉性湿疹)，痉挛(特别是在诸如站立等突然移动时出现)，受影响区域轻微损伤，出血量超过正常水平或需要很长时间才能愈合，脚踝上方的皮肤萎缩(脂肪性皮肤硬化症)，不宁腿综合征，脚踝处出现变白、不规则的疤痕样斑块(萎缩性白斑)，或其任何组合。
治疗或抑制静脉曲张的治疗剂的实例包括但不限于类黄酮(诸如地奥司明或橙皮苷)以及抗炎剂(诸如布洛芬和阿司匹林)。
在一些实施方案中，与对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是纯合的患者或人受试者(其可接受标准剂量量)相比，对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的患者或人受试者，治疗或抑制静脉曲张的治疗剂的剂量可减少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％(即低于标准剂量量)。在一些实施方案中，治疗或抑制静脉曲张的治疗剂的剂量可减少约10％、约20％、约30％、约40％或约50％。此外，与对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是纯合的患者或人受试者相比，治疗或抑制对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的患者或人受试者的静脉曲张的治疗剂的剂量可以较不频繁地施用。
治疗或抑制静脉曲张的治疗剂的施用可在例如一天、两天、三天、五天、一周、两周、三周、一个月、五周、六周、七周、八周、两个月或三个月之后重复。重复施用可以是相同剂量或不同剂量。施用可以重复一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次或更多次。例如，根据某些剂量方案，患者可以接受较长时间段的疗法，例如像6个月、1年或更长时间。
治疗或抑制静脉曲张的治疗剂的施用可通过任何合适的途径发生，包括但不限于肠胃外、静脉内、口服、皮下、动脉内、颅内、鞘内、腹膜内、局部、鼻内或肌内。用于施用的药物组合物希望是无菌的且基本上等渗的，并且在GMP条件下制造。药物组合物可以单位剂型(即，单次施用的剂量)提供。药物组合物可以使用一种或多种生理上且药学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂或辅助剂来配制。制剂取决于所选的施用途径。术语“药学上可接受的”意指载剂、稀释剂、赋形剂或辅助剂与制剂的其他成分相容，并且对其接受者基本上无害。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”以及“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”分别是指引发期望的生物反应，诸如治疗性和预防性作用。在一些实施方案中，在施用药剂或包含所述药剂的组合物之后，治疗效果包括以下的一种或多种：静脉曲张降低/减少、静脉曲张的严重程度的降低/减少(例如像，静脉曲张的发展的降低或抑制)、症状和静脉曲张相关影响的降低/减少、延迟症状和静脉曲张相关影响的发作、降低静脉曲张相关影响的症状的严重程度、降低急性发作的严重程度、减少症状和静脉曲张相关影响的数量、减少症状和静脉曲张相关影响的潜伏期、改善症状和静脉曲张相关影响、减少继发性症状、减少继发性感染、预防静脉曲张复发、减少复发发作的次数或频率、增加症状发作之间的潜伏期、增加持续进展的时间、加速恢复和/或增加对替代治疗剂的功效或降低对替代治疗剂的抗性。预防作用可包括在施用治疗方案后完全或部分避免/抑制或静脉曲张发展/进展(例如像，完全或部分避免/抑制或延迟)。静脉曲张的治疗包括治疗已被诊断为在任何临床阶段或表现具有任何形式的静脉曲张的患者、延迟静脉曲张的症状或体征的发作或演变或加重或恶化、和/或预防和/或减小静脉曲张的严重程度。
本公开还在本文所述的方法中的任一种中提供了检测或确定来自受试者人的生物样品中存在PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子和/或PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子。应理解，群体内的基因序列和由此类基因编码的mRNA分子可以由于多态性(诸如单核苷酸多态性)而变化。本文公开的PIEZO1变体核酸分子的本文提供的序列仅是示例性序列。PIEZO1变体核酸分子的其他序列也是可能的。
生物样品可以来源于受试者的任何细胞、组织或生物流体。样品可以包括任何临床上相关的组织诸如骨髓样品、肿瘤活检样品、细针抽吸物，或体液的样品诸如血液、龈沟液、血浆、血清、淋巴、腹水、囊液或尿液。在一些情况下，所述样品包括口腔拭子。用于本文公开的方法的样品根据测定形式、检测方法的性质以及用作样品的组织、细胞或提取物而变化。生物样品可以根据所采用的测定进行不同处理。例如，当检测任何PIEZO1变体核酸分子时，可以采用被设计来分离或富集基因组DNA的样品的初步处理。各种已知的技术可用于此目的。当检测任何PIEZO1变体mRNA的水平时，不同的技术可以用于富集具有mRNA的生物样品。可以使用检测mRNA的存在或水平或特定变体基因组DNA基因座的存在的各种方法。
在一些实施方案中，检测人受试者中的人PIEZO1的功能丧失变体核酸分子包括分析或基因分型从人受试者获得的生物样品以确定生物样品中的PIEZO1基因组核酸分子、PIEZO1 mRNA分子或由mRNA分子产生的PIEZO1 cDNA分子是否包含导致功能丧失(部分或完全)或预测导致功能丧失(部分或完全)的一个或多个变异。
在一些实施方案中，检测人受试者中存在或不存在PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子(例如像，基因组核酸分子、mRNA分子和/或cDNA分子)的方法包括：对从人受试者获得的生物样品进行测定，所述测定确定生物样品中的核酸分子是否包含特定的核苷酸序列。
在一些实施方案中，生物样品包括细胞或细胞裂解物。此类方法还可以包括，例如，从受试者获得包含PIEZO1基因组核酸分子或mRNA分子的生物样品，并且如果包含mRNA，任选地将mRNA逆转录成cDNA。此类测定可以包括例如确定特定PIEZO1核酸分子的这些位置的身份。在一些实施方案中，所述方法是体外方法。
在一些实施方案中，确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括对生物样品中的PIEZO1基因组核酸分子、PIEZO1 mRNA分子或由mRNA分子产生的PIEZO1 cDNA分子的核苷酸序列的至少一部分进行测序，其中所测序的部分包含引起功能丧失(部分或完全)或预测引起功能丧失(部分或完全)的一个或多个变异。
在本文所述的方法中的任一种中，确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括对生物样品中的PIEZO1核酸分子的核苷酸序列的至少一部分进行测序，其中所测序的部分包含对应于预测的功能丧失变体位置的位置，其中当检测到预测的功能丧失变体位置处的变体核苷酸时，生物样品中的PIEZO1核酸分子是PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子。
在一些实施方案中，确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括：a)使生物样品与引物接触，所述引物与PIEZO1核酸分子的核苷酸序列的邻近预测的功能丧失变体位置的部分杂交；b)延伸引物至少通过预测的功能丧失变体位置；和c)确定引物的延伸产物是否在预测的功能丧失变体位置处包含变体核苷酸。
在一些实施方案中，测定包括对整个核酸分子进行测序。在一些实施方案中，仅分析PIEZO1基因组核酸分子。在一些实施方案中，仅分析PIEZO1 mRNA。在一些实施方案中，仅分析由PIEZO1 mRNA获得的PIEZO1 cDNA。
在一些实施方案中，确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括：a)扩增编码人PIEZO1多肽的PIEZO1核酸分子的至少一部分，其中所述部分包含预测的功能丧失变体位置；b)用可检测标记对扩增的核酸分子进行标记；c)使标记的核酸分子与包含改变特异性探针的支持物接触，其中所述改变特异性探针包含在严格条件下与预测的功能丧失变体位置杂交的核苷酸序列；和d)检测可检测标记。
在一些实施方案中，核酸分子是mRNA，并且确定步骤还包括在扩增步骤之前将mRNA逆转录成cDNA。
在一些实施方案中，确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括：使生物样品中的核酸分子与包含可检测标记的改变特异性探针接触，其中所述改变特异性探针包含在严格条件下与预测的功能丧失变体位置杂交的核苷酸序列；以及检测可检测标记。
本文所述的改变特异性探针或改变特异性引物包含与PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子或其互补序列互补和/或杂交或特异性杂交的核酸序列。在一些实施方案中，改变特异性探针或改变特异性引物包含至少约5个、至少约8个、至少约10个、至少约11个、至少约12个、至少约13个、至少约14个、至少约15个、至少约16个、至少约17个、至少约18个、至少约19个、至少约20个、至少约21个、至少约22个、至少约23个、至少约24个、至少约25个、至少约30个、至少约35个、至少约40个、至少约45个或至少约50个核苷酸或由其组成。在一些实施方案中，改变特异性探针或改变特异性引物包含至少15个核苷酸或由其组成。在一些实施方案中，改变特异性探针或改变特异性引物包含至少15个核苷酸至至少约35个核苷酸或由其组成。在一些实施方案中，改变特异性探针或改变特异性引物在严格条件下与PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子和/或PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子杂交。
改变特异性聚合酶链反应技术可以用于检测核酸序列中的突变，诸如SNP。因为当与模板存在失配时，DNA聚合酶将不延伸，所以可以使用改变特异性引物。
在一些实施方案中，样品中的核酸分子是mRNA并且在扩增步骤之前将mRNA逆转录成cDNA。在一些实施方案中，核酸分子存在于从人受试者获得的细胞内。
在本文所述的实施方案中的任一项中，PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是编码具有部分功能丧失、完全功能丧失、预测的部分功能丧失或预测的完全功能丧失的PIEZO1多肽的任何PIEZO1核酸分子(例如像，基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)。例如，PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子可以是本文所述的PIEZO1变体核酸分子中的任一种。
在一些实施方案中，所述测定包括使生物样品与引物或探针诸如改变特异性引物或改变特异性探针接触，所述引物或探针在严格条件下与PIEZO1变体基因组序列、变体mRNA序列或变体cDNA序列而不与对应的PIEZO1参考序列特异性杂交，以及确定杂交是否已经发生。
在一些实施方案中，所述测定包括RNA测序(RNA-Seq)。在一些实施方案中，所述测定还包括，诸如通过逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)，将mRNA逆转录成cDNA。
在一些实施方案中，所述方法利用具有足够核苷酸长度的探针和引物来结合靶核苷酸序列并特异性地检测和/或鉴定包含PIEZO1变体基因组核酸分子、变体mRNA分子或变体cDNA分子的多核苷酸。杂交条件或反应条件可以由操作员决定以实现此结果。核苷酸长度可以是足以用于所选择的检测方法(包括本文所述或例示的任何测定)的任何长度。此类探针和引物可以在高严格杂交条件下与靶核苷酸序列特异性地杂交。探针和引物可以具有在靶核苷酸序列内连续核苷酸的完全核苷酸序列同一性，但可以通过常规方法设计不同于靶核苷酸序列并保留特异性检测和/或鉴定靶核苷酸序列的能力的探针。探针和引物可以与靶核酸分子的核苷酸序列具有约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％序列同一性或互补性。
核酸测序技术的例示性实例包括但不限于链终止子(Sanger)测序和染料终止子测序。其他方法包括除了测序以外的核酸杂交方法，其包括使用针对纯化的DNA、扩增的DNA和固定细胞制品的标记的引物或探针(荧光原位杂交(FISH))。在一些方法中，靶核酸分子可以在检测之前或与检测同时进行扩增。核酸扩增技术的例示性实例包括但不限于聚合酶链反应(PCR)、连接酶链反应(LCR)、链置换扩增反应(SDA)以及基于核酸序列的扩增反应(NASBA)。其他方法包括但不限于连接酶链反应、链置换扩增反应和嗜热SDA(tSDA)。
在杂交技术中，可以采用严格条件，使得探针或引物特异性地与其靶标杂交。在一些实施方案中，多核苷酸引物或探针在严格条件下与其靶序列杂交的可检测程度将比与其他非靶序列的杂交的可检测程度更高，诸如比背景高至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多，包括比背景高超过10倍。严格的条件是序列依赖性的并且在不同的环境中将是不同的。
促进DNA杂交的适当严格性条件(例如，在约45℃下6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)，接着在50℃下进行2X SSC的洗涤)是已知的，或者可见于Current Protocols in MolecularBiology,John Wiley和Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。通常，用于杂交和检测的严格条件将是其中如下所述的那些：在pH 7.0至8.3下盐浓度低于约1.5M Na+离子、通常约0.01至1.0M Na+离子浓度(或其他盐)，并且温度对于短探针(例如像，10至50个核苷酸)而言是至少约30℃，而对于较长探针(例如像，大于50个核苷酸)是至少约60℃。还可以通过添加去稳定剂诸如甲酰胺来实现严格条件。任选地，洗涤缓冲液可以包含约0.1％至约1％SDS。杂交的持续时间通常少于约24小时，通常约4至约12小时。洗涤时间的持续时间将至少是足以达到平衡的时间长度。
本公开还提供了包含本文所述的PIEZO1核酸分子(基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)中的任一种或其互补序列和本文所述的改变特异性引物或改变特异性探针中的任一种的分子复合物。在一些实施方案中，分子复合物中的PIEZO1核酸分子(基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)或其互补序列是单链的。在一些实施方案中，PIEZO1核酸分子是本文所述的基因组核酸分子中的任一种。在一些实施方案中，PIEZO1核酸分子是本文所述的mRNA分子中的任一种。在一些实施方案中，PIEZO1核酸分子是本文所述的cDNA分子中的任一种。在一些实施方案中，分子复合物包含本文所述的PIEZO1核酸分子(基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)中的任一种或其互补序列和本文所述的改变特异性引物中的任一种。在一些实施方案中，分子复合物包含本文所述的PIEZO1核酸分子(基因组核酸分子、mRNA分子或cDNA分子)中的任一种或其互补序列和本文所述的改变特异性探针中的任一种。在一些实施方案中，分子复合物包含非人聚合酶。
在一些实施方案中，检测人PIEZO1预测的功能丧失多肽的存在包括对从人受试者获得的样品进行测定以确定受试者中的PIEZO1多肽是否含有导致多肽具有功能丧失(部分或完全)或预测的功能丧失(部分或完全)的一个或多个变异。在一些实施方案中，所述测定包括对包含变体位置的PIEZO1多肽的至少一部分进行测序。在一些实施方案中，检测步骤包括对整个多肽进行测序。在PIEZO1多肽的变体位置处鉴定出变体氨基酸表明PIEZO1多肽是PIEZO1预测的功能丧失多肽。在一些实施方案中，所述测定包括用于检测包含变体的多肽的存在的免疫测定。在PIEZO1多肽的变体位置处检测到变体氨基酸表明PIEZO1多肽是PIEZO1预测的功能丧失多肽。
本文所述的探针和/或引物(包括改变特异性探针和改变特异性引物)包含约15至约100、约15至约35个核苷酸或由其组成。在一些实施方案中，改变特异性探针和改变特异性引物包含DNA。在一些实施方案中，改变特异性探针和改变特异性引物包含RNA。在一些实施方案中，本文所述的探针和引物(包括改变特异性探针和改变特异性引物)具有与本文公开的核酸分子中的任一种或其互补序列特异性杂交的核苷酸序列。在一些实施方案中，探针和引物(包括改变特异性探针和改变特异性引物)在严格条件下与本文公开的核酸分子中的任一种特异性杂交。在本公开的上下文中，“特异性杂交”意指探针或引物(包括改变特异性探针和改变特异性引物)不与编码PIEZO1参考基因组核酸分子、PIEZO1参考mRNA分子和/或PIEZO1参考cDNA分子的核酸序列杂交。在一些实施方案中，探针(例如像，改变特异性探针)包含标记。在一些实施方案中，所述标记是荧光标记、放射性标记或生物素。
PIEZO1参考基因组核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其长度为69,883个核苷酸。SEQ ID NO:1中所述的第一个核苷酸对应于16号染色体的第88,715,338位的核苷酸(参见，hg38_knownGene_ENST00000301015.14)。
存在PIEZO1的众多变体基因组核酸分子，包括但不限于(使用人基因组参考构建GRch38)：16:88715629:G:A、16:88715728:G:T、16:88715767:G:A、16:88715802:C:A、16:88715822:D:4、16:88715987:I:1、16:88716359:A:G、16:88716570:C:T、16:88716874:G:A、16:88717213:T:A、16:88719588:G:A、16:88719722:C:G、16:88719870:G:T、16:88720068:D:2、16:88720229:C:A、16:88720248:D:4、16:88720394:C:T、16:88720644:D:1、16:88720698:D:1、16:88720698:I:1、16:88721165:C:A、16:88721268:D:1、16:88721307:G:A、16:88721586:G:C、16:88721652:G:C、16:88722217:C:T、16:88722605:I:1、16:88723005:I:7、16:88723253:G:A、16:88723311:C:T、16:88725081:C:A、16:88726282:G:A、16:88726546:C:T、16:88726619:G:A、16:88726924:G:A、16:88727038:C:T、16:88727072:D:1、16:88727163:G:A、16:88731768:D:1、16:88732334:C:G、16:88732411:D:1、16:88732720:D:1、16:88733326:G:C、16:88733337:D:4、16:88733587:C:A、16:88733965:D:1、16:88734017:C:A、16:88734042:I:1、16:88734679:C:T、16:88734909:I:1、16:88736167:D:2、16:88736324:G:A、16:88736391:G:T、16:88736409:C:T、16:88736671:G:A、16:88737557:A:C、16:88737727:C:G、16:88737815:C:T、16:88738283:G:C、16:88738637:G:A、16:88738735:D:1、16:88741477:C:T、16:88742306:D:1、16:88749399:G:A和16:88784929:C:T。因此，例如，使用SEQ ID NO:1参考基因组核苷酸序列作为基础(其中列出的第一个核苷酸指定为第88,715,338位)，第一个列出的变体(16:88715629:G:A)在第88,715,629位(称为“变体位置”)用腺嘌呤替换鸟嘌呤(称为“变体核苷酸”)。指定为“D”后跟数字的那些变体具有所述数量的核苷酸缺失。指定为“I”后跟数字的那些变体具有所述数量的核苷酸(任何核苷酸)插入。这些PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子中的任一种可在本文所述的方法中的任一种中检测。
PIEZO1参考mRNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示(参见NCBI参考序列：NM_001142864.4)，其长度为8,089个核苷酸。基于根据SEQ ID NO:2的PIEZO1参考mRNA序列，本文所述的变体基因组核酸分子在其各自变体位置处的变体核苷酸还具有变体mRNA分子在其各自变体位置处的对应变体核苷酸。这些PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子中的任一种可在本文所述的方法中的任一种中检测。
PIEZO1参考cDNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示(基于NCBI参考序列：NM_001142864.4)，其长度为8,089个核苷酸。基于根据SEQ ID NO:3的PIEZO1参考cDNA序列，本文所述的变体基因组核酸分子在其各自变体位置处的变体核苷酸还具有变体cDNA分子在其各自变体位置处的对应变体核苷酸。这些PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子中的任一种可在本文所述的方法中的任一种中检测。
PIEZO1参考多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示(参见，UniProt登录号Q92508.4和NCBI RefSeq登录号NM_001142864.4)，其长度为2,521个氨基酸。使用PIEZO1mRNA或cDNA分子的翻译的核苷酸序列，PIEZO1变体多肽在变体位置(密码子)处具有对应的翻译的变体氨基酸。这些PIEZO1预测的功能丧失变体多肽中的任一种可在本文所述的方法中的任一种中检测。
所附序列表中列出的核苷酸序列和氨基酸序列使用核苷酸碱基的标准字母缩写和氨基酸的三字母代码显示。所述核苷酸序列遵循从序列的5'端开始并前进(即在每一行中从左到右)到3'端的标准惯例。仅显示了每个核苷酸序列的一条链，但是应当了解的是，互补链是通过对所示链的任何参考而被包括在内的。所述氨基酸序列遵循从序列的氨基末端开始并前进(即在每一行中从左到右)到羧基末端的标准惯例。
如本文所用，当在特定核苷酸或核苷酸序列或位置的编号的上下文中使用时，短语“对应于”或其语法变型是指当特定核苷酸或核苷酸序列与参考序列比较时对指定参考序列的编号。换句话讲，特定聚合物的残基(例如像，核苷酸或氨基酸)号或残基(例如像，核苷酸或氨基酸)位置相对于参考序列来指定，而非通过残基在特定核苷酸或核苷酸序列内的实际数值位置来指定。例如，特定核苷酸序列可以通过引入缺口以优化两个序列之间的残基匹配来与参考序列对齐。在这些情况下，虽然存在缺口，但是对特定核苷酸或核苷酸序列中的残基的编号相对于它所对齐的参考序列来进行。存在多种计算算法，它们可用于进行序列对齐以鉴定一个聚合物分子中对应于另一个聚合物分子中的核苷酸或氨基酸位置的核苷酸或氨基酸位置。例如，可以通过使用NCBI BLAST算法(Altschul等人,NucleicAcids Res.,1997,25,3389-3402)或CLUSTALW软件(Sievers和Higgins,MethodsMol.Biol.,2014,1079,105-116)进行序列对齐。然而，序列还可以手动地进行对齐。
以上或以下所引用的所有专利文献、网站、其他出版物、登录号等均在犹如每个单独项目均具体地且单独地指示为以引用的方式如此并入一样的相同程度上出于所有目的以引用的方式整体并入。如果序列的不同版本与不同时间的登录号相关，那么意指与在本申请的有效申请日时的登录号相关的版本。如果适用的话，提及登录号时，有效申请日意指实际申请日或优先权申请的申请日中较早者。同样，如果出版物、网站等的不同版本在不同的时间公布，那么除非另外指明，否则意指在本申请的有效申请日时最新公布的版本。除非另外具体指明，否则本公开的任何特征、步骤、元件、实施方案或方面均可以与任何其他特征、步骤、元件、实施方案或方面组合使用。尽管出于清楚和理解的目的已通过说明和实例详细描述本公开，但将显而易见的是，可以在所附权利要求的范围内进行某些变化和修改。
提供以下实施例来更详细地描述实施方案。它们意图说明但不限制所要求保护的实施方案。以下实施例为本领域普通技术人员提供了如何制造和评价本文所述的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的公开和描述，并且意图仅仅是示例性的，而不意图限制任何权利要求的范围。已努力确保关于所用数值(例如像，量、温度等)的准确性，但可以考虑一些误差和偏差。除非另外指明，否则份数是重量份，温度是以℃计或处于环境温度，并且压力处于或接近大气压。
实施例
实施例1：材料和方法
WES样品制备和测序
将标准化至约16ng/μl的基因组DNA样品从UK Biobank内部转移到0.5ml 2D基质管(Thermo Fisher Scientific)中，并在样品制备之前在-80℃下储存在自动样品生物库(LiCONiC Instruments)中。一个样品中的DNA不足以进行测序。使用内部开发的高通量、全自动方法完成外显子组捕获。简言之，通过使用定制的NEBNext Ultra II FS DNA文库制备试剂盒(New England Biolabs)将100ng基因组DNA酶剪切成200个碱基对的平均片段大小来产生DNA文库，并将通用的Y形衔接子(Integrated DNA Technologies)连接至所有DNA文库。在用KAPA HiFi聚合酶(KAPA Biosystems)进行文库扩增期间，将独特的不对称的10个碱基对条形码加入到DNA片段中，以促进多重外显子组捕获和测序。合并等量的样品，然后用稍微修改的IDT xGen探针文库型式进行过夜外显子组捕获约16小时；将补充探针加入到被先前的捕获试剂(NimbleGen VCRome)充分覆盖但被标准xGen探针不充分覆盖的基因组的捕获区域中。总共有n＝38,997,831个碱基被包括在所靶向的区域中。将捕获的片段与链霉亲和素偶联的
Figure BDA0003290781080000241
(Thermo Fisher Scientific)结合，并根据制造商推荐的方案(Integrated DNA Technologies)使用xGen杂交和洗涤试剂盒通过一系列严格洗涤除去非特异性DNA片段。将捕获的DNA用KAPA HiFi进行PCR扩增并用KAPA文库定量试剂盒(KAPA Biosystems)通过qPCR进行定量。合并多重样品，然后使用S2流动池在Illumina
Figure BDA0003290781080000242
6000平台上使用75碱基对配对末端读数和两个10碱基对索引读数进行测序。
序列对齐、变体鉴定和基因型分配
在测序完成后，将来自每个Illumina
Figure BDA0003290781080000243
运行的原始数据收集在本地缓冲存储器中并上传到DNAnexus平台用于自动分析。上传完成后，以将CBCL文件转换为FASTQ格式的读数开始分析，并使用bcl2fastq转换软件(Illumina Inc.,San Diego,CA)通过特异性条形码分配给样品。然后用BWA-mem将代表对所述样品产生的所有读数的样品特异性FASTQ文件与GRCh38基因组参考对齐。每个样品的所得二进制对齐文件(BAM)包含映射读数的基因组坐标、质量信息和特定读数与其映射位置处的参考不同的程度。然后评价BAM文件中的对齐读数以使用Picard MarkDuplicates工具(万维网“picard.sourceforge.net”)识别和标记重复读数，从而产生对齐文件(duplicatesMarked.BAM)，其中所有标记的潜在重复读数用于在下游分析中排除。
然后使用来自Genomics PLC的WeCall变体调用程序(万维网“github.com/Genomicsplc/wecall”)对每个单独的样品产生包括变体调用的GVCF文件，从而与参考相比识别SNV和INDEL两者。另外，每个GVCF文件携带每个变体的接合性(zygosity)、参考和替代等位基因的读数计数、代表基因型调用的置信度的基因型质量、和在所述位置的变体调用的总体质量。
在完成变体调用后，使用samtools将各个样品BAM文件转换为完全无损的CRAM文件。使用Picard(万维网“picard.sourceforge.net”)、bcftools(万维网“samtools.github.io/Bcftools”)和FastQC(万维网“bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc”)，捕获每个样品的度量统计以评价捕获、对齐、插入大小和变体调用质量。
完成样品测序后，排除表现出遗传确定的与报道的性别之间存在差异(n＝15)、杂合性/污染率高(D-stat>0.4)(n＝7)、序列覆盖度低(小于85％的所靶向的碱基达到20X覆盖度)(n＝1)或遗传鉴定的样品重复(n＝14)的样品以及与基因分型芯片不一致的WES变体(n＝9)。六个样品在多个类别中未通过质量控制，导致38名个体被排除。然后使用剩余的49,960个样品编译项目级VCF(PVCF)用于下游分析。使用GLnexus联合基因分型工具创建PVCF。注意将所有纯合参考、杂合、纯合替代和无调用基因型携带到项目级VCF中。还生成了另外的过滤PVCF，“Goldilocks”。在过滤的Goldilocks PVCF中，在单个样品流水线或DP<7中携带SNP变体调用的样品被转换为“无调用”。在应用DP过滤器后，排除其中所有剩余样品被称为杂合和所有样品具有AB<85％ref/15％alt的位点。在DP<10的单个样品流水线中携带INDEL变体调用的样品被转换为“无调用”。在应用DP过滤器后，排除其中所有剩余样品被称为杂合和所有样品具有AB<80％ref/20％alt的位点。PVCF文件中的多等位基因变体位点通过左对齐标准化并表示为双等位基因。
表型定义
基于ICD10的病例需要以下一项或多项：住院患者健康事件统计(HES)记录中的主要诊断或次要诊断。基于ICD10的排除在代码范围内具有≥1个主要或次要诊断。基于ICD10的对照被定义为那些非病例或排除的个体。自定义表型定义包括以下一项或多项：ICD-10诊断、来自口头面谈的自我报告疾病和来自在线随访、触摸屏信息的医生诊断疾病。从UKBiobank(UKB)库下载定量性状(诸如，身体指标、血细胞计数、认知功能测试和成像衍生的表型)并跨越一次或多次访问。在WES关联分析中总共测试了1,073个二元性状，其中病例计数≥50和定量性状数量669个。
预测的功能丧失(LOF)变体的注释
使用来自Ensemb版本85的snpEff和基因模型对变体进行注释。从Ensembl基因模型获得包括具有注释的起始和终止密码子的所有蛋白质编码转录物的蛋白质编码区的全面和高质量转录物集。注释为stop_gained、start_lost、splice_donor、splice_acceptor、stop_lost和frameshift的变体被认为是LOF变体。
最近对141,456名个体的遗传变异的大规模研究提供了LOF变体的目录。由于许多因素，诸如外显子组测序捕获平台、变体调用算法和注释的差异，因此难以与此数据进行直接比较。此外，在本报告中，gnomAD的NFE子集中的个体数量和确定性(ascertainment)的区域分布(以及因此的遗传多样性)可能大于使用WES的UK Biobank。尽管如此，使用注释流水线对来自gnomAD r2.1的标记为“PASS”的gnomAD外显子组位点进行注释。使用PicardLiftoverVcf将来自gnomAD的数据提升到HG38。数据是限制于MAFNFE<1％的变体的非芬兰欧洲人(NFE)(n＝56,885个样品，个体)的子集，并且在17,951个基因中的任何转录物中获得261,309个LOF。将LOF限制于所有转录物中存在的那些，在16,462个基因中观察到175,162个LOF。在使用欧洲血统的WES的UKB参与者的所有基因转录物中观察到134,745个LOF。
LOF负担关联分析方法
对49,960名欧洲血统的个体中的罕见LOF进行了负担关联测试。对于由Ensembl定义的每个基因区域。MAF≤0.01的LOF是折叠型的(collapsed)，使得对于所述基因区域中的至少一个LOF是杂合的任何个体被认为是杂合的，并且只有携带同一LOF的两个拷贝的个体被认为是纯合的。罕见的变体不是分期的，因此在此分析中不考虑复合杂合子。
对于每个基因区域，使用在BOLT-LMM v2中实施的加性混合模型，对≥5名个体具有非缺失表型信息的668个基于秩的逆正太变换(RINT)定量指标(包括所有受试者和性别分层模型)进行评估。在标准化之前，首先将性状适当地变换(log10，平方)并针对一组标准协变量进行调整，所述协变量包括年龄、性别、研究地点、血统的前四个主成分以及在一些情况下的BMI和/或吸烟状况。在标准化之前，大于中位数的五个中位数绝对偏差的数据点作为异常值被排除。使用SAIGE中实施的广义混合模型，通过对年龄、性别和血统的前四个主成分进行协变量调整，对≥50个病例的1,073个离散结果(包括所有受试者和性别分层模型)进行评估。对于分析中包括的每个定量和离散性状，仅评价>3个LOF携带者具有非缺失表型和协变量信息的基因区域。
使用两步法系统地定义阳性对照。首先，使用公开可获得的资源，包括OMIM、NCBIMedGen和NHGRI-EBI GWAS目录，注释相关疾病、性状、生物学或功能证据的每个基因。然后使用NCBI PubMed手工挑选具有来自至少一个来源的支持证据的基因，以验证感兴趣基因中性状与LOF变体之间的关系。在GWAS目录中对感兴趣的性状或相关表型的具有基因座水平的支持但对LOF关联缺乏明确的支持证据的基因在本文中报告为新的LOF关联。
单变体LOF关联分析方法
使用与负担关联分析的方法部分中所述相同的方法进行单变体关联分析。对于p<10-7的基因-性状关联，用负担测试中包括的所有LOF的感兴趣表型计算单变体关联统计，这些LOF使用WES在49,960名欧洲血统个体中观察到，其中次要等位基因计数≥5。在扩展数据(ExtData_SingleVariantLOFs_V1.xlsx)中报告这些变体的关联统计。
P值留一(LOO)负担是不存在/存在测试的p值，不包括被测试的变体。ΔP值负担是留一分析中的p值与使用所有65个变体的负担测试相比的比率。使用无关个体的所有65个变体的负担汇总统计：B＝1.44，SE＝0.26，p值＝3.12E-08，cMAF＝0.00174，cMAC＝152，cMAF病例＝0.0066，cMAC病例＝17，cMAF对照＝0.0016，cMAC病例＝135。逐步逻辑回归选择了11/65个变体(AIC 11451)。使用11个变体的负担汇总统计：B＝3.71，SE＝0.437，p值<2e-16，cMAF＝0.0003，cMAC＝22，cMAF病例＝0.005，cMAC病例＝12，cMAF对照＝0.0001，cMAC对照＝10。当分析限制于MAC>1的变体时，逐步逻辑回归选择5/13个变体(AIC 11484)。使用5个变体的负担汇总统计：B＝3.02，SE＝0.53，p值＝8.92e-09。
通过对于PIEZO1和阳性对照(16:88835545_G_A；以绿色突出显示)的逐步回归选择的11个pLOF变体的LD(r2)在PIEZO1的文献中报告。这12个变体均不在LD中，R2>0.01。当针对先前报告的变体rs2911463(16:88835545_G_A)调整负担测试时，负担测试p值保持<2E-16(AIC 11,444)，这表明负担未标记报告的变体。
实施例2：测序参与者的人口统计学和临床特征
总共选择了50,000名参与者，优先考虑具有更完全表型数据的个体：具有来自UKBiobank成像研究的全身MRI成像数据、增强的基线测量值、医院事件统计(HES)和/或相关的初级护理记录(这将可很快地由批准的研究者获得)的那些个体。在数据生成期间，40名参与者的样品因质量控制指标失败或参与者退出而被排除，得到49,960名个体的最终集合。总之，测序的样品代表500,000名UKB参与者(表1)。测序样品与总体研究群体在年龄、性别或血统方面没有明显差异。测序的参与者更可能具有HES诊断代码(测序组为84.2％，而总体为77.3％)和增强指标(表1)。
表1：测序的全外显子组和所有UK Biobank参与者的临床特征
Figure BDA0003290781080000291
Figure BDA0003290781080000301
a在2018年11月从UK Biobank下载的数据中具有至少一个非缺失图像衍生表型值的样品数量。
b在2018年11月从UK Biobank下载的数据中具有外显子组测序数据和至少一个非缺失图像衍生表型值的样品数量。
c前两个遗传主成分得分图的3个预先定义区域中的样品数量，其中所选择的区域代表非洲、东亚和欧洲血统(参见图3)。
除了哮喘代码(ICD10 J45)和哮喘持续状态代码(ICD10 J46)(测序样品中最丰富的)和老年性白内障代码(ICD10 H25)以及未知和未指定的发病原因代码(ICD10 R69)(最贫乏的)之外，具有至少一个HES诊断代码的WES参与者在主要和次要ICD10代码的中位数或广泛表型分布方面与未测序的参与者没有差异。测序子集包括194对亲子对、613对全同胞对、1对单卵双胞胎对和195个二级关系。UKB WES中个体对之间的相关性分布包括在图1中。
实施例3：来自WES的编码变异的总结和表征
靶向19,467个基因的蛋白质编码区和外显子-内含子剪接位点。按所有和MAF<1％频率的类型/功能类别在所有个体中观察到的常染色体变体计数。所有变体均通过QC标准，个体和变体缺失<10％，并且Hardy Weinberg p值>10-15。所有变体和MAF<1％的变体计数中位数和四分位数间距(IQR)。在每个样品中达到至少20倍覆盖度的所靶向的碱基(n＝38,997,831)的平均比例为94.6％(标准偏差2.1％)。质量控制后观察到10,028,025个单核苷酸和插入缺失变体，98.5％具有次要等位基因频率(MAF)<1％(表2)。在总变体中，3,995,785个在所靶向的区域内。这些变体包括2,431,680个非同义(98.9％具有MAF<1％)、1,200,882个同义(97.8％具有MAF<1％)和205,867个影响至少一个编码转录物的预测功能丧失(pLOF)变体(起始密码子丢失、过早终止密码子、剪接和移码插入缺失变体；99.7％具有MAF<1％)(图2)。每名个体的9,403个同义(IQR 125)、8,369个非同义(IQR 132)和161个pLOF变体(IQR 14)的计数(中位数)与先前的外显子组测序研究相当。如果分析限制于影响基因的所有转录物的pLOF变体，则pLOF变体的数量下降到总体140,850个和每名个体96个(分别降低约31.6％和约40.4％)，这与先前的研究一致。
表2：49,960名UKB参与者的测序外显子组中变体的汇总统计
Figure BDA0003290781080000321
实施例4：与LOF变异的表型关联
WES和丰富的健康信息的组合允许对人遗传变异的表型结果进行广泛研究。LOF变异可深入了解基因功能；然而，推算的数据集丢失了大部分此类变异。WES非常适合鉴定LOF变体并评价它们的表型关联。在n＝46,979个主要是欧洲血统的个体中，用1,741个性状(1,073个离散性状，其中有至少50个由医院事件统计和自我报告数据定义的病例计数；668个定量、人体测量和血液性状)进行罕见(AAF<1％)pLOF变体(在WES中在>3个pLOF变体携带者的所有基因中鉴定的pLOF变体)的基因负担关联测试。对于每个基因-性状关联，还将pLOF基因负担测试的关联强度与负担测试中包括的每个SNV的关联结果进行比较。
实施例5：LOF关联和新基因发现
在pLOF基因负担关联分析中，鉴定了PIEZO1 LOF(累积等位基因频率＝0.2％)与大幅增加的静脉曲张风险之间的新关联。表3示出了UKB 50k外显子组和UKB 150k外显子组内的下肢无症状静脉曲张二元表型的PIEZO1结果。
表3：PIEZO1 LOF基因负担关联
Figure BDA0003290781080000331
这一发现是由罕见LOF变体的负担驱动的，其中UKB 50k外显子组中最重要的PIEZO1单变体LOF关联实现了2.29x10-3的p值。UKB 50k外显子组的留一分析表明没有单变体来解释整个信号，并且逐步回归分析表明11个单独的变异(其中5个具有MAC>1)对总体负担信号作出贡献(图4)。
这一发现在2,953个静脉曲张病例和75,694个先前外显子组测序的对照中得到重复(OR＝2.7，p＝1.86x10-9)。此区域先前与对疾病风险影响很小的常见非编码变体有关，其中rs2911463和附近的16号染色体上的其他常见变体最近与静脉曲张相关联(在408,455个基因分型的U.K.Biobank参与者的GWAS中，频率＝0.69，OR＝0.996，p值＝1.0x10-27)。rs2911463变体不在LD中，没有识别出任何关键变体(图5)，并且在针对rs2911463进行调整时，负担测试仍然很重要。
序列表
<110> 雷杰纳荣制药公司(Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)
<120> 压电型机械敏感离子通道组件1 (PIEZO1)变体及其用途
<130> 189238.02502 (3172)
<150> 62/862,847
<151> 2019-06-18
<150> 62/806,932
<151> 2019-02-18
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 69883
<212> DNA
<213> 智人(homo sapien)
<400> 1
gggagccgcc gtccggccca gctcggcccc agtgagccga gcgctgcgct ccgccgaggg 60
gcagggcggt cgcctgagcg agcgcgggcc cgggacgtcg gcaccggcgg ggcggccgaa 120
ggagaaggag gaagaggaga aggcggcgcg cgggtccccg cgggtcagcc atggcgcgcc 180
ggccccgggg cccccgcacc gccccatagc gccgcggcgt ccgctcggtc tgggccgggc 240
cctgggccct ccagccatgg agccgcacgt gctcggcgcg gtcctgtact ggctgctgct 300
gccctgcgcg ctgctggctg gtgagtgggg ggcgggcgcc tgggggcgac gggagggggc 360
tgcgtctcgg ctccccacgg cctggacacc ggacgacgcc ggccggggcg agggctgcgg 420
gcgagcgggc gcggaaattc ccagggacgc gcgacccggg cgcccgcatt cctgaagcat 480
gagcgcgcca ggcggcggcg gggctcctgt cccagggccg ggctggaagg gcggcggcgg 540
ctgggggaga cggcaccgcg tgcccacggg ggcggtcgag cgagcgccgg gcatagcgcg 600
gctggcgtct ccgccggggc gctgcggaga ggaggccgcc gggcgaggcg gtgtttgccc 660
cggtgggaag ggccgcggcg gtggtggggg gagcacgaat ctctttttct ctttcgggtt 720
taaaaaaaaa agcgcaaagt tgcatcagga cttcctgaca atctgggaga aggcgggctt 780
cctgcctgga gctgtttaat ttggagcttc ccgagcccaa cgaacgtccg tgcccagggc 840
ccagccccgc tcaccgctgc acccccctct gccggactga ggcggtccca cactttggaa 900
aaaaatagtg tgggttcctc cctggtcctc ccttgcccta ctgggctcag tttcgcaggg 960
gcgggggccg gcctctgccc tggtctgggg gaggggacac ccccggaggc tgtggcctgg 1020
tgtcagggcg gggcaggggt ccccagtcct ggcatctgtg ttccctgctt gccgggcagt 1080
ggtgcccctt tcgcgaagca cacccgggtg gcttggtgct gcacggcctg gcacccctac 1140
ccttccccga ccctggccta gccgggaccc agggtccgcg ccctccgccc gggggctccc 1200
cacgtgtgat tgatctggga agcagtcgga tggaattaac ccacggacaa gtgggacggt 1260
ttgcattggg agtccgccat ggacacggca ggtggggcct tttgattgta aaagcccttt 1320
cggagccctt gcctcgctcc aggtgggagc tcgcccagcg ctagctttgg ggatctagag 1380
ccgcctgcct gaggctccca gacagactgc gttttgatcg gtcgcacaga aaggtggtga 1440
aacttgggga agattttcta gacaggaatc aatgaaaacc attgaggctg gagaggagag 1500
gttttgagca actctcttca gtgcggtcag ccctgtgtgg actgggcagc ctgggacctg 1560
ctcccagtgc agggtcagat gggccgtaaa cagggcccgg ctgtgttcct tcctgtgcct 1620
tgaaaacaag caggacagcc tggcacagag gcagagtcta gagctgacag gccttagaga 1680
gggaaacagg aaagcttctg aaacgtcccg ttcacactga tcgttccatt tcctcttgtg 1740
tctgagtggg agcgggtgtc ctccctgcag ggaatgcccc ccctctcaga tggcagctgc 1800
tccttgggca gagttggcaa tgtttttctt taaatgacca gatggtaaat attttcatgt 1860
cacaaaatct tcttcttctg gtatttttcc agccattaaa tgtaaaagcc ctcctgagtt 1920
catgggctgt acctaaacag gtgttgagcc cgattctgtg gcacatgtgg tttgctgccc 1980
cctgggcatt ggtcaggggg cctgggttct gccttctcga ttgctatccg cgtgggggat 2040
ctgggggagg gatcactgtt cttcttgctt ttggcctcct tggggaggat ggggaggtag 2100
cccaggggtg ctcacccagg ccccgtgtca gtcttctatg aaacttttaa agaatagtga 2160
tgactgactg tctgtctgta tggtactttc cttaaaccta aaactggtcc caaataaagt 2220
ctcttaattt gaaagatgct gaagcccggg ccatacccca cactgattct gtgtctgggg 2280
atggggcgtg gggcctgggc ctcactcagt gttttctctc agtcacctgg gggagatgga 2340
agtggagccg gccaagaacc ctgcctgcct gcctgctggc cgggactcct gagtcaggct 2400
ctctggccct ggggtgtggg cagctccaga tggacccgcg atgtgcaggt tcagctggcc 2460
tggccggagg tgggacactg gctttgctgt ctttggagtg ccccctccct ctctggcgag 2520
ctttggctgg aagcagttct accgtgtttt ggaaatgaat gaggccttca gaaggcatta 2580
gtcagtgtgt gcctgcgctg gctcagacag tgcctggtga gggtttgagt catcctgggg 2640
tgcccctggc ccccacgccc tccctctcca gtgcaggatc attacccaaa aatctggcag 2700
ggagctgccc cacccacagg gagcaggggc ctccttcagc agtctcacct aatgttgctg 2760
gagccttggg ggatcagggc ccatctcttc tagagagatg tcagggcagg gctgggcgcg 2820
atggctcaca cctgtaatcc cagagcttcg ggaggccaag gtgggaggat tgcttgagcg 2880
tagccattcg agagcagcct gggcaacgta gagatcccca tctctatgaa aaatatttaa 2940
aaattagctg ggcatggtgg tagtgcacct gtagtcccag ctactcagga ggccaaggtg 3000
ggatgattgt ttgagtccag gagttggagg ctacagtgag ccatgattgt atgactgcac 3060
tccagcctgg gtgacagacc ctgtctcaaa aaagaaaaag gaaaaaaaag ggcaggacat 3120
ttgtgattct gataatatgg gaccgcacct ccagttctat cagtgggaaa tctagacagg 3180
gctgcggaaa gccagctggt gcgagaggag ccaccgtgtc actgactgtg ggacacccac 3240
gtgggctgac aatatggctt ctgcttttca gggtgcctcg tggcacagcc taggggcaca 3300
cccacggccg gcaagctggg cgtcacctcc ttcaggctga ttgtcactga gaagtgtcac 3360
catttagcat gagggatgct gcctcctttt tcagaacatt gtcaccatca gggtctcacc 3420
actcctggga ggcggccgag aagctgggga acagcaggca ctcggctcac agttgctcag 3480
cagtgcagac cctctgagct gagcatggca gagtcaccct tcggaggcct gtgcccgggt 3540
ctcaggacct gcacagaacc ctggcctgtc ccatccgagg gtgctgggaa gagcatggcc 3600
gtggcagagt agggtgggag ctgctttcct ctgtggcttg ggggcccctt ctgagcatca 3660
gctccctggt gtgacagagg ggcgcactct gtccccatgc tgggcctgga ggctggatga 3720
gtcagcagga gagcctgggg cctgcctcac agcaccaagg gctgcaggtg tgagtgtgca 3780
catgtgtgcg tgtttgggga aggggccagg gactgcccag gagctgagga tgggtcacag 3840
cgggtgctcg tcccgcagcg ggtcactggt gcccaggaca cagggagctc cagccccagc 3900
tgccagggtc ccacagagag gaagtttcct ctgggggtgg gtgggggcgc acagtctctg 3960
atcctggccc caaggcagct tcctgggcgg tgtctctcct gtgctgactc ggcagtgcat 4020
ttgctttcgg tgctcaaaga tgaaggggaa ccaccgtggg ccttgacggc ctcatctgcc 4080
cgctgcagcc cactcctgag atgggaccac cgcagtcgtc agggtccagt gagagccgca 4140
tcttgcagga agccattcct ggcctctctg gcctcagaaa tccccttttc aattcaacaa 4200
aatgttagtc ttctgtttag ctattttaga aatagacagt taggcttttt tctctttttt 4260
cttaaagaca gaggctcact ctgtcgccca ggctggagtg tagcggcgtg attttggctc 4320
cctacaactt cagcctccag ggctcaagcc atcctcctgc ctcagcctcc tgagtagctg 4380
agattacagg tgtgtagcac catacctaat ttttgtattt tttgtagaga cggggtttca 4440
ccactttggc caggctggcc ttgaactcct gaccttaagc gatctgcccg cctcagcctc 4500
caaaagtgct ggggttacag gcatgagcca ccgcgcccgg ctgacagtta gacttttgct 4560
tctttgttta tataagcttt ttcttctggt tccaaaagca agtttgccct tccttgtggt 4620
agagaatcct agctcacaga gcagtttaga agccagcaca gtatcccaca cacacatctg 4680
gcatggacag acccttcctt gctgggtgtg ggtcctgtgt tcttctgaaa ggcaagctgt 4740
tcccagccaa cccctgcccc tctctgcctt agcctgcctg gaggcctgag tctcctgggt 4800
gactgtgagg tgggaccccc ccttccccta cccccaccca catcctctgt atctgccttc 4860
tgtcctgctc ttgacctttg agctcctctg ctggcttcag ggtgcggctg ttgagcctat 4920
tttttggatt aggactctgg ggtgagggaa gttaattcac acacccaaga tcacactggt 4980
gggaagggac aggcccgggg tgaaggcttc tcctctcctt ggcggttgag tcccacacct 5040
gctggccgag gcacctgaag gggacttggg gtccagggtc actgggagga cgggggcagg 5100
cagaggggtg gccgacctgg tggcggctcg tgggcagcag ccgaccctat cttgctctga 5160
acgtgtgggg ccctcacccc cttctctggg tctgggtttc ctcccctgta agtgacaccg 5220
taaaagcttc acagccgctt ccaagtctca ggtctctcgg gctttggatc tcacacccag 5280
gctgggtggg ggtaggggcg ggacagccgt cccccccgga aggctcagaa ttcctcgcac 5340
aatcgtgggg ccaggagacc cgcaacacag gctttcccag ctgcgctgag tgccgcggtg 5400
gccgggggtc cgtcgggcct ccatggagct gaggggaagg ggccactcac cgcctggtcc 5460
cggagcacac agggcagctc ccaggagcac agaggctcct tgggacctgt ggggctgtcg 5520
gcctccctca tgctgcacac acagcgcgtc cccaggggtg tctgcagccc agcccatccc 5580
actgcagatt cccgaccact cagattcatt catgcatcct ctcacgccgg tcctgtggga 5640
cagagctctg ggcagcagcc agaagtccaa gttctggttc agggccagtg gaggtgggtg 5700
ttggggtggg gctggagctc cctgctctcc ctcccaagct agccaggaaa ggaggttggg 5760
ggccccgcac ggtcattgct gtttattcac aaagcgcgat gctgagcaca ggcggggaaa 5820
gaaaagtgcg atcagtgcca ggaaaatggg gctcccccga cgccgtccaa aatgggatcc 5880
cttgccgggc gcggtggctc acacctgtaa tcccagcact ttgggaagcc gaggcaggtg 5940
gatcacctga ggtcaggagt tcgagaccag cctgaccaac atggcaaaac tccatctcag 6000
ctaaaaatac aaaaattagc tgggcatggt ggcgggcacc tgtattccca gctgggaagg 6060
ctgagacagg agaatcgccg gaacccagga ggtagaggtt gcagtgagcc acagtcgtgc 6120
cactgcactc cagcttgggg gcttggggga cagcaagact ccctctcaaa aaaaaaaaaa 6180
aaaagtgaag tcgtaaatca gattaaattc cctttttaac cctttgaacc tctgtcctcc 6240
cctgttccca gcgggaagcc tctggtgaac gcgccatgca ccccacctgc ccccgctctc 6300
tgggtctctc tcccagctgg aacggccgct tccccaggtg ccttccctgg gccacagcct 6360
tgtgcctcgg cggctgctgg atgcctgggt gtgtgggtgg ctcccagtgt gtgggatggc 6420
acacgagcct ctcgcccttc tgtgtggggt cgcacaccca ccgcaggccg tatttttgct 6480
cacgttcatg tttctccacg gtggacgctg ggttgcaggg acccttcctg tgtgcgggtg 6540
aggatctggg cagctgctgg tgccgggccc atggggacgc tgaccgtccc gggtgccggc 6600
tctgaggtgt gcagtggacg gctgtcctgc cgggcgctgc cagggcccct taggccgacg 6660
tgcgtggcca cccgattccc cgccgttgtc tcaggaacct ttgccgagtg gggtggatca 6720
atttttcggg tgtgttttaa tagcataatt acagggagta tttcaggctc cctctgacgg 6780
gccggcaggg tttggctgcc ggctgtttac caggctccaa tctgcacact atttttctgt 6840
gggtatatat agctggggct gcttctcctt cctcaggttc aggctaaaga gggacagcag 6900
ccgcctcagc caccccctgt ggtttccttt gcctgtggat gggcggctaa aatgggccca 6960
ggaagagtca agaacaaggc cggctctcgg tgccacagct ctacccccaa aagcaggaag 7020
ggggctcggg ccatgcccat ctgtgagcta caccggtccg ggagcggcat caggcagggg 7080
agtcctggac ccccgcagtg ctggggtgtg tttgtccgcc ctccctcccg tgtgtctaga 7140
agcctccagc ctcggggaaa acaatgaaac tcaactgtga cttaaacaga ttcccaggcc 7200
cgcaggagct cccggaggct tgtggctgtg gcgagacctg gagggccatg cgggagggac 7260
agacgcaggt ttgcggaggc cgcctgccca ggaggggcgt caaaggaggg gacagatgtg 7320
ggtttaggga ggccacctgc ccgggaggag cctcgaagga aggcacaggc gtgggtttgg 7380
ggctgcctgc cctggagggg cctcaaggac cccaggtctg gtcttggtct cactcacctc 7440
ctggaccccc caaggcctgc agtttgcaat ctgtcgcctg ggacccccac tgtctgcctt 7500
tacgcagctc agccaccacg cggccctcgc tccctcattt acttgatttc tgtttatggt 7560
taaagtaccg tttaaaacga cacatcatta aagcaacatg aaagggagtt ttgaaaaggg 7620
aagccatcgt ccatcccact gcccctgcct cagcggggat ttacttttcc tttcctgtct 7680
gcgggccagt gacaatgagg accccgcaat gtgtctgcgg gccagtgaca atgaggaccc 7740
cgcaatgtgt ctgcgggcca gtgacagtga ggaccccgca atgtgtctgc gggccagtga 7800
cagtgaggac cctgcaatgt gtctgcgggc cagtgacaat gaggaccctg caatgggcgg 7860
cctgtaaggc tctgccctgg cctccgctgc cttcgctttc tccctccttg gtgggtgcac 7920
gcccttgtgc ttttcctaaa agagcaggtc ctccgggcat ggtggctcac gccggtaatc 7980
ccagcacttt gggaggccga gacgggtgga tcccaaggcc aggagttcaa gaccagcctg 8040
gccaacatgg caaaaccctg tccctactga aaatacaaaa attagctggg tatggtgaca 8100
ggcatctgta atcctagcta ctcgggaggc tgaggcagga gaatcacttg aatccgggag 8160
acggagtttg cagtgagccg agatcacacc attgcactcc agcctgggca acaagagcga 8220
aactccatct caaaaaagaa gaagaagaaa atcctgacac ttcagcctgg tgcaggccct 8280
tccctccttc tagtccctgc caagaagtga gccgggccca gatctcctgc cgggcgggga 8340
atgagcacac acattcccct cttgggacag acagcagcag cagccctgtt gcacacatga 8400
ggacgtacag gctcaggggc cgtgggtggc agagaggcta tcagcgccgg actggcccgc 8460
cccgagccag ggtccagccc cacagtcctg tccccaagcc ctggcccttc tgcggtcact 8520
cccgtctgct gaatccccta ctctgcccct ggtgtgtggc cccccagttc cctcctgtgt 8580
tcattccctg ctaacctccc gtggcttcgc ctccccagat gccctgagca cacagcctct 8640
ccccttcctc ccctcctaga tgtgcacata ggagccgccc aaaggctggg gcagctagtg 8700
gggcccctcc aagggaagct gggccccggg caatgccctg agccaccagg tcctggccct 8760
gcgtctcatc ccttcttttt tttttttgag acagagtctc gctctgtcgc cctggctgga 8820
gtgcagtggc ccagtctggg ctcactgcaa gctctgcctc ccaggttcac gccattctcc 8880
ttcctcagcc tcccgagtag ctgggactac aggcgcccac caccacactc cgctaatttt 8940
ttgtattttt agtagagacg gggtttcacc gtgttaacca ggatggtctc aatctcctga 9000
cctcatgatc cacccgcctc ggcctcccag aatgctggga tgacaggcgt gagccaccgc 9060
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acgtgtttaa cctgaaagga aactgcccct gcgctcccca gcttgtagcc cgtgggcctg 9180
gctctgaggc cccgactgcc ccacggcctg tgctgcgcat gctggagcca ggctccggct 9240
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gcctctgcgt gtgcactgcc ttcttctgag gagtctcctc aagtctccca gctgtttaaa 9360
caatggggtc ttttgtcttt tgacctgttg gtgccatcag ccagcctcct gcacatactc 9420
tccctaccct tggctgccac tcctgtcctg cccttcgcca tgtctttttt cttttctttt 9480
tttttttttt ttttgacagc gtcttattct gccacccagg ctgtagtgga gtggcacgat 9540
cttggctcac tgcaccctcc gcctccctgg ttcaaccgat tctcctgcct tagcctccca 9600
agtagctagg actacaggtg cccaccacca cacccggcta atttttgtat tgttagtgga 9660
gatggagttt caccattttg gccaggctgg tctcaaactc ctgaccttag gtgatccgcc 9720
tgccttggcc tcccaaagtg ctgggattac aggcgtgagc cactgcgccg ggcccccgcc 9780
atgtgttttt aagagcaggc atttcattca gatgaagccc ggacactctt gggggttctg 9840
ctcaggggct ctacctgcca ctgaacgtcc tctccctgtg tgggtggcca tggcattcag 9900
cctgtgttgg gccttgttct gcctggctac tggccgctag gtctgccccg gcatcctctg 9960
tgtcctgtgt gggcgcctct gcctcctgct ccagcctgtg ccaggcaatc ctgctcacct 10020
tccaggagcc aggcctctcc ccagggcctg cgtcctgtca gggtcaggga cggcccctct 10080
gccatgctcc ggagtccctg gtcccctcac tccgttacgt cctgggtgtc acgggtacgg 10140
ccgggaactc tgtcgtcttc actgtctggg ccggggcctc cctgggtgtc tgctggatgg 10200
agtgggtgcc tttgggtccc tgcaaagtga gcctgcctcc cagcaccgcc ctgtcgttac 10260
atagccacta tctttgcgcc tgtttttcct tcctttgact ggttcctctg gggttaattc 10320
ccaggcctgg tattaccatc tctgaatgcc tgggtggttt cagcgcccag gaggctgtgc 10380
tgaggtatct tagaccatgt gggcaccgtt cgctcctgcg cagccggctc cggggtgccc 10440
tgtttttgcg gaatcctgca gggaacccca tgtaccctaa gagtgctctc cccagccact 10500
gtggcataag acaagcggtc tctttgccct tgggccccat ccttgtctgg tcggcccttc 10560
ttcatgggtc cagcgcggga ttgccggctt ccttttcagg cttcctggga cccccactca 10620
gacctgcagc tgggccagcg atgcccaccc gtttctcctc cacgtggtat acagaggtgc 10680
ccaggctgct gctggggact ctggagccca ggagtgagtc tccttgaccc tgagctgtcc 10740
tggctatcac agctgggtcc tgttttcccc ttcagcaccc acgggtgtct ttctccagtt 10800
tatattgtta tttttattta tttacttatc gagacagagt ctcgctctgt cgcccaagct 10860
ggtgtgcagt ggcacaatct cgactcatcg caaactccgc ctcccgggtt caagcgattc 10920
tcatgcctca gcctcctgag tagctgggat tacaggcatg tatcaccagg ctggacctct 10980
agtttatatt attacagcct ggtcagggag tcactgggcg tcgccatcct gtgggtggga 11040
agggggccca ggcagaggcc aggaggaggt gacagtcatg cgcttagaag ctcaggccac 11100
gcccacccag ccctgcctgg tgaccggttc ctgctgtgtt gggagctgca tcccagacct 11160
tatcgccggg cacagaactt ccaagccagg ggagagggag gcctggaggg gccccaatct 11220
ctgaaggtca gcagtggcgg ggaggaggct tgcggtgctg aagggactcg ggggacctgc 11280
agggaggtgt tggtggtcag ggatggtggc acctgagggg acttttggca gggccagaag 11340
tgcccagagc aagctccggt ggggccctgc actggagggc tggggtcgag tgaccctctt 11400
cctaagacca cccaggagga cactgggtgc agggtggccg gagccctcac ccccagtagg 11460
cagctgctgt ccactccgcc gacctgcctg tcacccagta ggcagctgct gtccactccc 11520
ccgacctgcc tgtcacccag taggcagctg ctgtccactc ccccgacctg cctgtcaccc 11580
aataggcagc tgctgtccag tcccccgacc tgcctgtcag ccttttccct gtcaggccct 11640
gttcctagga gcctggagac ctcaggggtg gccttgagcc cccagggttt ttttgagggg 11700
aagcgccagc tgctgtcttc acccttcccc tagtgaggcc aggctgtgca gggccacgtg 11760
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ggtgggcaga cctcctctgc ggtttttatt cagggggtcc ctcgttggct gcccactctt 11940
ggagggctgt cctgactcag gcctcccctc tactcagatc ccctgagcga gggcctgggc 12000
gtgacgccgg gagttactgg ggggccagag ggggaggctc agcctgaatc aatgagaccc 12060
aggaggaagg aggcacgtgg acctgagggc tggctggagc cgctggtgac agatggagga 12120
gtaattgctg cttccagagc acagcgagct cgagctccct ggagtgccag aagcttctgg 12180
gtggacagac aggccgcctc acattccaga ggctgacaca gtcttccagg cacccctggg 12240
gccagctgga agccatgtgc ctccactcac gtgtcccgtg ggtgtttgga ggggaggctg 12300
gccctgccat ggcccacccc agcctgcggc ctcaggagct tgcacatttg caagggggtg 12360
acatgaagac tgagccaggg ctgcggcggg catccccctc agagaacagg gaggaggggg 12420
cacaggcctt tttttttttt tttttgacag agtctcactc tttggccagg ctggaatgca 12480
gtggcacgat ctcagctcac tgccaccttc gcctcccagg ttcaagcgat tctcctgcct 12540
cagcctcccc agtagctgag attacaggca cccaccatca cgcccggctc atttttgtat 12600
ttttagtaga gacggggttt taccatgttg tccaggatgg tcttgatctg ttgacctcgt 12660
gatctgcttg cctcggcctc ccaaagtgct gggattacag gcgtgagcca ctgtgccctg 12720
ccaggcacgg gcctttttat gagggaggaa gccgtgccct ctgccacctg cctgtgggct 12780
ggggcctgca ggctcccagg gccctcagct ccagcgtggc tgttggttat tggcacctgg 12840
gcctcatgtc cacatggaaa gtatattccg agctggtggc taagccacaa gagcctgctt 12900
acctgtccca acccccggct cacttgctgc catgatacgt ctgggattct gggccctcct 12960
tctgagcttg gacacagact tgggacttca gcgctggaca caggtgctgg atctggggtc 13020
tcaatggcac cagggatggt cattctgaca gccatgccca gagtctcagg agggcctggg 13080
gccgcaggtg gacaggcatc ctgaccagag tctcaggagg gcctggggcc gcgggtggac 13140
aggcatagag tctcaggtgg gcctggggcc gcgggtggac gggcatagag tctcaggagg 13200
gcctggggcc gcgggtggat gggcatagag tctcaggagg gcctggggcc gcgggtggac 13260
gggcatagag tctcaggtgg gcctggggcc gcgggtggac gggcatagag tctcaggagg 13320
gcctggggcc gcgggtggac gggcatagag tctcaggagg gcctggggcc gcgggtggac 13380
gggcatagag tctcaggagg gcctggggcc gcgggtggac gggcatagag tctcaggagg 13440
gcctggggcc gcgggtggac gggcatagag tctcaggagg gcctggggcc gcgggtggac 13500
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agggagtctc tccagtgccg cccaccggat tcctatagtt agagctcctc gcccaagccc 14340
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gggagaacac cctgggaggc atcagtcctc ttccctgggg acgggccatg cgtcaacagt 15180
ccctcacttc ctctctcagg ggcagaggcg tgggggtccc gagcctccag gttggagtag 15240
gttaggaggg cctcagagcc ccctgctgcc ccgccatgtg gcattggaag gggtgtgacc 15300
ccctagggga tctgttaacc acactccgcc ccatgccggc ctctctgttc cctctaacct 15360
gcgcaggagc agggccagct ctgagctagc agaggtgaca tgaggctcgt cctggccccg 15420
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ttgagcctca gccccagacc tggctcaggt cctcaggagg aagcagtgac agccaggccc 15540
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gaggggctgc gaggcccagg cagtgtgcca ggccgcacaa gaggagccca gctcttgccc 17040
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agccccctga cctccttcct catgggcagg acctggccca ggggtctcag cacagccaca 17940
ggccagggat gcccttgcag atggccctgg atggaattcc agaactcaga aatgtctcct 18000
tcccgtaagg atgtcccgag actcatgaga ccgtttcctt ctgggaaggg ggaggaatgg 18060
ggagatgagt gaagagcgca ctgcagctca atccgggaag aagctaatca atcaatcagg 18120
gaagccaatc gatcggagaa gctgatggga aagctgtgct tggtagaata ggctcgtgcg 18180
ggcagagcag tcgcggcact cacaggctga ctgtgaggac cttgggtgtt actttgtgct 18240
tctctgcatt ttaaaaactt ttgaaagtgg agaagaggaa agtgaatgtt ctctgagatt 18300
tcatggaaag gggaaactga ggcccactct agccagtttg ggcccagggt tccaacctgg 18360
ggtggccccg gccctcgtgg cctgaggtga tcgtccctgt ggctctgaga gcagctgggg 18420
ccgggtcccc gttctggggc tggtgatcct ggggaagagc caggcagtgc cctgcccacc 18480
tagtggttat gagcccagaa tgttgatttt tttcccttgg ttgcttcatg actttgttga 18540
atttccagag tatgtgtggg ggcccccggc gtcccactcg ccccagccct gtggcagcag 18600
agctggctgt caagctcagt cagctgggcc cagggccccg gaggtaggtg ggtgtgtgcc 18660
tgagcttccc ctttgggccc tgccaggtgc tgggagggac cacacaggcg gcaggaactc 18720
ggggtcccca ggcctcggcc acaccagcct ggtgcttgtt atatattgat atgtctctct 18780
acctgtgaaa tgggtattta ttttaaggag ctgacgcacg cgattgtggg gctgtcacgt 18840
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gtgcgctcag gccgggcttc tctgtggcgg tcctgggaat tcctcctccg ggcccttagg 18960
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caatctcatt ttaaaaacac ctgcacacca aattgcgatt ggcgtttgac taaactgggc 19080
agcgtggccc agcagcgctg acacatgaat caaccctcac accccacccg caggcgtgac 19140
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tggtcgcacc tcctccatcc tcagcaccct gttcagaatg gagatagcgg ccgggtgcag 19260
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aatcgcttga acccaggagg tagaggttgt agtgcgcgag attgtgccac tgcactccag 19500
cctgggcggg cgacagagtg agactctgtc tcaaaaaaaa aaaaaaaaaa aattagagat 19560
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tgccagctat acgaggtgct cacctggcca cgtgtccggg cagtgcttct ggggtggcat 19680
ccactgggag ggcaagatgg ttctggtaca ggtgcccaat tctgtcccca tttcacttac 19740
tgggaactca aggcacagag aggggagggc tgagctagga ccagacccca gtctcctgca 19800
gaagtacaca gacatgatgt acgaccatcc tggacacctg ccctgagatt cccctccctc 19860
tcctgccctg tcccagtggc ctggggggaa ggggaagcaa ggttctgaag ggagtgtgac 19920
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agagcaggcc agcctgtgac tgggccctgg ggcagtctag acaggccaga ctggacaggc 20100
cagggggctg ggtgccgctg ggtaaatcac agggtgaggg ctctgagtca gcaccccatc 20160
ttctgtcctg ggtccagcac cgctgaggac acagtgggca gccgggtctg ccagggccag 20220
gtagctgtgt tgagaaggca gtgctcctga gaggcggcta ccgggaggtt ttcaatggcc 20280
aggcttctta ggaagccctt gttgcctctc tggggtgagt tgctggggcc atggttggag 20340
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atgatgctgg gagtcaaagg caggccgtgg caggggcatt ccttttttct ttcttttttt 20460
tttttttttg agacggagtt tcactcttgt cgcccaggct ggagtgcagt ggtgcgatcc 20520
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tagctgggat tacaggtacg tgccaccatg cccggctaat ttttgtattt ttagtagcga 20640
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ttagcttccc aaagtgttgg cattacaggt gtgagccacc gcgcccggcc tggcagggga 20760
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gctaatcaat gtaatcattg tggtccatgc ggcctctgga atgtgctgtc cactccctgg 21540
gtcagccaga gagtgtcagg gagcacctac cggctgttac ccagtgctgc cctgacctgg 21600
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catgtcagtg ccttcctgtt ctgttctgtt ttgttttgtt ttttaaatcg ggatgaggcc 21720
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cctgcaggac cctgtgggct ttgccccgct ccctgggcag agacagttcc cccagtccca 24060
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agatgagcca taaaactgag tttcctggac actgagctaa ttaaacctgg acaccgagct 24360
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aggaacattc cgtttacctc ctgctgcgtc gaaggcgggt ggctcccctc gggcccctgc 24480
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gggccagggc caggctgtgg gtggggtgag cgatggcgcc ctgcgttctg atccagcctc 45420
gcccccagct gctgtgtggt ctctgagagg ggtgggctca gggcctgggc ctctcctgcc 45480
ctgatctccc tgttaccctg gcctcggagc ctcccagcag cccctgcagc cctggaggcc 45540
tgtgaggaca ggactggtct ggttcatctg tcccgtcaag cccccatccc atttgacaga 45600
aggggaatag gctccgagag gctgtgactt gcctcggcct gcagagcacg gagactgtca 45660
gagctggggt ggggcctatc gtccagcccc acagcctgcg gtctcagccc gggcacctgg 45720
cgcctcagcc accaggagag cccccgagtc acagatgggg acactgggcc ggtggcagcc 45780
aggccagagc cagggcatct gacgacagcc gtgttctttc caccacacct ggctttccct 45840
ggtgtttggg aaatggctgt gttctgggaa atctttagtc aggtccaggg aaaacaggcc 45900
cggcaggtct ctctccccag ccccaggccg gcctgtcact tcttctaggc agctggccac 45960
ctctgtcccc ccagaggctt ggggagggca ggagtaccac ccctatcttc caggcagagc 46020
cacccagaag gctggcaggg gtacacagga gaccctggag cctggccatg tccctcaggc 46080
ccccttggtc tctagagacc ccccggggta tagacagggc cccgctgctc cctgggtgcg 46140
tggttcgggg agatgaggtg gtataggaca gtctgtggtc tgtctgtacc tggcaaggtc 46200
atcacgtgcc tgggcttggc aggacagacc ctgggtcttc ggccagggtg ggagctgcta 46260
ccaggaaggc ctgcaggaac tgtgagcttg agtgaggaag taggaaggtg tcaggcagac 46320
ctcagggacg gctggggcct gtgcccgggg aggctgtcct gtggccctca gaggagcagc 46380
tgtggatgtg gccgcctccc acgctcctgg ctgggcaggt gtgggctgga gaggtggcgt 46440
cagtgcgata cacctgacct tgcccctgtc cgtgaccttg gcaggatgat gatgagaggg 46500
atgtggatgc cagcccgacg gcagggctgc aggaagcagc aacgctggcc cctacacgga 46560
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gcactggcca ggtaccaccc tgtgtgcccc tgccccgcag gcatcgccca cccctcggcc 46800
ctctccagtg tctacctgct gctcttcctg gccctctgca cctggtgggc ctgccacttt 46860
cccatcagca ctcggggctt cagcagactc tgcgtcgcgg tggggtgctt cggcgccggc 46920
catctcatct gcctctactg ctaccagatg cccttggcac aggctctgct cccgcctgcc 46980
ggcatctggg ctaggtaacg gcttgccaca cagccccttt ttcctgccac cctggtcccg 47040
cccacctggc tcgtctagcc cctgtggccc cactgcctct ggggtggtag gctgtgacgg 47100
gtcttctctg gacagggtgc tgggtctcaa ggacttcgtg ggtcccacca actgctccag 47160
cccccacgcg ctggtcctca acaccggcct ggactggcct gtgtatgcca gccccggcgt 47220
cctcctgctg ctgtgctacg ccacggcctc tctgcgcaag ctccgcgcgt accgcccctc 47280
cggccaggtg agcacctgcc acccatggtg ggtgggctga ggccaggcca tggggctggt 47340
ctcaggacct cctgcctctg ggtggggtgt ggagctggtt tgggctcaag acgctggtct 47400
ctgcagagga aggaggcggc aaaggggtat gaggctcggg agctggagct agcagagctg 47460
gaccagtggc cccaggaacg ggagtctgac caggtgagca gccaggcagg tggagacgcc 47520
agcgtggggg gcgcccggcc agcccgtgca tggctcagcg ctgcttgccc acagcacgtg 47580
gtgcccacag cacccgacac cgaggctgat aactgcatcg tgcacgagct gaccggccag 47640
agctccgtcc tgcggcggcc tggtgagtac cgcacactgc aaggtatggc tgggtgcggg 47700
gggcggggcg gaggccggtg ctgccccctg gtggccgcct ggcgctctcg catgctcgcg 47760
ccgcacctct gcctgccgcc ccctcggggg cccaggacat ccacgggtcg gtgtcagtga 47820
cccccgagac ccccagggca gccgagtggc catgtcactg accaaccccc aagaccccca 47880
gggcagctga gtggccgcgt cgttgatccc caagacccca tggggggcct ccaggtcccc 47940
caacccctcc ccagagaatg tggctatgct gtcttgtgct gttagctctg ggagctgctc 48000
caggtggccc agtggcccca ggaggccgct cgtccagggc aggggctggc ctgggaactc 48060
tgtgttggcc acgtcgcctt gggagggcct gggggctctt tctggctact ttctttcttt 48120
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gccctggggt gggggtcctg agagtcttca ggtgcgcaga gctggaaagg gggtcagggc 48240
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atccctgacg ctcagggacg gtgtcagccc aattgccgga gccctcgtgt tctgcccata 48360
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agtcagggtg gggaggcctg cagatcaacc tgccgaagct gaccgctgtc cccacctgca 48480
gtgcggccca agcgggctga gcccagggag gcgtctccgc tccacagcct gggccacctc 48540
atcatggacc agagctatgt gtgcgcgctc attgccatga tggtaggcgg ctgtgggggt 48600
tggggtgggc ggccccctct gccgcgcagg tgtggggcat cgcctgggtg gggtgcgctg 48660
ggcagctgtg cagccccctc tgccgcgcag gtgtggggca tcgcctgggt ggggtgcgct 48720
gggcagctgt gcagccccct ctgccgcgca ggtgtggggc atcgcctggg tggggtgcgc 48780
tgggcagctg tgcagccctc tctgccgcgc aggtatggag catcacctac cacagctggc 48840
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tggccatgct gtgctcgccc tgcatcctgc tgtatgggat gacgctgtgc tgcctacgct 48960
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gccagctggg gctggagcac acccgctacc cctgtctgga ccttggtgcc atggtgagtg 49080
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ggtgcctgcg tgtccatgtg aaacgggtgc cagcatcgtg tctggacacc tgtttgcagg 49560
ccagtgggtc tcatcttgtg aaacttgtga gcctgtgtgc caacatatgc acctgtgagc 49620
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gtgggagggg tgctgggccc cccggctgac tgtgacaccc tgcgcttgtc acagttgctc 49980
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ccaggacttc cctgcctact ggcgcaacct cactggcttc accgacgagc agtgagtcca 50580
ggctggggcg gtggggcagg ggcgccgaaa ccccgtgcac ttccccgggg ctgcagcggc 50640
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ggagcagttc agcgtgtccg agctcttctc cagcatcctg gtgcccggct tcttcctcct 50760
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ggacaggagc cacatcttcc accttcagat cccaaggggc atttgctcat accaagggga 51000
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gggcttcctg gaggcagcat ccttcgacct caactgtgga ccaggggcgc actccctgca 52140
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gggcagcgca tgaactttct ggtgaccctg cacggttgct ggctggtggc catcctcacc 53400
cgcaggcacc gccaggccat tgcccgcctc tggcccaact actgcctctt cctggcgctg 53460
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gggcacgtgg cttgggtggg agtgggcttt gtggctttgt ggatgcccgt gggggtgttt 53580
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ccccgtgcgg gtcggccgtg atgcctcaca cccaagtgct gcctcgagca tgcgtctcct 53880
gggtgagggt gtctgagccc acagccccac acccgtggtc ccgtctcctg gcagtgccat 53940
cgtcaaacgt gtcctctgca ttcaaacagc cccggcctca gcacccttct ttgtggccat 54000
ttggttttca gacgggatct ggtctgatgt ttgctctagt ctcttgtctt gggtctaagc 54060
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ctgccccaca gtggcaccca gcctgttggc actggtgggc tgtgtggggt cagccttgtg 54300
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gggcctcccc tctgctgagt gggtcctggc ccctccggcc acacactgtt acatcatctc 54480
cccgtatttg gctgggcatg gtggttcacg cctgtgatgc cagcactttg ggaggctgag 54540
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tttttttttt tttttttttt tttgagatgg agtcttgctc tgtcacccag gctggagtac 54660
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cacgcccggc cccgtcttgt tttctgctcc caggcgctgc tgcctcatct tctgctaccc 54960
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gatcagcatg tcctgggttc cccaacatcg agggtaactt tgtttttgta tcgtgaggtt 55320
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atcagtgagt gccccccacc acccccgcct ctgcagagga ccctcagagt acattcacgc 57720
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gcagcccttg tgcagatgcc ctcacaccgg ggctccccca gggacacccg gccactcacc 57900
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aggtcctacc ttgacatgct gaaggtggcc gtcttccgat acctgttctg gctggtgctg 58320
gtggtggtgt ttgtcacggg ggccacccgc atcagcatct tcgggctggg ctacctgctg 58380
gcctgcttct acctgctgct cttcggcacg gccctgctgc agagggacac acgggcccgc 58440
ctcgtgctgt gggactgcct cattctgtac aacgtcaccg tcatcatctc caagaacatg 58500
ctgtcggtga gcctccggcc cccccgcacc caccgccctg gggccccgct ggccccgctg 58560
accctgctct cccccagctc ctggcctgcg tcttcgtgga gcagatgcag accggcttct 58620
gctgggtcat ccagctcttc agccttgtat gcaccgtcaa gggctactat gaccgtgagt 58680
ggccaggacg gtggcggggg agggcgtggg gaagccccct gctcctgggc cctgggcctg 58740
acccttgccg gtgcctgcct tgcagccaag gagatgatgg acagagacca ggactgcctg 58800
ctgcctgtgg aggaggctgg catcatctgg gacagcgtct gcttcttctt cctgctgctg 58860
cagcgccgcg tcttccttag ccattactac ctgcacgtca gggccgacct ccaggccacc 58920
gccctgctag cctccaggca agcttgggcc cagacacagc ccagagctcc cgtcttgggg 58980
ctgggagggg gcaatgggag gttcctcact gtctcaggcc ccggcccgtg gagggcaggc 59040
tctgccactc tgtgacatgg gcgtgtcatc tagagggaga atgaaggccg gcagatcccc 59100
ggcaccatca cactctgccc cagtgctggg tctgtcagag accacaggct gcagtgctga 59160
cggtggctgg tgtctcaccc ccagccaact ttcccactaa gggctaagtt tctccaccag 59220
cgggagggcc actgtgtggt gtcacgactg ccccagggag gggttctggc ttggggccag 59280
ctttgccttc ttccctgcag ctgtggtggg gtgggtgcca ccagacgccc ctgcatctgt 59340
acggcagaag ggcctgtcct cgccgcagac agcacggagg gtgggggcag cagatgcctc 59400
ccccgtgggt gcctcttgtc cagcgtgggc agagaggagc aggctgagct gtcccgggct 59460
gagcggggag cggcggctgc ccatgttgct ggggtcgagt gcctggtgct cacaccccat 59520
ccccgcctcc ctacaggggc ttcgccctct acaacgctgc caacctcaag agcattgact 59580
ttcaccgcag gatagaggag aagtccctgg cccagctgaa aagacagtag gtgcctctgg 59640
ggcggggact ccccggctcc tccccccaat gctcagcata ccccaccttt ccccaccaca 59700
ggatggagcg tatccgtgcc aagcaggaga agcacaggca gggccgggtg gaccgcagtc 59760
gcccccagga caccctgggc cccaaggacc ccggcctgga gccaggtgag tgcagctgga 59820
gtcgggcacc cagggccccg tgtccagcat gtctgtgcct gctggcgtgt gctgcgtctg 59880
tgcccatgtg acgtcccaca gggctcccag cccgcctgtc ctgtccgcat gatcaccctc 59940
tgtctggcag gccccatggc cgccctgtga ctgtccgtcc acgcacatgg gctctgagcc 60000
ccatggcccc acacggcccc cgtcactgtg ggtgtccgtg tctgtctcca cctatcctgt 60060
ctccaagacg ggagcactca cagccccgac ccctcctggt ggcttgactg ctgcctcatg 60120
ctcaccctgc ccctccacag ggcccgacag tccagggggc tcctccccgc cacggaggca 60180
gtggtggcgg ccctggctgg accacgccac aggtaccccc aattaggccg cctgtggcca 60240
ccctctcagg ccctctgtgc ccccatctgt cctctgcctg gcctgctatc ttcccctccc 60300
ttcccccgac tcccaggccc tgagcgtcag gacgtgctca ggcctcctgg gtcggggggt 60360
gcctcactgg ctgcagaccc ctgggctgac tatgtcctct cctggctatg ccccagccct 60420
tccaacagtg ggagtctcgg agcttgcccc gatgacacat ggtggtcgag cagcgatctc 60480
acctgggacc cagcagcact gcgttattct gtttttgttt ctttttgaga tggagtctcg 60540
ctctgtcact gcaggctgga gtgcagtggc atgatctcag ctcactgcaa tctctacctc 60600
ccgggttcaa gtgatcctcc tgcctcagcc tcccaagtaa ctgagactac aagcatgtgc 60660
cccactccag gccttttttt tttttttttg gagacggtgt cttgccctgt cgcccaggct 60720
acagtgcaat ggcgtgattg cggctcacta caacccccac ctcccaggtt caaaggattc 60780
tcctgcctca gcctcccaag tagctgggat tacaggtgcc cgccaccacg cccagctaat 60840
tttcgtattt ttagtagaga tggggtttca ccatattggc caggctggtc tcgaacctct 60900
gacttcaggt gatccgcccg cctcagcctc ccacagtgct gggattacag gcgtcagcca 60960
ccgtgcccgg cctgttctgt ttttctaact ctcacacagc ctcctgggtt ttccccggtc 61020
ctctgcagtc ggcccactct gcaccccagc ccgcgctggc tctgctcctc agctgccctg 61080
cccacctctg tcttgtccca ccgcgctggc ctgtgtcttg tgcctgcact gctcccggct 61140
actccgcatg ggaagggtgg ctctcgggcc ttggcccatg caggcggagg gggtctggct 61200
gggagtctcc ctgcatggaa ggctggctct cagtgctgcc tgcccacagt catccactcc 61260
ggggactact tcctgtttga gtccgacagt gaggaagagg aggaggctgt tcctgaagac 61320
ccgaggccgt cggcacagag tgccttccag gtgaggtggg agagccccgt cggccccact 61380
ccaaccacag agcttgtggt cctggaccag ggcagcatag agggtgtcag atgcccccag 61440
ggcctgggag ccgagctcct ccacctccag ttagcccacc ccgccccatc caggcctccc 61500
aagtcccatg ggaaaccagg ctacagggac atgggtcatg tgtagcctgc tgccccacgg 61560
tcttggctct gaccacccag gttctggtgg ctgcccgtgg cctgacctgt gagaccggcc 61620
caacaccttt gtgctggccg cctggctgtc ctgggtccat ctttgggccc ctggctcttg 61680
gtgttagacc agcccaccca actcctgaat gggtgggagt cttcccccac agcccctcag 61740
ggtccccatc cgggaggggc tcagggacac ggaggtccct gggagacaca gagcagggat 61800
ctggatctgg cgcccggctt gcccaacccc agcttcccgc ctgggtctga tggctcggga 61860
ggccgggtcc taacccgggg gctggccgac agctggcgta ccaggcatgg gtgaccaacg 61920
cccaggcggt gctgaggcgg cggcagcagg agcaggagca ggcaaggcag gaacaggcag 61980
gacagctacc cacaggtgag ctggggggcg tggggactct gaggggaagc cgcgggactg 62040
ccagtcactc accagcatcc tgtgcccagg aggtggtccc agccaggagg tggagccagc 62100
agagggcccc gaggaggcag cggcaggtac gtgggcccgg ggctggggag tgggaggtct 62160
ctcttggccc cacaggctgc ccctccagcg ccccctcccg ccctcccgca ggccggagcc 62220
atgtggtgca gagggtgctg agcacggcgc agttcctgtg gatgctgggg caggcgctag 62280
tggatgagct gacacgctgg ctgcaggagt tcacccggca ccacggcacc atgagcgacg 62340
tgctgcgggc agagcgctac ctcctcacac aggagctcct gcaggtgagc ctgcccgtgc 62400
accacgctcg tccctgctct gcctgactac gcccctgcct gcttaacagc ctagtcccgc 62460
gcccactgca cgaaaccccg tgtggggaca agagctggac gcagccctga gccccctgct 62520
gtgccctgca gggcggcgaa gtgcacaggg gcgtgctgga tcagctgtac acaagccagg 62580
ccgaggccac gctgccaggc cccaccgagg cccccaatgc cccaagcacc gtgtccaggt 62640
aggtgcgggg gtgacccgag ccccagctgc tgcccctggt gtgtgggcat cgcctagcca 62700
tccccgaccc tcgccattcc cttgtacccc aaaggaccgt gggcactttc caccctgacc 62760
ctccctgtag cctggggtca ggccatagag caggattctc tgtgactcgg cttccctccc 62820
cagtgggctg ggcgcggagg agccactcag cagcatgaca gacgacatgg gcagccccct 62880
gagcaccggc taccacacgc gcagtggcag tgaggaggca gtcaccgacc ccggggagcg 62940
tgaggctggt gcctctctgt accagggact gatgcggacg gccagcgagc tgctcctgga 63000
caggtggggg cgggacgcgc acaacaccag cctcaccatg gccctcgggg agcagccgaa 63060
caggggcagg agactgactg tgaccggcaa cagatcgggc cgtcatgcct tcgggcagtc 63120
ccagactccc ccaaacacgc gggtctccct gtaggcgcct gcgcatccca gagctggagg 63180
aggcagagct gtttgcggag gggcagggcc gggcgctgcg gctgctgcgg gccgtgtacc 63240
agtgtgtggc cgcccactcg gagctgctct gctacttcat catcatcctc aaccacatgg 63300
tcacggcctc cgccggctcg ctggtgctgc ccgtgctcgt cttcctgtgg gccatgctgt 63360
cgatcccgag gcccagcaag cgcttctgga tgacggccat cgtcttcacc gaggtgggcc 63420
gaggccgcgg gggagggggc gcccggccca ccgcgccgtg accctccccg cgtgctgagc 63480
cccctccccc acagatcgcg gtggtcgtca agtacctgtt ccagtttggg ttcttcccct 63540
ggaacagcca cgtggtgctg cggcgctacg agaacaagcc ctacttcccg ccccgcatcc 63600
tgggcctgga gaagactgac ggctacatca agtacgacct ggtgcagctc atggcccttt 63660
tcttccaccg ctcccagctg ctggtgagtg tgagccttgg ctggcaatgc ggggctgggc 63720
aggccctctg ggcacctgtg ctctccacca gggaggcaag gccccctcac cacaccctcc 63780
cgcccctcag tgctatggcc tctgggacca tgaggaggac tcaccatcca aggagcatga 63840
caagagcggc gaggaggagc agggagccga ggaggggcca ggggtgcctg cggccaccac 63900
cgaagaccac attcaggtgg aagccagggt cggacccacg gacgggaccc cagaacccca 63960
agtggagctc aggccccgtg atacgaggcg catcagtcta cgttttagaa gaaggaagaa 64020
ggagggccca gcacggaaag gagcggcagc catcggtata agcgccctgc ctcacaacct 64080
cctgcctacc cagttttctg agtggggcta ctgcagggag ggtctttctc agatgagacg 64140
gccaagccca gtgcgaggcc cacctggatc ccaggaaggt gccacttctg agccacagct 64200
cccggctctg cctacagagc cgtccctgac tgctgccccc ggggatgctc cccacgtgta 64260
gggtgactgt tggcctgggc tggcccctca cagttgcccc agacagagga cacagcccca 64320
gctgtctcct tgccagtgac actgggagct ttcctgtgct ccgtctgctt gtctgtcaaa 64380
cagggagaat gccagcctct tagggtggtc aggagccatg agccaggccc agtccccagg 64440
gggcccaggc agaagtcagc ttttccctac agaagctgag gacagggagg aagaagaggg 64500
ggaggaagag aaagaggccc ccacggggag agagaagagg ccaagccgct ctggaggaag 64560
agtaagggcg gccgggcggc ggctgcaggg cttctgcctg tccctgtgag tgatggcggc 64620
cgggggcagc tggggagtgg gggtggggag gcgggtactg ggcccaggct gagcgccccc 64680
ttccgcaggg cccagggcac atatcggccg ctacggcgct tcttccacga catcctgcac 64740
accaagtacc gcgcagccac cgacgtctat gccctcatgt tcctggctga tgttgtcgac 64800
ttcatcatca tcatttttgg cttctgggcc tttggggtga gccaggcccg ggacccaaac 64860
ccagtgtacg cagagctcag cagccaccca catcccctgg gcttggctcc ccctgacctg 64920
tgctctcctg gccacagaag cactcggcgg ccacagacat cacgtcctcc ctatcagacg 64980
accaggtacc cgaggctttc ctggtcatgc tgctgatcca gttcagtacc atggtggttg 65040
accgcgccct ctacctgcgc aagaccgtgc tgggcaagct ggccttccag gtggcgctgg 65100
tgctggccat ccacctatgg atgttcttca tcctgcccgc cgtcactgag aggtgggccc 65160
acgcgtgggg gcgctcggtc tccaggggcg gggcagtgca ggctgggggc cctgcggggc 65220
tgtttctgat ggggtccttg acctggccat cccgccccag gatgttcaac cagaatgtgg 65280
tggcccagct ctggtacttc gtgaagtgca tctacttcgc cctgtccgcc taccagatcc 65340
gctgcggcta ccccacccgc atcctcggca acttcctcac caagaagtac aatcatctca 65400
acctcttcct cttccagggg tgagtgcagg tccgccgggg tgggggtcac ggcccgggca 65460
tgagggagcc cacctgacgg gaaccctggc tgtgggcagg ttccggctgg tgccgttcct 65520
ggtggagctg cgggcagtga tggactgggt gtggacggac accacgctgt ccctgtccag 65580
ctggatgtgt gtggaggaca tctatgccaa catcttcatc atcaaatgca gccgagagac 65640
agagaaggtg cctgggccca gggcgggggc cgggacaagg gccagggata tgccctctcc 65700
ctaagacaga ggcactgctg ccacgagaac ccgtggtgct ggaggccctc ccagggctcg 65760
gagcccatgg ggacatgagg cgagcccacc cactagctga tcacgaggcc agtgatcttg 65820
gcagctgcga gtgagtgctg ggcgcagaag tgggcagcgg agttggtcct gttccaggca 65880
ggctggcagc agagcagggc ctggtgcagg gaggaccgga cagccactgt ttgctgcatt 65940
cttgtttaat ggcctttctc agagagaatt cgtgcgtcag accactcccc cacgtaaaaa 66000
gtacaactca ggggtttcta gtggattcac agttgagcat ctgccttctc accacttcaa 66060
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caggagggag gtactgctca aggccaggag ttcaagatct gcacggccac aagcgagacc 66180
ctgcctcagc aaatgtaaaa ataaaacaat tagctggcaa tggcagctca tgcctatggt 66240
cccagcactt tgggaggcca aaggaggagg atcagttgag gccaggagtt ttaagaccag 66300
cctgggcaac atagtgagtg agactctctc tacaaaaaaa taaacgttag ctgggtgtga 66360
tggtgcacac ttgtgctccc agctactctg gaggctgagg tgggaggatg gcttgaggcc 66420
aggagtacag ggctgcatta agcctgatca caccactgca ctccagcttg ggcaacagag 66480
tgagaccctg tctctaaaaa agtaaaaaga agaaacccag tgcccattgg ctgtcactcg 66540
gtttcccctc ccctggcccc tagtaacccc ttgtctaggt cctggttcta tgagatttgc 66600
ctacagtgga tatttcatga aaacaggctc agacagcgtt tgtccttttg taatcagctt 66660
tccttgctca gcatggtgtc tctgaggtcc acccacgtgg cagtatggcc ttcctgttta 66720
tgggcaaatg atattctgtg gcatggatgg accacaacat gctcatctgt tgatgggctg 66780
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gcttgctgtg ggctcttctc agttccctgt tgaccgacgc tgagcgtctt ttcatgtgct 67080
tggccatttg tgtatcttct ctggggaaat gtctattcaa atcctttctc catagtttag 67140
ttgggctttt gagataggat ctcaggctga agtgcagtgg catgaccttc actcactgta 67200
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caggtgtgca ccaccaggcc tggctagtct tttgtatttt tggccaggtt cgtctcaaac 67320
tcctgacctc aaagtgctgg gatgacaagt gtgagccgcc acacccagca gttgggttgt 67380
tttttattag agttttttct gtttttctgc agatacattg gctagaaatg actgaattgg 67440
aagaattctc tgtattctct ggttgctaga accttatcaa ttaaaatttg cagaaaattt 67500
ctccaattct atggactgtc tcttaaattt tcttggtgtc tttggaagca caaagtattt 67560
attttggtaa tatctggttt actttgtttc cttcgccaaa tccaggttca tgaagatttg 67620
cccgttttct tctaaaagtt ctatagtttt agctctgaag tttcgctctt tgatccactt 67680
tgaggtaaat tttggcacat ggtatgaggc aggagttgcg tttcattctc ctgcctgggg 67740
cggtgcctgc accgtgttga aaaaggttgt ccgttcccac tgaacggtca cagctccctt 67800
gtctaagatc aacgacccct gaacatgagg gttccaactg gactcttagt tctactccac 67860
tggcctgtgt ctgcccacca ttactaccgc tgtgccatac tgaggtcagg ctggggcttt 67920
tctgggctgc tgggtgagct ggagaatgcg gttgtgtgac ccgcaggaag ggcagagctg 67980
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ggttcccact gctcttcatg tcgctggtgc gctccgtggt tggggttgtc aaccagccca 68160
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cacgctcatc ttcgtggccc cgtgtccccg tgcctgcccc agccgctgtt caccatgagc 68340
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cagtcactga gggtgtcact tgtacccagc tggccatgca gttcatcagc cagtacagcc 68520
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cccccagccg tgcccagatg aagcgggagc tctacaacgg cacggccgac atcaccctgc 68640
gcttcacctg gaacttccag aggttcgtcc tggacttggg gcagtgcctg ggtgggtgga 68700
cccactacag tgggtcacgc tgtgttccca cccccaggga cctggcgaag ggaggcactg 68760
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cagggtcatc cctaatctct tccccaagta catccgtgcc cccaacgggc ccgaagccaa 69000
ccctgtgaag cagctgcagc ccagtgagta tgggcgtggg ggttggggga ggctagagag 69060
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cggcgtgcgt atccagctgc ggagggagca gggtgcgggg gccaccggct tcctcgaatg 69180
gtgggtcatc gagctgcagg agtgccggac cgactgcaac ctgctgccca tggtcatttt 69240
cagtgacaag gtcagcccac cgagcctcgg cttcctggct ggctacgggt gagtgagtgg 69300
ctgggggggc accccgcagc tcggggggct ccgggcggcc ccaggactca ccagcttccc 69360
ccgcagcatc atggggctgt acgtgtccat cgtgctggtc atcggcaagt tcgtgcgcgg 69420
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cctcaagctc tgccaggaca tcttcctggt gcgggagact cgggagctgg agctggagga 69540
ggagttgtac gccaagctca tcttcctcta ccgctcaccg gagaccatga tcaagtggac 69600
tcgtgagaag gagtaggagc tgctgctggc gcccgagagg gaaggagccg gcctgctggg 69660
cagcgtggcc acaaggggcg gcactcctca ggccggggga gccactgccc cgtccaaggc 69720
cgccagctgt gatgcatcct cccggcctgc ctgagccctg atgctgctgt cagagaagga 69780
cactgcgtcc ccacggcctg cgtggcgctg ccgtccccca cgtgtactgt agagtttttt 69840
ttttaattaa aaaatgtttt atttatacaa atggacaatc aga 69883
<210> 2
<211> 8089
<212> DNA
<213> 智人(homo sapien)
<400> 2
gggagccgcc guccggccca gcucggcccc agugagccga gcgcugcgcu ccgccgaggg 60
gcagggcggu cgccugagcg agcgcgggcc cgggacgucg gcaccggcgg ggcggccgaa 120
ggagaaggag gaagaggaga aggcggcgcg cggguccccg cgggucagcc auggcgcgcc 180
ggccccgggg cccccgcacc gccccauagc gccgcggcgu ccgcucgguc ugggccgggc 240
ccugggcccu ccagccaugg agccgcacgu gcucggcgcg guccuguacu ggcugcugcu 300
gcccugcgcg cugcuggcug ccugccugcu ccgcuucagc ggacucucgc uggucuaccu 360
gcucuuccug cugcugcugc ccugguuccc cggccccacc cgaugcggcc uccaagguca 420
cacaggccgc cuccugcggg cauugcuggg ccucagccug cucuuccugg uggcccaucu 480
cgcccuccag aucugccugc auauugugcc ccgccuggac cagcuccugg gacccagcug 540
cagccgcugg gagacccucu cgcgacacau aggggucaca aggcuggacc ugaaggacau 600
ccccaacgcc auccggcugg uggccccuga ccugggcauc uugguggucu ccucugucug 660
ccucggcauc ugcgggcgcc uugcaaggaa cacccggcag agcccacauc cacgggagcu 720
ggaugaugau gagagggaug uggaugccag cccgacggca gggcugcagg aagcagcaac 780
gcuggccccu acacggaggu cacggcuggc cgcucguuuc cgagucacgg cccacuggcu 840
gcugguggcg gcugggcggg uccuggccgu aacacugcuu gcacuggcag gcaucgccca 900
ccccucggcc cucuccagug ucuaccugcu gcucuuccug gcccucugca ccuggugggc 960
cugccacuuu cccaucagca cucggggcuu cagcagacuc ugcgucgcgg uggggugcuu 1020
cggcgccggc caucucaucu gccucuacug cuaccagaug cccuuggcac aggcucugcu 1080
cccgccugcc ggcaucuggg cuagggugcu gggucucaag gacuucgugg gucccaccaa 1140
cugcuccagc ccccacgcgc ugguccucaa caccggccug gacuggccug uguaugccag 1200
ccccggcguc cuccugcugc ugugcuacgc cacggccucu cugcgcaagc uccgcgcgua 1260
ccgccccucc ggccagagga aggaggcggc aaagggguau gaggcucggg agcuggagcu 1320
agcagagcug gaccaguggc cccaggaacg ggagucugac cagcacgugg ugcccacagc 1380
acccgacacc gaggcugaua acugcaucgu gcacgagcug accggccaga gcuccguccu 1440
gcggcggccu gugcggccca agcgggcuga gcccagggag gcgucuccgc uccacagccu 1500
gggccaccuc aucauggacc agagcuaugu gugcgcgcuc auugccauga ugguauggag 1560
caucaccuac cacagcuggc ugaccuucgu acugcugcuc ugggccugcc ucaucuggac 1620
ggugcgcagc cgccaccaac uggccaugcu gugcucgccc ugcauccugc uguaugggau 1680
gacgcugugc ugccuacgcu acgugugggc cauggaccug cgcccugagc ugcccaccac 1740
ccugggcccc gucagccugc gccagcuggg gcuggagcac acccgcuacc ccugucugga 1800
ccuuggugcc auguugcucu acacccugac cuucuggcuc cugcugcgcc aguuugugaa 1860
agagaagcug cugaaguggg cagagucucc agcugcgcug acggagguca ccguggcaga 1920
cacagagccc acgcggacgc agacgcuguu gcagagccug ggggagcugg ugaagggcgu 1980
guacgccaag uacuggaucu augugugugc uggcauguuc aucgugguca gcuucgccgg 2040
ccgccucgug gucuacaaga uugucuacau guuccucuuc cugcucugcc ucacccucuu 2100
ccaggucuac uacagccugu ggcggaagcu gcucaaggcc uucugguggc ucgugguggc 2160
cuacaccaug cugguccuca ucgccgucua caccuuccag uuccaggacu ucccugccua 2220
cuggcgcaac cucacuggcu ucaccgacga gcagcugggg gaccugggcc uggagcaguu 2280
cagcgugucc gagcucuucu ccagcauccu ggugcccggc uucuuccucc uggccugcau 2340
ccugcagcug cacuacuucc acaggcccuu caugcagcuc accgacaugg agcacguguc 2400
ccugccuggc acgcgccucc cgcgcugggc ucacaggcag gaugcaguga gugggacccc 2460
acugcugcgg gaggagcagc aggagcauca gcagcagcag caggaggagg aggaggagga 2520
ggaggacucc agggacgagg ggcugggcgu ggccacuccc caccaggcca cgcaggugcc 2580
ugaaggggca gccaaguggg gccugguggc ugagcggcug cuggagcugg cagccggcuu 2640
cucggacguc cucucacgcg ugcagguguu ccugcggcgg cugcuggagc uucacguuuu 2700
caagcuggug gcccuguaca ccgucugggu ggcccugaag gaggugucgg ugaugaaccu 2760
gcugcuggug gugcuguggg ccuucgcccu gcccuaccca cgcuuccggc ccauggccuc 2820
cugccugucc accgugugga ccugcgucau caucgugugu aagaugcugu accagcucaa 2880
gguugucaac ccccaggagu auuccagcaa cugcaccgag cccuucccca acagcaccaa 2940
cuugcugccc acggagauca gccagucccu gcuguaccgg gggcccgugg acccugccaa 3000
cugguuuggg gugcggaaag gguuccccaa ccugggcuac auccagaacc accugcaagu 3060
gcugcugcug cugguauucg aggccaucgu guaccggcgc caggagcacu accgccggca 3120
gcaccagcug gccccgcugc cugcccaggc cguguuugcc agcggcaccc gccagcagcu 3180
ggaccaggau cugcucggcu gccucaagua cuucaucaac uucuucuucu acaaauucgg 3240
gcuggagauc ugcuuccuga uggccgugaa cgugaucggg cagcgcauga acuuucuggu 3300
gacccugcac gguugcuggc ugguggccau ccucacccgc aggcaccgcc aggccauugc 3360
ccgccucugg cccaacuacu gccucuuccu ggcgcuguuc cugcuguacc aguaccugcu 3420
gugccugggg augcccccgg cccugugcau ugauuauccc uggcgcugga gccgggccgu 3480
ccccaugaac uccgcacuca ucaaguggcu guaccugccu gauuucuucc gggcccccaa 3540
cuccaccaac cucaucagcg acuuucuccu gcugcugugc gccucccagc aguggcaggu 3600
guucucagcu gagcgcacag aggaguggca gcgcauggcu ggcgucaaca ccgaccgccu 3660
ggagccgcug cggggggagc ccaaccccgu gcccaacuuu auccacugca gguccuaccu 3720
ugacaugcug aagguggccg ucuuccgaua ccuguucugg cuggugcugg uggugguguu 3780
ugucacgggg gccacccgca ucagcaucuu cgggcugggc uaccugcugg ccugcuucua 3840
ccugcugcuc uucggcacgg cccugcugca gagggacaca cgggcccgcc ucgugcugug 3900
ggacugccuc auucuguaca acgucaccgu caucaucucc aagaacaugc ugucgcuccu 3960
ggccugcguc uucguggagc agaugcagac cggcuucugc ugggucaucc agcucuucag 4020
ccuuguaugc accgucaagg gcuacuauga ccccaaggag augauggaca gagaccagga 4080
cugccugcug ccuguggagg aggcuggcau caucugggac agcgucugcu ucuucuuccu 4140
gcugcugcag cgccgcgucu uccuuagcca uuacuaccug cacgucaggg ccgaccucca 4200
ggccaccgcc cugcuagccu ccaggggcuu cgcccucuac aacgcugcca accucaagag 4260
cauugacuuu caccgcagga uagaggagaa gucccuggcc cagcugaaaa gacagaugga 4320
gcguauccgu gccaagcagg agaagcacag gcagggccgg guggaccgca gucgccccca 4380
ggacacccug ggccccaagg accccggccu ggagccaggg cccgacaguc cagggggcuc 4440
cuccccgcca cggaggcagu gguggcggcc cuggcuggac cacgccacag ucauccacuc 4500
cggggacuac uuccuguuug aguccgacag ugaggaagag gaggaggcug uuccugaaga 4560
cccgaggccg ucggcacaga gugccuucca gcuggcguac caggcauggg ugaccaacgc 4620
ccaggcggug cugaggcggc ggcagcagga gcaggagcag gcaaggcagg aacaggcagg 4680
acagcuaccc acaggaggug gucccagcca ggagguggag ccagcagagg gccccgagga 4740
ggcagcggca ggccggagcc auguggugca gagggugcug agcacggcgc aguuccugug 4800
gaugcugggg caggcgcuag uggaugagcu gacacgcugg cugcaggagu ucacccggca 4860
ccacggcacc augagcgacg ugcugcgggc agagcgcuac cuccucacac aggagcuccu 4920
gcagggcggc gaagugcaca ggggcgugcu ggaucagcug uacacaagcc aggccgaggc 4980
cacgcugcca ggccccaccg aggcccccaa ugccccaagc accgugucca gugggcuggg 5040
cgcggaggag ccacucagca gcaugacaga cgacaugggc agcccccuga gcaccggcua 5100
ccacacgcgc aguggcagug aggaggcagu caccgacccc ggggagcgug aggcuggugc 5160
cucucuguac cagggacuga ugcggacggc cagcgagcug cuccuggaca ggcgccugcg 5220
caucccagag cuggaggagg cagagcuguu ugcggagggg cagggccggg cgcugcggcu 5280
gcugcgggcc guguaccagu guguggccgc ccacucggag cugcucugcu acuucaucau 5340
cauccucaac cacaugguca cggccuccgc cggcucgcug gugcugcccg ugcucgucuu 5400
ccugugggcc augcugucga ucccgaggcc cagcaagcgc uucuggauga cggccaucgu 5460
cuucaccgag aucgcggugg ucgucaagua ccuguuccag uuuggguucu uccccuggaa 5520
cagccacgug gugcugcggc gcuacgagaa caagcccuac uucccgcccc gcauccuggg 5580
ccuggagaag acugacggcu acaucaagua cgaccuggug cagcucaugg cccuuuucuu 5640
ccaccgcucc cagcugcugu gcuauggccu cugggaccau gaggaggacu caccauccaa 5700
ggagcaugac aagagcggcg aggaggagca gggagccgag gaggggccag gggugccugc 5760
ggccaccacc gaagaccaca uucaggugga agccaggguc ggacccacgg acgggacccc 5820
agaaccccaa guggagcuca ggccccguga uacgaggcgc aucagucuac guuuuagaag 5880
aaggaagaag gagggcccag cacggaaagg agcggcagcc aucgaagcug aggacaggga 5940
ggaagaagag ggggaggaag agaaagaggc ccccacgggg agagagaaga ggccaagccg 6000
cucuggagga agaguaaggg cggccgggcg gcggcugcag ggcuucugcc ugucccuggc 6060
ccagggcaca uaucggccgc uacggcgcuu cuuccacgac auccugcaca ccaaguaccg 6120
cgcagccacc gacgucuaug cccucauguu ccuggcugau guugucgacu ucaucaucau 6180
cauuuuuggc uucugggccu uugggaagca cucggcggcc acagacauca cguccucccu 6240
aucagacgac cagguacccg aggcuuuccu ggucaugcug cugauccagu ucaguaccau 6300
ggugguugac cgcgcccucu accugcgcaa gaccgugcug ggcaagcugg ccuuccaggu 6360
ggcgcuggug cuggccaucc accuauggau guucuucauc cugcccgccg ucacugagag 6420
gauguucaac cagaaugugg uggcccagcu cugguacuuc gugaagugca ucuacuucgc 6480
ccuguccgcc uaccagaucc gcugcggcua ccccacccgc auccucggca acuuccucac 6540
caagaaguac aaucaucuca accucuuccu cuuccagggg uuccggcugg ugccguuccu 6600
gguggagcug cgggcaguga uggacugggu guggacggac accacgcugu cccuguccag 6660
cuggaugugu guggaggaca ucuaugccaa caucuucauc aucaaaugca gccgagagac 6720
agagaagaaa uacccgcagc ccaaagggca gaagaagaag aagaucguca aguacggcau 6780
ggguggccuc aucauccucu uccucaucgc caucaucugg uucccacugc ucuucauguc 6840
gcuggugcgc uccgugguug ggguugucaa ccagcccauc gaugucaccg ucacccugaa 6900
gcugggcggc uaugagccgc uguucaccau gagcgcccag cagccgucca ucauccccuu 6960
cacggcccag gccuaugagg agcugucccg gcaguuugac ccccagccgc uggccaugca 7020
guucaucagc caguacagcc cugaggacau cgucacggcg cagauugagg gcagcuccgg 7080
ggcgcugugg cgcaucaguc cccccagccg ugcccagaug aagcgggagc ucuacaacgg 7140
cacggccgac aucacccugc gcuucaccug gaacuuccag agggaccugg cgaagggagg 7200
cacuguggag uaugccaacg agaagcacau gcuggcccug gcccccaaca gcacugcacg 7260
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gcccaaugag gaggccgacu accucggcgu gcguauccag cugcggaggg agcagggugc 7440
gggggccacc ggcuuccucg aauggugggu caucgagcug caggagugcc ggaccgacug 7500
caaccugcug cccaugguca uuuucaguga caaggucagc ccaccgagcc ucggcuuccu 7560
ggcuggcuac ggcaucaugg ggcuguacgu guccaucgug cuggucaucg gcaaguucgu 7620
gcgcggauuc uucagcgaga ucucgcacuc cauuauguuc gaggagcugc cgugcgugga 7680
ccgcauccuc aagcucugcc aggacaucuu ccuggugcgg gagacucggg agcuggagcu 7740
ggaggaggag uuguacgcca agcucaucuu ccucuaccgc ucaccggaga ccaugaucaa 7800
guggacucgu gagaaggagu aggagcugcu gcuggcgccc gagagggaag gagccggccu 7860
gcugggcagc guggccacaa ggggcggcac uccucaggcc gggggagcca cugccccguc 7920
caaggccgcc agcugugaug cauccucccg gccugccuga gcccugaugc ugcugucaga 7980
gaaggacacu gcguccccac ggccugcgug gcgcugccgu cccccacgug uacuguagag 8040
uuuuuuuuuu aauuaaaaaa uguuuuauuu auacaaaugg acaaucaga 8089
<210> 3
<211> 8089
<212> DNA
<213> 智人(homo sapien)
<400> 3
gggagccgcc gtccggccca gctcggcccc agtgagccga gcgctgcgct ccgccgaggg 60
gcagggcggt cgcctgagcg agcgcgggcc cgggacgtcg gcaccggcgg ggcggccgaa 120
ggagaaggag gaagaggaga aggcggcgcg cgggtccccg cgggtcagcc atggcgcgcc 180
ggccccgggg cccccgcacc gccccatagc gccgcggcgt ccgctcggtc tgggccgggc 240
cctgggccct ccagccatgg agccgcacgt gctcggcgcg gtcctgtact ggctgctgct 300
gccctgcgcg ctgctggctg cctgcctgct ccgcttcagc ggactctcgc tggtctacct 360
gctcttcctg ctgctgctgc cctggttccc cggccccacc cgatgcggcc tccaaggtca 420
cacaggccgc ctcctgcggg cattgctggg cctcagcctg ctcttcctgg tggcccatct 480
cgccctccag atctgcctgc atattgtgcc ccgcctggac cagctcctgg gacccagctg 540
cagccgctgg gagaccctct cgcgacacat aggggtcaca aggctggacc tgaaggacat 600
ccccaacgcc atccggctgg tggcccctga cctgggcatc ttggtggtct cctctgtctg 660
cctcggcatc tgcgggcgcc ttgcaaggaa cacccggcag agcccacatc cacgggagct 720
ggatgatgat gagagggatg tggatgccag cccgacggca gggctgcagg aagcagcaac 780
gctggcccct acacggaggt cacggctggc cgctcgtttc cgagtcacgg cccactggct 840
gctggtggcg gctgggcggg tcctggccgt aacactgctt gcactggcag gcatcgccca 900
cccctcggcc ctctccagtg tctacctgct gctcttcctg gccctctgca cctggtgggc 960
ctgccacttt cccatcagca ctcggggctt cagcagactc tgcgtcgcgg tggggtgctt 1020
cggcgccggc catctcatct gcctctactg ctaccagatg cccttggcac aggctctgct 1080
cccgcctgcc ggcatctggg ctagggtgct gggtctcaag gacttcgtgg gtcccaccaa 1140
ctgctccagc ccccacgcgc tggtcctcaa caccggcctg gactggcctg tgtatgccag 1200
ccccggcgtc ctcctgctgc tgtgctacgc cacggcctct ctgcgcaagc tccgcgcgta 1260
ccgcccctcc ggccagagga aggaggcggc aaaggggtat gaggctcggg agctggagct 1320
agcagagctg gaccagtggc cccaggaacg ggagtctgac cagcacgtgg tgcccacagc 1380
acccgacacc gaggctgata actgcatcgt gcacgagctg accggccaga gctccgtcct 1440
gcggcggcct gtgcggccca agcgggctga gcccagggag gcgtctccgc tccacagcct 1500
gggccacctc atcatggacc agagctatgt gtgcgcgctc attgccatga tggtatggag 1560
catcacctac cacagctggc tgaccttcgt actgctgctc tgggcctgcc tcatctggac 1620
ggtgcgcagc cgccaccaac tggccatgct gtgctcgccc tgcatcctgc tgtatgggat 1680
gacgctgtgc tgcctacgct acgtgtgggc catggacctg cgccctgagc tgcccaccac 1740
cctgggcccc gtcagcctgc gccagctggg gctggagcac acccgctacc cctgtctgga 1800
ccttggtgcc atgttgctct acaccctgac cttctggctc ctgctgcgcc agtttgtgaa 1860
agagaagctg ctgaagtggg cagagtctcc agctgcgctg acggaggtca ccgtggcaga 1920
cacagagccc acgcggacgc agacgctgtt gcagagcctg ggggagctgg tgaagggcgt 1980
gtacgccaag tactggatct atgtgtgtgc tggcatgttc atcgtggtca gcttcgccgg 2040
ccgcctcgtg gtctacaaga ttgtctacat gttcctcttc ctgctctgcc tcaccctctt 2100
ccaggtctac tacagcctgt ggcggaagct gctcaaggcc ttctggtggc tcgtggtggc 2160
ctacaccatg ctggtcctca tcgccgtcta caccttccag ttccaggact tccctgccta 2220
ctggcgcaac ctcactggct tcaccgacga gcagctgggg gacctgggcc tggagcagtt 2280
cagcgtgtcc gagctcttct ccagcatcct ggtgcccggc ttcttcctcc tggcctgcat 2340
cctgcagctg cactacttcc acaggccctt catgcagctc accgacatgg agcacgtgtc 2400
cctgcctggc acgcgcctcc cgcgctgggc tcacaggcag gatgcagtga gtgggacccc 2460
actgctgcgg gaggagcagc aggagcatca gcagcagcag caggaggagg aggaggagga 2520
ggaggactcc agggacgagg ggctgggcgt ggccactccc caccaggcca cgcaggtgcc 2580
tgaaggggca gccaagtggg gcctggtggc tgagcggctg ctggagctgg cagccggctt 2640
ctcggacgtc ctctcacgcg tgcaggtgtt cctgcggcgg ctgctggagc ttcacgtttt 2700
caagctggtg gccctgtaca ccgtctgggt ggccctgaag gaggtgtcgg tgatgaacct 2760
gctgctggtg gtgctgtggg ccttcgccct gccctaccca cgcttccggc ccatggcctc 2820
ctgcctgtcc accgtgtgga cctgcgtcat catcgtgtgt aagatgctgt accagctcaa 2880
ggttgtcaac ccccaggagt attccagcaa ctgcaccgag cccttcccca acagcaccaa 2940
cttgctgccc acggagatca gccagtccct gctgtaccgg gggcccgtgg accctgccaa 3000
ctggtttggg gtgcggaaag ggttccccaa cctgggctac atccagaacc acctgcaagt 3060
gctgctgctg ctggtattcg aggccatcgt gtaccggcgc caggagcact accgccggca 3120
gcaccagctg gccccgctgc ctgcccaggc cgtgtttgcc agcggcaccc gccagcagct 3180
ggaccaggat ctgctcggct gcctcaagta cttcatcaac ttcttcttct acaaattcgg 3240
gctggagatc tgcttcctga tggccgtgaa cgtgatcggg cagcgcatga actttctggt 3300
gaccctgcac ggttgctggc tggtggccat cctcacccgc aggcaccgcc aggccattgc 3360
ccgcctctgg cccaactact gcctcttcct ggcgctgttc ctgctgtacc agtacctgct 3420
gtgcctgggg atgcccccgg ccctgtgcat tgattatccc tggcgctgga gccgggccgt 3480
ccccatgaac tccgcactca tcaagtggct gtacctgcct gatttcttcc gggcccccaa 3540
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gttctcagct gagcgcacag aggagtggca gcgcatggct ggcgtcaaca ccgaccgcct 3660
ggagccgctg cggggggagc ccaaccccgt gcccaacttt atccactgca ggtcctacct 3720
tgacatgctg aaggtggccg tcttccgata cctgttctgg ctggtgctgg tggtggtgtt 3780
tgtcacgggg gccacccgca tcagcatctt cgggctgggc tacctgctgg cctgcttcta 3840
cctgctgctc ttcggcacgg ccctgctgca gagggacaca cgggcccgcc tcgtgctgtg 3900
ggactgcctc attctgtaca acgtcaccgt catcatctcc aagaacatgc tgtcgctcct 3960
ggcctgcgtc ttcgtggagc agatgcagac cggcttctgc tgggtcatcc agctcttcag 4020
ccttgtatgc accgtcaagg gctactatga ccccaaggag atgatggaca gagaccagga 4080
ctgcctgctg cctgtggagg aggctggcat catctgggac agcgtctgct tcttcttcct 4140
gctgctgcag cgccgcgtct tccttagcca ttactacctg cacgtcaggg ccgacctcca 4200
ggccaccgcc ctgctagcct ccaggggctt cgccctctac aacgctgcca acctcaagag 4260
cattgacttt caccgcagga tagaggagaa gtccctggcc cagctgaaaa gacagatgga 4320
gcgtatccgt gccaagcagg agaagcacag gcagggccgg gtggaccgca gtcgccccca 4380
ggacaccctg ggccccaagg accccggcct ggagccaggg cccgacagtc cagggggctc 4440
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cggggactac ttcctgtttg agtccgacag tgaggaagag gaggaggctg ttcctgaaga 4560
cccgaggccg tcggcacaga gtgccttcca gctggcgtac caggcatggg tgaccaacgc 4620
ccaggcggtg ctgaggcggc ggcagcagga gcaggagcag gcaaggcagg aacaggcagg 4680
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agagaagaaa tacccgcagc ccaaagggca gaagaagaag aagatcgtca agtacggcat 6780
gggtggcctc atcatcctct tcctcatcgc catcatctgg ttcccactgc tcttcatgtc 6840
gctggtgcgc tccgtggttg gggttgtcaa ccagcccatc gatgtcaccg tcaccctgaa 6900
gctgggcggc tatgagccgc tgttcaccat gagcgcccag cagccgtcca tcatcccctt 6960
cacggcccag gcctatgagg agctgtcccg gcagtttgac ccccagccgc tggccatgca 7020
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cttccccaag tacatccgtg cccccaacgg gcccgaagcc aaccctgtga agcagctgca 7380
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caacctgctg cccatggtca ttttcagtga caaggtcagc ccaccgagcc tcggcttcct 7560
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ccgcatcctc aagctctgcc aggacatctt cctggtgcgg gagactcggg agctggagct 7740
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caaggccgcc agctgtgatg catcctcccg gcctgcctga gccctgatgc tgctgtcaga 7980
gaaggacact gcgtccccac ggcctgcgtg gcgctgccgt cccccacgtg tactgtagag 8040
tttttttttt aattaaaaaa tgttttattt atacaaatgg acaatcaga 8089
<210> 4
<211> 2521
<212> PRT
<213> 智人(homo sapien)
<400> 4
Met Glu Pro His Val Leu Gly Ala Val Leu Tyr Trp Leu Leu Leu Pro
1 5 10 15
Cys Ala Leu Leu Ala Ala Cys Leu Leu Arg Phe Ser Gly Leu Ser Leu
20 25 30
Val Tyr Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Pro Trp Phe Pro Gly Pro Thr
35 40 45
Arg Cys Gly Leu Gln Gly His Thr Gly Arg Leu Leu Arg Ala Leu Leu
50 55 60
Gly Leu Ser Leu Leu Phe Leu Val Ala His Leu Ala Leu Gln Ile Cys
65 70 75 80
Leu His Ile Val Pro Arg Leu Asp Gln Leu Leu Gly Pro Ser Cys Ser
85 90 95
Arg Trp Glu Thr Leu Ser Arg His Ile Gly Val Thr Arg Leu Asp Leu
100 105 110
Lys Asp Ile Pro Asn Ala Ile Arg Leu Val Ala Pro Asp Leu Gly Ile
115 120 125
Leu Val Val Ser Ser Val Cys Leu Gly Ile Cys Gly Arg Leu Ala Arg
130 135 140
Asn Thr Arg Gln Ser Pro His Pro Arg Glu Leu Asp Asp Asp Glu Arg
145 150 155 160
Asp Val Asp Ala Ser Pro Thr Ala Gly Leu Gln Glu Ala Ala Thr Leu
165 170 175
Ala Pro Thr Arg Arg Ser Arg Leu Ala Ala Arg Phe Arg Val Thr Ala
180 185 190
His Trp Leu Leu Val Ala Ala Gly Arg Val Leu Ala Val Thr Leu Leu
195 200 205
Ala Leu Ala Gly Ile Ala His Pro Ser Ala Leu Ser Ser Val Tyr Leu
210 215 220
Leu Leu Phe Leu Ala Leu Cys Thr Trp Trp Ala Cys His Phe Pro Ile
225 230 235 240
Ser Thr Arg Gly Phe Ser Arg Leu Cys Val Ala Val Gly Cys Phe Gly
245 250 255
Ala Gly His Leu Ile Cys Leu Tyr Cys Tyr Gln Met Pro Leu Ala Gln
260 265 270
Ala Leu Leu Pro Pro Ala Gly Ile Trp Ala Arg Val Leu Gly Leu Lys
275 280 285
Asp Phe Val Gly Pro Thr Asn Cys Ser Ser Pro His Ala Leu Val Leu
290 295 300
Asn Thr Gly Leu Asp Trp Pro Val Tyr Ala Ser Pro Gly Val Leu Leu
305 310 315 320
Leu Leu Cys Tyr Ala Thr Ala Ser Leu Arg Lys Leu Arg Ala Tyr Arg
325 330 335
Pro Ser Gly Gln Arg Lys Glu Ala Ala Lys Gly Tyr Glu Ala Arg Glu
340 345 350
Leu Glu Leu Ala Glu Leu Asp Gln Trp Pro Gln Glu Arg Glu Ser Asp
355 360 365
Gln His Val Val Pro Thr Ala Pro Asp Thr Glu Ala Asp Asn Cys Ile
370 375 380
Val His Glu Leu Thr Gly Gln Ser Ser Val Leu Arg Arg Pro Val Arg
385 390 395 400
Pro Lys Arg Ala Glu Pro Arg Glu Ala Ser Pro Leu His Ser Leu Gly
405 410 415
His Leu Ile Met Asp Gln Ser Tyr Val Cys Ala Leu Ile Ala Met Met
420 425 430
Val Trp Ser Ile Thr Tyr His Ser Trp Leu Thr Phe Val Leu Leu Leu
435 440 445
Trp Ala Cys Leu Ile Trp Thr Val Arg Ser Arg His Gln Leu Ala Met
450 455 460
Leu Cys Ser Pro Cys Ile Leu Leu Tyr Gly Met Thr Leu Cys Cys Leu
465 470 475 480
Arg Tyr Val Trp Ala Met Asp Leu Arg Pro Glu Leu Pro Thr Thr Leu
485 490 495
Gly Pro Val Ser Leu Arg Gln Leu Gly Leu Glu His Thr Arg Tyr Pro
500 505 510
Cys Leu Asp Leu Gly Ala Met Leu Leu Tyr Thr Leu Thr Phe Trp Leu
515 520 525
Leu Leu Arg Gln Phe Val Lys Glu Lys Leu Leu Lys Trp Ala Glu Ser
530 535 540
Pro Ala Ala Leu Thr Glu Val Thr Val Ala Asp Thr Glu Pro Thr Arg
545 550 555 560
Thr Gln Thr Leu Leu Gln Ser Leu Gly Glu Leu Val Lys Gly Val Tyr
565 570 575
Ala Lys Tyr Trp Ile Tyr Val Cys Ala Gly Met Phe Ile Val Val Ser
580 585 590
Phe Ala Gly Arg Leu Val Val Tyr Lys Ile Val Tyr Met Phe Leu Phe
595 600 605
Leu Leu Cys Leu Thr Leu Phe Gln Val Tyr Tyr Ser Leu Trp Arg Lys
610 615 620
Leu Leu Lys Ala Phe Trp Trp Leu Val Val Ala Tyr Thr Met Leu Val
625 630 635 640
Leu Ile Ala Val Tyr Thr Phe Gln Phe Gln Asp Phe Pro Ala Tyr Trp
645 650 655
Arg Asn Leu Thr Gly Phe Thr Asp Glu Gln Leu Gly Asp Leu Gly Leu
660 665 670
Glu Gln Phe Ser Val Ser Glu Leu Phe Ser Ser Ile Leu Val Pro Gly
675 680 685
Phe Phe Leu Leu Ala Cys Ile Leu Gln Leu His Tyr Phe His Arg Pro
690 695 700
Phe Met Gln Leu Thr Asp Met Glu His Val Ser Leu Pro Gly Thr Arg
705 710 715 720
Leu Pro Arg Trp Ala His Arg Gln Asp Ala Val Ser Gly Thr Pro Leu
725 730 735
Leu Arg Glu Glu Gln Gln Glu His Gln Gln Gln Gln Gln Glu Glu Glu
740 745 750
Glu Glu Glu Glu Asp Ser Arg Asp Glu Gly Leu Gly Val Ala Thr Pro
755 760 765
His Gln Ala Thr Gln Val Pro Glu Gly Ala Ala Lys Trp Gly Leu Val
770 775 780
Ala Glu Arg Leu Leu Glu Leu Ala Ala Gly Phe Ser Asp Val Leu Ser
785 790 795 800
Arg Val Gln Val Phe Leu Arg Arg Leu Leu Glu Leu His Val Phe Lys
805 810 815
Leu Val Ala Leu Tyr Thr Val Trp Val Ala Leu Lys Glu Val Ser Val
820 825 830
Met Asn Leu Leu Leu Val Val Leu Trp Ala Phe Ala Leu Pro Tyr Pro
835 840 845
Arg Phe Arg Pro Met Ala Ser Cys Leu Ser Thr Val Trp Thr Cys Val
850 855 860
Ile Ile Val Cys Lys Met Leu Tyr Gln Leu Lys Val Val Asn Pro Gln
865 870 875 880
Glu Tyr Ser Ser Asn Cys Thr Glu Pro Phe Pro Asn Ser Thr Asn Leu
885 890 895
Leu Pro Thr Glu Ile Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Arg Gly Pro Val Asp
900 905 910
Pro Ala Asn Trp Phe Gly Val Arg Lys Gly Phe Pro Asn Leu Gly Tyr
915 920 925
Ile Gln Asn His Leu Gln Val Leu Leu Leu Leu Val Phe Glu Ala Ile
930 935 940
Val Tyr Arg Arg Gln Glu His Tyr Arg Arg Gln His Gln Leu Ala Pro
945 950 955 960
Leu Pro Ala Gln Ala Val Phe Ala Ser Gly Thr Arg Gln Gln Leu Asp
965 970 975
Gln Asp Leu Leu Gly Cys Leu Lys Tyr Phe Ile Asn Phe Phe Phe Tyr
980 985 990
Lys Phe Gly Leu Glu Ile Cys Phe Leu Met Ala Val Asn Val Ile Gly
995 1000 1005
Gln Arg Met Asn Phe Leu Val Thr Leu His Gly Cys Trp Leu Val
1010 1015 1020
Ala Ile Leu Thr Arg Arg His Arg Gln Ala Ile Ala Arg Leu Trp
1025 1030 1035
Pro Asn Tyr Cys Leu Phe Leu Ala Leu Phe Leu Leu Tyr Gln Tyr
1040 1045 1050
Leu Leu Cys Leu Gly Met Pro Pro Ala Leu Cys Ile Asp Tyr Pro
1055 1060 1065
Trp Arg Trp Ser Arg Ala Val Pro Met Asn Ser Ala Leu Ile Lys
1070 1075 1080
Trp Leu Tyr Leu Pro Asp Phe Phe Arg Ala Pro Asn Ser Thr Asn
1085 1090 1095
Leu Ile Ser Asp Phe Leu Leu Leu Leu Cys Ala Ser Gln Gln Trp
1100 1105 1110
Gln Val Phe Ser Ala Glu Arg Thr Glu Glu Trp Gln Arg Met Ala
1115 1120 1125
Gly Val Asn Thr Asp Arg Leu Glu Pro Leu Arg Gly Glu Pro Asn
1130 1135 1140
Pro Val Pro Asn Phe Ile His Cys Arg Ser Tyr Leu Asp Met Leu
1145 1150 1155
Lys Val Ala Val Phe Arg Tyr Leu Phe Trp Leu Val Leu Val Val
1160 1165 1170
Val Phe Val Thr Gly Ala Thr Arg Ile Ser Ile Phe Gly Leu Gly
1175 1180 1185
Tyr Leu Leu Ala Cys Phe Tyr Leu Leu Leu Phe Gly Thr Ala Leu
1190 1195 1200
Leu Gln Arg Asp Thr Arg Ala Arg Leu Val Leu Trp Asp Cys Leu
1205 1210 1215
Ile Leu Tyr Asn Val Thr Val Ile Ile Ser Lys Asn Met Leu Ser
1220 1225 1230
Leu Leu Ala Cys Val Phe Val Glu Gln Met Gln Thr Gly Phe Cys
1235 1240 1245
Trp Val Ile Gln Leu Phe Ser Leu Val Cys Thr Val Lys Gly Tyr
1250 1255 1260
Tyr Asp Pro Lys Glu Met Met Asp Arg Asp Gln Asp Cys Leu Leu
1265 1270 1275
Pro Val Glu Glu Ala Gly Ile Ile Trp Asp Ser Val Cys Phe Phe
1280 1285 1290
Phe Leu Leu Leu Gln Arg Arg Val Phe Leu Ser His Tyr Tyr Leu
1295 1300 1305
His Val Arg Ala Asp Leu Gln Ala Thr Ala Leu Leu Ala Ser Arg
1310 1315 1320
Gly Phe Ala Leu Tyr Asn Ala Ala Asn Leu Lys Ser Ile Asp Phe
1325 1330 1335
His Arg Arg Ile Glu Glu Lys Ser Leu Ala Gln Leu Lys Arg Gln
1340 1345 1350
Met Glu Arg Ile Arg Ala Lys Gln Glu Lys His Arg Gln Gly Arg
1355 1360 1365
Val Asp Arg Ser Arg Pro Gln Asp Thr Leu Gly Pro Lys Asp Pro
1370 1375 1380
Gly Leu Glu Pro Gly Pro Asp Ser Pro Gly Gly Ser Ser Pro Pro
1385 1390 1395
Arg Arg Gln Trp Trp Arg Pro Trp Leu Asp His Ala Thr Val Ile
1400 1405 1410
His Ser Gly Asp Tyr Phe Leu Phe Glu Ser Asp Ser Glu Glu Glu
1415 1420 1425
Glu Glu Ala Val Pro Glu Asp Pro Arg Pro Ser Ala Gln Ser Ala
1430 1435 1440
Phe Gln Leu Ala Tyr Gln Ala Trp Val Thr Asn Ala Gln Ala Val
1445 1450 1455
Leu Arg Arg Arg Gln Gln Glu Gln Glu Gln Ala Arg Gln Glu Gln
1460 1465 1470
Ala Gly Gln Leu Pro Thr Gly Gly Gly Pro Ser Gln Glu Val Glu
1475 1480 1485
Pro Ala Glu Gly Pro Glu Glu Ala Ala Ala Gly Arg Ser His Val
1490 1495 1500
Val Gln Arg Val Leu Ser Thr Ala Gln Phe Leu Trp Met Leu Gly
1505 1510 1515
Gln Ala Leu Val Asp Glu Leu Thr Arg Trp Leu Gln Glu Phe Thr
1520 1525 1530
Arg His His Gly Thr Met Ser Asp Val Leu Arg Ala Glu Arg Tyr
1535 1540 1545
Leu Leu Thr Gln Glu Leu Leu Gln Gly Gly Glu Val His Arg Gly
1550 1555 1560
Val Leu Asp Gln Leu Tyr Thr Ser Gln Ala Glu Ala Thr Leu Pro
1565 1570 1575
Gly Pro Thr Glu Ala Pro Asn Ala Pro Ser Thr Val Ser Ser Gly
1580 1585 1590
Leu Gly Ala Glu Glu Pro Leu Ser Ser Met Thr Asp Asp Met Gly
1595 1600 1605
Ser Pro Leu Ser Thr Gly Tyr His Thr Arg Ser Gly Ser Glu Glu
1610 1615 1620
Ala Val Thr Asp Pro Gly Glu Arg Glu Ala Gly Ala Ser Leu Tyr
1625 1630 1635
Gln Gly Leu Met Arg Thr Ala Ser Glu Leu Leu Leu Asp Arg Arg
1640 1645 1650
Leu Arg Ile Pro Glu Leu Glu Glu Ala Glu Leu Phe Ala Glu Gly
1655 1660 1665
Gln Gly Arg Ala Leu Arg Leu Leu Arg Ala Val Tyr Gln Cys Val
1670 1675 1680
Ala Ala His Ser Glu Leu Leu Cys Tyr Phe Ile Ile Ile Leu Asn
1685 1690 1695
His Met Val Thr Ala Ser Ala Gly Ser Leu Val Leu Pro Val Leu
1700 1705 1710
Val Phe Leu Trp Ala Met Leu Ser Ile Pro Arg Pro Ser Lys Arg
1715 1720 1725
Phe Trp Met Thr Ala Ile Val Phe Thr Glu Ile Ala Val Val Val
1730 1735 1740
Lys Tyr Leu Phe Gln Phe Gly Phe Phe Pro Trp Asn Ser His Val
1745 1750 1755
Val Leu Arg Arg Tyr Glu Asn Lys Pro Tyr Phe Pro Pro Arg Ile
1760 1765 1770
Leu Gly Leu Glu Lys Thr Asp Gly Tyr Ile Lys Tyr Asp Leu Val
1775 1780 1785
Gln Leu Met Ala Leu Phe Phe His Arg Ser Gln Leu Leu Cys Tyr
1790 1795 1800
Gly Leu Trp Asp His Glu Glu Asp Ser Pro Ser Lys Glu His Asp
1805 1810 1815
Lys Ser Gly Glu Glu Glu Gln Gly Ala Glu Glu Gly Pro Gly Val
1820 1825 1830
Pro Ala Ala Thr Thr Glu Asp His Ile Gln Val Glu Ala Arg Val
1835 1840 1845
Gly Pro Thr Asp Gly Thr Pro Glu Pro Gln Val Glu Leu Arg Pro
1850 1855 1860
Arg Asp Thr Arg Arg Ile Ser Leu Arg Phe Arg Arg Arg Lys Lys
1865 1870 1875
Glu Gly Pro Ala Arg Lys Gly Ala Ala Ala Ile Glu Ala Glu Asp
1880 1885 1890
Arg Glu Glu Glu Glu Gly Glu Glu Glu Lys Glu Ala Pro Thr Gly
1895 1900 1905
Arg Glu Lys Arg Pro Ser Arg Ser Gly Gly Arg Val Arg Ala Ala
1910 1915 1920
Gly Arg Arg Leu Gln Gly Phe Cys Leu Ser Leu Ala Gln Gly Thr
1925 1930 1935
Tyr Arg Pro Leu Arg Arg Phe Phe His Asp Ile Leu His Thr Lys
1940 1945 1950
Tyr Arg Ala Ala Thr Asp Val Tyr Ala Leu Met Phe Leu Ala Asp
1955 1960 1965
Val Val Asp Phe Ile Ile Ile Ile Phe Gly Phe Trp Ala Phe Gly
1970 1975 1980
Lys His Ser Ala Ala Thr Asp Ile Thr Ser Ser Leu Ser Asp Asp
1985 1990 1995
Gln Val Pro Glu Ala Phe Leu Val Met Leu Leu Ile Gln Phe Ser
2000 2005 2010
Thr Met Val Val Asp Arg Ala Leu Tyr Leu Arg Lys Thr Val Leu
2015 2020 2025
Gly Lys Leu Ala Phe Gln Val Ala Leu Val Leu Ala Ile His Leu
2030 2035 2040
Trp Met Phe Phe Ile Leu Pro Ala Val Thr Glu Arg Met Phe Asn
2045 2050 2055
Gln Asn Val Val Ala Gln Leu Trp Tyr Phe Val Lys Cys Ile Tyr
2060 2065 2070
Phe Ala Leu Ser Ala Tyr Gln Ile Arg Cys Gly Tyr Pro Thr Arg
2075 2080 2085
Ile Leu Gly Asn Phe Leu Thr Lys Lys Tyr Asn His Leu Asn Leu
2090 2095 2100
Phe Leu Phe Gln Gly Phe Arg Leu Val Pro Phe Leu Val Glu Leu
2105 2110 2115
Arg Ala Val Met Asp Trp Val Trp Thr Asp Thr Thr Leu Ser Leu
2120 2125 2130
Ser Ser Trp Met Cys Val Glu Asp Ile Tyr Ala Asn Ile Phe Ile
2135 2140 2145
Ile Lys Cys Ser Arg Glu Thr Glu Lys Lys Tyr Pro Gln Pro Lys
2150 2155 2160
Gly Gln Lys Lys Lys Lys Ile Val Lys Tyr Gly Met Gly Gly Leu
2165 2170 2175
Ile Ile Leu Phe Leu Ile Ala Ile Ile Trp Phe Pro Leu Leu Phe
2180 2185 2190
Met Ser Leu Val Arg Ser Val Val Gly Val Val Asn Gln Pro Ile
2195 2200 2205
Asp Val Thr Val Thr Leu Lys Leu Gly Gly Tyr Glu Pro Leu Phe
2210 2215 2220
Thr Met Ser Ala Gln Gln Pro Ser Ile Ile Pro Phe Thr Ala Gln
2225 2230 2235
Ala Tyr Glu Glu Leu Ser Arg Gln Phe Asp Pro Gln Pro Leu Ala
2240 2245 2250
Met Gln Phe Ile Ser Gln Tyr Ser Pro Glu Asp Ile Val Thr Ala
2255 2260 2265
Gln Ile Glu Gly Ser Ser Gly Ala Leu Trp Arg Ile Ser Pro Pro
2270 2275 2280
Ser Arg Ala Gln Met Lys Arg Glu Leu Tyr Asn Gly Thr Ala Asp
2285 2290 2295
Ile Thr Leu Arg Phe Thr Trp Asn Phe Gln Arg Asp Leu Ala Lys
2300 2305 2310
Gly Gly Thr Val Glu Tyr Ala Asn Glu Lys His Met Leu Ala Leu
2315 2320 2325
Ala Pro Asn Ser Thr Ala Arg Arg Gln Leu Ala Ser Leu Leu Glu
2330 2335 2340
Gly Thr Ser Asp Gln Ser Val Val Ile Pro Asn Leu Phe Pro Lys
2345 2350 2355
Tyr Ile Arg Ala Pro Asn Gly Pro Glu Ala Asn Pro Val Lys Gln
2360 2365 2370
Leu Gln Pro Asn Glu Glu Ala Asp Tyr Leu Gly Val Arg Ile Gln
2375 2380 2385
Leu Arg Arg Glu Gln Gly Ala Gly Ala Thr Gly Phe Leu Glu Trp
2390 2395 2400
Trp Val Ile Glu Leu Gln Glu Cys Arg Thr Asp Cys Asn Leu Leu
2405 2410 2415
Pro Met Val Ile Phe Ser Asp Lys Val Ser Pro Pro Ser Leu Gly
2420 2425 2430
Phe Leu Ala Gly Tyr Gly Ile Met Gly Leu Tyr Val Ser Ile Val
2435 2440 2445
Leu Val Ile Gly Lys Phe Val Arg Gly Phe Phe Ser Glu Ile Ser
2450 2455 2460
His Ser Ile Met Phe Glu Glu Leu Pro Cys Val Asp Arg Ile Leu
2465 2470 2475
Lys Leu Cys Gln Asp Ile Phe Leu Val Arg Glu Thr Arg Glu Leu
2480 2485 2490
Glu Leu Glu Glu Glu Leu Tyr Ala Lys Leu Ile Phe Leu Tyr Arg
2495 2500 2505
Ser Pro Glu Thr Met Ile Lys Trp Thr Arg Glu Lys Glu
2510 2515 2520

Claims (12)

1.一种鉴定具有增加的发展静脉曲张的风险的人受试者的方法，其中所述方法包括确定或已经确定从所述受试者获得的生物样品中存在或不存在：
压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)预测的功能丧失变体基因组核酸分子；
PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子；
由所述mRNA分子产生的PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子；或
PIEZO1预测的功能丧失变体多肽；
其中：
不存在所述PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽表明所述受试者不具有增加的发展静脉曲张的风险；并且
存在所述PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽表明所述受试者具有增加的发展静脉曲张的风险。
2.一种诊断人受试者的静脉曲张的方法，其中所述方法包括检测从所述受试者获得的样品中存在或不存在：
压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)预测的功能丧失变体基因组核酸分子；
PIEZO1预测的功能丧失变体mRNA分子；
由所述mRNA分子产生的PIEZO1预测的功能丧失变体cDNA分子；或
PIEZO1预测的功能丧失变体多肽；
其中当所述受试者具有PIEZO1预测的功能丧失变体基因组核酸分子、mRNA分子、cDNA分子或多肽，并且具有静脉曲张的一种或多种症状时，则所述受试者被诊断为患有静脉曲张。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述方法还包括用有效治疗静脉曲张的药剂治疗患有静脉曲张或具有增加的发展静脉曲张的风险的所述受试者。
4.一种用治疗或抑制静脉曲张的治疗剂治疗患者的方法，其中所述患者罹患静脉曲张或具有增加的发展静脉曲张的风险，所述方法包括以下步骤：
通过以下确定所述患者是否具有编码人压电型机械敏感离子通道组件1(PIEZO1)多肽的PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子：
从所述患者获得或已经获得生物样品；以及
对所述生物样品进行或已经进行基因分型测定以确定所述患者是否具有包含所述PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的基因型；以及
当所述患者是PIEZO1参考时，则以标准剂量量向所述患者施用或继续施用治疗或抑制所述静脉曲张的所述治疗剂；以及
当所述患者对于PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是杂合的或纯合的时，则以等于或大于所述标准剂量量的量向所述患者施用或继续施用治疗或抑制所述静脉曲张的所述治疗剂；
其中存在具有编码所述人PIEZO1多肽的所述PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子的基因型表明所述患者具有增加的发展静脉曲张的风险。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述确定步骤、检测步骤或基因分型测定在体外进行。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括对所述生物样品中的所述PIEZO1核酸分子的核苷酸序列的至少一部分进行测序，其中所测序的部分包含对应于预测的功能丧失变体位置的位置，其中当检测到所述预测的功能丧失变体位置处的变体核苷酸时，所述生物样品中的所述PIEZO1核酸分子是PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括：
a)使所述生物样品与引物接触，所述引物与所述PIEZO1核酸分子的核苷酸序列的邻近预测的功能丧失变体位置的部分杂交；
b)延伸所述引物至少通过所述预测的功能丧失变体位置；以及
c)确定所述引物的所述延伸产物是否在所述预测的功能丧失变体位置处包含变体核苷酸。
8.根据权利要求6或权利要求7所述的方法，其中所述确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括对整个核酸分子进行测序。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括：
a)扩增编码所述人PIEZO1多肽的所述PIEZO1核酸分子的至少一部分，其中所述部分包含预测的功能丧失变体位置；
b)用可检测标记对所述扩增的核酸分子进行标记；
c)使所述标记的核酸分子与包含改变特异性探针的支持物接触，其中所述改变特异性探针包含在严格条件下与所述预测的功能丧失变体位置杂交的核苷酸序列；以及
d)检测所述可检测标记。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述样品中的所述核酸分子是mRNA并且在所述扩增步骤之前将所述mRNA逆转录成cDNA。
11.根据权利要求9或权利要求10所述的方法，其中所述确定步骤、检测步骤或基因分型测定包括：
使所述生物样品中的所述核酸分子与包含可检测标记的改变特异性探针接触，其中所述改变特异性探针包含在严格条件下与预测的功能丧失变体位置杂交的核苷酸序列；以及
检测所述可检测标记。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述PIEZO1预测的功能丧失变体核酸分子是16:88715629:G:A、16:88715728:G:T、16:88715767:G:A、16:88715802:C:A、16:88715822:D:4、16:88715987:I:1、16:88716359:A:G、16:88716570:C:T、16:88716874:G:A、16:88717213:T:A、16:88719588:G:A、16:88719722:C:G、16:88719870:G:T、16:88720068:D:2、16:88720229:C:A、16:88720248:D:4、16:88720394:C:T、16:88720644:D:1、16:88720698:D:1、16:88720698:I:1、16:88721165:C:A、16:88721268:D:1、16:88721307:G:A、16:88721586:G:C、16:88721652:G:C、16:88722217:C:T、16:88722605:I:1、16:88723005:I:7、16:88723253:G:A、16:88723311:C:T、16:88725081:C:A、16:88726282:G:A、16:88726546:C:T、16:88726619:G:A、16:88726924:G:A、16:88727038:C:T、16:88727072:D:1、16:88727163:G:A、16:88731768:D:1、16:88732334:C:G、16:88732411:D:1、16:88732720:D:1、16:88733326:G:C、16:88733337:D:4、16:88733587:C:A、16:88733965:D:1、16:88734017:C:A、16:88734042:I:1、16:88734679:C:T、16:88734909:I:1、16:88736167:D:2、16:88736324:G:A、16:88736391:G:T、16:88736409:C:T、16:88736671:G:A、16:88737557:A:C、16:88737727:C:G、16:88737815:C:T、16:88738283:G:C、16:88738637:G:A、16:88738735:D:1、16:88741477:C:T、16:88742306:D:1、16:88749399:G:A或16:88784929:C:T，或由其产生的mRNA分子，或由所述mRNA分子产生的cDNA分子。
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