CN113652472B - 一种检测产毒微囊藻菌型的探针组合、芯片、试剂盒及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测产毒微囊藻菌型的探针组合，属于微生物检测技术领域。其中，所述探针组合包括检测产毒微囊藻菌型组合中各个产毒微囊藻菌型的探针。本发明还公开了利用上述探针组合制备的基因芯片、试剂盒和检测方法。利用本发明具有通量高和分辨率高的双重优势，并且，本发明检测方法操作方法简单，同时数据处理更为简单便捷，使得本发明对于水体危害蓝藻污染的长期动态监测具有重要应用价值，可指导藻华控制和水生态修复。
Description
技术领域
本发明属于微生物检测技术领域，具体地，涉及一种检测产毒微囊藻菌型的探针组合、芯片、试剂盒及方法。
背景技术
随着人类工业活动和社会经济的持续发展，湖泊因为富营养化而导致的藻类污染已经成为全球性的重大环境问题。水体富营养化主要指的是源于水中营养物质氮和磷的积累而导致的水体浮游生物迅速繁殖，水中溶解氧下降的现象。水体富营养化主要会带来三个方面的危害。首先是影响水体生态系统，当水体中营养物质过于丰富，引起藻类的过度繁殖，水面被藻类覆盖，从而影响下层水中生物的光合作用，同时死亡藻类被微生物分解也会消耗氧气，最终会导致水体缺氧，而影响水中其它生物的自然生长，破坏生态系统稳定，严重阻碍湖泊水产养殖业的发展。另一方面，水体富营养化后通常会伴随藻类的爆发，湖泊被覆盖上一层厚厚的绿膜，死去的水体生物又会发出难闻的气味，这一系列的变化会导致湖泊观赏程度降低，影响附近居民生活，阻碍社会旅游经济发展。最后，也是最重要的一点，富营养化的水体中使得大量可以产生毒素的藻类爆发生长，而被藻毒素污染的水源无论是直接作为饮用水，还是通过间接的水中水产食用，都可能会对人类生命健康造成巨大威胁。
在已知的富营养化水体中最为常见的产毒素藻类是微囊藻。微囊藻(Microcystis)，广泛分布于富营养湖泊，如滇池、太湖和巢湖等。微囊藻属产生的微囊藻毒素会造成人体的肝脏、神经系统和皮肤疾病，因而世界卫生组织明确规定饮用水中的微囊藻毒素不能超过1μg/L。微囊藻属是典型的有害藻属之一，该属菌株多样性很高，目前该属内已发现上百种菌株分属十个物种，不同菌株生活特性，是否产毒素也有所差别，因此对水体湖泊中的产毒微囊藻进行菌株水平长期精准检测对于藻毒素危害的监测和预警意义重大。
目前微囊藻的检测主要分为两种检测策略。一种是利用质谱仪根据微囊藻毒素特性直接检测水体中微囊藻毒素含量，从而判断水体是否被微囊藻污染。这种检测策略主要的劣势在于，只有当水体中已经被微囊藻严重污染且进入毒素释放阶段之后才能检测出，而早期微囊藻休眠阶段很难检出微囊藻污染。第二种策略是通过对微囊藻特定DNA片段扩增测序的方式检测水体中是否含有微囊藻，包括针对微囊藻16S rRNA片段和藻毒素功能基因片段的定量PCR检测方法。这种策略具有较好的早期微囊藻预警效果，但是对于微囊藻检出的分辨率不够，通常只能鉴定到属的水平，从而混淆了不同微囊藻菌株的产毒素差异。
基因芯片是由密集固定于玻片上的寡核苷酸探针组成，利用探针与荧光标记的样本DNA进行碱基互补配对杂交，通过对杂交信号强弱的判读，可以完成对探针目标序列的检测。因为基因芯片的高通量，高敏感性特点，目前已经广泛应用于人类病原微生物检测中，但是将基因芯片技术应用于产毒微囊藻的检测，目前还未有报道。
发明内容
为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明采用的技术方案如下：
本发明第一方面提供本发明检测产毒微囊藻菌型的探针组合，所述探针组合包括检测产毒微囊藻菌型组合中各个产毒微囊藻菌型的探针，其中，所述检测产毒微囊藻菌型组合包括Microcystis wesenbergii FACHB-929、Microcystis aeruginosa FACHB-909、Microcystis aeruginosa FACHB-911、Microcystis aeruginosa FACHB-925、Microcystisaeruginosa FACHB-975、Microcystis aeruginosa FACHB-978、Microcystis sp.FACHB-1005、Microcystis sp.FACHB-1023、Microcystis sp.FACHB-1026、Microcystissp.FACHB-1027和Microcystis elabens FACHB-917中的至少两种。
微囊藻属(Microcystis)是蓝藻门(Cyanophyta)、色球藻纲(Chroococcophyceae)、色球藻目(Chroococcales)、色球藻科(Chrococcaceae)的一属。又名多胞藻属。细胞呈球形，由多数细胞包在胶质物中形成不规则群体。微囊藻属大量繁殖时引起湖靛，并产生毒素，有害于水产养殖。
在本发明中，产毒微囊藻菌型是指同一种微囊藻菌的不同微囊藻菌产毒类型，在产毒方面存在较小差异的为同一菌型。在本发明中，定义上述11种菌型，若检测其中一种菌型的探针检测结果为阳性，则待测样本中存在该菌型的产毒微囊藻菌。
在本发明的一些实施方案中，所述检测产毒微囊藻菌型组合包括所述11种菌型中的3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种或全部11种。
在本发明的一些具体实施方案中，检测Microcystis wesenbergii FACHB-929菌型的探针选自SEQ ID NO.1～47所示探针中的至少一个；检测Microcystis aeruginosaFACHB-909菌型的探针选自SEQ ID NO.48～87所示探针中的至少一个；检测Microcystisaeruginosa FACHB-911菌型的探针选自SEQ ID NO.88～132所示探针中的至少一个；检测Microcystis aeruginosa FACHB-925菌型的探针选自SEQ ID NO.133-161所示探针中的至少一个；检测Microcystis aeruginosa FACHB-975菌型的探针选自SEQ ID NO.162～205所示探针中的至少一个；检测Microcystis aeruginosa FACHB-978菌型的探针选自SEQ IDNO.206～241所示探针中的至少一个；检测Microcystis sp.FACHB-1005菌型的探针选自SEQ ID NO.242～283所示探针中的至少一个；检测Microcystis sp.FACHB-1023菌型的探针选自SEQ ID NO.284～327所示探针中的至少一个；检测Microcystis sp.FACHB-1026菌型的探针选自SEQ ID NO.328～387所示探针中的至少一个；检测Microcystis sp.FACHB-1027菌型的探针选自SEQ ID NO.388～451所示探针中的至少一个；检测Microcystiselabens FACHB-917菌型的探针选自SEQ ID NO.452～504所示探针中的至少一个。
本发明第二方面提供本发明第一方面任一所述的探针组合在制备用于检测产毒微囊藻菌型的基因芯片或试剂盒中的应用。
本发明第三方面提供一种检测产毒微囊藻菌型的基因芯片，所述基因芯片包括权利要求1所述的探针组合。
进一步地，所述基因芯片还包括有阴性对照探针。在本发明的一些优选实施方案中，所述阴性对照探针的核苷酸序列如SEQ ID No.506所示。
进一步地，所述基因芯片还包括全局质控探针。在本发明的一些优选实施方案中，所述全局质控探针的核苷酸序列如SEQ ID No.507所示。
进一步地，所述基因芯片还包括阳性对照探针。在本发明的一些优选实施方案中，所述阳性对照探针的核苷酸序列如SEQ ID No.505所示。
本发明第四方面提供一种检测产毒微囊藻菌型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括本发明第一方面任一所述的探针组合或本发明第三方面任一所述的基因芯片。
进一步地，所述试剂盒还包括待测样本基因组DNA提取试剂。
更进一步地，所述试剂盒还包括核酸扩增试剂和荧光标记试剂。
更进一步地，所述试剂盒还包括纯化试剂。
本发明第五方面提供一种检测产毒微囊藻菌型的方法，包括以下步骤：
S1，获取待测样本的基因组DNA；
S2，对获取的基因组DNA进行核酸扩增、荧光标记并进行纯化；
S3，利用本发明第三方面任一所述的基因芯片进行杂交检测；
S4，根据检测到的探针信号判断检测结果。
在本发明的一些实施方案如此，步骤S1中，可使用本领域常规方法进行核酸提取，进行所述获取待测样本的基因组DNA。
在本发明的一些实施方案中，步骤S2中，所述核酸扩增为非特异性随机扩增；使用Cyanine3-dUTP进行荧光标记。
在本发明的一些实施方案中，步骤S3的基因芯片包括检测Microcystiswesenbergii FACHB-929、Microcystis aeruginosa FACHB-909、Microcystis aeruginosaFACHB-911、Microcystis aeruginosa FACHB-925、Microcystis aeruginosa FACHB-975、Microcystis aeruginosa FACHB-978、Microcystis sp.FACHB-1005、Microcystissp.FACHB-1023、Microcystis sp.FACHB-1026、Microcystis sp.FACHB-1027和Microcystis elabens FACHB-917中的至少两种产毒微囊藻菌型的探针，还包括阴性对照探针、全局质控探针和阳性对照探针。
在本发明的一些实施方案中，检测Microcystis wesenbergii FACHB-929菌型的探针选自SEQ ID NO.1～47所示探针中的至少一个；检测Microcystis aeruginosa FACHB-909菌型的探针选自SEQ ID NO.48～87所示探针中的至少一个；检测Microcystisaeruginosa FACHB-911菌型的探针选自SEQ ID NO.88～132所示探针中的至少一个；检测Microcystis aeruginosa FACHB-925菌型的探针选自SEQ ID NO.133-161所示探针中的至少一个；检测Microcystis aeruginosa FACHB-975菌型的探针选自SEQ ID NO.162～205所示探针中的至少一个；检测Microcystis aeruginosa FACHB-978菌型的探针选自SEQ IDNO.206～241所示探针中的至少一个；检测Microcystis sp.FACHB-1005菌型的探针选自SEQ ID NO.242～283所示探针中的至少一个；检测Microcystis sp.FACHB-1023菌型的探针选自SEQ ID NO.284～327所示探针中的至少一个；检测Microcystis sp.FACHB-1026菌型的探针选自SEQ ID NO.328～387所示探针中的至少一个；检测Microcystis sp.FACHB-1027菌型的探针选自SEQ ID NO.388～451所示探针中的至少一个；检测Microcystiselabens FACHB-917菌型的探针选自SEQ ID NO.452～504所示探针中的至少一个。
任选地，所述阴性对照探针的核苷酸序列如SEQ ID No.506所示，任选地，所述全局质控探针的核苷酸序列如SEQ ID No.507所示，任选地，所述阳性对照探针的核苷酸序列如SEQ ID No.505所示。
进一步地，步骤S4的步骤为：
S41，扫描及特征提取：清洗后的芯片使用安捷伦芯片扫描仪在Multi-TIFF模式下进行扫描，得到芯片特征数据，接着使用特征提取软件提取信号特征，得到探针信号特征数据；
S42，数据质检：对上一步的探针信号特征数据进行质检，设置信号检出阈值为100，若：a)所有阴性对照探针均未检出(荧光信号值均低于阈值)；b)检出了50％以上的阳性对照探针；c)所有全局质控探针均检出，且均未出现信号过饱和，则本次检测数据质检合格；
S43，探针信号判断：首先对所有探针的探针信号值进行杂交置信度筛选，将置信度较低的探针杂交荧光信号删除，得到具有合格信号值的探针数目或比例；对于某一种菌型在待测样本中被检出的检测标准为：检测该菌型的探针中具有合格信号值的探针至少有一个或检测该菌型的全部探针中具有合格信号值的探针的比例高于阈值。
在本发明的一些实施方案中，而判断一个探针是否具有合格信号值，主要通过对杂交位点图像内全部包含的像素点荧光值进行统计分析判断得出。
在本发明的一些具体实施方案中，探针信号值是否合格的判断步骤包括：
①探针信号信噪比筛选：信噪比大于2，单个探针信号值减去背景值，再除以背景值的标准差，结果大于2的探针信号判断为合格信号；
②探针信号信倍比筛选：信背比大于2，单个探针信号值除以背景信号值，结果大于2的探针信号判断为合格信号。
在本发明的一些优选实施方案中，所述阈值为50％、60％、70％或80％。
在本发明中，所述待测样本可以来源为任意水源，包括但不限于江、河、溪、海、湖、泊、水库、池塘等任意流动的或不流动的水源。
本发明的有益效果
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1.现有的产毒微囊藻分子检测技术大都将检测目标区域限定在16S rRNA核糖体基因，或者微囊藻毒素基因区域，因为目标检测区域较小因此分辨率较低，无法鉴定到种以及以下水平。本发明通过基因芯片技术，利用全基因组范围内菌株特异探针，可以对菌株水平的产毒微囊藻进行检测，弥补了现有检测技术分辨率不够的缺陷。
2.本发明利用基因芯片技术，可以同时对11种常见产毒微囊藻菌株在水体中的存在进行检测。且该检测方法操作方法简单，相比较于基于测序的检测方法省去了目标区域PCR和测序的步骤，同时数据处理更为简单便捷。这种高通量，高分辨率的便捷产毒微囊藻菌株检测方法对于水体危害蓝藻污染的长期动态监测具有重要应用价值，可指导藻华控制和水生态修复。
附图说明
图1示出了目标菌株与非目标菌株在模拟样本中的显著荧光探针比率分布，图中虚线代表菌株判定标准，比率高于60％的菌株可被判定为检出。
图2示出了不同杂交DNA总量梯度下目标产毒微囊藻的检出效果。
具体实施方式
除非另有说明、从上下文暗示或属于现有技术的惯例，否则本申请中所有的份数和百分比都基于重量，且所用的测试和表征方法都是与本申请的提交日期同步的。在适用的情况下，本申请中涉及的任何专利、专利申请或公开的内容全部结合于此作为参考，且其等价的同族专利也引入作为参考，特别这些文献所披露的关于本领域中的合成技术、产物和加工设计、聚合物、共聚单体、引发剂或催化剂等的定义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。
本申请中的数字范围是近似值，因此除非另有说明，否则其可包括范围以外的数值。数值范围包括以1个单位增加的从下限值到上限值的所有数值，条件是在任意较低值与任意较高值之间存在至少2个单位的间隔。例如，如果记载组分、物理或其它性质(如分子量，熔体指数等)是100至1000，意味着明确列举了所有的单个数值，例如100，101，102等，以及所有的子范围，例如100到166，155到170，198到200等。对于包含小于1的数值或者包含大于1的分数(例如1.1，1.5等)的范围，则适当地将1个单位看作0.0001，0.001，0.01或者0.1。对于包含小于10(例如1到5)的个位数的范围，通常将1个单位看作0.1。这些仅仅是想要表达的内容的具体示例，并且所列举的最低值与最高值之间的数值的所有可能的组合都被认为清楚记载在本申请中。
关于化学化合物使用时，除非明确地说明，否则单数包括所有的异构形式，反之亦然(例如，“己烷”单独地或共同地包括己烷的全部异构体)。另外，除非明确地说明，否则用“一个”，“一种”或“该”形容的名词也包括其复数形式。
术语“包含”，“包括”，“具有”以及它们的派生词不排除任何其它的组分、步骤或过程的存在，且与这些其它的组分、步骤或过程是否在本申请中披露无关。为消除任何疑问，除非明确说明，否则本申请中所有使用术语“包含”，“包括”，或“具有”的组合物可以包含任何附加的添加剂、辅料或化合物。相反，出来对操作性能所必要的那些，术语“基本上由……组成”将任何其他组分、步骤或过程排除在任何该术语下文叙述的范围之外。术语“由……组成”不包括未具体描述或列出的任何组分、步骤或过程。除非明确说明，否则术语“或”指列出的单独成员或其任何组合。
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
实施例
以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术，因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本发明的精神或范围。
除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
下述实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均按照《分子克隆实验指南》(第四版)(J.萨姆布鲁克、M.R.格林，2017)一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。其他实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备，如无特殊说明，均为实验室常规仪器设备；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1产毒微囊藻菌型特异性检测探针筛选
本实施例利用11种菌株的基因组序列进行探针设计。11种菌株包括Microcystiswesenbergii FACHB-929、Microcystis aeruginosa FACHB-909、Microcystis aeruginosaFACHB-911、Microcystis aeruginosa FACHB-925、Microcystis aeruginosa FACHB-975、Microcystis aeruginosa FACHB-978、Microcystis sp.FACHB-1005、Microcystissp.FACHB-1023、Microcystis sp.FACHB-1026、Microcystis sp.FACHB-1027和Microcystis elabens FACHB-917。11种菌株均来源于中国科学院淡水藻种库(FreshwaterAlgae Culture Collection at the Institute of Hydrobiology，FACHB)，全部获得了基因组序列。
下面为利用产毒微囊藻菌株Microcystis wesenbergii FACHB-929的基因组序列(GCA_014698625.1)设计Microcystis wesenbergii FACHB-929产毒菌型的特异性检测探针的过程。
1.数据集收集：
为设计Microcystis wesenbergii FACHB-929产毒菌型的特异性探针，准备的数据主要包括两个部分，产毒微囊藻菌株Microcystis wesenbergii FACHB-929的基因组序列和背景基因组序列。
在本实施例中，以NCBI数据库中全部的2531个其它(截止到2021年3月12日的数据)的蓝藻基因组序列被设定为背景序列。
2.特异性探针初步挑选：
将2531个蓝藻基因组序列全部打断成50mer长度的Kmer片段，并建立背景序列Kmer片段hash库，记录Kmer的出现频率和所归属菌株信息。再建立微囊藻菌株Microcystiswesenbergii FACHB-929基因组序列的Kmer片段(50mer长度)hash库。将目标序列Kmer库与背景序列的Kmer库进行比较分析，将只存在于目标序列Kmer库中而没有出现在背景序列Kmer库中的Kmer挑选出来，作为该菌株的备选特异探针库。
3.备选特异探针中潜在非特异结合探针的剔除：
如果探针与非目标序列有超过20个碱基的连续匹配，可能发生潜在的非特异结合。利用NCBI的Blast程序，将备选特异探针与背景Kmer库进行序列比对，根据比对结果，将备选特异探针中与背景Kmer有超过20个碱基连续匹配的探针剔除。
4.探针理化性质筛选：
上步结束后共得到253条Microcystis wesenbergii FACHB-929菌株特异探针，这些探针序列唯一的存在于该菌株基因组中，且与其它的菌株基因组没有超过20个连续碱基的匹配。随后对剩余特异探针进行理化性质筛选，主要条件包括：
(1)探针序列与目标序列的核酸自由能(Free energy，单位kcal/mol)，如核酸自由能小于-30，则去除该探针序列。
(2)若探针的连续相同碱基出现5次，那么该探针的复杂度太低，去除该探针序列。
(3)根据熔解温度Tm值(65<Tm<95)和GC含量(0.2<GC含量<0.8)进行菌株特异探针的最后筛选。
最终，设计得到47个分布于Microcystis wesenbergii FACHB-929全基因组范围内的特异探针。如表1所示：
表1 Microcystis wesenbergii FACHB-929产毒菌型特异性探针
实施例2产毒微囊藻特异检测基因芯片制备
利用实施例的方法，分别利用Microcystis aeruginosa FACHB-909、Microcystisaeruginosa FACHB-911、Microcystis aeruginosa FACHB-925、Microcystis aeruginosaFACHB-975、Microcystis aeruginosa FACHB-978、Microcystis sp.FACHB-1005、Microcystis sp.FACHB-1023、Microcystis sp.FACHB-1026、Microcystis sp.FACHB-1027和Microcystis elabens FACHB-917的基因组序列设计探针，结果如表2所示。
表2 10种产毒菌型的特异性探针
由此，设计出的探针数目如表3：
表3各产毒菌型对应的探针
| 产毒菌型 | 探针数目 | SEQ ID No. |
| Microcystis wesenbergii FACHB-929 | 47 | 1～47 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-909 | 40 | 48～87 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-911 | 45 | 88～132 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-925 | 29 | 133～161 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-975 | 44 | 162～205 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-978 | 36 | 206～241 |
| Microcystis sp.FACHB-1005 | 42 | 242～283 |
| Microcystis sp.FACHB-1023 | 44 | 284～327 |
| Microcystis sp.FACHB-1026 | 60 | 328～387 |
| Microcystis sp.FACHB-1027 | 64 | 388～451 |
| Microcystis elabens FACHB-917 | 53 | 452～504 |
阳性和阴性对照探针及全局质控探针的设计：
阳性探针序列(SEQ ID No.505)：
GCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACACCTCACGGCACGAGCTGACGACA
阴性对照探针序列(SEQ ID No.506)：
GACCTGATAAAGCGCAACCGATAACTAAAGAGGGCAGATATAATATCTGT
全局质控探针序列(SEQ ID No.507)：
TGAGCATGAGGTCGCGTTGATTAATCCCGAAGGTCAACTGGCGGATTTCT
探针序列设计方法：均为人工合成序列，且这三个探针与目前已知微生物序列无杂交亲和性。
将设计的全部特异性探针委托安捷伦(Agilent)公司合成。
同时，将上述特异性探针进行不同组合制备成不同基因芯片，例如选择11种菌型中的甚至一种或几种，根据选择出来的菌型，再分别对应选择一种或多种探针，并制成基因芯片。如此，可以制备大量不同的基因芯片。
对照探针和全局质控探针排布方式：随机分布于检测探针之间；
对照探针和全局质控探针数量：对照探针与质控探针为40条重复探针随机排布在芯片上。
在本实施例中，制备如下基因芯片：
基因芯片#1，包括的探针如表4所示：
表4基因芯片#1探针信息
| 产毒菌型 | 探针数目 | SEQ ID No. |
| Microcystis aeruginosa FACHB-911 | 10 | 89、91、93、95、102、104、110、115、119、123 |
| Microcystis sp.FACHB-1023 | 10 | 286、289、290、296、299、301、308、314、319、323 |
| Microcystis elabens FACHB-917 | 10 | 455、459、462、468、473、481、485、489、493、500 |
基因芯片#2，包括的探针如表5所示：
表5基因芯片#2探针信息
| 产毒菌型 | 探针数目 | SEQ ID No. |
| Microcystis wesenbergii FACHB-929 | 5 | 3、8、14、29、38 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-975 | 5 | 168、171、174、188、194 |
| Microcystis sp.FACHB-1005 | 5 | 245、254、253、278、281 |
| Microcystis sp.FACHB-1023 | 5 | 288、291、298、305、314 |
| Microcystis sp.FACHB-1026 | 5 | 328、330、343、356、377 |
基因芯片#3，包括的探针如表6所示：
表6基因芯片#3探针信息
| 产毒菌型 | 探针数目 | SEQ ID No. |
| Microcystis wesenbergii FACHB-929 | 47 | 1～47 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-911 | 45 | 88～132 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-975 | 44 | 162～205 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-978 | 36 | 206～241 |
| Microcystis sp.FACHB-1026 | 60 | 328～387 |
| Microcystis elabens FACHB-917 | 53 | 452～504 |
基因芯片#4，包括的探针如表7所示：
表7基因芯片#4探针信息
基因芯片#5，包括的探针如表8所示：
表8基因芯片#5探针信息
实施例3利用实施例2制备的基因芯片快速检测常见水体产毒微囊藻产毒菌型的方法
1.目标样本DNA提取
采集湖泊或者河流中的水体并通过滤膜过滤对蓝藻进行富集，以富集物作为待测样本，随后，使用Agilent CGH MicroArray的DNA提取试剂盒进行待测样本核酸提取，也可以使用其他本领域常规方法进行待测样本核酸提取。
2.DNA纯化
DNA纯化主要步骤为：
(1)取500ng提取得到的DNA样品于打断管中，补足H2O至50μL。设置打断时间为90s；
(2)预先室温平衡OnePure MagBeads 30min，并充分振荡混匀，确保无明显磁珠沉淀；
(3)向低吸附管/八联管中加入60μL OnePure MagBeads(1.2×)，再加入步骤(1)的打断产物，涡旋混匀，瞬离收集管壁液体，室温静置5min；
(4)将低吸附管或八联管放在磁力架上，待管中溶液澄清，弃去上清液；
(5)向1.5mL低吸附管或八联管中加入200μL 80％新鲜配制的乙醇，静置30s后弃去上清液，重复操作步骤，直至上清去除较为干净；
(6)将低吸附管或八联管置于磁力架上，室温静置1到2min至磁珠干裂或将管子开盖放于45℃金属浴上，待磁珠表面无水光干裂，管底无乙醇残留；
(7)将离心管从磁力架上移开，并加入15μL温育好的Nuclease-free water重悬磁珠，涡旋或吹打混匀后，瞬离收集管壁液体，室温放置3min；
(8)将低吸附管或八联管放在磁力架上，待管中溶液澄清，转移13μL上清液到新的PCR管中，用于下一步标记。
3.DNA荧光标记
本实施例使用Agilent SureTag Complete DNA Labeling Kit试剂盒，包括以下步骤：
(1)向打断后纯化好的gDNA中加入2.5μL Random primer mix，混匀后，进行如下变性反应：98℃3min、4℃hold；
(2)向上述变性反应体系(13μL gDNA和2.5μL Random primer mix)中直接加入以下试剂：5μL 5×Reaction buffer、2.5μL 10×dNTP、1.5μL Cyanine 3-dUTP、0.5μL Exo(-)Klenow，共25μL；
(3)使用移液枪吹打或涡旋振荡混匀后，快速离心收集管壁上的液体，去除气泡；
(4)将反应体系置于PCR仪上，设置热盖温度为75℃，并运行以下程序：37℃2h、65℃10min、4℃hold。
4.目标样本荧光DNA与实施例3制备的基因芯片进行杂交
本实施例使用Agilent Oligo aCGH/ChIP-on-chip Hybridization Kit试剂盒，包括以下步骤：
(1)将纯化后的样品提及浓缩至14.3μL，并按表9配置杂交体系好后，用枪吹打混匀，瞬离后将反应体系置于PCR仪上，设置热盖温度为105℃，并运行以下程序：98℃3min、37℃30min、37℃hold；
(2)杂交：
a.首先将一个干净的垫片放入安捷伦chamber里面，垫片标签朝上，与chamber底部的矩形部分对准，确保垫圈与腔室底座齐平；
b.然后吸取上一步37℃的样品55μL到垫片上的橡胶圈中间，避免产生气泡，将芯片倒扣在垫片上；
c.接着将chamber盖子盖上去，拧紧旋钮；
d.将每个组装好的装置装入恒温箱旋转架，取一个配平的chamber，垂直旋转杂交室，使载玻片湿润，并评估气泡的流动性。
e.设置杂交旋转器旋转速度为20rpm，67℃杂交4h。
(3)芯片清洗：杂交后在室温下取出芯片，放在洗液1(Agilent试剂盒的试剂)中，设置250rpm，在室温下震荡清洗5min；接着再用洗液2(Agilent试剂盒的试剂)，设置200rpm，在39℃下震荡清洗1min，最后去除芯片表面的液体，并在4h内扫描。
表9实施例3中的杂交体系表
5.荧光结果扫描与信号分析
(1)扫描及特征提取：清洗后的芯片使用安捷芯片扫描仪在Multi-TIFF模式下进行扫描，得到芯片特征数据(tiff图片格式)，接着使用特征提取软件(Agilent Featureextraction)v12.1从tiff文件中提取信号特征，得到探针信号特征数据；
(2)数据质检：对上一步的探针信号特征数据进行质检，设置信号检出阈值为100，若a)所有阴性对照探针均未检出(荧光信号值均低于阈值)；b)检出了50％以上的阳性对照探针；c)所有全局质控探针均检出，且均未出现信号过饱和，则本次实验数据质检合格。
(3)信号解读：为了避免杂交实验中一些非特异探针信号的干扰，利用以下步骤实现对芯片探针信号的解读。首先对所有的探针信号进行杂交置信度筛选，将置信度较低的探针杂交荧光信号删除。而判断一个杂交位点的信号是否合格，主要通过对杂交位点图像内全部包含的像素点荧光值进行统计分析判断得出。随后，对于某一种菌型检出的检测标准为，检测该菌型的全部特异探针中至少有1个具有合格信号值。探针信号分析步骤主要包括：
①探针信号信噪比筛选。信噪比(单个探针管道中荧光目标信号与荧光噪音信号的比值)大于2，单个探针信号值减去背景值，再除以背景值的标准差，结果大于2的探针信号判断为合格信号。
②探针信号信倍比筛选。信背比(单个探针管道中荧光目标信号与荧光背景信号的比值)大于2，单个探针信号值除以背景信号值，结果大于2的探针信号判断为合格信号。
③探针信号合格率筛选。统计某一种菌型具有合格探针信号的个数或比例。
④检测结果判定：对于某一种菌型检出的检测标准为：如果针对该菌型的特性性探针有至少1个探针具有合格探针信号值或具有合格探针信号值的比例大于某个阈值，如50％、60％、70％或80％，那么该产毒微囊藻菌型被检测存在于目标水体中。
实施例4检测产毒微囊藻产毒菌型的基因芯片的特异性测试
特异性指的是，对于目标的菌株可以针对性的检测在水体样本中的有无。为了测试发明人设计的探针与基因芯片的特异检出效果，发明人产毒微囊藻菌株进行多组合混合，利用本发明方法对混合菌液进行检测，比较检测结果与实验选定组合设计之间的一致性，并分析检测结果的假阳性和假阴性比率。
发明人从中国科学院淡水藻种库(Freshwater Algae Culture Collection atthe Institute of Hydrobiology，FACHB)获得11种微囊藻产毒菌株，将11种菌株的菌液进行多种组合混合(混合所用每一种单菌的DNA总量为30ng)，一共设计出6种模拟样本，每种模拟样本包含三个重复(表10)。
表10模拟样本的纯菌组合
| 产毒微囊藻菌株 | 模拟样本1 | 模拟样本2 | 模拟样本3 | 模拟样本4 | 模拟样本5 | 模拟样本6 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-909 | √ | × | × | × | × | × |
| Microcystis aeruginosa FACHB-911 | √ | √ | × | × | × | × |
| Microcystis aeruginosa FACHB-925 | √ | √ | √ | × | × | × |
| Microcystis aeruginosa FACHB-975 | √ | √ | √ | √ | × | × |
| Microcystis aeruginosa FACHB-978 | √ | √ | √ | √ | √ | × |
| Microcystis sp.FACHB-1005 | × | √ | √ | √ | √ | √ |
| Microcystis sp.FACHB-1023 | × | × | √ | √ | √ | √ |
| Microcystis sp.FACHB-1026 | × | × | × | √ | √ | √ |
| Microcystis sp.FACHB-1027 | × | × | × | × | √ | √ |
| Microcystis elabens FACHB-917 | × | × | × | × | × | √ |
| Microcystis wesenbergii FACHB-929 | × | × | × | × | × | √ |
发明人利用实施例2制备的基因芯片#5通过实施例3的方法对上述6个模拟样本进行检测。
检测结果显示，所有6个模拟样本中的目标菌株的探针组中具有显著荧光信号的探针比例都大于60％，而非目标菌株的该比例都小于60％(图1)。以探针组点亮探针比例大于60％作为菌株检出标准，所有模拟样本检出微囊藻菌株与实际添加的菌株相吻合，假阳性和假阴性的比例都为0(表11)。
表11模拟样本检出结果
| 产毒微囊藻菌株 | 模拟样本1 | 模拟样本2 | 模拟样本3 | 模拟样本4 | 模拟样本5 | 模拟样本6 |
| Microcystis aeruginosa FACHB-909 | + | - | - | - | - | - |
| Microcystis aeruginosa FACHB-911 | + | + | - | - | - | - |
| Microcystis aeruginosa FACHB-925 | + | + | + | - | - | - |
| Microcystis aeruginosa FACHB-975 | + | + | + | + | - | - |
| Microcystis aeruginosa FACHB-978 | + | + | + | + | + | - |
| Microcystis sp.FACHB-1005 | - | + | + | + | + | + |
| Microcystis sp.FACHB-1023 | - | - | + | + | + | + |
| Microcystis sp.FACHB-1026 | - | - | - | + | + | + |
| Microcystis sp.FACHB-1027 | - | - | - | - | + | + |
| Microcystis elabens FACHB-917 | - | - | - | - | - | + |
| Microcystis wesenbergii FACHB-929 | - | - | - | - | - | + |
| 样本检测准确率 | 100％ | 100％ | 100％ | 100％ | 100％ | 100％ |
| 样本检测假阴性 | 0％ | 0％ | 0％ | 0％ | 0％ | 0％ |
| 样本检测假阳性 | 0％ | 0％ | 0％ | 0％ | 0％ | 0％ |
以上结果证实了本发明的探针和基因芯片以及检测方法具有可靠的微囊藻菌株水平检测效果。
实施例5对目标产毒微囊藻的最低检测限度
为了检验本发明检测方法对于环境中极低浓度的微囊藻菌株是否具有检出能力，设计了浓度梯度检出试验。具体的方案为，选择随机挑选三种微囊藻菌株，每一种菌株分别提取DNA，并选取总量为0.1、0.5、1、5、10、50和100ng的DNA与实施例2基因芯片#5进行荧光杂交实验，实验步骤与实施例3相同。比较在不同的DNA总量下，目标菌型具有显著荧光信号探针占据该菌型探针组比例以及对应的探针荧光信号均值。
如图2，结果表明，当体系中的目标菌株DNA总量达到5ng以及以上，菌株特异探针组中的阳性探针结果就会大于60％，可以通过判定条件，被判定为成功检出。
以上结果证实，利用本发明的探针和基因芯片以及检测方法，在水体中含有微量目标产毒微囊藻时，依然具有良好的检出能力。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 壹健生物科技（苏州）有限公司
<120> 一种检测产毒微囊藻菌型的探针组合、芯片、试剂盒及方法
<130> XYY202110808
<140> 2021108536553
<141> 2021-07-27
<160> 507
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tttaggattc acatatatac agctaactat accaatccct ttgagaacac 50
<210> 2
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
acccgagccg ctgcctgttc cgttaaagcg tgatgtcgat cgttctcagc 50
<210> 3
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tcttcttgat cacagttaac atgcctgctg ttcgaaaaga aattgaagag 50
<210> 4
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gcgcgcagct gtccaatcgc ctcgagccaa gtctggaaat tgcgcagatc 50
<210> 5
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ctggtctcaa tcactgcttt tcccgctaat tacctagaaa tctcctcatt 50
<210> 6
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gctgcactgc acccaaatac cggacacccg ccactgtttg caacaaggta 50
<210> 7
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
aacaacacgc aacctcttcg tactggccat caagtgaagc cgaagcatcc 50
<210> 8
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
ggtattgcca accaaggaca agactcaccg cgagtcttat tttacgtcta 50
<210> 9
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cgaccagcca gaagaagact ccctcggcac actgctagac gaagtagcag 50
<210> 10
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
cctgaacgga cagtcggtcg gtacccgtgt aagaacccac tgcgttaccc 50
<210> 11
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
actatctgcc tacagaagac tatctgccta cagaagacta tctgcctaca 50
<210> 12
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
aaacgatcaa cacagccgtg tcgtcaccgc ctacacaaat ttggtgactc 50
<210> 13
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
ccatatccaa gcagtccatg taaaacaaac accactcaga tattatttaa 50
<210> 14
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
cttttcggaa tgctgctggt agtcccatag ataccgcaag acctctaaga 50
<210> 15
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
cgagccgagg ccaagtcgcc ctggtcagaa aactgaatgg cctcgcgccg 50
<210> 16
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
tcaccactta gttgattcca aacatcagac agtggcacct ggccagcatc 50
<210> 17
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
cgcgtttcta ggcgggtcgt caacagctta gaaggtccac cacaatttag 50
<210> 18
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
gatcgcctgt gcgtacttaa gatgcagagc atcgattcga ctgacgacat 50
<210> 19
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
atacagctct ctgaaaacca ccactattac agcgtacctt atcagtatgt 50
<210> 20
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
ggtgggtttg tccgtacaat tgttccctcc ccgtcagggg agggtcaggg 50
<210> 21
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
tctgatttaa ataatcgtct agcgacttcc aactgttcgg atttggcatt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
tctctgcgcg cgaggggagc ttccgctcga ttaactcaag cctgcatcaa 50
<210> 23
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
caggttctgg aaagagcacg ctcgcgaatg ccgttaatct tgccttattt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
ctggccaggg ctggtgccag ggtccccaga ccctgacggg agagttcgcc 50
<210> 25
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
atctgccagc gagagatgaa gtgaggatct acaacgtcaa gcccagctac 50
<210> 26
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
ggcgtatgag agctgtgatc tatagctctg cttcttggta catcccgttt 50
<210> 27
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
cagctcgtta taagtgctga tccttttatc actcatctcc tgcacataag 50
<210> 28
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcagaagtca gagagggatg cttagactgt catcgcttat atcgagtccg 50
<210> 29
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccgataactt cagccactgt ctgtttatcg ctcttccaat cgtaactaat 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgttgttcac cactacaaac acgcaaatat gcgtttctgg gtccttgtat 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tttggcagat gtctgtagta aaatctttca gggaatagcc acaagtgctg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
ccaaccggaa accgacctaa cggtagcctc cagagtgcta ctgacagaac 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tggatctaaa gcactggcaa gtagcccggg aagaacttct attcctccgc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cattcgccct ttacaccgct caaggttacc acgggctcgg aacgatcgcc 50
<210> 35
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
gcaccggtcg tgctggtacg cccggagaag ctctatccct cgtgtgtgtg 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aaacagttcg attacttgag gtgggacttc gcaacaacct ggtgaatggc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cggtagagac cagcgcccga tcggaggagg aacgccgtcc caggtttaga 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttcatcccca cgacgatcgt ggcaccacgg ccggtgtttt ccggtgcgat 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gatggattta tcaaattggc ggggagggta ctgcggtggg ttaccgacaa 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<210> 43
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aatgttaact taagcaatgt cagtgactca attagtgtta acatttacga 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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ttttcgatct actggagggc cgtccaggaa acggcagatg tgccagatta 50
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<211> 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
tagctgacct cccgagtagg gccagtaggg tcagtactgt gagctatgtc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gccaatgtag agcctgaggg taataacacc tccactaccc gttgattatt 50
<210> 48
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
atgccggatt tgccatggta gaagccgggt ttggccgcac taacaatgca 50
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<211> 50
<212> DNA
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<400> 49
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atggtgacct gccaagtgaa tgccctccct tcgagaggga cgttggcgat 50
<210> 52
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
ttccaacgtt ccgtacctgg acttcgcgca ttgtttaggc ctacacatta 50
<210> 53
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
tttgcctcaa tcgtgccacg gtgagcttcc actatttggc gacacaaatg 50
<210> 54
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
cgagtaattc gcacccgaat tcgtggtgga accggcgttt tagaatttca 50
<210> 55
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
atattgctcg actgacattt aatatcgaag tccctaagta ttcttctttg 50
<210> 56
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
atttgtgtgt gcgttgatgc catcccatgg ggttgcgaca gtcactttgg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
cggactttta gtccgcagct tgcctctaat gcggccttgc atgctgttca 50
<210> 58
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
accattagtc acccctgtca cggtcgcttg catcaccgcc gttccaccct 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
acgaacacac ctgcggcatc tgttcgcacg aatcttgtca tgagcataaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
gctggggaaa ttgagacaaa cacgggagag attgctggag ctataagtgg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
taattctaaa tgagaaactc taatctctag ccatagtgga tgtaggttaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
caatgcccac agtccgtata ttgcgagggg tagataatca gccagtcgaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
agcctggccg aaccaagaga ttattatccg aggagatgca ggattttcct 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
tcgttgaatc tgccccgacg cctcgagttc tcctaggagc cgagtaatcg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
ggggatgacg atctatatgg aactttagcc gttcgtcgag acatctataa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aatatcagca ttattcactc tgtagcctct gttgtattgg tgagtgctgt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
tccagctact cactcggatg acgtcaacat ctctaatggg acttcagagc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
gcaacaaaag ctctggattg tctaacttgc tgagatctgg ttggcagcta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
gcatgggcta tcgctctcgg aagtctgcga agcgttgggg ctggattata 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cacttgatgc taagagctgg gcgtcagtcg cgtagggaat ggtagccata 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
ataccccatt ggtattatga tcgccgtctg gctgcccatc gggaaatgat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tgcttgggtg gataggcacc aacgacgcta aagtcaggag aggagttgac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tattatcgag ggttaaaact ccataaacgt caggttctcg ctgaccgaga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
catcttcttg agtatcattt ccgtattccg actcggaagg atttacggca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccagtagcca gcaggtccag agctccaatg accgagttca tcggggtgcg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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attatcggtg aacttttcgt cagccagggc cgggttattc aggtagcctc 50
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ttcaacggtc aactcaaagt cgcgaaacgt tgccagatcc acgcgacaat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agtgctgatg acctgtagct tgccctgctg gtctttcacg agccatgccc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgtgcacgtt tagtttagcc cctgcacgtt ctggcactct tgcagaagta 50
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<212> DNA
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acagttccga gcgtcctgtc atccgcgggc agtcgaacat cctcggtgac 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aggaagaccg gaatttacac cgctacccct gaactcaagc ggagatattc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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atgtcattaa attatgagcg catccggcct cagtatcaga gaactcgaag 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acaggccagg cgtgggcaga tgatttcaca tcagtgtttg atgatctcaa 50
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<212> DNA
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ctttgcaaca gacactgcat tacgaaaagt tgaagactcg cttgaactgc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccatcgcaaa cactttccac gttgcatcgg gcctgttcgt ctttcgtgct 50
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<212> DNA
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ggtattttat ttccgaaagt tgatgaaacg ctgtgcgaag aatatcatgt 50
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ccacaattgc ccatgtatct atgcgttgtt ttccttcaat acgaacggct 50
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<212> DNA
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<400> 88
caatcttaaa gtttgccggt gacgacgact gacttggcga cgactgactt 50
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cagccttcgg aactcaccct ttgcgacagt gaagtcttta gatagtgtcg 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agccgttctg aatgcaagag tataagtgct tgtagagatt tctaccggca 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
gcccaagaca attatggtta cgaatgtata atcgagcgtc aacgataatt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
tggctggctg aagccggtgg ggtccatgtg cactctctgc cccagacgtt 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
gtccgttcct cagcacatta tcttcctgac tcagaccagt atggcatgac 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
aaatccagtt cagtcaagtt ggggtagtca gtaacgatat tgccactaac 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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attgagggaa taagttgcgc ccaattctct acagcgttat ctcacaactt 50
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<212> DNA
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tcttctaagt caccgatgag atttaacaga tcggttcgtt gtgctaatac 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
ctcccatagt gagattgtct ggattcgctg actgtctagg aggagtatct 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
gaatcgaccc gggttctaag cgcgaagggt acacggtcaa atccaaagct 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
gcgtgtatcc aggtttgcta cagctaacca agtaaacata gtgaatgttc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
ttttccattc gactttacag tttgctttgt gtcgcgtaat tcgtgcatgg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
tgttgagaca ctaagccttc tagcacttct gaattgccta cctcgttagc 50
<210> 102
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
tcatagctaa taggttgccg ttgctctaga caaaggctgt agttctcaca 50
<210> 103
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 103
gaccctctga atacgttgaa gccaacgttc cgaagtccac ttctccttcg 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
attatggcac tagtggtcaa tgacaccgct aagttcaagt attggcacgg 50
<210> 105
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 105
agtagcacac gatagaatcc ttgcatagtg tgagggtaaa tcatcggcca 50
<210> 106
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 106
caacccagac aagcctgctg ttgtatcggc gaagggttta catgagtcac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 107
ttaacattct acgatactac tgtatgcaga atccgttctt ttggggtgtt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 108
tcagcccaac cccggttcca gccgggagtc taacaacgta ctgcaagaac 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 109
cgcaccaagc cccgaaagca cttgatagga ctgaccctga atattaccca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 110
ttgacaaact tgtttctcgg aacgtaccga gatgggaagc caaatttatc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 111
ttttgttttc ggtagtgagt gtaaatgtgt ccgttggcaa ccttctttca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
tccgacgcct agtgaactgc atgccttctt gaaggagcag gtccccgaat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
caatcagtag agcgaaatcc gtctttggac ggataaacta gagtggtgaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 114
tggttcatca gacgtcactt cggcttatca acgtgcaatc gcacgagaag 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 115
ctatgccctg aagtgttcgg ctctcgtctg attgccgccc ttcaatcatg 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
aaccacaact ttcatctagc tccaaactag aatcggttgt caaagcaaga 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
caaggatgaa ggctgttaag gtcttgtaca tcggtagatc actcctagta 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 118
atcgtcagtg caggcaccac cacctccgag ggtggcgcta tcaatctgaa 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
gcccgactcg ggcactcaca ctgacagccc tgctagaatt ggcaccgcat 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 120
ccttgatggt cagaacgccc tgcgccatgt acgcaaacac ctaaaagcaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
aagaaactgc ttaaatcctc tgtatagata gcgtaaacgt ctatggttgt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
actgagaaat ttggtccaca agcagctgtt gaggacttat atacaaacaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
gagcctatgc tgaccctcac ggcactgaca aagaacctca taatcaatac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
aatttcatca gtataatact ctgctgatac cgtgatttta ggattgtctc 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 125
atcatgaatt aacactcgct tcgcatccgg tggtaaagcc tgtaagccat 50
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<211> 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 126
ggcttaaact ccagccggta agcccggaga ctggggtgct tggggatgag 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
agaagagttg atattggaag agattgagcc tacgcttcgc cctttggttc 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 128
ttttcctatc ttgttttcag tatagcgaat ggttgtccta aaagctcttc 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctgtgatgaa cgttatggat tagggatgtg cctctgagac acatttcaga 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 130
agcagcactg gatggttatt gcaaaactcg tgggttaaga agagatgagt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 131
aaaataatct tacttgctat acctctttca ttcctaacca tcctaccagc 50
<210> 132
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
ctcagatgcg gtgcgtacgc gaggagacat ccacatactg ctcgtaggag 50
<210> 133
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 133
aggcggcgat taatgcatgt gtagtagctg acctcagttt cggataaaag 50
<210> 134
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 134
ttaatttcat gttctgagtg taaaccacct cataacctac caaattcaga 50
<210> 135
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 135
acgccagtaa ctctggatac gctgagaaat cttagagttt cctagcgaaa 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 136
cgatggaatc cgttgagccc tattcgggag acatggactc aacatgaata 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 137
cgcctggcaa actaaaatgt tgttcgttaa aatctcggac gatgcaatac 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 138
gctcagagca ttcgttcggc taacccgcca gctatggcac agggtgagcc 50
<210> 139
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 139
ggattgaaag cttgctccgg cctaggcact cggacgccgc tgcccggttg 50
<210> 140
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 140
ggagctggtc aagcccagta cctcaaggac aagccgctta tccaggctga 50
<210> 141
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 141
caagatcaat gacatccgag gagcttgttg atttgcagct cggccctcgc 50
<210> 142
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 142
gatacaggaa accttggaag tagtgcgaca ctcactaaca acgaaacaat 50
<210> 143
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 143
caccgtggcc agggtacgca gtgtggcggt gctcagctct accggcagca 50
<210> 144
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 144
actcctgcat caaggcgcag acgggctaga cgtaaggctt cagttgcact 50
<210> 145
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 145
gacctataac ccttgtgtat caatcaatga cttacattac tcagaagtaa 50
<210> 146
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 146
tattcactta ggacatttat actggatccc ctactagact accgggaaat 50
<210> 147
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 147
tctaagcgga tgtcgctgca caggttaaaa cctgctcgct ccgcttacga 50
<210> 148
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 148
acgattaggg gcaagcaacc cgacttgcaa gcacctccca ttgttcctgt 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 149
gctgcatcga atgccgagag cagagcggtg gcttggtcag acagcagcta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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taagtatgct tatgatgtcg gcgtttgtca gtggaagtta gatgttgatg 50
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tctcctgcta aaatctcaac gtgtttccac aaactggacg ggtcaatttt 50
<210> 152
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 152
gaggttggcc aaggccccag acagactgct gccctggagt acccctttat 50
<210> 153
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 153
tttatgttaa tggtacaatg ggttcagtac catttgctac aggtcaagat 50
<210> 154
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 154
ttcatctcag ctcggaatcc ttcaagcact cgcttctcat gaatgaccct 50
<210> 155
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 155
ggaaccgtcg ccgtatattg tcagcggttc gtttcgcaag gcttgcacaa 50
<210> 156
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 156
ggattctgcg cagggtgagt ggtggaatct gaagacaaaa cggtggtagg 50
<210> 157
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 157
gcaagtgtat ccttatcgga agcaacccgt cctataggag tagaatcacc 50
<210> 158
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 158
ccctcgtctc agacgtgtct acacattaga ccttctttgt gtcttggttg 50
<210> 159
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 159
ccaaactgga tcgcaagtaa aacctgctcc ttgtcttgcc atcagcgatc 50
<210> 160
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 160
agaataaaat gtttcgggtg ttggaagccg aaatgttatg taagtgaaac 50
<210> 161
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 161
aaaatttagc gataagatta ctccgatagt ttcagtatgt agtgtcgagg 50
<210> 162
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 162
tgcccaacta gcagtaggca tcggcacgag acgggtttca actctctact 50
<210> 163
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 163
gccgctttta cggacccatt gccgccgaaa ctctgtaatc gcttccgaag 50
<210> 164
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 164
gcaatgaatc ctgtacccaa agagcctcct gctcgaatca taacaacctt 50
<210> 165
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 165
tgccgactta tgctcaccat atggcgttgt tttgttaaca cctcttataa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 166
tgaactaacc agatttccta tcgttactgt gtacggtgaa tcacggctaa 50
<210> 167
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 167
ggtttatctc catatagatc cgctcggtta acgggatcat tcccacagta 50
<210> 168
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 168
cactggagtt actgcagtct gtctaccccg tacaaggaag agccacgttc 50
<210> 169
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 169
tgtaaaagct gggcttgtca atgggagttg cggtacaatt attgaactca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 170
tcgcaattaa ctagcttacg tatctaaaag tcgaaacggc tctaaagaga 50
<210> 171
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 171
cgctgcattg aagtaaccct tggtgcggta aactggttcg gtgatacgat 50
<210> 172
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 172
agtggtgcat cccatccgat cacagtcgct ggaaccattc ctaagcaggc 50
<210> 173
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 173
gcgtctcccg gaagtagaat acgttgagca gcctgggcag gcgttcgcgg 50
<210> 174
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 174
caccggccaa cttgagaccg ccccgagcct gaccatccat gaccagtgca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 175
tgataaacag ctacttcggc caaaccgcac aaaacgtcgg ccgccgccac 50
<210> 176
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 176
tcaggctgtc gcgcaaaggc aatctctgga gactggacca cgaaaattcg 50
<210> 177
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 177
ccctgggcca gttaacctgg ccttacccgc caatgcctag tcgcccagcc 50
<210> 178
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 178
gagccttaag cagagctagg aggtattcag gacgtctgta ggtcagatcg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 179
ttttctcagt ttcgcaacga gccggacaag ttcccacaca ttcgcgtcat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 180
aagttagtag ccataacttt agcgataagc cccagatctc agaaatgcag 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 181
aggcgttccc aatgagaggt gtcgctggtg tcatccagtt ctcttaaatc 50
<210> 182
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 182
cttcaacctt ttcctcatgc cagactgtgt ggcggagctt ccattcacca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 183
caccaactaa acacaattcg ctattcggta tatctgcttt cataaaggct 50
<210> 184
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 184
ccctatcacg gttggcattc atttcactgt gactgatgcc ggtgccggcg 50
<210> 185
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 185
ctcagactgg ccgccagggg tgtcgtgagg ttgagactgg cgctcacccg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 186
tgtatttcat gattgacatg tcaggcctgc cgtaaacatt tattgagtcg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 187
gatagttctg tagcagtttt cactagtgag ctagttcgtc aatccgcaat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 188
gatctcatcg acagatctac ccagcgacag gacctgaatc aaccggagat 50
<210> 189
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 189
ttttgggaaa tgcacgagtt gactatatga atcaggtgat catgtattgg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 190
ccaaaatcca gacgtgcgcc caggctcaga aaccagtctg agttttgctg 50
<210> 191
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 191
gggtggcgtt agtgaacact tggacggctg ttaacgtttt caaggataac 50
<210> 192
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 192
gatttataac gaagccggta ctttgacctt gaataatgca aattttacgg 50
<210> 193
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 193
caatggtggg acgttcctcg gagcctcgga ggttcgctac aacgcctcaa 50
<210> 194
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 194
gctggcgtcg gtcaaccaac aagggatcgg ctgccatgtc agccctacaa 50
<210> 195
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 195
ttatgcggtt tatagaagtg taaacgtgga ggataatcga aaattgaacc 50
<210> 196
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 196
tggttatttc cgcgcctgat tttgtaagac tactgcacat aataacagga 50
<210> 197
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 197
acgactagcc ccgaaaaggt agacgcgcta cagcacatat ctgctgcaaa 50
<210> 198
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 198
gtccacagcc tgccctgtaa tcgggcttcg tcgtataacc aatttaatcc 50
<210> 199
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 199
ttaggatttg attataacac tatgttctcc ccgcatattc acctttcaaa 50
<210> 200
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 200
gggtcaccgt aggtcacgac aagttctact ccctccttcg agagagcatc 50
<210> 201
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 201
tgcagacgat catctatgaa cgggtggcat tatcccattg tgtgaatcaa 50
<210> 202
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 202
tgaaggtcag cagggacgac ggtcgcgcaa caacagcgca gatcacaacc 50
<210> 203
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 203
ttggcctatt tgtactgggc gaataagccg acatgcaatg caaaagaggt 50
<210> 204
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 204
catcgagccg aacggaccac ggtggagatg taccggatgc aatacaaaag 50
<210> 205
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 205
caggaaatta ctgctctggc ggaagtttgg attagcaata cggtggatat 50
<210> 206
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 206
atctaaacaa ggatcccctt actacatcgt aaaaccaaag agagaatata 50
<210> 207
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 207
gcctcggtgt atcgcgggca gattttggca cgggccaagg gctaatgctg 50
<210> 208
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 208
gcagaattgc aagagcgttt cttcacagag tttgccctgg tccaattgca 50
<210> 209
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 209
ggctttggaa caggcgctca gtttgctaca ctcacaggtc atccaacatt 50
<210> 210
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 210
cgcccacatt ccacttccag tctccttttg acgccgggcg ataagccact 50
<210> 211
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 211
ccagatgtta agtcactcca cggcgatgaa ttgtccaggt cttgctccaa 50
<210> 212
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 212
agttctcttc gactgagtga gaaggatgat tatgcctagc cacttcatct 50
<210> 213
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 213
aagggtcaaa ttttccctta gatcgcttta tactgtcgct tggttgtttt 50
<210> 214
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 214
ccaccgctga agtacagtct gtatcagcca acgggctaga tccttctgca 50
<210> 215
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 215
gggtcctgcc gagagcccct cagccaatgc agggaactca acggcgaaac 50
<210> 216
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 216
aaggacctga tgggtatcga tgaccttcac accaagggcg cgaagggcat 50
<210> 217
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 217
aaccgatgaa cctgatcaac cggttcgctc gaacccggaa ctctcagagc 50
<210> 218
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 218
aactttgcaa aacttgacga cagcagcaca cttgacccgg ataattacta 50
<210> 219
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 219
agtctacttt tgcatgggct tgatgcaaca agctcacggg atttcatcac 50
<210> 220
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 220
tcaacatcgg cgctctcttc gcgttcagga tcatgggagg ccgggtcacc 50
<210> 221
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 221
tcgaattcat ctccggccgc cgggacatcc cgtagaccta agacctcaac 50
<210> 222
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 222
cattgaatcc aacttggacc ggtaccagtt cagacgataa cactaccaat 50
<210> 223
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 223
cgatggtgct gtcggtctga gatggagcca cctgcacagc gctgcatacg 50
<210> 224
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 224
tagtaaaggg cctgcctggt tgcctcgaag ctctaaccag tccaaaacga 50
<210> 225
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 225
taacaatgac acggttagaa gattgctcta tgatgtccgt tccataaacc 50
<210> 226
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 226
taagtataaa gccaagctag tgtctgtgga ctccgtaacc gctgtgtttc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 227
gcgactccac gactcctagt gcgttagcag taaccacatc agcacgctga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 228
gccacagccg ccctgcctcg tgacccgtca gcggaaaccc gtagagccgc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 229
ttgatttcaa cgctcgaatc cccaatcgca agctgtttct gcgtgccatc 50
<210> 230
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 230
caatgcgtag ctccgttccg catgacactg ttttcaagtc aacggtgaca 50
<210> 231
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 231
agctcgtcca cacccagcct ttccgcaact cgaatgagca gcgcttccag 50
<210> 232
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 232
caataaactc actaactgtc accaccctct caactagctg taggcaatgc 50
<210> 233
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 233
gcaccagtcg tttcctttgt gacttacgca gacgtgggtg cagtggatga 50
<210> 234
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 234
cgatcgcact aaccaacggc cctagcgcta aatgcaacgg atagttccac 50
<210> 235
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 235
cttagcttgt cataagtaag attatcgacc cggttaaagg tctccttgct 50
<210> 236
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 236
ggatgtaagg agtgccagtt caagatgagc gctcttacat tcaacgagaa 50
<210> 237
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 237
gtgttttgtt tacagaggct gcaacggtgt ttaatgatcc attgtctaca 50
<210> 238
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 238
accatgcgag gagagagccc gttcaaccag cggtcgcact gttgaatggg 50
<210> 239
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 239
ggagcttcgc attgttgaac ccgagagccg gagcacgctg gctttcgctg 50
<210> 240
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 240
gaaacatcgc cgtcagtacg agaaggtttt aatcgttatc gagggaattt 50
<210> 241
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 241
caaggatgtt ccctgcgaag ctcgcacggt cagctgcaat tcacctgaac 50
<210> 242
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 242
cccatgctct gcgtcgggaa ttactagaca agcccctgcg agtagaggtt 50
<210> 243
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 243
cgttgactaa tgctgatcat ggagtcacta ctcaaccata aaacaaggat 50
<210> 244
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 244
agcctgcaac tgagtacaac caaagatggg gcgacaatca acctgaccag 50
<210> 245
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 245
gagatatatt acaggggtct cgaggctccc gccgggtgtc cacttattat 50
<210> 246
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 246
ttaaactgat gggtaaatta tgccgatagg cactgtcaag tcggtcgatc 50
<210> 247
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 247
taattccatt gcctgcattc tcagccataa taggtgcaaa ccctttaaag 50
<210> 248
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 248
gccaccacag ttacaagtgg gctcgttatt gttagattac ggtactttca 50
<210> 249
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 249
taccatctca aaactaggca acgcctcgat taaataatct ctcccgattg 50
<210> 250
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 250
ttctacatct taatggtgcc tatgggcttg atgatgcgtc tgttcagtgg 50
<210> 251
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 251
gtcacggtga taaaacgagg tgagatcact tggcactagc gaggtggcac 50
<210> 252
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 252
cccaactgaa tccgatatcc gagagtattc attcgctcca gacctatttg 50
<210> 253
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 253
attgcagggc gttctccctc gcatatatgt atatccgatg ctccgatatt 50
<210> 254
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 254
agtgcttact cctaaggtgt gtcgacccag gaaatctgtt aaggacgttc 50
<210> 255
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 255
agggaaacga gactcttcgt gtcctcccgg cggtcggtca cggcggtgcc 50
<210> 256
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 256
ctggatgtac agggaacgtt ccagccggct gcgtgccaga tatgacttgg 50
<210> 257
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 257
ccccgactct tgctcagctc gctctgcgct cagtagctga ttttgcacat 50
<210> 258
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 258
aacagttggg cgcaaattcc gactgacact aagatcgctc ctattattga 50
<210> 259
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 259
cgtcacacgt cacacgtcac acgtcacacg tcacacgtca cacgtcacac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 260
catgggattc aacatggcgc gcctggcaaa gcgcgaccca gtccgcctcc 50
<210> 261
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 261
caatgtggat aagatgacat tgcacatgcg ctggatttga tgagtactgc 50
<210> 262
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 262
ttcctgtttg aaccgaatgt ccttgtattg cctgatattc caccccaaga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 263
aaacattcac cgaccgacaa gacatagaca ctctgtgggg tagatgtccg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 264
agcaatcaaa gcgggctaac gattgcatca ccaagggatg gaattgtggt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 265
tctgcatctg taactcaggt ggaagagtgc caacccgacg agttagtagt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 266
atcattaata aagcgttctt gagaacgcgt gtagtagtta cttaaatatt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 267
gccgttccaa gagcttttca atctggggct gaagaacgcc cgccgggaac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 268
cgaggagccg ccagacccag atgactttaa aactttaggc gaatatcaac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 269
gataagcctc gcgcgatgag agcacctcgc gggagttggt gatcagattc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 270
aaggagcctt gtccgcttcc cctaagcccg atctcttctt ccagcgtatc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 271
gacgttcacg ttgctgagtg gcccgtcatc cggaacttgg ttcctgtttc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 272
ggggtctatc tagagatgat ctcggctgca gtggctgaag ttaatggtga 50
<210> 273
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 273
tccgccaggt ctgccggcac ggaccacctg ctccgtcgct gccctgacgg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 274
cagtttccct ctgccacgat gtgaaacgga acaatatggg ttgtctcaga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 275
cttccgacag ttctgcggtc aatccctctc ccatactcaa acaacgccag 50
<210> 276
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 276
taaagtagtt ggtgctacct cgaatggcta ctgtgttacg gcatcagatg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 277
tcaataaacg caacttagag ttctgcggta tcccaagcgg tcgctgcggg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 278
aactactatc gaatccgttt tctgtcattt tatgacagtc tccactaaca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 279
tctccgagag aattcgatct ctgctccagc cattatccag tgcattagga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 280
tttgcgtatt aacaactgtt gcgtaaacac gaaatgtatt ttatacttac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 281
ggcttcgatg ccaagccaat taagagccat taacccgccg acggcaccgc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 282
ctatatttct catgattgac ttagtctgtt caaaagtccc ttgcatctgc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 283
cgattattct tttcctaggt tacgccacaa catgcttcac tttcatcctc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 284
cgtcggggac ggcgatgtag tgctcgcagg cggagaagca gcgcttcatc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 285
cattttcact ggggcaactt gtatcctttg gtcgtcaacc tgccaaagta 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 286
agatagagac ttctctcaca gtattggtac ctataagacc agaacggtac 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 287
acactacaac ctcgtatgag ccgggttgag gtccaatttg ggctggccag 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 288
ataagcttga tgcgtggaga tgagtaggta actgttctgg caacccgctc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 289
gcaaacccgc agtaacatcc atgttagctg ctacttggaa cgaacacatt 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tttgaacgag gacgatgttt ctcgtatgaa taaatcggtt cgtctttact 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 291
cttcagaaca gctagctatc ttcttccatg caggtggcgc gaatgaaatg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 292
gatgctggtg cggatttcat ggaaaatgcg actacgcagt tcttcggagg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 293
acgcactatt gggaaattta gagcccacaa gtccactgtc cacaagcaca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 294
ttcatctcac atggattatc aacacaacac cctatgtctt gacatagatc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 295
aagcgtaggt atatgtgagg gctgacaact cgcccttgtc ccaatttatg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 296
aatttattga tttgaggcgc tcgctcttaa agcgctaatc cagtctaaac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 297
ttggcagcat cccgtttggt tgccgcttgt ggtattccca tgctcactgt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 298
gtatctctac tgttagccag ttgaggaata ccgtggagat taccgccgtc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 299
cttgttgtcc cattggacgg cgttcagtga cggaatgcgg ttcgggcgat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 300
accgcaaaca gcgtataact ggcggatttc ctacgtatgc gaggcgaaaa 50
<210> 301
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 301
cgcaggcgtt aaggtgccgt tagttccacc atcgttgtct ccgttcgctg 50
<210> 302
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 302
gaactcctgt aaccattatt tcaggcgctt aacagtccaa atcagcttcc 50
<210> 303
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 303
tctagcttgc tcctgtagat cttcacccaa gggtacacat agtttaacag 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 304
acgccgcatc tcagctcgct tgagcggccg ccaagcccct ccttctgcat 50
<210> 305
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 305
ctttcactgt ttggtcatat ccgctcgcca acgaaatgac tcccaatgca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 306
caaaacatca agcgccgtga acaattggat tagagcggcg cgggtcatga 50
<210> 307
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 307
accgggatac caatacgacc cggacacgac tttacagcac taccaaatct 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 308
gagcgcgtga tcccgttctg ggaaacccac tcgccggatc ccgagcacgg 50
<210> 309
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 309
ctgctgttgt ccgaacaaag cgagcagatc cccgcgttgg ctcgtgcagc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 310
gatcaaggcc ggccggtcgt tgaaggcgga gcctgggtcg tcggccagcg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 311
atataaattg cctaaatgag tccaacctga ataacaactg ttttcaattt 50
<210> 312
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 312
ggatcaggag gggttaacaa atgcgcttgg cctttcataa caaataaata 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 313
ggattgagga tgaagcacgg tttcggtact acgagatcat ctcgcctgaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 314
tttgcggtgt tacgaatccg aggggaaaga ggccgtgcta gaattgaata 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 315
ttcctcttta agtgaagggg aagccacatt cttgacatgg ttatatcgcc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 316
atcgcggctc caaagattcc ctaaatatgc acttctgaga ttctacacta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 317
tctgccgttc agctggaaca cggtgtagtc cccgccatct gcggctgtcg 50
<210> 318
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 318
gccttcgatc aggcaaggaa tggccgaaat tatcacgtca taaccgacat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 319
attcttttga gcgtttaccg agtggcacat aggtcaaccc ttcgcactta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 320
cttcagcacg atcccatagc gtctgataat cgattaggga gctaattaaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 321
ggccaagaga agattgtaca gcggagcaaa tggctcccaa gtgtccggtg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 322
tcatcacgaa atcgacaagc gactcgcacg ttggttgctg cttctcagcg 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 323
gcttcttccg tgctctcgtc cgtttcggac tttctgggtt gctcgtccat 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 324
tggtcgtttg agttgtcgtg ttggagtggg ctcacgaatc tgctttcaca 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 325
gtcatgatcg gtctctggag aagaatgagg tgaaaccgat cgtcggaaac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 326
gggtgcaata cacggctgtg acgcattaga tgctgctata ccccaattgc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 327
ttttcaatag cggtaggcta cagcgcattt atctagacga actagagccg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 328
tagttgagga ttgtttccca ccaaccctcg gaatgggagg aaaccccgtt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 329
aatcagaata cttatcatgc agtgtccttg gatataccta ttgagaataa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 330
ctaaacggtt aatagctcac ccggcaagct tacctaatcc taagtcatac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 331
tctgacccga tcaatgctat ggagatgccc gcgtgaatgg tgatccagga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 332
tacttatatt aattctcaca caagtaaagt cttcacaatc taagcttggt 50
<210> 333
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 333
ggtagggaag ccattggagt aacggttaat acccgaggaa taacctcacg 50
<210> 334
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 334
aattctccta gttagctatt ttgccacgca cagaaatagg ttttctaaac 50
<210> 335
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 335
ggtaacaaat gtctcccacg gggagcgtaa agggtatcct cttttggatt 50
<210> 336
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 336
atcattcggc cgtcttgatc gaggggtgga tcatagctct cgaggaaatt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 337
taagattcgt cgcattgtgc tcaacactag tccccattgc gtgatcaata 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 338
cgggctgaga gtaaagccgg cgaagctgct ggcaacgtca accaggccat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 339
aatggacatt gtcgggcctc gaattacgcc acggtaacca tatttcgtta 50
<210> 340
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 340
cacctttgat aagttgtaca attcggtgcg aggtgttatc ttgcggagaa 50
<210> 341
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 341
cgccgctaca tgggtcatcc tggcgtagcc cggcttggga ggataccagt 50
<210> 342
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 342
ccatcggtga tggctacgac aaccacctgg ccgatgtcac ttctggccat 50
<210> 343
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 343
ccgcgttagc atgaccgaag ctggttgggc tagcagtatt gtactcgtta 50
<210> 344
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 344
caggctggaa cgcactgcgg catggtcctg acggcgcggt atccgcagca 50
<210> 345
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 345
cgtttcttgg tctcgtgttc attgcggttg gtcagcaagc ggtcgatgtt 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctcaagtcac ttgtagatct caacgataca gtacagtacc tatggttaag 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 347
ctttaaaagc ggcttttact ttcaagccga gaggaattcg gacttttcct 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 348
aggcagacgc ggatatgtag caatcgtttc taccgcctta gaaatgctaa 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 349
gtccgcacac cggcgctctc caatgtgcga agtgctgcca tggtcgtacc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttgtacttta ctctctgtct tcgctactat atcgatgatg ctattcattt 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 351
tgaatgcagc ccaaaccgcg tttgggcatt cgaaagggat cgcatgcaac 50
<210> 352
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 352
aaagttgtta cttcccgcca cactctttat tgtatatagg gctgcgtcac 50
<210> 353
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 353
cgatgacgga tcaagcattc ccttagacaa agagctatcg tttaaggaat 50
<210> 354
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 354
ttattcacga gtaagcttct gttctgaagg aaccgaattg cattgcaaag 50
<210> 355
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 355
ctccgtgaaa gaactccgtg gcccagtagt cgatcttgcg gggatgatcg 50
<210> 356
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 356
cgactttgtc gatttcgaag aatcgaaagt tccggatgct aaggccgcta 50
<210> 357
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 357
tacgcagata ggactcgaga ttggaccgct caatcgaccg attatcacgc 50
<210> 358
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 358
ggtcttgcac agtttggcgg tgtacctata cgtcgagcta cacaatttag 50
<210> 359
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 359
catctccgaa accgctccag ctgagccggt tgcatcctcc ggactcgacc 50
<210> 360
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 360
gttgtttaat tatataacga gcctatgtgg ttcgctacca ctatctctaa 50
<210> 361
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 361
ccagttctca cattcagtgg gataaactcg cggttaaggt tcctactgca 50
<210> 362
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 362
agcgcaaccc tgagctaatc cgcctattgc gggacaacga cgtagatgtt 50
<210> 363
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 363
cggcatcacc cgagcgcgcc tagccctctg cggcccgtcc gtgccactgc 50
<210> 364
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 364
aactgtcttt catagtaaag gtaaaactca acgctcctct atcaggtgat 50
<210> 365
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 365
atgcgccaga actagctgag cccagtctgg gcgatttcga caccaccttc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 366
ttgttggaca atcgccgctt ggagtgtcga gtaccactgt gggaatgcga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 367
ggcgaaaagt tagtgtaaca cctaaaggac gtgtatcttg atctgatttt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 368
acgatgccgc tacgggcgta acagtgggac tattacttgt cgattgctga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 369
atcctattag agggaatgat ccaactatgg acaatccaaa ttctatagat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 370
taattcagcg cgtttgtttt cccaccagtc gtccgttatt tctatggggt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 371
aaccattgcc gcgattaccc ttcccaccta aatacggagt tgcaacttaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 372
ccgacaataa atgtcgtccg cattactgcg tcggggaggg cgatcttgat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 373
cgagccgcat cgcgcgactc agccgcaagg cccatggtcg acctgatttt 50
<210> 374
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 374
gttaaacagc ctgccgacta gcgcgggaca gtgaaagtaa tgtccagccg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 375
aaagtgaatt atatgagacg tatcgcagca cacgtagacg agaatccatt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 376
atggaaactt ggaatacttc cggtctatgc gaccagagaa catcttgctt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 377
tttaggattc acatatatac agctaactat accaatccct ttgagaacac 50
<210> 378
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 378
acccgagccg ctgcctgttc cgttaaagcg tgatgtcgat cgttctcagc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 379
tcttcttgat cacagttaac atgcctgctg ttcgaaaaga aattgaagag 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 380
gcgcgcagct gtccaatcgc ctcgagccaa gtctggaaat tgcgcagatc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 381
ctggtctcaa tcactgcttt tcccgctaat tacctagaaa tctcctcatt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 382
gctgcactgc acccaaatac cggacacccg ccactgtttg caacaaggta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 383
aacaacacgc aacctcttcg tactggccat caagtgaagc cgaagcatcc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 384
ggtattgcca accaaggaca agactcaccg cgagtcttat tttacgtcta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 385
cgaccagcca gaagaagact ccctcggcac actgctagac gaagtagcag 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 386
cctgaacgga cagtcggtcg gtacccgtgt aagaacccac tgcgttaccc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 387
actatctgcc tacagaagac tatctgccta cagaagacta tctgcctaca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 388
cgttgactaa tgctgatcat ggagtcacta ctcaaccata aaacaaggat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 389
agcctgcaac tgagtacaac caaagatggg gcgacaatca acctgaccag 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 390
gagatatatt acaggggtct cgaggctccc gccgggtgtc cacttattat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 391
ttaaactgat gggtaaatta tgccgatagg cactgtcaag tcggtcgatc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 392
taattccatt gcctgcattc tcagccataa taggtgcaaa ccctttaaag 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 393
gccaccacag ttacaagtgg gctcgttatt gttagattac ggtactttca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 394
taccatctca aaactaggca acgcctcgat taaataatct ctcccgattg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 395
ttctacatct taatggtgcc tatgggcttg atgatgcgtc tgttcagtgg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 396
gtcacggtga taaaacgagg tgagatcact tggcactagc gaggtggcac 50
<210> 397
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 397
cccaactgaa tccgatatcc gagagtattc attcgctcca gacctatttg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 398
attgcagggc gttctccctc gcatatatgt atatccgatg ctccgatatt 50
<210> 399
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 399
agtgcttact cctaaggtgt gtcgacccag gaaatctgtt aaggacgttc 50
<210> 400
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 400
agggaaacga gactcttcgt gtcctcccgg cggtcggtca cggcggtgcc 50
<210> 401
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 401
ctggatgtac agggaacgtt ccagccggct gcgtgccaga tatgacttgg 50
<210> 402
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 402
ccccgactct tgctcagctc gctctgcgct cagtagctga ttttgcacat 50
<210> 403
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 403
aacagttggg cgcaaattcc gactgacact aagatcgctc ctattattga 50
<210> 404
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 404
cgtcacacgt cacacgtcac acgtcacacg tcacacgtca cacgtcacac 50
<210> 405
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 405
catgggattc aacatggcgc gcctggcaaa gcgcgaccca gtccgcctcc 50
<210> 406
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 406
caatgtggat aagatgacat tgcacatgcg ctggatttga tgagtactgc 50
<210> 407
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 407
ttcctgtttg aaccgaatgt ccttgtattg cctgatattc caccccaaga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 408
aaacattcac cgaccgacaa gacatagaca ctctgtgggg tagatgtccg 50
<210> 409
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 409
agcaatcaaa gcgggctaac gattgcatca ccaagggatg gaattgtggt 50
<210> 410
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 410
tctgcatctg taactcaggt ggaagagtgc caacccgacg agttagtagt 50
<210> 411
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 411
atcattaata aagcgttctt gagaacgcgt gtagtagtta cttaaatatt 50
<210> 412
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 412
gccgttccaa gagcttttca atctggggct gaagaacgcc cgccgggaac 50
<210> 413
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 413
cgaggagccg ccagacccag atgactttaa aactttaggc gaatatcaac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 414
gataagcctc gcgcgatgag agcacctcgc gggagttggt gatcagattc 50
<210> 415
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 415
aaggagcctt gtccgcttcc cctaagcccg atctcttctt ccagcgtatc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 416
gacgttcacg ttgctgagtg gcccgtcatc cggaacttgg ttcctgtttc 50
<210> 417
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 417
ggggtctatc tagagatgat ctcggctgca gtggctgaag ttaatggtga 50
<210> 418
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 418
tccgccaggt ctgccggcac ggaccacctg ctccgtcgct gccctgacgg 50
<210> 419
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 419
cagtttccct ctgccacgat gtgaaacgga acaatatggg ttgtctcaga 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 420
cttccgacag ttctgcggtc aatccctctc ccatactcaa acaacgccag 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 421
taaagtagtt ggtgctacct cgaatggcta ctgtgttacg gcatcagatg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 422
tcaataaacg caacttagag ttctgcggta tcccaagcgg tcgctgcggg 50
<210> 423
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 423
aactactatc gaatccgttt tctgtcattt tatgacagtc tccactaaca 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 424
tctccgagag aattcgatct ctgctccagc cattatccag tgcattagga 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 425
tttgcgtatt aacaactgtt gcgtaaacac gaaatgtatt ttatacttac 50
<210> 426
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 426
ggcttcgatg ccaagccaat taagagccat taacccgccg acggcaccgc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 427
ctatatttct catgattgac ttagtctgtt caaaagtccc ttgcatctgc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 428
cgattattct tttcctaggt tacgccacaa catgcttcac tttcatcctc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 429
cgtcggggac ggcgatgtag tgctcgcagg cggagaagca gcgcttcatc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 430
cattttcact ggggcaactt gtatcctttg gtcgtcaacc tgccaaagta 50
<210> 431
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 431
agatagagac ttctctcaca gtattggtac ctataagacc agaacggtac 50
<210> 432
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 432
acactacaac ctcgtatgag ccgggttgag gtccaatttg ggctggccag 50
<210> 433
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 433
ataagcttga tgcgtggaga tgagtaggta actgttctgg caacccgctc 50
<210> 434
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 434
gcaaacccgc agtaacatcc atgttagctg ctacttggaa cgaacacatt 50
<210> 435
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 435
tttgaacgag gacgatgttt ctcgtatgaa taaatcggtt cgtctttact 50
<210> 436
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 436
cttcagaaca gctagctatc ttcttccatg caggtggcgc gaatgaaatg 50
<210> 437
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 437
gatgctggtg cggatttcat ggaaaatgcg actacgcagt tcttcggagg 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 438
acgcactatt gggaaattta gagcccacaa gtccactgtc cacaagcaca 50
<210> 439
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 439
ttcatctcac atggattatc aacacaacac cctatgtctt gacatagatc 50
<210> 440
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 440
aagcgtaggt atatgtgagg gctgacaact cgcccttgtc ccaatttatg 50
<210> 441
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 441
aatttattga tttgaggcgc tcgctcttaa agcgctaatc cagtctaaac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 442
ttggcagcat cccgtttggt tgccgcttgt ggtattccca tgctcactgt 50
<210> 443
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 443
gtatctctac tgttagccag ttgaggaata ccgtggagat taccgccgtc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 444
acgccgcatc tcagctcgct tgagcggccg ccaagcccct ccttctgcat 50
<210> 445
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 445
ctttcactgt ttggtcatat ccgctcgcca acgaaatgac tcccaatgca 50
<210> 446
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 446
caaaacatca agcgccgtga acaattggat tagagcggcg cgggtcatga 50
<210> 447
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 447
accgggatac caatacgacc cggacacgac tttacagcac taccaaatct 50
<210> 448
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 448
gagcgcgtga tcccgttctg ggaaacccac tcgccggatc ccgagcacgg 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 449
ctgctgttgt ccgaacaaag cgagcagatc cccgcgttgg ctcgtgcagc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gatcaaggcc ggccggtcgt tgaaggcgga gcctgggtcg tcggccagcg 50
<210> 451
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 451
atataaattg cctaaatgag tccaacctga ataacaactg ttttcaattt 50
<210> 452
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 452
ggatcaggag gggttaacaa atgcgcttgg cctttcataa caaataaata 50
<210> 453
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 453
ggattgagga tgaagcacgg tttcggtact acgagatcat ctcgcctgaa 50
<210> 454
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 454
tttgcggtgt tacgaatccg aggggaaaga ggccgtgcta gaattgaata 50
<210> 455
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 455
ttcctcttta agtgaagggg aagccacatt cttgacatgg ttatatcgcc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 456
atcgcggctc caaagattcc ctaaatatgc acttctgaga ttctacacta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 457
tctgccgttc agctggaaca cggtgtagtc cccgccatct gcggctgtcg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 458
gccttcgatc aggcaaggaa tggccgaaat tatcacgtca taaccgacat 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 459
attcttttga gcgtttaccg agtggcacat aggtcaaccc ttcgcactta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 460
cttcagcacg atcccatagc gtctgataat cgattaggga gctaattaaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggccaagaga agattgtaca gcggagcaaa tggctcccaa gtgtccggtg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 462
tcatcacgaa atcgacaagc gactcgcacg ttggttgctg cttctcagcg 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcttcttccg tgctctcgtc cgtttcggac tttctgggtt gctcgtccat 50
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<211> 50
<212> DNA
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tggtcgtttg agttgtcgtg ttggagtggg ctcacgaatc tgctttcaca 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtcatgatcg gtctctggag aagaatgagg tgaaaccgat cgtcggaaac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 466
gggtgcaata cacggctgtg acgcattaga tgctgctata ccccaattgc 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 467
ttttcaatag cggtaggcta cagcgcattt atctagacga actagagccg 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tagttgagga ttgtttccca ccaaccctcg gaatgggagg aaaccccgtt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aatcagaata cttatcatgc agtgtccttg gatataccta ttgagaataa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctaaacggtt aatagctcac ccggcaagct tacctaatcc taagtcatac 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 471
tctgacccga tcaatgctat ggagatgccc gcgtgaatgg tgatccagga 50
<210> 472
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 472
tacttatatt aattctcaca caagtaaagt cttcacaatc taagcttggt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 473
ggtagggaag ccattggagt aacggttaat acccgaggaa taacctcacg 50
<210> 474
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 474
aattctccta gttagctatt ttgccacgca cagaaatagg ttttctaaac 50
<210> 475
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 475
ggtaacaaat gtctcccacg gggagcgtaa agggtatcct cttttggatt 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 476
atcattcggc cgtcttgatc gaggggtgga tcatagctct cgaggaaatt 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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taagattcgt cgcattgtgc tcaacactag tccccattgc gtgatcaata 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgggctgaga gtaaagccgg cgaagctgct ggcaacgtca accaggccat 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aatggacatt gtcgggcctc gaattacgcc acggtaacca tatttcgtta 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aaagttgtta cttcccgcca cactctttat tgtatatagg gctgcgtcac 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgatgacgga tcaagcattc ccttagacaa agagctatcg tttaaggaat 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttattcacga gtaagcttct gttctgaagg aaccgaattg cattgcaaag 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctccgtgaaa gaactccgtg gcccagtagt cgatcttgcg gggatgatcg 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgactttgtc gatttcgaag aatcgaaagt tccggatgct aaggccgcta 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 485
tacgcagata ggactcgaga ttggaccgct caatcgaccg attatcacgc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 486
ggtcttgcac agtttggcgg tgtacctata cgtcgagcta cacaatttag 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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catctccgaa accgctccag ctgagccggt tgcatcctcc ggactcgacc 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 488
gttgtttaat tatataacga gcctatgtgg ttcgctacca ctatctctaa 50
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<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 489
ccagttctca cattcagtgg gataaactcg cggttaaggt tcctactgca 50
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agcgcaaccc tgagctaatc cgcctattgc gggacaacga cgtagatgtt 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cggcatcacc cgagcgcgcc tagccctctg cggcccgtcc gtgccactgc 50
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aactgtcttt catagtaaag gtaaaactca acgctcctct atcaggtgat 50
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atgcgccaga actagctgag cccagtctgg gcgatttcga caccaccttc 50
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<212> DNA
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ttgttggaca atcgccgctt ggagtgtcga gtaccactgt gggaatgcga 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggcgaaaagt tagtgtaaca cctaaaggac gtgtatcttg atctgatttt 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acgatgccgc tacgggcgta acagtgggac tattacttgt cgattgctga 50
<210> 497
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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atcctattag agggaatgat ccaactatgg acaatccaaa ttctatagat 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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taattcagcg cgtttgtttt cccaccagtc gtccgttatt tctatggggt 50
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<212> DNA
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aaccattgcc gcgattaccc ttcccaccta aatacggagt tgcaacttaa 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccgacaataa atgtcgtccg cattactgcg tcggggaggg cgatcttgat 50
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cgagccgcat cgcgcgactc agccgcaagg cccatggtcg acctgatttt 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aaagtgaatt atatgagacg tatcgcagca cacgtagacg agaatccatt 50
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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atggaaactt ggaatacttc cggtctatgc gaccagagaa catcttgctt 50
<210> 505
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcgctcgttg cgggacttaa cccaacacct cacggcacga gctgacgaca 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 506
gacctgataa agcgcaaccg ataactaaag agggcagata taatatctgt 50
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 507
tgagcatgag gtcgcgttga ttaatcccga aggtcaactg gcggatttct 50
Claims (10)
1.一种检测产毒微囊藻菌型的探针组合，其特征在于，所述探针组合包括检测产毒微囊藻菌型组合中各个产毒微囊藻菌型的探针，其中，所述检测产毒微囊藻菌型组合包括Microcystis wesenbergii FACHB-929、Microcystis aeruginosa FACHB-909、Microcystis aeruginosa FACHB-911、Microcystis aeruginosa FACHB-925、Microcystis aeruginosa FACHB-975、Microcystis aeruginosa FACHB-978、Microcystis sp. FACHB-1005、Microcystis sp. FACHB-1023、Microcystis sp. FACHB-1026、Microcystis sp.FACHB-1027和Microcystis elabens FACHB-917，检测Microcystis wesenbergii FACHB-929菌型的探针为如SEQ ID NO. 1~47所示的探针；检测Microcystis aeruginosa FACHB-909菌型的探针为如SEQ ID NO. 48~87所示的探针；检测Microcystis aeruginosa FACHB-911菌型的探针为如SEQ ID NO. 88~132所示的探针；检测Microcystis aeruginosaFACHB-925菌型的探针为如SEQ ID NO. 133-161所示的探针；检测Microcystis aeruginosa FACHB-975菌型的探针为如SEQ ID NO. 162~205所示的探针；检测Microcystis aeruginosa FACHB-978菌型的探针为如SEQ ID NO. 206~241所示的探针；检测Microcystis sp. FACHB-1005菌型的探针为如SEQ ID NO. 242~283所示的探针；检测Microcystis sp. FACHB-1023菌型的探针为如SEQ ID NO. 284~327所示的探针；检测Microcystis sp. FACHB-1026菌型的探针为如SEQ ID NO. 328~387所示的探针；检测Microcystis sp. FACHB-1027菌型的探针为如SEQ ID NO. 388~451所示的探针；检测Microcystis elabens FACHB-917菌型的探针为如SEQ ID NO. 452~504所示的探针。
2.权利要求1所述的探针组合在制备用于检测产毒微囊藻菌型的基因芯片或试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测产毒微囊藻菌型组合包括Microcystis wesenbergiiFACHB-929、Microcystis aeruginosa FACHB-909、Microcystis aeruginosa FACHB-911、Microcystis aeruginosa FACHB-925、Microcystis aeruginosa FACHB-975、Microcystis aeruginosa FACHB-978、Microcystis sp. FACHB-1005、Microcystis sp. FACHB-1023、Microcystis sp. FACHB-1026、Microcystis sp. FACHB-1027和Microcystis elabensFACHB-917。
3.一种检测产毒微囊藻菌型的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片包括权利要求1所述的探针组合。
4.根据权利要求3所述的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片还包括阴性对照探针。
5.根据权利要求4所述的基因芯片，其特征在于，所述阴性对照探针的核苷酸序列如SEQ ID No. 506所示。
6.根据权利要求3-5任一项所述的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片还包括全局质控探针和/或阳性对照探针。
7.根据权利要求6所述的基因芯片，其特征在于，所述全局质控探针的核苷酸序列如SEQ ID NO. 507所示，所述阳性对照探针的核苷酸序列如SEQ ID NO. 505所示。
8.一种检测产毒微囊藻菌型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的探针组合或权利要求3-7任一所述的基因芯片。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括待测样本基因组DNA提取试剂、核酸扩增试剂和/或荧光标记试剂。
10.一种检测产毒微囊藻菌型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，获取待测样本的基因组DNA；
S2，对获取的基因组DNA进行核酸扩增、荧光标记并进行纯化；
S3，利用权利要求3-7任一所述的基因芯片进行杂交检测；
S4，根据检测到的探针信号判断检测结果；
所述检测产毒微囊藻菌型组合包括Microcystis wesenbergii FACHB-929、Microcystis aeruginosa FACHB-909、Microcystis aeruginosa FACHB-911、Microcystis aeruginosa FACHB-925、Microcystis aeruginosa FACHB-975、Microcystis aeruginosaFACHB-978、Microcystis sp. FACHB-1005、Microcystis sp. FACHB-1023、Microcystissp. FACHB-1026、Microcystis sp. FACHB-1027和Microcystis elabens FACHB-917。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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