CN113637091B - 一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法及其产品和应用 - Google Patents

一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法及其产品和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法及其产品和应用，提取方法为：将黄芪药材依次经低温冷冻干燥粉碎和脱脂处理后，得到粉末状黄芪；使用第4代非解乳糖链球菌FGM株对粉末状黄芪进行发酵提取处理，得到发酵黄芪粉；将发酵黄芪粉进行多次调醇处理，将醇沉后的白色沉淀物进行真空干燥处理，得到黄芪多糖；将得到的黄芪多糖依次经脱蛋白、脱色素和透析纯化处理后，获得纯化后的低分子的黄芪多糖。将低分子黄芪多糖应用于防晒和/或晒后修复的化妆品。本发明提取得到的黄芪多糖具有分子量小、纯度提升以及改善效果稳定性的特点。

Description

一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法及其产品和应用
技术领域
本发明涉及一种黄芪多糖的制备方法，特别是一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法及其产品和应用。
背景技术
黄芪(Radix Astragali)，又名绵芪，为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，黄芪中含有多糖、蛋白质、氨基酸和黄酮等多种成分，用于药材至今已有两千多年的历史。黄芪多糖是黄芪中主要的生物活性成分之一，具有抗衰老、抗辐射、免疫调节、抗肿瘤、双向调节血糖、抗炎和调节微生态系统等生物活性，多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一。
黄芪的多糖成分主要有葡聚糖和杂多糖，分子量有大有小，其中葡聚糖包括水溶性和水不溶性葡聚糖，分别是α-(1→4)(1→6)葡聚糖和α-(1→4)葡聚糖。杂多糖多为水溶性酸性杂多糖，主要由葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖组成。少量含有糖醛酸，由半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸组成；而有些杂多糖仅由葡萄糖和阿拉伯糖组成。
但是，目前黄芪多糖的提取方法使用最多的就是碱液提取法，酶解法和超声波提取法、水提法等传统的提取方法，有提取时间长、温度高、提取率低等缺点。水提醇沉法提取率较高，但水的极性较大，在提取黄芪中的多糖时，容易将植物体里面所含有的脂质和蛋白质一同提取，并且都被乙醇所沉淀，增加了分离纯化的难度。并且目前提取方法提取得到的黄芪多糖基本都是大分子极性物质组，分子量较大，成分复杂，效果并不稳定。
因此，现有的技术存在着提取的黄芪多糖分子量大、成分复杂以及效果不稳定的问题。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法及其产品和应用。本发明提取得到的黄芪多糖具有分子量低、纯度提升以及改善效果稳定性的特点。
本发明的技术方案：一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法，将黄芪药材依次经低温冷冻干燥粉碎和脱脂处理后，得到脱脂黄芪粉末；使用第4代非解乳糖链球菌FGM株对粉末状黄芪进行发酵提取处理，得到发酵黄芪粉；将发酵黄芪粉进行多次调醇处理，将醇沉后的白色沉淀物进行真空干燥处理，得到粗黄芪多糖；将得到的黄芪多糖依次经脱蛋白、脱色素和透析纯化处理后，获得纯化后的低分子的黄芪多糖。
前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法中，包括以下具体步骤：
第一步、低温冷冻干燥粉碎预处理
将50g内蒙古黄芪饮片在-80℃冰箱中冷冻6h；将冷冻好的黄芪饮片放入冷冻干燥机中-45℃冷冻干燥28h，然后用破壁机打成粉末状，过60目筛，得到黄芪粉末，密封备用；
第二步、黄芪多糖脱脂处理
将黄芪粉末加入5倍重量的乙醇回流脱脂3次，过滤并将药渣挥干后于70℃温度下烘干，得到脱脂后的黄芪粉末；
第三步、发酵黄芪粉
将黄芪粉末加入到全自动发酵罐中，接种第4代非解乳糖链球菌FGM株，得到发酵液；随后将发酵液放入真空冷冻干燥机中，冻干后收集得到发酵黄芪粉；
第四步、发酵黄芪粗多糖的提取
在发酵黄芪粉中加入8倍重量的蒸馏水，于功率300W的微波炉中加热10min，过滤得到初期滤液和初期残渣；初期残渣采用上述相同方法再处理1次，得到后期滤液和后期残渣；将初期滤液和后期滤液合并，浓缩得到浓缩液，利用超速离心机对浓缩液进行分离过滤，将分离过滤得到的滤液进行浓缩，得到浓缩滤液；随后将浓缩滤液进行调醇处理，加入纯度90％的乙醇调醇度为80％，在室温下静置12h后，进行超速离心处理，得到前期离心液，收集前期离心液中的白色沉淀物，并将前期离心液中的上清液减压浓缩，得到前期浓缩上清液；将前期浓缩上清液再次调醇处理，调醇度为80％，室温静置12h，随后进行超速离心处理，得到后期离心液，弃去后期离心液中的上清液，收集后期离心液中的白色沉淀物；将两次调醇处理得到的白色沉淀物合并，放入干燥器中真空干燥，得到黄芪多糖；
第五步、脱蛋白
将黄芪多糖用蒸馏水配成5％浓度的糖溶液，加入与糖溶液等体积的Sevage试剂进行反应，上下振摇30min，静置分层后，除去下层的有机溶剂和液面交界处的变性蛋白；将上述步骤重复3次，得到上层多糖液；将上层多糖液于5000rpm条件下离心处理10min，弃除沉淀，得到脱蛋白的黄芪多糖液；
第六步、脱色素
通过静态吸附法对脱蛋白的黄芪多糖液进行脱色素处理，得到脱蛋白脱色的黄芪多糖液；
第七步、透析纯化
将经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液进行透析处理，将截留液浓缩后冷冻干燥，得到黄芪多糖粉末。
前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法中，第一步中，每次乙醇回流脱脂的时间为2h。
前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法中，
第三步中，第4代非解乳糖链球菌FGM株的具体制备过程为：
取2mL非解乳糖链球菌FGM株培养液接种于100mL MRS肉汤培养基中，37℃厌氧培养24h，此为第1代非解乳糖链球菌FGM株；再取第1代的培养液2mL接种于100mL MRS肉汤培养基中，此为第2代非解乳糖链球菌FGM株，按上述方法培养到第4代，取第4代非解乳糖链球菌FGM株作为发酵黄芪的菌株。
前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法中，第三步中黄芪粉发酵的具体过程为：将发酵培养基经高压灭菌后加入到全自动发酵罐中，接种第4代非解乳糖链球菌FGM株，接菌量为5％，调节pH为5.4，温度为39℃、在200r/min的条件下发酵48h；从发酵培养基加入至发酵罐中开始后连续发酵5次，将发酵液放入真空冷冻干燥机中，冻干后收集发酵黄芪粉。
前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法中，第六步中，采用D152型大孔弱酸阳离子交换树脂对脱蛋白的黄芪多糖液进行脱色素吸附处理，过滤后收集得到滤液；吸附时间为180min、脱蛋白的黄芪多糖液的上样浓度为0.08g/mL、上样量为1倍柱体积，流速为1mL/min；
将滤液进行浓缩，离心机采用5000rpm的转速对浓缩后的液体进行离心处理10min，取上清液，加入乙醇，静置12h，滤过得到醇沉物，用乙醇洗涤醇沉物，60℃温度下减压干燥至无醇味，取沉淀，真空干燥，得到脱蛋白脱色的黄芪多糖；
所述乙醇浓度为70％。
前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法中，第七步中，透析纯化处理的具体过程为：将经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液加入蒸馏水超声溶解1h，定容至3500mL，装入膜分离机的储液罐中；打开安装有300kDa中空纤维膜的膜分离机，调节流量计，保持恒定流速4m/s，压力控制在0.1MPa，截留液返回储液罐，滤液流向滤液罐，随着膜分离机储液罐中经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液的不断减少，加入蒸馏水冲洗，滤液变为澄清时用Molish反应鉴定滤液中多糖含量，直至滤液中不含有多糖为止；关闭膜分离机，收集截留液和滤液；
将滤液放入到膜分离机的储液罐中，更换100kDa中空纤维膜，依照上述步骤进行重复操作；
将截留液浓缩后冷冻干燥，得100-300kDa分子量的低分子量黄芪多糖。
一种高纯度低分子量黄芪多糖，该高纯度低分子量黄芪多糖由前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法制备得到；所述高纯度低分子量黄芪多糖的分子量为100-300kDa。
一种防晒和/或晒后修复的化妆品，防晒和/或晒后修复的化妆品中包含有前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法制备得到的高纯度低分子量黄芪多糖。
与现有技术相比，本发明采用发酵提取法提取黄芪多糖，选择第4代非解乳糖链球菌FGM株作为发酵黄芪的菌种，FGM株发酵黄芪的稳定性可以保证，可有效防止多糖含量减少，也能够有效的降低黄芪多糖的分子量；而且，非解乳糖链球菌FGM为非解乳糖链球菌，是从鸡盲肠分离的一株健康菌株，在动物机体内发挥着重要的生物学作用；黄芪经FGM株发酵后，粗多糖的含量明显提高；非解乳糖链球菌FGM菌株发酵黄芪的过程中产生α－半乳糖苷酶进而分解黄芪粉中的抗营养因子α－半乳糖苷类，并可能通过中间产物UDP－半乳糖苷酶间接将分解产物半乳糖合成为胞外多糖，提高黄芪发酵后的多糖含量。同时本发明对提取到的黄芪多糖进行糖脱蛋白、脱色素、还进行了透析纯化处理，从而可以获得高纯度的低分子黄芪多糖。经检测，本发明制备得到的黄芪多糖的分子量为100-300kDa，分子扩散速度较快，易于在配方体系中的添加，也易于皮肤的吸收。本发明还通过实验证明了本发明方法提取到的黄芪多糖对紫外线的照射具有一定的晒后修复效果，增加了黄芪多糖在化妆品中的应用。综上所述，本发明得到的黄芪多糖具有分子量低、纯度提升以及效果稳定性改善的特点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
实施例。一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法，将黄芪药材依次经低温冷冻干燥粉碎和脱脂处理后，得到粉末状黄芪；使用第4代非解乳糖链球菌FGM株对粉末状黄芪进行发酵提取处理，得到发酵黄芪粉；将发酵黄芪粉进行多次调醇处理，将醇沉后的白色沉淀物进行真空干燥处理，得到黄芪多糖；将得到的黄芪多糖依次经脱蛋白、脱色素和透析纯化处理后，获得纯化后的低分子的黄芪多糖。
FGM菌株(专利号：20120141827.5)为非解乳糖链球菌，由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中兽医室分离、保存。
包括以下具体步骤：
第一步、低温冷冻干燥粉碎预处理
将50g内蒙古黄芪饮片在-80℃冰箱中冷冻6h；将冷冻好的黄芪饮片放入冷冻干燥机中-45℃冷冻干燥28h，然后用破壁机打成粉末状，过60目筛，得到黄芪粉末，密封备用；
第二步、黄芪多糖脱脂处理
将黄芪粉末加入5倍重量的乙醇回流脱脂3次，过滤并将药渣挥干后于70℃温度下烘干，得到脱脂后的黄芪粉末；
第三步、发酵黄芪粉
将黄芪粉末加入到全自动发酵罐中，接种第4代非解乳糖链球菌FGM株，得到发酵液；随后将发酵液放入真空冷冻干燥机中，冻干后收集得到发酵黄芪粉；
第四步、发酵黄芪粗多糖的提取
在发酵黄芪粉中加入8倍重量的蒸馏水，于功率300W的微波炉中加热10min，过滤得到初期滤液和初期残渣；初期残渣采用上述相同方法再处理1次，得到后期滤液和后期残渣；将初期滤液和后期滤液合并，浓缩得到浓缩液，利用超速离心机对浓缩液进行分离过滤，将分离过滤得到的滤液进行浓缩，得到浓缩滤液；随后将浓缩滤液进行调醇处理，加入纯度90％的乙醇调醇度为80％，在室温下静置12h后，进行超速离心处理，得到前期离心液，收集前期离心液中的白色沉淀物(一次醇沉)，并将前期离心液中的上清液减压浓缩，得到前期浓缩上清液；将前期浓缩上清液再次调醇处理，调醇度为80％，室温静置12h，随后进行超速离心处理，得到后期离心液，弃去后期离心液中的上清液，收集后期离心液中的白色沉淀物；将两次调醇处理得到的白色沉淀物合并，放入干燥器中真空干燥，得到黄芪多糖；
第五步、脱蛋白
将黄芪多糖用蒸馏水配成5％浓度的糖溶液，加入与糖溶液等体积的Sevage试剂(氯仿：正丁醇体积比为4：1)进行反应，上下振摇30min，静置分层后，除去下层的有机溶剂和液面交界处的变性蛋白；将上述步骤重复3次，得到上层多糖液；将上层多糖液于5000rpm条件下离心处理10min，弃除沉淀，得到脱蛋白的黄芪多糖液；
第六步、脱色素
通过静态吸附法对脱蛋白的黄芪多糖液进行脱色素处理，得到脱蛋白脱色的黄芪多糖液；
第七步、透析纯化
将经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液进行透析处理，将截留液浓缩后冷冻干燥，得到黄芪多糖粉末。
第一步中，每次乙醇回流脱脂的时间为2h。
第三步中，第4代非解乳糖链球菌FGM株的具体制备过程为：
取2mL非解乳糖链球菌FGM株培养液接种于100mL MRS肉汤培养基中，37℃厌氧培养24h，此为第1代非解乳糖链球菌FGM株；再取第1代非解乳糖链球菌FGM株的培养液2mL接种于100mL MRS肉汤培养基中，此为第2代非解乳糖链球菌FGM株，按上述方法培养到第4代，取第4代非解乳糖链球菌FGM株作为发酵黄芪的菌株。
第三步中黄芪粉发酵的具体过程为：将发酵培养基经高压灭菌后加入到全自动发酵罐中，接种第4代菌株，接菌量为5％，调节pH为5.4，温度为39℃、在200r/min的条件下发酵48h；从发酵培养基加入至发酵罐中开始后连续发酵5次，将发酵液放入真空冷冻干燥机中，冻干后收集发酵黄芪粉。
第六步中，采用D152型大孔弱酸阳离子交换树脂对脱蛋白的黄芪多糖液进行脱色素吸附处理，过滤后收集得到滤液；吸附时间为180min、脱蛋白的黄芪多糖液的上样浓度为0.08g/mL、上样量为1倍柱体积，流速为1mL/min；
将滤液进行浓缩，离心机采用5000rpm的转速对浓缩后的液体进行离心处理10min，取上清液，加入乙醇(乙醇浓度为70％)，静置12h，滤过得到醇沉物，用乙醇洗涤醇沉物，60℃温度下减压干燥至无醇味，取沉淀，真空干燥，得到脱蛋白脱色的黄芪多糖；
所述乙醇浓度为70％。
第七步中，透析纯化处理的具体过程为：将经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液加入蒸馏水超声溶解1h，定容至3500mL，装入膜分离机的储液罐中；打开安装有300kDa中空纤维膜的膜分离机，调节流量计，保持恒定流速4m/s，压力控制在0.1MPa，截留液返回储液罐，滤液流向滤液罐，随着膜分离机储液罐中经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液的不断减少，加入蒸馏水冲洗，滤液变为澄清时用Molish反应鉴定滤液中多糖含量，直至滤液中不含有多糖为止；关闭膜分离机，收集截留液和滤液；
将滤液放入到膜分离机的储液罐中，更换100kDa的中空纤维膜，依照上述步骤进行重复操作；
将截留液浓缩后冷冻干燥，得100-300kDa分子段的低分子量黄芪多糖。
一种高纯度低分子量黄芪多糖，该高纯度低分子量黄芪多糖由前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法制备得到；所述高纯度低分子量黄芪多糖的分子量为100-300kDa。
一种防晒和/或晒后修复的化妆品，防晒和/或晒后修复的化妆品中包含有前述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法制备得到的高纯度低分子量黄芪多糖。
第七步中，透析纯化处理的具体过程中，截留液返回储液罐，滤液流向滤液罐，随着储液罐中多糖溶液的不断减少，加入适量的蒸馏水冲洗，滤液变为澄清时用Molish反应鉴定滤液中是否含有多糖(取滤液1mL，加入等体积的10％的α-萘酚醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，观察两界面产生的颜色变化，无棕色环出现，即为不含有多糖)，直至滤液中不含有多糖为止。关闭膜分离机，收集截留液(<300kDa)和滤液(>300kDa)。再向储液罐中加入少量蒸馏水，关闭滤液口，进行反清洗，将粘附于中空纤维膜上的多糖清洗下来，合并到截留液中。浓缩后冷冻干燥，得黄芪多糖(<300kDa)。滤液放入到储液罐中，更换中空纤维膜(100kDa)，依照上述步骤进行操作，得100-300kDa分子量范围的黄芪多糖；
Sevage试剂包括氯仿和正丁醇，且氯仿：正丁醇＝4：1。
发酵黄芪粗多糖的提取的具体过程：
将发酵黄芪粉加入8倍重量的蒸馏水，在微波炉功率300W时加热10min，过滤，残渣用相同方法再处理1次，弃去滤渣并合并滤液，浓缩得到浓缩液50mL，浓缩液上超速离心机，分离过滤的滤液浓缩至50mL。调醇度为80％，室温静置过夜12h，超速离心，收集白色沉淀物(一次醇沉)，并将上清液减压浓缩至50mL，再次调醇度为80％，室温静置12h，超速离心，弃上清液，收集白色沉淀物(二次醇沉)，合并两次得到的白色沉淀物，放入干燥器中真空干燥，即得黄芪多糖。
针对本发明所制备的低分子的黄芪多糖，对紫外辐射致体外培养成纤维细胞增殖、氧化损伤、细胞膜损伤具有保护作用进行以下验证：
准备五份人皮肤成纤维细胞模型,设正常对照组、UVA模型组、UVA+0.1mg/ml黄芪多糖组、UVA+0.2mg/ml黄芪多糖组、UVA+0.4mg/ml黄芪多糖组、UVA+0.8mg/ml黄芪多糖组。
UVA模型组单纯给予紫外线照射,各黄芪多糖保护组于紫外线照射前2h加入黄芪多糖(采用实施例2制得的黄芪多糖粉末),正常对照组和UVA模型组只加入相同量的培养基,在紫外灯下照射,UVA光源距离台面15cm,辐射强度为1mW/cm2,照射时间为2400s,总剂量为2.4J/cm2。
采用MTT法测定细胞增殖活力,按照试剂盒说明书检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。
UVA模型组在492nm波长的吸光度值低于对照组，差异有统计学意义(p<0.01)。
UVA+0.4mg/ml黄芪多糖组和UVA+0.8mg/ml黄芪多糖组在492nm波长的吸光度值高于UVA模型组,差异均有统计学意义(p<0.01)。
UVA+0.1mg/ml黄芪多糖组和UVA+0.2mg/ml黄芪多糖组在492nm波长的吸光度值低于对照组,差异均有统计学意义(p<0.01)。
随着黄芪多糖剂量的增加,在492nm波长的吸光度值呈升高趋势(r＝0.658,P<0.01)。与模型对照组比较,UVA模型组细胞内SOD活力降低,MDA含量升高,LDH漏出量升高；UVA+0.1mg/ml黄芪多糖组、UVA+0.2mg/ml黄芪多糖组、UVA+0.4mg/ml黄芪多糖组、UVA+0.8mg/ml黄芪多糖组MDA含量、LDH漏出量均高于模型对照组，差异均有统计学意义(p<0.05)。随着黄芪多糖剂量的增加,细胞内SOD活力呈升高趋势(r＝0.545,p<0.01),MDA含量呈降低趋势(r＝-0.737,p<0.01),LDH漏出量呈降低趋势(r＝-0.834,p<0.01)。
表1黄芪多糖对UVA照射成纤维细胞SOD活力、MDA含量和LDH漏出量的影响(n＝6,
Figure BDA0003214597000000131
)
Figure BDA0003214597000000132
Figure BDA0003214597000000141
与对照组比较,*，P<0.05；**，<0.01；与UVA模型组比较,#，P<0.05；##，P<0.01。
结论：UVA可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞氧化损伤,黄芪多糖对UVA致人皮肤成纤维细胞的损伤具有一定保护作用,其机制与其抗氧化作用和促进细胞增殖作用有关。

Claims (7)

1.一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法，其特征在于：将黄芪药材依次经低温冷冻干燥粉碎和脱脂处理后，得到脱脂黄芪粉末；使用第4代非解乳糖链球菌FGM株对粉末状黄芪进行发酵提取处理，得到发酵黄芪粉；将发酵黄芪粉进行多次调醇处理，将醇沉后的白色沉淀物进行真空干燥处理，得到粗黄芪多糖；将得到的黄芪多糖依次经脱蛋白、脱色素和透析纯化处理后，获得纯化后的低分子的黄芪多糖；
包括以下具体步骤：
第一步、低温冷冻干燥粉碎预处理
将50g内蒙古黄芪饮片在-80℃冰箱中冷冻6h；将冷冻好的黄芪饮片放入冷冻干燥机中-45℃冷冻干燥28h，然后用破壁机打成粉末状，过60目筛，得到黄芪粉末，密封备用；
第二步、黄芪多糖脱脂处理
将黄芪粉末加入5倍重量的乙醇回流脱脂3次，过滤并将药渣挥干后于70℃温度下烘干，得到脱脂后的黄芪粉末；
第三步、发酵黄芪粉
将黄芪粉末加入到全自动发酵罐中，接种第4代非解乳糖链球菌FGM株，得到发酵液；随后将发酵液放入真空冷冻干燥机中，冻干后收集得到发酵黄芪粉；
第四步、发酵黄芪粗多糖的提取
在发酵黄芪粉中加入8倍重量的蒸馏水，于功率300W的微波炉中加热10min，过滤得到初期滤液和初期残渣；初期残渣采用上述相同方法再处理1次，得到后期滤液和后期残渣；将初期滤液和后期滤液合并，浓缩得到浓缩液，利用超速离心机对浓缩液进行分离过滤，将分离过滤得到的滤液进行浓缩，得到浓缩滤液；随后将浓缩滤液进行调醇处理，加入纯度90％的乙醇调醇度为80％，在室温下静置12h后，进行超速离心处理，得到前期离心液，收集前期离心液中的白色沉淀物，并将前期离心液中的上清液减压浓缩，得到前期浓缩上清液；将前期浓缩上清液再次调醇处理，调醇度为80％，室温静置12h，随后进行超速离心处理，得到后期离心液，弃去后期离心液中的上清液，收集后期离心液中的白色沉淀物；将两次调醇处理得到的白色沉淀物合并，放入干燥器中真空干燥，得到黄芪多糖；
第五步、脱蛋白
将黄芪多糖用蒸馏水配成5％浓度的糖溶液，加入与糖溶液等体积的Sevage试剂进行反应，上下振摇30min，静置分层后，除去下层的有机溶剂和液面交界处的变性蛋白；将上述步骤重复3次，得到上层多糖液；将上层多糖液于5000rpm条件下离心处理10min，弃除沉淀，得到脱蛋白的黄芪多糖液；
第六步、脱色素
通过静态吸附法对脱蛋白的黄芪多糖液进行脱色素处理，得到脱蛋白脱色的黄芪多糖液；
第七步、透析纯化
将经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液进行透析处理，将截留液浓缩后冷冻干燥，得到黄芪多糖粉末；
第七步中，透析纯化处理的具体过程为：将经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液加入蒸馏水超声溶解1h，定容至3500mL，装入膜分离机的储液罐中；打开安装有300kDa中空纤维膜的膜分离机，调节流量计，保持恒定流速4m/s，压力控制在0.1MPa，截留液返回储液罐，滤液流向滤液罐，随着膜分离机储液罐中经脱色脱蛋白处理的黄芪多糖液的不断减少，加入蒸馏水冲洗，滤液变为澄清时用Molish反应鉴定滤液中多糖含量，直至滤液中不含有多糖为止；关闭膜分离机，收集截留液和滤液；
将滤液放入到膜分离机的储液罐中，更换100kDa中空纤维膜，依照上述步骤进行重复操作；
将截留液浓缩后冷冻干燥，得100-300kDa分子量的低分子量黄芪多糖。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法，其特征在于，第一步中，每次乙醇回流脱脂的时间为2h。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法，其特征在于，
第三步中，第4代非解乳糖链球菌FGM株的具体制备过程为：
取2mL非解乳糖链球菌FGM株培养液接种于100mLMRS肉汤培养基中，37℃厌氧培养24h，此为第1代非解乳糖链球菌FGM株；再取第1代的培养液2mL接种于100mLMRS肉汤培养基中，此为第2代非解乳糖链球菌FGM株，按上述方法培养到第4代非解乳糖链球菌FGM株，取第4代非解乳糖链球菌FGM株作为发酵黄芪的菌株。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法，其特征在于，第三步中黄芪粉发酵的具体过程为：将发酵培养基经高压灭菌后加入到全自动发酵罐中，接种第4代非解乳糖链球菌FGM株，接菌量为5％，调节pH为5.4，温度为39℃、在200r/min的条件下发酵48h；从发酵培养基加入至发酵罐中开始后连续发酵5次，将发酵液放入真空冷冻干燥机中，冻干后收集发酵黄芪粉。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法，其特征在于，第六步中，采用D152型大孔弱酸阳离子交换树脂对脱蛋白的黄芪多糖液进行脱色素吸附处理，过滤后收集得到滤液；吸附时间为180min、脱蛋白的黄芪多糖液的上样浓度为0.08g/mL、上样量为1倍柱体积，流速为1mL/min；
将滤液进行浓缩，离心机采用5000rpm的转速对浓缩后的液体进行离心处理10min，取上清液，加入乙醇，静置12h，滤过得到醇沉物，用乙醇洗涤醇沉物，60℃温度下减压干燥至无醇味，取沉淀，真空干燥，得到脱蛋白脱色的黄芪多糖；
所述乙醇浓度为70％。
6.一种高纯度低分子量黄芪多糖，其特征在于：该高纯度低分子量黄芪多糖由权利要求1-5中任一项所述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法制备得到；所述高纯度低分子量黄芪多糖的分子量为100-300kDa。
7.一种防晒和/或晒后修复的化妆品，其特征在于：防晒和/或晒后修复的化妆品中包含有权利要求1-5中任一项所述的一种高纯度低分子量黄芪多糖的提取方法制备得到的高纯度低分子量黄芪多糖。
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