CN113631186A - 肺炎球菌表面蛋白 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种即使在中性附近的pH下也不会经受脱氨基化，保持作为分子的稳定性的来自D39的PspA变异体。具体而言，本发明是以下的(a)或(b)的蛋白质。(a)包含序列号2所示的氨基酸序列，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质，以及与该蛋白质实质上相同的蛋白质，(b)序列号2所示的氨基酸序列的一部分，并且在该一部分包含254位的天冬氨酸，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质，以及与该蛋白质实质上相同的蛋白质。

Description

肺炎球菌表面蛋白
技术领域
本发明涉及肺炎球菌表面蛋白A(PspA)和包含PspA的疫苗。
背景技术
肺炎球菌是与流感病毒并肩的在临床上重要的上呼吸道感染病原体，并发中耳炎～肺炎、菌血症和脑膜炎等，使小儿、成人发作包括死亡的严重的疾病。
作为防御因这样的肺炎球菌所致的感染的手段，近年来，开发了面向成人的7价－、10价－和13价－多糖结合型肺炎球菌疫苗(PCV(pneumococcal conjugate vaccine)7、PCV10和PCV13)，通过肌肉内注射进行给药。但是，该基于多糖体的疫苗由于T细胞非依赖性的多糖的免疫原性弱，因此，几乎不会诱导对小儿的免疫应答，另外，仅对荚膜血清型的肺炎球菌显示感染防御效果。进而，疫苗的肌肉内注射主要诱导全身性的抗IgG抗体，因此，这些疫苗存在无法对肺炎球菌诱导粘膜免疫的应答等问题。
存在于肺炎球菌的表层的肺炎球菌表面蛋白A(pneumococcal surface proteinA：PspA)作为具有高免疫原性的蛋白质被得知，认为有望作为疫苗的候选(非专利文献1和非专利文献2)。PspA存在于几乎所有种类的肺炎球菌上，基于PspA的疫苗在小鼠和人中诱导引起交叉反应的抗体(非专利文献3～非专利文献5)。进而，PspA特异性的粘膜性和全身性的抗体在幼鼠(通过母体)和成年小鼠中被诱导，该抗体的诱导是由CD4+T细胞的Th1和Th2型细胞因子的应答介导的。根据以上的见解，表明PspA是不仅在成人，而且在小儿中也有效的肺炎球菌疫苗候选。
PspA被分类为3个家族(家族1～3)，进而，被分类为被称为6个支系(支系1～6)的亚群。其中，具有被分类为家族1的PspA的肺炎球菌株占迄今为止确认的菌株的约95％，被分类为家族1的PspA作为疫苗候选特别重要。
作为肺炎球菌的通用抗原已知的来自D39株的PspA是被分类为家族1、支系2的代表性的疫苗抗原，具有高的抗原性和肺炎球菌中和抗体诱导能力。但是，来自D39株的PspA在中性附近的pH下容易脱氨基化，在稳定性方面存在问题。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Berry等,Infect Immun 57：2037-2042 1989
非专利文献2：McDaniel等,J Exp Med 165：381-394 1987
非专利文献3：Briles等,Infect Immun 68：796-800 2000
非专利文献4：Nguyen等,Vaccine 29：5731-5739 2011
非专利文献5：McCool等,J Exp Med 195：359-365 2002
发明内容
鉴于上述情况，本发明的课题在于提供一种即使在中性附近的pH下也不会经受脱氨基化，保持作为分子的稳定性的来自D39的PspA变异体。
本发明人等通过MS/MS法对经脱氨基化的来自D39的PspA的氨基酸序列进行解析，结果发现在来自野生型D39的PspA的1个氨基酸产生变异。
对于该氨基酸的位置，在序列号1所示的来自野生型D39的成熟PspA的全氨基酸序列中，仅254位的天冬酰胺(Asn)特异性地变为天冬氨酸(Asp)是显而易见的。来自D39的成熟PspA的254位变为天冬氨酸的PspA(N254D)是极稳定的PspA，抗原性、中和抗体诱导能力也没有变化。而且，例如在家族2、支系3的EF3296肺炎球菌株的PspA、家族2、支系4的EF5668肺炎球菌株的PspA中没有发现这样的氨基酸的变化。
基于以上的见解，完成了本发明。
即，本发明为以下的(1)～(5)。
(1)一种以下的(a)或(b)的蛋白质。
(a)包含序列号2所示的氨基酸序列，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质，以及与该蛋白质实质上相同的蛋白质，
(b)序列号2所示的氨基酸序列的一部分，并且在该一部分中包含254位的天冬氨酸，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质，以及与该蛋白质实质上相同的蛋白质。
(2)根据上述(1)所述的蛋白质，其特征在于，所述序列号2所示的氨基酸序列的一部分为α-螺旋区域。
(3)根据上述(2)所述的蛋白质，其特征在于，是序列号3所示的氨基酸序列的全部或一部分。
(4)一种DNA，编码上述(1)～(3)中任一项所述的蛋白质。
(5)一种肺炎球菌疫苗，包含上述(1)～(3)中任一项所述的蛋白质作为抗原或抗原的一部分。
根据本发明，可提供作为分子稳定的肺炎球菌疫苗抗原。具体而言，在以往的来自D39肺炎球菌的PspA的医药品级的制造中的利用离子交换色谱等的纯化过程中，洗脱峰有时分为2个，后面的峰为脱氨基体。可以表明由本发明提供的抗原能够制备即使在纯化过程和其后的保存状态下也非常稳定的制剂。
附图说明
图1是示意性地表示PspA蛋白质的结构的图。
图2表示利用Native-PAGE确认规定的pH(pH 6.5、pH 7.0、pH 7.5、pH 8.0和pH8.5)下的PspA 1-3的经时分子变化而得的结果。A：标志物(500mg)B：pH 7.0(0天的对照)C：pH 6.5D：pH 7.0E：pH 7.5F：pH 8.0G：pH 8.5
图3表示PspA 1-3和PspA 1-3LB的基于肽图的分析结果。箭头是PspA 1-3LB特异性产生的峰。
图4表示将PspA 1-3LB的纳米凝胶经鼻疫苗效果与使用其它PspA抗原的纳米凝胶经鼻疫苗的效果进行比较而得的结果。
具体实施方式
本发明提供保持与来自野生型D39的PspA蛋白质同等的抗原性和中和抗体诱导能力，并且在作为分子的稳定性(例如，不易产生氨基酸变异等)方面比来自野生型D39的PspA优异的蛋白质(以下记为“本发明的PspA蛋白质”)。
即，本发明的第1实施方式是本发明的PspA蛋白质，是以下的(a)或(b)的蛋白质。
(a)包含序列号2所示的氨基酸序列，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质，以及与该蛋白质实质上相同的蛋白质，
(b)序列号2所示的氨基酸序列的一部分，并且在该一部分中包含254位的天冬氨酸，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质，以及与该蛋白质实质上相同的蛋白质。
PspA蛋白质从其N末端侧由信号序列(Signal sequence)(例如，GenBankaccession no.：ABJ54172(来自D39株)的氨基酸位置1～31)、α－螺旋(α－Helix)区域(例如，GenBank accession no.：ABJ54172的氨基酸位置32～319)、脯氨酸富集(Proline-rich)区域(例如，GenBank accession no.：ABJ54172的氨基酸位置320～402)、胆碱结合(Choline binding)区域和C末端尾部(C-terminal tail)区域构成(参照图1)。信号序列被切断而成为成熟PspA(由α－螺旋区域、脯氨酸富集区域、胆碱结合区域和C末端尾部区域构成)。
本发明的实施方式中，“肺炎球菌疫苗抗原活性”是指诱导用于防御生物体免受肺炎球菌的攻击的免疫(体液免疫和/或细胞性免疫)的活性。本领域技术人员能够容易地确认某种蛋白质是否具有“肺炎球菌疫苗抗原活性”(例如，可通过实施例的“4.小鼠经鼻免疫”中记载的方法等来确认)。
上述(a)中的“该蛋白质”是指“包含序列号2所示的氨基酸序列，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质”，上述(b)中的“该蛋白质”是指“序列号2所示的氨基酸序列的一部分，并且在该一部分中包含254位的天冬氨酸，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质”。
本发明的实施方式中，“与该蛋白质实质上相同的蛋白质”是指由在“该蛋白质”的氨基酸的序列中缺失(不包括254位的天冬氨酸)、取代(不包括254位的天冬氨酸)、插入或附加有1或几个(优选为1～30个左右，更优选为1～10个左右，进一步优选为1～5个)的氨基酸的氨基酸序列构成，且该蛋白质具有作为肺炎球菌疫苗抗原的活性的蛋白质。
或者，在本发明的实施方式中，“与该蛋白质实质上相同的蛋白质”是指254位的氨基酸为天冬氨酸，并且包含与“该蛋白质”的氨基酸的序列具有约60％以上、优选约70％以上、更优选约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、最优选约99％的氨基酸同源性的氨基酸序列，且该蛋白质具有作为肺炎球菌疫苗抗原的活性的蛋白质。
上述(b)中的“序列号2所示的氨基酸序列的一部分”是指包含例如α-螺旋区域(其中，包含254位的天冬氨酸)的一部分或全部与脯氨酸富集区域的一部分或全部的区域，例如可举出由序列号3所示的氨基酸构成的蛋白质。
本发明的第2实施方式是编码“本发明的PspA蛋白质”的核酸(DNA等)。本发明的PspA蛋白质可通过如下操作来制备：从cDNA文库等取得编码其的核酸，掺入到适当的表达用载体，利用该表达载体转化或转染适当的宿主细胞，将其在适当的培养基中培养，使本发明的PspA蛋白质表达，并进行纯化。
例如可以使用细菌细胞(例如，大肠杆菌B菌株(Escherichia coli B strain)、大肠杆菌Kl2菌株(E. coli Kl2 strain)、产氨棒杆菌(Coryne bacterium ammoniagenes)、谷氨酸棒状杆菌(C.glutamicum)、液化沙雷氏菌(Serratia liquefaciens)、变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)等)、霉菌(例如，卡门柏青霉(Penicil lium camembertii)、顶头孢霉(Acremonium chrysogenum)等)、动物细胞、植物细胞、杆状病毒/昆虫细胞或酵母细胞(例如，酿酒酵母(Sacc haromyces cerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)等)作为Psp A蛋白质表达用的宿主细胞，并使其在这些细胞内表达。
用于使PspA蛋白质表达的表达用载体可以使用适于各种宿主细胞的载体。作为表达用载体，例如可以使用pBR322、pBR325、pUC118、pET等(大肠杆菌宿主)、pEGF-C、pEGF-N等(动物细胞宿主)、pVL1392、pVL1393等(昆虫细胞宿主、杆状病毒载体)、pG-1、Yep13或pPICZ等(酵母细胞宿主)。这些表达载体具有适于各个载体的复制起点、选择标志物和启动子，可以根据需要具有增强子、转录终止序列(终止子)、核糖体结合部位和多腺苷酸化信号等。进而，为了使表达后的多肽的纯化容易，可以在表达载体中插入用于使FLAG标签、His标签、HA标签和GS T标签等融合并表达的碱基序列。
表达用载体的制作可通过本领域技术人员公知的方法来实施，也可以适当地使用市售的试剂盒等。
在从培养菌体或培养细胞提取所表达的PspA蛋白质时，培养后，通过公知的方法收集菌体或培养细胞，将其悬浮于适当的缓冲液，通过超声波、溶菌酶和/或冷冻融化等将菌体或细胞破坏后，通过离心分离、过滤而取得可溶性提取液。特别是在使用培养细胞作为宿主的情况下，优选通过回收上清液来取得培养上清中表达的PspA蛋白质。可以将公知的分离·纯化法适当地组合而从所得到的提取液或培养上清液取得目标蛋白质。作为公知的分离、纯化法，可使用如下方法：盐析、溶剂沉淀法等利用溶解度的方法、透析法、超滤法、凝胶过滤法、SDS-PAGE等主要利用分子量的差的方法、离子交换色谱等利用电荷的差的方法、亲和色谱等利用特异亲和性的方法(例如，在使多肽与GST标签一起表达的情况下，使用使谷胱甘肽结合于载体的树脂，在使多肽与His标签一起表达的情况下，使用Ni-NTA树脂、Co基树脂，在使多肽与HA标签一起表达的情况下，使用抗HA抗体树脂，在使多肽与FLAG标签一起表达的情况下，使用抗FLAG抗体结合树脂等的方法)、反相高效液相色谱等利用疏水性的差的方法或等电点电泳法等利用等电点的差的方法等。
本发明的第3实施方式是一种包含本发明的PspA蛋白质作为抗原的用于抑制肺炎球菌的感染的疫苗(以下也记载为“本发明的肺炎球菌疫苗”)。
本发明的肺炎球菌疫苗中所含的本发明的PspA蛋白质可以单独含有，但也可以以与和本发明的PspA蛋白质不同的PspA蛋白质(包含属于不同的家族和/或支系的PspA蛋白质)的全部或一部分融合的形态含有(例如参照WO2018102774等)。
本发明的肺炎球菌疫苗可以包含1种或多种佐剂、例如完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂、霍乱毒素、大肠杆菌不耐热肠毒素、氢氧化铝、钾明矾、皂苷或其衍生物、胞壁酰二肽、矿物油或植物油、非磷脂基脂质体(Novasome)或非离子性嵌段共聚物、DEAE葡聚糖等。另外，也可以包含医药上允许的载体。医药上允许的载体需要是对进行疫苗接种的动物的健康不造成不良影响的化合物。医药上允许的载体例如为无菌水或缓冲液。
本发明的肺炎球菌疫苗可通过通常的主动免疫法进行给药，可以通过注射进行给药，也可以通过口服或经鼻等经粘膜方法进行给药。另外，肺炎球菌疫苗可以以对肺炎球菌感染的预防或治疗有效的量(针对肺炎球菌的攻击，足以在生物体内诱导免疫的量)通过适于剂型的方法进行单次或多次给药。肺炎球菌疫苗可以皮内、皮下、肌肉内、腹腔内、静脉内、口服或粘膜(鼻腔内或舌下等)给药。另外，本发明的肺炎球菌疫苗也可以与其它抗原成分混合而使用。
肺炎球菌疫苗的给药量、给药次数可根据给药对象而改变，通过以1周～几周一次的频率给药几次包含几10μg抗原的疫苗，能够诱导防御免疫。
另外，本发明的肺炎球菌疫苗中，可以以适于经鼻给药的方式包含纳米凝胶。本发明的实施方式中，纳米凝胶是指在亲水性的多糖(例如，普鲁兰多糖)加成有疏水性的胆固醇作为侧链的高分子凝胶纳米粒。纳米凝胶可基于公知的方法、例如WO2000012564中记载的方法等来制造。
具体而言，首先，使碳原子数12～50的含羟基烃或甾醇与OCN-R1NCO(式中，R1为碳原子数1～50的烃基)所示的二异氰酸酯化合物反应，制造碳原子数12～50的含羟基烃或甾醇反应了1分子的含异氰酸酯基的疏水性化合物。使得到的含异氰酸酯基的疏水性化合物与多糖类反应，制造含有碳原子数12～50的烃基或甾醇基(steryl group)的含疏水性基团的多糖类。接着，将得到的生成物用酮系的溶剂进行纯化，由此能够制造纯度高的含疏水性基团的多糖类。
这里，作为多糖类，可利用普鲁兰多糖、支链淀粉、直链淀粉、葡聚糖、羟乙基葡聚糖、甘露聚糖、果聚糖、菊粉、几丁质、壳聚糖、木葡聚糖或水溶性纤维素等，特别优选普鲁兰多糖。
作为本发明的第3实施方式中使用的纳米凝胶，可举出阳离子性胆固醇取代普鲁兰多糖(称为cationic cholesteryl-group-bearing pullulan：cCH P)和其衍生物。cCHP具有如下结构：在分子量3万～20万、例如分子量100000的普鲁兰多糖中每100个单糖取代有1～10个、优选1～几个胆固醇。应予说明，本发明中使用的cCHP可根据抗原的尺寸、疏水性的程度而适当地变更胆固醇取代量。另外，为了变更CHP的疏水性的程度，可以加成烷基(碳原子数10～30，优选为碳原子数12～20左右)。本发明中使用的纳米凝胶的粒径为10～40nm，优选为20～30nm。纳米凝胶已被广泛市售，可以使用这些市售品。
本发明的实施方式中使用的纳米凝胶是以疫苗能够侵入带负电的鼻粘膜表面的方式导入了具有正电荷的官能团、例如氨基的纳米凝胶。作为氨基向纳米凝胶的导入方法，可举出使用加成了氨基的胆固醇普鲁兰多糖(CHPNH2)的方法。具体而言，将经减压干燥的CHP溶解于二甲基亚砜(DMSO)，在氮气流下向其中加入1-1’羰基二咪唑，在室温下使其反应几小时。向其反应溶液中缓慢加入乙二胺，搅拌几小时～几十小时左右。将得到的反应溶液相对于蒸馏水透析几天。将透析后的反应溶液冷冻干燥，得到乳白色的固体。乙二胺的取代度可使用元素分析、H-NMR等进行评价。
本发明的肺炎球菌疫苗可以包含药学上可允许的公知的稳定剂、防腐剂、抗氧化剂等。作为稳定剂，可举出明胶、葡聚糖、山梨糖醇等。作为防腐剂，可举出硫柳汞、β－丙内酯等。作为抗氧化剂，可举出α生育酚等。
本发明的第4实施方式是一种肺炎球菌的感染症的预防方法，包括对患者给予本发明的肺炎球菌疫苗。
这里，“预防”是指对有可能感染肺炎球菌的患者预先阻止其感染，由此，是以预先阻止肺炎球菌感染症的发病为目的的处置。
本说明书中引用的全部文献的公开内容通过参照将其整体援引为本说明书的一部分。另外，将本说明书翻译成英文时，在包含单数形式的“a、”“an”和“the”的单词的情况下，只要根据上下文没有清楚地表明它不是这样，则其不仅包括单数也包括复数。
以下示出实施例进一步进行本发明的说明，但实施例仅为本发明的实施方式的例示，并不限定本发明的范围。
实施例
1.Native PAGE
使各种PspA蛋白质、PspA 1-1(序列号5)、PspA 1-2(序列号6)、PspA 1-3(序列号4)和PspA 1-3LB(序列号3)在大肠杆菌表达系统等中表达(详细参照WO2018102774)。通过常规方法对表达的PspA蛋白质以非变性法提取，使用离子交换色谱、丁基琼脂糖等进行纯化直到在LDS(十二烷基硫酸锂，Lithium Dodecyl Sulfate)-PAGE中变得均匀。
首先，PspA 1-3分子在纯化后立即悬浮于2mg/ml的PBS，用0.5M NaH2PO4或0.5MNa2HP4将pH调整为规定的pH(pH6.5、pH7.0、pH7.5、pH8.0和pH8.5)，在25℃保存规定时间(1天、2天和5天)。使用10μl(1.0μg/lane)各样品以Native PAGE进行200V、60分钟电泳，进行考马斯蓝(BioRad)进行染色。应予说明，使用的凝胶是7.5％Mini-Protein TGX Gel12well(BioRad)，处理液使用Native Sample Buffer for Prot ein Gels(BIoRad)，电泳缓冲液使用10x Premixed electrophoresis buffe r(BioRad)。
以该条件的处理，LDS-PAGE中所有检体显示单一条带，表观分子量没有变化(没有示出数据)，在Native-PAGE中，在处理5天中不论pH如何均产生了移动度大的条带(图2的箭头)。将与该条带对应的蛋白质作为PspA 1-3LB。虽然没有示出数据，但在刚纯化后的PspA1-1和PspA1-2中均同样地观察到该现象，在PspA2(来自EF3296株)和PspA3(来自EF5668株)中没有观察到该现象，认为是来自肺炎球菌D39株的PspA特异性发生的现象。
2.肽图
为了确定从PspA 1-3向PspA 1-3LB的分子变化，对刚纯化后的PspA 1-3和PspA1-3LB各0.5mg/ml加入10μg的胰蛋白酶(sigma，序列等级(Sequence grade))，以37℃、24小时、pH 8.5进行消化处理，将处理后的样品50μl导入到反相HPLC(Waters C18 1.7μm2.1x100mm)中，以分离温度50℃、0.1％TFA(100％)、0.1％TFA-40％乙腈(55％)的110分钟线性梯度洗脱、0.2ml/min、220nm(检测)进行分析。
其结果，检测出洗脱时间不同的峰(图3)。因此，分取该峰，利用PPSQ-21A蛋白质测序仪(Shimadzu)进行N-端分析，结果在PspA 1-3LB中观测到AAEENDNVE(序列号7)这样的序列。根据该结果，表明在PspA 1-3LB氨基酸序列中发生特异性的脱氨基化的可能性。
3.PspA 1-3LB的氨基酸序列的确定
接着，为了进行PspA 1-3LB的全氨基酸序列分析，与上述2.同样地进行胰蛋白酶消化，使用LC-MS/MS(HPLC acquity UPLC(Waters：C4-1.7μm、2.1x100mm)-MS：OrbitrapFusion Tribrid(Thermo)MS1：Orbitrap,MS2：Ion Trap实施序列分析。
其结果，在302个氨基酸残基中鉴定出208个残基(69％)的氨基酸的序列，还进一步实施了whole-MS分析(Intact体33569.03和1脱氨基体33569.93)，与各理论值一致，因此，得出除N254D以外发生脱氨基化的可能性极低的结论。
4.小鼠经鼻免疫
4－1.方法
4－1－1.抗原的纳米凝胶化(疫苗的准备)
将cCHP纳米凝胶与各PspA蛋白质(PspA 1-1、PspA 1-2、PspA 1-3和PspA 1-3LB)以分子比1：1混合，用40℃的加热块孵育1小时。
4－1－2.对小鼠的经鼻免疫
对7周龄雌性Balb/c小鼠分别经鼻给予各cCHP-PspA溶液。给予抗原量为每1只、每1次以各PspA蛋白质量计给药10μg。经鼻免疫以1周间隔实施合计3次。
4－1－3.来自免疫小鼠的血清样品制备
为了测定从最终给药起1周间上升的血清中的PspA特异性IgG，从免疫小鼠的眼窝静脉进行采血。将采取的血液样品以4℃、7000rpm离心后，回收上清液作为血清样品。
4－1－4.抗原特异的IgG的测定
将各抗原以最终浓度1μg/ml涂布于ELISA板，反应一晩后，对孔进行清洗。为了避免非特异性反应，用含1％BSA的PBS在25℃将孔封闭1小时，进一步清洗后，制作从28连续稀释的血清样品，分别添加于孔，在25℃反应2小时。将孔清洗后，加入HRP标记的抗小鼠IgG，在25℃反应1个半小时。进一步清洗后，添加作为HRP的底物的TMB(3,3’,5,5’-四甲基联苯胺)溶液使其显色。用2N硫酸停止反应后，立即用酶标仪测定吸光度(450nm)，通过终点法算出抗体效价。
4－1.结果
可知通过cCHP-PspA 1-1、cCHP-PspA 1-2、cCHP-PspA 1-3或cCHP-PspA 1-3LB的经鼻给药，在小鼠血清中，诱导了各抗原特异性的IgG。另外，各PspA抗原间的抗体效价没有大的差异(图4)。
产业上的可利用性
本发明的肺炎球菌表面蛋白和其一部分可用作肺炎球菌疫苗的抗原。因此，可期待将本发明利用于感染症的预防医学的领域。
序列表
<110> 国立大学法人东京大学
和纳生物股份有限公司
<120> 肺炎球菌表面蛋白A
<130> TPC0312UVT
<150> JP2019- 65362
<151> 2019-03-29
<160> 7
<170> PatentIn第3.5版
<210> 1
<211> 588
<212> PRT
<213> 肺炎链球菌
<400> 1
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20 25 30
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<213> 肺炎链球菌
<400> 7
Ala Ala Glu Glu Asn Asp Asn Val Glu
1 5

Claims (5)

1.一种以下的(a)或(b)的蛋白质，
(a)包含序列号2所示的氨基酸序列，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质，以及与该蛋白质实质上相同的蛋白质，
(b)序列号2所示的氨基酸序列的一部分，并且在该一部分中包含254位的天冬氨酸，且具有肺炎球菌疫苗抗原活性的蛋白质，以及与该蛋白质实质上相同的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，所述序列号2所示的氨基酸序列的一部分为α-螺旋区域。
3.根据权利要求2所述的蛋白质，其特征在于，是序列号3所示的氨基酸序列的全部或一部分。
4.一种DNA，编码权利要求1～3中任一项所述的蛋白质。
5.一种肺炎球菌疫苗，包含权利要求1～3中任一项所述的蛋白质作为抗原或抗原的一部分。
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