CN113624736A - 一种基于拉曼效应的微生物浓度快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于拉曼效应的微生物浓度快速检测方法，首先制备4‑氰基苯乙烯聚合物纳米粒子，然后将细菌通过过量的4‑巯基苯硼酸修饰，将经过修饰后的细菌与已知浓度的银离子溶液相互作用，吸附部分银离子，将剩余的银离子与4‑氰基苯乙烯聚合物纳米粒子混合，根据聚合物拉曼信号强度和银离子浓度之间良好的线性关系，得到银离子与拉曼信号的对应关系，以银离子作为中间桥梁，建立细菌溶液的浓度与4‑氰基苯乙烯聚合物的拉曼信号的对应关系，获得标准曲线，利用标准曲线检测细菌浓度，同时通过银离子杀死细菌。本发明可以有效的杀死细菌，避免细菌检测后的二次环境污染，检测过程中无需对细菌进行培养，大大降低了检测时间，提高了检测效率。
Description
技术领域
本发明属于细菌检测分析领域，涉及一种细菌快速检测技术，具体涉及一种基于拉曼效应的微生物浓度快速检测方法。
背景技术
细菌感染尤其是院内感染可导致许多严重甚至致命的疾病，已成为一种广泛而重要的公共卫生威胁。自1928年发现青霉素以来，抗生素在临床抗感染治疗中得到广泛应用，使得细菌性感染治疗取得巨大成就。然而，随着近几十年抗生素的滥用，抗生素耐药性已成为抗生素治疗的严重威胁。除了实施严格的卫生条例来缓解这一困境外，开发有效的细菌检测和杀灭技术是限制细菌传播和减少潜在损害的有效途径。
三键拉曼报告分子在生物拉曼透明区(1800-2800cm-1)具有强烈而独特的拉曼振动，有效地避开了生物内源性分子的拉曼信号干扰，提高了生物应用中拉曼定量检测的准确性。一些含有各种三键(如C≡C键,C≡N键和C≡O键)基团的有机小分子或高分子大分子已发展成为细胞成像和细菌检测的拉曼标签。近年来，含有高密度三键基团的聚合物纳米粒子被合成为拉曼活性纳米材料并用于生物成像。在没有贵金属纳米粒子作为拉曼信号增强基底的情况下，聚合物纳米粒子可以实现在单个纳米粒子中产生强烈的拉曼信号，从而实现在活细胞和动物体内的拉曼高光谱检测和成像。
细菌检测后的及时杀灭对于防止造成环境二次污染至关重要。在众多的抗菌材料中，银离子由于具有安全、高效、广谱、无耐药性等特点，一直是抗菌领域的一个研究热点。银离子的杀菌原理是银离子作用于细菌的细胞壁和细胞膜并使之肿胀、疏松、通透性增加、内容物流出，导致细菌死亡。
发明内容
本发明的目的是提供了一种基于拉曼效应的微生物浓度快速检测方法。本发明合成的聚合物纳米粒子，灵敏度高、重现性稳定性好、在150-1500μM浓度范围与银离子浓度具有良好的线性关系，可用于快速检测并及时杀灭空气中的细菌。
为了实现本发明目的，本发明通过乳液聚合的方法合成4-氰基苯乙烯聚合物纳米粒子，并结合Ag+可以有效增强4-氰基苯乙烯聚合物纳米粒子的拉曼信号并且可以快速杀菌的特性，实现对空气中细菌的快速检测及杀灭。具体技术方案如下：
本发明提供一种基于拉曼效应的微生物浓度快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：制备4-氰基苯乙烯的聚合物纳米粒子乳液；
S2：获取待检测细菌浓度与拉曼信号强度的标准曲线，具体步骤如下：
S2.1、将含有已知细菌数量的标准菌液与过量的4-巯基苯硼酸混合孵育，然后离心收集菌体，去除多余的4-巯基苯硼酸，得到与4-巯基苯硼酸饱和结合的标准菌体；
S2.2、将与4-巯基苯硼酸饱和结合的菌体稀释不同倍数，得到不同浓度的细菌溶液；
S2.3、将不同浓度的细菌溶液与已知浓度的银离子溶液共育，部分银离子通过4-巯基苯硼酸为中介与细菌结合在一起；
S2.4、将步骤S2.3中共育后的混合溶液离心，得到上层清液，将上层清液与步骤S1中得到的聚合物纳米粒子乳液混合后进行拉曼检测，得到不同浓度细菌溶液对应的拉曼强度，建立细菌浓度与拉曼强度之间的标准曲线；
S3、细菌浓度检测，具体步骤如下：
S3.1、取已知体积的待检测细菌溶液，将待检测细菌溶液与过量的4-巯基苯硼酸混合孵育，然后离心收集菌体，去除多余的4-巯基苯硼酸，得到与4-巯基苯硼酸饱和结合的待检测菌体；
S3.2、将待检测菌体重悬于已知量水中，得到待检测细菌溶液；
S3.3、将待检测细菌溶液与已知浓度的银离子溶液共育，部分银离子通过4-巯基苯硼酸为中介与细菌结合在一起；
S3.4、将步骤S3.3中共育后的混合溶液离心，得到上层清液，将上层清液与聚合物纳米粒子乳液混合后进行拉曼检测，得到拉曼强度，根据步骤S2.4建立的标准曲线即可得到步骤S3.2中细菌溶液浓度，根据已知的水量计算细菌的数量，根据细菌数量计算出步骤S3.1中所取待检测细菌溶液的浓度。
进一步地，步骤S1中制备聚合物纳米粒子乳液方法为：
步骤1.1、以4-氰基苯乙烯作为单体，在惰性气体氛围和过氧化物引发剂引发下进行聚合，得到4-氰基苯乙烯聚合物；
步骤1.2、对步骤1.1得到的4-氰基苯乙烯聚合物进行透析，得到聚合物纳米粒子乳液。
进一步地，步骤1.1中具体方式为：将4-氰基苯乙烯加入反应容器中，然后向反应容器中加入水，在室温下搅拌20-40分钟，之后往反应容器中通入高纯度氮气，并对反应容器水浴升温至60-80℃，然后加入过硫酸钾溶液作为引发剂，反应1-2h后冷却至室温，得到4-氰基苯乙烯聚合物。
进一步地，步骤S1.2中，采用截留分子量为3500Da的透析袋对4-氰基苯乙烯聚合物进行透析。
进一步地，步骤S1中，所述引发剂为过氧化物引发剂，更优的为无机氧化物引发剂，最优的为过硫酸钾溶液。
步骤S1中，4-氰基苯乙烯的用量为40-60mg；去离子水的用量为7-10mL，室温下搅拌时间为20-40分钟，过硫酸钾溶液浓度为8-12mg/mL，用量为0.5-1.5mL，加入过硫酸钾溶液后反应时间文1-2h。
进一步地，步骤S2.1中，所述标准菌液中的细菌数量通过平板计数确定。
进一步地，步骤S2.1中，混合孵育的具体方式为，先将标准菌液稀释到固定浓度，然后离心收集菌体，之后将收集的菌体与巯基苯硼酸乙醇溶液重悬于水中，重悬液于细菌活性温度下孵育10-20min，再次离心收集，得到经过4-巯基苯硼酸饱和结合的标准菌体。
进一步地，步骤S2中，所述银离子为硝酸银溶液，4-巯基苯硼酸溶液浓度为1-3mM，加入4-巯基苯硼酸溶液后孵育时间为10-20min，4-巯基苯硼酸作用后的细菌与银离子溶液作用时间为5-15min，银离子溶液浓度为2-5mM，拉曼采集条件为：1-10s曝光时间，10-40mW激光强度，1-5s采集时间。
进一步地，步骤S2.3中，所述银离子溶液浓度为1-10mM，所述细菌溶液与已知浓度的银离子溶液在室温下共孵育5-15分钟。
进一步地，步骤S2.3中银离子溶液的浓度与步骤S3.3中银离子溶液的浓度相同。
进一步地，步骤S2和S3中，拉曼检测的参数相同，拉曼采集条件为：1-10s曝光时间，10-40mW激光强度，1-5s采集时间。
进一步地，步骤S3中，采用FKC-1浮游菌采集器对空气中细菌进行收集得到待检测细菌溶液。
本发明还提出一种4-氰基苯乙烯聚合物的用途，其特征在于：用于拉曼光谱技术中检测银离子的浓度。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)所合成的纳米粒子具有强且稳定的拉曼本征信号，有利于提高拉曼定量分析的准确性，重现性。
(2)首次提出银离子可以有效增强4-氰基苯乙烯聚合物的拉曼信号这一理论，并证实了银离子浓度与聚合物拉曼信号强度在150-1500μM范围内具有良好的线性关系。
(3)本发明成功地开发了一种快速、高灵敏度且无细菌污染的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌定量检测方法，可在2h内实现细菌的有效检测，具有快速，准确，广谱等优点，满足欧盟委员会法规(EC)No 2073/2005规定的最低检测要求(500CFU/mL)。而且本方法可以有效的杀死细菌，避免细菌检测后的二次环境污染，此聚合物及所提出的方法在细菌的定量检测方面具有极大的潜在应用价值。
附图说明
图1为放置不同时间段的聚合物纳米粒子乳液的扫描电镜(SEM)图，其中，图1(A)为聚合物纳米粒子乳液放置0天的扫描电镜(SEM)图，图1(B)为聚合物纳米粒子乳液放置1周的扫描电镜(SEM)图，图1(C)为聚合物纳米粒子乳液放置2周的扫描电镜(SEM)图，图1(D)为聚合物纳米粒子乳液放置3周的扫描电镜(SEM)图。
图2为放置不同时间段的聚合物纳米粒子乳液的拉曼信号强度。
图3为聚合物拉曼强度与银离子浓度之间的线性关系图。
图4为通过聚合物检测大肠杆菌的标准曲线。
图5为通过聚合物检测金黄色葡萄球菌的标准曲线。
图6为空气中细菌检测拉曼光谱图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。
本发明提供一种基于拉曼效应的微生物浓度快速检测方法，包括以下步骤
S1：制备4-氰基苯乙烯的聚合物纳米粒子乳液；
S2：获取待检测细菌浓度与拉曼信号强度的标准曲线，具体步骤如下：
S2.1、将含有已知细菌数量的标准菌液与过量的4-巯基苯硼酸混合孵育，然后离心收集菌体，去除多余的4-巯基苯硼酸，得到与4-巯基苯硼酸饱和结合的标准菌体；
S2.2、将与4-巯基苯硼酸饱和结合的菌体稀释不同倍数，得到不同浓度的细菌溶液；
S2.3、将不同浓度的细菌溶液与已知浓度的银离子溶液共育，部分银离子通过4-巯基苯硼酸为中介与细菌结合在一起；
S2.4、将步骤S2.3中共育后的混合溶液离心，得到上层清液，将上层清液与步骤S1中得到的聚合物纳米粒子乳液混合后进行拉曼检测，得到不同浓度细菌溶液对应的拉曼强度，建立细菌浓度与拉曼强度之间的标准曲线；
S3、细菌浓度检测，具体步骤如下：
S3.1、取已知体积的待检测细菌溶液，将待检测细菌溶液与过量的4-巯基苯硼酸混合孵育，然后离心收集菌体，去除多余的4-巯基苯硼酸，得到与4-巯基苯硼酸饱和结合的待检测菌体；
S3.2、将待检测菌体重悬于已知量水中，得到待检测细菌溶液；
S3.3、将待检测细菌溶液与已知浓度的银离子溶液共育，部分银离子通过4-巯基苯硼酸为中介与细菌结合在一起；
S3.4、将步骤S3.3中共育后的混合溶液离心，得到上层清液，将上层清液与聚合物纳米粒子乳液混合后进行拉曼检测，得到拉曼强度，根据步骤S2.4建立的标准曲线即可得到步骤S3.2中细菌溶液浓度，根据已知的水量计算细菌的数量，根据细菌数量计算出步骤S3.1中所取待检测细菌溶液的浓度。
本发明首先合成了4-氰基苯乙烯聚合物，然后通过透析得到4-氰基苯乙烯的聚合物纳米粒子乳液；之后将4-巯基苯硼酸与细菌混合，利用4-巯基苯硼酸与细菌表面的多肽可较好的结合，使用过量的4-巯基苯硼酸附着结合在细菌表面(采用过量的4-巯基苯硼酸保证其在每个细菌上都均匀的附着)，之后利用4-巯基苯硼酸上的巯基能与银离子快速结合的原理，将经过4-巯基苯硼酸修饰的细菌溶液与过量已知浓度的银离子溶液混合共育，之后提取上清液与聚合物纳米粒子乳液，得到银离子增强的聚合物纳米粒子乳液，利用银离子可以有效增强4-氰基苯乙烯聚合物的拉曼信号的原理，通过拉曼检测分析得到银离子浓度与拉曼强度的对应关系，由于原始银离子浓度为已知，所以剩余的上清液中的银离子浓度与经过4-巯基苯硼酸修饰的细菌溶液的浓度也存在线性对应关系，这样就建立起了经过4-巯基苯硼酸修饰的细菌溶液的浓度与银离子增强的聚合物纳米粒子乳液的拉曼强度之间的线性关系，通过这种线性关系建立标准曲线，即可用于细菌浓度检测。
本发明提供了一种步骤S1中制备聚合物纳米粒子乳液的方法，具体步骤如下：
室温下将40-60mg氰基苯乙烯加入50mL三口圆底烧瓶中，随即加入7-10mL水，以800r/min的速度在室温下搅拌20-40分钟，开启加热的同时通入高纯度氮气，待硅油温度达到70℃时，打开回流装置，加入0.5-1.5mL浓度为10mg/mL的过硫酸钾溶液，反应1-2h后冷却至室温，使用透析袋(截留分子量为3500Da)对所得产物进行透析，透析一周左右即得最终的聚合物纳米粒子乳液。
步骤S1中4-氰基苯乙烯的用量为40-60mg；去离子水的用量为7-10mL，室温下搅拌时间为20-40分钟，过硫酸钾溶液浓度为8-12mg/mL，用量为0.5-1.5mL，加入过硫酸钾溶液后反应时间文1-2h。
需要说明的是本发引发剂并不限于过硫酸钾，可以采用过氧化物类引发剂，包括有机过氧化物和无机过氧化物引发剂，当然最优的是无极过氧化物引发剂。
为了验证聚合物的拉曼信号稳定性，分别对放置于室温下0天，1周，2周，3周以及4周等时间段的4-氰基苯乙烯的聚合物纳米粒子乳液进行拉曼光谱采集并使用场发射扫描电镜对其进行形貌表征，拉曼采集条件为：5s曝光时间，40mW激光强度，1s采集时间。如图1和图2所示，所述4-氰基苯乙烯的聚合物纳米粒子乳液的形貌和拉曼强度基本没有变化。
为了验证银离子可以有效增强4-氰基苯乙烯聚合物的拉曼信号的效果，分别配制150μM,300μM,450μM,600μM,750μM,900μM,1050μM,1200μM,1350μM和1500μM等10个不同浓度的硝酸银溶液，将100μL不同浓度的银离子溶液加入到100μL聚合物乳液中，混匀后进行拉曼信号采集，拉曼采集条件为：5s曝光时间，40mW激光强度，1s采集时间。如图3所示，可知银离子浓度与增强4-氰基苯乙烯聚合物的拉曼信号强度成良好的线性关系，拟合后线性回归决定系数R2高达0.9831。由于4-巯基苯硼酸上能与银离子结合的巯基数量是恒定的，因此，4-巯基苯硼酸与其最大结合银离子的量是固定比例，同时细菌数量与其能最大程度结合4-巯基苯硼酸量也是固定比例，所以，细菌数量(或者浓度)与拉曼强度也是线性关系。
作为优选实施例，本发明采用的银离子溶液为硝酸银溶液，硝酸银溶液的浓度为0-2mM。
实施例1：以大肠杆菌为例，本发明步骤S2中获取标准曲线方式如下：
根据平板计数结果，先将大肠杆菌菌液稀释至1×108CFU/mL，然后以4000r/min的转速离心10min收集菌体，加入1mL用乙醇配制1mM的4-巯基苯硼酸溶液进行重悬，重悬液于37℃孵育15min，再以4000r/min的转速离心10min，收集经过4-巯基苯硼酸修饰的大肠杆菌菌体，去除多余的4-巯基苯硼酸。
之后将经过4-巯基苯硼酸修饰的大肠杆菌细胞重悬于去离子水中，分别稀释至1×108CFU/mL、1×107CFU/mL、1×106CFU/mL、1×105CFU/mL、1×104CFU/mL、1×103CFU/mL、1×102CFU/mL和1×101CFU/mL，得到经过4-巯基苯硼酸修饰不同浓度的大肠杆菌标准溶液。将500μl不同浓度的大肠杆菌标准溶液与500μl浓度为4mM的银离子溶液进行混合并在室温下共孵育10分钟，然后以4000r/min的转速离心10min，得到上清液。
之后，取100μl的上述离心后的上清液与100μl 4-氰基苯乙烯聚合物混合并进行拉曼光谱采集，拉曼采集条件为：5s曝光时间，40mW激光强度，1s采集时间。得到不同浓度的大肠杆菌标准溶液对应的拉曼强度，将采集的拉曼强度和大肠杆菌标准溶液浓度绘制在一个坐标系内，进行线性拟合，建立细菌浓度与拉曼强度之间的标准曲线。大肠杆菌检测标准曲线如图4所示，按照相同方法得到金黄色葡萄球菌的检测标准曲线如图5所示，当然如果是检测空气中混合状态细菌，需要标定混合状态细菌的标准曲线(先采集部分空气中浮游菌，采用平板计数确定细菌浓度，然后再做标准曲线)，除了配置标准浓度细菌溶液以外，标准曲线标定阶段和检测阶段的各项参数均相同。
同时将银离子作用后的以及未与银离子作用的细菌溶液进行涂布并在37℃下培养24h，验证银离子的杀菌作用，如图6所示，可知与银离子作用后，细菌全部被杀死。
本发明S3中，细菌浓度检测方式如下：
取1mL收集到的未知大肠杆菌菌液以4000r/min的转速离心10min收集菌体，加入1mL用乙醇配制1mM的4-巯基苯硼酸溶液进行重悬，重悬液于37℃孵育15min，再以4000r/min的转速离心10min，去除多余的4-巯基苯硼酸，得到经过4-巯基苯硼酸修饰的大肠杆菌菌体。
之后将经过4-巯基苯硼酸修饰的大肠杆菌细胞重悬于已知量去离子水中，将500μl经过4-巯基苯硼酸处理后的大肠杆菌水溶液与500μl浓度为4mM的银离子溶液进行混合并在室温下共孵育10分钟，然后以4000r/min的转速离心10min，得到上清液。
最后，取100μl的上述离心后的上清液与100μl 4-氰基苯乙烯聚合物混合并进行拉曼光谱采集，拉曼采集条件为：5s曝光时间，40mW激光强度，1s采集时间。将采集到的拉曼强度在标准曲线中寻找对应的细菌浓度，即为收集到的未知大肠杆菌菌液的细菌浓度。
需要说明的是，本发明为了保证测量准确性，无论是标准曲线确定阶段还是检测阶段，拉曼参数均相同，拉曼采集条件为：1-10s曝光时间，10-40mW激光强度，1-5s采集时间；并不限于上述实施例中参数。
对照例：本发明还可以在检测时，取100μl相同的未知大肠杆菌菌液(未经任何处理)，进行涂布并在37℃下培养24h，按照平板计数法进行检测，得到的结果如表1所示，可知，本发明检测结构准确度与平板计数法相比差不多，但是可以大大节省时间。
本发明还提供一种对空气中细菌的采集方法，具体，采用FKC-1浮游菌采集器对空气中细菌进行收集，首先配制LB(Luria-Bertani)培养基，在直径为90mm的培养皿中加入5mL配置好的培养基，设置浮游菌采集器收集参数为4000L，进行空气中收集。
需要说明的是，培养皿直径为70-100mm，加入培养基的量为3-6mL。
表1实施例1与对照例平板计数法检测结果对照表
以上实施方式仅用于说明本发明，而非对本发明的限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行各种组合、修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种基于拉曼效应的微生物浓度快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：制备4-氰基苯乙烯的聚合物纳米粒子乳液；
S2：获取待检测细菌浓度与拉曼信号强度的标准曲线，具体步骤如下：
S2.1、将含有已知细菌数量的标准菌液与过量的4-巯基苯硼酸混合孵育，然后离心收集菌体，去除多余的4-巯基苯硼酸，得到与4-巯基苯硼酸饱和结合的标准菌体；
S2.2、将与4-巯基苯硼酸饱和结合的菌体稀释不同倍数，得到不同浓度的细菌溶液；
S2.3、将不同浓度的细菌溶液与已知浓度的银离子溶液共育，部分银离子通过4-巯基苯硼酸为中介与细菌结合在一起；
S2.4、将步骤S2.3中共育后的混合溶液离心，得到上层清液，将上层清液与步骤S1中得到的聚合物纳米粒子乳液混合后进行拉曼检测，得到不同浓度细菌溶液对应的拉曼强度，建立细菌浓度与拉曼强度之间的标准曲线；
S3、细菌浓度检测，具体步骤如下：
S3.1、取已知体积的待检测细菌溶液，将待检测细菌溶液与过量的4-巯基苯硼酸混合孵育，然后离心收集菌体，去除多余的4-巯基苯硼酸，得到与4-巯基苯硼酸饱和结合的待检测菌体；
S3.2、将待检测菌体重悬于已知量水中，得到待检测细菌溶液；
S3.3、将待检测细菌溶液与已知浓度的银离子溶液共育，部分银离子通过4-巯基苯硼酸为中介与细菌结合在一起；
S3.4、将步骤S3.3中共育后的混合溶液离心，得到上层清液，将上层清液与聚合物纳米粒子乳液混合后进行拉曼检测，得到拉曼强度，根据步骤S2.4建立的标准曲线即可得到步骤S3.2中细菌溶液浓度，根据已知的水量计算细菌的数量，根据细菌数量计算出步骤S3.1中所取待检测细菌溶液的浓度。
2.根据权利要求1所述的微生物浓度快速检测方法，其特征在于；步骤S1中制备聚合物纳米粒子乳液方法为：
步骤1.1、以4-氰基苯乙烯作为单体，在惰性气体氛围和过氧化物引发剂引发下进行聚合，得到4-氰基苯乙烯聚合物；
步骤1.2、对步骤1.1得到的4-氰基苯乙烯聚合物进行透析，得到聚合物纳米粒子乳液。
3.根据权利要求2所述的微生物浓度快速检测方法，其特征在于；步骤1.1中具体方式为：将4-氰基苯乙烯加入反应容器中，然后向反应容器中加入水，在室温下搅拌20-40分钟，之后往反应容器中通入高纯度氮气，并对反应容器水浴升温至60-80℃，然后加入过硫酸钾溶液作为引发剂，反应1-2h后冷却至室温，得到4-氰基苯乙烯聚合物。
4.根据权利要求3所述的微生物浓度快速检测方法，其特征在于；步骤S1.2中，采用截留分子量为3500Da的透析袋对4-氰基苯乙烯聚合物进行透析。
5.根据权利要求1所述的微生物浓度快速检测方法，其特征在于；步骤S2.1中，所述标准菌液中的细菌数量通过平板计数确定。
6.根据权利要求1所述的微生物浓度快速检测方法，其特征在于；步骤S2.1中，混合孵育的具体方式为，先将标准菌液稀释到固定浓度，然后离心收集菌体，之后将收集的菌体与巯基苯硼酸乙醇溶液重悬于水中，重悬液于细菌活性温度下孵育10-20min，再次离心收集，得到经过4-巯基苯硼酸饱和结合的标准菌体。
7.根据权利要求6所述的微生物浓度快速检测方法，其特征在于；步骤S2.3中，所述银离子溶液浓度为1-10mM，所述细菌溶液与已知浓度的银离子溶液在室温下共孵育5-15分钟。
8.根据权利要求6所述的微生物浓度快速检测方法，其特征在于；步骤S2中银离子溶液的浓度与步骤S3中银离子溶液的浓度相同，拉曼检测的参数相同，拉曼采集条件为：1-10s曝光时间，10-40mW激光强度，1-5s采集时间。
9.根据权利要求4所述的微生物浓度快速检测方法，其特征在于；步骤S3中，采用FKC-1浮游菌采集器对空气中细菌进行收集得到待检测细菌溶液。
10.一种4-氰基苯乙烯聚合物的用途，其特征在于：用于拉曼光谱技术中检测银离子的浓度。
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