CN113620903B - 一种4-(苯并噻唑-2-基)-n-取代苯胺化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种4-(苯并噻唑-2-基)-n-取代苯胺化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了4‑(苯并噻唑‑2‑基)‑N‑取代苯胺化合物及其制备方法，所述方法为：取代4‑(苯并噻唑‑2‑基)苯胺与卤代物发生反应，生成4‑(苯并噻唑‑2‑基)‑N‑取代苯胺化合物，或者与卤代酰氯反应，再经亲核取代、还原和亲核取代反应生成系列4‑(苯并噻唑‑2‑基)‑N‑杂环烷基取代苯胺化合物。本发明还提供了所述4‑(苯并噻唑‑2‑基)‑N‑取代苯胺化合物在抗中东呼吸综合征冠状病毒(MERS‑CoV)和新冠病毒(SARS‑CoV‑2)中的应用，其在抑制冠状病毒新药发现领域具有应用前景。

Description

一种4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物及其制备方法和 应用
技术领域
本发明属于药物化学的技术领域，涉及一类4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物及其制备方法和应用。
背景技术
中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)是一种中东地区的新型人畜共患病毒病原体。由此种冠状病毒感染引起的病毒性传染疾病被称为中东呼吸综合征(Middle Eastrespiratory syndrome，MERS)。
2012年9月，在一名60岁的患有急性肺炎同时患有急性肾功能衰竭的沙特男子体内发现此种新型冠状病毒。截止到2019年5月31日，全球至少有27个国家报告了有人感染MERS-CoV，已有2442人感染该病毒，其中842人死亡，致死率高达35％。MERS病毒通过动物传染给人类，随后在人与人之间传播。感染该病毒后，可引起严重的呼吸道疾病，其症状包括发烧、咳嗽及呼吸急促，并伴有较高比率的急性肾衰竭或死亡。
目前，尚未批准任何用于预防或治疗MERS-CoV感染的特效药物或疫苗，有关抗MERS-CoV药物的许多基础和临床研究正在进行中。
MERS病毒是一种包膜单链RNA病毒，属β类冠状病毒C谱系。它主要通过刺突蛋白(S蛋白)介导进入细胞。S蛋白包括含有受体结合结构域(RBD)的S1亚基，含有融合肽(FP)、长七肽重复1结构域(HR1)和短七肽重复2结构域(HR2)的S2亚基。MER-CoV通过刺突蛋白中的RBD将病毒颗粒与宿主细胞表面上的细胞受体二肽基肽酶-4(DPP4)结合。随后，S2改变其构象并将其FP插入质膜或内体膜。HR2与HR1结合形成六螺旋束(6-HB)融合核心，使病毒和细胞膜紧密结合以进行融合，从而进入宿主细胞，进行自身的复制。从致病机理上看，MERS病毒S蛋白与细胞膜的识别结合这一过程对病毒的繁殖尤为重要，因此病毒S蛋白是抗MERS-CoV药物研发的重要靶点。
发明内容
本发明提供了一种4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物及其制备方法和用途。
本发明4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物具有如下结构通式(I)：
R1为氢、卤素、烷氧基；
R2为氢、烷基；
R3为环烷基、五元芳杂环、取代苄基、芳杂环亚甲基、n为1-3；X为O、CH2、N；当X为N时，G为氢、甲基、/>
优选地，
R1为氢、卤素、C1-C10烷氧基；
R2为氢、C1-C10烷基；
R3为环戊基、环己基、噻吩、吡咯、呋喃、
进一步优选地，
R1为氢、卤素、甲氧基；
R2为氢、甲基、乙基；
R3为环戊基、环己基、噻吩、吡咯、呋喃、
当式(I)中的R2为氢时，4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的结构如式(I-1)所示：
其中，R1、R3的定义同式(I)。
当式(I)中的R3为时，4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的结构如式(I-2)和(I-4)所示：
其中，R1、R2、n、X、G的定义同式(I)。
本发明还提出了如式(I-1)所示的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的制备方法，在溶剂中，在碱的作用下，取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺和卤代物发生亲核取代生成目标产物I-1，所述反应过程如反应式(a)所示：
其中，
R1为氢、卤素、烷氧基；
R3为环烷基、五元芳杂环、取代苄基、芳杂环亚甲基；其中，所述环烷基为环戊基、环己基；所述五元芳杂环为噻吩、吡咯、呋喃；所述取代苄基为所述芳杂环亚甲基为/>
Y为卤素。
其中，所述溶剂为DMF、乙腈等中的一种或几种；优选地，为DMF。
其中，所述碱为氢化钠、碳酸钾或叔丁醇钠、叔丁醇钾等中的一种或几种；优选地，为氢化钠、碳酸钾或叔丁醇钠。
其中，所述碱与取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺的摩尔用量之比为2:1～10:1；优选地，为5：1。
其中，所述卤代物与取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺的摩尔用量之比为1:1～2:1；优选地，为1.2：1。
其中，所述反应的温度为室温～130℃；优选地，为80℃。
其中，所述反应的时间为5～16小时；优选地，为14小时。
本发明还提出了如式(I-4)所示的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)在溶剂中，取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺与卤代酰氯发生反应，形成中间体氯代物ii。
(2)在溶剂中，在碱的作用下，中间体氯代物ii与含氮杂环发生亲核取代反应，得到酰胺产物I-2。
(3)在溶剂中，酰胺产物I-2与氢化铝锂发生还原反应，得到还原产物I-3。
(4)在溶剂中，在碱的作用下，还原产物I-3与卤代烷发生亲核取代反应，得到目标产物I-4，所述反应过程如反应式(b)所示：
R1为氢、卤素、烷氧基；
R2为氢、烷基；
n为1-3；
X为O、CH2、N；
当X为N时，G为氢、甲基、
步骤(1)中，所述溶剂优选为丙酮。
步骤(1)中，所述卤代酰氯为氯乙酰氯或氯丙酰氯等中的一种或几种；优选地，为氯乙酰氯或氯丙酰氯。
步骤(1)中，所述酰氯与4-(苯并噻唑-2-基)苯胺的摩尔用量之比为1:1～1.05:1；优选地，为1：1。
步骤(1)中，所述反应的温度为室温～70℃；优选地，为70℃。
步骤(1)中，所述反应的时间为0.2～2小时；优选地，为1小时。
步骤(2)中，所述溶剂为DMF、乙腈等中的一种或几种；优选地，为DMF。
步骤(2)中，所述碱为碳酸钾、叔丁醇钾、叔丁醇钠等中的一种或几种；优选地，为碳酸钾。
步骤(2)中，所述碱与氯代物ii的摩尔用量之比为1.8:1～2.2:1；优选地，为2：1。
步骤(2)中，所述含氮杂环与氯代物ii的摩尔用量之比为1:1～1.5:1；优选地，为1.1：1。
步骤(2)中，所述反应的温度为60℃～130℃；优选地，为80℃。
步骤(2)中，所述反应的时间为3-6小时；优选地，为4小时。
步骤(3)中，所述溶剂为无水四氢呋喃、无水1,4-二氧六环等中的一种或几种；优选地，为无水四氢呋喃。
步骤(3)中，所述氢化铝锂与酰胺产物I-2的摩尔用量之比为2:1～4:1；优选地，为4：1。
步骤(3)中，所述反应的温度为70℃。
步骤(3)中，所述反应的时间为10～16小时；优选地，为14小时。
步骤(4)中，所述溶剂为DMF、乙腈等中的一种或几种；优选地，为DMF。
步骤(4)中，所述碱为碳酸钾、叔丁醇钾、叔丁醇钠、氢化钠等中的一种或几种；优选地，为碳酸钾。
步骤(4)中，所述碱与还原产物I-3的摩尔用量之比为1.8:1～2.2:1；优选地，为2：1。
步骤(4)中，所述卤代烷与还原产物I-3的摩尔用量之比为1:1～1.5:1；优选地，为1.1：1。
步骤(4)中，所述反应的温度为室温～130℃；优选地，为130℃。
步骤(4)中，所述反应的时间为6～18小时；优选地，为14小时。
在一个具体实施方式中，所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)以取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺为原料，以氢化钠、碳酸钾或叔丁醇钠为碱，与卤代烷在DMF中发生亲核取代生成产物I-1’(其中R2为氢；R3为环烷基、五元芳杂环、取代苄基、芳杂环亚甲基)。
(2)以取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺为原料，与氯乙酰氯或氯丙酰氯在丙酮中形成氯代物中间体ii。
(3)中间体氯代物ii在DMF中以碳酸钾为碱，与含氮杂环发生亲核取代得到酰胺产物I-2’(其中R2为氢；R3为 )。
(4)酰胺产物I-2’在无水四氢呋喃中以氢化铝锂还原得到还原产物I-3’(其中R2为氢；R3为 )。
(5)还原产物I-3’在DMF中以碳酸钾为碱，与卤代烷发生亲核取代得到N-烷基化产物I-4’(其中R2为甲基、乙基；R3为 )。
本发明制备方法的反应路线，如下式(c)所示：
本发明还提供了所述式(I)、式(I-1)、式(I-4)所示的含苯并噻唑基团N-取代苯胺化合物在制备抗病毒药物中的应用。
所述式(I)、式(I-1)、式(I-4)所示的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物用于抑制病毒的生长、转移、增殖；促进病毒的凋亡。
所述病毒为MERS-CoV、SARS-CoV-2、SARS-CoV等。
本发明中，所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物以病毒S蛋白为靶点，抑制病毒进入宿主细胞，从而达到治疗效果。
本发明的有益效果在于，本发明制备的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物结构新颖，其抗病毒效果显著，尤其在抗中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)和新冠病毒(SARS-CoV-2)上效果显著，其在抑制冠状病毒新药发现领域具有应用前景，可用于发展新型抗冠状病毒药物。
具体实施方式
结合以下具体实施例，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实施方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知尝试，本发明没有特别限制内容。
实施例1：化合物Ia(R1＝H，R2＝H，R3＝环己基)的合成
将4-(苯并噻唑-2-基)苯胺(100mg，0.44mmol)溶于DMF(3mL)中，加入氢化钠(105mg，4.4mmol)和溴代环己烷(80mg，0.49mmol)，60℃下反应5h。降温至室温，加入水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，分液，无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂。所得粗品经硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝30:1)得30mg白色固体产物Ia。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(d,J＝8.8Hz,2H),7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.28(m,1H),6.62(d,J＝8.9Hz,2H),3.98(d,J＝6.5Hz,1H),3.37–3.34(m,1H),1.45–1.41(m,2H),1.81–1.76(m,2H),1.72–1.66(m,1H),1.46–1.35(m,2H),1.29–1.16(m,3H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.75,153.34,148.72,133.46,128.14,124.92,123.14,121.24,121.00,120.30,111.51,50.35,32.21,24.76,23.87.
实施例2：化合物Ib(R1＝H，R2＝H，R3＝ )的合成
将实施例1中原料溴代环己烷替换为2-(溴甲基)-6-甲氧基苯酚，参照实施例1的方法得到黄色固体化合物Ib。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,1H),8.00(d,J＝7.4Hz,1H),7.89(d,J＝8.1Hz,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,2H),7.46–7.43(m,1H),7.35–7.31(m,1H),6.88–6.84(m,2H),6.82–6.80(m,1H),6.73–6.68(m,3H),4.30(d,J＝5.9Hz,2H),3.80(s,3H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ168.00,153.86,151.61,147.29,143.82,133.68,128.60,126.17,125.51,124.26,121.82,121.70,120.04,120.02,118.62,111.93,110.39,55.78,40.78.
实施例3：化合物Ic(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例1中原料溴代环己烷替换为3-溴甲基噻吩，参照实施例1的实验方法得到白色固体化合物Ic。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(d,J＝8.1Hz,1H),7.92(d,J＝8.5Hz,2H),7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.46–7.42(m,1H),7.36–7.28(m,2H),7.21(s,1H),7.09(d,J＝4.8Hz,1H),6.70(d,J＝8.5Hz,2H),4.41(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.60,154.34,150.26,139.54,134.57,129.14,126.99,126.49,126.03,124.33,123.06,122.40,122.03,121.39,112.60,43.31.
实施例4：化合物Id(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例1中原料溴代环己烷替换为3-溴噻吩，参照实施例1的实验方法得到绿色固体化合物Id。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(d,J＝8.1Hz,1H),7.96(d,J＝8.6Hz,2H),7.86(d,J＝7.9Hz,1H),7.47–7.44(m,1H),7.36–7.30(m,2H),7.02–6.97(m,3H),6.89(s,1H),6.01(s,1H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.14,153.24,146.32,138.72,133.62,128.05,125.10,124.56,123.79,123.52,122.30,121.54,120.41,113.59,108.62.
实施例5：化合物Ie(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将4-(苯并噻唑-2-基)苯胺(1g，4.42mmol)溶于丙酮(20mL)中，缓慢滴加溶有氯乙酰氯(500mg，4.42mmol)的丙酮(10mL)溶液，回流反应2h。降温至室温，过滤得黄色固体氯代物1.5g；
将氯代物(300mg，0.99mmol)溶于DMF(4mL)中，加入哌啶(94mg，1.09mmol)和碳酸钾(276mg，1.98mmol)，60℃反应4h。加入水，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，分液，无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂。粗品经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷)，得到225mg白色固体化合物Ie。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.49(s,1H),8.08–8.04(m,3H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.7Hz,2H),7.50–7.46(m,1H),7.38–7.35(m,1H),3.10(s,2H),2.59–2.53(m,4H),1.69–1.65(m,4H),1.55–1.43(m,2H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ169.31,167.56,154.15,140.22,134.92,129.20,128.46,126.31,125.04,122.98,121.59,119.37,62.83,54.97,26.33,23.60.
实施例6：化合物If(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为哌嗪，参照实施例5的实验方法得到白色固体化合物If。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.35(s,1H),8.08–8.04(m,3H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,2H),7.50–7.46(m,1H),7.39–7.35(m,1H),3.15(s,2H),2.99–2.97(m,4H),2.65–2.57(m,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ168.66,167.47,154.15,140.04,134.92,129.36,128.48,126.33,125.06,123.01,121.59,119.41,62.68,54.79,46.33.
实施例7：化合物Ig(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为N-甲基哌嗪，参照实施例5的实验方法得到白色固体化合物Ig。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.31(s,1H),8.08–8.04(m,3H),7.89(d,J＝7.9Hz,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,2H),7.50–7.46(m,1H),7.39–7.35(m,1H),3.17(s,2H),2.71–2.65(m,4H),2.58–2.50(m,4H),2.34(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ167.55,166.43,153.13,139.03,133.91,128.36,127.45,125.29,124.04,121.98,120.55,118.38,60.88,54.21,52.43,44.95.
实施例8：化合物Ih(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料氯乙酰氯替换为氯丙酰氯，原料哌啶替换为1-(2-羟乙基)哌嗪，参照实施例5的实验方法得到淡蓝色固体化合物Ih。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.21(s,1H),8.06–8.02(m,3H),7.88(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(d,J＝8.7Hz,2H),7.50–7.44(m,1H),7.39–7.33(m,1H),3.67(t,J＝5.3Hz,2H),2.89–2.40(m,15H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ169.63,166.56,153.14,140.25,133.86,127.82,127.43,125.25,123.96,121.93,120.53,118.47,58.23,56.83,52.50,52.10,51.33,31.53.
实施例9：化合物Ii(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将化合物Ie(200mg，0.57mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，冰水浴冷却，加入氢化铝锂(75mg，2mmol)，氮气保护下回流16h。降温至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液，采用二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤、分液、无水硫酸钠干燥、过滤、除去溶剂。粗品经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100:1)，得到180mg淡黄色固体化合物Ii。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.1Hz,1H),7.91(d,J＝8.6Hz,2H),7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.28(m,1H),6.67(d,J＝8.6Hz,2H),4.93(m,1H),3.26–3.21(m,2H),2.63(t,J＝6.0Hz,2H),2.47–2.41(m,4H),1.64–1.59(m,4H),1.49–1.45(m,2H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.79,153.30,149.81,133.45,128.04,124.94,123.17,121.25,121.23,120.32,111.40,55.91,53.21,38.65,24.78,23.26.
实施例10：化合物Ij(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为吗啉，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Ij。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.1Hz,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,2H),7.84(d,J＝7.7Hz,1H),7.46–7.41(m,1H),7.33–7.29(m,1H),6.67(d,J＝8.7Hz,2H),4.76(t,J＝4.8Hz,1H),3.74(t,J＝4.6Hz,4H),3.27–3.21(m,2H),2.66(t,J＝6.2Hz,2H),2.49(t,J＝4.6Hz,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.68,153.29,149.63,133.47,128.07,124.98,123.24,121.53,121.28,120.33,111.43,65.93,55.75,52.24,38.29.
实施例11：化合物Ik(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为哌嗪，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Ik。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.98(d,J＝8.3Hz,1H),7.92(d,J＝8.2Hz,2H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.28(m,1H),6.67(d,J＝8.3Hz,2H),4.80–4.76(m,1H),3.25–3.21(m,2H),2.93–2.91(m,4H),2.66–2.63(m,2H),2.49–2.45(m,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.64,153.29,149.50,133.49,128.09,124.99,123.27,121.66,121.31,120.34,111.46,55.54,51.05,43.94,38.46.
实施例12：化合物Il(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料哌啶替换为N-甲基哌嗪，参照实施例5与实施例9的实验方法得到淡黄色固体化合物Il。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.91(d,J＝8.4Hz,2H),7.83(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.33–7.31(m,1H),6.66(d,J＝8.5Hz,2H),4.78(t,J＝4.8Hz,1H),3.24–3.20(m,2H),2.80–2.37(m,10H),2.35(s,3H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ168.75,154.32,150.69,134.49,129.10,126.03,124.28,122.46,122.30,121.39,112.45,56.14,54.87,52.32,45.75,39.59.
实施例13：化合物Im(R1＝7-F，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(7-氟苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Im。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(d,J＝8.4Hz,2H),7.77(d,J＝8.1Hz,1H),7.41–7.36(m,1H),7.05–7.01(m,1H),6.68(d,J＝8.4Hz,2H),4.82–4.80(t,J＝4.8Hz,1H),3.76–3.73(m,4H),3.25(q,J＝5.5Hz,2H),2.69–2.66(m,2H),2.51–2.49(m,4H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.65(d,J＝1.6Hz),156.23(d,J＝2.7Hz),156.06(d,J＝249.3Hz),149.93,128.24,125.81(d,J＝7.4Hz),120.84,120.40(d,J＝16.6Hz),117.05(d,J＝3.5Hz),111.42,108.76(d,J＝18.8Hz),65.92,55.69,52.23,38.21.
实施例14：化合物In(R1＝6-F，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(6-氟苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到褐色固体化合物In。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.91–7.86(m,3H),7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.18–7.14(m,1H),6.67(d,J＝8.2Hz,2H),4.78–4.76(m,1H),3.76–3.72(m,4H),3.26–3.22(m,2H),2.67(d,J＝6.2Hz,2H),2.51–2.47(m,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.42(d,J＝3.0Hz),158.93(d,J＝244.2Hz),149.91,149.66,134.41(d,J＝11.1Hz),127.95,121.99(d,J＝9.3Hz),121.24,113.35(d,J＝24.5Hz),111.44,106.64(d,J＝26.8Hz),65.91,55.74,52.24,38.28.
实施例15：化合物Io(R1＝5-F，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(5-氟苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到白色固体化合物Io。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(d,J＝8.6Hz,2H),7.74(dd,J＝8.7,5.2Hz,1H),7.65(dd,J＝9.7,2.5Hz,1H),7.09–7.04(m,1H),6.66(d,J＝8.7Hz,2H),4.80(t,J＝4.8Hz,1H),3.74–3.72(m,4H),3.23(q,J＝5.4Hz,2H),2.67–2.64(m,2H),2.49–2.47(m,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ170.15,160.82(d,J＝242.2Hz),154.23(d,J＝12.1Hz),149.84,128.78(d,J＝1.9Hz),128.09,121.16,120.85(d,J＝9.9Hz),111.61(d,J＝24.9Hz),111.39,107.46(d,J＝23.7Hz),65.90,55.68,52.21,38.20.
实施例16：化合物Ip(R1＝4-F，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(7-氟苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Ip。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.95(d,J＝8.3Hz,2H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.25–7.22(m,1H),7.16–7.11(m,1H),6.66(d,J＝8.3Hz,2H),4.81–4.77(m,1H),3.75–3.73(m,4H),3.27–3.22(m,2H),2.67(d,J＝6.0Hz,2H),2.51–2.47(m,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ168.22,154.40(d,J＝255.1Hz),149.87,142.06(d,J＝13.3Hz),136.15(d,J＝4.0Hz),128.37,123.78(d,J＝7.0Hz),121.09,116.01(d,J＝4.3Hz),111.36,110.75(d,J＝18.2Hz),65.93,55.74,52.25,38.26.
实施例17：化合物Iq(R1＝6-OCH3，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料4-(苯并噻唑-2-基)苯胺替换为4-(6-甲氧基苯并噻唑-2-基)苯胺，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Iq。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(d,J＝8.9Hz,1H),7.74(d,J＝7.8Hz,2H),7.60(s,1H),7.05(d,J＝8.9Hz,1H),6.69(d,J＝7.8Hz,2H),6.24(t,J＝5.9Hz,1H),3.82(s,3H),3.61–3.58(m,4H),3.24–3.19(m,2H),2.54–2.52(m,2H),2.44–2.41(m,4H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.51,156.67,151.10,148.25,135.07,128.25,122.23,120.34,115.05,111.83,104.87,66.14,56.92,55.63,53.37,39.65.
实施例18：化合物Ir(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料氯乙酰氯替换为氯丙酰氯，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Ir。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.91(d,J＝8.7Hz,2H),7.84(d,J＝7.7Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.28(m,1H),6.63(d,J＝8.7Hz,2H),5.28(t,J＝4.8Hz,1H),3.76(t,J＝4.6Hz,4H),3.30–3.26(m,2H),2.56–2.41(m,6H),1.86–1.79(m,2H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.75,153.29,149.96,133.44,128.09,124.95,123.18,121.23,121.18,120.32,111.13,66.07,56.61,52.73,42.04,23.98.
实施例19：化合物Is(R1＝H，R2＝H，R3＝)的合成
将实施例5中的原料氯乙酰氯替换为氯丙酰氯，原料哌啶替换为1-(2-羟乙基)哌嗪，参照实施例5与实施例9的实验方法得到黄色固体化合物Is。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.90(d,J＝8.7Hz,2H),7.84(d,J＝7.8Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.32–7.28(m,1H),6.63(d,J＝8.7Hz,2H),5.41–5.37(m,1H),3.64(t,J＝5.4Hz,2H),3.28(t,J＝6.3Hz,2H),2.71–2.39(m,12H),1.87–1.79(m,2H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.78,153.33,150.05,133.46,128.10,124.95,123.18,121.24,121.15,120.31,111.14,58.20,56.68,56.19,52.22,51.97,42.18,24.23.
实施例20：化合物It(R1＝H，R2＝CH3，R3＝)的合成
将化合物Ij(200mg，0.59mmol)溶于DMF(4mL)中，加入碳酸钾(160mg，1.18mmol)和碘甲烷(92mg，0.65mmol)，常温搅拌6h。加水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤、分液、无水硫酸钠干燥、过滤、除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到180mg白色固体产物It。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.99–7.95(m,3H),7.83(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.41(m,1H),7.31–7.27(m,1H),6.72(d,J＝8.5Hz,2H),3.71(t,J＝4.6Hz,4H),3.53(t,J＝7.3Hz,2H),3.02(s,3H),2.54(t,J＝7.3Hz,2H),2.49(t,J＝4.6Hz,4H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ167.59,153.35,149.87,133.46,127.95,124.94,123.15,121.21,120.31,120.27,110.41,65.92,54.19,53.01,48.81,37.66.
实施例21：抗MERS-CoV假病毒侵入活性筛选(假病毒-细胞水平模型)
材料：本发明所述部分化合物
1.1测试原理：以Huh7细胞作为病毒宿主细胞(易感细胞)，测试样品阻断MERS-CoV膜蛋白修饰HIV假病毒感染细胞的活性，该活性可反应样品干预MERS-CoV感染关键靶点的抗病毒活性。检测指标为假病毒基因组上报告基因活性水平。
1.3测试方法：Huh7细胞提前一天接种于96孔培养板，分别设活性板和细胞毒性板，置37℃，5％CO2培养。活性测定板和细胞毒性测定板按同样加样方式，加入不同稀释浓度的样品和MERS-CoV假病毒悬液，设病毒对照、细胞对照和样品对照。继续培养3天后，细胞毒性板采用MTT法测定细胞存活率。活性板吸去培养液后加入100μL每孔细胞裂解液，震荡裂解5分钟后，每孔再加入100μL的Luciferase反应检测液，震荡孵育5分钟后测定化学发光值。
1.4评价方法：细胞毒性(MTT法)：通过比较病毒对照、细胞对照和样品对照的OD值，计算细胞的存活率，并进一步计算样品的细胞毒作用。假病毒感染率：以细胞对照组读值为本底，将病毒对照和样品对照的化学发光值扣除本底后，计算相对病毒对照孔的相对感染率，进而计算样品对病毒感染细胞的保护活性。
本发明提供结构通式(I)化合物对MERS-CoV假病毒IC50测试以及Huh7细胞CC50测试(见表1)。
实施例22：对新冠病毒(SARS-CoV-2)病毒刺突蛋白抑制活性筛选(假病毒-细胞水平模型)
2.1材料：本发明所述部分化合物
2.2测试原理：以Huh7细胞作为病毒宿主细胞(易感细胞)，测试样品阻断SARS-CoV-2病毒的刺突蛋白(S蛋白)修饰HIV假病毒感染Huh7细胞的活性，该抑制活性可反应样品干预SARS-CoV-2病毒感染关键靶点的活性。检测指标为报告基因萤火虫荧光素酶Luciferase活性水平。
2.3测试方法：Huh7细胞提前一天铺种于96孔培养板，分别设活性测定板和细胞毒性测定板，置于37℃培养箱，5％CO2培养。活性测定板和细胞毒性测定板按同样加样方式，加入不同稀释浓度的样品和SARS-CoV-2病毒S蛋白修饰假病毒悬液，设病毒对照、细胞对照和样品对照。继续培养3天后，细胞毒性测定板采用MTT法测定细胞存活率。活性测定板吸去细胞培养液后每孔加入100μL细胞裂解液，震荡裂解5分钟后，每孔再加入100μL的Luciferase反应检测液，震荡孵育5分钟后测定化学发光值。
2.4评价方法：细胞毒性(MTT法)：通过比较病毒对照、细胞对照和样品对照的OD值，计算细胞的存活率，并进一步计算样品的细胞毒作用。假病毒感染率：以细胞对照组读值为本底，将病毒对照和样品对照的化学发光值扣除本底后，计算相对病毒对照孔的相对感染率，进而计算样品对病毒感染细胞的保护活性。
本发明提供所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物Ii、Ij、Ik、Il、Ir对MERS-CoV假病毒IC50测试以及Huh7细胞CC50测试(见表2)。
本发明提供的系列化合物对MERS-CoV抑制活性如表1所示表1
本发明的化合物对MERS-CoV表现出很好的抑制活性，其中Ik、Il化合物对MERS-CoV抑制活性IC50达到了0.01μM，表现出优异的抗MERS-CoV活性。
本发明提供的系列化合物对新冠病毒(SARS-CoV-2)抑制活性数据如表2所示。
表2
化合物 IC50:μM CC50:μM 化合物 IC50:μM CC50:μM
Ii <0.41 11.7 Ij <0.41 34.4
Ik <0.41 4.5 Il <0.41 5.2
Ir <0.41 >100
本发明的部分化合物对SARS-CoV-2也表现出优异的抑制活性。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。

Claims (9)

1.一种4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物，其特征在于，其结构如式(I)所示：
R1为氢、卤素、C1-C10烷氧基；
R2为氢、C1-C10烷基；
R3为环戊基、环己基、噻吩、吡咯、呋喃、 其中，n为2-3；X为O、CH2、N；当X为N时，G为氢、甲基、/>
2.如权利要求1所述的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物，其特征在于，R1为氢、卤素、C1-C10烷氧基；R2为氢、C1-C10烷基；R3为环戊基、环己基、噻吩、吡咯、呋喃、
3.如权利要求1所述的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物，其特征在于，R1为氢、卤素、甲氧基；R2为氢、甲基、乙基；R3为环戊基、环己基、噻吩、吡咯、呋喃、
4.如权利要求1所述的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物，其特征在于，当式(I)中所述的R2为氢时，所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的结构如式(I-1)所示：
其中，R1、R3的定义同权利要求1。
5.如权利要求1所述的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物，其特征在于，当式(I)中的R3为时，4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的结构如式(I-2)和式(I-4)所示：
其中，R1、R2、n、X、G的定义同权利要求1。
6.如权利要求4所述的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物的制备方法，其特征在于，在溶剂中，在碱的作用下，取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺和卤代物发生亲核取代生成目标产物I-1，反应过程如反应式(a)所示：
其中，
R1为氢、卤素、C1-C10烷氧基；
R3为环戊基、环己基、噻吩、吡咯、呋喃、
Y为卤素。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述溶剂为DMF、乙腈中的一种或两种；和/或，所述碱为氢化钠、碳酸钾、叔丁醇钠、叔丁醇钾中的一种或几种；和/或，所述碱与取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺的摩尔用量之比为2:1～10:1；和/或，所述卤代物与取代的4-(苯并噻唑-2-基)苯胺的摩尔用量之比为1:1～2:1；和/或，所述反应的温度为室温～130℃。
8.如权利要求1-5之任一项所述的4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于，所述病毒为MERS-COV、SARS-CoV-2、2013SARS-CoV。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述4-(苯并噻唑-2-基)-N-取代苯胺化合物用于抑制病毒的生长、转移、增殖，促进病毒的凋亡。
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