CN113616584B - 含双菌发酵产物与活性葡萄籽提取物抵御城市污染的抗炎护肤品组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种护肤品，主要包括嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物的复配混合物，复配混合物优选嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物的含量10％，葡萄籽提取物的含量0.1μg/mL。本发明还公开了所述复配混合物在制作抵御空气粉尘污染的护肤品上的用途，以及在制作同时抑制炎症因子IL‑8和TNF‑α的护肤品上的用途。所述护肤品能提高细胞的自我修复能力，消除城市尘埃导致的炎症反应，最终使皮肤免受空气粉尘污染的侵害。本发明还提供了复配组合物的制备方法：(一)嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物，发酵液离心除菌；或(二)取嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵结束后的发酵产物，添加葡萄籽提取物。

Description

含双菌发酵产物与活性葡萄籽提取物抵御城市污染的抗炎护 肤品组合物

技术领域

本发明涉及护肤品技术领域，具体涉及一种含双菌发酵产物与葡萄籽提取物抵御城市污染的抗炎护肤品组合物及其用途。

背景技术

空气中的颗粒物对皮肤的伤害很大，不仅会堵塞毛孔，使皮肤变得暗沉粗糙，还会刺激皮肤，导致皮肤敏感、泛红、干燥等不适，出现皮肤瘙痒、皮肤过敏等症状。空气污染和紫外线被认为是造成皮肤污染和头发污染的主要因素之一。全球超过80％的消费者认为皮肤会吸收空气中的污染物，巴西，墨西哥，巴基斯坦和印度的消费者对粉尘最敏感，紧接着的是俄罗斯和中国。在中国，巴基斯坦，印度，墨西哥和巴西的消费者有强烈的抗污染的诉求。因此寻找一种可以对抗空气粉尘污染的化妆品原料迫在眉睫。

生物发酵原料在皮肤护理制剂包括化妆品领域的应用越来越多，近两年酵素化妆品受到了消费者的追捧。发酵是纯生物的过程，中间没有任何化工成分的添加。发酵让活性物质更加容易溶出，通过发酵将全部活性成分提取出来，会产生新的营养素，让营养成分更加均衡，使营养成分小分子化，活性更强，可被皮肤快速吸收。植物提取物是从植物中提取出有效成分，减少了化工成分的添加，符合消费者对于“天然、健康、高效”护肤品的期待。

嗜热栖热菌(Thermus Thermophilus)是一种耐热菌，能产生热稳定性的超氧化物歧化酶(SOD)和B族维生素。超氧化物歧化酶可以将02－氧化成H202，避免生物体被氧化损伤，起到皮肤抵抗自由基侵害，延缓衰老的功效。B族维生素可以减轻皮肤炎症反应，抵抗日光的损害，促进细胞再生，B族维生素还是很多酶和辅助酶分子结构的一部分，可促进氨基酸的代谢以保持皮肤健康。

葡萄因其体内富含大量矿物质元素、多种氨基酸和蛋白质等营养物质，故此在水果界一直被冠于“水果之王”的美称，据不完全统计，全世界年产约为6500万吨，我国为200万吨，总产量的80％用于酿酒，13％作为鲜果食用，7％用于加工果汁及其它葡萄产品，其中葡萄酿酒或进行果汁加工的下脚料主要是葡萄籽，约占鲜果重量的4％～8％，近几年研究表明葡萄籽中含有大量的生物活性物质成分具有抗氧化、抗肿瘤等多种生理活性。

在众多炎症细胞因子中，起主要作用的是TNF-α、IL-8、IL-1β、IL-6等，其中与保护肌肤关系抗菌消炎最密切的主要有TNF-α和IL-8。

TNF-α(肿瘤坏死因子)是炎症反应过程中出现最早、最重要的炎性介质，能激活中性粒细胞和淋巴细胞，使血管内皮细胞通透性增加，调节其他组织代谢活性并促使其他细胞因子的合成和释放。

IL-8能刺激中性粒细胞、T淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的趋化，促进中性粒细胞脱颗粒，释放弹性蛋白酶，损伤内皮细胞，使微循环血流淤滞，组织坏死，造成器官功能损伤。

专利CN108553403B主要公开了嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵提升嗜热栖热菌活性成分的方法，同时提及了其发酵产物在温和消炎、保湿和皮肤祛黄方面的应用。但是嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物抑制肿瘤坏死因子TNF-α的效果不显著。专利CN2019109574023主要公开了葡萄籽提取物具有抗菌消炎的作用，但是并未提及其抑制何种炎症因子的表达。

发明内容

针对以上问题，本发明提供一种嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物的复配，能同时高效抑制炎症因子IL-8和TNF-α的表达，使复配组合物达到抗菌消炎，温和抗敏，修复受损细胞的效果，用于制备的化妆品，能提高细胞的自我修复能力，最终使皮肤免受空气粉尘污染的侵害。

本发明提供一种护肤品，所述护肤品包含嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物，还包含葡萄籽提取物。通过多次实验研究发现，单独的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物能够抑制炎症因子IL-8的表达，但对肿瘤坏死因子TNF-α的抑制作用不明显，单独的葡萄籽提取物能够抑制肿瘤坏死因子TNF-α的表达，但对炎症因子IL-8的抑制效果较弱。采用嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物的复配，在抑制TNF-α和IL-8的表达方面都具有明显增效作用，可用于制备帮助肌肤抵御空气粉尘污染伤害的天然、健康、高效的护肤品。

所述的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物富含氨基酸、多肽、多酚及维持肌肤营养的微量元素。

所述的葡萄籽提取物制作方法按照美国授权专利US11/890278的实施例8的提取方法，先选取没有任何杂质的葡萄籽，通过在室温下用600毫升100％乙醇提取18小时，乙醇提取物通过Whatman滤纸过滤，然后通过旋转蒸发仪去除乙醇，得到浓缩的初级提取物，初级提取物重复上述操作，再经真空干燥箱干燥，被进一步浓缩为最终提取物，研磨得到葡萄籽提取物。

进一步地，所述护肤品还包括表面活性剂、保湿剂和水中的一种或多种。

进一步地，所述护肤品中嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物的含量为1-10％。

进一步地，所述护肤品中嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物的含量为10％。

进一步地，所述护肤品中葡萄籽提取物的含量为0.01-0.1μg/mL。

进一步地，所述护肤品中葡萄籽提取物的含量为0.1μg/mL。

另一方面，本发明提供了一种混合物在制作抵御空气粉尘污染的护肤品上的用途，所述混合物包括嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物，以及葡萄籽提取物。

进一步地，关于混合物在制作抵御空气粉尘污染的护肤品上的用途，所述混合物中，嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物的含量为10％，葡萄籽提取物的含量为0.1μg/mL。

进一步，关于混合物在制作抵御空气粉尘污染的护肤品上的用途，所述混合物的制备方法包含两种：

方法(一)嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物，发酵液离心除菌。

嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵，并在发酵后期添加葡萄籽提取物，不仅可以发酵出种类更多的有益酶，还能使酶产出的数量是普通单菌种发酵数量的多倍，酶越多，对人体的催化保健功能越强，所得组合物在对抗空气污染引起的衰老和炎症方面具有明显增效。

或者是方法(二)取嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵结束后的发酵产物，添加葡萄籽提取物。

采用嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物，与葡萄籽提取物进行勾兑复配，所得的复配组合物由于其中所含活性物质之间的相互反应，在对抗空气污染引起的衰老和炎症方面也产生增效作用。

取方法(一)或方法(二)制得的混合物，添加表面活性剂、保湿剂和水中的一种或多种。

其中，酿酒酵母菌的菌种保藏号为CICC1596，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心；嗜热栖热菌菌种保藏号为BAA-163，购于美国模式菌种收集中心。

进一步地，上述两种方法中，方法(一)经过发酵产生了更多的活性物质，获得的复配组合物在制备抵御空气污染的护肤品方面效果更佳，因此优选方法(一)。

进一步地，所述方法(一)主要包括以下步骤：

(1)对酿酒酵母菌进行低温20℃-30℃、pH值为4.0-5.0的酸性条件下的一次或多次的增菌发酵，让其处于指数生长期。

(2)发酵液温度升高至55℃-70℃后，添加嗜热栖热菌，在pH值为7.0-8.5的碱性条件下进行二次发酵，培养12h后添加葡萄籽提取物，继续培养6h，发酵液离心除菌。

进一步地，所述方法(一)包括以下步骤：

步骤1：酿酒酵母菌和嗜热栖热菌种子液培养；

其中，酿酒酵母菌种子液培养方法如下：

在超净工作台上取试管斜面上的酿酒酵母菌CICC1596一环，接入装有pH为4.8±0.2的培养液的三角瓶中，200rpm，30℃培养10h，菌体处于指数生长期后作为种子液。

其中，嗜热栖热菌种子液培养方法如下：

在超净工作台上取嗜热栖热菌BAA-163冻存液接入装有pH为7.8±0.2的培养液的三角瓶中，通气量维持在5m³/h/50L，150rpm，65℃培养12h，菌体处于指数生长期后作为一级种子液。

步骤2：酿酒酵母菌的一次发酵

将酿酒酵母菌种子液转接至装pH为4.8±0.2的发酵罐中，通气量维持在5m³/h/50L，200rpm，30℃培养14h。

步骤3：添加嗜热栖热菌进行二次发酵

将一次发酵培养液温度升至65℃，立即将嗜热栖热菌增菌液转移到发酵罐中，通气量维持在5m³/h/50L，150rpm搅拌，用碱液将pH值调节到7.8±0.2，65℃培养12h，添加葡萄籽提取物继续培养6h。

其中，所述的发酵基本培养液配方为：10L培养液中含有30g蛋白胨、2g麦芽汁、3.5g无水硫酸镁、1.2g磷酸二氢钾、20g硫酸铵、0.5g无水氯化铁、2.5g氯化钠，水补足到10L。不同量的培养液按照配比进行缩小或放大。种子液按3-10％的接种量接种至培养基液。

其中，步骤3的二次发酵后，还包括进行分离纯化步骤，其中所述的分离纯化包括离心除菌步骤。

进一步地，本发明提供的护肤品的剂型，主要包括面霜、乳液、悬浮液、面膜、霜剂、膏状、凝胶、干粉、湿粉、水剂、精华或喷剂中的一种。

再一方面，本发明提供了一种混合物在制作同时抑制炎症因子IL-8和TNF-α的护肤品上的用途，所属的混合物包括嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物，以及葡萄籽提取物。

本发明所述的抵御空气粉尘污染的护肤品，除了包括嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物外，在不损本发明效果的范围内，可以根据需要而适宜配合在护肤品品、准药品领域中通常配合的各种成分，例如粉末成分、保湿剂、乳化剂、光稳定剂、增稠剂、增溶剂、金属离子掩蔽剂、色素、pH调节剂、皮肤营养剂、维生素、防腐剂、抗氧化剂、防晒剂、促渗剂、脂质体、皮肤营养组分、抗氧化助剂、香精、香料、色素等中的任意一种或几种的混合。

本发明的护肤品复配组合物相对单独的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物，和单独的葡萄籽提取物，对抑制IL-8和TNF-α的表达方面都具有显著增效作用，并完全消除了在培养的人类角质形成细胞中进行城市尘埃处理后的炎症反应。经实验验证，复配组合物具有更优于维生素C、维生素E、阿魏酸等的抗炎效果，能够有效对抗空气粉尘污染引起的衰老和炎症，可见两种活性成分具有相互促进作用，活性物质的活性含量或活性都大大提高。

本发明提供一种护肤品，主要包含嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物的复配混合物，复配混合物优选嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物的含量10％，葡萄籽提取物的含量0.1μg/mL。本发明还公开了所述复配混合物在制作抵御空气粉尘污染的护肤品上的用途，以及在制作同时抑制炎症因子IL-8和TNF-α的护肤品上的用途。本发明制得的护肤品对抑制IL-8和TNF-α的表达方面都具有显著增效作用，用于制备的化妆品，能提高细胞的自我修复能力，消除城市尘埃导致的炎症反应，最终使皮肤免受空气污染的侵害。本发明还提供了复配混合物的制备方法：(一)嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物，发酵液离心除菌；或(二)取嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵结束后的发酵产物，添加葡萄籽提取物。其中方法(一)经过发酵产生更多活性物质，获得的复配组合物在制备抵御空气污染的护肤品方面效果更佳。

附图说明

图1为实施例8中各样品组对IL-8的影响结果图

图2为实施例8中各样品组对TNF-α的影响结果图

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，需要指出的是，以下所述实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用。

实施例1嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物(每1L培养液中加入1mg葡萄籽提取物

发酵基本培养液配方为：10L培养液中含有30g蛋白胨、2g麦芽汁、3.5g无水硫酸镁、1.2g磷酸二氢钾、20g硫酸铵、0.5g无水氯化铁、2.5g氯化钠，水补足到10L。不同量的培养液按照配比进行缩小或放大。种子液按3-10％的接种量接种至培养基液。

本发明所有实施例都采用以上配比的培养基配方作为菌种发酵的培养液。当然，在实际工业生产中，可以根据不同的要求进行配比，这些配方都是培养酿酒酵母菌和/或嗜热栖热菌的普通配方。

酿酒酵母菌的菌种保藏号为CICC1596，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心；嗜热栖热菌菌种保藏号为BAA-163，购于美国模式菌种收集中心。

所述的葡萄籽提取物制作方法按照美国授权专利US11/890278的实施例8的提取方法，先选取没有任何杂质的葡萄籽，通过在室温下用600毫升100％乙醇提取18小时，乙醇提取物通过Whatman滤纸过滤，然后通过旋转蒸发仪去除乙醇，得到浓缩的初级提取物，初级提取物重复上述操作，再经真空干燥箱干燥，被进一步浓缩为最终提取物，研磨得到葡萄籽提取物。

步骤1：酿酒酵母菌和嗜热栖热菌种子液培养

酿酒酵母菌种子液培养：

(1)在超净工作台上取试管斜面上的酿酒酵母菌CICC1596一环，接入装有50ml的pH为4.8±0.2的培养液的250ml三角瓶中，200rpm，30℃培养10h，菌体处于指数生长期。

(2)将处于指数生长期的菌体50ml接种到装有1L，pH为4.8±0.2的培养液的2.5L三角瓶中，接种量为体积百分数的10％，200rpm，30℃培养10h，获得菌体处于指数生长期的1L酿酒酵母菌种子液。

嗜热栖热菌种子液培养：

在超净工作台上取嗜热栖热菌BAA-163冻存液2ml接入装有1L，pH为7.8±0.2的培养液的2.5L三角瓶中，150rpm，65℃培养12h，获得菌体处于指数生长期的1L嗜热栖热菌种子液。

步骤2：酿酒酵母菌的一次发酵

将1L酿酒酵母菌种子液转接至装有8L，pH为4.8±0.2的培养液的20L发酵罐中，通气量维持在5m³/h/50L，200rpm，30℃培养14h。

步骤3：添加嗜热栖热菌进行二次发酵

将一次发酵培养液温度升至65℃，立即将1L嗜热栖热菌种子液转移到上述发酵罐中，通气量维持在5m³/h/50L，150rpm搅拌，用碱液将pH值调节到7.8±0.2，25℃培养12h，然后添加10mg经乙醇溶解的葡萄籽提取物继续培养6h。

步骤4：分离纯化

经过二次发酵后的培养液进行离心除菌，保留上清液，得到嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物组合物，其中发酵产物和葡萄籽提取物的比例为1L∶1mg。

实施例2嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物(每1L培养液中加入0.1mg葡萄籽提取物)

本实施例的步骤1、2、4都和实施例1一致，在步骤3中，添加经乙醇溶解的葡萄籽提取物的量改为1mg。最后得到嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物组合物，其中发酵产物和葡萄籽提取物的比例为1L∶0.1mg。

实施例3嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物(每1L培养液中加入10mg葡萄籽提取物)

本实施例的步骤1、2、4都和实施例1一致，在步骤3中，添加经乙醇溶解的葡萄籽提取物的量改为100mg。最后得到嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物组合物，其中发酵产物和葡萄籽提取物的比例为1L∶10mg。

实施例4嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵(无葡萄籽提取物)

本实施例的步骤1、2、4都和实施例1一致，在步骤3中，不再添加葡萄籽提取物。最后得到嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物。

实施例5嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物中与葡萄籽提取物(每1L发酵产物中加入1mg葡萄籽提取物)

取实施例4所得的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物1L，直接加入经乙醇溶解的葡萄籽提取物1mg。

实施例6嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物中与葡萄籽提取物(每1L发酵产物中加入0.1g葡萄籽提取物)

取实施例4所得的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物1L，直接加入经乙醇溶解的葡萄籽提取物0.1g。

实施例7嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物中与葡萄籽提取物(每1L酵产物中加入10g葡萄籽提取物)

取实施例4所得的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物1L，直接加入经乙醇溶解的葡萄籽提取物10g。

实施例8水溶性城市尘埃(WS-UD)污染防护能力测试

接种：按1E4个/孔的接种密度接种正常人表皮角质形成细胞(购于美国赛默飞世尔科技公司Thermo-Fisher(Cat NO.A13401))至96孔板中，培养箱(37℃、5％CO2、95％RH)中孵育过夜。

配液：按照实验设计(表1)配置受试物工作液。

表1用于空气污染测定的测试组列表

空气粉尘刺激：根据表1实验具体设计，待96孔板中细胞铺板率达到40％～50％时，进行分组刺激，0.1mg/mL空气粉尘量被添加到每个孔中(空白对照孔不添加空气粉尘)，每组设3个复孔。培养箱(37℃、5％CO2、95％RH)中继续培养。

收集细胞上清：培养24h后，收集细胞培养上清液于EP管中，收集完后置于-80℃冰箱冷冻保存。

通过ELISA检测分析各样品组对IL-8和TNF-α的影响情况，其中各样品组对IL-8的影响结果见图1，各样品组对TNF-α的影响结果见图2。

如图1所示，在城市尘埃颗粒的刺激下，样品组2的阳性对照中IL-8的释放量已经达到了701pg/ml，与对照组相比，样品组3、4、5、6对抑制IL-8的释放都具有一定的效果，其中样品组3和4效果更佳，可见单独的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵物，单独的葡萄籽提取物都对抑制IL-8的释放具有一定的抑制效果，其中嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物效果更明显。样品组7、8、9、10和样品组11、12、13、14对抑制IL-8的释放效果明显增强，其IL-8的释放量甚至低于样品组1的空白对照，而且该样品组7、8、9、10的效果更为明显，可见不管采用嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物的方式，还是对嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物添加葡萄籽提取物的方式，对抑制IL-8的释放都具有显著增效作用，其中采用嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物的方式增效作用更为明显。另外，针对样品组7、8、9、10，明显样品组9和10对抑制IL-8的释放效果更突出，针对样品组11、12、13、14，明显样品组13和14对抑制IL-8的释放效果最突出，其中效果最好为样品组10，能够完全抑制IL-8的释放。因此最优选的复配方式为10％共生发酵产物和0.1μg/ml葡萄籽提取物，其制备方式优选为采用嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物的方式。

如图2所示，在城市尘埃颗粒的刺激下，样品组2的阳性对照中TNF-α的释放量已经达到了28pg/ml，与对照组相比，样品组3、4、5、6对抑制TNF-α的释放都具有一定的效果，其中样品组5和6效果更佳，可见单独的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵物，单独的葡萄籽提取物都对抑制TNF-α的释放具有一定的抑制效果，其中葡萄籽提取物效果更明显。样品组7、8、9、10和样品组11、12、13、14对抑制TNF-α的释放效果明显增强，其TNF-α的释放量甚至低于样品组1的空白对照，而且该样品组7、8、9、10的效果更为明显，可见不管采用嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物的方式，还是对嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物添加葡萄籽提取物的方式，对抑制TNF-α的释放都具有显著增效作用，其中采用嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物的方式增效作用更为明显。另外，针对样品组7、8、9、10，明显样品组8和10对抑制TNF-α的释放效果更突出，针对样品组11、12、13、14，明显样品组12和14对抑制IL-8的释放效果更突出，其中效果最好为样品组10，能够完全抑制TNF-α的释放。因此最优选的复配方式为10％共生发酵产物和0.1μg/ml葡萄籽提取物，其制备方式优选为采用嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物的方式。

各样品组对IL-8和TNF-α的抑制情况见表2。

表2不同活性物质组合抑制城市尘埃引起的角质形成细胞中炎症因子的释放

由表2可知，10％的嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物物对IL-8的抑制率达到88％，对于TNF-α的抑制率只能达到75％。0.1μg/mL的葡萄籽提取物对TNF-α的抑制率可达86％，对于IL-8的抑制率却只能达到35％。但是嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物和葡萄籽提取物进行复配后，所得发酵产物能同时对IL-8和TNF-α起到很好的抑制效果，尤其是采用10％共生发酵产物和0.1μg/ml葡萄籽提取物时，抑制效果增效更为明显，同时当复配物的制备方法为嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物时增效作用最佳。实验结果说明嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵发酵物和葡萄籽提取物的复配能够显著抑制炎症因子IL-8和TNF-α的分泌，从而说明嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵物和葡萄籽提取物复配后具有明显的抵御空气污染的增效功效。每一个系列的样品组都经过了多次重复试验，对实验数据进行方差分析，其中P值小于0.05为达到极显著差异，发现不少样品组之间都达到极显著差异，如样品组7、8、9、10对TNF-α的抑制率达到极显著差异，样品组11、12、13、14对TNF-α的抑制率达到极显著差异，说明复配物之间的不同配比对TNF-α的抑制率存在较大影响。

发明人还选择了不同浓度的阿魏酸、抗坏血酸、生育酚以及烟酰胺进行了城市尘埃挑战，发现它们即使在100μM时，对IL-8和TNF-α的抑制也没有起到一个很好的效果。其原因可能是不同的活性物或其组合可能产生不同的炎症因子保护能力，因此针对炎症因子IL-8和TNF-α的分泌，优选嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵物和葡萄籽提取物的复配物，可以明显抵御空气污染从而保护肌肤。

虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。

Claims (8)

1.一种护肤品，其特征在于，包含嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物，还包含葡萄籽提取物；所述护肤品的制备方法包括：

嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物，发酵液离心除菌；

制得的混合物，添加表面活性剂、保湿剂和水中的一种或多种；

所述酿酒酵母菌的菌种保藏号为CICC1596，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心；嗜热栖热菌菌种保藏号为BAA-163，购于美国模式菌种收集中心。

2.如权利要求1所述的护肤品，其特征在于，嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物的含量为1-10%。

3.如权利要求2所述的护肤品，其特征在于，嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物的含量为10%。

4.如权利要求1-3任一项所述的护肤品，其特征在于，葡萄籽提取物的含量为0.01-0.1μg/mL。

5.如权利要求4所述的护肤品，其特征在于，葡萄籽提取物的含量为0.1μg/mL。

6.一种混合物在制作抵御空气粉尘污染的护肤品上的用途，所述混合物包括嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物，以及葡萄籽提取物；所述混合物的制备方法包括：

嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物，发酵液离心除菌；

制得的混合物，添加表面活性剂、保湿剂和水中的一种或多种；

所述酿酒酵母菌的菌种保藏号为CICC1596，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心；嗜热栖热菌菌种保藏号为BAA-163，购于美国模式菌种收集中心。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物的含量为10%，葡萄籽提取物的含量为0.1μg/mL。

8.一种混合物在制作同时抑制炎症因子IL-8和TNF-α的护肤品上的用途，所述混合物包括嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵产物，以及葡萄籽提取物，所述混合物的制备方法包括：

嗜热栖热菌和酿酒酵母菌共生发酵后期培养液中添加葡萄籽提取物，发酵液离心除菌；

制得的混合物，添加表面活性剂、保湿剂和水中的一种或多种；

所述酿酒酵母菌的菌种保藏号为CICC1596，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心；嗜热栖热菌菌种保藏号为BAA-163，购于美国模式菌种收集中心。

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