CN113583991B - 淀粉蔗糖酶SaAS及其编码基因和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了淀粉蔗糖酶SaAS及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种淀粉蔗糖酶，命名为SaAS蛋白，是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明还保护SaAS蛋白作为淀粉蔗糖酶的应用。

Description

淀粉蔗糖酶SaAS及其编码基因和应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉淀粉蔗糖酶SaAS及其编码基因和应用。

背景技术

淀粉蔗糖酶(Amylosucrase，AS，EC 2.4.1.4)属于糖苷水解酶家族中的葡糖基转移酶。它以蔗糖为底物，能够催化α-D-葡糖从蔗糖转移到α-葡聚糖链的非还原端，同时伴随着D-果糖的释放，导致不溶性直链淀粉类α-葡聚糖的产生。与其他参与α-(1，4)葡聚糖合成的酶不同，淀粉蔗糖酶不需要任何昂贵的核苷酸激活糖，如ADP-或UDP-葡萄糖作为葡萄糖供体，因此被认为是工业合成和修饰淀粉多糖的一种有吸引力的生物催化剂。

另外，随着人们生活水平的提高，不合理的饮食导致许多慢性疾病如肥胖、糖尿病等大幅度上升，因此选择合适的饮食至关重要。淀粉是人类能量的重要来源之一，人类在摄入淀粉之后，淀粉会发生一系列的水解反应而生成葡萄糖，进而影响到人类血液葡萄糖水平和健康，通过淀粉蔗糖酶的转糖基反应可以有效提高淀粉中SDS和RS的含量，进而起到控制高血糖和心血管疾病的作用，因此获取一种具有高转糖基活性的淀粉蔗糖酶引起了越来越广泛的关注。本发明提供了新颖来源的淀粉蔗糖酶SaAS及其编码基因和应用。

发明内容

本发明的目的是提供淀粉蔗糖酶SaAS及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种淀粉蔗糖酶，命名为SaAS蛋白，氨基酸序列如序列表中序列1所示。由于氨基酸序列的特殊性，任何含有序列表中序列1所示氨基酸序列的肽蛋白的片段或其突变体，只要其与前述氨基酸序列具有99％以上同源性，且具有淀粉蔗糖酶功能，均属于本发明保护范围。具体的，所述改变包括氨基酸序列中一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加和/或替换。

SaAS蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。

优选的，所述基因的碱基序列如序列表中序列2所示，该基因序列来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，由1968个碱基组成。由于核苷酸序列的特殊性，任何序列表中序列2所示多核苷酸的变体，只要其与该多核苷酸具有90％以上同源性，均属于本发明保护范围之列。所述多核苷酸的变体是指一种具有一个或多个核苷酸改变的多核苷酸序列。此多核苷酸的变体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。

含有所述基因的重组表达载体、表达盒或重组微生物均属于本发明的保护范围。

本发明还保护SaAS蛋白作为淀粉蔗糖酶的应用。应用SaAS蛋白作为淀粉蔗糖酶时，采用的温度为20-60℃，采用的pH为3-11。应用SaAS蛋白作为淀粉蔗糖酶时，采用的温度为40℃，采用的pH为8。

本发明提供的淀粉蔗糖酶SaCA具有较高的酶活力，且反应温度宽泛，反应pH宽泛。

盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)已于2020年7月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国，武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO:M 2020375。

附图说明

图1为菌株JH的照片。

图2为菌株JH的系统发生树。

图3为SaAS蛋白溶液的电泳图。

图4为检测最适pH时的相对酶活结果。

图5为检测最适反应温度时的相对酶活结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1、盐螺旋菌JH的分离、鉴定和保藏

一、分离

样品取自内蒙古鄂尔多斯地区的一处碱湖，取碱湖样品50μL，加入碱湖滤液450μL，吹打混匀得到10^-1浓度样品，依次稀释得到10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5浓度的样品。取碱湖水样原液20μL、40μL及稀释得到的样品，涂布到LBH固体培养基中，在35℃恒温培养箱中培养3-4d后，观察生长情况。

二、鉴定

将纯化后的菌株接种至LBH固体培养基中，于30℃恒温培养3d后，记录菌株的菌落颜色、凸起情况、边缘规则性、大小及透明度等。利用透射电子显微镜和倒置荧光显微镜观察菌株的形态、大小和胞外附属物等特征。利用革兰氏染色法对菌株进行革兰氏染色处理，使用倒置荧光显微镜观察细菌的革兰氏染色情况。此外，采用穿刺接种法将菌株接种至半固体LBH培养基中，用以观察细菌的运动性和好氧性情况。

以LBH液体培养基作为基础培养基，分别添加0-10.0％浓度(以1％为增量，w/v)的NaCl，将菌株接种至上述培养基中，并于30℃下培养7d，空白对照组为不接种菌株的LBH培养基，利用分光光度计在600nm波长下检测菌体密度，从而确定菌株生长的最佳盐度；在pH3.0-11.0范围内(以1.0单位为间隔)，调节LBH液体培养基的pH值，将菌株接种至上述液体培养基中，空白对照组为不接种菌株的LBH培养基，使用分光光度计在600nm波长下检测菌体的生长密度，确定菌株生长的最适pH；将菌株接种至LBH液体培养基中，分别在4℃、10℃、15℃、20℃、25℃、28℃、30℃、37℃、40℃、45℃和50℃下培养7d，空白对照组为不接种菌株的LBH培养基，利用分光光度计在600nm波长下检测菌体的生长密度，从而确定菌株的最适温度及温度生长范围；利用Biolog GEN III鉴定板检测菌株对不同碳源的利用情况。

使用API 20NE和API 32GN试剂盒对菌株进行鉴定，如硝酸盐还原试验、亚硝酸盐还原试验、酶活特性及碳源利用试验等。菌株Salinispirillum sp.JH和参考菌株Salinispirillum marinum GCWy1^T的结果见表1。

表1

利用基因组提取试剂盒提取菌株的基因组DNA，并利用PCR技术扩增菌株的16SrDNA序列。本实验采用的PCR体系为：4μL模板DNA、1μL引物27F、1μL引物1492R、5μL 10×Taq Buffer、4μL dNTP、0.8μL Taq DNA聚合酶、34.2μL灭菌超纯水。利用琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增产物进行验证，若条带大小符合预期实验结果，则将PCR扩增产物送商业测序。如果测序结果正确，则对PCR扩增产物进行切胶回收，并利用pClone007 Simple Vector Kit克隆试剂盒克隆目的条带，再将克隆后的目的基因与质粒pMD18-T连接，最后将重组质粒转入大肠杆菌E.coli DH5α中，转化过程严格按照感受态细胞E.coli DH5α的使用操作说明进行。将测得的16S rDNA序列结果上传至https://www.ezbiocloud.net/网站进行序列对比分析，确定分离细菌的种属，并下载与菌株亲缘性较高的细菌的16S rDNA序列。通过选择合适的外群，并基于分离菌株及其相关菌株的16S rDNA基因序列，使用MEGA7.0软件构建菌株的系统发育树。使用近邻连接法(NJ)进行细菌的系统发育分析。基于1000次重复，使用Bootstrap分析确定系统发生树的拓扑结构。见图2。

以上鉴定结果表明，菌株JH属于糖螺旋菌科(Saccharospirillaceae)，盐螺旋菌属(Salinispirillum)。

三、保藏

盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)已于2020年7月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国，武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO:M 2020375。

实施例2、淀粉蔗糖酶(SaAS蛋白)的制备

经过大量序列分析、比对和功能验证，从盐螺旋菌JH中发现一个新蛋白，将其命名为SaAS蛋白，如序列表的序列1所示。将盐螺旋菌JH中编码SaAS蛋白的基因命名为SaAS基因，其编码框如序列表的序列2所示。

一、构建重组质粒

1、以盐螺旋菌JH的基因组DNA为模板，采用AS-F和AS-R组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

AS-F：5’-CGGGATCCATGAGTAAATCTGCGTC-3’；

AS-R：5’-CCCAAGCTTTCATTCGGCCAGAGG-3’。

2、取步骤1得到的PCR扩增产物，与pET-28a载体连接，得到重组质粒pET-28a-SaAS。

pET-28a载体(pET-28a Vector)：Novagen，产品目录号69864-3。

经测序，重组质粒pET-28a-SaAS中具有序列表的序列2所示的DNA分子。

二、制备重组菌

将重组质粒pET-28a-SaAS导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌甲。

将pET-28a载体导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌乙。

三、表达蛋白

1、将重组菌接种至含50μg/mL卡那霉素的液体LB培养基，37℃、150rpm振荡培养12h，得到种子液。

2、将1体积份种子液接种至99体积份含50μg/mL卡那霉素的液体LB培养基中，37℃、200rpm振荡培养至OD₆₀₀值约为0.6，此时加入IPTG诱导剂并使其在体系中的浓度为0.5mmol/L，然后25℃、200rpm振荡培养6h(诱导表达)，然后4℃、8000×g离心10min，收集菌体沉淀。

3、取步骤2得到的沉淀，用Tris-HCl缓冲液(0.05M，pH 7.5)洗涤，然后悬浮于Tris-HCl缓冲液(0.05M，pH 7.5)并进行超声破碎(超声破碎参数：功率250W，每超声3s，停3s，总时间为30min)，然后4℃、10000×g离心10min，收集上清液。

重组菌甲进行上述步骤得到的上清液，命名为粗酶液甲。

重组菌乙进行上述步骤得到的上清液，命名为粗酶液乙。

四、纯化蛋白

取步骤三得到的粗酶液甲，用孔径为0.22μm的微滤滤膜过滤，收集滤液。取滤液，采用Superdex^TM 200 10/60凝胶层析柱进行分离纯化。将Superdex^TM 200 10/60凝胶层析柱连接到快速蛋白液相系统，以PBS缓冲液(50mM，pH 8.0)作为流动相，流速为0.05mL/min。收集保留体积为14-16mL对应洗脱峰的过柱后溶液，即为SaAS蛋白溶液。SaAS蛋白溶液的电泳图见图3，仅一条蛋白带，且符合预估分子量(约74.9kDa)。

实施例3、淀粉蔗糖酶(SaAS蛋白)的酶学性质

PBS缓冲液(50mM，pH 8.0)：称取1.44g磷酸二氢钠，0.24g磷酸二氢钾，0.20g氯化钾，8.00g氯化钠，溶于800mL超纯水中，用HCl调节pH至8.0，定容至1L。

底物溶液(0.1M蔗糖)：称取34.2g蔗糖，溶于1.0L PBS缓冲液。

一、pH对淀粉蔗糖酶活性的影响

取实施例2制备的SaAS蛋白溶液，用缓冲液稀释至2倍体积，将稀释液作为供试液。

检测方法：加入供试液100μL、底物溶液900μL，反应在40℃下进行30min，然后加入100μL DNS试剂终止反应，将反应混合物煮沸5min后冷却至室温，测定OD_575nm值。

分别采用如下缓冲液：pH 3.0的柠檬酸盐缓冲液、pH 4.0的柠檬酸盐缓冲液、pH5.0的柠檬酸盐缓冲液、pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液、pH 6.0的磷酸盐缓冲液、pH 7.0的磷酸盐缓冲液、pH 8.0的磷酸盐缓冲液、pH 8.0的碳酸盐缓冲液、pH 9.0的碳酸盐缓冲液、pH10.0的碳酸盐缓冲液、pH 11.0的碳酸盐缓冲液。柠檬酸盐缓冲液的配方见表2。磷酸盐缓冲液的配方见表3。碳酸盐缓冲液的配方见表4。

表2

表3

pH	0.2M磷酸氢二钠水溶液(mL)	0.2M磷酸二氢钠水溶液(mL)
			6.0	61.5	438.5
7.0	305	195
			8.0	473.5	26.5

表4

pH	0.1M碳酸钠水溶液(mL)	0.1M碳酸氢钠水溶液(mL)
			8.0	50	450
9.0	150	350
			10.0	300	200
11.0	450	50

SaAS蛋白的最适pH为8。将最适pH对应的缓冲液时的OD_575nm值作为100％，计算采用各种缓冲液时的相对值，作为相对酶活，结果见图4。

二、温度对碳酸酐酶活性的影响

取实施例2制备的SaAS蛋白溶液，用缓冲液稀释至2倍体积，然后作为供试液。

检测方法：加入供试液100μL、底物溶液900μL，反应分别在20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃下进行30min，然后加入100μL DNS试剂终止反应，将反应混合物煮沸5min后冷却至室温，测定OD_575nm值。

最适反应温度为40℃。将最适反应温度时的OD_575nm值作为100％，计算采用各种反应温度时的相对值，作为相对酶活，结果见图5。

三、酶活力的测定

酶活(1U)定义为：在40℃和pH 8.0条件下，每分钟生成1μmol果糖所需的酶量。

检测方法：加入供试液100μL、底物溶液900μL，反应在40℃下进行30min，然后加入100μL DNS试剂终止反应，将反应混合物煮沸5min后冷却至室温，测定OD_575nm值。

采用实施例2制备的粗酶液甲作为供试液，酶活为8.7U/mL。

采用实施例2制备的粗酶液乙作为供试液，酶活为0U/mL。

采用实施例2制备的SaAS蛋白溶液作为供试液，检测单位体积供试液的酶活。检测实施例2制备的SaAS蛋白溶液中的蛋白浓度。将单位体积供试液的酶活除以单位体积供试液的蛋白含量，得到蛋白比活力，数值为105U/mg。

实施例4、淀粉蔗糖酶(SaAS蛋白)在制备熊果苷中的应用

1、实验过程

(1)取实施例2制备的SaAS蛋白溶液，用PBS缓冲液(50mM、pH 8.0)稀释至20U/L，作为供试液；

(2)反应物总体积为50mL，含有1.5M的蔗糖、30mM对苯二酚、20U/mL的SaAS蛋白溶液，采用PBS缓冲液(50mM、pH 8.0)，反应温度为40℃，搅拌速率为150rpm，反应时间为10h。

(3)反应混合物在ZorbaxSB-C18(4.6mm×150mm)柱中分析，柱温为40℃，流动相为甲醇：水(20:80，v/v)，流速为1.0mL/min，进样为10μL，紫外检测保持在283nm。

2、淀粉蔗糖酶(SaAS蛋白)在制备熊果苷中的应用

反应结束后，经HPLC分析得知，蔗糖的转化率为97.4％，这说明该酶在熊果苷的制备方面具有较大的应用潜力。

序列表

<110> 中国石油大学（华东）

<120> 淀粉蔗糖酶SaAS及其编码基因和应用

<130> 2021.6.8

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 655

<212> PRT

<213> 盐螺旋菌(Salinispirillum sp.)

<400> 1

Met Ser Lys Ser Ala Ser Pro Val Phe Thr Asp Asp Val Gln Lys Thr

1 5 10 15

Leu Ala Arg Leu Leu Pro Arg Ile Gln Pro Leu Ala Lys Ser Asp Ala

20 25 30

Glu Trp Arg Ala Phe Glu Ala Asn Leu Ser Leu His Phe Pro Arg Leu

35 40 45

Phe Glu Leu Leu Arg Ser Leu Tyr Gly Thr Gln Tyr Asp Phe Phe Tyr

50 55 60

His Leu Glu Gln Ile Leu Arg Thr Ala Phe Gln Ala Trp Gln Ala Arg

65 70 75 80

Ser Ala Thr Leu Lys Lys Gln Asp Lys Gln Arg Val Ala Asn Pro Asp

85 90 95

Trp Phe Arg Asp Glu Gln Met Leu Gly Ala Ala Cys Tyr Val Asp Leu

100 105 110

Phe Ala Gly Asp Leu Lys Ala Leu Gln Ala Lys Ile Pro Tyr Phe Lys

115 120 125

Glu Leu Gly Leu Thr Tyr Leu His Leu Met Pro Leu Phe Lys Ala Pro

130 135 140

Ala Glu Asp Ser Asp Gly Gly Tyr Ala Val Ser Asp Tyr Arg Gln Val

145 150 155 160

Asp Pro Ala Leu Gly Thr Met Ala Asp Leu Lys Lys Leu Ala Thr Ala

165 170 175

Leu Arg Lys Glu Gly Ile Ser Leu Val Leu Asp Phe Val Phe Asn His

180 185 190

Thr Ser Asp Glu His Ala Trp Ala Glu Gln Ala Lys Gln Gly Asn Pro

195 200 205

Glu Tyr Met Asp Tyr Tyr Phe Cys Phe Glu Asp Arg Thr Glu Val Asp

210 215 220

Glu Tyr Glu Arg Thr Leu Arg Glu Ile Phe Pro Glu Ile Arg Lys Gly

225 230 235 240

Cys Phe Thr Trp Arg Glu Asp Met Gln Arg Trp Val Trp Thr Thr Phe

245 250 255

Asn Ser Phe Gln Trp Asp Leu Asn Tyr Arg Asn Pro Ala Val Phe Asn

260 265 270

Ala Met Ala Gly Glu Leu Leu Tyr Leu Ala Asn Ala Gly Ala Asp Val

275 280 285

Leu Arg Phe Asp Ala Leu Ala Phe Val Trp Lys Glu Lys Gly Thr Ser

290 295 300

Cys Glu Asn Leu Pro Lys Ala His Thr Val Ile Gln Ala Phe Asn Ala

305 310 315 320

Met Ala Ala Ile Ala Ala Pro Gly Leu Leu Phe Lys Ser Glu Ala Ile

325 330 335

Val His Pro Asp Glu Val Val Lys Tyr Ile Gly Arg Asp Glu Cys Gln

340 345 350

Leu Ser Tyr Asn Pro Leu Leu Met Ala Leu Leu Trp Asn Ser Leu Ala

355 360 365

Thr Arg Lys Thr Arg Leu Met Thr Arg Ser Leu Gln Ala Arg Phe Pro

370 375 380

Ile Asp Gly Asp Cys Ala Trp Val Asn Tyr Ile Arg Gly His Asp Asp

385 390 395 400

Ile Gly Trp Thr Phe Asp Asp Asn Ile Ala Trp Gln Leu Gly Ile Asn

405 410 415

Pro Asp His His Arg Gln Phe Leu Asn Arg Tyr Tyr Thr Gly Gln Phe

420 425 430

Glu Gly Ser Phe Ala Arg Gly Val Pro Phe Gln Glu Asn Pro Leu Asn

435 440 445

Gly Asp Cys Arg Val Ala Gly Met Leu Ala Ser Leu Val Gly Ile Glu

450 455 460

Lys Gly Leu Glu Glu Glu Asn Ser Ala Val Val Asp Met Ala Ile Arg

465 470 475 480

Arg Ile Leu Leu Met His Ala Ile Ile Phe Ser Ile Gly Gly Val Pro

485 490 495

Val Leu Tyr Met Gly Asp Glu Leu Gly Leu Leu Asn Asp Tyr Ser Tyr

500 505 510

Glu Asn Asp Pro Ser Lys Arg Tyr Asp Ser Arg Trp Val Asn Arg Val

515 520 525

Ala Val Asn Asp Glu Leu Leu Ala Gln Arg Asn Ile Pro Ser Thr Val

530 535 540

Ala Tyr Lys Val Phe Tyr Gly Leu Gln His Leu Ile Gln Arg Arg Arg

545 550 555 560

Ser Leu Pro Ile Leu Gly Arg Ala Asn Thr Glu Ile Leu Asp Ala Asp

565 570 575

Asn Val His Val Phe Ser Phe Val Arg Ile Gln Gly Asp Gln Arg Leu

580 585 590

Leu Val Leu Ala Asn Phe Ala Glu Thr Pro Gln Val Val Ser Gln Glu

595 600 605

Phe Ile Gln Gly Val Met His Ser Ala Asp Leu His Asp Val Leu Thr

610 615 620

Ser Thr Ala Val Glu Phe Ser Glu Gln Ala Ile Thr Leu Gln Ala Tyr

625 630 635 640

Glu Val Leu Trp Leu Gln Ser Gln Glu Ala Ser Pro Leu Ala Glu

645 650 655

<210> 2

<211> 1968

<212> DNA

<213> 盐螺旋菌(Salinispirillum sp.)

<400> 2

atgagtaaat ctgcgtcacc tgtcttcact gacgatgtcc aaaaaacact ggctcgatta 60

ctgccgcgca ttcagccttt agcgaagtcg gacgcagaat ggcgagcctt tgaagccaac 120

ctatcactgc actttccgcg tctgtttgaa ttgctgcgca gtctgtacgg cacccagtat 180

gatttcttct accacttgga acagattctg cgcactgctt tccaagcgtg gcaggcacgt 240

tcggccacgc tgaagaaaca ggataagcag cgcgtcgcta atcccgattg gttccgtgac 300

gagcaaatgc tgggggccgc ttgctacgta gatttgttcg ccggagacct caaagcctta 360

caggccaaga ttccgtattt caaagagctg ggcctgacct acctgcattt gatgcccttg 420

ttcaaagcgc ccgcggaaga cagtgacggc ggctatgcgg tgtcagacta ccgccaagta 480

gaccctgcat tgggcaccat ggcggacctt aaaaagctgg cgacggcctt acgcaaagaa 540

ggcatctctc tggtgctcga ctttgtgttc aatcacacct cggacgagca cgcgtgggcg 600

gagcaagcca agcagggtaa cccagagtac atggattatt atttctgctt cgaagaccgc 660

accgaggtgg atgagtacga gcgcacgctg cgcgaaatct tccctgaaat ccgcaaaggc 720

tgctttacct ggcgtgagga catgcaacgc tgggtgtgga caacgttcaa tagcttccag 780

tgggatctga attaccgcaa cccggcggtg tttaacgcca tggccggtga actgctgtat 840

ttggctaatg cgggtgccga cgtactgcgc tttgatgcct tggcgtttgt gtggaaagag 900

aagggcacct cgtgcgaaaa cctgcctaag gctcacaccg ttattcaggc cttcaatgcc 960

atggcagcca ttgctgcgcc cggcttgttg ttcaaatcgg aagccattgt ccaccccgac 1020

gaggtggtga agtacattgg ccgcgacgaa tgccagctgt cgtacaatcc tttgctaatg 1080

gcgttactct ggaacagcct ggccacgcgt aaaacccgct tgatgacacg ctcattgcag 1140

gcccgctttc ccatcgacgg agactgtgcg tgggtgaact atattcgcgg ccacgacgac 1200

atcggctgga cgtttgacga caacatcgcc tggcaactcg gcatcaatcc ggatcaccat 1260

cggcagtttc ttaaccggta ttacaccggc cagtttgaag gcagtttcgc gcgtggcgta 1320

ccttttcaag aaaatccact caatggcgat tgtcgtgtag ccggtatgtt ggcttcactg 1380

gtaggtattg aaaaagggtt agaagaagaa aattcagccg tggttgatat ggcgatacgc 1440

cgtatcctgt tgatgcatgc cattattttc agcattggtg gtgtgcctgt gctgtacatg 1500

ggcgatgagt tgggtttgtt gaatgactac agctatgaaa atgacccaag caagcgttat 1560

gacagccgct gggtaaatcg cgtggcggtg aatgatgagt tactggcgca gcgcaatatc 1620

cccagcactg tggcgtataa ggtgttttac ggcctacagc acttgattca gcggcgtcgc 1680

agtttgccga tattaggccg agccaatacc gagatactgg atgccgacaa tgtacatgta 1740

ttcagttttg tgcggataca gggtgatcag cgcttgttgg tgttggctaa ctttgctgaa 1800

accccgcaag tcgtttcaca agaattcata caaggtgtga tgcacagtgc agacctgcac 1860

gacgtgctca ccagcaccgc cgtggagttt tctgagcagg cgatcacctt gcaggcgtat 1920

gaggtgcttt ggttgcagtc gcaggaggcc agccctctgg ccgaatga 1968

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 3

cgggatccat gagtaaatct gcgtc 25

<210> 4

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 4

cccaagcttt cattcggcca gagg 24

Claims (5)

1.一种淀粉蔗糖酶基因编码的蛋白质，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种编码权利要求1所述蛋白质的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒或重组微生物。

5.权利要求1所述蛋白质作为淀粉蔗糖酶的应用。

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