CN113577387A - 一种复合prp和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用 - Google Patents

一种复合prp和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113577387A
CN113577387A CN202110642433.7A CN202110642433A CN113577387A CN 113577387 A CN113577387 A CN 113577387A CN 202110642433 A CN202110642433 A CN 202110642433A CN 113577387 A CN113577387 A CN 113577387A
Authority
CN
China
Prior art keywords
collagen
solution
prp
temperature
heparin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110642433.7A
Other languages
English (en)
Inventor
邹杰
李鉴墨
严炎刘星
邓欣欣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kangxi Biomedical Shenzhen Co ltd
Original Assignee
Kangxi Biomedical Shenzhen Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kangxi Biomedical Shenzhen Co ltd filed Critical Kangxi Biomedical Shenzhen Co ltd
Priority to CN202110642433.7A priority Critical patent/CN113577387A/zh
Publication of CN113577387A publication Critical patent/CN113577387A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3616—Blood, e.g. platelet-rich plasma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/0005—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L33/0064—Hydrogels or hydrocolloids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/06—Use of macromolecular materials
    • A61L33/08—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/23—Carbohydrates
    • A61L2300/232—Monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, lipopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/42—Anti-thrombotic agents, anticoagulants, anti-platelet agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
    • A61L2400/06—Flowable or injectable implant compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/34—Materials or treatment for tissue regeneration for soft tissue reconstruction

Abstract

本发明涉及一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用，在4‑25℃下，使用前30min中内通过如下步骤制得：首先选择胶原蛋白，并利用酸溶液对其进行溶解，之后利用碱溶液调节pH值，并稀释制得一定浓度的胶原蛋白溶液；然后使用经过肝素或肝素类多糖溶液浸润过的取血容器抽取自体血液来制得PRP；最后将制得的胶原蛋白溶液、PRP和一定浓度的肝素或肝素类多糖溶液混合制得使用前成液态的水凝胶，并公开了该水凝胶的应用。该发明的水凝胶具有温度敏感的特点，温度变化形成熵驱动过程，使得胶原蛋白分子自组装成胶原纤维而形成凝胶，其能促进细胞增殖、分化，从而加快受损组织的修复，制备简单方便，也便于使用。

Description

一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用
技术领域
本发明涉及医疗材料领域，尤其是一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用。
背景技术
胶原蛋白是动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％～30％，某些生物体甚至高达80％以上。一般是白色、透明的粉状物，分子呈细长的棒状，相对分子质量从约2kD至300kD不等。胶原蛋白具有很强的延伸力，具有良好的保水性和乳化性。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。
富血小板血浆(PRP)是将动物或人的全血经过离心后得到的富含高浓度血小板的血浆。PRP中的血小板被激活后释放大量的生长因子如血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、表皮生长因子(EGF)，血管内皮生长因子(VEGF)等。除了释放生长因子外，激活的血小板还释放活性小分子包括儿茶酚胺、组胺、血清素、ADP、ATP、钙离子和多巴胺.这些释放是活性物质激活血管收缩，增加毛细血管通透性，吸引和激活巨噬细胞，组织塑形和再生。在组织受损后出血形成的血凝块后10分钟血小板开始释放这些活性分子，有超过95％的生长因子在1小时内释放。血小板有调节创伤修复以及肿瘤转移的平衡作用。在创伤修复领域，血小板释放的纤维蛋白、粘连蛋白、SDF-1等因子在促进细胞增殖、调节干细胞向创伤组织迁移等作用。
于是出现了将胶原蛋白和PRP复合形成凝胶的应用，在现有的复合方法中均是利用外加物质如促凝剂或凝血酶来刺激血小板聚集，从而形成纤维蛋白并沉淀、连接形成凝胶。由于外源性凝血酶的作用，高凝血酶浓度使得纤维蛋白原的聚合速度远高于生理反应，不利于网罗生长因子及促进细胞迁移。同时PRP由于外源性凝血酶的参与，瞬间激活了PRP中的血小板，使得其生长因子的释放集中在加入外源性凝血酶的时点附近以及使用后愈合期的早期阶段，而后期的释放较少，生长因子的释放并不均衡及持久。
发明内容
针对现有的不足，本发明提供一种复合PRP的胶原蛋白温敏水凝胶的制备方法及应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，在4-25℃的室温下，该温敏水凝胶是高流动性的液态混合物，用于人体后形成固态水凝胶，该液态混合物在使用前30min中内通过如下步骤制得：
S1，选择胶原蛋白，并利用一定浓度的酸溶液对其进行溶解，之后利用一定浓度的碱溶液调节其pH值为6.6-9.2，并用纯水稀释制得质量浓度为0.5-3％的胶原蛋白溶液；
S2，使用经过一定质量浓度的肝素或肝素类多糖溶液浸润过的取血容器抽取自体血液来制得PRP；
S3，将前述步骤中制得的胶原蛋白溶液、PRP和一定质量浓度的肝素或肝素类多糖溶液混合均匀制得液态混合物，其中PRP与肝素或肝素类多糖溶液体积比为1000-200:1，PRP与胶原蛋白的体积比为1:20-4。
作为优选，所述步骤S2和步骤S3中肝素或肝素类多糖溶液的质量浓度均为0.2-2％。
作为优选，各所述步骤的制备过程中各溶液的温度均不超过25℃。
作为优选，所述酸溶液的浓度为0.2-2mol/L，并使得溶解后的胶原蛋白溶液的质量浓度为0.75-5％，所述酸溶液是有机羧酸或无机酸中的任意一种或两种。
作为优选，所述碱溶液是浓度为0.1-5mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液，调节pH值是将碱溶液缓慢滴加到胶原蛋白溶液中的。
作为优选，所述PRP通过Landesberg法、Petrungaro法、Aghaloo法中的任意一种方法制得。
一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶的应用，将权利要求1至8中任意一项所制得的胶原蛋白温敏水凝胶通过注射器注射到体内用于人体受损组织的修复或美容填充。
作为优选，所述胶原蛋白温敏水凝胶是在制成后30min内使用。
本发明的有益效果在于：该发明利用肝素的抗凝血作用，以及肝素的多糖分子链上所具有的大量的负电荷基团，使得其能结合多种蛋白质,包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)、骨形态形成蛋白(BMP2、BMP7)、炎症趋化因子类、白细胞介素类等，而肝素与生长因子的结合就能够更好的保护生长因子在酸性、碱性、重金属、非糖基化酶等条件的生物活性，此时肝素与生长因子又是通过静电相互结合，就能缓慢的控制生长因子的释放，就可以使生长因子的活性在室温环境下保存时间可以达到个月,不影响释放后的生长因子的生物活性，解决了常规方法中添加外源性凝血物质而产生的问题，同时,该水凝胶中没有外源性凝血物质就确保了其具有较高的流动性，在室温下呈粘稠的液体状，就可以通过注射器注射到体内，在体温(37℃)下其就能在短时间内固化成水凝胶，形成温敏性的水凝胶，其转变过程则是熵驱动的过程，即胶原蛋白在中性溶液中，当温度升高，由于胶原分子周围的结构性水分子离解而导致水的熵增加，而胶原蛋白分子的熵降低，利用胶原蛋白分子自身来组装成胶原纤维，就可以根据其要凝胶时间来选择相应的胶原蛋白浓度即可，更便于使用。
附图说明
图1是本发明实施例中不同浓度胶原蛋白溶液制成的水凝胶在一定时间后的状态图；
图2是本发明实施例中所制成的水凝胶在不同温度下的状态图；
图3是本发明实施例中所制成的水凝胶中PDGF随时间的释放图；
图4是本发明实施例中所制成的水凝胶中TGF-β随时间的释放图；
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明实施例的目的、技术方案和优点，下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。此外，本发明中所提到的方向用语，例如，“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“内”、“外”等，仅是参考附加图示的方向，使用的方向用语是为了更好、更清楚地说明及理解本发明，而不是指示或暗指本发明必须具有的方位，因此不能理解为对本发明的限制。
本发明实施例，一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，在4-25℃的室温下，该温敏水凝胶是高流动性的液态混合物，用于人体后形成固态水凝胶，该液态混合物，即在使用前其是具有高流动性的液态，用于人体后，在体温(37℃)驱动下能在5min内形成固态水凝胶，同时在以下各步骤的制备过程中各溶液的温度均不超过25℃，就确保了水凝胶能始终处于液体状态，使用前30min中内通过如下步骤制得：
S1，选择胶原蛋白，比如胶原蛋白海绵、胶原蛋白粉末、高浓度胶原蛋白胶体等，并利用一定浓度的酸溶液对胶原蛋白进行溶解，此时酸溶液的浓度为0.2-2mol/L，并使得溶解后的胶原蛋白溶液的质量浓度为0.75-5％(W/V)，酸溶液是有机羧酸或无机酸中的任意一种或两种，如甲酸、醋酸、丙酸、盐酸，硝酸、磷酸、硫酸等，之后利用一定浓度的碱溶液调节其pH值为6.6-9.2，碱溶液是浓度为0.1-5mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液，调节pH值时是将碱溶液缓慢滴加到胶原蛋白溶液中的，调节好胶原蛋白溶液的pH值后，用纯水将其稀释，稀释至其质量浓度为0.5-3％(W/V)；这样就通过调控胶原蛋白溶液的浓度、pH值、溶液中的盐种类和温度来控制其所处的状态。
S2，使用经过一定质量浓度的肝素或肝素类多糖溶液浸润过的取血容器抽取自体血液来制得PRP；此时就抽取患者或者实验动物的自体血液2-50ml,抽取血液前，在抽取血液的注射器或者离心管中加入肝素或肝素类多糖溶液，就避免在抽血中出现凝血，如硫化肝素,低分子量肝素、类肝素磺化粘多糖(HSGAGs)等，加入的肝素或肝素类多糖溶液的质量浓度为0.2-2％，此时可以依据加入的体积与待抽取的自体血液的体积比为1:900-1200的比例来利用肝素或肝素类多糖溶液浸润取血容器，优选肝素或肝素类多糖溶液的质量浓度为1％(W/V)，加入肝素或肝素类多糖溶液的体积与抽取的血液体积比为1：1000；将抽取的血液与肝素溶液充分混合后，PRP就通过现有的成熟的制取PRP的方法来制取，比如Landesberg法、Petrungaro法、Aghaloo法中的任意一种方法来制取；
S3，将前述步骤中制得的胶原蛋白溶液、PRP和一定质量浓度的肝素或肝素类多糖溶液混合均匀制得液态混合物，加入的肝素或肝素类多糖溶液的质量浓度为0.2-2％，优选肝素或肝素类多糖溶液的质量浓度均为1％(W/V)，其中PRP与肝素或肝素类多糖溶液体积比为1000-200:1，PRP与胶原蛋白的体积比为1:20-4。
这样制成的水凝胶在4-25℃下始终成粘稠的液体状，具有较高的流动性，可以制备成各种形式和形状便于临床使用，就可以通过注射器注射到体内，在体温(37℃)下就能在5分钟内固化成水凝胶，具有温度敏感的特点。水凝胶中主要有效成分为胶原蛋白、PRP和肝素或肝素类多糖。胶原蛋白为体内细胞生长提供粘附、生长、增殖、分化的场所；PRP被激活后释放的多种细胞生长因子具有高的生物活性，能促进细胞的生长、增殖以及诱导其分化形成新的组织，完成对受损组织的快速修复；肝素或肝素类多糖，在提取PRP过程中能防止凝血和血小板的激活，形成水凝胶后与血小板释放出的生长因子通过静电方式结合，保护生长因子的生物活性，可以使生长因子的活性在室温环境下保存时间达到数个月,不影响释放后的生长因子的生物活性，解决了常规方法中添加外源性凝血物质而产生的问题，并控制生长因子从胶原蛋白凝胶中缓慢、持续的释放，达到持续促进细胞生长、增殖和诱导其分化的作用，更有利于促进损伤区的细胞增殖，分化，加快受损组织的修复。形成固态水凝胶的过程是熵驱动过程，即胶原蛋白在中性溶液中，温度升高，胶原分子周围的结构性水分子离解而导致水的熵增加，而胶原蛋白分子的熵降低，就形成胶原蛋白分子自身的移动组装而形成胶原纤维。通过调节胶原蛋白溶液浓度和使用的酸和碱的种类来改变形成凝胶时间，胶原蛋白水凝胶的力学强度和在体内的降解速度。
具体实施例如下：
实施例1
1.精确称量胶原蛋白海绵0.050g、0.075g、0.1g、0.15g和0.2g分别置于1-5号离心管中，每离心管中加入7.5ml 0.5mol/L醋酸，在4℃条件下充分搅拌，让胶原蛋白海绵充分溶解。
2.在1制备的胶原蛋白溶液中逐步缓慢滴加0.73ml 5mol/L的NaOH溶液，滴加过程中继续搅拌，并加入1.77ml纯水，测定pH值为7.2～7.4。(1-5号试管中胶原蛋白浓度分别为0.5％(W/V)、0.75％(W/V)、1.0％(W/V)、1.5％(W/V)、2.0％(W/V))。
3.将2制备的胶原蛋白溶液置于37℃水中水浴，1-5号胶原蛋白均出现胶原蛋白纤维的自组装，但是由于胶原蛋白溶液浓度不同导致其力学强度和流动性的不同，如图1中所示为经过一定时间后各胶原蛋白自组装的状况。
实施例2
1.精确称量浓度为9％的高浓度胶原蛋白胶体15.2g，加入pH＝1的磷酸21ml,加入5mol/L NaOH溶液5ml,而后加入纯水35ml最终胶原蛋白浓度约为1.8％。检测pH＝7.4。
2.将1制备的胶原蛋白溶液分别置于室温(25℃)和37℃条件下，观察胶原蛋白的成胶情况。在室温条件下，胶原蛋白不形成凝胶，保持良好的流变性，而在37℃条件下胶原蛋白在3分钟就能形成凝胶，如图2中所示为不同温度下所制成的水凝胶的状况。
实施例3
1.精确称量浓度为9％的高浓度胶原蛋白凝胶样品18g然后加入pH＝1的磷酸21ml,加入5mol/L的NaOH溶液5ml,而后加入纯水35ml最终胶原蛋白浓度约为2.1％。最后检测pH＝7.35。
2.在20ml试管中加入20μl 1％的肝素溶液，然后抽取新鲜的兔血10ml,充分混合后采用Landesberg法分离提取PRP溶液500μl。
3.在2提取的PRP中加入10ul 1％肝素溶液，然后将混合液加入到5ml的胶原蛋白溶液(1制备)中，充分混合。
4.将3混合后的溶液放入37℃水浴中，3分钟即形成固态的水凝胶。
5.将水凝胶分切成等质量的小块，然后将这些小块水凝胶放置于无菌的PBS溶液中，37℃空气浴振荡箱中缓慢振荡，在不同时间点取PBS溶液样品、记录、冰冻储存，然后补充新鲜PBS溶液至原始体积。
6.使用PDGF、TGF-β的ELISA试剂盒检测5中各时间点取样中的PDGF和TGF-β的含量，如图3和图4中所示，分别为所制成的水凝胶中PDGF、TGF-β随时间的释放图。
一种复合PRP的胶原蛋白温敏水凝胶的应用，将前述内容中所制得的胶原蛋白温敏水凝胶通过注射器注射到体内用于人体受损组织的修复或美容填充。比如：宫腔镜剥离宫腔粘连手术后的子宫内膜的修复，受损骨组织的填充修复，受损软骨组织的修复，受损肌腱、韧带的修复，皮肤损伤的修复，拔牙窝的填充，丰乳填充、丰臀填充、丰唇填充以及皮肤皱纹填充等。而在需要使用该种水凝胶时，就在胶原蛋白温敏水凝胶制成后30min内使用，确保其的流动性和生物活性。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (8)

1.一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，其特征在于：在4-25℃的室温下，该温敏水凝胶是高流动性的液态混合物，用于人体后形成固态水凝胶，该液态混合物在使用前30min中内通过如下步骤制得：
S1，选择胶原蛋白，并利用一定浓度的酸溶液对其进行溶解，之后利用一定浓度的碱溶液调节其pH值为6.6-9.2，并用纯水稀释制得质量浓度为0.5-3％的胶原蛋白溶液；
S2，使用经过一定质量浓度的肝素或肝素类多糖溶液浸润过的取血容器抽取自体血液来制得PRP；
S3，将前述步骤中制得的胶原蛋白溶液、PRP和一定质量浓度的肝素或肝素类多糖溶液混合均匀制得液态混合物，其中PRP与肝素或肝素类多糖溶液体积比为1000-200:1，PRP与胶原蛋白的体积比为1:20-4。
2.根据权利要求1所述复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，其特征在于:所述步骤S2和步骤S3中肝素或肝素类多糖溶液的质量浓度均为0.2-2％。
3.根据权利要求1所述复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，其特征在于:各所述步骤的制备过程中各溶液的温度均不超过25℃。
4.根据权利要求1所述复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，其特征在于:所述酸溶液的浓度为0.2-2mol/L，并使得溶解后的胶原蛋白溶液的质量浓度为0.75-5％，所述酸溶液是有机羧酸或无机酸中的任意一种或两种。
5.根据权利要求1所述复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，其特征在于:所述碱溶液是浓度为0.1-5mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液，调节pH值是将碱溶液缓慢滴加到胶原蛋白溶液中的。
6.根据权利要求1所述复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法，其特征在于:所述PRP通过Landesberg法、Petrungaro法、Aghaloo法中的任意一种方法制得。
7.一种复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶的应用，其特征在于:将权利要求1至6中任意一项所制得的胶原蛋白温敏水凝胶通过注射器注射到体内用于人体受损组织的修复或美容填充。
8.根据权利要求7所述复合PRP和胶原蛋白的温敏水凝胶的应用，其特征在于:所述胶原蛋白温敏水凝胶是在制成后30min内使用。
CN202110642433.7A 2021-06-09 2021-06-09 一种复合prp和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用 Pending CN113577387A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110642433.7A CN113577387A (zh) 2021-06-09 2021-06-09 一种复合prp和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110642433.7A CN113577387A (zh) 2021-06-09 2021-06-09 一种复合prp和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113577387A true CN113577387A (zh) 2021-11-02

Family

ID=78243576

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110642433.7A Pending CN113577387A (zh) 2021-06-09 2021-06-09 一种复合prp和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113577387A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115137878A (zh) * 2022-06-24 2022-10-04 成都世联康健生物科技有限公司 一种促内源性牙髓再生注剂、制法及bmp7在制备牙髓再生注剂中的应用
CN115463264A (zh) * 2022-10-26 2022-12-13 中国人民解放军空军军医大学 一种温敏互穿聚合物网络水凝胶及其制备方法和应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1228338A (zh) * 1999-02-04 1999-09-15 马昭若 促进伤口组织修复的伤口覆盖材料
CA2664866A1 (en) * 2006-09-28 2008-05-22 Children's Medical Center Coporation Methods and collagen products for tissue repair
CN102573943A (zh) * 2009-10-23 2012-07-11 世元世龙技术株式会社 通过活化富血小板血浆（prp)诱导组织再生的组合物及其制备方法
CN110051692A (zh) * 2019-04-12 2019-07-26 南京市第一医院 一种血小板定向释放生长因子的组合物及其制备方法
CN110343169A (zh) * 2019-08-12 2019-10-18 武汉轻工大学 一种改性i型胶原蛋白及改性方法和利用该改性i型胶原蛋白制备的胶原凝胶
CN111450312A (zh) * 2020-05-15 2020-07-28 赵辉 一种有效促进创面修复再生的水凝胶敷料及其制备方法和应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1228338A (zh) * 1999-02-04 1999-09-15 马昭若 促进伤口组织修复的伤口覆盖材料
CA2664866A1 (en) * 2006-09-28 2008-05-22 Children's Medical Center Coporation Methods and collagen products for tissue repair
CN102573943A (zh) * 2009-10-23 2012-07-11 世元世龙技术株式会社 通过活化富血小板血浆（prp)诱导组织再生的组合物及其制备方法
CN110051692A (zh) * 2019-04-12 2019-07-26 南京市第一医院 一种血小板定向释放生长因子的组合物及其制备方法
CN110343169A (zh) * 2019-08-12 2019-10-18 武汉轻工大学 一种改性i型胶原蛋白及改性方法和利用该改性i型胶原蛋白制备的胶原凝胶
CN111450312A (zh) * 2020-05-15 2020-07-28 赵辉 一种有效促进创面修复再生的水凝胶敷料及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIA PENG，ET AL.: "In situ hydrogel dressing loaded with heparin and basic fibroblast growth factor for accelerating wound healing in rat", 《MATERIALS SCIENCE & ENGINEERING C-MATERIALS FOR BIOLOGICAL APPLICATIONS》 *
MANYU CHEN，ET AL.: "The effect of LyPRP/collagen composite hydrogel on osteogenic differentiation of rBMSCs", 《REGENERATIVE BIOMATERIALS》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115137878A (zh) * 2022-06-24 2022-10-04 成都世联康健生物科技有限公司 一种促内源性牙髓再生注剂、制法及bmp7在制备牙髓再生注剂中的应用
CN115137878B (zh) * 2022-06-24 2023-12-19 成都世联康健生物科技有限公司 一种bmp7细胞因子在制备促内源性牙髓再生注剂中的应用
CN115463264A (zh) * 2022-10-26 2022-12-13 中国人民解放军空军军医大学 一种温敏互穿聚合物网络水凝胶及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lawson et al. Adhesion and growth of bone marrow stromal cells on modified alginate hydrogels
CN113577387A (zh) 一种复合prp和胶原蛋白的温敏水凝胶制备方法及应用
WO2014133027A1 (ja) ハイドロゲル
CN111184917B (zh) 一种负载生物活性多肽的温敏胶原基水凝胶及其制备方法
CN109432496A (zh) 一种可原位注射成型的巯基化多糖基水凝胶及其药物载体的制备方法和应用
CN109701073A (zh) 一种可注射软骨修复水凝胶及其制备方法
CN110256856A (zh) 一种具有形状记忆的可注射明胶-海藻酸钠多孔冻凝胶及其制备方法
CN108452378B (zh) 一种3d生物打印成型方法
CN107823699A (zh) 止血防粘连膜及其制备方法
JP2001505809A (ja) 組織処理用の改善されたヒドロゲル
CN108295029B (zh) 一种注射用多功能复合型水凝胶及其制备方法
US9561304B2 (en) Combination of blood and of biphasic calcium phosphate ceramic particles
CN108404207A (zh) 温敏壳聚糖水凝胶细胞因子复合支架的制备方法
WO2008032054A2 (en) Composite material comprising a tissue matrix compound and a bioactive glass
CN112370571A (zh) 治疗颌面部骨缺损的骨组织工程支架材料及其合成方法
CN110760076A (zh) 一种基于胶体颗粒-iPRF双网络结构的可注射、高强度复合水凝胶及其制备方法和应用
CN115487358B (zh) 一种用于软骨组织修复的凝胶复合支架及制备方法
JP2021507946A (ja) マンガンを含むヒドロゲル、その方法および使用
CN102618492B (zh) 干细胞体外定向诱导软骨支架材料及其制备方法
CN115192776A (zh) 制备肌腱损伤修复用强韧水凝胶的方法
CN104721881B (zh) 一种高强度可降解软骨组织工程支架及其制备方法
CN113559331A (zh) 一种高活性可注射材料及其制备方法和应用
JP2018513845A (ja) 特に高濃度コラーゲンマトリックスの形成のための、注入可能なコラーゲン懸濁液、その調製方法、及びその使用
CN115845148A (zh) 一种温敏可注射壳聚糖/丝素蛋白/水滑石复合水凝胶及其制备方法和应用
Kolan et al. Bioprinting with adipose stem cells and hydrogel modified with bioactive glass

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination