CN113564211A - 一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置及提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置及提取方法，包括机壳，机壳内部设置有下料管，下料管上方设置有真空干燥室，下料管下方设置有粉碎室，真空干燥室包括格网、插板阀、真空气泵和加热器，插板阀水平安装在机壳侧部，插板阀设置在下料管上方，格网设置在插板阀插板的上方，格网固定安装在机壳内部，真空气泵安装在机壳侧部，加热器安装在机壳侧部，粉碎室包括粉碎辊和盛料盒，粉碎辊成对设置，粉碎辊设置在下料管出料口的正下方，粉碎辊转动安装在机壳内壁上，盛料盒活动安装在机壳底部。本发明中通过设置格网，在混合液干燥时先一步处理成若干个小块，相较于整个大块物体直接破碎，小方块更方便上料和粉碎，提高了粉碎的效率。
Description
技术领域
本发明涉及提取蜂胶总黄酮技术领域，具体涉及一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置及提取方法。
背景技术
现代药理研究显示蜂胶具有抗细菌感染、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化脂、降血糖、降血压增强免疫、促进组织再生等广泛的药理作用。研究证实蜂胶中黄酮类化合物和菇烯类物质是蜂胶发挥广泛药理学作用的主要物质基础。蜂胶中的主要黄酮有黄烷酮、黄酮醇类和双氢黄酮类。黄酮类化合物是人体所必需的营养素之一,人体自身不能合成,只能从食物中摄取,目前人体黄酮摄取水平远未达到有益摄取量。黄酮类化合物能使冠状动脉、脑血管血流量增加,具有降低心肌耗氧量、抗心律失常、软化血管、降血糖、降血脂、降低血液粘稠度、抗氧化、清除体内自由基、抗衰老等作用。
由于人工合成的黄酮类化合物存在副作用大且价格昂贵等诸多缺点,而天然物质中提取的黄酮类化合物具有较好的药理作用,且毒副作用小,因此人们逐渐将注意力转向从植物中获取黄酮类化合物,蜂胶中所含黄酮类化合物的种类和数量之多是其他天然植物所不及的,现己分离出来并己鉴定结构的有多种,如槲皮素、白杨素、芦丁等,从蜂胶中提取和分离黄酮类化合物并对其新的药理学作用进行研究一直受到人们重视。
从蜂胶中提取黄酮类化合物的传统方法主要是根据相似相溶原理进行溶液或溶剂提取,常用有热水提取法、碱液提取法、丙酮提取法、醇提取法、酶解法等方法。热水提取法主要适合提取黄酮昔,但水的极性大,易把蛋白质、糖类等成分浸提出来,提取液易腐败变质,后续分离困难；
碱液提取法利用苯基色原酮为母核的多轻基化合物在碱性条件下其苯基色原酮,碳之间的一打开成查耳酮型结构溶于水而提取,但是强碱条件下加热可以破坏黄酮类化合物的母核；
丙酮提取法用于脂溶性基团占优势的黄酮类物质的提取有一定的优势。乙醇提取法利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用乙醇进行萃取可以提取黄酮类化合物,且可以起到分离昔和配基或极性配墓和非极性配基的目的，醇提取法又分为醇浸渍法、索氏抽提法、回流热提取法和醇渗流法,渗媲法提取时间过长、溶剂用量大、操作麻烦等缺点；
超临界流体萃取,是一种新型物质物理分离和纯化技术,利用超临界流体扩散系数高,流动及传递性能好,溶解能力强的特点,通过调节压力、温度以及加入适宜夹带剂等方法已广泛应用于中药挥发油、生物碱、黄酮类等多种有效成分的提取分离。亦可以解决生物大分子、热敏性和化学不稳定性物质的分离，但超临界流体萃取技术用于蜂胶黄酮的提取尚存在疑问。
因此我们需要一种新的种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置及提取方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置及提取方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一方面，本发明提供一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置，包括机壳，机壳内部设置有下料管，下料管上方设置有真空干燥室，下料管下方设置有粉碎室；
真空干燥室包括格网、插板阀、真空气泵和加热器，插板阀水平安装在机壳侧部，插板阀设置在下料管上方，格网设置在插板阀插板的上方，格网固定安装在机壳内部，真空气泵安装在机壳侧部，加热器安装在机壳侧部；
粉碎室包括粉碎辊和盛料盒，粉碎辊成对设置，粉碎辊设置在下料管出料口的正下方，粉碎辊转动安装在机壳内壁上，盛料盒活动安装在机壳底部。
在本发明的一种实施例中，机壳顶部安装有机盖，机盖下侧设置有密封圈，密封圈与机壳侧壁贴合。
在本发明的一种实施例中，下料管与机壳内壁连接处设置为斜坡。
第二方面，本发明提供一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮提取方法，具体包括以下步骤：
S1.选用优质毛胶为原料，经去杂机去杂、冷冻、粉碎后，均质混合一定量的酶解剂；
S2.混合后的原料充填在生物酶解床上，通过调节酶解温度、湿度、pH、时间等参数进行生物酶解；
S3.在提取罐中通过控制酒精度、料液比、温度、压力、时间等因素进行分级提取蜂胶中的黄酮类化合物；
S4.控制浓缩温度和真空度进行减压蒸馏，去除杂质和水分；
S5.采用吸附层析法一梯度洗脱工艺从中提纯蜂胶总黄酮。
在本发明的一种实施例中，S2中去杂提纯具体包括：蜂胶原胶检验合格粉碎8－10目，用石油醚脱腊，采用75％-85％乙醇室温浸提两次,每次47-49小时,每次加乙醇量与蜂胶即液料比为6：1。
在本发明的一种实施例中，S5中选用薄层层析用硅胶G作为层析吸附剂，石油醚一乙酸乙酯为梯度洗脱剂。
在本发明的一种实施例中，S5中梯度洗脱的极性变化顺序是由小到大，石油醚与乙酸乙酯容积比从10：0、10：1、10：2…，按比例逐渐增加洗脱液极性冲柱，直至后10：10停止，收集洗脱液备用。
在本发明的一种实施例中，S5中提纯总黄酮的方法为，使用真空离心机对蒸发浓缩洗脱液室温下析出结晶，收集结晶，反复多次结晶，合并结晶物，收集分别保存，取少量结晶物质采用高效液相色谱分析，成分相近者且黄酮含量高者合并，即为制备的蜂胶总黄酮。
综上所述，由于采用了上述技术，本发明的有益效果是：
本发明中，通过在真空干燥室中设置格网，使得混合液在干燥时成块固化，相较于凝固一大块，小块更便于后续粉碎；
通过设置粉碎辊，便于将小块的混合物粉碎成粉末；
本发明提取总黄酮的方法中，通过采用醇提酯萃法提取蜂胶总黄酮，同时利用复合酶系酶解蜂胶黄酮糖苷提高蜂胶提取物中杨梅黄酮、槲皮素、芹菜素、松属素等黄酮糖苷元的含量，提高蜂胶总黄酮，增强了蜂胶提取物的抗氧化活性，可更好地将蜂胶应用于医药、保健食品、化妆品等领域。
附图说明
图1为本发明的主视剖视结构示意图；
图2为本发明的格网俯视示意图；
图3为本发明方法所使用装置流程图。
图中：100、机壳；110、机盖；130、下料管；140、斜坡；200、真空干燥室；210、格网；220、插板阀；230、真空气泵；240、加热器；300、粉碎室；310、粉碎辊；320、盛料盒。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要理解的是，指示方位或位置关系的术语为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的设备或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据说明书具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
实施例1
请参阅图1-图3，本发明提供了一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置，包括机壳100，机壳100内部设置有下料管130，下料管130上方设置有真空干燥室200，下料管130下方设置有粉碎室300，机壳100顶部安装有机盖110，机盖110下侧设置有密封圈，密封圈与机壳100侧壁贴合，使得机盖110关闭时，机壳100形成密闭空间。
同时，为便于混合物下滑，下料管130与机壳100内壁连接处设置为斜坡140。
真空干燥室200包括格网210、插板阀220、真空气泵230和加热器240，插板阀220水平安装在机壳100侧部，插板阀220设置在下料管130上方，见图2，格网210设置在插板阀220插板的上方，格网固定安装在机壳100内部，真空气泵230安装在机壳100侧部，加热器240安装在机壳100侧部。
具体设置时，加热器240可设置为电热丝，或热风机，通过热传导对机壳110内的空气进行加热，进而对混合液干燥。
当混合液倒至格网210中，格网210与插板阀220的插板形成若干独立的小空间，经过加热器240的加热，混合液固化为若干的小方块，此时插板阀220的插板移动打开，小方块下落进入粉碎室300。相较于固化成一大块，小方块更加便于粉碎，提高了粉碎的效率。
粉碎室300包括粉碎辊310和盛料盒320，粉碎辊310成对设置，粉碎辊310设置在下料管130出料口的正下方，粉碎辊310转动安装在机壳100内壁上，机壳100侧壁还安装有转动电机，转动电机的输出端与粉碎辊310通过齿轮连接，使得两个粉碎辊310同时向内转动，进而对小方块进行挤压破碎。
为便于接料，盛料盒320活动安装在机壳100底部，盛料盒320通过滑轨与机壳100滑动连接，当混合块粉碎成粉末，将盛料盒320抽出，便于进行蜂胶总黄酮提取的后续操作。
工作原理：使用时将混合了层析吸附剂和梯度洗脱剂的蜂胶浸膏倒入格网210中，格网210和插板阀220插板形成的小空间将混合液分隔成若干份，经过真空气泵230和加热器240的真空干燥，混合液变成混合物，此时插板阀220的插板移动打开，形成小方块的混合物掉落下落，转动电机带动粉碎辊310转动，对混合物进行挤压破碎，使得混合物粉碎成粉末，粉末掉落至盛料盒320中。本装置通过设置格网210，在混合液干燥时先一步处理成若干个小块，相较于整个大块物体，小方块更方便上料和粉碎，提高了粉碎的效率。
需要说明的是：真空气泵230和加热器240的型号规格需根据该装置的实际规格等进行选型确定，具体选型计算方法采用本领域现有技术，故不再详细赘述。
真空气泵230和加热器240其供电及其原理对本领域技术人员来说是清楚的，在此不予详细说明。
一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮提取方法，包括以下具体步骤：
S1.选用优质毛胶为原料，经去杂机去杂、冷冻、粉碎后，均质混合一定量的酶解剂；
S2.混合后的原料充填在生物酶解床上，通过调节酶解温度、湿度、pH、时间等参数进行生物酶解；
S3.在提取罐中通过控制酒精度、料液比、温度、压力、时间等因素进行分级提取蜂胶中的黄酮类化合物；
S4.控制浓缩温度和真空度进行减压蒸馏，去除杂质和水分；
S5.采用吸附层析法一梯度洗脱工艺从中提纯蜂胶总黄酮。
黄酮类化合物是蜂胶的主要功效成分，具有广泛的生物学活性.黄酮糖苷在动物体内的生物利用率远远低于苷元型黄酮，黄酮苷类物质在人体内的利用率很低,抗氧化活性也是得不到保证。因此，改善黄酮的构型、提高其在血液中的吸收率是提高黄酮类产物生物利用率的重要途径。目前大多采用化学法水解黄酮糖苷，通过黄酮的醚化、酯化、酰基化等化学衍生化反应，以改变黄酮的特性，如提高脂溶性，但是这些反应程往往屏蔽了黄酮类化合物的主要功能团一酚羟基，对抗氧化作用产生不利影响，且加工中容易产生环境污染。采用生物酶解方法对蜂胶黄酮分子进行修饰，使之转化为苷元型黄酮，可大大提高蜂胶黄酮的生物效价。
蜂胶原胶检验合格粉碎8－10目，用石油醚脱腊，采用80％乙醇室温浸提两次,每次48小时,每次加乙醇量与蜂胶即液料比为6：1，合并两次浸提液抽滤，真空浓缩滤液得蜂胶乙醇浸膏，乙酸乙酯萃取蜂胶乙醇浸膏3次，绝大部分黄酮物转移至乙酸乙酯中。真空负压浓缩，回收乙酸乙酯，得到黑棕色物质为蜂胶浸膏，即蜂胶乙醇提取物。
选用薄层层析用硅胶G作为层析吸附剂，石油醚一乙酸乙酯为梯度洗脱剂。每次准确称取100g蜂胶浸膏置于500ml烧杯中，加入乙酸乙酯200ml充分溶解蜂胶浸膏，混入100g薄层层析用硅胶G，搅拌混匀，充分浸泡溶解硅胶，使用本发明的真空干燥室200调至45℃恒温真空干燥，使用粉碎室300粉碎混合物呈粉末状,用500ml石油醚溶解粉碎后的混合物备用。
另取400g薄层层析用硅胶G，加入1500ml石油醚，搅拌成匀浆，浸泡4－6小时，浸泡充分溶解。
将玻璃层析柱柱底用医用脱脂棉塞紧，加入400ml石油醚，打开柱下活塞，摇匀用石油醚溶解的硅胶G匀浆，利用漏斗直接将硅胶G匀浆缓慢倒入玻璃层析柱中。自然沉降完成后加大量石油醚将硅胶柱床压实,直至流速恒定。
采用湿法上柱,将已经溶解备用的蜂胶浸膏硅胶G混合物匀桨缓慢加入玻璃层析柱中,避免破坏层析柱中硅胶床上层硅胶面的平整。上样后,加入石油醚500ml，样品在层析柱中自然沉降后将一团脱脂棉塞至接近样品硅胶表面，以避免充柱时加入洗脱液破坏样品硅胶表面的平整性。采用石油醚一乙酸乙酯溶液梯度洗脱，梯度洗脱的极性变化顺序是由小到大，石油醚与乙酸乙酯容积比从10：0、10：1、10：2…，按比例逐渐增加洗脱液极性冲柱，直至后10：10停止，收集洗脱液备用。
前洗脱液颜色与溶剂颜色接近，真空负压旋转蒸发浓缩洗脱液，回收溶剂得到少量乳白色腊脂样物质弃去。此后每次收集洗脱液500ml，真空负压(负压为0.03－0.05MPa，水温45℃)旋转蒸发浓缩洗脱液，回收溶剂，余下物用少量加热的乙酸乙酷超声溶解，形成过饱和溶液，室温下析出结晶，收集结晶，反复多次结晶，合并结晶物，收集分别保存。取少量结晶物质采用高效液相色谱分析，成分相近者且黄酮含量高者合并，即为制备的蜂胶总黄酮。
本发明的方法制得蜂胶提取物中杨梅黄酮、槲皮素、芹菜素、松属素等黄酮苷元的含量得到提高，增强了蜂胶提取物的抗氧化活性，可更好地将蜂胶应用于医药、保健食品、化妆品等领域。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
Claims (8)
1.一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置，包括机壳(100)，其特征在于：所述机壳(100)内部设置有下料管(130)，所述下料管(130)上方设置有真空干燥室(200)，所述下料管(130)下方设置有粉碎室(300)；
所述真空干燥室(200)包括格网(210)、插板阀(220)、真空气泵(230)和加热器(240)，所述插板阀(220)水平安装在所述机壳(100)侧部，所述插板阀(220)设置在所述下料管(130)上方，所述格网(210)设置在所述插板阀(220)插板的上方，所述格网固定安装在所述机壳(100)内部，所述真空气泵(230)安装在所述机壳(100)侧部，所述加热器(240)安装在所述机壳(100)侧部；
所述粉碎室(300)包括粉碎辊(310)和盛料盒(320)，所述粉碎辊(310)成对设置，所述粉碎辊(310)设置在所述下料管(130)出料口的正下方，所述粉碎辊(310)转动安装在所述机壳(100)内壁上，所述盛料盒(320)活动安装在所述机壳(100)底部。
2.根据权利要求1所述的一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置，其特征在于：所述机壳(100)顶部安装有机盖(110)，所述机盖(110)下侧设置有密封圈，密封圈与所述机壳(100)侧壁贴合。
3.根据权利要求1所述的一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮装置，其特征在于：所述下料管(130)与所述机壳(100)内壁连接处设置为斜坡(140)。
4.一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮提取方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
S1.选用优质毛胶为原料，经去杂机去杂、冷冻、粉碎后，均质混合一定量的酶解剂；
S2.混合后的原料充填在生物酶解床上，通过调节酶解温度、湿度、pH、时间等参数进行生物酶解；
S3.在提取罐中通过控制酒精度、料液比、温度、压力、时间等因素进行分级提取蜂胶中的黄酮类化合物；
S4.控制浓缩温度和真空度进行减压蒸馏，去除杂质和水分；
S5.采用吸附层析法一梯度洗脱工艺从中提纯蜂胶总黄酮。
5.根据权利要求4所述的一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮提取方法，其特征在于，所述S2中去杂提纯具体包括：蜂胶原胶检验合格后，使用去杂机粉碎8－10目，用石油醚脱腊，采用75％-85％乙醇室温浸提两次,每次47-49小时,每次加乙醇量与蜂胶即液料比为6：1。
6.根据权利要求4所述的一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮提取方法，其特征在于，所述S5中选用薄层层析用硅胶G作为层析吸附剂，石油醚一乙酸乙酯为梯度洗脱剂。
7.根据权利要求4所述的一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮提取方法，其特征在于，所述S5中梯度洗脱的极性变化顺序是由小到大，石油醚与乙酸乙酯容积比从10：0、10：1、10：2…，按比例逐渐增加洗脱液极性冲柱，直至后10：10停止，收集洗脱液备用。
8.根据权利要求4所述的一种复合酶解法提取蜂胶总黄酮提取方法，其特征在于，所述S5中提纯总黄酮的方法为，使用真空离心机对蒸发浓缩洗脱液室温下析出结晶，收集结晶，反复多次结晶，合并结晶物，收集分别保存，取少量结晶物质采用高效液相色谱分析，成分相近者且黄酮含量高者合并，即为制备的蜂胶总黄酮。
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| CN101683360A (zh) * | 2008-09-24 | 2010-03-31 | 湖州来色生物基因工程有限公司 | 蜂胶黄酮的提取、纯化技术及其抗癌机理 |
| CN102283866A (zh) * | 2011-06-16 | 2011-12-21 | 张大辉 | 一种含高纯度黄酮类成分的蜂胶提取方法 |
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- 2021-08-24 CN CN202110974203.0A patent/CN113564211A/zh active Pending
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 熊志勇，徐惠娟编: "《全国应用型本科院校化学课程统编教材 有机化学实验 第2版》", vol. 2020, 华中科技大学出版社, pages: 49 - 50 * |
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