CN113521250A - 一种蛋白冻干粉及其注射用溶液 - Google Patents

一种蛋白冻干粉及其注射用溶液 Download PDF

Info

Publication number
CN113521250A
CN113521250A CN202110881180.9A CN202110881180A CN113521250A CN 113521250 A CN113521250 A CN 113521250A CN 202110881180 A CN202110881180 A CN 202110881180A CN 113521250 A CN113521250 A CN 113521250A
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
solution
freeze
injection
prescription
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110881180.9A
Other languages
English (en)
Inventor
陆晨阳
袁立
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanxi Jinbo Bio Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Shanxi Jinbo Bio Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanxi Jinbo Bio Pharmaceutical Co ltd filed Critical Shanxi Jinbo Bio Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN202110881180.9A priority Critical patent/CN113521250A/zh
Publication of CN113521250A publication Critical patent/CN113521250A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses

Abstract

本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种蛋白冻干粉及其注射用溶液。具体而言，该蛋白冻干粉由处方溶液经冻干工艺而制得，每1mL处方溶液中含有15mg的蛋白、35‑45mg的甘露醇、15‑25mmol/L的缓冲盐、将处方溶液的pH值调至设定值所对应的用量的pH调节剂以及余量的注射用水。基于该蛋白冻干粉可以获得溶液型制剂，例如注射剂，通过严格限制甘露醇的用量同时满足冻干赋型和注射剂渗透压的需求。

Description

一种蛋白冻干粉及其注射用溶液
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种蛋白冻干粉及其注射用溶液。更具体的是，该蛋白冻干粉用特定比例的甘露醇作为赋形剂，满足其注射剂所需的渗透压。
背景技术
本发明中的蛋白(简称EK1蛋白)为申请号为202010080751.4，发明名称为“多肽、其制备方法和用途”的专利申请所记载，是该申请的申请人在科学实验中发现的一种能够抑制新型冠状病毒(2019-nCoV)的蛋白。该蛋白稳定性较差，并且吸湿性很强，作为多肽，其理化性质比较特殊。
冻干粉为蛋白药物常规使用的形式之一，其制备方法适合大多数蛋白药物，稳定性强，易于保存，并且能够复溶制备成多种制剂。因此，选择冻干粉来保护蛋白药物，是常见的制剂学应用之一。而冻干粉复溶后，可以有多种选择，进行给药，其中注射剂较为常见。
冻干粉注射剂制备过程中需要使用到赋形剂，其需要同时满足冻干赋形和注射剂渗透压两个功能需求，所以需要选定特定赋形剂并对其用量范围进行严格限定以满足制剂需求。
发明内容
发明要解决的问题
本发明拟提供用量范围限定非常严格的甘露醇作为赋形剂用于制备EK1冻干粉注射剂，以同时满足冻干赋形和调节渗透压两个功能需求。
用于解决问题的方案
第一方面，本发明提供了一种蛋白冻干粉，其由处方溶液经冻干工艺而制得，每1mL所述处方溶液中含有15mg的蛋白、35-45mg的甘露醇、15-25mmol/L的缓冲盐、将所述处方溶液的pH值调至设定值所对应的用量的pH调节剂以及余量的注射用水。
进一步地，在上述蛋白冻干粉中，所述蛋白为EK1蛋白、EK1-Plam蛋白、EK1-chol蛋白或其衍生物，这些蛋白均记载在申请号为202010080751.4，发明名称为“多肽、其制备方法和用途”的专利申请中。
优选地，在上述蛋白冻干粉中，所述蛋白为EK1蛋白(在1mg/mL的浓度下，其碱度约为8.5，理论等电点约为4.02)。
进一步地，在上述蛋白冻干粉中，所述缓冲盐选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、枸橼酸钠中的一种或多种。
优选地，在上述蛋白冻干粉中，所述缓冲盐为磷酸二氢钠。
优选地，在上述蛋白冻干粉中，所述缓冲盐浓度为20mmol/L。
进一步地，在上述蛋白冻干粉中，所述pH调节剂为氯化氢或氢氧化钠。
优选地，在上述蛋白冻干粉中，所述pH调节剂以水溶液的形式存在，优选浓度为0.5mol/L。
进一步地，在上述蛋白冻干粉中，所述pH调节剂将所述处方溶液的pH值调至5.0-10.0。
更优选地，在上述蛋白冻干粉中，所述pH调节剂为0.5mol/L的氢氧化钠水溶液，其将所述处方溶液的pH值调至7.0-10.0。
进一步地，在上述蛋白冻干粉中，所述处方溶液通过以下方法制备：在室温常压下，称取处方量的蛋白、甘露醇和缓冲盐，加入到适量的注射用水中，缓慢搅拌至溶解，用处方量的pH调节剂调节pH值，加入处方量剩余的注射用水，混匀，滤膜过滤，得到处方溶液。
优选地，在上述处方溶液的制备方法中，所述滤膜为聚醚砜(PES)膜、聚偏三氟乙烯(PVDF)膜中的一种或多种，优选聚醚砜膜。
进一步地，在上述蛋白冻干粉中，所述冻干工艺包括如下步骤：首先，将处方溶液放置于冻干机中，降温至-45℃，预冻1h，保持5-6h；其次，在0.2-0.4mbar下，升温至-20℃，保持18-20h；再次，在0-0.1mbar下，升温至0℃；最后，升温至25℃，保持5h，得到蛋白冻干粉。
本发明的蛋白冻干粉并无专用溶剂，本领域常规使用的蛋白冻干粉溶剂均可适用。
本发明的蛋白冻干粉所使用的包装材料和/或容器情况如下：西林瓶：中硼硅玻璃管制注射剂瓶；胶塞：注射用冷冻干燥用氯化丁基橡胶塞；铝盖：抗生素瓶用铝塑组合盖。
第二方面，本发明提供了一种基于蛋白冻干粉的注射用溶液，其包括上述蛋白冻干粉和溶剂。
优选地，在上述注射用溶液中，所述溶剂与蛋白冻干粉的用量比为1mL:15mg。
第三方面，本发明提供了上述注射用溶液的制备方法，其包括如下步骤：采用溶剂对蛋白冻干粉进行复溶，形成注射用溶液。
第四方面，本发明提供了上述注射用溶液的使用方法，其包括如下步骤：将注射用溶液加入到注射器中，施用于对其有需要的个体。
发明的效果
本发明中涉及的EK1蛋白稳定性较差，并且吸湿性很强，作为多肽，其理化性质比较特殊。本发明通过筛选本领域常规的赋形剂，利用甘露醇作为EK1蛋白冻干粉的赋形剂并对其用量进行非常严格的限定，不仅满足了冻干赋形的需求，同时满足了其冻干粉注射剂的渗透压要求。
具体实施方式
以下将结合具体的实施例来进一步阐述本发明的技术方案。本发明所述EK1蛋白为申请号为202010080751.4、发明名称为“多肽、其生产方法和用途”的专利申请记载。除非另有说明，本发明中使用的仪器、试剂、材料、实验动物等均可通过常规商业手段获得。
实施例1：EK1冻干粉注射剂的处方研究
1.剂型及处方组成
1.1剂型
本品为无菌冻干粉，规格：15mg，其单位剂量产品的处方组成分别如下表：
表1.单位剂量EK1产品的处方组成
Figure BDA0003192402230000041
注：注射用水在冻干工艺过程中几乎全部去除；原料药同期申报为企业自拟标准。
1.2专用溶剂
本品无专用溶剂
1.3所使用的包装材料和容器
西林瓶：中硼硅玻璃管制注射剂瓶。
胶塞：注射用冷冻干燥用氯化丁基橡胶塞。
铝盖：抗生素瓶用铝塑组合盖。
2.赋形剂筛选
2.1选择赋形剂
甘露醇、葡萄糖、木糖醇、乳糖、山梨醇及其组合物。
需要满足特定要求：1.能够作为赋形剂，形成冻干粉末；2.能够调节渗透压，保证等渗或微高渗，以便注射。
用于筛选赋形剂的EK1蛋白冻干粉处方溶液具体情况如表2所示。
表2.筛选赋形剂用处方的具体组成
Figure BDA0003192402230000051
2.2检测项目及检测方法如表所示：
表3.蛋白冻干粉的检测项目
Figure BDA0003192402230000052
冻干粉针检测方法：
·外观：取供试品，置明亮处观察。
·水分：取本品，照水分测定法(中国药典2015年版四部通则0832第一法2)测定。
·复溶时间：取本品5支，揭铝盖，用注射器注入1.0ml水，振摇，测定复溶时间。
·溶液澄清度与颜色：取本品，加水制成每1ml中约含EK1 15mg的溶液，照中国药典2015年版四部通则0902第一法与中国药典2015年版四部通则0901第一法，检测溶液澄清度与颜色。
·渗透压摩尔浓度：取本品，精密加入1ml水复溶后，依法测定(中国药典2015年版四部通则0632)毫渗透压摩尔浓度。
·有关物质/纯度：参照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ZORBAX300SB-C18 3.5μm，4.6×150mm或效能相当的色谱柱)；以30mmol/L磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾4.08g，加水1000ml溶解，用42％氢氧化钠溶液调pH值至6.0)为流动相A，以乙腈为流动相B；流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为215nm；进行梯度洗脱。测定方法：取本品，每瓶加水1ml复溶再用流动相稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液20μl，分别注入色谱仪，记录色谱图。扣除溶剂及辅料峰，按面积归一化法计算主峰纯度。
2.3冻干粉针检测结果
表4.冻干粉针考察结果-外观
Figure BDA0003192402230000061
表5.冻干粉针考察-0天水分结果
批号 D1 D2 D3 D4 D5 D6
水分(％) 1.03 1.11 1.12 3.49 3.48 3.88
批号 D7 D8 D9 D10 D11 D12
水分(％) 1.07 4.98 1.58 2.43 2.99 3.11
表6.冻干粉针考察-0天渗透压摩尔浓度结果
批号 D1 D2 D3 D4 D5 D6
渗透压摩尔浓度(mOsmol/kg) 281 289 306 258 255 245
批号 D7 D8 D9 D10 D11 D12
渗透压摩尔浓度(mOsmol/kg) 233 247 256 277 273 274
表7.冻干粉针考察-最大复溶时间结果
Figure BDA0003192402230000071
表8.冻干粉针考察-复溶后溶液澄清度与颜色结果
Figure BDA0003192402230000072
表9.冻干粉针考察-主峰纯度(％)结果
Figure BDA0003192402230000073
冻干粉针试验结果表明：
①冻干粉针处方1/2/3/7/9在各条件下外观为白色疏松块状物，其余均有粘稠状；
②冻干粉针处方1/2/3/7/9在0天水分均小于2.0％；
③冻干粉针处方1、2、3渗透压摩尔浓度均在280～310mOsmol/kg，满足注射液等渗要求，而7/9由于低于260，无法满足等渗需求(最低260～320范围)；
④冻干粉针处方1/2/3/7/9的其他各处方在各条件下最大复溶时间均小于15s，满足要求；
⑤冻干粉针处方1/2/3/7/9在各条件下复溶后溶液澄清度均为澄清溶液；
⑥冻干粉针在甘露醇的保护下，能够达到比较稳定，而在木糖醇和山梨醇作为赋形剂下，稳定性稍微降低；
综合上述结果显示，常规的冻干粉末赋形剂中，糖醇类(甘露醇、木糖醇、山梨醇)似乎更能够保护EK1，而糖类(葡萄糖、乳糖)等似乎与EK1产生些许反应，导致冻干粉性状发生变化。同时，为了能够满足注射液的渗透压需求，因此选择甘露醇作为赋形剂。
3.处方筛选
本品原料药碱度(1mg/ml)约为8.7，同时考虑本品理论等电点为4.02，结合制剂常规pH范围为4～9，设计pH考察范围为5.0～10.0，调节值分别为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0；处方中加入缓冲盐以增加制剂pH稳定性，缓冲盐选择：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、碳酸氢钠、枸橼酸钠，盐浓度选择：20mmol/L；pH调节剂为0.5mol/L盐酸溶液或0.5mol/L氢氧化钠溶液；处方中加入约4.0％甘露醇作为赋形剂。
3.1冻干粉针处方及制备工艺(每个处方制备100ml)
表10.冻干粉针处方
Figure BDA0003192402230000091
制备工艺：称取处方量甘露醇、磷酸二氢钠(或碳酸氢钠或枸橼酸钠或磷酸氢二钠)和EK1，加处方量80％注射用水，缓慢搅拌使溶解，用0.5mol/L氢氧化钠溶液或0.5mol/L盐酸溶液调pH值至设定值±0.1，加入处方量20％注射用水(扣除调节剂使用量)，混匀，用杭州科百特过滤器材有限公司0.22μm PES膜(双层)滤过，分装于2ml中性硼硅玻璃管制注射剂瓶中，1.0ml/瓶，加注射用冷冻干燥无菌粉末用氯化丁基橡胶塞半压塞，冷冻干燥，全压塞，加抗生素瓶用铝塑组合盖轧盖，即得。
3.2检测项目及检测方法
表11.检测项目安排表
Figure BDA0003192402230000092
冻干粉针检测方法：
·外观：取供试品，置明亮处观察。
·水分：取本品，照水分测定法(中国药典2015年版四部通则0832第一法2)测定。
·复溶时间：取本品5支，揭铝盖，用注射器注入1.0ml水，振摇，测定复溶时间。
·溶液澄清度与颜色：取本品，加水制成每1ml中约含EK1 15mg的溶液，照中国药典2015年版四部通则0902第一法与中国药典2015年版四部通则0901第一法，检测溶液澄清度与颜色。
·渗透压摩尔浓度：取本品，精密加入1ml水复溶后，依法测定(中国药典2015年版四部通则0632)毫渗透压摩尔浓度。
·有关物质/纯度：参照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ZORBAX300SB-C18 3.5μm，4.6×150mm或效能相当的色谱柱)；以30mmol/L磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾4.08g，加水1000ml溶解，用42％氢氧化钠溶液调pH值至6.0)为流动相A，以乙腈为流动相B；流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为215nm；进行梯度洗脱。测定法：取本品，每瓶加水1ml复溶再用流动相稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液20μl，分别注入色谱仪，记录色谱图。扣除溶剂及辅料峰，按面积归一化法计算主峰纯度。
3.3冻干粉针检测结果
表12.冻干粉针考察结果-外观
Figure BDA0003192402230000101
表13.冻干粉针考察-0天水分结果
批号 200504-1 200504-2 200504-3 200504-4 200504-5 200504-6
水分(％) 0.95 0.88 1.21 0.97 1.02 1.10
批号 200504-7 200504-8 200504-9 200504-10 200504-11 200504-12
水分(％) 1.14 1.14 1.01 1.15 1.17 1.00
表14.冻干粉针考察-0天渗透压摩尔浓度结果
批号 200504-1 200504-2 200504-3 200504-4 200504-5 200504-6
渗透压摩尔浓度(mOsmol/kg) 283 259 267 289 283 280
批号 200504-7 200504-8 200504-9 200504-10 200504-11 200504-12
渗透压摩尔浓度(mOsmol/kg) 235 225 325 258 284 274
表15.冻干粉针考察-最大复溶时间结果
批号/条件 0天 60℃5天 60℃13天 40℃5天 40℃13天 光照5天 光照13天
200504-1 9s 16s 17s 20s 19s 20s 16s
200504-2 9s 10s 8s 8s 9s 8s 8s
200504-3 9s 8s 12s 8s 7s 10s 8s
200504-4 8s 9s 9s 9s 9s 11s 10s
200504-5 9s 9s 9s 8s 9s 10s 9s
200504-6 8s 7s 9s 11s 9s 11s 10s
200504-7 9s 9s 11s 9s 9s 9s 9s
200504-8 9s 9s 9s 8s 9s 8s 9s
200504-9 12s 11s 9s 9s 11s 11s 9s
200504-10 8s 9s 10s 9s 9s 12s 9s
200504-11 9s 12s 10s 8s 9s 12s 9s
200504-12 8s 11s 11s 9s 10s 9s 10s
表16.冻干粉针考察-复溶后溶液澄清度与颜色结果
批号/条件 0天 60℃5天 60℃13天 40℃5天 40℃13天 光照5天 光照13天
200504-1 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-2 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-3 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-4 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-5 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-6 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-7 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-8 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-9 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-10 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-11 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
200504-12 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色 澄清无色
表17.冻干粉针考察-主峰纯度(％)结果
批号/条件 0天 60℃5天 60℃13天 40℃5天 40℃13天 光照5天 光照13天
200504-1 98 98 98 98 98 98 98
200504-2 98 95 94 98 98 98 98
200504-3 98 96 95 98 98 98 98
200504-4 98 96 96 98 98 98 98
200504-5 98 97 96 98 98 98 98
200504-6 98 96 95 98 98 98 98
200504-7 98 96 96 98 98 98 98
200504-8 98 96 96 98 98 98 98
200504-9 98 96 96 98 98 98 98
200504-10 98 96 96 98 98 98 97
200504-11 98 97 96 98 98 98 98
200504-12 98 97 96 98 98 98 98
冻干粉针试验结果表明：
①冻干粉针各处方在各条件下外观均为白色疏松块状物；
②冻干粉针各处方0天水分均小于2.0％；
③冻干粉针处方1、3、4、5、6、11、12渗透压摩尔浓度均在260～320mOsmol/kg，满足等渗要求；
④冻干粉针除处方1外的其他各处方在各条件下最大复溶时间均小于15s，满足要求；
⑤冻干粉针各处方在各条件下复溶后溶液澄清度均为澄清溶液；
⑥冻干粉针各处方在0天、40度5天、光照5天及13天条件下复溶后溶液颜色均为无色溶液；处方1、2、3在60度5天及13天、40度13天条件下复溶后溶液颜色均为无色溶液；处方4～12在40度13天条件下复溶后溶液颜色均为几乎无色溶液；处方4、5、8、9、11、12在60度13天条件下复溶后溶液颜色均为几乎无色溶液；处方6、7、10在60度13天条件下复溶后溶液颜色均为浅于1号黄色标准比色液；
⑧冻干粉针各处方在40度及光照13天后纯度无明显变化；在60度13天后，纯度有明显降低，其中处方1、2明显差于其余处方，其余处方纯度结果基本一致；
综合上述结果显示，本品较稳定pH范围为7～10；甘露醇用量不影响产品质量稳定性；不同缓冲盐不影响产品质量稳定性；故选择处方4为本品冻干粉针处方。
实施例2：EK1冻干粉注射剂的工艺研究
1.EK1处方溶液的稳定性考察
以实施例1中200504-4处方溶液为研究目标，考察其稳定性。分别于22℃自然光和30℃自然光条件下配制处方溶液并放置20小时，考察处方溶液的性状(溶液澄清度与颜色)、pH值、有关物质的变化。
表18.EK1处方溶液的稳定性考察结果
Figure BDA0003192402230000131
结果表明：本品处方溶液于22℃自然光与30℃自然光条件下配制并放置20小时，检测结果与0小时一致，表明本品处方溶液配制与放置温度在不高于30℃自然光条件下20小时内稳定，配液及灌装过程中不需要加氮气等措施进行保护。
2.滤材选择(滤膜吸附试验)及小试制剂制备
检验一定温度(22±4℃)条件下，模拟了药物实际过滤生产中最大过滤量的情况下，0.22微米亲水性聚醚砜膜(PES)及0.22微米亲水性聚偏氟乙烯膜(PVDF)对产品EK1的吸附能力，选择合适滤膜。
依据产品的设计大生产的规模(4万瓶)，实验按照47mm膜片的规格等比例缩小过滤工艺的流程工艺参数。配制EK1处方溶液500ml进行考察，按表19设计取样，并分别测定各取样点其相对于过滤前各自的含量。
表19.滤膜吸附取样表
Figure BDA0003192402230000141
药液配制(500ml)：称取7.5gEK1、20.0g甘露醇和1.38g磷酸二氢钠，加400ml注射用水，缓慢搅拌使溶解，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调pH值至8.0±0.1，加入100ml注射用水(扣除0.5mol/L氢氧化钠溶液使用量)，混匀即得；
药液过滤：①取配制的500ml药液，用0.22μm PES膜(两张，科百特)按上表过滤体积过滤。按表19取样点和取样量取样考察滤膜吸附。取样后的剩余滤液混匀分装于2ml中性硼硅玻璃管制注射剂瓶中，1.0ml/瓶，加注射用冷冻干燥无菌粉末用氯化丁基橡胶塞半压塞，按表20冻干曲线进行冷冻干燥，全压塞，加抗生素瓶用铝塑组合盖轧盖，即得小试制剂(批号：200508，小试批理论处方溶液体积为400ml)。②取配制的500ml药液，用0.22μm PVDF膜(两张，科百特)按滤膜吸附取样表过滤，按滤膜吸附取样表取样点和取样量取样考察含量。
表20.小试制剂的冻干曲线
Figure BDA0003192402230000142
分别精密量取各取样点溶液1ml，分置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度摇匀，即得各供试品溶液。参照实施例1处方筛选中有关物质检测条件，取A0(连续5针)、A1～A10各1针、A0(系统回校)注入液相色谱仪。
滤膜吸附试验结果：
表21.滤膜吸附试验测定结果
Figure BDA0003192402230000151
结果表明：本品采用0.22μm亲水性聚醚砜膜(PES)及0.22μm亲水性聚偏三氟乙烯膜(PVDF)过滤对产品EK1基本无吸附，可选择0.22μm亲水性聚醚砜膜(PES)为本品过滤材质。
3.共晶点测试
取滤膜吸附试验中PVDF滤后剩余处方溶液适量，作为供试品溶液。采用共晶点测试仪，进行共晶点测试。结果如下：
表22.共晶点测试结果
取样点 1 2 3 4 5 平均值
共晶点(℃) -16.0 -17.0 -16.9 -17.4 -16.1 -16.7
经测试可知，本品共晶点为-16.7℃。冻干曲线一次升华干燥温度设置合理，小试制备的冻干产品合格。
本品为无菌冻干粉，生产工艺过程主要包括药液配制、除菌过滤、无菌灌装、半压塞、冷冻干燥及轧盖。我们采用冻干粉针基本相同的工艺，同时对处方溶液配制条件及溶液稳定性进行了考察，确定生产过程中处方溶液稳定；对滤膜材质进行了考察，结果表明本品采用亲水性聚醚砜膜(PES)及亲水性聚偏氟乙烯膜(PVDF)过滤对产品均无吸附，选择了亲水性聚醚砜膜(PES)为本品过滤材质；完成了一批小试制剂制备，确定了小试冻干工艺，中试生产冻干根据实际生产，参数略有调整，但基本与小试一致。
实施例3：EK1注射剂的药代动力学实验
1.EK1静脉给予SD大鼠的药代动力学实验
1.1实验方法
选用SD大鼠48只，静脉组给药剂量为2.5mg/kg，单次静脉推注给EK1/EK1冻干粉注射剂(均用生理盐水溶解)，采集血样。
1.2实验结果
单次静脉推注给予EK1制剂后，动物血浆中EK1的主要代谢动力学参数见下表：
Figure BDA0003192402230000161
结论：对大鼠进行药代动力学分析，EK1/EK1冻干粉注射剂在大鼠体内，各项药代动力学指标接近。
2.EK1静脉给予Beagle犬的药代动力学试验
2.1实验方法
选用Beagle犬24只，静脉组给药剂量为1mg/kg，单次静脉推注给EK1/EK1冻干粉注射剂(均用生理盐水溶解)，采集血样。
2.2实验结果
单次静脉推注给予EK1制剂后，动物血浆中EK1的主要代谢动力学参数见下表：
Figure BDA0003192402230000162
结论：对Beagle犬进行药代动力学分析，EK1/EK1冻干粉注射剂在Beagle犬体内，各项药代动力学指标接近。

Claims (10)

1.一种蛋白冻干粉，其由处方溶液经冻干工艺而制得，每1mL所述处方溶液中含有15mg的蛋白、35-45mg的甘露醇、15-25mmol/L的缓冲盐、将所述处方溶液的pH值调至设定值所对应的用量的pH调节剂以及余量的注射用水。
2.根据权利要求1所述的蛋白冻干粉，其特征在于：
所述蛋白为EK1蛋白、EK1-Plam蛋白、EK1-chol蛋白或其衍生物，优选EK1蛋白。
3.根据权利要求1所述的蛋白冻干粉，其特征在于：
所述缓冲盐选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、枸橼酸钠中的一种或多种，优选磷酸二氢钠，更优选浓度为20mmol/L。
4.根据权利要求1所述的蛋白冻干粉，其特征在于：
所述pH调节剂为氯化氢或氢氧化钠，优选以水溶液的形式存在，更优选浓度为0.5mol/L。
5.根据权利要求1所述的蛋白冻干粉，其特征在于：
所述pH调节剂将所述处方溶液的pH值调至5.0-10.0，优选7.0-10.0。
6.根据权利要求1所述的蛋白冻干粉，其特征在于：
所述处方溶液通过以下方法制备：在室温常压下，称取处方量的蛋白、甘露醇和缓冲盐，加入到适量的注射用水中，缓慢搅拌至溶解，用处方量的pH调节剂调节pH值，加入处方量剩余的注射用水，混匀，滤膜过滤，得到处方溶液；
所述冻干工艺包括如下步骤：首先，将处方溶液放置于冻干机中，降温至-45℃，预冻1h，保持5-6h；其次，在0.2-0.4mbar下，升温至-20℃，保持18-20h；再次，在0-0.1mbar下，升温至0℃；最后，升温至25℃，保持5h，得到蛋白冻干粉。
7.一种基于蛋白冻干粉的注射用溶液，其包括根据权利要求1至6中任一项所述的蛋白冻干粉和溶剂。
8.根据权利要求7所述的注射用溶液，其特征在于，所述溶剂与蛋白冻干粉的用量比为1mL:15mg。
9.根据权利要求7所述的注射用溶液的制备方法，包括如下步骤：采用溶剂对蛋白冻干粉进行复溶，形成注射用溶液。
10.根据权利要求7所述的注射用溶液的使用方法，包括如下步骤：将注射用溶液加入到注射器中，施用于对其有需要的个体。
CN202110881180.9A 2021-08-02 2021-08-02 一种蛋白冻干粉及其注射用溶液 Pending CN113521250A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110881180.9A CN113521250A (zh) 2021-08-02 2021-08-02 一种蛋白冻干粉及其注射用溶液

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110881180.9A CN113521250A (zh) 2021-08-02 2021-08-02 一种蛋白冻干粉及其注射用溶液

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113521250A true CN113521250A (zh) 2021-10-22

Family

ID=78090043

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110881180.9A Pending CN113521250A (zh) 2021-08-02 2021-08-02 一种蛋白冻干粉及其注射用溶液

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113521250A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102631328A (zh) * 2012-05-04 2012-08-15 常州千红生化制药股份有限公司 重组人抗血栓蛋白冻干粉针剂及其制备方法
CN105232476A (zh) * 2014-06-06 2016-01-13 北京康辰药业股份有限公司 盐酸洛拉曲克冻干粉针剂的制备方法
CN108743551A (zh) * 2018-07-27 2018-11-06 宁波蒙曼生物科技有限公司 一种盐酸右美托咪定冻干粉针注射剂及制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102631328A (zh) * 2012-05-04 2012-08-15 常州千红生化制药股份有限公司 重组人抗血栓蛋白冻干粉针剂及其制备方法
CN105232476A (zh) * 2014-06-06 2016-01-13 北京康辰药业股份有限公司 盐酸洛拉曲克冻干粉针剂的制备方法
CN108743551A (zh) * 2018-07-27 2018-11-06 宁波蒙曼生物科技有限公司 一种盐酸右美托咪定冻干粉针注射剂及制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHUAI XIA等: "Inhibition of SARS-CoV-2 (previously 2019-nCoV) infection by a highly potent pan-coronavirus fusion inhibitor targeting its spike protein that harbors a high capacity to mediate membrane fusion", 《CELL RESEARCH》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108938654B (zh) 一种白头翁皂苷b4的注射用制剂
CN101317852B (zh) 一种复方甘草酸苷类粉针注射剂及其制备方法
CN108659104B (zh) 一种特利加压素的制备方法及其药物组合物
CN100998593A (zh) 一种稳定的注射用奥美拉唑钠制剂
CN117233309A (zh) 一种多种维生素注射剂杂质的检测方法
CN101756915B (zh) 盐酸替罗非班冻干粉针注射剂及制备方法
CN102772409B (zh) 一种药物组合物
US9918956B2 (en) Chlorogenic acid powder-injection and preparation method thereof
CN113521250A (zh) 一种蛋白冻干粉及其注射用溶液
CN102138908A (zh) 一种注射用胸腺五肽冻干粉针及其制备工艺
CN113398081A (zh) 一种蛋白冻干粉及其溶液
CN113117071B (zh) 一种无糖基化抗pd-1单克隆抗体的冻干制剂
CN115598261A (zh) 一种盐酸氯哌丁原料及其制剂中有关物质的测定方法
CN102657646B (zh) 一种药物组合物及其制剂
CN111138516B (zh) 一种大胡蜂肽及其制备方法和应用
CN112386575B (zh) 一种代谢调节融合蛋白的冻干制剂
CN103816126B (zh) 一种含有丁溴东莨菪碱的药物组合物
CN112057421B (zh) 一种紫杉醇脂质体药物组合物及其制备方法
CN113521244B (zh) 一种阿加曲班注射剂及其制备方法
CN112137967B (zh) 一种重组人FGF21-Fc融合蛋白冻干制剂
CN102743342A (zh) 一种供注射用夫西地酸钠冻干组合物
RU2471484C2 (ru) Способ получения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия
CN102813631B (zh) 一种制备甲磺酸酚妥拉明冻干粉针剂的方法
CN110327361A (zh) 一种克林霉素磷酸酯的药物组合物及其制备方法
CN115245488A (zh) 一种注射用特地唑胺组合物及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination