CN113504208A - 一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法 - Google Patents

一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113504208A
CN113504208A CN202110693082.2A CN202110693082A CN113504208A CN 113504208 A CN113504208 A CN 113504208A CN 202110693082 A CN202110693082 A CN 202110693082A CN 113504208 A CN113504208 A CN 113504208A
Authority
CN
China
Prior art keywords
urea
milk
concentration
cds
urease
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110693082.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113504208B (zh
Inventor
陈国庆
殷文志
朱拓
吴亚敏
辜姣
马超群
李磊
朱纯
高辉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN202110693082.2A priority Critical patent/CN113504208B/zh
Publication of CN113504208A publication Critical patent/CN113504208A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113504208B publication Critical patent/CN113504208B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6402—Atomic fluorescence; Laser induced fluorescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6432—Quenching

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法，属于分析检测领域。本发明以3,5‑二氨基苯甲酸为前驱体，通过一步法合成稳定的绿光碳点作为荧光探针，实验表明该碳点的荧光强度会随着pH(pH＝6‑9)的变化而产生较为明显的变化，利用溶液荧光强度与尿素浓度的关系构建线性模型，从而定量检测出牛奶中本身含有的尿素浓度。相较于传统检测方法，操作简单、无需预处理、安全、成本低廉，为牛奶中尿素的检测建立了一个新的方法。

Description

一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法
技术领域
本发明涉及一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法，属于分析检测领域。
背景技术
牛奶是人类饮食的重要组成部分，富含蛋白质、碳水化合物、矿物质和维生素，所有这些都是人类健康所必需的。由于它的高营养价值，全球牛奶的生产和消费逐年增加。尿素是蛋白质代谢产物，少量存在于哺乳动物的乳汁中。一般认为尿素含量介于0.2～0.3g/L为牛奶的正常含量范围，牛奶中尿素可以接受的上限浓度通常是0.7g/L。目前一些不法商贩为了达到以次充好、赚取非法利润的目的，在牛奶中添加尿素以提高蛋白质含量和提供白度，增加牛奶的稠度，这直接危害人体健康。为了检测牛奶中尿素浓度是否超标，确保牛奶的品质，因此研发牛奶中尿素的检测技术是必要的。
目前，检测牛奶中尿素的主要方法有：生物电极传感器、红外光谱法、丁二酮肟法、二乙酰肟法、液相色谱同位素稀释质谱和液相色谱-串联质谱法等。尽管这些方法较成熟、准确度高，但其检测步骤大多耗时且涉及复杂的样品处理过程，或是需要专业技术人员和昂贵的成本。因此，对于牛奶中的尿素进行简单快捷的定量检测具有重要的意义。
荧光光谱(FS)可以反映目标分子的特性，可对目标分子定性或定量检测。荧光光谱法具有选择性好、灵敏度高、操作简单和样品用样量少等优点，被应用于诸多复杂混合物体系的精确检测。而利用荧光纳米材料作为荧光探针进行检测，极大地提高了检测的灵敏度，且检测具有操作简单、检测时间短和灵敏度高的优点，目前荧光光谱技术已广泛地应用于环境、化学、医药食品等领域，也有一些学者提出使用荧光光谱技术对牛奶中尿素进行检测，但有关地研究报道很少且与传统检测方法相比优势不足。
发明内容
[技术问题]
目前检测牛奶中尿素的主要方法有：生物电极传感器、液相色谱同位素稀释质谱和液相色谱-串联质谱法等。其检测大多耗时且涉及复杂的样品处理过程，或是需要专业技术人员和昂贵的成本。而利用荧光光谱检测牛奶中尿素的研究有待进一步开发。
[技术方案]
针对上述问题，本发明提供了一种基于pH敏感碳点(CDs)和脲酶检测牛奶中尿素的方法，本发明基于CDs荧光强度随pH变化而变化和脲酶水解尿素导致pH增大这两个机理，提出了基于pH敏感的CDs和脲酶用于牛奶中尿素的检测方法，可以实现不用预处理、简单、灵敏地定量检测牛奶中的尿素。
本发明提供了一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将3，5-二氨基苯甲酸分散在乙醇中进行溶剂热反应，反应结束后，纯化，获得pH敏感碳点；
(2)利用在牛奶中加入尿素配置得到一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品，然后将所得pH敏感碳点和脲酶加入到一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品中，静置，然后测定相应的荧光发射光谱；同时，测定不加入尿素的牛奶样品的荧光发射光谱。
(3)采集不加入尿素时荧光发射光谱中490nm波长处的荧光强度峰值F0，以及一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品的荧光发射光谱中490nm波长处的荧光强度峰值F；计算得到不同尿素浓度的淬灭程度C＝(F0-F)/F0；利用淬灭程度C与尿素浓度构建线性检测模型；
(4)按照步骤(2)测定待测样品的荧光发射光谱，获得相应的淬灭程度C；然后通过步骤(3)中的检测模型计算得到待测样品中的尿素浓度。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中，将0.4g的3，5-二氨基苯甲酸分散在40mL乙醇中。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中溶剂热反应的条件为：在180℃下反应12h。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中溶剂热反应是在含有四氟乙烯内衬的高压釜中进行的，四氟乙烯内衬的容积100毫升。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(1)中pH敏感碳点的制备过程具体如下：
1)向乙醇中加入3，5-二氨基苯甲酸，然后将混合物移至含有四氟乙烯内衬的高压釜中，进行溶剂热反应；
2)将步骤(1)中产物自然冷却至室温后，过滤去除反应产物中的固体沉淀，将过滤后的反应产物在真空浓缩至原始体积的四分之一；CDs的纯化通过柱色谱法进行，固定相是硅胶，流动相是甲醇和二氯甲烷的混合物；
3)将步骤(2)中提纯浓缩得到的CDs稀释至所需浓度后，储存在冰箱中等待后续使用。
在本发明的一种实施方式中，步骤2)中流动相的甲醇和二氯甲烷的混合比为4:1。
在本发明的一种实施方式中，步骤3)中CDs使用吸光度定量，仪器为岛津UV2600吸收光谱仪，稀释至吸收光谱的390nm处吸收峰的吸光度为0.066。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中获得CDs的分散液，该分散液的吸收光谱在390nm处吸收峰的吸光度为0.066。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品中的配置方法为：配置2g/L浓度的尿素母液，分别取母液稀释到25，50，100，200，300，400，500，600，800，900，1000，2000mg/L；然后将上述浓度的尿素溶液等体积加入到牛奶中，获得一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品。
在本发明的一种实施方式中，一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品中尿素浓度相应为12.5、25、50、100、150、200、250、300、400、450、500、1000mg/L。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述的脲酶相对标准牛奶样品的用量为50mg/L。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述的脲酶是配制成浓度为100mg/L的脲酶溶液添加的，添加的体积为标准牛奶样品的50％。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中，步骤(1)所述的CDs分散液的体积与标准牛奶样品的体积比为1：2。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述静置的时间为40分钟，温度为室温(20-30℃)。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中利用采用英国Edinburg生产的FLS980型荧光光谱仪测量荧光发射光谱，激发波长为390nm，峰值波长为490nm，激发和发射狭缝宽度分别为2nm和1nm。
本发明提供了上述方法在食品检测领域的应用。
[有益效果]：
1.本发明使用的CDs的荧光强度对pH＝6-9区间内的变化具有线性响应，为实现牛奶中尿素的检测提供了良好的基础。
2.本发明中使用的CDs浓度经过优化，在未经预处理的牛奶中直接添加也具有较好的效果，从而增加了检测的灵敏度。
3.本发明方法首次使用CDs和脲酶实现了对牛奶这类复杂体系中尿素的定量检测，本方法检测对牛奶样品无需进行预处理，且检测操作简单，检测时只需将几种物质混合静置后测量荧光发射光谱即可。
4.本发明构建的线性模型线性范围为25-500mg/L，标准曲线方程为C＝0.00121I+0.00849(C为碳点荧光的猝灭程度与I为尿素浓度)，决定系数R2＝0.997，检测限低至6.27mg/L，方法的回收率为94.72％-109.87％，具有好的检测准确性，对于监督牛奶中尿素的非法添加具有重要意义。
附图说明
图1为CDs检测牛奶中尿素的流程图。
图2为实施例1中CDs水溶液的吸收光谱、荧光激发光谱和发射光谱。
图3(a)为牛奶-碳点混合溶液、牛奶-尿素-脲酶-碳点(尿素浓度为0-2g/L)混合溶液、牛奶的荧光发射光谱(激发波长为390nm)；(a)中插图为：牛奶-尿素-脲酶-碳点(尿素浓度为0-2g/L)混合溶液的荧光峰值波长与尿素浓度的关系；(b)猝灭程度((F0-F)/F0)与尿素浓度的关系(尿素浓度为25-500mg/L，F0和F分别为不存在和存在尿素时溶液的峰值强度)。
图4(a)为实施例1中所得CDs在不同pH(4-11)下的荧光发射光谱(激发波长为390nm)；(b)随pH变化CDs峰值强度变化图。λex/λem＝390/490nm。(b)插图为：pH＝6-9时CDs峰值强度的拟合曲线。
图5为实施例3中牛奶中标准添加尿素后加入脲酶的溶液pH与尿素浓度的关系图。
图6(a)为实施例4中CDs浓度不同时的吸收光谱；(b)不同浓度CDs与pH＝6和pH＝9的缓冲液混合后的发射光谱(激发波长为390nm)；(c)猝灭程度((F0-F)/F0)与碳点浓度(390nm处吸光度)的关系(F0和F分别为不同浓度CDs与pH＝6和pH＝9缓冲液混合后的490nm处峰值强度)。
图7为实施例5中CDs的抗干扰实验。
图8为不同碳点的pH响应图；其中，a为柠檬酸/丝氨酸/乙醇胺制得的碳点；b为对苯二胺/乙二胺制得的碳点。
图9为不同碳点的pH响应图；其中，a为邻苯二胺,吡啶二甲酸制得的碳点；b为间苯二胺制得的碳点。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实施例1pH敏感碳点的制备
对pH敏感碳点的制备，包括如下步骤：
(1)将0.4g的3，5-二氨基苯甲酸混合在40毫升乙醇中。将混合物移至100毫升四氟乙烯衬里的高压釜中，并在电炉中于180℃加热12小时。
(2)反应产物冷却至室温后，过滤去除深棕色反应固体产物，将过滤后的产物在真空浓缩至原始体积的四分之一。CDs的纯化通过柱色谱法进行。固定相是硅胶，流动相是比例为4:1的甲醇和二氯甲烷的混合物。
(3)将提纯浓缩得到的CDs稀释成390nm处吸光度为0.066，并储存在冰箱中。
CDs的吸收光谱、荧光激发光谱和发射光谱如图2所示。CDs的量子产率为53.8％。
碳点pH响应特性：pH缓冲液的pH范围为4-11，浓度为0.1M。图4(a)激发波长为390nm时碳点与不同pH缓冲液混合后的发射光谱。可以看出，随着pH的增大，CDs的荧光强度出现了明显的下降。图4(b)为峰值波长与pH的关系图。图中可以看出，pH＝4-6和pH＝10-11时，两个区间内pH的变化对CDs的荧光强度没有明显的影响。当pH＝6-9时，CDs的荧光强度随着pH的变化产生了明显的变化，且具有一定的线性。对这一区间进行拟合，得到图4(b)插图。F490nm＝-19942.1307pH+182831，R2＝0.984，有较好的线性，且线性范围宽。
实施例2检测模型的构建
一种基于实施例1所述的基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法中标准曲线的构建包括如下步骤：
(1)在1mL不经过预处理的牛奶样品中加入1mL不同浓度的尿素溶液，加入的尿素浓度分别为0(对照组)，25，50，100，200，300，400，500，600，800，900，1000，2000mg/L(相应标准混合样品中尿素浓度为0、12.5、25、50、100、150、200、250、300、400、450、500、1000mg/L)。然后加入1mL浓度为100mg/L的脲酶溶液和1mL实施例1中(3)获得的浓度的碳点，并在室温下静置40min；
在1mL不经过预处理的牛奶样品中加入1mL水，然后再加入1mL水和1mL实施例1(3)中浓度的碳点，并在室温下静置40min。得到牛奶-碳点混合溶液，此为计算牛奶中本身含有尿素含量用。
(2)将(1)中的样品进行荧光光谱检测，扫描条件：激发波长为390nm，发射波长扫描范围为400-650nm，每隔1nm扫描一次，狭缝宽度设为2/1nm(激发狭缝/发射狭缝)，得到在490nm处荧光强度峰值F；将尿素浓度为0的牛奶溶液进行荧光光谱检测，得到在490nm处荧光强度峰值F0；通过式(1)计算得到不同尿素浓度的淬灭程度C；
C＝(F0-F)/F0 (1)
(3)通过不同尿素浓度的加标牛奶溶液中碳点淬灭程度的关系曲线如图3(a)所示，淬灭程度C和尿素浓度I的拟合曲线如图3(b)。从图3(a)(b)可以看出：当尿素浓度为25-500mg/L范围内，碳点的猝灭程度C与尿素浓度I成线性关系，线性回归方程为C＝0.00121I+0.00849，决定系数为R2＝0.997，检测限为6.27mg/L。再通过代入(1)中未添加脲酶的牛奶-碳点混合溶液的峰值强度，计算出牛奶中本身含有尿素的浓度为265.46mg/L。
表1中对比了CDs方法和液相色谱串联质谱法(LC-MS)得到的牛奶中尿素浓度，以及实验得到加标回收率和RSD。
表1 CDs方法和液相色谱串联质谱法(LC-MS)对比以及加标回收率和RSD
Figure BDA0003127437050000061
实施例3脲酶加入加标了不同浓度尿素牛奶后pH的变化
实验测量得到本次实验所用牛奶pH为6.9，在牛奶中标准添加了不同浓度的尿素(0-2000mg/L)后加入脲酶，溶液pH与尿素浓度如图5所示。图5中可以看出，随着尿素的浓度的增加，溶液的pH也在逐步增大，当尿素浓度为0-1000mg/L时，溶液的pH与尿素浓度的关系接近线性。当尿素浓度继续增加时(1000-2000mg/L)，pH增大的趋势趋于平缓，推断这与pH对脲酶活性的影响有关。而当尿素浓度为0时，溶液pH与牛奶pH不同，是由于牛奶中本身含有的尿素被脲酶水解，使得溶液pH增大，这也为后续检测牛奶中本身含有尿素浓度提供了基础。
实施例4碳点浓度对检测的变化
实验所用的CDs浓度使用其吸收光谱在390nm处的吸光度定量。将CDs稀释成多个浓度(浓度分别为：CDs，3/4·CDs，1/2·CDs，1/3·CDs，1/5·CDs，1/10·CDs，1/50·CDs，1/100·CDs)，并测量了这些浓度CDs的吸收光谱，得到图6(a)。图中看出吸光度随着CDs浓度的降低逐渐降低。
图6(b)为不同浓度CDs与pH＝6和pH＝9的缓冲液混合后的发射光谱(激发波长为390nm)。从图中可以看出，CDs浓度较高时，牛奶本身的荧光光谱基本无法观测到，此时荧光强度较高，基本可以忽略牛奶本身的荧光的影响，灵敏度较高。而随着CDs浓度的降低，牛奶本身的荧光占整个体系的荧光比例逐渐增加，pH变化时CDs的荧光强度变化被牛奶的荧光所影响，此时灵敏度较低。
为了方便对比，制作了图6(c)，猝灭程度((F0-F)/F0)与碳点浓度(390nm处吸光度)的关系(F0和F分别为不同浓度CDs与pH＝6和pH＝9缓冲液混合后的490nm处峰值强度)。图中可以看出，随着CDs浓度的增加(吸光度增加0-0.066)，CDs的荧光强度逐渐增加，牛奶本身荧光的影响逐渐降低，此时猝灭程度逐渐增加，灵敏度逐渐增加。随后，当吸光度大于等于0.066时，此时的猝灭程度已经趋于不变，是由于此时CDs的荧光强度已经基本可以摆脱牛奶本身荧光的影响。为了检测的高灵敏度，本方案选择390nm处的吸光度0.066这一浓度作为实验用CDs浓度。
实施例5检测模型在牛奶体系中抗干扰能力
由于实验是在牛奶中进行检测，将牛奶中的主要单体物质分别与脲酶混合后加入CDs，对比荧光强度来进行干扰实验，主要单体物质包括：尿素、氨基酸(色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、组氨酸、甘氨酸)、金属盐离子(Ca2+、Na+)和糖类(葡萄糖)，结果如图所示。图中7可以看出，除了尿素，牛奶中的主要单体物质与脲酶混合后对CDs荧光强度的影响很小。而尿素可以被脲酶水解，使得溶液pH增大，此时CDs的荧光强度降低明显。这也为实际应用CDs检测牛奶中的尿素奠定了良好的基础。
对比例1不同氮掺杂碳点的响应对比
对比现有已报道的不同氮掺杂碳点的pH响应结果(见表2)，本发明的优势在于所用碳点契合检测环境所需pH，且量子产率高、灵敏度高。
表2不同碳源(氮源)所得碳点的pH响应结果
碳源(氮源) pH响应范围-线性区间 量子产率/％ pH响应曲线
柠檬酸(丝氨酸，乙醇胺) 1.5-7.5 10 图8a
对苯二胺(乙二胺) 4.45-7 14.5 图8b
柠檬酸，谷胱甘肽 3–9 9.4 Y＝-97.92X+1043.35
邻苯二胺,吡啶二甲酸 - 47 图9a
间苯二胺 6-10 36 图9b
3,5-二氨基苯甲酸 6-9 53.8 图4b
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将3，5-二氨基苯甲酸分散在乙醇中进行溶剂热反应，反应结束后，纯化，获得pH敏感碳点；
(2)利用在牛奶中加入尿素配置得到一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品，然后将所得pH敏感碳点和脲酶加入到一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品中，静置，然后测定相应的荧光发射光谱；同时，测定不加入尿素的牛奶样品的荧光发射光谱。
(3)采集不加入尿素时荧光发射光谱中490nm波长处的荧光强度峰值F0，以及一系列已知尿素浓度的标准牛奶样品的荧光发射光谱中490nm波长处的荧光强度峰值F；计算得到不同尿素浓度的淬灭程度C＝(F0-F)/F0；利用淬灭程度C与尿素浓度构建线性检测模型；
(4)按照步骤(2)测定待测样品的荧光发射光谱，获得相应的淬灭程度C；然后通过步骤(3)中的检测模型计算得到待测样品中的尿素浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，将每0.4g的3，5-二氨基苯甲酸质量分散在40mL乙醇中。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中溶剂热反应的条件为：在180℃下反应12h。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中溶剂热反应是在含有四氟乙烯内衬的高压釜中进行的，四氟乙烯内衬的容积100毫升。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述纯化通过柱色谱法进行，固定相是硅胶，流动相是甲醇和二氯甲烷的混合物。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，流动相的甲醇和二氯甲烷的混合比为4:1。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中pH敏感碳点是以分散液的方式加入到样品中，分散液的吸光度为0.066。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，步骤(1)所述的CDs分散液的体积与标准牛奶样品的体积比为1：2。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述静置的时间为40分钟，温度为室温(20-30℃)。
10.权利要求1-9任一项所述的方法在食品检测领域中的应用。
CN202110693082.2A 2021-06-22 2021-06-22 一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法 Active CN113504208B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110693082.2A CN113504208B (zh) 2021-06-22 2021-06-22 一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110693082.2A CN113504208B (zh) 2021-06-22 2021-06-22 一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113504208A true CN113504208A (zh) 2021-10-15
CN113504208B CN113504208B (zh) 2022-12-13

Family

ID=78010340

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110693082.2A Active CN113504208B (zh) 2021-06-22 2021-06-22 一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113504208B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114113023A (zh) * 2021-12-16 2022-03-01 郑州轻工业大学 基于单核增生李斯特菌来源的氮掺杂碳点的制备方法和应用
CN116814256A (zh) * 2023-06-28 2023-09-29 江南大学 一种双发射碳点荧光探针及其制备方法与应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5017475A (en) * 1985-11-25 1991-05-21 Microbiological Associates, Inc. Fluorescent detection method based on enzyme activated conversion of a fluorophore precursor substrate
US5037738A (en) * 1987-06-03 1991-08-06 Abbott Laboratories Simultaneous assay for glucose and urea
CN103808705A (zh) * 2014-03-11 2014-05-21 吉林大学 一种利用量子点和金纳米粒子检测草甘膦的方法
CN106634984A (zh) * 2016-12-29 2017-05-10 福建医科大学 一种pH敏感响应的N、S共掺杂石墨烯量子点的制备及脲酶活性的测定
CN111690405A (zh) * 2020-05-18 2020-09-22 中国石油大学(北京) 一种荧光碳点及其制备方法和在检测铜离子中的应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5017475A (en) * 1985-11-25 1991-05-21 Microbiological Associates, Inc. Fluorescent detection method based on enzyme activated conversion of a fluorophore precursor substrate
US5037738A (en) * 1987-06-03 1991-08-06 Abbott Laboratories Simultaneous assay for glucose and urea
CN103808705A (zh) * 2014-03-11 2014-05-21 吉林大学 一种利用量子点和金纳米粒子检测草甘膦的方法
CN106634984A (zh) * 2016-12-29 2017-05-10 福建医科大学 一种pH敏感响应的N、S共掺杂石墨烯量子点的制备及脲酶活性的测定
CN111690405A (zh) * 2020-05-18 2020-09-22 中国石油大学(北京) 一种荧光碳点及其制备方法和在检测铜离子中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TINGYU WANG等: "Highly Fluorescent Green Carbon Dots as a Fluorescent Probe for Detecting Mineral Water pH", 《SENSOR》 *
张雅兰: "氮掺杂正电荷碳量子点的制备、性质及其在尿素、硫酸软骨素检测中的应用", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士) 医药卫生科技辑》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114113023A (zh) * 2021-12-16 2022-03-01 郑州轻工业大学 基于单核增生李斯特菌来源的氮掺杂碳点的制备方法和应用
CN114113023B (zh) * 2021-12-16 2024-04-26 郑州轻工业大学 基于单核增生李斯特菌来源的氮掺杂碳点的制备方法和应用
CN116814256A (zh) * 2023-06-28 2023-09-29 江南大学 一种双发射碳点荧光探针及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113504208B (zh) 2022-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108776127B (zh) 一种AuAgNCs@APAP荧光探针及其制备方法和在测定氨基酸中的应用
Alwarthan Chemiluminescent determination of tryptophan in a flow injection system
CN102645464B (zh) 一种利用电子舌系统快速检测黄酒中氨基酸的方法
Chen et al. A novel histidine assay using tetraphenylporphyrin manganese (III) chloride as a molecular recognition probe by resonance light scattering technique
CN113504208B (zh) 一种基于pH敏感碳点和脲酶检测牛奶中尿素的方法
Wu et al. Development of Electrochemical Sensor for Fast Liquor Authentication
Sochorova et al. Electrochemical and others techniques for the determination of malic acid and tartaric acid in must and wine
CN110780011A (zh) 采用高效液相色谱法测定苯甲酸中邻苯二甲酸含量的方法
CN110823970A (zh) 一种快速测定酸性溶液中l-胱氨酸含量的电化学检测方法
CN112198249B (zh) 一种土壤中乙醇胺类化合物的检测方法
CN113219089B (zh) 一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法
CN112924566B (zh) 一种同时检测酶促反应液中甘氨酸和丝氨酸的方法
CN115494042A (zh) 一种以“关-开”型荧光传感器检测Hg2+和谷胱甘肽的方法
CN114324647A (zh) 一种同时测定奶粉中维生素k1和k2的方法与应用
CN108645947A (zh) 一种酱油中酪胺含量的检测方法
CN114839171A (zh) 一种基于深紫外发射碳点检测牛奶中四环素类抗生素的方法
CN113376280A (zh) 一种同时检测尿液样本中94种氨基酸的方法
Peng et al. A new spectrofluorimetric method for determination of trace amounts histamine in human urine and serum
Chen et al. Chemiluminescence flow sensor with immobilized reagent for the determination of pyrogallol based on potassium hexacyanoferrate (III) oxidation
CN110658167A (zh) 基于银-金属有机骨架材料作为荧光探针应用于叶酸检测的方法
CN112986215B (zh) 一种基于表面增强拉曼光谱技术检测牛奶中苯甲酸的方法
CN108760906A (zh) 一种新精神活性物质pFPP的检测方法
CN114441681B (zh) 一种测定特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和l-羟脯氨酸的方法
CN115267014A (zh) 一种检测三羧酸循环中有机酸的方法
CN113075178B (zh) 一种富含酚羟基碳点直接定量检测牛奶中葡萄糖的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant