CN108760906A - 一种新精神活性物质pFPP的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种新精神活性物质pFPP的检测方法。本发明所提供的精确、高效的测定生物样品中pFPP的方法包括气质联用、气相色谱、液相色谱、液质联用等定性定量分析方法;所涉及的生物样品可为血液、尿液、唾液和毛发中至少一种。由于生物样品的干扰因素众多,因此检材的前处理过程非常重要。本发明经过大量的实验,通过固相萃取过程,有效将生物样品中的pFPP充分提取出来,并实现高效的定性定量分析。各分析方法的灵敏度高、线性范围广。检测器成本低,有利于自动化的分析操作。
Description
技术领域
本发明涉及一种新精神活性物质pFPP的检测方法,属于刑侦毒品检测领域。
背景技术
pFPP(1-4-氟苯基哌嗪)属于哌嗪类新精神活性物质,分子式为C10H13FN2,分子量为180.22g/mol。它有温和的致幻作用以及产生欣快感。它最初是1982年做为抗组胺药尼普拉嗪的代谢物被发现,再次被发现是2003年做为潜在的娱乐药物,在新西兰做为“俱乐部药物”的一种成分,使用的商品名为"The Big Grin","Mashed"和"Extreme Beans"。随后它做为黑市场“摇头丸”的一种成分遍布世界各地。其结构式如式(1)所示。
通过查阅国内外大量文献,已报道的pFPP分析方法包括颜色反应、微晶实验、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳以及傅里叶红外等。但已有分析方法多侧重于定性分析。同时由于在实际侦查过程中,需要的检测对象多为生物样品,如血液、尿液等,生物样品具有基质复杂、干扰多、难净化的特点,为实际检测工作带来极大困扰。因此目前急需一种针对生物样品中pFPP的精确、高效检测方法,以满足不同需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种精确、高效的测定生物样品中pFPP的方法,包括气质联用、气相色谱、液相色谱、液质联用等定性定量分析方法。
本发明所涉及的生物样品可为血液、尿液、唾液和毛发中至少一种。
本发明首先提供生物样品中pFPP的气质联用检测方法,包括如下步骤:
(1)提取生物样品得到提取液;
(2)将所述提取液进行所述气质联用检测,若保留时间为10.59~10.79min出现的吸收峰的所对应的碎片离子的m/z为137.9和180.1,在判定所述生物样品中含有pFPP。
所述气质联用的检测条件如下:
气相色谱条件:
载气为氦气;
色谱柱为DB-5MS或HP-5MS;
升温程序为:起始温度为70℃,以10℃/min的速率升至300℃,保持7min;
质谱条件:
电压扫描范围为50~450M/z。
上述的气质联用检测方法中,采用固相萃取提取所述生物样品;
所述固相萃取的条件如下:
Oasis HLB固相萃取柱,规格可为60mg、3mL;
首先采用体积比为1:1:1的甲醇、去离子水和乙酸铵(10mM,pH=9.5)预处理,如均为2mL;上样;用(1mL)去离子水清洗,然后真空干燥;再用(1mL)甲醇洗脱,氮吹至干,用甲醇复溶。
本发明上述气质联用检测方法的分析时间控制在30min以内,各物质之间的分离度在2以上,定性检测限为2μg/mL。
本发明提供的生物样品中pFPP的气相色谱检测方法,包括如下步骤:
(1)提取生物样品得到提取液;
(2)配制至少5种不同浓度的pFPP标准溶液,将所述标准溶液进行气相色谱检测,得到所述pFPP所对应的吸收峰的峰面积,以所述标准溶液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,制作标准曲线;
(3)将所述提取液进行气相色谱检测,得到pFPP所对应的吸收峰的峰面积,根据所述标准曲线,即得到提取液中pFPP的浓度;
所述气相色谱的检测条件如下:
载气为氮气;
色谱柱为DB-5或HP-5;
柱流量为1.0mL/min;
升温程序为:起始温度为100℃,以18℃/min的速率升至140℃,保持5min;然后以50℃/min的速率升至280℃,保持3min。
上述的气相色谱检测方法中,所述提取液的制备方法与上述气质联用检测方法中基本相同;
其中,上述的气相色谱液检测方法中提取液的制备方法与上述气质联用检测方法中基本相同;
所述标准溶液的浓度可为0.001~1.0mg/mL。
本发明提供的生物样品中pFPP的液相色谱检测方法,包括如下步骤:
(1)提取生物样品得到提取液;
(2)配制至少5种不同浓度的pFPP标准溶液,将所述标准溶液进行液相色谱检测,得到所述pFPP所对应的吸收峰的峰面积,以所述标准溶液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,制作标准曲线;
(3)将所述提取液进行所述液相色谱检测,得到所述pFPP所对应的吸收峰的峰面积,根据所述标准曲线,即得到所述提取液中所述pFPP的浓度;
所述液相色谱的检测条件如下:
色谱柱为C18色谱柱,如300SB-C18;
柱温为35℃;
检测波长为202nm;
流动相A为pH值为7的浓度为10mM的甲酸铵水溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为1.0mL/min。
上述的液相色谱检测方法中提取液的制备方法与上述气质联用检测方法中基本相同;
所述标准溶液的浓度可为5~1000μg/mL;
所述梯度洗脱的条件如下:
0~5min,所述流动相B的体积比由5%到60%;5~10min,所述流动相B的体积比由60%到40%;10~12min,所述流动相B的体积比由40%到95%。
本发明提供的生物样品中pFPP的液相色谱-质谱联用检测方法,包括如下步骤:
(1)提取生物样品得到提取液;
(2)配制至少5种不同浓度的pFPP标准溶液,将所述标准溶液进行液相色谱-质谱联用检测,得到离子对为181.0-75.1所对应的吸收峰的峰面积,以所述标准溶液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,制作标准曲线;
(3)将所述提取液进行所述液相色谱-质谱联用检测,得到离子对为181.0-75.1所对应的吸收峰的峰面积,根据所述标准曲线,即得到所述提取液中所述pFPP的浓度;
所述液相色谱-质谱联用的检测条件如下:
液相色谱条件:
色谱柱为反相C18色谱柱;
柱温为35℃;
流动相A为体积浓度为0.1%的甲酸水溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为0.5mL/min;
质谱条件为:
毛细管出口电压为90V;
子离子137.9的碰撞电压为20V,子离子75.1的碰撞电压为65V;
离子源参数为:干燥气温度为350℃,干燥气流量为10L/min,雾化气压力为30psi。
上述的液相色谱-质谱联用检测方法中,所述提取液的制备方法与上述气质联用检测方法中基本相同;
所述标准溶液的浓度为1~10000ng/mL;
所述梯度洗脱的条件如下:
0~8min,所述流动相B的体积比由5%调整为40%;8~8.01min,所述流动相B的体积比由40%调整为5%。
本发明检测方法具有以下优点:
(1)由于生物样品的干扰因素众多,因此检材的前处理过程非常重要。本发明经过大量的实验,通过固相萃取过程,有效将生物样品中的pFPP充分提取出来,并实现高效的定性定量分析。
(2)各分析方法的灵敏度高、线性范围广。
(3)检测器成本低,有利于自动化的分析操作。
附图说明
图1为本发明实施例1中pFPP的气质联用色谱图。
图2为本发明实施例2中pFPP的气相色谱图。
图3为本发明实施例3中pFPP的液相色谱图。
图4为本发明实施例4中pFPP的液质联用图谱。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1、气质联用检测尿样中的pFPP
(1)样品溶液的制备
使用Oasis HLB固相萃取柱(60mg,3mL),首先用2mL甲醇、2mL去离子水和2mL乙酸铵(10mM,pH=9.5)预处理。上样,固相萃取柱用1mL去离子水清洗,然后真空干燥。用1mL甲醇洗脱,氮吹至干,用甲醇复溶至400μL,过滤离心,装进样小瓶。
(2)检测条件的设置
气相色谱条件的设定过程为:
载气为氦气;
色谱柱为DB-5MS或HP-5MS;
升温程序为:起始温度为70℃,以10℃/min的速率升至300℃,保持7min;
质谱条件:电压扫描范围设为50~450M/z。
(3)气质联用测定及结果
采用上述设定的条件检测提取液,得到提取液3次进样的保留时间为10.69min左右的吸收峰所对应的碎片离子m/z138.1和180.1,因此判定尿样中含有pFPP。
本实施例中pFPP的气质联用色谱图如图1所示,其中保留时间为10.69min处的吸附峰为pFPP的吸收峰。
实施例2、气相色谱检测毛发中的pFPP
(1)样品溶液的制备
与实施例1中的基本相同。
(2)标准工作液的制备
取pFPP标准储备溶液,依次稀释成质量浓度分别为1.0、0.5、0.25、0.125、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001mg/mL的系列标准溶液。
分别取不同浓度的标准液1μL进样,记录响应的峰面积。
每个浓度进样3次,并对3次峰面积的平均值A及质量浓度c(mg/mL)进行线性回归,得到pFPP的回归方程:A=1114.8c-6.0522,r2为0.999,线性范围5~1000μg/mL,检出限5μg/mL(S/N≥3)。
(3)检测条件的设置
载气为氮气;
色谱柱为DB-5或HP-5;
柱流量为1.0mL/min;
升温程序为:起始温度为100℃,以18℃/min的速率升至140℃,保持5min;然后以50℃/min的速率升至280℃,保持3min。
(4)气相色谱测定及结果
采用上述设定的条件检测提取液,得到提取液3次进样的峰面积的平均值(保留时间为9.11min所对应的吸收峰),带入上述线性方程,得到提取液中pFPP的浓度,经换算得到毛发中pFPP的浓度为28.52μg/mL。
本实施例中pFPP的气相色谱图如图2所示。
本实施例检测方法的精密度测定:取低、中、高3个浓度的pFPP样品,用本实施例所建立的方法进行提取分析。1天内提取分析6次,计算样本的日内相对标准偏差(RSD);连续5天,计算样本的日间相对标准偏差,结果见表1。
表1不同浓度pFPP样品的精密度试验结果
本实施例检测方法的准确度测定:采用加样回收法,取已知浓度的毛发样品3份,分别加入低、中、高三个浓度的标准品各3份,按上述方法测定,求得平均回收率为95.2%(n=3),结果见表2。
表2回收率(n=3)
实施例3、液相色谱检测血液中的pFPP
(1)样品溶液的制备
与实施例1中的基本相同。
(2)标准工作液的制备
取pFPP标准储备溶液,依次稀释成质量浓度分别为1.0、0.75、0.5、0.1、0.05、0.025、0.01、0.005、0.001、0.0005mg/mL的系列标准溶液。
分别取不同浓度的标准液10μL进样,记录响应的峰面积。
每个浓度进样3次,并对3次峰面积的平均值A及质量浓度c(mg/mL)进行线性回归,得pFPP的回归方程为A=1211c+18882,r2=0.9992,线性范围5~1000μg/mL,定量限为5μg/mL(S/N≥3)。
(3)检测条件的设置
色谱柱为300SB-C18(4.6×150mm,5μm);
柱温为35℃;
检测波长为202nm;
流动相A为pH值为7的浓度为10mM的甲酸铵水溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为1.0mL/min;
所述流动相使用前经0.45μm微孔滤膜过滤后放入超声波清洗器中超声10~15min,充分脱出流动相中的气体。
所述梯度洗脱的条件如下:
0~5min,所述流动相B的体积比由5%到60%;5~10min,所述流动相B的体积比由60%到40%;10~12min,所述流动相B的体积比由40%到95%。
采用内标法定量,选择咖啡因为内标物质。
(4)液相色谱测定及结果
采用上述设定的条件检测提取液,得到提取液3次进样的峰面积的平均值(保留时间为8.39min所对应的吸收峰,如图3所示),带入上述线性方程,得到提取液中pFPP的浓度,经换算得到血液中pFPP的浓度为22.82μg/mL。
本实施例检测方法的精密度测定:
取低、中、高3个浓度的样品,用本实施例所建立的方法进行提取分析。1天内提取分析6次,计算样本的日内相对标准偏差(RSD);连续5天,计算样本的日间相对标准偏差,结果见表3。
表3不同浓度样品的精密度试验结果
本实施例检测方法的准确度测定:采用加样回收法,取已知浓度的血液样品3份,分别加入低、中、高三个浓度的标准品各3份,按上述方法测定,求得平均回收率为96.7%(n=3),见表4。
表4回收率(n=3)
实施例4、液相色谱-质谱联用检测毛发中的pFPP
(1)样品溶液的制备
与实施例1中的基本相同。
(2)标准工作液的制备
取pFPP标准储备溶液,依次稀释成质量浓度分别为1、5、10、50、100、500、1000、5000、7500、10000ng/mL的系列标准溶液。
分别取不同浓度的标准液5μL进样,选择的181.0-75.1记录响应的峰面积。
每个浓度进样3次,并对3次峰面积的平均值A及质量浓度c(ng/ml)进行线性回归,得到pFPP的回归方程为A=207.02c+10377,r2=0.9997,线性范围1~10000ng/mL,检出限为0.30ng/mL(S/N≥3),定量限为1.00ng/mL(S/N≥10)。
(3)检测条件的设置
质谱条件的设定过程为:
A.确定准分子离子;
B.通过选择离子扫描,优化毛细管出口电压;
C.通过子离子扫描,选择子离子,同时优化碰撞能量;
D.建立多反应监测MRM方法;
E.离子源参数的优化。
其中,对pFPP通过选择母离子和子离子,优化Fragmentor电压和CE值,获得最优MRM参数,从而建立质谱库,如表5所示。
表5 pFPP的质谱库
优化后的离子源参数为:干燥气温度350℃,干燥气流量10L/min,雾化气压力为30psi。
液相色谱条件:
色谱柱为反相C18色谱柱(2.1×150mm,1.7μm);
柱温为35℃;
流动相A为体积浓度为0.1%的甲酸水溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱条件如表6中所示,流速为0.5mL/min。
表6梯度洗脱条件
(4)液相色谱测定及结果
采用上述设定的条件检测提取液,得到提取液3次进样的峰面积的平均值(181.0→75.1的离子对),带入上述线性方程,得到提取液中pFPP的浓度,经换算得到毛发中pFPP的浓度为102.59ng/mL。
本实施例中pFPP的液质联用图谱如图4所示,分别为181.0→75.1的MRM图谱和181.0→137.9的MRM图谱。
本实施例检测方法的精密度测定:取pFPP样品,用本实施例所建立的方法进行提取分析。1天内提取分析6次,连续进行5天,结果如表7所示。
表7 pFPP的精密度试验结果
Claims (8)
1.一种生物样品中pFPP的气质联用检测方法,包括如下步骤:
(1)提取生物样品得到提取液;
(2)将所述提取液进行所述气质联用检测,若保留时间为10.59~10.79min出现的吸收峰的所对应的碎片离子的m/z为137.9和180.1,在判定所述生物样品中含有pFPP;
所述气质联用的检测条件如下:
气相色谱条件:
载气为氦气;
色谱柱为DB-5MS或HP-5MS;
升温程序为:起始温度为70℃,以10℃/min的速率升至300℃,保持7min;
质谱条件:
电压扫描范围为50~450M/z。
2.根据权利要求1所述的气质联用检测方法,其特征在于:所述生物样品为血浆、血清、尿液、唾液和毛发中至少一种;
采用固相萃取提取所述生物样品。
3.一种生物样品中pFPP的气相色谱检测方法,包括如下步骤:
(1)提取生物样品得到提取液;
(2)配制至少5种不同浓度的pFPP标准溶液,将所述标准溶液进行气相色谱检测,得到所述pFPP所对应的吸收峰的峰面积,以所述标准溶液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,制作标准曲线;
(3)将所述提取液进行所述气相色谱检测,得到所述pFPP所对应的吸收峰的峰面积,根据所述标准曲线,即得到所述提取液中所述pFPP的浓度;
所述气相色谱的检测条件如下:
载气为氮气;
色谱柱为DB-5或HP-5;
柱流量为1.0mL/min;
升温程序为:起始温度为100℃,以18℃/min的速率升至140℃,保持5min;然后以50℃/min的速率升至280℃,保持3min。
4.根据权利要求3所述的气相色谱检测方法,其特征在于:所述生物样品为血浆、血清、尿液、唾液和毛发中至少一种;
采用固相萃取提取所述生物样品;
所述标准溶液的浓度为0.001~1.0mg/mL。
5.一种生物样品中pFPP的液相色谱检测方法,包括如下步骤:
(1)提取生物样品得到提取液;
(2)配制至少5种不同浓度的pFPP标准溶液,将所述标准溶液进行液相色谱检测,得到所述pFPP所对应的吸收峰的峰面积,以所述标准溶液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,制作标准曲线;
(3)将所述提取液进行所述液相色谱检测,得到所述pFPP所对应的吸收峰的峰面积,根据所述标准曲线,即得到所述提取液中所述pFPP的浓度;
所述液相色谱的检测条件如下:
色谱柱为C18色谱柱;
柱温为35℃;
检测波长为202nm;
流动相A为pH值为7的浓度为10mM的甲酸铵水溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为1.0mL/min。
6.根据权利要求5所述的液相色谱检测方法,其特征在于:所述生物样品为血浆、血清、尿液、唾液和毛发中至少一种;
采用固相萃取提取所述生物样品;
所述标准溶液的浓度为0.001~1.0mg/mL;
所述梯度洗脱的条件如下:
0~5min,所述流动相B的体积比由5%到60%;5~10min,所述流动相B的体积比由60%到40%;10~12min,所述流动相B的体积比由40%到95%。
7.一种生物样品中pFPP的液相色谱-质谱联用检测方法,包括如下步骤:
(1)提取生物样品得到提取液;
(2)配制至少5种不同浓度的pFPP标准溶液,将所述标准溶液进行液相色谱-质谱联用检测,得到离子对为181.0-75.1所对应的吸收峰的峰面积,以所述标准溶液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,制作标准曲线;
(3)将所述提取液进行所述液相色谱-质谱联用检测,得到离子对为181.0-75.1所对应的吸收峰的峰面积,根据所述标准曲线,即得到所述提取液中所述pFPP的浓度;
所述液相色谱-质谱联用的检测条件如下:
液相色谱条件:
色谱柱为反相C18色谱柱;
柱温为35℃;
流动相A为体积浓度为0.1%的甲酸水溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为0.5mL/min;
质谱条件为:
毛细管出口电压为90V;
子离子137.9的碰撞电压为20V,子离子75.1的碰撞电压为65V;
离子源参数为:干燥气温度为350℃,干燥气流量为10L/min,雾化气压力为30psi。
8.根据权利要求7所述的液相色谱-质谱联用检测方法,其特征在于:所述生物样品为血浆、血清、尿液、唾液和毛发中至少一种;
采用固相萃取提取所述生物样品;
所述标准溶液的浓度为1~10000ng/mL;
所述梯度洗脱的条件如下:
0~8min,所述流动相B的体积比由5%调整为40%;8~8.01min,所述流动相B的体积比由40%调整为5%。
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