CN113502215B - 小反刍兽疫病毒的lamp检测方法及基于该方法的实施装置 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法及基于该方法的实施装置，包括试管，试管包括依次连通设置的实验区、连接区和密封部，连接区为柔性材料支撑且连接区中设有密封件，密封部与密封盖配合，当密封盖插入密封部中时，密封盖将密封部封闭；密封件包括回形弹片，回形弹片的两端分别通过锥形连接套与连接区两端内壁连接，当回形弹片位于初始位置时，回形弹片将实验区和密封部的连接处密封。通过在实验前将加入荧光染料，然后通过紫光灯检测，能够不用开盖检测，从而避免了因为在检测时试管内部暴露而造成气溶胶产物污染实验室的问题。

Description

小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法及基于该方法的实施装置

技术领域

本发明属于病毒检测领域，具体涉及小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法及基于该方法的实施装置。

背景技术

小反刍兽疫病毒属副黏病毒科麻疹病毒属。与牛瘟病毒有相似的物理化学及免疫学特性。病毒呈多形性，通常为粗糙的球形。病毒颗粒较牛瘟病毒大，核衣壳为螺旋中空杆状并有特征性的亚单位，有囊膜。病毒可在胎绵羊肾、胎羊及新生羊的睾丸细胞、Vero细胞上增殖，并产生细胞病变(CPE)，形成合胞体。

目前用于小反刍兽疫病毒诊断的实验室方法很多，传统的LAMP检测方法在检测的过程中，经常会试管内部暴露从而容易造成气溶胶产物污染实验室，使用效果不够好，为此我们需要一种小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法及基于该方法的实施装置。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法及基于该方法的实施装置。本发明要解决的技术问题通过以下技术方案实现：

小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，包括试管，所述试管包括依次连通设置的实验区、连接区和密封部，所述连接区为柔性材料支撑且连接区中设有密封件，所述密封部与密封盖配合，当所述密封盖插入密封部中时，所述密封盖将密封部封闭；

所述密封件包括回形弹片，所述回形弹片的两端分别通过锥形连接套与连接区两端内壁连接，当所述回形弹片位于初始位置时，所述回形弹片将实验区和密封部的连接处密封。

具体的，所述回形弹片的边沿处设置有截面形状为弧形的抵触层，通过弧形的抵触层的抵触作用，能够更好的起到密封作用。

在本发明的一个实施例中，所述连接区的外壁两侧均设有防滑部，所述防滑部位于回形弹片两端。

具体的，所述防滑部用于起到防滑作用的一侧上固定开设有防滑凸棱，所述防滑凸棱的形状为S形。

在本发明的一个实施例中，所述密封部的端口内壁设有橡胶圈，所述橡胶圈具有弹性且受压前内径小于密封盖外径。

在本发明的一个实施例中，所述密封盖还通过防丢连接件与密封部外壁连接。

在本发明的一个实施例中，还包括对比盒，所述对比盒上开设有两个用于容纳试管的放置槽，所述容纳槽一侧开设有用于观察试管的观察通道。

在本发明的一个实施例中，所述容纳槽内壁与密封部接触，所述容纳槽中远离观察通道的一侧还与连接区接触，所述防滑部正对观察通道设置。

在本发明的一个实施例中，所述对比盒远离容纳槽的一侧壳壁中还开设有背景板收纳槽，所述背景板收纳槽靠近容纳槽的一侧壳壁为可视窗口。

具体的，所述可视窗口的内侧涂有疏油层，所述疏油层的设置能够减少溶液对可视窗口的附着能力，从而能够使使用者便于通过可视窗口观察到试管内部的情况。

在本发明的一个实施例中，所述对比盒的下端还间隔设置有底座，且所述对比盒的底面通过转轴和底座转动连接，所述转轴伸入至底座内的部分包裹有一层摩擦层；

所述摩擦层上缠绕有拉绳，所述拉绳的一端伸出于底座外并和拉块固定连接且另一端和卷簧的自由端固定连接，所述卷簧远离拉绳的一端和底座固定连接；所述对比盒的底面上还固定连接有挤压块，所述底座上固定连接有多个抵触块，所述抵触块位于挤压块的移动路径上。

具体的，所述抵触块在底座上呈不规则摆放。

本发明还提供一种小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法，用于非诊断目的，采用上面任一项所述的实施装置，包括以下步骤：

步骤1：将试管的密封盖打开，打开试管中的密封件使得试管底部的实验区内部露出；

步骤2：将提取待测样品的RNA放入实验区中；

步骤3：将荧光染料加入到实验区中；

步骤4：关闭密封件使得实验区密封；

步骤5：盖上密封盖后摇晃试管；

步骤6：以提取的RNA为模板，以LAMP引物组为扩增引物，建立LAMP反应体系，将试管放在实时浊度仪进行密闭监控；

步骤7：反应程序为65℃反应50分钟，75℃灭活7分钟；

步骤8：采用紫光灯观察颜色变化。

本发明的有益效果：

1、通过设置密封件，能够在密封盖打开后以及在需要将密封盖盖上时，先对试管的实验区进行密封，避免实验区暴露的时间过长，从而影响实验环境以及实验结果。

2、通过在实验前将加入荧光染料，然后通过紫光灯检测，能够不用开盖检测，从而避免了因为在检测时试管内部暴露从而容易造成气溶胶产物污染实验室的问题。

以下将结合附图及实施例对本发明做进一步详细说明。

附图说明

图1是本发明实施例提供的一种小反刍兽疫病毒的LAMP检测实施装置的三维结构示意图；

图2是本发明实施例提供的一种小反刍兽疫病毒的LAMP检测实施装置的剖视图。

图3是本发明实施例提供的密封件的俯视图。

图4是本发明实施例提供的底座内部视图。

图5是本发明实施例提供的底座俯视图。

附图中：对比盒1、实验区2、防滑部3、连接区4、密封盖5、防丢连接件6、密封部7、背景板收纳槽8、回形弹片9、橡胶圈10、锥形连接套11、底座12、卷簧13、转轴14、摩擦层15、拉绳16、抵触块17、挤压块18。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例一

请参见图1-5，其中图1是本发明实施例提供的一种小反刍兽疫病毒的LAMP检测实施装置的三维结构示意图。

图2是本发明实施例提供的一种小反刍兽疫病毒的LAMP检测实施装置的剖视图。

图3是本发明实施例提供的密封件的俯视图。

图4是本发明实施例提供的底座的内部视图。

图5是本发明实施例提供的底座的俯视图。

小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，包括试管，试管包括依次连通设置的实验区2、连接区4和密封部7，连接区4为柔性材料支撑且连接区4中设有密封件，密封部7与密封盖5配合，当密封盖5插入密封部7中时，密封盖5将密封部7封闭。

密封件包括回形弹片9，回形弹片9的两端分别通过锥形连接套11与连接区4两端内壁连接，当回形弹片9位于初始位置时，回形弹片9将实验区2和密封部7的连接处密封。

为了起到防滑作用，连接区4的外壁两侧均设有防滑部3，防滑部3位于回形弹片9两端。密封部7的端口内壁设有橡胶圈10，橡胶圈10具有弹性且受压前内径小于密封盖5外径。在插入密封盖5后，通过对比盒1自身的弹力挤压密封盖5外壁，从而提升了对密封部7密封的作用。

密封盖5还通过防丢连接件6与密封部7外壁连接。还包括对比盒1，对比盒1上开设有两个用于容纳试管的放置槽，容纳槽一侧开设有用于观察试管的观察通道。容纳槽内壁与密封部7接触，容纳槽中远离观察通道的一侧还与连接区4接触，防滑部3正对观察通道设置。对比盒1远离容纳槽的一侧壳壁中还开设有背景板收纳槽8，背景板收纳槽8靠近容纳槽的一侧壳壁为可视窗口。

进一步的，所述对比盒1的下端还间隔设置有底座12，且所述对比盒1的底面通过转轴14和底座12转动连接，所述转轴14伸入至底座12内的部分包裹有一层摩擦层15，所述摩擦层15上缠绕有拉绳16，所述拉绳16的一端伸出于底座12外并和拉块固定连接且另一端和卷簧13的自由端固定连接，所述卷簧13远离拉绳16的一端和底座12固定连接；所述对比盒1的底面上还固定连接有挤压块18，所述底座12上固定连接有多个抵触块17，所述抵触块17位于挤压块18的移动路径上。

通过拉扯拉绳16，能够在拉绳16和摩擦层15之间的摩擦力的带动下带动所述对比盒1相对底座12转动，此时再在所述抵触块17和挤压块18之间的挤压作用下，能够使得所述对比盒1在带动试管旋转的同时发生竖直面上的摆动，进而能够提高对试管内溶液的混匀程度。

本实施例在实际应用时，使用者通过使用两个手指对准两个防滑部3挤压，使得两个回形弹片9张开，此时可以将实验溶液放到实验区2中，然后松开手，从而通过回形弹片9自身的弹力将实验区2封闭，也可以手持连接区4与防滑部3垂直的两侧挤压回形弹片9复位。

然后再盖上密封盖5，进一步提升密封的作用。进一步的，本实施例设置的对比盒1，能够将对比组和实验组放在一起，从而便于对比以及便于对实验结果的观察，设置的背景板收纳槽8，能在其中放置白色背景板或者黑色背景板等，从而便于染色情况或者沉淀物的情况进行观察对比。

实施例二

小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法，用于非诊断目的，采用上面实施例所述的实施装置，包括以下步骤：

步骤1：将试管的密封盖5打开，打开试管中的密封件使得试管底部的实验区2内部露出。

步骤2：将提取待测样品的RNA放入实验区2中。

步骤3：将荧光染料加入到实验区2中。

步骤4：关闭密封件使得实验区2密封。

步骤5：盖上密封盖5后摇晃试管。

步骤6：以提取的RNA为模板，以LAMP引物组为扩增引物，建立LAMP反应体系，将试管放在实时浊度仪进行密闭监控。

步骤7：反应程序为65℃反应50分钟，75℃灭活7分钟。

步骤8：采用紫光灯观察颜色变化。

在本发明中，所述荧光染料可以采用钙黄绿素荧光试剂。有必要说明的是，所述LAMP引物组可以引用现有技术中的引物组，本实施例不做具体限定。待测样品的RNA的提取可以使用病毒基因组RNA提取试剂盒提取试验毒株的RNA，以及疑似小反刍兽疫病毒感染引起病变组织的RNA来进行实验。

LAMP反应体系的建立可以按30μL体系配置：

有必要说明的是，通过在紫外观察，能够避免开盖跑电泳造成扩增产物气溶胶污染，而且设置的密封件进一步提升试管的密封效果。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”包括第一特征在第二特征正下方和斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，其特征在于，包括试管，所述试管包括依次连通设置的实验区(2)、连接区(4)和密封部(7)，所述连接区(4)为柔性材料支撑且连接区(4)中设有密封件，所述密封部(7)与密封盖(5)配合，当所述密封盖(5)插入密封部(7)中时，所述密封盖(5)将密封部(7)封闭；

所述密封件包括回形弹片(9)，所述回形弹片(9)的两端分别通过锥形连接套(11)与连接区(4)两端内壁连接，当所述回形弹片(9)位于初始位置时，所述回形弹片(9)将实验区(2)和密封部(7)的连接处密封。

2.根据权利要求1所述的小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，其特征在于，所述连接区(4)的外壁两侧均设有防滑部(3)，所述防滑部(3)位于回形弹片(9)两端。

3.根据权利要求2所述的小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，其特征在于，所述密封部(7)的端口内壁设有橡胶圈(10)，所述橡胶圈(10)具有弹性且受压前内径小于密封盖(5)外径。

4.根据权利要求3所述的小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，其特征在于，所述密封盖(5)还通过防丢连接件(6)与密封部(7)外壁连接。

5.根据权利要求4所述的小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，其特征在于，还包括对比盒(1)，所述对比盒(1)上开设有两个用于容纳试管的容纳槽，所述容纳槽一侧开设有用于观察试管的观察通道。

6.根据权利要求5所述的小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，其特征在于，所述容纳槽内壁与密封部(7)接触，所述容纳槽中远离观察通道的一侧还与连接区(4)接触，所述防滑部(3)正对观察通道设置。

7.根据权利要求6所述的小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，其特征在于，所述对比盒(1)远离容纳槽的一侧壳壁中还开设有背景板收纳槽(8)，所述背景板收纳槽(8)靠近容纳槽的一侧壳壁为可视窗口。

8.根据权利要求7所述的小反刍兽疫病毒的LAMP检测的实施装置，其特征在于，所述对比盒(1)的下端还间隔设置有底座(12)，且所述对比盒(1)的底面通过转轴(14)和底座(12)转动连接，所述转轴(14)伸入至底座(12)内的部分包裹有一层摩擦层(15)，所述摩擦层(15)上缠绕有拉绳(16)；

所述拉绳(16)的一端伸出于底座(12)外并和拉块固定连接且另一端和卷簧(13)的自由端固定连接，所述卷簧(13)远离拉绳(16)的一端和底座(12)固定连接；所述对比盒(1)的底面上还固定连接有挤压块(18)，所述底座(12)上固定连接有多个抵触块(17)，所述抵触块(17)位于挤压块(18)的移动路径上。

9.小反刍兽疫病毒的LAMP检测方法，其特征在于，用于非诊断目的，并采用权利要求1-8任一项所述的实施装置，包括以下骤：

步骤1：将试管的密封盖(5)打开，打开试管中的密封件使得试管底部的实验区(2)内部露出；

步骤2：将提取待测样品的RNA放入实验区(2)中；

步骤3：将荧光染料加入到实验区(2)中；

步骤4：关闭密封件使得实验区(2)密封；

步骤5：盖上密封盖(5)后摇晃试管；

步骤6：以提取的RNA为模板，以LAMP引物组为扩增引物，建立LAMP反应体系，将试管放在实时浊度仪进行密闭监控；

步骤7：反应程序为65℃反应50分钟，75℃灭活7分钟；

步骤8：采用紫光灯观察颜色变化。

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