CN113499280B - 一种双色双形态冻干制品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种双色双形态冻干制品及其制备方法。所述双色双形态冻干制品包括红色絮状冻干制品层和白色粉状冻干制品层；其中，所述红色絮状冻干制品层包括：氰钴胺和第一活性物质；所述白色粉状冻干制品层包括：第二活性物质和赋形剂。所述双色双形态冻干制品因其存在两个不同体系，不同体系可承载不同种类原料，一瓶可承载更多种类原料，可将一些特殊原料置于一瓶冻干，避免配方和工艺的复杂，增加了单瓶冻干制品的多样性，功效全面且肤感优异，外观新颖美丽。

Description

一种双色双形态冻干制品及其制备方法
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种双色双形态冻干制品及其制备方法。
背景技术
近年来，以生物多肽护肤和现代高新科技相结合的新产品为开发热点，冻 干技术因其特有的技术优势，可做出安全有效无防腐和添加剂的冻干制品，因 而深受市场欢迎。其冻干原理为：先将溶液冻结至冰点之下，使原料中的水分 变为固态冰，然后在适当的真空环境下，将冰直接转化为蒸汽而除去，再用真 空系统中的水汽凝结器将水蒸汽冷凝，从而使物料得到干燥。生产方法为：将 物料配制成水溶液装入特定容器置于冻干机冷冻干燥，使用前加溶媒溶解。目 前，国内外生产的冻干粉或冻干絮，状态单一，颜色单一，成分简单，功效不 全。有些原料是混合物，在做成冻干制品时会加大配方难度，或者复杂工艺， 尤其是冻干工艺，某些特殊原料在冻干后外观异样，造成产品稳定性差。
CN109512697A公开了一种鸡尾酒法双色冻干粉，包含上层冻干粉和下层冻 干粉；所述上层冻干粉包含寡肽-1、寡肽-3和赋形剂A；所述下层冻干粉包含三 肽-1铜、肌肽和赋形剂B；所述赋形剂A的比重小于赋形剂B。该发明所述冻 干粉通过不同功效添加成分适宜存于不同的体系里，两个体系可以添加更多的 功效添加剂，不同体系间功效添加剂冻干前不易相互作用，冻干后更加稳定， 宜于长期存放，使用时用溶媒复溶为一个体系，但某些原料在冻干后外观异样， 造成产品稳定性差，而且赋形剂使用量与功效成分量成正比，加大了赋形剂的 使用。
CN111514064A公开了一种西林瓶冻干面膜，所述西林瓶冻干面膜由冻干部 分和溶媒部分组成；所述冻干粉部分由以下重量份原料制成：85～100份去离子 水、2～6份甘露糖醇、0.5～2份烟酰胺、0.6～1.8份NB835、0.6～1.2份海藻糖、 0.2～0.6份蓝铜肽、0.15～0.25份磷酸氢二钠、0.08～0.18份氯化钠、0.05～0.15份 四氢甲基嘧啶羧酸、0.05～0.15份磷酸二氢钠。所述的西林瓶冻干面膜采用所西 林瓶储存包装，能够有效的保护活性成分，该冻干面膜同样存在状态单一，颜 色单一，成分简单，功效不全的问题。
因此，开发一种同时具备功效全面、肤感优异，外观新颖美丽的冻干制品 是本领域研究的重点。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种双色双形态冻干制 品及其制备方法。本发明所述双色双形态冻干制品功效全面且肤感优异，外观 新颖美丽。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种双色双形态冻干制品，所述双色双形态冻干制 品包括红色絮状冻干制品层和白色粉状冻干制品层；
其中，所述红色絮状冻干制品层包括：氰钴胺和第一活性物质；所述白色 粉状冻干制品层包括：第二活性物质和赋形剂。
在本发明中，按照该方法制得的双色双形态冻干制品因其存在两个不同体 系，不同体系可承载不同种类原料，所述双色双形态冻干制品可承载更多种类 原料，可将一些特殊原料置于一瓶冻干，避免配方和工艺的复杂，增加了单瓶 冻干制品的多样性，功效全面且肤感优异，外观新颖美丽。
优选地，所述红色絮状冻干制品层和所述白色粉状冻干制品层的质量比为 (1-10):(20-100)；
其中，“1-10”例如可以是1、2、4、6、8、10等；
其中，“20-100”例如可以是20、30、40、50、60、70、80、90、100等。
优选地，所述红色絮状冻干制品层和所述白色粉状冻干制品层的厚度比为 (3-7):(4-10)；
其中，“3-7”例如可以是3、4、5、6、7等；
其中，“4-10”例如可以是4、5、6、7、8、9、10等。
优选地，所述氰钴胺和第一活性物质的质量比为(0.001-0.2):(0.1-10)；
其中，“0.001-0.2”例如可以是0.001、0.005、0.1、0.15、0.2等；
其中，“0.1-10”例如可以是0.1、0.5、1、2、4、6、8、10等。
优选地，所述第一活性物质包括：透明质酸钠、铁皮石斛多糖、海藻糖、III 型胶原或多聚脱氧核糖核苷酸中的任意一种或至少两种的组合，优选为透明质 酸钠、铁皮石斛多糖、海藻糖、III型胶原和多聚脱氧核糖核苷酸的组合。
在本发明中，采用透明质酸钠、铁皮石斛多糖、海藻糖、III型胶原和多聚 脱氧核糖核苷酸相互配合，具有协同增效的作用，使得所述冻干制品能够抵抗 自由基，抑制炎症因子，减少氧化损伤；充分锁水保湿，修复肌肤屏障；并进 一步地提高肌肤免疫力和皮肤细胞的自我修护能力，促生胶原蛋白和弹力纤维。
优选地，所述第一活性物质按重量份数计包括：透明质酸钠0.1-0.5份、铁 皮石斛多糖0.01-1份、海藻糖0.1-0.5份、III型胶原0.1-2份和多聚脱氧核糖核 苷酸0.1-0.2份。
在所述第一活性物质中，透明质酸钠含量为0.1-0.5份，例如可以是0.1份、 0.2份、0.3份、0.4份、0.5份等。
在所述第一活性物质中，铁皮石斛多糖含量为0.01-1份，例如可以是0.01 份、0.1份、0.3份、0.5份、0.7份、0.9份、1份等。
在所述第一活性物质中，海藻糖含量为0.1-0.5份，例如可以是0.1份、0.2 份、0.3份、0.4份、0.5份等。
在所述第一活性物质中，III型胶原含量为0.1-2份，例如可以是0.1份、0.3 份、0.6份、0.8份、1.3份、1.5份、2份等。
在所述第一活性物质中，多聚脱氧核糖核苷酸含量为0.1-0.2份，例如可以 是0.1份、0.12份、0.14份、0.16份、0.18份、0.2份等。
优选地，所述第二活性物质和赋形剂的质量比为(0.1-2.5):(20-100)；
其中，“0.1-2.5”例如可以是0.1、0.5、1、1.5、2、2.5等；
其中，“20-100”例如可以是20、40、60、80、100等。
优选地，所述第二活性物质包括：透明质酸钠、海藻酸钠、寡肽-3或肌肽 中的任意一种或至少两种的组合，优选为透明质酸钠、海藻酸钠、寡肽-3和肌 肽的组合。
在本发明中，所述透明质酸钠、海藻酸钠、寡肽-3和肌肽相互配合，具有 协同增效的作用，不仅能够促进肌肤对于第一活性物质的吸收，而且还能够使 所述冻干粉具有抑制黑色素，美白肌肤；并进一步地提高收缩毛孔和补水保湿 能力，并能够增强肌肤的光泽度和紧致度。
优选地，所述第二活性物质按重量份数计包括：透明质酸钠0.1-0.5份、海 藻酸钠0.1-0.5份、寡肽-30.1-0.5份和肌肽0.5-1份。
在所述第二活性物质中，透明质酸钠含量为0.1-0.5份，例如可以是0.1份、 0.2份、0.3份、0.4份、0.5份等。
在所述第二活性物质中，海藻酸钠含量为0.1-0.5份，例如可以是0.1份、 0.2份、0.3份、0.4份、0.5份等。
在所述第二活性物质中，寡肽-3含量为0.1-0.5份，例如可以是0.1份、0.2 份、0.3份、0.4份、0.5份等。
在所述第二活性物质中，肌肽含量为0.5-1份，例如可以是0.5份、0.6份、 0.7份、0.8份、0.9份、1份等。
优选地，所述赋形剂为甘露醇。
在本发明中，下层冻干粉采用甘露醇作为赋形剂，可承载更多种类原料； 双层冻干粉的联用增加单瓶功效的同时，减少了赋形剂的使用，也给使用者带 来新奇美丽的视觉享受。
优选地，所述白色粉状冻干制品层还包括：冻干保护剂和/或缓冲剂。
优选地，所述冻干保护剂为甘氨酸。
优选地，所述冻干保护剂占所述白色粉状冻干制品层总质量的0.1-2％，例 如可以是0.1％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、 2％等。
优选地，所述缓冲剂为磷酸氢二钠和/或磷酸二氢钠。
优选地，所述缓冲剂占所述白色粉状冻干制品层总质量的0.01-2％，例如可 以是0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％、1.2％、1.4％、1.6％、 1.8％、2％等。
优选地，所述双色双形态冻干制品包括红色絮状冻干制品层和白色粉状冻 干制品层；
所述红色絮状冻干制品层由如下组分组成：
Figure BDA0003158163370000051
Figure BDA0003158163370000061
所述白色粉状冻干制品层由如下组分组成：
Figure BDA0003158163370000062
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的双色双形态冻干制品的制备 方法，所述双色双形态冻干制品的制备方法包括以下步骤：
(1)将红色絮状冻干制品层中各组分溶解，得到红色混合液；将白色粉状 冻干制品层中各组分溶解，得到无色混合液；
(2)先将所述无色混合液灌装于西林瓶中；再将所述红色混合液灌装于西 林瓶中，得到分层双色溶液；
(3)将所述分层双色溶液进行冷冻干燥，得到所述双色双形态冻干制品。
由于本发明利用上下两层溶液的密度差异及流体的内摩擦力使其分层。采 用两次灌装，一次冻干能够隔绝两个体系，防止其互溶导致原料之间相互作用， 致使冻干效果不佳。上层冻干体系采取透明质酸钠、III型胶原、黄原胶等大分 子原料冻干后可呈絮状，冻干絮的出现可将功效原料直接冻干，减少其他无功 效赋形剂的使用，且冻干絮更易冻干，但因其絮状的结构，某些原料无法在冻 干絮体系中进行冻干。下层冻干粉采用甘露醇作为赋形剂，可承载更多种类原 料，但其承载量与赋形剂使用量成正比关系，肤感相对较差，两者联用增加单 瓶功效的同时，减少了赋形剂的使用，也给使用者带来新奇美丽的视觉享受。
优选地，步骤(1)中，所述红色混合液和所述无色混合液的密度差为20-60 g/cm3，例如可以是20g/cm3、25g/cm3、30g/cm3、35g/cm3、40g/cm3、45g/cm3、 50g/cm3、55g/cm3、60g/cm3等。
优选地，所述红色混合液和所述无色混合液的黏滞系数比为1:(2-4)，例如 可以是1:2、1:2.2、1:2.4、1:2.6、1:2.8、1:3、1:3.2、1:3.4、1:3.6、1:3.8、1:4等。
优选地，步骤(1)中，所述溶解所用溶剂均为水。
优选地，步骤(1)中，所述红色混合液中溶质的质量百分含量为1-10wt％， 例如可以是1wt％、2wt％、4wt％、6wt％、8wt％、10wt％等。
优选地，步骤(1)中，所述无色混合液中溶质的质量百分含量为10-30wt％， 例如可以是10wt％、15wt％、20wt％、25wt％、30wt％等。
优选地，步骤(3)中，所述冷冻干燥采用设定冻干曲线的方式进行冻干， 所述冻干曲线如下所示：
(a)将温度降至-50～-40℃(例如可以是-50℃、-48℃、-46℃、-44℃、-42℃、 -40℃等)，保持110-130min(例如可以是110min、115min、120min、125min、 130min等)；
(b)使真空度维持在0.8-1.2Pa(例如可以是0.8Pa、0.9Pa、1.0Pa、1.1Pa、 1.2Pa等)；
(c)在15-25min(例如可以是15min、17min、19min、21min、23min、 25min等)内将温度升至-35～-25℃(例如可以是-35℃、-33℃、-31℃、-29℃、 -27℃、-25℃等)，保持140-160min(例如可以是140min、145min、150min、 155min、160min等)；
(d)在25-35min(例如可以是25min、27min、29min、31min、33min、35min等)内将温度升至-15～-5℃(例如可以是-15℃、-13℃、-11℃、-9℃、-7℃、 -5℃等)，保持140-160min(例如可以是140min、145min、150min、155min、 160min等)；
(e)在15-25min(例如可以是15min、17min、19min、21min、23min、 25min等)内将温度升至-5～5℃(例如可以是-5℃、-3℃、-1℃、1℃、3℃、5℃ 等)，保持300-420min(例如可以是300min、320min、340min、360min、380 min、400min、420min等)，使真空度维持在在0.3-0.7Pa(例如可以是0.3Pa、 0.4Pa、0.5Pa、0.6Pa、0.7Pa等)；
(f)在15-25min(例如可以是15min、17min、19min、21min、23min、 25min等)内将温度升至10～20℃(例如可以是10℃、12℃、14℃、16℃、18℃、 20℃等)，保持110-130min(例如可以是110min、115min、120min、125min、 130min等)；
(g)在15-25min(例如可以是15min、17min、19min、21min、23min、 25min等)内将温度升至35～45℃(例如可以是35℃、37℃、39℃、41℃、43℃、 45℃等)，保持110-130min(例如可以是110min、115min、120min、125min、 130min等)；停止加热，补充净化空气至真空度达到0.5Pa以上(例如可以是 0.5Pa、0.52Pa、0.55Pa、0.6Pa等)，压力达到500Pa以上(例如可以是500Pa、 501Pa、505Pa、510Pa等)即通过压力升测试，进行机器自动压塞，后以20-30Pa/min(20Pa/min、22Pa/min、24Pa/min、26Pa/min、28Pa/min、30Pa/min等) 的速度使气压与外界大气压平衡，最后取出所述的双色双形态冻干制品成品。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)按照该方法制得的双色双形态冻干制品因其存在两个不同体系，不同 体系可承载不同种类原料，一瓶可承载更多种类原料，可将一些特殊原料置于 一瓶冻干，避免配方和工艺的复杂，增加了单瓶冻干制品的多样性，功效全面 且肤感优异，外观新颖美丽；
(2)由于本发明采用两次灌装，一次冻干能够隔绝两个体系，防止其互溶 导致原料之间相互作用，致使冻干效果不佳。上层冻干体系采取透明质酸钠、III 型胶原、黄原胶等大分子原料冻干后可呈絮状，冻干絮的出现可将功效原料直 接冻干；
(3)下层冻干粉采用甘露醇作为赋形剂，可承载更多种类原料，但其承载 量与赋形剂使用量成正比关系，肤感相对较差，两者联用增加单瓶功效的同时， 减少了赋形剂的使用，也给使用者带来新奇美丽的视觉享受。
附图说明
图1为本发明所述双色双形态冻干制品的外观图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领 域技术人员应该明了，所述具体实施方式仅仅是帮助理解本发明，不应视为对 本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种所述的双色双形态冻干制品，所述双色双形态冻干制品 包括红色絮状冻干制品层和白色粉状冻干制品层(如图1所示)，其中，所述红 色絮状冻干制品层和所述白色粉状冻干制品层的质量比为1:38，厚度比为1:1；
具体成分如下所示：
Figure BDA0003158163370000091
Figure BDA0003158163370000101
本实施例所述双色双形态冻干制品的制备方法包括如下步骤：
(1)在100g水中加入0.1g的多聚脱氧核糖核苷酸、0.1g的透明质酸钠、 0.5g III型胶原、0.5g铁皮石斛多糖、0.2g海藻糖、0.01g氰钴胺混合均匀，制 备出有肤感的红色澄清透明液体；在100g水中加入0.5g透明质酸钠、0.5g海 藻酸钠、50g甘露醇、0.15g磷酸氢二钠、0.1g磷酸二氢钠、1g甘氨酸、0.5g 寡肽-3、0.5g肌肽搅拌均匀，制备成无色澄清透明液体；其中，红色混合液和 无色混合液的密度差为51g/cm3，黏滞系数比为1:3；
(2)先将1g无色混合液灌装于西林瓶中；再将1g红色混合液灌装于西 林瓶中，得到上层红色下层无色的溶液；
(3)将分层的双色溶液进行冷冻干燥，得到所述双色双形态冻干制品；
其中，冻干曲线如下所示：
(a)将温度降至-45℃，保持120min；
(b)抽真空使真空度维持在1Pa；
(c)在20min内将温度升至-30℃，保持150min；
(d)在30min内将温度升至-10℃，保持150min；
(e)在20min内将温度升至0℃，保持360min，抽真空使真空度维持在 0.5Pa；
(f)在20min内将温度升至15℃，保持120min；
(g)在20min内将温度升至40℃，保持120min；停止加热，补充净化空 气至真空度达到0.5Pa，以0.2pa/2-3min为标准测压力，压力达到500Pa即通 过压力升测试，后进行机器自动压塞，以25Pa/min的速度使气压与外界大气压 平衡，最后取出所述的双色双形态冻干制品成品。
实施例2
本实施例提供一种所述的双色双形态冻干制品，所述双色双形态冻干制品 包括红色絮状冻干制品层和白色粉状冻干制品层，其中，所述红色絮状冻干制 品层和所述白色粉状冻干制品层的质量比为1:43，厚度比为1:1；
具体成分如下所示：
Figure BDA0003158163370000111
本实施例所述双色双形态冻干制品的制备方法包括如下步骤：
(1)在100g水中加入0.2g的多聚脱氧核糖核苷酸、0.5g的透明质酸钠、 0.1g III型胶原、0.01g铁皮石斛多糖、0.5g海藻糖、0.02g氰钴胺混合均匀， 制备出有肤感的红色澄清透明液体；在100g水中加入0.2g透明质酸钠、0.3g 海藻酸钠、55g甘露醇、0.3g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钠、0.5g甘氨酸、0.3 g寡肽-3、0.7g肌肽搅拌均匀，制备成无色澄清透明液体；其中，红色混合液和 无色混合液的密度差为56g/cm3，黏滞系数比为1:3；
(2)先将1g无色混合液灌装于西林瓶中；再将1g红色混合液灌装于西 林瓶中，得到上层红色下层无色的溶液；
(3)将分层的双色溶液进行冷冻干燥，得到所述双色双形态冻干制品；
其中，冻干曲线如下所示：
(a)将温度降至-45℃，保持120min；
(b)抽真空使真空度维持在1Pa；
(c)在20min内将温度升至-30℃，保持150min；
(d)在30min内将温度升至-10℃，保持150min；
(e)在20min内将温度升至0℃，保持360min，抽真空使真空度维持在 0.5Pa；
(f)在20min内将温度升至15℃，保持120min；
(g)在20min内将温度升至40℃，保持120min；停止加热，补充净化空 气至真空度达到0.5Pa，以0.2pa/2-3min为标准测压力，压力达到500Pa即通 过压力升测试，后进行机器自动压塞，以25Pa/min的速度使气压与外界大气压 平衡，最后取出所述的双色双形态冻干制品成品。
实施例3-7
本实施例提供5种所述的双色双形态冻干制品，与实施例1的区别仅在于， 红色絮状冻干制品层中各组分配比不同，其他组分含量及制备方法同实施例1，
红色絮状冻干制品层区别具体如下所示：
Figure BDA0003158163370000121
实施例8-11
本实施例提供4种所述的双色双形态冻干制品，与实施例1的区别仅在于， 白色粉状冻干制品层中各组分配比不同，其他组分含量及制备方法同实施例1，
白色粉状冻干制品层区别具体如下所示：
Figure BDA0003158163370000131
实施例12
本实施例提供一种所述的双色双形态冻干制品，与实施例1的区别仅在于， 冻干曲线的程序不同，所诉冻干曲线为：
(a)将温度降至-45℃，保持150min；
(b)抽真空使真空度维持在1Pa；
(c)在20min内将温度升至-18℃，保持360min；
(d)在30min内将温度升至5℃，保持540min，抽真空使真空度维持在 0.5Pa；
(f)在30min内将温度升至40℃，保持120min后停止加热补充净化空气 至真空度达到0.01Pa/min，压力升测试通过后，进行机器自动压塞，后以25 Pa/min的速度使气压与外界大气压平衡，打开箱门，取出后按瓶型轧盖即可
对比例1
本对比例提供一种所述的单色单形态冻干制品，所述单色单形态冻干制品 仅包括红色絮状冻干制品层，但总厚度与实施例1双层产品相同；
具体成分如下所示：
Figure BDA0003158163370000141
本对比例所述单色单形态冻干制品的制备方法包括如下步骤：
(1)在100g水中加入0.1g的多聚脱氧核糖核苷酸、0.1g的透明质酸钠、 0.5g III型胶原、0.5g铁皮石斛多糖、0.2g海藻糖、0.01g氰钴胺混合均匀，制 备出有肤感的红色澄清透明液体；
(2)按每瓶2g的灌装量灌装上述红色澄清透明液体；然后将灌装完成的 西林瓶半加塞置于冻干机，选择冻干曲线进行冻干，冻干后压塞，轧盖，即得 上层红色絮状冻干制品；其中，所诉冻干曲线同实施例1。
对比例2
本对比例提供一种所述的单色单形态冻干制品，所述单色单形态冻干制品 仅包括白色粉状冻干制品层，但总厚度与实施例1双层产品相同；
具体成分如下所示：
Figure BDA0003158163370000142
本对比例所述单色单形态冻干制品的制备方法包括如下步骤：
(1)在100g水中加入0.5g透明质酸钠、0.5g海藻酸钠、50g甘露醇、0.15g 磷酸氢二钠、0.1g磷酸二氢钠、1g甘氨酸、0.5g寡肽-3、0.5g肌肽搅拌均匀， 制备成无色澄清透明液体；
(2)在配制前洗好西林瓶，并进行干热灭菌，取灭菌冷却后的西林瓶按每 瓶2g的灌装量灌装上述无色澄清透明液体；在灌装前使冻干机板层温度降至 -30℃，灌装好的溶液置于冻干机冰冻，待冻实后取出，得到所述单色单形态冻 干制品。
试验例1
安全性能测试
对实施例1-12提供的冻干制品和对比例1-2提供的冻干制品进行安全性能 测试，方法如下：
(1)红细胞溶血实验
红细胞悬液的制备：选择健康家兔，心脏取血9mL，加入2％的草酸钾溶 液1mL，离心，弃去上清液，用20mmol/L的PBS溶液将沉淀物稀释至20mL， 4℃保存备用。选择样品用PBS溶液稀释至不同浓度，每个样品设置5个浓度梯 度。取10mL待测样品的稀释液，加入200μL上述红细胞悬液(控制样品终浓 度分别为5、10、20、50、100mg/mL)，以蒸馏水作为全溶血对照，PBS溶液 作为阴性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心10min，取上清液，用分光光度计测试其在560nm处的吸光度(A560)，按如下公 式计算溶血率；
Figure BDA0003158163370000151
绘制溶血率～样品浓度标准曲线，计算50％红细胞发生溶血时的样品浓度(HD50)。
(2)蛋白变性实验：
将样品用PBS溶液稀释至10g/L，取10mL待测样品的稀释液，加入200μL 上述红细胞悬液，以蒸馏水作为空白对照，1mg/mL十二烷基硫酸钠(SDS)溶 液作为阳性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心 10min，取上清液，用分光光度计分别测试其在540nm和575nm处的吸光度 A540和A575，按照如下公式计算蛋白变性指数(DI)；
Figure BDA0003158163370000161
其中，R1＝空白对照组A575/空白对照组A540，R2＝实验组A575/实验组A540， R3＝阳性对照组A575/阳性对照组A540。
根据L/D值对待测样品的刺激性进行评价，其中L/D值为HD50/DI，红细胞 溶血实验刺激性分级标准如下表1所示：
表1
L/D 分级
>100 无刺激性
10<L/D≤100 微刺激性
1<L/D≤10 轻度刺激性
0.1<L/D≤1 中度刺激性
上述红细胞溶血实验和蛋白变性实验的测试结果如下表2所示：
表2
Figure BDA0003158163370000162
Figure BDA0003158163370000171
由实施例1～8提供的冻干制品和性能测试可知，本发明提供的冻干制品刺 激性分级为无刺激性，说明本发明提供的冻干制品具有温和无刺激的特点。
试验例2
保湿性能测试
对实施例1-12和对比例1-2提供的冻干制品进行保湿性能测试，方法如下：
(1)经皮失水变化率：仪器为德国CK公司的TewameterTM300，测试外 部环境：室温25℃，湿度60％。选取140名皮肤健康的18～40岁的志愿者，男 女比例各占一半，随机分成14组，每组5名男性、5名女性，分别使用实施例 1-12和对比例1-2提供的冻干制品。在使用前皮肤组合物前，以及连续使用4 天后，分别测试各位受试者的经皮失水变化率(以使用前为100％计)，每个数 据测试三次，取平均值后，计算每组平均值，保留小数点后一位。
(2)水分保持率：仪器为德国Courage+Khazaka electronic型号：Derma UnitSSC，测试温度25℃，湿度60％。选取110名皮肤健康的18～40岁的志愿 者，男女比例各占一半，随机分成11组，每组5名男性、5名女性，分别使用 实施例1-12和对比例1-2提供的冻干制品。在使用前以及使用4h后分别测试各 位受试者的皮肤水分含水量(以使用前为100％计)，每个数据测试三次，取平 均值后，计算每组平均值，保留小数点后一位。
(3)体外称重法保湿性能测试：称取样品0.2g，分别均匀涂敷在贴有微孔 通气胶带的5cm×5cm的玻璃板上，并将玻璃板放入恒温恒湿的干燥器中，分 别称量玻璃板放置4h后的质量，计算其保湿率。保湿率计算公式为：保湿率 /％＝(M2～M0)/(M1～M0)×100％。
其中，M0为玻璃板板质量/g，M1为加样后玻璃板质量/g，M2为干燥器中放 置若干小时后玻璃板质量/g。
具体测试结果如表3所示：
表3
测试样品 经皮失水变化率/％ 水分保持率/％ 保湿率/％
实施例1 91.02 90.55 94.29
实施例2 95.64 92.58 92.14
实施例3 89.51 86.24 84.67
实施例4 92.57 90.35 90.36
实施例5 95.23 94.91 89.99
实施例6 86.25 94.56 91.62
实施例7 95.13 93.21 90.03
实施例8 90.51 86.24 85.67
实施例9 89.15 88.24 84.63
实施例10 92.58 95.10 93.19
实施例11 93.58 91.56 94.19
实施例12 95.63 92.47 93.93
对比例1 123.20 75.64 76.21
对比例2 115.94 79.61 73.58
由上述测试数据可知，本实施例1-12提供的冻干制品经皮失水变化率在 86％以下，水分保持率在86％以上，体外称重法测得的保湿率在84％以上，这 充分说明本发明所述冻干制品各组分相互配合，帮助强化和恢复肌肤保湿状态， 长效保湿。
试验例3
抗氧化性能测试
(1)对超氧阴离子自由基清除能力评价
取0.05mol/L pH＝8.2的Tris-HCl缓冲溶液4.5mL，于25℃水浴锅中预热 30min。再加入1mL试样和0.4mL 25mol/L的邻苯三酚溶液，混匀后，于25℃ 水浴中反应5min，加入8mol/L的HCl 1.0mL终止反应。以Tris-HCl缓冲溶液作 参比，在299nm处测吸光度值。空白对照用1mL试样的溶剂来替代样品。所述 超氧阴离子自由基清除率(％)＝[1-(A2/A1)]×100％，式中A1为空白对照的吸光度 值；A2为对应样品的吸光度值。
(2)对羟自由基的清除能力评价
在25mL比色皿中依次加入2mmol/L FeSO43mL，1mmol/L H2O23mL，摇 匀，接着加入6mmol/L水杨酸3mL，摇匀，于37℃水浴加热15min后取出， 测其吸光度；分别加入待测液，摇匀，继续水浴加热15min，取出测其吸光度。 所述羟自由基清除率(％)＝[A0-Ax-(A0-Ax0)]/A0×100％，式中A0为未加样品前反 应体系的吸光度值；Ax为样品清除羟自由基后体系的吸光度值；Ax0为空白对照 清除羟自由基后体系的吸光度值。
具体测试结果如表4所示：
表4
Figure BDA0003158163370000191
Figure BDA0003158163370000201
由上述测试数据可知，本发明实施例1-12提供的冻干制品超氧阴离子自由 基清除率和羟自由基清除率均在70％以上，这充分说明本发明所述冻干制品各 组分相互配合，协同增效具有很好的清除自由基的功效，恢复皮肤抗氧化的保 护能力。
试验例4
抗衰祛皱功效测试
促进弹性蛋白生成实验：将人成纤维细胞按照2×104个/孔的密度接种在96 孔板上，加入新鲜培养基在37℃培养箱中培养24h，待细胞贴壁后，更换新的 培养基，并分别加入实施例1-12和对比例1-2提供的冻干制品(控制样品终浓 度为50mg/mL)，以20mmol/L的PBS溶液作为空白对照，然后在37℃培养箱 中培养2天。
培养结束后，利用细胞裂解液将细胞洗脱下来，并超声破碎。采用Biocolor 弹性蛋白检测试剂盒对弹性蛋白的含量进行检测：用弹性蛋白沉淀剂处理样本， 使弹性蛋白沉淀下来，离心分离，去除上清液，向沉淀中加入染料和反应液， 反应形成弹性蛋白-染料复合物，离心分离并用PBS溶液洗涤三次，去除未结合 的染料，添加染料释放剂，使弹性蛋白-染料复合物中的染料释放出来，采用分 光光度计测定样品在513nm处的吸光度。根据吸光度-染料浓度标准曲线计算弹 性蛋白的表达量(实施例和对比例中弹性蛋白表达量是相对于空白组的相对表 达量，空白组的表达量计为1)，测试结果见表5。
表5
测试样品 弹性蛋白表达量
实施例1 7.8
实施例2 8.0
实施例3 7.2
实施例4 6.5
实施例5 7.6
实施例6 6.9
实施例7 6.2
实施例8 7.1
实施例9 7.3
实施例10 6.1
实施例11 6.5
实施例12 8.2
对比例1 3.9
对比例2 4.2
由表5的测试结果可以看出，试用实施例1-12提供的冻干制品弹性蛋白表 达量在6以上，而试用对比例1-2提供的冻干制品弹性蛋白表达量则要低得多。 这充分说明本发明所述各组分相互配合，协同增效，促进了细胞生长，正在修 复皮肤屏障，增加皮肤弹性。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明所述双色双形态冻干制品及其 制备方法，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述 实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进， 对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落 在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (15)

1.一种双色双形态冻干制品，其特征在于，所述双色双形态冻干制品由红色絮状冻干制品层和白色粉状冻干制品层组成；所述红色絮状冻干制品层和所述白色粉状冻干制品层的质量比为(1-10):(20-100)；
其中，所述红色絮状冻干制品层包括：氰钴胺和第一活性物质；所述白色粉状冻干制品层包括：第二活性物质和赋形剂；
所述氰钴胺和第一活性物质的质量比为(0.001-0.2):(0.1-10)；所述第一活性物质按重量份数计包括：透明质酸钠0.1-0.5份、铁皮石斛多糖0.01-1份、海藻糖0.1-0.5份、III型胶原0.1-2份和多聚脱氧核糖核苷酸0.1-0.2份；
所述第二活性物质和赋形剂的质量比为(0.1-2.5):(20-100)；所述第二活性物质按重量份数计包括：透明质酸钠0.1-0.5份、海藻酸钠0.1-0.5份、寡肽-3 0.1-0.5份和肌肽0.5-1份；
所述赋形剂为甘露醇。
2.根据权利要求1所述的双色双形态冻干制品，其特征在于，所述红色絮状冻干制品层和所述白色粉状冻干制品层的厚度比为(3-7):(4-10)。
3.根据权利要求1所述的双色双形态冻干制品，其特征在于，所述白色粉状冻干制品层还包括：冻干保护剂和/或缓冲剂。
4.根据权利要求3所述的双色双形态冻干制品，其特征在于，所述冻干保护剂为甘氨酸。
5.根据权利要求3所述的双色双形态冻干制品，其特征在于，所述冻干保护剂占所述白色粉状冻干制品层总质量的0.1-2%。
6.根据权利要求3所述的双色双形态冻干制品，其特征在于，所述缓冲剂为磷酸氢二钠和/或磷酸二氢钠。
7.根据权利要求3所述的双色双形态冻干制品，其特征在于，所述缓冲剂占所述白色粉状冻干制品层总质量的0.01-2%。
8.根据权利要求1所述的双色双形态冻干制品，其特征在于，所述双色双形态冻干制品由红色絮状冻干制品层和白色粉状冻干制品层组成；所述红色絮状冻干制品层和所述白色粉状冻干制品层的质量比为(1-10):(20-100)；
所述红色絮状冻干制品层由如下组分组成：
氰钴胺 0.001-0.02份
透明质酸钠 0.1-0.5份
铁皮石斛多糖 0.01-1份
海藻糖 0.1-0.5份
III型胶原 0.1-2份
多聚脱氧核糖核苷酸 0.1-0.2份；
所述白色粉状冻干制品层由如下组分组成：
透明质酸钠 0.1-0.5份
海藻酸钠 0.1-0.5份
寡肽-3 0.1-0.5份
肌肽 0.5-1份
甘露醇 20-80份
冻干保护剂 0.5-1份
缓冲剂 0.1-0.5份。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的双色双形态冻干制品的制备方法，其特征在于，所述双色双形态冻干制品的制备方法包括以下步骤：
（1）将红色絮状冻干制品层中各组分溶解，得到红色混合液；将白色粉状冻干制品层中各组分溶解，得到无色混合液；
（2）先将所述无色混合液灌装于西林瓶中；再将所述红色混合液灌装于西林瓶中，得到分层双色溶液；
（3）将所述分层双色溶液进行冷冻干燥，得到所述双色双形态冻干制品。
10.根据权利要求9所述的双色双形态冻干制品的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述红色混合液和所述无色混合液的密度差为20-60 g/cm3。
11.根据权利要求9所述的双色双形态冻干制品的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述红色混合液和所述无色混合液的黏滞系数比为1:(2-4)。
12.根据权利要求9所述的双色双形态冻干制品的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述溶解所用溶剂均为水。
13.根据权利要求9所述的双色双形态冻干制品的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述红色混合液中溶质的质量百分含量为1-10 wt%。
14.根据权利要求9所述的双色双形态冻干制品的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述无色混合液中溶质的质量百分含量为10-30 wt%。
15.根据权利要求9所述的双色双形态冻干制品的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述冷冻干燥采用设定冻干曲线的方式进行冻干，所述冻干曲线如下所示：
（a）将温度降至-50~-40℃，保持110-130 min；
（b）使真空度维持在0.8-1.2 Pa；
（c）在15-25 min内将温度升至-35~-25℃，保持140-160 min；
（d）在25-35 min内将温度升至-15~-5℃，保持140-160 min；
（e）在15-25 min内将温度升至-5~5℃，保持300-420 min，使真空度维持在在0.3-0.7Pa；
（f）在15-25 min内将温度升至10~20℃，保持110-130 min；
（g）在15-25 min内将温度升至35~45℃，保持110-130 min；停止加热，补充净化空气至真空度达到0.5 Pa以上，以0.1-0.3 pa/2-3min为标准测压力，压力达到500 Pa以上即通过压力升测试，后进行机器自动压塞，以20-30 Pa/min的速度使气压与外界大气压平衡，最后取出所述的双色双形态冻干制品成品。
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