CN115644170A - 一种经血保存液及制备方法和应用 - Google Patents
一种经血保存液及制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115644170A CN115644170A CN202211452208.8A CN202211452208A CN115644170A CN 115644170 A CN115644170 A CN 115644170A CN 202211452208 A CN202211452208 A CN 202211452208A CN 115644170 A CN115644170 A CN 115644170A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- menstrual blood
- solution
- anticoagulant
- antibiotic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 title claims abstract description 72
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 57
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 239000012530 fluid Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 73
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 23
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims abstract description 21
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 238000004555 blood preservation Methods 0.000 claims abstract description 18
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 29
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 24
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 19
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 17
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 14
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 14
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 13
- 241000382455 Angelica sinensis Species 0.000 claims description 11
- 235000011034 Rubus glaucus Nutrition 0.000 claims description 11
- 244000235659 Rubus idaeus Species 0.000 claims description 11
- 235000009122 Rubus idaeus Nutrition 0.000 claims description 11
- 241000304195 Salvia miltiorrhiza Species 0.000 claims description 11
- 235000011135 Salvia miltiorrhiza Nutrition 0.000 claims description 11
- 244000237330 gutta percha tree Species 0.000 claims description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 8
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 7
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 claims description 3
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 3
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 3
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims description 3
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims description 3
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 claims description 3
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims description 3
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 claims description 3
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims description 3
- 235000013905 glycine and its sodium salt Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004247 glycine and its sodium salt Substances 0.000 claims description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 3
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940029258 sodium glycinate Drugs 0.000 claims description 3
- WUWHFEHKUQVYLF-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetate Chemical group [Na+].NCC([O-])=O WUWHFEHKUQVYLF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 claims description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 abstract description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 30
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 abstract description 23
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 5
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 4
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 2
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 2
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 2
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 1
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000013013 Member 2 Subfamily G ATP Binding Cassette Transporter Human genes 0.000 description 1
- 108010090306 Member 2 Subfamily G ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000012676 herbal extract Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
Abstract
本发明提供一种经血保存液及制备方法和应用，所述经血保存液包括包括抗凝剂、保护剂、抗生素、缓冲剂、营养液以及基础液，其中，所述抗凝剂、保护剂、抗生素和缓冲剂在所述经血保存液中的质量浓度分别为50~60ug/ml、25~35ug/ml、40~45ug/ml、95μ/ml。本发明中，采用特定的经血保存液作为传统经血保存液的替代，由于其中保护剂使用了中药提取物，补肾活血，对经血中的宫内膜干细胞能够维持较长时间的活性，最大程度地保存了经血的生物活性，延长了保存期，便于多种实验或医疗治疗中不同用途的使用。
Description
技术领域
本发明属于干细胞保存的生物技术领域，具体涉及一种经血保存液及制备方法和应用。
背景技术
成体干细胞存在于各个组织器官中，它们能够维持内部稳态、修复因疾病所致的器官损伤。常用的多能成体干细胞之一是骨髓间充质干细胞，然而其在分离过程中具有一定的侵入创伤性而以造成患者不适，脐血干细胞也是成体干细胞的重要来源，但由于其获取依赖于母体妊娠使其在来源以及获取机会方面存在缺陷。其它成体干细胞，比如脂肪干细胞、羊水干细胞、脐带干细胞，由于其获取性低且再生能力有限，在某种程度上限制了它们的应用，因此寻找一种无创且安全可靠的干细胞来源是目前亟待解决的问题。
来源于月经血的高度增生的干细胞即经血源性基质干细胞成为了关注的热点，女性每月排出的月经血中含有大量的干细胞(子宫内膜干细胞)，扩增能力是自体骨髓干细胞的30倍，而且在神经修复、抑制肿瘤和美容抗衰老等方面具有非常显著的作用。由于女性在家庭中(直系亲属)的特殊亲缘关系，故其组织相容性较高而抗原性减半，使得来自女性自身的干细胞可以使多位家庭成员受益。月经血虽然次数很多，但如何将这些多次排出收集的干细胞保存、运输，使采集的经血保持低温状态以避免导致其中的细胞活性降低。是本领域技术人员一直研究的课题，但目前还未见诸有关这方面之报道。目前不管是文献资料还是专利发明，对于经血来源间充质干细胞的制备存储方法都是将经血间充质干细胞从经血中分离出来经过纯化培养后再冻存，但是经血干细胞在这期间因为会活性降低，即使想办法保存了，也不一定能保持宫内膜干细胞的活性。
综上所述，现有的经血保存液，储存过程中随着时间推移，宫内膜干细胞的活性会降低，即使保存了，效果也一般。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种经血保存液及制备方法和应用，旨在提供一种针对宫内膜干细胞活性，保存效果时间更长的经血保存液。
为达到上述目的，本发明提供一种经血保存液，所述经血保存液包括抗凝剂、保护剂、抗生素、缓冲剂、营养液以及基础液，其中，所述抗凝剂、保护剂、抗生素和缓冲剂在所述经血保存液中的质量浓度分别为50~60ug/ml、25~35ug/ml、40~45ug/ml、95μ/ml。
可选地，所述保护剂为中药提取物，所述中药提取物包括菟丝子提取物、熟地提取物、当归提取物、丹参提取物、覆盆子提取物、杜仲提取物和川牛膝提取物，其中，所述菟丝子提取物、熟地提取物、当归提取物、丹参提取物、覆盆子提取物、杜仲提取物和川牛膝提取物的质量比为（10~12）:（15~17）:（8~12）:（9~13）:（10~13）:（15g~18):（10~13）。
可选地，所中药提取物的制备方法包括：
1）将菟丝子、熟地、当归、丹参、覆盆子、杜仲和川牛膝混合，加水浸泡后再加热煎煮，过滤后保存滤液和药渣，获得中药混合液；
2）将所述中药混合液继续煎煮、过滤，对滤液进行加热浓缩后，超膜过滤，收集滤液进行减压干燥，获得中药提取物。
可选地，所述中药提取物的制备方法中：
所述加水浸泡的浸泡时间为0.5~1.5h；和/或，
所述加热煎煮的煎煮时间为0.5~1.5h；和/或，
所述减压干燥时的压力为65~85mpa。
可选地，所述抗生素包括两性霉素、庆大霉素和青霉素中的至少一种。
可选地，所述抗凝剂包括枸橼酸、肝素和鱼精蛋白的至少一种。
可选地，所述缓冲剂为甘素钠的PBS缓冲液。
此外，本发明提供一种上述经血保存液的制备方法,所述的经血保存液的制备方法，包括如下步骤：将所述缓冲剂、所述抗凝剂、所述保护剂、所述营养液及所述抗生素分别加入所述基础液中混合，即得。
可选地，所述保存步骤是放置在温5~15℃下保存。
本发明还提供一种上述经血保存液的应用，所述经血保存液如上述所述的经血保存液的制备方法制备而成。
本发明中，采用特定的经血保护液配比替代传统的经血保存液，整个经血保护液成分配比合理，能够维持经血中成分的稳定性，最大程度地保持抗体的生物活性，同时其中保护剂采取中药提取物，与抗生素配合，可以缓慢释放出中药活性，便于多种实验或工业生产中不同用途的使用，且所述中药提取物的配比可以活化了β-catenin蛋白的表达增加，增加宫内膜干细胞的活性，从而相比较传统的经血保存液更能延长经血中的宫内膜干细胞的保存期，更大限度地推广了经血保存液的使用。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。
需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
随着宫内膜干细胞的扩增能力是自体骨髓干细胞的30倍，而且在神经修复、抑制肿瘤和美容抗衰老等方面具有非常显著的作用。其临床使用具有重大意义，而且月经血的提取相比较其它干细胞便捷且易得，故经血保存液的使用便广泛推展开来，但是由于储存过程中随着时间推移，宫内膜干细胞的活性持续性降低，即使保存了经血，但是假如宫内膜干细胞活性最后不好，即使保存了经血，那么意义也不大。
因此，本发明提出一种经血保存液，所述经血保存液包括抗凝剂、保护剂、抗生素、缓冲剂、营养液以及基础液，其中，所述抗凝剂、保护剂、抗生素和缓冲剂在所述经血保存液中的质量浓度分别为50~60ug/ml、25~35ug/ml、40~45ug/ml、95μ/ml，所述营养液占所述经血保存液体积的10~18%。
在本发明技术方案中，所制备的经血保存液具有较大延长宫内膜干细胞活性的优点，通过采取了将抗凝剂、保护剂、抗生素、缓冲剂、营养液以及基础液进行特定配比，其中，通过引入抗凝剂主要目的是为了使得保存经血时，减少或者防止经血的凝固，延长凝血时间，而保护剂是为了最大限度保护宫内膜干细胞的活性，抗生素的使用是作为广谱抗菌作用，抗菌作用强，能够有效地抑制经血内自带的各种菌群，起到抗菌作用，而缓冲剂是PBS磷酸缓冲溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性。所述营养液为现有技术中常用的葡萄糖，所述基础液为生理盐水，用以配置溶液，且能保证经血保存液的特定浓度。该组分都是为了更好延长经血保存液的保存时间，以及最大限度保存宫内膜干细胞的活性。
需要说明的是，中药提取物能和抗生素联合用药，具有缓释作用，药效持续时间超过7天以上，不仅发挥了抗生素的抑菌作用和中药提取物对宫内膜干细胞的活性保存的作用，还能维持药效时间长，有效地延长了宫内膜干细胞的活性，从而提高了经血保存液的保存宫内膜干细胞活性的时间。
在本发明技术方案中，所述保护剂为中药提取物，所述中药提取物包括菟丝子提取物、熟地提取物、当归提取物、丹参提取物、覆盆子提取物、杜仲提取物和川牛膝提取物，其中，所述菟丝子提取物、熟地提取物、当归提取物、丹参提取物、覆盆子提取物、杜仲提取物和川牛膝提取物的质量比为（10~12）:（15~17）:（8~12）:（15~17）:（8~12）:（9~13）:（10~13）:（15~18):（10~13）。该中药提取物具有补肾活血的作用，因为目前研究发现，wnt/β-catenin信号通路是一个保守的细胞信号系统，在胚胎发育、维持器官及组织稳态方面，发挥了至关重要的作用，多项研究表明，Oct4、ABCG2虽然并非子宫内膜干细胞特有的，但能够反映子宫内膜干细胞的特性。
本实施例中的经血保存液包含的抗生素包括两性霉素、庆大霉素和青霉素中的至少一种，抗生素的使用是作为广谱抗菌作用，抗菌作用强，能够有效地抑制经血内自带的各种菌群，起到抗菌作用。
具体地，在本实施例中，所中药提取物的制备方法包括：
1）将菟丝子、熟地、当归、丹参、覆盆子、杜仲和川牛膝混合，加水浸泡后再加热煎煮，过滤后保存滤液和药渣，获得中药混合液；
2）将所述中药混合液继续煎煮、过滤，对滤液进行加热浓缩后，超膜过滤，收集滤液进行减压干燥，得黄色粉末，为中药提取物。其中，所述加水浸泡的浸泡时间为0.5~1.5h；所述加热煎煮的煎煮时间为0.5~1.5h；所述减压干燥时的压力为65~85mpa。
在一些实施例中，所述抗凝剂包括枸橼酸、肝素和鱼精蛋白的至少一种。
本实施例中的抗凝剂选择枸橼酸，含量取4~5mmol/ml之间，因为在该浓度下可以维持血iCa2+小于0.35mmol/ml。
所述缓冲剂为甘素钠的PBS缓冲液。采用上述缓冲剂可进一步提高溶剂的pH环境的稳定性。
此外，本发明提供一种上述经血保存液的制备方法,所述的经血保存液的制备方法，包括如下步骤：将所述缓冲剂、所述抗凝剂、所述保护剂、所述营养液及所述抗生素分别加入所述基础液中混合、保存即得
需要说明的是，所述保存是放置在温5~15℃下保存，因为该温度下，经血保存液可以保持较大的活性。
本发明还提供一种上述经血保存液的应用，所述经血保存液由上述经血保存液的制备方法制得。
以下结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细说明，应当理解，以下实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
1）制备中药提取物：将菟丝子、熟地、当归、丹参、覆盆子、杜仲和川牛膝分别称取10g、15g、8g、9g、10g、15g和10g混合，加蒸馏水浸泡0.5h后再在石棉网电炉上加热煎煮0.5h，绢布过滤，保存滤液和药渣，再以同样的方法，将滤液和滤渣加蒸馏水浸泡、煎煮和过滤，将两次滤液混合后，加热至小体积，超滤膜过滤，采用真空干燥箱，在65mpa下干燥，获得中药混合液；
将所述中药混合液继续煎煮、过滤，对滤液进行加热浓缩后，超膜过滤，收集滤液进行减压干燥，获得中药提取物。
2）称取2.5mg中药提取物、所述5mg抗凝剂、所述4mg抗生素、5g葡萄糖和95μPBS磷酸缓冲液加入100ml的0.9%生理盐水混合后，再放置5℃下保存。
实施例2
1）制备中药提取物：将菟丝子、熟地、当归、丹参、覆盆子、杜仲和川牛膝分别称取11g、16g、9g、10g、11g、16g和11g混合，加蒸馏水浸泡1h后再在石棉网电炉上加热煎煮1h，绢布过滤，保存滤液和药渣，再以同样的方法，将滤液和滤渣加蒸馏水浸泡、煎煮和过滤，将两次滤液混合后，加热至小体积，超滤膜过滤，采用真空干燥箱，在70mpa下干燥，获得中药混合液；
将所述中药混合液继续煎煮、过滤，对滤液进行加热浓缩后，超膜过滤，收集滤液进行减压干燥，获得中药提取物。
2）称取3.5mg中药提取物、所述6mg抗凝剂、所述4.5mg抗生素、5g葡萄糖和95μPBS磷酸缓冲液加入100ml的0.9%生理盐水混合后，再放置10℃下保存。
实施例3
1）制备中药提取物：将菟丝子、熟地、当归、丹参、覆盆子、杜仲和川牛膝分别称取12g、17g、11g、12g、12g、17g和12g混合，加蒸馏水浸泡0.7h后再在石棉网电炉上加热煎煮0.7h，绢布过滤，保存滤液和药渣，再以同样的方法，将滤液和滤渣加蒸馏水浸泡、煎煮和过滤，将两次滤液混合后，加热至小体积，超滤膜过滤，采用真空干燥箱，在85mpa下干燥，获得中药混合液；
将所述中药混合液继续煎煮、过滤，对滤液进行加热浓缩后，超膜过滤，收集滤液进行减压干燥，获得中药提取物。
2）称取3mg中药提取物、所述5.5mg抗凝剂、所述4.3mg抗生素、5g葡萄糖和95μPBS磷酸缓冲液加入100ml的0.9%生理盐水混合后，再放置15℃下保存。
实施例4
1）制备中药提取物：将菟丝子、熟地、当归、丹参、覆盆子、杜仲和川牛膝分别称取12g、17g、12g、13g、13g、18g和13g混合，加蒸馏水浸泡1h后再在石棉网电炉上加热煎煮1h，绢布过滤，保存滤液和药渣，再以同样的方法，将滤液和滤渣加蒸馏水浸泡、煎煮和过滤，将两次滤液混合后，加热至小体积，超滤膜过滤，采用真空干燥箱，在70mpa下干燥，获得中药混合液；
将所述中药混合液继续煎煮、过滤，对滤液进行加热浓缩后，超膜过滤，收集滤液进行减压干燥，获得中药提取物。
2）称取3.5mg中药提取物、所述5.5mg抗凝剂、所述4.2mg抗生素、5g葡萄糖和95μPBS磷酸缓冲液加入100ml的0.9%生理盐水混合后，再放置10℃下保存。
对比例1
去掉中药提取物，其余与实施例1相同。
对比例2
市售经血保存液。
性能测试
活性测试
1、运用流式细胞仪对分别对实施例1~4、对比例1和2的宫内膜间充质干细胞表面标志物进行检测，它们的阳性表达成体干细胞表面标记分子CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和HLA-DR检测结果如表所示。
2、在第1天、3天、5天、7天、9天分别测量其阳性标志物表达数据，测试的结果如表所示。国际干细胞协会ISCT颁布的间充质干细胞的鉴定标准：阳性表达：CD73、CD90、CD105>95.0％；阴性表达HLA-DR、CD45、CD11b、CD34、CD19<2.0％。
从表1～5看出，实施例1~4相较于对比例1而言，采用了中药提取物作为保护剂，相较于对比例1和2而言，使宫内膜干细胞的活性保持在95%以上，同时可以看出随着时间延长，宫内膜干细胞活性持续降低，而使用本实施例制备出的经血保存液约7天，可以保持宫内膜干细胞活性95%上，而使用市售的约3天，对比例1是约5天的，主要原因还是因为中药提取物与抗生素协同缓释作用，可以持续性的给宫内膜干细胞提供活性成分，才使得使用该经血保存液的宫内膜干细胞活性保持率在95%以上。
以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种经血保存液，其特征在于，所述经血保存液包括抗凝剂、保护剂、抗生素、缓冲剂、营养液以及基础液，其中，所述抗凝剂、保护剂、抗生素和缓冲剂在所述经血保存液中的质量浓度分别为50~60ug/ml、25~35ug/ml、40~45ug/ml、95μ/ml。
2.如权利要求1所述的经血保存液，其特征在于，所述保护剂为中药提取物，所述中药提取物包括菟丝子提取物、熟地提取物、当归提取物、丹参提取物、覆盆子提取物、杜仲提取物和川牛膝提取物，其中，所述菟丝子提取物、熟地提取物、当归提取物、丹参提取物、覆盆子提取物、杜仲提取物和川牛膝提取物的质量比（10~12）:（15~17）:（8~12）:（9~13）:（10~13）:（15~18):（10~13）。
3.如权利要求2所述的经血保存液，其特征在于，所中药提取物的制备方法包括：
S1、将菟丝子、熟地、当归、丹参、覆盆子、杜仲和川牛膝混合，加水浸泡后再加热煎煮，过滤后保存滤液和药渣，获得中药混合液；
S2、将所述中药混合液继续煎煮、过滤，对滤液进行加热浓缩后，超膜过滤，收集滤液进行减压干燥，获得中药提取物。
4.如权利要求3所述的经血保存液，其特征在于，所述中药提取物的制备方法中：
所述加水浸泡的浸泡时间为0.5~1.5h；和/或，
所述加热煎煮的煎煮时间为0.5~1.5h；和/或，
所述减压干燥时的压力为65~85mpa。
5.如权利要求1所述的经血保存液，其特征在于，所述抗生素包括两性霉素、庆大霉素和青霉素中的至少一种。
6.如权利要求1所述的经血保存液，其特征在于，所述抗凝剂包括枸橼酸、肝素和鱼精蛋白的至少一种。
7.如权利要求1所述的经血保存液，其特征在于，所述缓冲剂为甘素钠的PBS缓冲液。
8.一种如权利要求1至7中任意一种所述的经血保存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将所述缓冲剂、所述抗凝剂、所述保护剂、所述营养液及所述抗生素分别加入所述基础液中混合、保存即得。
9.如权利要求8所述的经血保存液的制备方法，其特征在于，所述保存步骤是放置在温度5~15℃下保存。
10.一种经血保存液在保存经血中的应用，其特征在于，所述经血保存液为如权利要求1~7任意一项所述的经血保存液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211452208.8A CN115644170A (zh) | 2022-11-21 | 2022-11-21 | 一种经血保存液及制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211452208.8A CN115644170A (zh) | 2022-11-21 | 2022-11-21 | 一种经血保存液及制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115644170A true CN115644170A (zh) | 2023-01-31 |
Family
ID=85017221
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211452208.8A Pending CN115644170A (zh) | 2022-11-21 | 2022-11-21 | 一种经血保存液及制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115644170A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116616277A (zh) * | 2023-07-21 | 2023-08-22 | 北京赛普九洲科技发展有限公司 | 一种经血保存液及其制备方法和应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002049653A1 (en) * | 2000-12-21 | 2002-06-27 | Metabolic Engineering Laboratories Co., Ltd. | Compositions for preservation of organs and blood |
| CN105532647A (zh) * | 2016-02-03 | 2016-05-04 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 经血保存液及其应用、经血源宫内膜干细胞的分离培养方法 |
| CN105558350A (zh) * | 2016-01-18 | 2016-05-11 | 长沙博声生物科技有限公司 | 一种含有中草药复合粗多糖的饲料及其制备方法 |
| CN111518865A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-11 | 湖州中科朗斯生物技术有限公司 | 一种基于间充质干细胞的皮肤修复活性成分的筛选方法 |
| CN115119833A (zh) * | 2022-08-30 | 2022-09-30 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种精液冷冻保存稀释液及其应用 |
| CN115381445A (zh) * | 2021-05-24 | 2022-11-25 | 上海长一干细胞研究中心有限公司 | 一种人月经血用经血采集器、保存液及配套保存运输装置 |
-
2022
- 2022-11-21 CN CN202211452208.8A patent/CN115644170A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002049653A1 (en) * | 2000-12-21 | 2002-06-27 | Metabolic Engineering Laboratories Co., Ltd. | Compositions for preservation of organs and blood |
| CN105558350A (zh) * | 2016-01-18 | 2016-05-11 | 长沙博声生物科技有限公司 | 一种含有中草药复合粗多糖的饲料及其制备方法 |
| CN105532647A (zh) * | 2016-02-03 | 2016-05-04 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 经血保存液及其应用、经血源宫内膜干细胞的分离培养方法 |
| CN111518865A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-11 | 湖州中科朗斯生物技术有限公司 | 一种基于间充质干细胞的皮肤修复活性成分的筛选方法 |
| CN115381445A (zh) * | 2021-05-24 | 2022-11-25 | 上海长一干细胞研究中心有限公司 | 一种人月经血用经血采集器、保存液及配套保存运输装置 |
| CN115119833A (zh) * | 2022-08-30 | 2022-09-30 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种精液冷冻保存稀释液及其应用 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116616277A (zh) * | 2023-07-21 | 2023-08-22 | 北京赛普九洲科技发展有限公司 | 一种经血保存液及其制备方法和应用 |
| CN116616277B (zh) * | 2023-07-21 | 2023-10-13 | 北京赛普九洲科技发展有限公司 | 一种经血保存液及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106344492B (zh) | 干细胞活性因子及其冻干粉剂 | |
| CN106109496B (zh) | 人脐带间充质干细胞提取物冻干粉及制备方法 | |
| CN106982821A (zh) | 脐带间充质干细胞临床冻存保护液组合物及其用途 | |
| WO2020173164A1 (zh) | 间充质干细胞冻干粉剂及其制备方法 | |
| US10251824B2 (en) | Method for inducing pluripotent stem cells and pluripotent stem cells prepared by said method | |
| CN108348555B (zh) | 细胞扩增方法和治疗组合物 | |
| KR20070122316A (ko) | 주사용 인체 연조직 충전제 및 이의 제조 방법 | |
| CN105687240B (zh) | 一种经血源干细胞制剂及其制备方法与应用 | |
| CN110269833A (zh) | 一种脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用 | |
| CN106038597B (zh) | 间充质干细胞在制备治疗急性肺损伤制剂中的应用 | |
| CN115644170A (zh) | 一种经血保存液及制备方法和应用 | |
| CN113384506B (zh) | 一种低刺激性植物酵素美白纳米组合物和制备方法及其应用 | |
| CN108949748B (zh) | 一种痰液液化及核酸保护试剂 | |
| CN108265023A (zh) | 一种增殖促进剂及其应用 | |
| WO2021077812A1 (zh) | 脐带间充质干细胞因子冻干粉、制备方法及其应用 | |
| CN107372464B (zh) | 一种维持间充质干细胞活性的运输保存液与制备方法 | |
| CN109010369A (zh) | 一种修复哺乳动物肠道损伤冻干粉的制备方法 | |
| CN108309875A (zh) | 滋润保湿面霜及其制备方法 | |
| WO2021056885A1 (zh) | 一种用于人月经血的保存液及其制备方法 | |
| CN111849887A (zh) | 一种自体脂肪三维凝胶及其svf干细胞的制备方法及应用 | |
| CN1746297A (zh) | 胎盘来源间充质干细胞及其制备 | |
| CN113797151B (zh) | 一种含间充质干细胞外泌体的修护凝胶及其制备方法 | |
| CN113287603B (zh) | 一种生物样本保存液及其制备方法与应用 | |
| US20220347250A1 (en) | Anti-aging chinese herb extract,extraction method and use thereof | |
| CN108949677B (zh) | 地黄苷c和丹酚酸a在促进体外培养骨髓间充质干细胞增殖和抑制复制性衰老中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20230131 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |