CN113495141A - 2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种2019新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)IgM抗体检测试剂盒，属于生物技术领域。本发明的检测试剂盒包括吖啶酯标记的两种抗原和包被在固相载体上的鼠抗人IgM抗体；其中，两种抗原为新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原。本发明提供的检测试剂盒，具有灵敏度高、特异性好的优势，适用于对2019新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)IgM抗体进行检测。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)IgM抗体检测试剂盒。
背景技术
冠状病毒是自然界广泛存在的一个大型病毒家族，因其形态在电镜下观察似王冠而得名，主要引起呼吸系统疾病。冠状病毒属于单股正链RNA病毒，其遗传物质是所有RNA病毒中最大的，分为α、β、γ和δ四个属。
2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种新的冠状病毒，2020年2月11日，世界卫生组织将新型冠状病毒感染的肺炎命名为“COVID-19”。与此同时，国际病毒分类委员会将新型冠状病毒命名为“SARS-CoV-2”。
2019新型冠状病毒是一类呈球形、表面有突起、电镜下观察形似皇冠的病毒，病毒基因为连续线性单链RNA，直径在75-160nm。2019-nCoV是目前发现的可以感染人类的冠状病毒科中的第七个成员。其他6 个成员分别为：HCoV 229E、HCoV NL63、HCoV OC43、HCoVHKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。新冠病毒感染人的潜伏期1-14天，多为3-7天。病毒主要经呼吸道飞沫和密切接触传播；患者出现发热、乏力和干咳，并逐渐出现呼吸困难等严重症状。病毒感染人后，机体会发生针对病毒的免疫反应并产生抗体。IgM抗体产生较快(5-7天)，数周或数月后逐渐消失；IgG抗体产生较晚(10-14天)，亲和力更高，可持续多年甚至终生存在。
目前研究发现，虽然SARS-CoV-2与SARS-CoV、MERS-CoV同属于β-CoV，其基因组与SARS-CoV基因组表现出较高的序列同源性。但是，SARS-CoV-2基因组在两个核心位置具有高度变异性。一个是ORF1ab 基因中的沉默变异，另一个为氨基酸ORF8中的多态性。据预测，ORF8中的突变会导致其两个变异体(即 ORF8-L和ORF8-S)，导致蛋白质的结构异常。在对SARS-CoV-2进行结构分析时发现，其刺突糖蛋白及核衣壳蛋白发生突变。这提示SARS-CoV-2具有独特的基因组特征及结构特征，需要对其做进一步的研究。
2019新型冠状病毒传染性强，能引起病毒性肺炎，在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。为了控制疫情，大家都在积极研发相应的诊断试剂盒，但由于新型冠状病毒 (SARS-CoV-2)的发现时间短，对其基因组特征、结构特征、发病机理等方面还在不断的研究当中。目前的新型冠状病毒抗体检测试剂盒，也因研发周期短，检测试剂盒的特异性有待提高。
发明内容
为解决上述问题，本发明第一方面，提供一种特异性好、假阳性率低的2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒。该试剂盒包括：包被在固相载体上的鼠抗人IgM单克隆抗体和可检测标记物标记的两种抗原；所述两种抗原为新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原。
本发明中，“新型冠状病毒RBD抗原”为包括新型冠状病毒S1蛋白受体结合域的抗原表位的抗原，可以是天然抗原，也可以是通过常规基因工程技术表达后得到的重组抗原；“新型冠状病毒N抗原”为包括新型冠状病毒N蛋白的抗原表位的抗原，可以是天然抗原，也可以是通过常规基因工程技术表达后得到的重组抗原。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的氨基酸序列及其编码核酸序列已在NCBI上公开，其基因组排列顺序为5'-复制酶多聚糖蛋白(orf1/ab)-结构蛋白[刺突糖蛋白(spike，S)-小包膜糖蛋白(envelope，E)-膜糖蛋白(membrane，M)-核衣壳蛋白(nucleocapsid，N)]-3'。在冠状病毒中有一个关键的S蛋白(棘突蛋白，spike protein)，包含2个亚单位：S1和S2。S1能够促进病毒与宿主细胞受体的结合，其含有一个重要的C端RBD结构域，正是这个区域负责和受体结合。
新型冠状病毒的重组抗原已有许多市售产品，例如四川迈克生物新材料技术有限公司生产的重组新型冠状病毒RBD抗原(货号为XCL1831)，四川迈克生物新材料技术有限公司生产的重组新型冠状病毒N抗原(货号为XCL1829)，北京孚博生物科技有限公司生产的重组新型冠状病毒S1抗原(货号为FB2019HIS)。
作为优选，本发明的2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒中，新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原的质量比为2000:1～2000:3；更优选地，新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原的质量比为1000:1。
本发明中，“固相载体”可以是聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚乙烯基甲苯、聚丙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、尼龙、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、乳胶、脂质体、明胶、琼脂糖、纤维素、玻璃、金属、陶瓷或磁性体等材质形成的珠粒(beads)、微孔板、试管、棒、膜(membrane)或试验片等形状的固相载体。优选地，固相载体为磁微粒，更优选地，固相载体为链霉亲和素磁微粒，即，链酶亲和素蛋白包被的磁性微粒。
本发明中，“可检测标记物”是指一类可通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电、光学或化学等手段进行检测的物质，例如酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和ELISA中常用的其它酶)、荧光染料(例如，荧光素、德克萨斯红、罗丹明和绿色荧光蛋白等，参见例如 MolecularProbes,Eugene,Oreg.,USA)、放射性标记物(例如，3H、125I、35S、14C或32P)、发光物质(例如，化学发光物质，进一步地，例如吖啶(例如吖啶-9-羧酰胺)、啡啶(phenanthridinium)、二氧杂环丁烷(dioxetanes)和鲁米诺等)。
作为优选，“可检测标记物”为化学发光物质。“化学发光物质”是指一类经催化剂的催化和/或氧化剂的氧化,形成一激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子的物质。
作为优选，“可检测标记物”为“吖啶类化学发光物质”。“吖啶类化学发光物质”是指吖啶酯及其衍生物、吖啶磺酰胺化学发光物质和光泽精，其适用于化学发光免疫分析系统。在碱性H2O2溶液中，分子受到过氧化氢离子进攻时，生成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮，当其回到基态时发出光子。
优选地，“可检测标记物”为“吖啶酯衍生物”。吖啶酯衍生物”在化学发光免疫分析领域中是众所周知的，例如中国专利201510090045.7中记载了用于化学发光免疫分析的吖啶酯衍生物及其制备方法； Law等(Novel poly-substituted aryl acridinium estersand theiruse in immunoassay,J BioluminChemilumin.1989Jul；4(1):88-98)合成了一系列可用于免疫分析的吖啶酯类似物。
进一步地，本发明的2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒中，还包括新型冠状病毒IgM抗体校准品。“校准品”，即校准物质，指在校准函数中用作独立变量值的参考物质，在体外诊断临床检测中起到检测和监督检验结果具有准确性和一致性的作用。“校准品”可以包括阳性校准品(含有新型冠状病毒IgM 抗体)和阴性校准品(不含新型冠状病毒IgM抗体)。
进一步地，本发明的2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒中，还包括多聚IgG。“多聚IgG”，有时称“寡聚IgG”，是指呈多聚体形式(例如，二聚体、三聚体、四聚体等)的IgG。“多聚IgG”已有许多市售产品，例如四川迈克生物新材料技术有限公司生产的多聚鼠IgG1(货号为XCL-1818)。申请人意外地发现，在试剂盒中加入多聚IgG，能提高待测样品中新冠病毒IgM抗体与鼠抗人IgM单克隆抗体的特异性结合，降低待测样品中IgG抗体的干扰，从而提高检测结果的特异性，减少假阳性的产生。
本发明的另一个方面，提供一种新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒的制备方法，包括可检测标记物标记的两种抗原的制备方法，包括以下内容：
(1)将新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原分别与吖啶酯进行混合反应，分别得到吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原；
(2)将吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原进行混合，即得。
进一步地，上述步骤(2)中，按照新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原的质量比为1000:1～ 1000:2的比例，将吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原进行混合。
本发明的另一个方面，提供一种新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒的使用方法，包括以下内容：
将待测样品与多聚IgG、包被在固相载体上的鼠抗人IgM单克隆抗体进行接触反应，然后加入可检测标记物标记的两种抗原进行反应，然后对标记物进行测量。
本发明的2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒，包被在固相载体上的鼠抗人IgM单克隆抗体、可检测标记物标记的两种抗原、校准品、以及多聚IgG，可以分别保存在本领域熟知的基础缓冲液中。“基础缓冲液”是指一类具有盐平衡、pH缓冲、保护活性成分结构和生物学特性的溶液，包括pH值调节剂、无机盐离子、表面活性剂和稳定剂成分。其中，“pH值调节剂”，是指能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响，从而保持溶液的pH值相对稳定的试剂，选自磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、Tris缓冲液和HEPES缓冲液中的一种或多种。“无机盐离子”是指一类维持溶液的离子浓度处于相对稳定平衡状态的试剂，选自氯化钠、氯化钾中的一种或多种。“表面活性剂”是指加入少量能够使其溶液体系的界面状态发生明显变化的物质，其具有固定的亲水亲油基团且在溶液的表面能够定向排列，选自Tween、SPAN、曲拉通、EMULGEN系列表面活性剂(如吐温20、吐温40和曲拉通100)以及月桂酸聚乙二醇甘油酯、阴离子烷基多苷、十二烷基二甲基甜菜碱、3ARAMT1、SHO62C和AMPHITOL中的一种或几种。“稳定剂”是指一类其稳定作用的试剂，选自甘露醇、牛血清白蛋白、丙三醇、海藻糖、酪蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和羟乙基淀粉中的一种或多种。
本文中“新型冠状病毒”、“2019新型冠状病毒”、“SARS-CoV-2”、“2019-nCoV”、“新冠病毒”可互换，均为被国际病毒分类委员会命名为“SARS-CoV-2”的新型冠状病毒。
有益效果
与现有技术相比，申请人意外地发现，在新型冠状病毒检测试剂盒中采用新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原这两种抗原进行新型冠状病毒IgG抗体检测时，检测结果的灵敏度和特异性有很大提高。并且，申请人还意外发现，在检测试剂盒中加入多聚IgG，能降低待测样品中IgG抗体的干扰、进一步提高检测结果的特异性。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
以下具体实施例中涉及的试剂成分均为市售产品，例如，磁微粒购自四川迈克生物新材料技术有限公司(货号：XCL1026)，新型冠状病毒RBD抗原购自四川迈克生物新材料技术有限公司(货号：XCL1831)，新型冠状病毒N抗原购自四川迈克生物新材料技术有限公司(货号：XCL1829)，鼠抗人IgM单克隆抗体购自四川迈克生物新材料技术有限公司(货号：XCL1832)，新型冠状病毒IgM抗体标准品购自四川省临床检验中心；多聚鼠IgG1购自四川迈克生物新材料技术有限公司(货号：XCL1818)。
实施例1 2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒
2019新型冠状病毒IgM检测试剂盒包括：包被在链霉亲和素磁微粒上的鼠抗人IgM单克隆抗体、吖啶酯标记的两种抗原、以及2019新型冠状病毒IgM抗体校准品。
该检测试剂盒中，吖啶酯标记的两种抗原通过以下方法得到：
(1)将新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原分别与吖啶酯进行混合反应，分别得到吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原；
(2)将吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原进行混合，即得。
实施例2 2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒、制备方法及使用方法
2019新型冠状病毒IgM检测试剂盒包括：试剂R1、试剂R2、试剂R3和2019新型冠状病毒IgM抗体校准品。其中，试剂R1中含有包被在链霉亲和素磁微粒上的鼠抗人IgM单克隆抗体；试剂R2中含有吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原；试剂R3中含有多聚IgG。试剂R1、试剂R2、试剂R3和校准品中还包括基础缓冲液。“基础缓冲液”是指一类具有盐平衡、pH缓冲、保护活性成分结构和生物学特性的溶液，本实施例以及后面对比例采用的基础缓冲液相同，均为本领域常规的组分，包括pH值调节剂、无机盐离子、表面活性剂和稳定剂组分。
2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒的制备方法如下：
1.包被在链霉亲和素磁微粒上的鼠抗人IgM单克隆抗体的制备
1.1生物素化鼠抗人IgM单克隆抗体的制备
1)用0.02M PBS缓冲液对鼠抗人IgM单克隆抗体进行透析；透析12h-36h，中间换液1次；
2)然后按照每毫克鼠抗人IgM单克隆抗体加入10mM/L的生物素酯2.66ul，室温下反应30min；
3)反应完成后，加入1M的Tris缓冲液至其终浓度为0.01M，终止反应，室温混匀反应10min，最后用0.02M PBS缓冲液透析12-36小时，取透析后的液体即得到Biotin-鼠抗人IgM单克隆抗体。
1.2生物素化鼠抗人IgM单克隆抗体包被链霉亲和素磁微粒：
1)取40ml链霉亲和素磁微粒悬浮液，磁分离去上清，用基础缓冲液清洗三次，然后用200mL基础缓冲液重悬；
2)按照10μg/mg的包被量加入Biotin-鼠抗人IgM单克隆抗体，室温下混匀反应30min，磁分离去上清，用基础缓冲液清洗一次后再重悬至200mL，然后加入封闭剂10mmol/LBNHS 200μL(封闭量为每mg 磁微粒加入10mmol/L BNHS 0.50μL)，室温下混匀反应15min，磁分离去上清，用基础缓冲液清洗三次后重悬至1000mL，即得到包被在链霉亲和素磁微粒上的鼠抗人IgM单克隆抗体。
2.吖啶酯标记的新型冠状病毒抗原的制备
2.1吖啶酯标记
1)采用0.02M PBS缓冲液分别对新型冠状病毒RBD抗原、新型冠状病毒N抗原进行透析；
2)分别吸取1mg透析后的新型冠状病毒RBD抗原、新型冠状病毒N抗原于适当容器中，用0.02M PBS 缓冲液稀释至终浓度为1mg/mL，分别加入2.5mmol/L吖啶酯20μL，立即涡旋混匀，避光条件下，室温置血液混匀仪上反应1小时；
3)分别加入10mg/mL的赖氨酸溶液102μL，立即涡旋混匀，避光条件下，室温在血液混匀反应10min；
4)反应完成后过脱盐柱，得到吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N 抗原。
2.2混合抗原
取1000μg的吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原、1μg的吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原，加入10L基础缓冲液，混合均匀，即得。即混合液中，吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原0.1μg/mL，吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原0.0001μg/mL。
3.多聚IgG的制备
用量筒量取1000mL基础缓冲液，加入多聚鼠IgG1使其终浓度为0.025mg/mL，混合均匀，即得。
4.校准品的制备
准备含有2019新型冠状病毒IgM抗体的阳性校准品、以及不含有2019新型冠状病毒IgM抗体的阴性校准品。
2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒的使用方法，如下：
采用全自动化学发光免疫分析仪进行检测。在仪器中依次加入10μL待测样品、50μL多聚IgG和50 μL磁微粒包被的鼠抗人IgM单克隆抗体，反应10min后，磁分离清洗、加入100μL吖啶酯标记的新型冠状病毒抗原，反应10min后，磁分离清洗，加入发光底物液A液、B液检测发光信号。
实施例3 2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒的性能考察
对实施例2中的试剂盒进行性能考察，采用的检测仪器为迈克生物股份有限公司生产的I3000全自动化学发光免疫分析仪。
1.试剂盒稳定性考察
将制备好的试剂盒分别于2℃～8℃冰箱和37℃水浴锅进行处理，用阴性校准品和阳性校准品检测试剂盒的热稳定性，检测结果如表1所示。
表1
| 阴性校准品(RLU) | 阳性校准品(RLU) | |
| 2℃～8℃保存试剂盒 | 63 | 4620 |
| 37℃保存7天试剂盒 | 42.5 | 3953 |
| 信号保留率 | 67.5％ | 85.6％ |
以上结果表明，2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒37℃水浴处理7天(模拟2℃～8℃保存1年)，阳性校准品信号保留率为85.6％，满足临床需求。
2.试剂盒批内精密度和批间精密度考察
批内精密度考察
选择企业精密性参考品(即，两个不同浓度的灭活样本)作为测定样本。每个样本使用同一批试剂盒重复测定10次。测定完后，分别计算测定结果的均值和标准差。按变异系数为标准差与均值得比值，计算每个测定样本的变异系数，检测结果如表2所示。
表2
从表2可见，本发明试剂盒的批内变异系数均低于5％，满足临床需求。
批间精密度考察
选择企业精密性参考品作为测定样本。取三个批号的试剂盒，每个批次试剂盒重复测定样本10次。测定完后，分别计算30个测定结果的均值和标准差。按变异系数为标准差与均值得比值，计算变异系数。检测结果如表3所示。
表3
从表3中可见，本发明试剂盒的批间变异系数均小于6％，满足临床中批间变异系数低于10％的要求。
3.试剂盒分析特异性
采用实施例2中的2019新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒，分别将HIV、HBV、HCV、HAV、梅毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、结核杆菌、甲型流感、乙型流感的阳性血清作为样本进行检测。检测结果如表4 所示。
表4
从表4中可以看出：本发明的检测试剂盒与HIV、HBV、HCV、HAV、梅毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、结核杆菌、甲型流感、乙型流感的特异性抗体无交叉反应。
4.试剂盒灵敏度和特异性
将实施例2中的检测试剂盒，对372例临床样本(确诊的阳性血清62例、正常人血清310例) 进行检测，检测结果见表5。
表5
表5中，灵敏度＝检测得到的阳性样本数/实际的阳性样本数＝56/62＝90.3％；特异性＝检测得到的阴性样本数/实际的阴性样本数＝306/310＝98.7％。
对比例
对比例1
本对比例与实施例2相比，除了抗原只采用吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原外，其余成分及制备方法均与实施例2相同。将对比例1的检测试剂盒，对112例临床样本(确诊的阳性血清62例、正常人血清50例)进行检测，检测结果见表6。
对比例2
本对比例与实施例2相比，除了抗原只采用吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原外，其余成分及制备方法均与实施例2相同。将对比例2的检测试剂盒，对112例临床样本(确诊的阳性血清62例、正常人血清50例)进行检测，检测结果见表6。
表6
从表6可见，对比例1和对比例2的检测试剂盒，其灵敏度和特异性都有待进一步提高。
对比例3
本对比例的试剂盒与实施例2相比，除了按照新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原的质量比为1000:2的比例，将吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原进行混合外，其余成分及制备方法均与实施例2相同。将对比例3的检测试剂盒，对80例临床样本(确诊的阳性血清30例、正常人血清50例)进行检测，检测结果见表7。
表7
从表7可见，对比例3的新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒的灵敏度较高，但是特异性还有待提高。
对比例4
本对比例与实施例2相比，除了按照新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原的质量比为1000:10 的比例，将吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原进行混合外，其余成分及制备方法均与实施例2相同。将对比例4的检测试剂盒，对80例临床样本(确诊的阳性血清30例、正常人血清50例)进行检测，检测结果见表8。
表8
从表8可见，对比例3的检测试剂盒的特异性还有待进一步提高。
对比例5
本对比例与实施例2相比，除了试剂盒中不含有多聚鼠IgG1外，其余成分及制备方法均与实施例2 相同。将对比例5的检测试剂盒，对372例临床样本(确诊的阳性血清62例、正常人血清310例)进行检测，检测结果见表9。
表9
从表9可见，对比例4的检测试剂盒的特异性还有待进一步提高。
Claims (9)
1.一种新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被在固相载体上的鼠抗人IgM单克隆抗体和可检测标记物标记的两种抗原；所述两种抗原为新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原的质量比为2000:1～2000:3；优选地，所述质量比为1000:1。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为磁微粒；优选地，所述固相载体为链霉亲和素磁微粒。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述可检测标记物为酶、荧光染料、放射性标记物、同位素标记物或化学发光物质；优选地，所述可检测标记物为化学发光物质；优选地，所述可检测标记物为吖啶类化学发光物质；优选地，所述可检测标记物为吖啶酯衍生物。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括新型冠状病毒IgM抗体校准品。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括多聚IgG。
7.一种权利要求1-6任一项所述的新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括可检测标记物标记的两种抗原的制备方法，包括以下内容：
(1)将新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原分别与吖啶酯进行混合反应，分别得到吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原；
(2)将吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原进行混合，即得。
8.根据权利要求7所述的新型冠状病毒IgM抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，按照新型冠状病毒RBD抗原和新型冠状病毒N抗原的质量比为1000:1～1000:2的比例，将吖啶酯标记的新型冠状病毒RBD抗原和吖啶酯标记的新型冠状病毒N抗原进行混合。
9.一种权利要求6所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下内容：
将待测样品与多聚IgG、包被在固相载体上的鼠抗人IgM单克隆抗体进行接触反应，然后加入可检测标记物标记的两种抗原进行反应，然后对标记物进行测量。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991006305A1 (en) * | 1989-11-07 | 1991-05-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Oligomeric immunoglobulins |
| CN1245560A (zh) * | 1996-11-29 | 2000-02-23 | 罗赫诊断器材股份有限公司 | 抗原特异性IgM的检测 |
| CN1609617A (zh) * | 2003-09-29 | 2005-04-27 | 香港中文大学 | 诊断与预防严重急性呼吸道综合症（sars）的组合物和方法 |
| CN103575884A (zh) * | 2012-07-25 | 2014-02-12 | 上海纽卓生物科技有限公司 | 胶体金法丙型肝炎病毒(hcv)快速诊断试剂盒 |
| CN105378480A (zh) * | 2013-07-04 | 2016-03-02 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 检测血清样品中抗药物抗体的干扰抑制性免疫测定 |
| CN108196069A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-06-22 | 周珂 | 一种包含重组融合抗原a和b的丙型肝炎病毒抗体检测试剂及应用和重组融合抗原a和b |
| CN108508001A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-09-07 | 迈克生物股份有限公司 | 化学发光检测试剂盒 |
-
2020
- 2020-03-26 CN CN202010222448.3A patent/CN113495141A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991006305A1 (en) * | 1989-11-07 | 1991-05-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Oligomeric immunoglobulins |
| CN1245560A (zh) * | 1996-11-29 | 2000-02-23 | 罗赫诊断器材股份有限公司 | 抗原特异性IgM的检测 |
| CN1609617A (zh) * | 2003-09-29 | 2005-04-27 | 香港中文大学 | 诊断与预防严重急性呼吸道综合症（sars）的组合物和方法 |
| CN103575884A (zh) * | 2012-07-25 | 2014-02-12 | 上海纽卓生物科技有限公司 | 胶体金法丙型肝炎病毒(hcv)快速诊断试剂盒 |
| CN105378480A (zh) * | 2013-07-04 | 2016-03-02 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 检测血清样品中抗药物抗体的干扰抑制性免疫测定 |
| CN108196069A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-06-22 | 周珂 | 一种包含重组融合抗原a和b的丙型肝炎病毒抗体检测试剂及应用和重组融合抗原a和b |
| CN108508001A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-09-07 | 迈克生物股份有限公司 | 化学发光检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JUANJUAN ZHAO ET AL.: "Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients of novel coronavirus disease 2019", MEDRXIV PREPRINT, pages 6 - 7 * |
| LEI LIU ET AL: "A preliminary study on serological assay for severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) in 238 admitted hospital patients", MEDRXIV PREPRINT * |
| 四川省人民医: "我院杨正林团队成功研制出新冠病毒的早期快速准确检测诊断试剂盒", pages 1 - 8, Retrieved from the Internet <URL:四川省人民医院官网> * |
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