CN113491697A

CN113491697A - 吐根碱在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的应用

Info

Publication number: CN113491697A
Application number: CN202010258155.0A
Authority: CN
Inventors: 刘青松; 王傲莉; 孙永; 王文超; 胡晨; 吴宏; 何军; 苏斌; 王黎; 王蓓蕾
Original assignee: ANHUI PROVINCIAL CT FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION; Anhui Zhongke Tuotuo Pharmaceutical Science Research Co ltd; Hefei Institutes of Physical Science of CAS
Current assignee: ANHUI PROVINCIAL CT FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION; Anhui Zhongke Tuotuo Pharmaceutical Science Research Co ltd; Hefei Institutes of Physical Science of CAS
Priority date: 2020-04-03
Filing date: 2020-04-03
Publication date: 2021-10-12
Also published as: WO2021196275A1

Abstract

本发明公开一种吐根碱在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS‑CoV‑2感染的药物中的应用。本发明选用安全浓度的吐根碱进行抗新型冠状病毒SARS‑CoV‑2研究，证实吐根碱能有效抑制新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的复制，并且还能预防新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的感染，可以用于进一步开发抗新型冠状病毒SARS‑CoV‑2药物。

Description

吐根碱在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及吐根碱在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的新应用。

背景技术

冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具囊膜(envelope)、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS-CoV引起)和严重急性呼吸综合征(SARS-CoV引起)等较严重疾病。

新型冠状病毒SARS-CoV-2是2019年发现的第7种(其余六种分别是HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV)可以感染人的冠状病毒，于2020年1月12日被世界卫生组织命名，其可以引发新型冠状病毒肺炎COVID-19，对人类的身体健康产生严重的威胁。

单克隆抗体、多肽和小分子化合物通常是抗病毒药物研究的热点，通过对FDA已批准的药物库进行高通量筛选，探讨已有药物的新用途，已成为药物研发的一种重要途径。由于候选药物已具有关于药理药效测试、功能靶点以及临床安全性等资料，有利于进一步的毒理学评价、药代动力学评价和制剂研发等，可以大大减少研发风险、缩短研发时间和研发成本，有着广阔的应用前景。

吐根碱(emetine)也称依米丁，是从茜草科植物吐根中提取的一种异喹啉生物碱，分子式为C₂₉H₄₀N₂O₄，其结构式如下文所示。对吐根碱及衍生物的抗病毒研究表明，吐根碱及衍生物对登革热病毒、人免疫缺陷病毒、新城疫病毒、小反刍兽疫病毒、水牛痘病毒、疱疹病毒以及MERS-CoV、HCoV-OC43、MHV-A59、HCoV-NL63等多种DNA病毒和RNA病毒均有抑制活性。其中MERS-CoV抗病毒药物高通量筛选研究发现，吐根碱具有一定的抗冠状病毒的活性，对0.0001MOI剂量的MERS-CoV感染的药物半数有效浓度(Concentration for 50％ofmaximal effect，EC₅₀)为14.7μM，半数细胞毒性浓度(Concentration cytotoxicity 50％，CC₅₀)为17μM，药物安全指数为1.5，提示吐根碱具有一定的抗冠状病毒的活性(Chan JF，Chan KH，Kao RY，等.Broad-spectrum antivirals for the emerging Middle Eastrespiratory syndrome coronavirus.J Infect，2013，67，606-616)。专利文献CN108721293A选用无毒性浓度的吐根碱进行广谱抗冠状病毒研究，发现吐根碱能在体外有效抑制β群冠状病毒HCoV-OC43、MERS-CoV、MHV-A59以及α群冠状病毒HCoV-NL63的复制，并呈现剂量效应相关性，针对MOI＝0.01剂量的HCoV-OC43、HCoV-NL63、MERS-CoV和MHV-A59四种冠状病毒的药物EC₅₀分别为0.30μM、1.75μM、0.35μM和0.12μM，显示出吐根碱具有广谱抗冠状病毒活性。

然而，目前尚未见吐根碱在抗新型冠状病毒SARS-CoV-2中的应用报道。

发明内容

针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本发明提供一种吐根碱或其药学可接受的盐在制备治疗或预防冠状病毒感染的药物中的应用，所述冠状病毒为新型冠状病毒SARS-CoV-2。

上述药物是以吐根碱或其药学可接受的盐作为药物活性成分制成的以下任何一种药学上可接受的剂型：片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂或注射剂。

在上述应用中，当所述药物在施用后，所述吐根碱或其药学可接受的盐的作用浓度为0.005μM以上，优选为0.010μM以上。

为了避免所述药物对于正常细胞产生不可接受的毒性，所述吐根碱或其药学可接受的盐在血液中的作用浓度为2μM以下，优选为1μM以下。

基于以上技术方案，本发明以新型冠状病毒SARS-CoV-2作为模式病毒，通过体外抗病毒效果研究，提供了吐根碱或其药学可接受的盐在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的新应用，揭示吐根碱或其药学可接受的盐能够有效抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2的复制，并呈现剂量效应相关性，具有抗新型冠状病毒SARS-CoV-2活性，并具有预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的效果，对于新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的防控和治疗具有重要意义。

附图说明

图1为示出不同浓度吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2的抑制效果的图；其中A幅表示不同浓度吐根碱条件下新型冠状病毒SARS-CoV-2的病毒感染率曲线和对Vero细胞的细胞毒性曲线；B幅表示A幅的指标数据；C幅表示不同浓度吐根碱在体外治疗新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的Western blot检测结果；

图2为示出不同浓度吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2的预防效果的图；其中A幅表示不同浓度吐根碱条件下新型冠状病毒SARS-CoV-2的病毒感染率曲线；B幅表示A幅的指标数据；C幅表示不同浓度吐根碱在体外预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的Westernblot检测结果。

具体实施方式

本发明旨在提供吐根碱在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的新应用，其以新型冠状病毒SARS-CoV-2作为模式病毒，通过体外抗病毒效果研究，发现吐根碱能在体外显著抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2的复制，具有抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的生物活性。

吐根碱的游离碱形式的化学结构如下。

本发明的吐根碱可以是如上所示的游离碱形式，也可以被制成药学可接受的盐。药学可接受的盐的类型包括但不限于：(1)酸加成盐、通过将化合物的游离碱形式与药学可接受的无机酸反应形成，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等；或与有机酸反应形成，所述有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸、反丁烯二酸、三氟乙酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、4-甲基双环-[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、2-萘磺酸、叔丁基乙酸、葡庚糖酸、4,4'-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-甲酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、水杨酸、羟基萘酸、硬脂酸、粘康酸等。本发明优选的吐根碱药学可接受的盐是如下结构所示的盐酸盐。

以下结合具体实施例，对本发明进一步阐述。应当理解的是，具体实施例仅用于进一步说明本发明，而不是用于限制本发明的内容。

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，具体步骤可参见：《分子克隆实验指南》(《Molecular Cloning:A Laboratory Manual》Sambrook，J.，Russell，DavidW.，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，3rd edition，2001，NY，Cold SpringHarbor)。

实施例中描述到的各种生物材料的取得途径仅是提供一种实验获取的途径以达到具体公开的目的，不应成为对本发明生物材料来源的限制。事实上，所用到的生物材料的来源是广泛的，任何不违反法律和道德伦理能够获取的生物材料都可以按照实施例中的提示替换使用。

以下实施例中所有病毒培养和检测均在生物安全三级实验室进行，在微生物和生物医学实验室的生物安全规定下操作。

所用引物由通用生物科技有限公司合成；所用探针由通用生物基因公司合成。

实施例1：新型冠状病毒SARS-COV-2的分离培养

该实施例为对新型冠状病毒SARS-COV-2进行分离培养，以获得新型冠状病毒SARS-COV-2的病毒液，具体包括以下步骤：

1.1、首先在T75培养瓶中培养Vero细胞(非洲绿猴肾细胞，ATCC，美国)，培养基为DMEM培养基(Corning，美国)、10％血清(FBS)(ExCellBio，新西兰)和1％双抗(Corning，美国)，培养条件为37℃，5％CO₂的培养箱，备用。

1.2、从确诊感染新型冠状病毒SARS-COV-2的患者的咽拭子分离(由中国疾病预防控制中心(CDC)完成)获取新型冠状病毒SARS-COV-2，随后将该病毒感染在24孔板或48孔板中培养至单层的Vero细胞，感染后待Vero细胞出现75％细胞病变(CPE)后取上清继续感染步骤1.1中备用的T75培养瓶中的Vero细胞进行扩增。

1.3、当Vero细胞长到超过T75瓶底面积75％时，将步骤1.2中从24孔板或48孔板中获取的上清添加至T75培养瓶中的Vero细胞中，在37℃，5％CO₂的培养箱中孵育1小时；随后添加13mL的含5％FBS的DMEM培养基，继续孵育48小时；用倒置显微镜观察Vero细胞是否达到大约75％CPE。

1.4、收集T75瓶中细胞和上清，反复冻融3次裂解细胞，2000rpm条件下离心10分钟除去细胞碎片，上清作为新型冠状病毒SARS-COV-2的病毒液分装冻存，-80℃保存备用。

1.5、病毒毒力测定

该实验对上述步骤1.4获得的新型冠状病毒SARS-COV-2的病毒液的毒力进行测定，具体为：将对数生长期的Vero细胞消化计数后接种在透明96孔细胞培养板(BeaverBio，中国)上，细胞密度为2×10⁴个细胞/每孔，37℃、5％CO₂培养箱中培养，培养液为含10％FBS、1％双抗的DMEM培养基。待细胞长成单层后，弃培养液，加入用培养液10倍系列稀释的SARS-CoV-2病毒液，其稀释度分别为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7，每个稀释浓度设置12个复孔，同时设立正常细胞和未稀释病毒液对照，然后置37℃、5％CO₂培养箱中培养，每日观察细胞病变并记录CPE情况，观察直至CPE出现为止，当病变不再发展时记录结果，并记录病毒的50％组织细胞感染量(TCID₅₀)。TCID₅₀的计算公式为：Log(TCID₅₀)＝L-D(S-0.5)；其中L为最高稀释度的对数，D为稀释度对数之间的差，S为阳性孔比率总和。病毒感染能力测定是评估其毒力的常用方法之一，通常测定细胞培养物的半数组织(细胞)培养物感染量(50％tissue culture infectious dose，TCID₅₀)来评估病毒的感染能力(毒力)，本实验中TCID₅₀为10^-4.25。

实施例2：吐根碱的体外抑制病毒效果检测

2.1、吐根碱的细胞毒性测定

1)将吐根碱盐酸盐(购自MCE，中国)采用二甲基亚砜(DMSO)进行梯度稀释，初始浓度为20mM，3倍比稀释，共7个浓度，吸取每个浓度的吐根碱溶液1μL至1mL含2％FBS、1％双抗的DMEM维持液中，作为药物溶液，共7组，用于后续实验。

2)将对数生长期的Vero细胞消化计数后接种在透明96孔细胞培养板上，细胞密度为2×10⁵个细胞/每孔，37℃、5％CO₂培养箱中培养，待细胞长成单层后，弃细胞培养液，分别加入上述7组含不同浓度吐根碱的药物溶液0.1mL，每个浓度设置3个复孔，同时设立正常细胞和空白对照。将培养板置37℃、5％CO₂培养箱中培养3天，采用CCK-8方法测定不同浓度吐根碱对Vero细胞的毒性，以评价吐根碱对细胞的毒性作用。

如图1中A幅所示，右侧表示不同浓度吐根碱对Vero细胞的细胞毒性检测结果，可见随着浓度升高，吐根碱对Vero细胞的细胞毒性增强，图1中B幅示出了吐根碱对Vero细胞的CC₅₀为1.96±0.37μM。CC₅₀是指使得50％的细胞发生病变时的药物浓度。

2.2、吐根碱对SARS-CoV-2病毒的体外抑制作用检测

1)将吐根碱采用DMSO进行梯度稀释，初始浓度为1mM，3倍比稀释，共8个浓度，吸取每个浓度的吐根碱溶液1μL至1mL含2％FBS、1％双抗的DMEM维持培养基中，作为细胞维持液，共8组，用于后续实验；

2)取一瓶单层致密Vero细胞，首先将细胞消化后加入新鲜DMEM培养基(含10％FBS和1％双抗)，分散均匀后将细胞密度稀释至2.0×10⁵个细胞/mL；

3)在96孔板中每孔加入100μL细胞悬液(2.0×10⁴个/孔)，置于细胞培养箱，37℃、5％CO₂条件下培养24h后观察细胞生长情况；

4)待细胞贴壁达到底面积95％左右时，吸出细胞培养板孔内的培养液，每孔以100μL维持培养基(含2％FBS、1％双抗的DMEM维持培养基)洗涤2遍；选择TCID₅₀为20～30的病毒液(根据实施例1中1.5的方法计算获得，下同)感染细胞，每孔染毒体积为20μL；感染1.5h；感染过程中轻轻左右摇匀，保证病毒与细胞充分接触；

5)吸去上清，然后使用维持培养基洗去未吸附的病毒(2次)，每孔分别加入上述8组含有不同浓度吐根碱的细胞维持液100μL，每个浓度设置3个平行，48小时后冻融一次收集病毒细胞，进行PCR检测，使用的引物序列为：SA-F：5’-CAATGGTTTAACAGGCACAGG-3’(SEQID NO:1)；SA-R：5’-CTCAAGTGTCTGTGGATCACG-3’(SEQ ID NO:2)；探针序列：SA-probe：5’-FAM-GGCAGAGACATTGCTGACACTACTGATGC-BHQ-3’(SEQ ID NO:3，其中FAM为荧光报告基团，BHQ为荧光淬灭基团)；PCR体系为：实时荧光定量一步法PCR反应液2×One Step RT-PCRBuffer III(TAKARA)10μL、PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ(TAKARA)0.4μL、5U/μL TaKaRaEx Taq HS(TAKARA)0.4μL、SA-F 0.4μL(终浓度0.1～1.0μM)、SA-R 0.4μL(终浓度0.1～1.0μM)、SA-probe 0.8μL、RNase Free ddH2O 5.6μL。在使用时，模板RNA(10pg～100ng)的使用量为2μL。PCR检测使用LightCycler Real Time PCR扩增仪进行扩增反应，扩增程序为：反转录反应：42℃5min；95℃10sec；1个循环；PCR反应程序：95℃5sec；60℃20sec；40个循环。

6)实验设置为：正常细胞对照组(培养液为含10％FBS和1％双抗的DMEM培养基加0.1％DMSO)、正常病毒对照组(培养液为含10％FBS和1％双抗的DMEM培养基加0.1％DMSO)、吐根碱(8个浓度)+病毒组(3个平行)。

如图1中A幅所示，左侧表示不同浓度吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2的抑制效果。可见，随着浓度的增加，吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2的抑制效果越明显(即病毒的感染率明显下降)，证明吐根碱能够很强地抑制SARS-CoV-2病毒的复制。如图1中B幅所示，经计算获得的吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2的IC₅₀(IC₅₀是指能够有效抑制50％细胞感染病毒的药物浓度)为0.007±0.002μM，并且此时的吐根碱浓度对Vero细胞(吐根碱对Vero细胞的CC₅₀为1.96±0.37μM)没有任何毒副作用，选择指数(Selectivity index，SI，SI＝CC₅₀/EC₅₀，SI＞1为有效)为280，这证明安全浓度的吐根碱在体外可以有效抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2的活性。

2.3、Western blot检测吐根碱对SARS-CoV-2病毒的体外抑制效果

1)取一瓶单层致密Vero细胞，首先将细胞消化后加入新鲜DMEM培养基(含10％FBS和1％双抗)，分散均匀后将细胞密度稀释至5.0×10⁵个细胞/mL；

2)在6孔板中每孔加入1mL细胞悬液(5.0×10⁵个/孔)，置于细胞培养箱，37℃、5％CO₂条件下培养过夜后观察细胞生长情况；

3)待细胞贴壁达到底面积80％左右，吸出细胞培养板孔内的培养液，每孔以1mL维持培养基洗涤2遍；选择TCID₅₀为20～30的病毒液感染细胞，每孔染毒体积为0.5mL；感染1-2h；感染过程中轻轻左右摇匀，保证病毒与细胞充分接触；

4)倾去上清，然后使用维持培养基洗去未吸附的病毒(2次)。将吐根碱采用DMSO进行稀释，初始浓度分别为：0.01mM、0.03mM、0.1mM、0.3mM，同时设立阴性对照(即不含有吐根碱的DMSO)和阳性药物(5mM的瑞德西韦，购自MCE，中国)对照，吸取每个浓度的吐根碱溶液、阴性对照和阳性对照1μL至1mL含2％FBS、1％双抗的DMEM维持液中，作为细胞维持液(共6组)，分别加入6孔板的细胞中，置于培养箱内培养24小时；24小时后，取出培养板，去掉上清，PBS洗涤1遍；

5)每孔中加入200μL的裂解液(含有蛋白酶/磷酸酶抑制剂，1:100稀释)，轻轻晃动，使其充分与细胞接触，然后置于4℃冰箱45min，每隔15min轻轻晃动6孔板并轻拍6孔板的边缘；45min后，取出培养板，将裂解液吸入至1.5mL EP管中，再加入25μl的loadingbuffer；经56℃30min灭活后，100℃加热15min，12000rpm离心2min后获得检测样品，放置于-20℃保存。

6)采用western blot方法检测各组检测样品中SARS-CoV-2病毒的核壳体表达量(其中使用的抗体购自Sino biological，Cat:40588-T62，中国)，用GAPDH作为内参。

检测结果如图1中C幅所示，相对于阴性对照，使用的四组浓度(0.01μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM，作为治疗组)的吐根碱均能表现出对新型冠状病毒SARS-CoV-2的核壳体表达的显著抑制，经估算的吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2的EC₅₀为约0.01μM；尤其是当吐根碱的作用浓度超过0.1μM时，甚至未检测到SARS-CoV-2的核壳体表达；而采用浓度为5μM的瑞德西韦阳性药物组仍然能够检测到SARS-CoV-2的核壳体表达，表明吐根碱对SARS-CoV-2的抑制作用更强。

由上述实施例2的结果可知，安全浓度的吐根碱能够很强地抑制SARS-CoV-2病毒的复制，因此吐根碱可以用于制备治疗新型冠状病毒SARS-COV-2感染的药物，并且优选当施用该药物后，吐根碱的作用浓度(即向病毒感染患者施用药物后，患者血液中的吐根碱的浓度)可以为0.005μM以上，更优选为0.01μM以上，可以有效治疗新型冠状病毒SARS-COV-2感染。另外，为了避免所述药物对于正常细胞产生不可接受的毒性，所述吐根碱在血液中的作用浓度优选为2μM以下，更优选为1μM以下。

该药物的剂型可以为以吐根碱作为药物活性成分，制成的以下任何一种药学上可接受的剂型：片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂或注射剂。

实施例3：吐根碱的体外病毒预防效果检测

3.1、吐根碱对SARS-CoV-2病毒的预防作用检测

1)按照实施例2中2.2的方法获得8个浓度的细胞维持液，用于后续实验；

4)待细胞贴壁达到底面积80％左右时，吸出细胞培养板孔内的培养液，每孔中分别加入上述8个浓度的细胞维持液100μL，每个浓度设置3个平行，于37℃、5％CO₂条件下培养3-5h；

5)感染病毒：选择TCID₅₀为20～30的病毒液感染细胞，每孔染毒体积为20μL；感染1-2小时(注意：在感染病毒期间，作为药物的吐根碱依然存在)；感染过程中轻轻左右摇匀，保证病毒与细胞充分接触；

6)倾去上清，然后使用维持培养基洗去未吸附的病毒(2次)，并加入维持培养基，每孔100μL，48小时后收集细胞及上清，随后按照上述实施例2中2.2的方法进行PCR检测。

检测结果如图2中A幅所示，表示不同浓度吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2的预防效果。可见，随着浓度的增加，吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的预防效果越明显(即病毒的感染率明显下降)，如图2中B幅所示，经计算吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2感染预防的IC₅₀为0.019±0.009μM，并且此时的吐根碱浓度对Vero细胞(吐根碱对Vero细胞的CC₅₀为1.96±0.37μM)没有任何毒副作用，这证明安全浓度的吐根碱在体外可以有效预防新型冠状病毒SARS-CoV-2的感染。

3.2、Western blot检测吐根碱对SARS-CoV-2病毒的体外预防效果

1)取一瓶单层致密Vero细胞，首先将细胞消化后加入新鲜DMEM培养基(含10％FBS和1％双抗)，分散均匀后将细胞密度稀释至4.0×10⁵个细胞/mL；

2)在6孔板中每孔加入1mL细胞悬液(4.0×10⁵个/孔)，置于细胞培养箱，37℃、5％CO₂条件下培养过夜后观察细胞生长情况；

3)待细胞贴壁达到底面积80％左右时，吸出细胞培养板孔内的培养液，每孔中分别加入上述实施例2的2.3中步骤3)的6组细胞维持液3mL，每组设置3个平行，于37℃、5％CO₂条件下培养3.5h；

4)感染病毒：选择TCID₅₀为20～30的病毒液感染细胞，每孔染毒体积为0.5mL；感染1-2h；感染过程中轻轻左右摇匀，保证病毒与细胞充分接触；

5)倾去上清，然后使用维持培养基洗去未吸附的病毒(2次)，并加入维持培养基，每孔100μL，24小时后，取出培养板，去掉上清，PBS洗涤1遍，加入200μL的裂解液，随后按照上述实施例2中2.3的方法进行Western blot检测。

检测结果如图2中C幅所示，可见，相对于阴性对照，使用的四组浓度(0.01μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM，作为预防组)的吐根碱均能表现出对新型冠状病毒SARS-CoV-2的核壳体表达的显著抑制，估算的吐根碱对新型冠状病毒SARS-CoV-2的EC₅₀为约0.01μM；尤其是当吐根碱的作用浓度超过0.01μM时，甚至未检测到SARS-CoV-2的核壳体表达，证明吐根碱在体外可有效预防SARS-CoV-2的感染；而采用浓度为5μM的瑞德西韦阳性药物组未表现出对SARS-CoV-2的核壳体表达抑制，因此不能预防SARS-CoV-2病毒的感染。

由上述实施例3结果可知，在安全浓度的吐根碱存在的情况下，可以有效预防新型冠状病毒SARS-CoV-2的感染，因此吐根碱可以用于制备预防新型冠状病毒SARS-COV-2感染的药物，并且优选当施用该药物后，吐根碱的作用浓度可以为0.01μM以上，优选0.02μM以上且2μM以下，可以有效预防新型冠状病毒SARS-COV-2的感染。

另外，该药物的剂型可以为以吐根碱或其衍生物或药用盐作为药物活性成分，制成的以下任何一种药学上可接受的剂型：片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂或注射剂。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 中国科学院合肥物质科学研究院

安徽省疾病预防控制中心

安徽中科拓苒药物科学研究有限公司

<120> 吐根碱在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染的药物中的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

caatggttta acaggcacag g 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ctcaagtgtc tgtggatcac g 21

<210> 3

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggcagagaca ttgctgacac tactgatgc 29

Claims

1.吐根碱或其药学可接受的盐在制备治疗或预防冠状病毒感染的药物中的应用，其特征在于，所述冠状病毒为新型冠状病毒SARS-CoV-2。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物是以吐根碱或其药学可接受的盐作为药物活性成分制成的选自以下的剂型：片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂或注射剂。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，当所述药物在施用后，所述吐根碱或其药学可接受的盐的作用浓度为0.005μM以上且为2μM以下。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，当所述药物在施用后，所述吐根碱或其药学可接受的盐的作用浓度为0.010μM以上且为1μM以下。