CN113481266A - 一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法 - Google Patents

一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113481266A
CN113481266A CN202110867619.2A CN202110867619A CN113481266A CN 113481266 A CN113481266 A CN 113481266A CN 202110867619 A CN202110867619 A CN 202110867619A CN 113481266 A CN113481266 A CN 113481266A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fermentation
natamycin
product
yield
natamycin fermentation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110867619.2A
Other languages
English (en)
Inventor
宗工理
曹广祥
付加芳
张佩佩
陈曦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Medicinal Biotechnology Center (shandong Institute Of Virology)
Original Assignee
Shandong Medicinal Biotechnology Center (shandong Institute Of Virology)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Medicinal Biotechnology Center (shandong Institute Of Virology) filed Critical Shandong Medicinal Biotechnology Center (shandong Institute Of Virology)
Priority to CN202110867619.2A priority Critical patent/CN113481266A/zh
Publication of CN113481266A publication Critical patent/CN113481266A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
    • C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12F—RECOVERY OF BY-PRODUCTS OF FERMENTED SOLUTIONS; DENATURED ALCOHOL; PREPARATION THEREOF
    • C12F3/00—Recovery of by-products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法。将发酵结束后的纳他霉素发酵液通过离心收集上清液，得到纳他霉素发酵副产物；然后在纳他霉素发酵0～48h后，按照发酵培养基体积的2.5～7.5％，将纳他霉素发酵副产物添加至发酵培养基中，继续发酵，得纳他霉素。经本发明的方法得到的纳他霉素摇瓶发酵产量最高为2.40±0.17g/L。采取扩大生产后，在1L发酵体系中，发酵24h后添加5％的纳他霉素发酵副产物，其纳他霉素产量为8.83～8.86g/L，显著高于未添加纳他霉素发酵副产物的6.70～6.72g/L。

Description

一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法
技术领域
本发明涉及一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，属于纳他霉素制备技术领域。
背景技术
纳他霉素(Natamycin)(又称匹马霉素，Pimaricin)是一种天然、广谱、高效的多烯大环内酯类抗真菌剂，其分子式为C33H47NOl3，分子量为665.75，熔点为280℃。纳他霉素的分子结构中含有一个由26个碳原子组成的内酯环骨架结构，其中4个共扼双键形成了多烯发色团，在内酯环外还连接了一个海藻氨基糖。纳他霉素成品为白色或奶油色、无嗅、无味的结晶粉末，有三分子水以结晶水的形式结合于纳他霉素分子之上。纳他霉素分子中含有一个碱性基团与一个酸性基团，等电点为6.5。由于其性质稳定、低剂量、高效率、安全性的特点，不仅在食品原料保鲜、成品防腐方面具有较好的抗菌效果，而且在医药、青储饲料、粮储、家禽养殖等方面被广泛应用。
中国专利文献CN104946709A公开了一种发酵生产纳他霉素的方法，包括在发酵过程中同时流加还原糖和丙酸盐的步骤。由该发明方法合成纳他霉素的最高发酵单位可达8.13g/L。但是现有技术中纳他霉素的产量仍可进一步提升。
纳他霉素生物合成基因簇中存在一个胆固醇氧化酶基因(sgnE/pimE/scnE/slnE)，其编码的胆固醇氧化酶并不参与纳他霉素的母核、侧链的合成及缩合反应。但近年来国内外研究证实，胆固醇氧化酶在纳他霉素的生物合成中必不可少。胆固醇氧化酶可能作为信号蛋白参与纳他霉素的合成与积累【Mendes MV,Recio E,Anton N,Guerra SM,Santos-Aberturas J,Martin JF,Aparicio JF.Cholesterol oxidases act assignaling proteins for the biosynthesis of the polyene macrolidepimaricin.Chemistry and Biology,2007,14:279-290】。进一步的相关研究说明，发酵初期添加成品的胆固醇氧化酶能够提高纳他霉素的产量【Wang M,Wang SH,Zong GL,Hou ZW,Liu F,Liao DJ,Zhu XQ.Improvement of natamycin production by cholesteroloxidase overexpression in Streptomyces gilvosporeus,Journal of Microbiologyand Biotechnology,2016,26(2):241-247】。
在纳他霉素发酵过程中，胆固醇氧化酶能分泌到发酵培养基中，因此，在纳他霉素发酵副产物中存在大量能够提高纳他霉素产量的胆固醇氧化酶。然而，目前在纳他霉素生产、提取及纯化工艺中，胆固醇氧化酶随着其他发酵副产物被一同作为废液处理掉，造成了这种宝贵的副产物被浪费的现象。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法。本发明人首次发现纳他霉素发酵副产物可以促进提高纳他霉素的发酵产量，并且在提高纳他霉素的发酵产量的同时，合理化利用了纳他霉素发酵副产物，变废为宝。
本发明的技术方案如下：
一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，步骤如下：
将发酵结束后的纳他霉素发酵液通过离心收集上清液，得到纳他霉素发酵副产物；然后在纳他霉素发酵0～48h后，按照发酵培养基体积的2.5～7.5％，将纳他霉素发酵副产物添加至发酵培养基中继续发酵，得纳他霉素。
本发明中发酵结束后的纳他霉素发酵液为正常发酵108～120h后的发酵液，由于纳他霉素微溶，经离心后，得到的沉淀主要为纳他霉素产物，回收后并入待提取的发酵液中进行纳他霉素的提取，上清液为纳他霉素发酵副产物，在纳他霉素发酵过程中添加至发酵培养基，用于纳他霉素产量的提升。
根据本发明优选的，所述离心收集的条件为转速9000～11000rpm，时间12～18min。
根据本发明优选的，所述的纳他霉素发酵副产物中胆固醇氧化酶的酶活大于等于1U/mL；进一步优选为1.3～1.5U/mL。
根据本发明优选的，所述纳他霉素发酵生产所用菌株为褐黄孢链霉菌(Streptomyces gilvosporeus)、纳塔尔链霉菌(Streptomyces natalensis)、恰塔努加链霉菌(Streptomyces chattanoogensis)或利迪链霉菌(Streptomyces lydicus)。
根据本发明优选的，在纳他霉素发酵生产12～36h后添加纳他霉素发酵副产物；进一步优选为24h后。
根据本发明优选的，所述纳他霉素发酵的总时间为100～150h；进一步优选为120h。
根据本发明优选的，所述纳他霉素发酵副产物的添加量为发酵培养基体积的5％。
一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，具体包括步骤如下：
(1)将发酵结束后的纳他霉素发酵液通过离心收集上清液，得到纳他霉素发酵副产物；
(2)无菌条件下，取纳他霉素生产菌孢子涂布于琼脂斜面培养基中活化，然后将活化好的孢子刮入种子培养基中进行摇床培养，得种子液；
(3)将步骤(2)中的种子液按5～10％的接种量接入发酵培养基中发酵培养，在发酵0～48h后，将步骤(1)收集的纳他霉素发酵副产物按照发酵培养基体积的2.5～7.5％添加至发酵培养基中，继续发酵，发酵总时间为100～150h，得纳他霉素。
根据本发明优选的，步骤(2)中，所述琼脂斜面培养基的配方为：葡萄糖5.0～15.0g/L，麦芽浸粉1.0～5.0g/L，酵母浸膏1.0～5.0g/L，蛋白胨3.0～10.0g/L，琼脂粉10.0～20.0g/L，pH7.0～7.2；
所述种子培养基的配方为：葡萄糖10.0～30.0g/L，酵母浸膏3.0～10.0g/L，黄豆饼粉30.0～50.0g/L，pH 7.0～7.2。
根据本发明优选的，步骤(2)中，所述摇床培养的条件为转速150～200rpm，温度26～30℃，培养时间36～48h。
根据本发明优选的，步骤(3)中，所述发酵培养基的配方为：大豆蛋白胨20g/L，酵母提取物4.5g/L，氯化钠2g/L，结晶硫酸镁1g/L，葡萄糖60g/L，pH 7.5。
本发明中未详细说明的实验步骤，尤其是纳他霉素发酵过程，均按照本领域现有技术记载的方法进行。
本发明包含以下有益效果：
1、由于纳他霉素在水中的溶解度极低(50～100mg/L)，因此通过充分离心能够达到将发酵结束后的纳他霉素发酵液、纳他霉素及菌体分离的效果，得到含有胆固醇氧化酶的纳他霉素发酵副产物。再向发酵培养基中添加该纳他霉素发酵副产物，可以有效利用胆固醇氧化酶能够提高纳他霉素的产量的特点，显著提高纳他霉素生产菌株纳他霉素产量。经本发明的方法得到的纳他霉素摇瓶发酵产量最高为2.40±0.17g/L。采取扩大生产后，在1L发酵体系中，发酵24h后添加5％的纳他霉素发酵副产物，其纳他霉素产量为8.83～8.86g/L，显著高于未添加纳他霉素发酵副产物的6.70～6.72g/L，纳他霉素产量提高了31.84％。并且与直接向发酵培养基中添加市售胆固醇氧化酶的纳他霉素产量7.15～7.69g/L相比，本发明的方法纳他霉素产量提高了23.49％。
2、本发明向发酵培养基中添加含胆固醇氧化酶的纳他霉素发酵副产物，一方面可以为纳他霉素生产制备提供胆固醇氧化酶，从而提高纳他霉素产量；另一方面，纳他霉素发酵培养基采用葡萄糖、蛋白胨、酵母粉和无机盐等商品化成分，并且在较长的发酵过程中不断补加的碳源，在生产结束后往往剩余一部分未被消耗，本发明避免了这部分营养被作为废液丢弃，克服了浪费问题，可以将部分未消耗的原料再次利用，产生了极大的经济效益。
具体实施方式
以下实施例和试验例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明中所涉及材料均为普通市售产品。
琼脂斜面培养基的配制：葡萄糖10g/L，麦芽浸粉3g/L，酵母浸膏3g/L，蛋白胨5g/L，琼脂粉15g/L，pH 7.0，121℃×20min灭菌，冷却后备用。
摇瓶种子培养基的配制：葡萄糖20g/L，酵母浸膏5g/L，黄豆饼粉40g/L，pH 7.2，121℃×20min灭菌，冷却后备用。
发酵罐纳他霉素液体种子培养基的配制：葡萄糖10g/L，酵母提取物3g/L，大豆蛋白胨5g/L，麦芽浸粉3g/L；消泡剂，1.40g/L；pH7.0～7.2，121℃×20min灭菌，冷却后备用。
发酵培养基的配制：大豆蛋白胨20g/L，酵母提取物4.5g/L，氯化钠2g/L，结晶硫酸镁1g/L，葡萄糖60g/L，pH7.5；121℃×20min灭菌，冷却后备用。
pH的测定：利用梅特勒pH计进行直接测定。
实施例1：纳他霉素发酵副产物的制备
取纳他链霉菌于琼脂斜面培养基上活化，活化后从琼脂斜面培养基上刮取一环纳他链霉菌孢子，接种至摇瓶种子培养基中；30℃下，以200rpm的转速在摇床中振荡培养24h，得种子液；将种子液按照5％接种量转接至发酵培养基中，200rpm，28℃发酵120h，发酵结束，得纳他霉素发酵液。
将上述得到的纳他霉素发酵液10000rpm离心15min，收集上清液，得纳他霉素发酵副产物。测定纳他霉素发酵副产物的胆固醇氧化酶酶活，达到1U/mL以上为合格的发酵上清液。
其中，胆固醇氧化酶酶活的具体测定方法为：
配制溶液A：4-氨基安替比林，1mmol/L；苯酚，6mmol/L；过氧化物酶，7000U/L；磷酸钾缓冲液(pH 7.5)，25mmol/L；
配制溶液B：胆固醇，8.26g/L；Triton X-100，4.26％；异丙醇为溶剂；
取3mL溶液A于试管中，37℃保温3min，加入不同量过氧化氢溶液使得终浓度在0.02～0.10mmol/L，反应5min，在500nm处测定吸光度，建立标准曲线。取3mL溶液A，150μL溶液B于5mL EP管中，于37℃保温3min，加入50μL发酵液上清，准确反应5min，沸水浴中煮3min，冰浴冷却，500nm处测吸光度。
酶活计算公式：
酶活(U/mL)＝C×(V1/V2)×N÷T，
其中C，根据标准曲线计算出过氧化氢的浓度；V1，反应液总体积；V2，酶液体积；N，稀释倍数；T，反应时间。
计算结果显示，上述纳他霉素发酵副产物的胆固醇氧化酶酶活为1.5±0.07U/mL。
实施例2
一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，包括步骤如下：
1)无菌条件下，取纳他链霉菌于琼脂斜面培养基上活化，活化后从琼脂斜面培养基上刮取一环纳他链霉菌孢子，接种至摇瓶种子培养基中；30℃下，以200rpm的转速在摇床中振荡培养24h，得种子液；
2)将种子液按照5％接种量转接至发酵培养基中，发酵培养基盛装于500mL三角摇瓶中，每个500mL三角摇瓶装发酵培养基的体积为50mL，每个实验组6瓶，在接种种子液的同时添加实施例1的纳他霉素发酵副产物，200rpm，28℃发酵120h，发酵结束，得纳他霉素发酵液；其中纳他霉素发酵副产物的添加量分别为发酵培养基体积的0％(对照组)、2.5％(实验组1)、5％(实验组2)、7.5％(实验组3)和10％(实验组4)。
测定以上5组的纳他霉素含量，结果如表1所示。
纳他霉素含量测定方法按照国标GB 25532-2010中规定的方法进行。
表1不同纳他霉素发酵副产物添加量对纳他霉素产量的影响
组别 副产物添加量(体积比) 副产物中胆固醇氧化酶酶活(U/mL) 纳他霉素产量(g/L)
对照组 0 1.5±0.07 1.13±0.06
实验组1 2.5 1.5±0.07 1.32±0.14
实验组2 5 1.5±0.07 1.90±0.15
实验组3 7.5 1.5±0.07 1.748±0.17
实验组4 10 1.5±0.07 0.962±0.13
从表1的结果可以看出，向摇瓶发酵培养基中加入含胆固醇氧化酶的纳他霉素发酵副产物能够有效地提高纳他霉素的产量。实验组1～3与对照组相比，纳他霉素产量提高了16.81～68.14％。实验组1与对照组相比，纳他霉素产量提高了16.81％。实验组2与对照组相比，纳他霉素产量提高了68.14％。实验组3对照组相比，纳他霉素产量提高了54.69％。实验组4对照组相比，纳他霉素产量稍微降低。根据以上的数据结果，在本发明此后的实施例中纳他霉素发酵副产物的添加量优选为5％。
实施例3
一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，包括步骤如下：
1)无菌条件下，取纳他链霉菌于琼脂斜面培养基上活化，活化后从琼脂斜面培养基上刮取一环纳他链霉菌孢子，接种至摇瓶种子培养基中；30℃下，以200rpm的转速在摇床中振荡培养24h，得种子液；
2)将种子液按照5％接种量转接至发酵培养基中，发酵培养基盛装于500mL三角摇瓶中，每个500mL三角摇瓶装发酵培养基的体积为50mL，每个实验组6瓶，200rpm，28℃发酵培养，在发酵培养的过程中添加实施例1的纳他霉素发酵副产物，添加量为发酵培养基体积的5％，继续发酵，发酵总时间为120h，发酵结束，得纳他霉素发酵液；其中纳他霉素发酵副产物的添加时间分别为发酵培养0h后(对照组)、12h后(实验组1)、24h后(实验组2)、36h后(实验组3)、48h后(实验组4)和60h后(实验组5)。
测定以上6组的纳他霉素含量，结果如表2所示。
纳他霉素含量测定方法按照国标GB 25532-2010中规定的方法进行。
表2不同纳他霉素发酵副产物添加时间对纳他霉素产量的影响
Figure BDA0003185156270000061
从表2的结果可以直观地看出，实验组1～5与对照组相比，纳他霉素产量均有显著的提高，提高幅度达到了27.5～120.2％。但是，在菌株发酵的不同时间添加含胆固醇氧化酶的纳他霉素发酵副产物对纳他霉素产量有影响，实验组2相较于对照组纳他霉素产量提高了94.9％，相较于实验组1提高了14.2％，实验组3相较于对照组纳他霉素产量提高了120.2％，相较于实验组1提高了29.1％，实验组4和实验组5相较于实验组1则出现纳他霉素的产量降低，但是相较于对照组纳他霉素产量依然提高了27.5％以上。根据以上的数据结果，在本发明此后的实施例中纳他霉素发酵副产物的添加时间优选为24h。
实施例4
一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，包括步骤如下：
1)无菌条件下，取纳他链霉菌于琼脂斜面培养基上活化，活化后从琼脂斜面培养基上刮取一环纳他链霉菌孢子，接种至发酵罐液体种子培养基中，在29℃，300rpm的条件下，搅拌培养48h，得种子液；
2)将种子液按10％的接种量接入发酵培养基的中，发酵培养基未接种前体积为0.8L，装入1L全自动发酵罐中，在29℃的条件下进行发酵，发酵过程中溶氧DO值控制在30～40％之间，培养初期pH从初始pH值自然降落至6.00±0.10时开始流加20％浓度NaOH并将pH维持在6.00±0.20之间至发酵结束；发酵过程中流加40％质量百分比浓度的葡萄糖溶液，并始终将葡萄糖含量控制在15.00±5.00g/L，在发酵24h后，添加实施例1的纳他霉素发酵副产物，添加量为发酵培养基体积的5％，继续发酵96h后得纳他霉素；设置对照组，对照组不添加纳他霉素发酵副产物
测定以上2组的纳他霉素含量，结果如表3所示。
纳他霉素含量测定方法按照国标GB 25532-2010中规定的方法进行。
表3不同纳他霉素发酵副产物添加量在1L发酵体系中对纳他霉素产量的影响
Figure BDA0003185156270000071
从表3中可以看出，实验组由于在发酵24h后添加了5％体积的含胆固醇氧化酶的纳他霉素发酵副产物，其纳他霉素产量为8.86g/L，显著高于未添加纳他霉素发酵副产物对照组的纳他霉素产量6.72g/L，产量提高达到了31.84％。1L发酵体系验证结果表明，添加5％体积的含胆固醇氧化酶的纳他霉素发酵副产物可以显著提高纳他霉素的产量。
实施例5
一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，包括步骤如下：
1)无菌条件下，取链霉菌于琼脂斜面培养基上活化，活化后从琼脂斜面培养基上刮取一环纳他链霉菌孢子，接种至发酵罐液体种子培养基中，在29℃，300rpm的条件下，搅拌培养48h，得种子液；
2)将种子液按10％的接种量接入发酵培养基的中，发酵培养基未接种前体积为0.8L，装入1L全自动发酵罐中，在29℃的条件下进行发酵，发酵过程中溶氧DO值控制在30～40％之间，培养初期pH从初始pH值自然降落至6.00±0.10时开始流加20％浓度NaOH并将pH维持在6.00±0.20之间至发酵结束；发酵过程中流加40％质量百分比浓度的葡萄糖溶液，并始终将葡萄糖含量控制在15.00±5.00g/L，实验组在发酵24h后，添加实施例1的纳他霉素发酵副产物，添加量为发酵培养基体积的5％，继续发酵96h后得纳他霉素；设置对照组，对照组1不添加外源物质；对照组2添加与实验组等量的短杆菌属(Brevibacterium)来源纯化的市售胆固醇氧化酶；对照组3添加与实验组等量的链霉菌属(Streptomyces sp.)来源纯化的市售胆固醇氧化酶。
测定以上4组的纳他霉素含量，结果如表4所示。
纳他霉素含量测定方法按照国标GB 25532-2010中规定的方法进行。
表4不同胆固醇氧化酶在1L发酵体系中对纳他霉素产量的影响
Figure BDA0003185156270000081
从表4中可以看出，由于实验组在发酵24h后添加了5％体积的含胆固醇氧化酶的纳他霉素发酵副产物以及对照组2、3在发酵24h后添加了短杆菌属和链霉菌属来源的胆固醇氧化酶纯品，其纳他霉素产量都高于未添加的对照组1的纳他霉素产量6.70g/L，分别为8.83g/L、7.15g/L、7.69g/L，产量提高达到了31.79％，6.7％，14.77％。由于胆固醇氧化酶来源不同，与添加短杆菌属和链霉菌属来源的胆固醇氧化酶纯品的对照组相比，实验组的纳他霉素发酵产量比对照组2提高了23.49％，比对照组3提高了14.82％，产量达到最高。因此，本实施例的1L发酵体系验证结果表明，添加5％体积的含胆固醇氧化酶的纳他霉素发酵副产物可以显著提高纳他霉素的产量。

Claims (10)

1.一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，步骤如下：将发酵结束后的纳他霉素发酵液通过离心收集上清液，得到纳他霉素发酵副产物；然后在纳他霉素发酵0～48h后，按照发酵培养基体积的2.5～7.5％，将纳他霉素发酵副产物添加至发酵培养基中，继续发酵，得纳他霉素。
2.如权利要求1所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，所述离心收集的条件为转速9000～11000rpm，时间12～18min。
3.如权利要求1所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，所述的纳他霉素发酵副产物中胆固醇氧化酶的酶活大于等于1U/mL；进一步优选为1.3～1.5U/mL。
4.如权利要求1所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，所述纳他霉素发酵生产所用菌株为褐黄孢链霉菌(Streptomyces gilvosporeus)、纳塔尔链霉菌(Streptomyces natalensis)、恰塔努加链霉菌(Streptomyceschattanoogensis)或利迪链霉菌(Streptomyces lydicus)。
5.如权利要求1所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，在纳他霉素发酵生产12～36h后添加纳他霉素发酵副产物；进一步优选为24h后。
6.如权利要求1所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，所述纳他霉素发酵的总时间为100～150h；进一步优选为120h。
7.如权利要求1所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，所述纳他霉素发酵副产物的添加量为发酵培养基体积的5％。
8.如权利要求1所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，具体包括步骤如下：
(1)将发酵结束后的纳他霉素发酵液通过离心收集上清液，得到纳他霉素发酵副产物；
(2)无菌条件下，取纳他霉素生产菌孢子涂布于琼脂斜面培养基中活化，然后将活化好的孢子刮入种子培养基中进行摇床培养，得种子液；
(3)将步骤(2)中的种子液按5～10％的接种量接入发酵培养基中，发酵培养，在发酵0～48h后，将步骤(1)收集的纳他霉素发酵副产物按照发酵培养基体积的2.5～7.5％添加至发酵培养基中，继续发酵72～120h，得纳他霉素。
9.如权利要求8所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述琼脂斜面培养基的配方为葡萄糖5.0～15.0g/L，麦芽浸粉1.0～5.0g/L，酵母浸膏1.0～5.0g/L，蛋白胨3.0～10.0g/L，琼脂粉10.0～20.0g/L，pH 7.0～7.2；
所述种子培养基的配方为：葡萄糖10.0～30.0g/L，酵母浸膏3.0～10.0g/L，黄豆饼粉30.0～50.0g/L，pH 7.0～7.2；
所述摇床培养的条件为转速150～200rpm，温度26～30℃，培养时间36～48h。
10.如权利要求8所述的利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述发酵培养基的配方为：大豆蛋白胨20g/L，酵母提取物4.5g/L，氯化钠2g/L，结晶硫酸镁1g/L，葡萄糖60g/L，pH 7.5。
CN202110867619.2A 2021-07-28 2021-07-28 一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法 Pending CN113481266A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110867619.2A CN113481266A (zh) 2021-07-28 2021-07-28 一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110867619.2A CN113481266A (zh) 2021-07-28 2021-07-28 一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113481266A true CN113481266A (zh) 2021-10-08

Family

ID=77944605

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110867619.2A Pending CN113481266A (zh) 2021-07-28 2021-07-28 一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113481266A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993003171A1 (en) * 1991-08-05 1993-02-18 Bio-Technical Resources Continuous natamycin production
CN102827903A (zh) * 2012-08-03 2012-12-19 武汉中科光谷绿色生物技术有限公司 一种利用高山被孢霉发酵废液提高纳他霉素产量的方法
CN103923870A (zh) * 2014-04-30 2014-07-16 山东大学 一种生产纳他霉素的基因工程菌及其构建方法与应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993003171A1 (en) * 1991-08-05 1993-02-18 Bio-Technical Resources Continuous natamycin production
CN102827903A (zh) * 2012-08-03 2012-12-19 武汉中科光谷绿色生物技术有限公司 一种利用高山被孢霉发酵废液提高纳他霉素产量的方法
CN103923870A (zh) * 2014-04-30 2014-07-16 山东大学 一种生产纳他霉素的基因工程菌及其构建方法与应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108467876B (zh) 一种提高可得然胶产量的发酵方法
CN106635934B (zh) 一种嗜热型乳酸杆菌及人工添加该嗜热型乳酸杆菌的玉米浸泡方法
Rodrigues et al. Effects of inoculum concentration, temperature, and carbon sources on tannase production during solid state fermentation of cashew apple bagasse
CN108949713B (zh) 一种米曲霉菌体发酵液的制备方法及其在低聚果糖生产中的应用
CN101703152B (zh) 一种利用啤酒麦糟制备虾青素饲料添加剂的方法
CN107955825A (zh) 一种以d-阿洛酮糖为主要成分的甜味剂组合物的制备方法
CN101942406A (zh) 海洋拟诺卡氏菌株HY-G及其产生的β-葡萄糖苷酶
CN113481266A (zh) 一种利用纳他霉素发酵副产物提高纳他霉素发酵产量的方法
CN103497977B (zh) 一种发酵制备柠檬酸的方法
WO2023103543A1 (zh) 一种核酸酶p1的制备方法
CN109136314A (zh) 利用密西根克雷伯氏菌合成2’-脱氧-2-氨基腺苷的方法
CN109136313A (zh) 利用密西根克雷伯氏菌合成2’-脱氧腺苷的方法
CN112111408B (zh) 一种米卡芬净前体wf11899a生产菌株及发酵方法
BRPI0705359B1 (pt) processo de obtenção de frutooligossacarídeos em bioreator utilizando enzima frutosiltransferase
CN114875100B (zh) 一种通过提前激活纳他霉素合成来提高纳他霉素发酵产量的方法
CN111424061B (zh) 一株赤红球菌及其用于烟酰胺生产的方法
CN110564782A (zh) 一种赤藓糖醇发酵生产方法
CN110885136A (zh) 柠檬酸钙洗涤废水的处理方法以及柠檬酸的制备方法
RU2605635C1 (ru) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА С ЭНДОИНУЛИНАЗНОЙ И САХАРАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПУТЕМ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ШТАММА МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА PENICILLIUM CANESCENS Sopp INUA3
CN111041062B (zh) 一种甾体化合物的制备方法
CN106947793A (zh) 一种麸酸的发酵提取工艺
CN101538577B (zh) 嗜热糖化酶表达盒及其应用
CN117617355A (zh) 一种酶解构树粉及其制备方法与应用
CN117050963A (zh) 一种高活力右旋糖酐蔗糖酶的生产方法
CN116855562A (zh) 一种核苷代谢因子培养基发酵生产腺苷的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20211008