CN113476500A - 莲须及其提取物抗疲劳的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了莲须及其提取物抗疲劳的新用途。本发明同时公开了一种缓解疲劳的药物组合物,该药物组合物是由莲须与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂配合而成。根据不同的给药方法,本发明药物组合物可以含有莲须或莲须提取物0.1%‑99%重量。可以将莲须及其提取物制备成具有抗疲劳功效的药物、保健品,用于抗疲劳。
Description
技术领域
本发明涉及莲须的一种新的生物活性用途,尤其涉及莲须及其提取物在制备抗疲劳药物、保健品中的用途,属于莲须的药理用途领域。
背景技术
疲劳是一种疲乏无力的主观感觉,是机体由于体力或脑力劳动时间过久或强度过大造成体内组织器官所需营养物质和氧气供应不足、乳酸等代谢物蓄积增多,进而向大脑发出信号而产生的疲劳感觉。如今疲劳广泛存在于各类人群中,这与当今社会人们普遍存在的快节奏生活方式所致的作息和饮食不规律、睡眠不足、运动缺乏、心理压力大和精神紧张等息息相关。因此,社会对抗疲劳的产品需求日益增大。
莲须为睡莲科莲属植物莲(NelumbonuciferaGaerth)的干燥雄蕊。其味甘、涩,性平,归心、肾经。具有固肾涩精之功效,可用于遗精滑精、带下、尿频等症。现代药理学研究表明其具有收缩子宫、雌激素样、抗腹泻、抗氧化、镇痛等作用。根据古籍中所记载的固肾涩精作用,我们推测莲须应具有抗疲劳功效。因此,本课题组采用慢性束缚应激造成了小鼠疲劳模型,发现莲须提取物可显著改善小鼠的疲劳状态,表现为可显著提高小鼠在负重游泳中的力竭时间和首次连续下沉时刻,提高抓力,表明莲须具有良好的抗疲劳作用。
迄今为止,尚无莲须抗疲劳的药理作用的报道。
发明内容
本发明提供了莲须及其提取物抗疲劳的新用途
本发明所解决的另一个技术问题是提供一种缓解疲劳的药物组合物,该药物组合物是由莲须与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂配合而成。根据不同的给药方法,本发明药物组合物可以含有莲须或莲须提取物0.1%-99%重量。
其中,可以向莲须或提取物中加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂后,以常规的制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂,例如可以是注射剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)、口服制剂(片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸)等;其中,所述的辅料可以是抗氧络合剂、填充剂、骨架材料等;所述的药学上可接受的载体是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖苷、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。
更具体的,本发明提供了莲须或其提取物在制备具有抗疲劳功效的药物或保健品中的应用。
所述的药物是由莲须或莲须提取物与药学上可接受的载体或辅料制备而成。
所述的的药学上可接受载体或辅料包括赋形剂或稀释剂。
所述的药学上可接受的载体或辅料是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖苷、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。
所述的载体或辅料可以是抗氧络合剂、填充剂、骨架材料。
所述的药物或保健品是任何一种适宜的制剂。
所述的制剂可以是注射剂、口服制剂。
所述的注射剂是粉针、冻干粉针、水针、输液;所述的口服制剂是片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸。
所述莲须提取物的制备方法包括如下步骤:称取干燥莲须50g,加入去离子水或乙醇1000ml(20倍体积)微沸煎煮或回流提取60min,重复提取3次,提取液合并减压浓缩至浸膏状,得率约为15%-25%,存于-20度保存备用。
本发明同时提供了一种具有抗疲劳功效的组合物,包含莲须或其提取物,组合物中含有莲须或莲须提取物的重量百分比为0.1%-99%。
本发明所述的莲须提取物的制备方法包括如下步骤:称取干燥莲须50g,加入去离子水或乙醇1000ml(20倍体积)微沸煎煮或回流提取60min,重复提取3次。合并3次提取液,水浴蒸干或减压浓缩至浸膏状,于-20℃冰箱保存备用。提取物得率为15%-25%。
本发明人意外的发现,莲须提取物能够有效缓解动物的疲劳状况,从而可以将莲须制备成具有抗疲劳功效的药物、保健品。
实施例1
莲须水提取物对正常小鼠急性运动所致的疲劳行为的改善作用
1、实验材料
1)实验动物:ICR雄性小鼠36只,4周龄,体重22±1g,购自北京市维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK(京)2016-0006。动物购入后于SPF级动物中心饲养。保持饲养环境安静,室温22-25℃,湿度50%-60%,明暗交替周期12h/12h。整个实验过程中小鼠可自由进食进水。
2)试剂和药材:乳酸试剂盒和肝/肌糖原试剂盒购自南京建成生物工程研究所。尿素测定试剂盒、乳酸脱氢酶测定试剂盒和谷草转氨酶测定试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司。按照试剂盒内说明书方法操作对血清乳酸(LD)、尿素(Urea)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肝脏和肌肉糖原进行检测。莲须药材采自湖南省常徳市安乡县安裕乡双剅口村。
2、实验方法
1)莲须水提取物的制备,称取莲须样品50g,加入1000ml(20倍体积)去离子水,微沸煎煮提取60min,重复提取3次。合并3次提取液,水浴蒸发浓缩至干(11.2g),于-20℃保存备用。提取物得率为22.38%。
2)动物分组与给药:小鼠适应性饲养4天,根据体重将其随机分为3组,即空白对照组、莲须提取物低剂量组(110mg/kg,相当于生药剂量0.5g/kg)和高剂量组(220mg/kg,相对于生药剂量1.0g/kg),每组动物12只。莲须组小鼠每天按剂量灌胃给药一次(10ml/kg),空白对照组灌胃给予去离子水。给药15天后进行抓力和负重游泳的行为学检测。
3)动物行为检测:
(1)抓力实验:于第16天上午测试小鼠肌肉力量。将小鼠置于大小鼠抓力仪上,让其握住抓力仪,轻轻牵拉尾部使其产生反作用力。逐渐增大拉力直到动物牵拉不住而松爪,握力仪高精度力量传感器会记录下最大拉力,每只小鼠测量3次,取平均值。
(2)负重游泳实验:于第16天下午进行此实验。给小鼠尾根部负荷8%体重的铅皮,然后将其置于自动游泳检测仪的独立游泳桶中进行游泳行为检测,记录首次连续下沉时间和力竭时间。游泳桶直径为20cm,水温25±0.5℃,水深≥25cm。首次连续下沉时刻为小鼠在游泳过程中首次出现连续两次及以上头部完全沉入水下的时刻;力竭判断为小鼠头部完全沉入水中,且经7s仍不能返回水面,力竭时间为从游泳开始至力竭发生所经时长。当小鼠力竭时立即将其捞出,擦去身上水分,放回原笼中恢复。游泳用水为自来水,需提前一天烧开并放冷至室温以除去所含气体,实验前调整至所需温度。
4)生化指标检测:
负重游泳实验结束后的次日,小鼠在同上水环境中游泳20min(需准确计时)后,休息60min,然后在戊巴比妥钠麻醉下,腹主动脉取血,并收集肝脏和腓肠肌。获得的血静置4h后于3500r/min离心15min得血清。血清、肝脏和腓肠肌存于-80℃冰箱中待测。
血乳酸、肌糖原、肝糖原的含量按试剂盒中的说明书手动测定,血清中的乳酸脱氢酶(LDH)、尿素(Urea)、和谷草转氨酶(AST)水平、使用试剂盒通过全自动生化仪自动检测。
5)数据分析:
采用SPSS25.0统计软件进行分析,所有数据均采用mean±SEM表示。p<0.05认为具有统计学显著性差异。
3、实验结果
1)对抓力的影响
结果如表1所示,与空白对照组比较,莲须提取物给药15天后小鼠的抓力显著提高,低剂量和高剂量组分别提高了16.44%和12.10%,且均具有统计学差异(p<0.01,p<0.05)。
表1.莲须提取物对正常小鼠抓力的影响
与空白对照组比较,*p<0.05,**p<0.01。mean±SEM
2)对负重游泳首次连续下沉时刻和力竭时间的影响
结果如表2所示,与空白对照组比较,莲须高剂量给药15天后,小鼠负重游泳中的首次连续下沉时刻被显著推迟,从均值的106.40s延长至286.64s(P<0.01),提高了约1.7倍。而莲须低剂量组与对照组比无明显差异。在游泳耐力上,莲须高剂量亦可明显延长力竭时间从280.22s到473.83s,提高了69.3%。尽管低剂量的莲须亦能使力竭时间均值延长31.1%,但由于组内个体差异大,与空白组比较没有出现统计学差异。
表2.莲须提取物对正常小鼠负重游泳首次连续下沉时刻和力竭时间的影响
与空白对照组比较,*p<0.05,**p<0.01。mean±SEM
3)对生化指标的影响
结果如表3显示,与空白对照组比较,给药15天后莲须组小鼠的血清中乳酸和尿素(Urea)水平显著下降;谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性显著降低;并且肌糖原和肝糖原含量显著升高。这些指标均显示,给予莲须后小鼠的疲劳现象明显低于未给药的空白对照组,说明莲须具有很好的抗体力疲劳的功效。
表3.莲须提取物对正常小鼠游泳后疲劳相关生化指标的影响
与空白对照组相比较,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001。mean±SEM
实施例2
莲须水提取物对慢性束缚应激(CRS)所致小鼠疲劳行为的改善作用
1、实验材料
1)实验动物:ICR雄性小鼠48只,4周龄,体重22±1g,购自北京市维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK(京)2016-0006。动物购入后于SPF级动物中心饲养。保持饲养环境安静,室温22-25℃,湿度50%-60%,明暗交替周期12h/12h。整个实验过程中小鼠可自由进食进水。
2)药物及试剂:同实施例1。
2、实验方法
1)动物分组与造模:小鼠适应性饲养4天,根据体重将动物随机分为4组,即空白对照组、模型组、莲须提取物低剂量组(110mg/kg,相当于生药剂量0.5g/kg)和高剂量组(220mg/kg,相对于生药剂量1.0g/kg),每组12只。除空白对照组外,其余各组均进行CRS刺激以建立小鼠疲劳模型。造模时间为15天,每天束缚8h(11:00-19:00)。束缚时小鼠被限制在束缚管(内径30mm,长120mm)中无法自由活动,束缚结束后放回原饲养笼中。
2)给药:造模同时各给药组小鼠每天按剂量灌胃给药一次(10ml/kg),正常组和模型组灌胃给予同体积去离子水。给药后1h开始进行束缚。给药15天后,进行抓力和负重游泳的行为学检测。
3)小鼠行为检测:
(1)抓力实验:于第16天上午测试小鼠肌肉力量,方法同案例1中所述。
(2)负重游泳实验:于第16天下午测试小鼠负重游泳中首次连续下沉时刻及力竭时间,方法同施例1中所述。
4)数据分析:同实施案例1。
3、实验结果
1)对抓力的影响
结果如表4显示,与空白对照组相比,模型组小鼠在CRS刺激15天后抓力显著降低(p<0.05),给药各组较模型组抓力升高,且莲须提取物给药组的低和高剂量组与模型组相比分别提高了16.58%和14.07%,均具有显著差异(p<0.05)。
表4.莲须提取物对CRS模型小鼠抓力的影响
与空白对照组比较,#p<0.05;与模型组比较,*p<0.05。mean±SEM
2)对负重游泳首次连续下沉时刻和力竭时间的影响
结果如表5所示,与空白对照组相比,模型组小鼠在CRS刺激15天后负重游泳首次连续下沉时刻显著延后(p<0.001)。给药各组较模型组首次连续下沉时刻延长,且莲须给药组的低和高剂量组与模型组相比有显著性差异(p<0.05,p<0.001)。在游泳耐力上,较空白对照组相比,模型组力竭时间显著缩短(p<0.01)。莲须给药各组较模型组力竭时间延长,且莲须给药组的高剂量组与模型组相比提升显著(p<0.05),延长了77.7%。
表5.莲须提取物对CRS模型小鼠负重游泳首次连续下沉时刻和力竭时间的影响
与空白对照组相比较,###p<0.001;与模型组比较,*p<0.05,***p<0.001。mean±SEM
实施例3
莲须醇提取物对CRS所致小鼠疲劳行为的改善作用
1、实验材料
1)实验动物:同实施例2。
2)试剂和药材:同实施例1
2、实验方法
1)莲须醇提取物的制备:称取莲须样品50g,加入1000ml(20倍体积)80%乙醇,加热回流提取60min,重复提取3次。合并3次提取液,于旋转浓缩仪减压浓缩至干,得醇提取物8.05g,于-20℃保存待用。提取物得率为16.1%。
2)造模:同实验案例2。
3)动物分组与给药:小鼠适应性饲养4天,根据体重将其随机分为3组,即空白对照组、莲须醇提取物低剂量组(80mg/kg,相当于生药剂量0.5g/kg)和高剂量组(160mg/kg,相对于生药剂量1.0g/kg),每组动物12只。莲须组小鼠每天按剂量灌胃给药一次(10ml/kg),空白对照组灌胃给予去离子水。给药15天后进行负重游泳力竭时间检测。
4)小鼠行为检测:负重游泳实验:方法同实验案例2。
5)数据分析:同实施例1。
3、实验结果
莲须醇提取物对CRS所致疲劳模型小鼠负重游泳力竭时间的影响如表6所示,与空白对照组相比,模型组小鼠在慢性束缚应激15天后力竭时间显著缩短(P<0.001),说明出现了明显的疲劳现象。当给予莲须提取物后,其游泳耐力明显提高,特别是低剂量组其耐力相比模型组提升了53%(P<0.05)。尽管高剂量组与模型组比较没有出现统计学差异,但其力竭时间均值亦提高了27%。
表6莲须醇提物对CRS模型小鼠负重游泳力竭时间的影响
与空白对照组相比较,###p<0.001;与模型组比较,*p<0.05。mean±SEM
Claims (11)
1.莲须或其提取物在制备具有抗疲劳功效的药物或保健品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的药物是由莲须或莲须提取物与药学上可接受的载体或辅料制备而成。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的的药学上可接受载体或辅料包括赋形剂或稀释剂。
4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的药学上可接受的载体或辅料选自木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖苷、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。
5.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的载体或辅料包括抗氧络合剂、填充剂、骨架材料。
6.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的药物或保健品是任何一种适宜的制剂。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于所述的制剂包括注射剂、口服制剂。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于所述的注射剂包括粉针、冻干粉针、水针、输液;所述的口服制剂包括片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸。
9.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述莲须提取物的制备方法包括如下步骤:称取干燥莲须,加入去离子水或乙醇,干燥莲须与去离子水或乙醇的体积比是1:20,微沸煎煮或回流提取60min,重复提取3次,提取液合并减压浓缩至浸膏状,得率为15%-25%,存于-20度保存备用。
10.根据权利要求1-9中任一所述的应用,其特征在于,莲须或莲须提取物的用量占所述药物或保健品总重量的0.1%-99%。
11.一种具有抗疲劳功效的组合物,包含莲须或其提取物,其特征在于,组合物中含有莲须或莲须提取物的重量百分比为0.1%-99%。
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李天海: "《方药家珍》", 31 May 2002, 人民军医出版社 * |
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