CN113461631B - 一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种1,3,4‑恶二唑类神经氨酸酶抑制剂及其制备方法与应用，该抑制剂具有式(I)所示的结构：

Description

一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，尤其是涉及一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂及其制备方法与应用。
背景技术
神经氨酸酶是分布于流感病毒被膜上的一种糖蛋白，可以协助成熟的流感病毒脱离原来的宿主细胞去感染新的细胞，因此神经氨酸酶是抗流感病毒药物研发的重要靶点之一。
目前，美国FDA批准的抗流感病毒的药物仅6个，2个M2质子通道抑制剂(金刚烷胺和金刚烷乙胺)、3个神经氨酸酶抑制剂(扎那米韦、奥司他韦和帕拉米韦)和1个RNA依赖RNA聚合酶抑制剂(索夫鲁扎)。以神经氨酸酶为靶点开发的抗流感药物可根据结构分为以下几类：环己烯类、吡喃类、吡咯烷类、苯甲酸衍生物类以及天然产物类等。目前使用最广的抗流感药物是达菲，但是随着药物的广泛使用，流感病毒对达菲的耐药性也随之出现，而且达菲的生产原料极其昂贵，合成工艺复杂。
因此，开发出一款结构新型并具有更好抑制效果神经氨酸酶的抑制剂迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的就是为了解决上述问题而提供一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂及其制备方法与应用，本发明提供一种结构新颖的抑制剂，实验表明其具有良好的神经氨酸酶抑制活性，能够用于制备抑制神经氨酸酶活性的药物。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂，该抑制剂具有式(I)所示结构：
Figure BDA0003137953500000021
其中，其中，R1选自如下结构式中的任意一种：
Figure BDA0003137953500000022
(X＝C、F、Cl、Br或I)、
Figure BDA0003137953500000023
Figure BDA0003137953500000024
R2选自如下结构式中的任意一种：
Figure BDA0003137953500000025
Figure BDA0003137953500000026
(X＝C、F、Cl、Br或I)、
Figure BDA0003137953500000027
Figure BDA0003137953500000028
Figure BDA0003137953500000031
优选的，R1选自
Figure BDA0003137953500000032
(X＝C、F或Cl)、
Figure BDA0003137953500000033
中的任意一种。
R2选自
Figure BDA0003137953500000034
中的任意一种。
进一步优选，所述抑制剂具有如下结构：
Figure BDA0003137953500000035
最优选地，该抑制剂具有如下结构：
Figure BDA0003137953500000041
上述1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，制备方法的方程式如下所示：
Figure BDA0003137953500000042
制备方法具体包括以下步骤：
(1)将苯胺、氯乙酰氯、三乙胺反应后经后处理得到式(II)中间体；
(2)将苯甲酰肼、二硫化碳和氢氧化钾反应后经后处理得到式(III)中间体；
(3)取式(II)中间体和式(III)中间体溶于有机溶剂中，反应后经后处理得到式(I)所示的1,3,4-恶二唑类抑制剂。
其中，步骤(1)中，采用三乙胺作为催化剂，所述有机溶剂采用干燥的二氯甲烷。
步骤(1)中，所述反应体系置于温度为0-20℃，优选为15℃，反应的时间为8-24h，优选为24h。
步骤(1)中，后处理的过程具体为：反应结束后，依次用1moL-1盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，真空除去溶剂得到式(II)中间体。
步骤(1)中，所述苯胺、氯乙酰氯、三乙胺和有机溶剂的添加量比为(3-8)mmol:(3-8)mmol:(3-8)mmol：(10-40)ml，优选为5mmol:5mmol:5mmol:30ml。
步骤(2)中，采用氢氧化钾作为催化剂，所述有机溶剂采用干燥的乙醇。
步骤(2)中，所述反应体系置于温度为25-100℃，优选为80℃，反应的时间为14-48h，优选为24h。
步骤(2)中，取出反应体系进行冷却、将反应液倒入冰水中，用稀盐酸调酸至pH＝3，待固体完全析出，进行过滤操作，用冰水洗涤滤饼，再将滤饼进行常温干燥，最后用乙醇重结晶得到式(III)中间体。
步骤(2)中，所述苯甲酰肼、二硫化碳和氢氧化钾的添加量比为5mmol:(5-10)mmol：(5-10)mmol，优选为5mmol:10mmol：5mmol。
步骤(3)中，所述有机溶剂采用丙酮、乙腈或DMF，优选为丙酮。
步骤(3)中，所述反应体系置于油浴中进行加热，反应的温度为15-25℃，优选为20℃，反应的时间为8-24h，优选为24h。
步骤(3)中，后处理的过程具体为：取出反应体系进行冷却，常压抽滤取母液，旋蒸，拌样，柱层析得到式(I)所示的抑制剂。
步骤(3)中，所述式(II)中间体，式(III)中间体、无水碳酸钾、碘化钾和有机溶剂的添加量比为(1-1.5)mmol:(1-1.5)mmol:(1-1.5)mmol：(0.1-1)mmol：(10-20)ml，优选为1.2mmol:1mmol:1mmol：0.1mmol：15ml。
上述1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂能够用于制备能够抑制神经氨酸酶活性的药物。
本发明利用基于受体的分子对接虚拟筛选方法，从ZINC数据库中筛选了116708个化合物，得到了理论上具有神经氨酸酶抑制活性的一个化合物，继而对其结构进行改造，设计出了更为合理的化合物，并对其中十个化合物进行了神经氨酸酶测试，以奥司他韦酸(OSC)作为阳性对照，其中OSC的IC50值为0.082μM。本发明所合成的如下两个化合物的IC50值(0.027μM和0.032μM)都小于阳性对照OSC的IC50值0.082μM，表明其具有比奥司他韦酸更好的抑制神经氨酸酶的活性：
Figure BDA0003137953500000051
其中，抑制效果最好的化合物
Figure BDA0003137953500000052
其IC50值为0.027μM，具有非常优异的神经氨酸酶抑制活性。
本发明提供一种具有新骨架结构的神经氨酸酶抑制剂及其制备方法和应用，合成方法简单，制得的抑制剂神经氨酸酶抑制活性好，具有优异的神经氨酸酶抑制效果，有望应用于制备抑制神经氨酸酶活性的药物。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但绝不是对本发明的限制。
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂，该抑制剂具有式(I)所示结构：
Figure BDA0003137953500000061
其中，其中，R1选自如下结构式中的任意一种：
Figure BDA0003137953500000062
(X＝C、F、Cl、Br或I)、
Figure BDA0003137953500000063
Figure BDA0003137953500000064
R2选自如下结构式中的任意一种：
Figure BDA0003137953500000065
Figure BDA0003137953500000066
(X＝C、F、Cl、Br或I)、
Figure BDA0003137953500000067
Figure BDA0003137953500000071
一种如上述所述的1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，制备方法的方程式如下所示：
Figure BDA0003137953500000072
所述制备方法具体包括以下步骤：
(1)将苯胺，氯乙酰氯，三乙胺反应后经后处理得到式(II)中间体；
(2)将苯甲酰肼，二硫化碳和氢氧化钾反应后经后处理得到式(III)中间体；
(3)取式(II)中间体和式(III)中间体溶于有机溶剂中，反应后经后处理得到式(I)所示的1,3,4-恶二唑类抑制剂；
步骤(1)中，采用三乙胺作为催化剂，所述有机溶剂采用二氯甲烷，所述反应体系置于温度为0-20℃，优选为15℃，反应的时间为8-24h，优选为24h，后处理的过程具体为：反应结束后，依次用1moL-1盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，真空除去溶剂得到式(II)中间体，所述苯胺、氯乙酰氯、三乙胺和有机溶剂的添加量比为(3-8)mmol:(3-8)mmol:(3-8)mmol，(10-40)ml，优选为5mmol:5mmol:5mmol:30ml。
步骤(2)中，所述反应体系置于温度为25-100℃，优选为80℃，反应的时间为14-48h，优选为24h。后处理的过程具体为：取出反应体系进行冷却、将反应液倒入冰水中，用稀盐酸调酸至pH＝3，待固体完全析出，进行过滤操作，用冰水洗涤滤饼，再将滤饼进行常温干燥，最后用乙醇重结晶得到式(III)中间体。所述苯甲酰肼、二硫化碳和氢氧化钾的添加量比为5mmol:(5-10)mmol：(5-10)mmol，优选为5mmol:10mmol：5mmol。
步骤(3)中，所述有机溶剂采用丙酮、乙腈和DMF，优选为丙酮。所述反应体系置于油浴中进行加热，反应的温度为15-25℃，优选为20℃，反应的时间为8-24h，优选为24h。后处理的过程具体为：取出反应体系进行冷却，常压抽滤取母液，旋蒸，拌样，柱层析得到式(I)所示的抑制剂。所述式(II)中间体，式(III)中间体、无水碳酸钾、碘化钾和有机溶剂的添加量比为(1-1.5)mmol:(1-1.5)mmol:(1-1.5)mmol：(0.1-1)mmol：(10-20)ml，优选为1.2mmol:1mmol:1mmol：0.1mmol：15ml。
上述含有1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂在制备能够抑制神经氨酸酶活性的药物中的应用。
以下为具体示例：
实施例1
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如式I所示：
Figure BDA0003137953500000081
具体合成步骤如下：
(1)准确称量3-氟苯乙胺0.7g(5mmol)、三乙胺0.51g(5mmol)于250ml圆底烧瓶中，倒入30ml二氯甲烷，氮气保护，置于冰浴中搅拌，再用1ml一次性注射器滴加氯乙酰氯0.37mL(5mmol)。滴加完毕后，置于15℃下搅拌反应24小时，反应结束后，依次用1moL-1盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，真空除去溶剂得到式(II)中间体。
(2)准确称量4-羟基苯甲酰肼0.76g(5mmol)，氢氧化钾0.28g(5mmol)于250ml圆底烧瓶中，加入50ml的乙醇，10ml水，置于常温下搅拌溶解，待固体完全溶解后，取0.76g(10mmol)二硫化碳用50ml乙醇稀释，用恒压滴液漏斗缓慢滴加至体系中，85℃下反应8小时。反应完毕后，取出反应体系进行冷却、将反应液倒入冰水中，用稀盐酸调酸至pH＝3，待固体完全析出，进行过滤操作，用冰水洗涤滤饼，再将滤饼进行常温干燥，后用乙醇重结晶得到式(III)中间体。
(3)准确称量中间体式(II)0.22g(1.2mmol)、中间体式(III)0.19g(1mmol)、碳酸钾0.138g(1mmol)、碘化钾0.017g(0.1mmol)于50ml圆底烧瓶中，加入20ml丙酮，置于恒温油浴锅中20℃加热搅拌反应12小时，取出将反应液冷却，取出反应体系进行冷却，常压抽滤取母液，旋蒸，拌样，柱层析得到式(I)所示的抑制剂。
对制备得到的抑制剂进行抑制神经氨酸酶活性测试：
1、实验仪器和材料
多功能荧光酶标仪，SP-Max 3500FL型，上海闪谱生物科技有限公司；
超净工作台；
Bond A3Pipette手动单道可调试移液器，0.5-10ul，10-100ul，100-1000ul泰坦科技；
96孔板(黑色)，灭菌，康宁；
H5N1神经氨酸酶，购自北京义翘神州科技股份有限公司；酶抑制实验中使用的荧光底物2’-(4-甲基伞形酮)-α-D-乙酰神经氨酸钠水合物(4-MUNANA)(Sigma，M8639)，购自Sigma公司；2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、氯化钙、氢氧化钠、无水乙醇，购自泰坦科技。
阳性对照药，奥司他韦酸(Oseltamivir carboxlate，简写为OSC)，上海贺康生物技术有限公司。
2、实验方法
将阳性对照药及目标化合物(即制备得到的2-(N-(3,4-二氯苯基)羰基亚甲基巯基)-5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑)用DMSO溶解，初始浓度配制成1000μm/L，将其按照倍比稀释成6个浓度梯度，依次为200μm/L、40μm/L、8μm/L、1.6μm/L、0.32μm/L、0.064μm/L，每个浓度梯度依次配制三组；
2.1样品检测准备
a.缓冲液(33mM MES，4mM CaCl2)每孔加入70μl于96孔酶标板中；
b.神经氨酸酶每孔加入10μl；
c.每孔加入10μl配好浓度的待测神经氨酸酶抑制剂样品或阳性对照药样品，同时设置三组空白试验对照；
d.神经氨酸酶底物(100μM·L-1 4-MUNANA)每孔加入10μl。
2.2检测
a.将96孔板置于多功能荧光酶标仪中，震荡混匀1分钟；
b.温度设置为37摄氏度，孵育5分钟，使神经氨酸酶与待测样品充分混匀、相互作用；
c.取出96孔板，每孔再加入神经氨酸酶荧光底物10μl；
d.再次置于多功能荧光酶标仪中，震荡混匀1分钟；
e.于37摄氏度下孵育30分钟，取出，每孔加入150μl的终止液(14mM·L-1NaOH的83％乙醇水溶液)，再次置于多功能荧光酶标仪中，震荡混匀1分钟，激发波长设置为355nm，发射波长设置为460nm，孵育结束后开始荧光强度(RFU)测定；
f.重复上述操作步骤，做3组平行实验。
注：96孔板中的第一个孔作为空白组，不加待测样品，加入10微升DMSO溶液。
算出每次平行实验中每个梯度浓度下的样品的抑制率的平均值，再通过Origin拟合出相应IC50值。
2.3实验结果
将阳性对照药及目标化合物用DMSO溶液均配制成初始浓度1000μm/L的混合溶液，再将这两种混合溶液按照倍比稀释成6个浓度梯度，依次为200μm/L、40μm/L、8μm/L、1.6μm/L、0.32μm/L、0.064μm/L，每个浓度梯度依次配制三组。在96孔黑色荧光酶标板中加入神经氨酸酶缓冲液70μl，神经氨酸酶10μl，以及待测的每个梯度浓度的阳性对照药样品，同时设置三组空白试验对照。在多功能荧光酶标仪中震荡1分钟混匀，37℃孵育5min；取出96孔酶标板，每孔加入10μl的神经氨酸酶底物，震荡1分钟混匀，在37℃孵育30min后，取出，每孔加入150μl的终止液(14mM·L-1NaOH的83％乙醇水溶液)，再次置于多功能荧光酶标仪中，震荡混匀1分钟，激发波长设置为355nm，发射波长设置为460nm，孵育结束后开始荧光强度(RFU)测定。平行进行三次实验。算出每次平行实验中每个梯度浓度下的样品的抑制率的平均值，再通过Origin拟合出相应IC50值算出每个样品的抑制率，再通过Origin拟合出相应IC50值，其IC50值为0.027μM，阳性对照药的IC50值为0.082μM。
制得的产品为2-(N-(3-氟苯乙基)羰基亚甲基巯基)-5-(4-羟基苯基)-1,3,4-恶二唑，为白色固体，产率56％。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),8.41(t,J＝5.8Hz,1H),7.79(d,J＝8.2Hz,2H),7.29(q,J＝7.5Hz,1H),7.00(m,5H),4.04(s,2H),3.35(q,J＝6.9Hz,2H),2.74(t,J＝7.1Hz,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ166.55,165.78,163.61,162.61,161.67,161.26,142.64,130.51,128.82,125.25,116.62,115.71,114.24,113.27,40.76,36.14,34.98.
实施例2
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3，4-二氯苄基)羰基亚甲基巯基)-5-(4-氯苯基)-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000111
淡黄色固体，产率35％，IC50值为0.032μM。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.92(t,J＝6.1Hz,1H),7.93(d,J＝8.2Hz,2H),7.64(d,J＝8.2Hz,2H),7.50(d,J＝9.5Hz,2H),7.24(d,J＝8.4Hz,1H),4.32(d,J＝6.0Hz,2H),4.18(s,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ166.88,164.79,164.08,140.70,137.19,131.38,130.83,130.00,129.63,128.54,128.03,122.28,42.03,35.98.
实施例3
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3，4-二氯苄基)羰基亚甲基巯基)-5-苯基-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000121
淡黄色固体，产率51％，IC50值为0.13μM。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.92(t,J＝6.3Hz,1H),7.93(d,J＝7.6Hz,2H),7.59(dt,J＝15.0,7.3Hz,3H),7.50(m,2H),7.25(d,J＝8.3Hz,1H),4.32(d,J＝5.9Hz,2H),4.18(s,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ166.92,165.57,163.79,140.69,132.45,131.39,130.83,129.84,129.61,128.00,126.78,123.43,42.04,36.00.
实施例4
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3-甲氧基苯乙基)羰基亚甲基巯基)-5-苯基-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000122
白色固体，产率83％，IC50值为0.26μM。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.42(s,1H),7.97(d,J＝6.4Hz,2H),7.62(m,3H),7.18(t,J＝7.8Hz,1H),6.77(m,3H),4.10(s,2H),3.72(s,3H),3.35(s,2H),2.70(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ166.38,165.53,163.89,159.75,141.22,132.45,129.87,129.76,126.82,123.50,121.28,114.63,112.15,55.33,41.08,36.23,35.43.
实施例5
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3-甲氧基苯乙基)羰基亚甲基巯基)-5-(4-羟苯基)-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000131
白色固体，产率26％，IC50值为0.36μM。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),8.39(t,J＝5.7Hz,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,2H),7.18(t,J＝7.8Hz,1H),6.94(d,J＝8.9Hz,2H),6.77(d,J＝7.1Hz,3H),4.05(s,2H),3.73(s,3H),3.33(s,2H),2.69(t,J＝7.4Hz,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ166.46,165.77,162.63,161.26,159.75,141.22,129.76,128.83,121.28,116.63,114.62,114.26,112.16,55.37,41.07,36.21,35.44.
实施例6
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3，4-二氯苄基)羟基亚甲基巯基)-5-(4-氟苯基)-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000132
白色固体，产率24％，IC50值为0.45μM。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(t,J＝6.0Hz,1H),8.00(m,2H),7.52(d,J＝9.2Hz,2H),7.44(t,J＝8.6Hz,2H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),4.33(d,J＝5.9Hz,2H),4.19(s,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.96,165.84,164.86,163.86,140.78,131.43,130.90,129.90,129.68,129.60,129.51,128.08,120.20,117.27,117.05,42.07,36.02.
实施例7
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3，4-二氯苄基)羰基亚甲基巯基)-5-(4-羟基苯基)-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000141
白色固体，产率49％，IC50值为1.18μM。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),8.88(s,1H),7.77(d,J＝8.2Hz,2H),7.49(s,2H),7.24(d,J＝8.5Hz,1H),6.93(d,J＝8.2Hz,2H),4.32(d,J＝5.8Hz,2H),4.14(s,2H).13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ166.99,165.83,162.53,161.25,140.66,131.41,130.80,129.87,129.59,128.79,127.95,116.60,114.22,42.04,36.01.
实施例8
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3，4-二氯苄基)羟基亚甲基巯基)-5-(4-甲基苯基)-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000142
白色固体，产率49％，IC50值为2.05μM。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(t,J＝5.9Hz,1H),7.83(d,J＝7.1Hz,2H),7.52(d,J＝6.6Hz,2H),7.40(d,J＝7.8Hz,2H),7.26(d,J＝8.3Hz,1H),4.33(d,J＝5.9Hz,2H),4.18(s,2H),2.41(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.97,165.70,163.44,142.68,140.77,130.89,130.44,129.68,128.07,126.79,120.75,42.07,36.02,21.66.
实施例9
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3-氟苯乙基)羟基亚甲基巯基)-5-苯基-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000151
白色固体，产率50％，IC50值为3.58μM。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝6.0Hz,1H),7.95(d,J＝7.4Hz,2H),7.59(p,J＝7.1Hz,3H),7.28(q,J＝7.5Hz,1H),7.01(dt,J＝31.2,8.9Hz,3H),4.10(s,2H),3.41(s,2H),2.75(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ166.47,165.51,163.87,163.61,161.68,142.63,132.40,130.55,129.82,126.78,125.23,123.48,115.88,113.42,40.78,36.20,34.99.
实施例10
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3，4-二氯苄基)羟基亚甲基巯基)-5-(4-甲氧基苯基)-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000152
白色固体，产率47％，IC50值为3.95μM。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(t,J＝6.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.9Hz,2H),7.52(d,J＝8.5Hz,2H),7.26(d,J＝8.2Hz,1H),7.12(d,J＝9.0Hz,2H),4.33(d,J＝5.9Hz,2H),4.17(s,2H),3.86(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ167.02,165.58,162.99,162.53,140.76,131.45,130.88,129.92,129.68,128.69,128.05,115.85,115.32,56.02,42.09,36.05.
实施例11
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3-甲氧基苯乙基)羟基亚甲基巯基)-5-(4-氟苯基)-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000161
淡黄色固体，产率54％，IC50值为56.68μM。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(t,J＝5.7Hz,1H),8.03(d,J＝14.2Hz,2H),7.44(t,J＝8.8Hz,2H),7.18(t,J＝8.1Hz,1H),6.77(m,3H),4.11(s,2H),3.73(s,3H),3.35(m,2H),2.72(t,J＝7.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.44,165.84,164.83,163.97,163.35,159.78,141.26,129.79,129.61,129.52,121.32,120.21,117.27,117.04,114.67,112.16,55.36,41.12,36.28,35.47.
实施例12
一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其结构式如下，采用类似实施例1的方法制备得到。
2-(N-(3-甲氧基苯乙基)羟基亚甲基巯基)-5-(4-甲苯基)-1,3,4-恶二唑
Figure BDA0003137953500000162
白色固体，产率73％，IC50值为149.8μM。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(t,J＝5.7Hz,1H),7.87(d,J＝7.9Hz,2H),7.42(d,J＝7.9Hz,2H),7.19(t,J＝8.1Hz,1H),6.77(m,3H),4.09(s,2H),3.74(s,3H),3.33(d,J＝7.4Hz,2H),2.71(t,J＝7.3Hz,2H),2.41(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.38,165.53,163.89,159.75,141.22,132.45,129.87,129.76,126.82,123.50,121.28,114.63,112.15,55.33,41.08,36.23,35.43.
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂，其特征在于，该抑制剂具有式(I)所示的结构：
Figure FDA0003778202120000011
所述抑制剂具有如下化学结构式中的一种：
Figure FDA0003778202120000012
2.根据权利要求1所述的一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂，其特征在于，所述抑制剂具有如下化学结构式：
Figure FDA0003778202120000013
3.如权利要求1所述的一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂的制备方法，其特征在于，制备方法的方程式如下所示：
Figure FDA0003778202120000021
具体包括以下步骤：
(1)将苯胺、氯乙酰氯、三乙胺反应后经后处理得到式(II)中间体；
(2)将苯甲酰肼、二硫化碳和氢氧化钾反应后经后处理得到式(III)中间体；
(3)取式(II)中间体和式(III)中间体溶于有机溶剂中，反应后经后处理得到式(I)所示的1,3,4-恶二唑类抑制剂；
步骤(1)中，反应的温度为0-20℃，反应的时间为8-24h，后处理的过程具体为：反应结束后，依次用1moL-1盐酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥有机相，真空除去溶剂得到式(II)中间体；
步骤(2)中，反应的温度为25-80℃，反应的时间为14-48h，后处理的过程具体为：取出反应体系进行冷却、将反应液倒入冰水中，用稀盐酸调酸至pH＝3，待固体完全析出，进行过滤操作，用冰水洗涤滤饼，再将滤饼进行常温干燥，最后用乙醇重结晶得到式(III)中间体；步骤(3)中，反应的温度为15-25℃，反应的时间为6-12h，后处理的过程具体为：取出反应体系进行冷却，常压抽滤取母液，旋蒸、拌样、柱层析得到式(I)所示的抑制剂；
步骤(1)中，采用三乙胺作为催化剂，有机溶剂采用干燥的二氯甲烷，所述苯胺、氯乙酰氯、三乙胺和有机溶剂的添加量比为(3-8)mmol:(3-8)mmol:(3-8)mmol：(10-40)ml；
步骤(2)中，采用氢氧化钾作为催化剂，有机溶剂采用干燥的乙醇，所述苯甲酰肼、二硫化碳和氢氧化钾的添加量比为5mmol:(5-10)mmol：(5-10)mmol；
步骤(3)中，有机溶剂采用丙酮、乙腈或DMF，式(II)中间体、式(III)中间体、无水碳酸钾、碘化钾和有机溶剂的添加量比为(1-1.5)mmol:(1-1.5)mmol:(1-1.5)mmol：(0.1-1)mmol：(10-20)ml。
4.一种如权利要求1或2中所述的一种1,3,4-恶二唑类神经氨酸酶抑制剂在制备能够抑制神经氨酸酶活性的药物中的应用。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003022841A1 (en) * 2001-09-07 2003-03-20 Biota Scientific Management Pty Ltd Intermediates for preparing neuraminidase inhibitor conjugates
CN102146062A (zh) * 2011-01-19 2011-08-10 山东大学 噻唑烷类神经氨酸酶抑制剂及其应用

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Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003022841A1 (en) * 2001-09-07 2003-03-20 Biota Scientific Management Pty Ltd Intermediates for preparing neuraminidase inhibitor conjugates
CN102146062A (zh) * 2011-01-19 2011-08-10 山东大学 噻唑烷类神经氨酸酶抑制剂及其应用

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