CN105622452A - Ahu-377结晶型游离酸及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了AHU-377结晶型游离酸及其制备方法和应用。AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图包括位于23.70±0.2°,15.84±0.2°,20.84±0.2°和8.56±0.2°,的衍射角(2θ)处的峰；优选其X射线粉末衍射图还包括位于17.06±0.2°,25.98±0.2°,18.01±0.2°,9.42±0.2°和26.91±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。本发明改善了AHU-377理化性质，例如改善了结晶性，增加了溶解性，减少了吸湿性，增强了工艺可操作性，提高了化学稳定性，具有广阔的应用前景。

Description

AHU-377结晶型游离酸及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及一种NEP抑制剂AHU-377结晶型游离酸及其制备方法和应用。

背景技术

中性内肽酶(EC3.4.24.11；脑啡肽酶；必肽酶；NEP)是一种可以在芳族氨基酸的氨基末端上裂解各种肽底物的包含锌的金属蛋白酶。这种酶的底物非限制性地包括心钠素(ANF，也被称为ANP)、脑钠肽(BNP)、met和leu脑啡肽、缓激肽、神经激肽A和P物质。

ANF是一族血管舒张、利尿和抗高血压的肽类，一种形式——ANF99-126是在心脏扩张情况中由心脏释放的循环肽激素。ANF的功能是维持盐和水的体内平衡以及调节血压。ANF在循环中被至少两个过程迅速灭活：受体-介导的清除和在NEP进行的酶灭活。NEP抑制剂增强了实验动物进行药理学ANF注射后的低血压、利尿、促尿钠排泄和血浆ANF响应。通过两种特定的NEP抑制剂进行的ANF的增强，1988年，美国专利US4749688中一般性地公开了可以用NEP来增强ANF。同年，美国专利US4740499中公开了噻奥芬(thiorphan)和凯拉托芬也可以用于增强心房肽的应用。此外，NEP抑制剂可降低血压和发挥ANF-样作用如在一些形式的实验性高血压中的利尿和增加环鸟苷3’，5’-单磷酸(cGMP)排泄的作用。因为ANF的抗体将抵消血压的降低，所以NEP抑制剂的抗高血压作用是通过ANF介导的。长期和不进行控制的高血压血管疾病最终将导致靶器官如心和肾的各种病理学改变。持续的高血压也能导致中风的发生率增加。因此，强烈需要对抗高血压治疗的功效进行评估，即对除了血压降低以外的其它心血管终点事件进行检查以进一步发现联合治疗的益处。

1993年，GaryKsander等在美国专利US5217996中公开了一类联芳基取代的4-氨基丁酸衍生物，该类化合物被发现具有明显的NEP抑制活性，其中最具代表性的一个化合物为N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-对-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯(又称AHU-377)。

在实际生产制备过程中AHU-377通常以油状物出现，不利于保存及后续药物开发。AHU-377粗品经叔丁醇酯化、氢氧化钠碱水解后得到的AHU-377钠盐经二氯甲烷/正己烷重结晶后聚集状态不明，而且经发明人深入研究发现AHU-377钠盐吸湿性相当大，物质不稳定且不利于储存，因此，AHU-377作为药物活性成分，其产品质量、物质稳定性、储存或称量等均存在很大问题，其钠盐也没有解决上述问题，虽然美国专利US5217996也公开了AHU-377还可以制备成各种盐型化合物，例如碱金属盐、碱土金属盐、胺盐、烷基胺盐、羟烷基胺盐等，但是，主要还是从AHU-377含有一个羧基的化学结构上推断得出，并未实际得到各种除钠盐之外的其它盐型化合物，不能解决AHU-377产品质量差、物质不稳定、难以储存及称量等问题。

因此，鉴于现有技术存在的问题，有必要对AHU-377开发出一种稳定的游离酸聚集状态，以符合药物开发的需要。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，改善AHU-377理化性质，例如改善的结晶性，增加溶解性，减少吸湿性，增强工艺可操作性，提高化学稳定性等。发明人通过深入研究，在现有技术的基础上开发出了一种AHU-377结晶型游离酸，大大改善了AHU-377的理化性质，例如产品质量、溶解性、吸湿性、化学稳定性等。

本发明第一方面提供一种AHU-377结晶型游离酸(指定为晶型I)，其X线粉末衍射图包括位于23.70±0.2°,15.84±0.2°,20.84±0.2°和8.56±0.2°,的衍射角(2θ)处的峰。

作为进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于17.06±0.2°,25.98±0.2°,18.01±0.2°,9.42±0.2°和26.91±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图进一步还包括位于34.70±0.2°,21.83±0.2°,25.69±0.2°,25.33±0.2°,11.67±0.2°和26.24±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，最优选其X射线粉末衍射图与图1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表1所示：

表1

2θ(°)	强度％	2θ(°)	强度％
				8.56	44.7	20.84	66.5
9.42	13.6	21.83	8.5
				11.42	6.6	23.70	100
11.67	6.8	25.33	7.9
				15.43	6.1	25.69	8.1
15.84	70.7	25.98	31.9
				17.06	41.8	26.24	6.8
18.01	18.6	26.91	9.6
				18.69	5.4	29.47	5.9
19.12	6.5	34.70	9

本文所使用的关于X射线衍射峰位置的术语“基本上相同的”意指考虑典型的峰位置和强度可变性。例如，本领域技术人员将理解，峰位置(2θ)将由于XRPD仪器不同，而造成测量值有所变化，有时这种变化达有时多达0.2°。此外，本领域技术人员将理解，XRPD样品制样方法，XRPD仪器，样品结晶度，样品用量以及晶体择优取向等因素将导致样品XRPD衍射图中相对峰强度的改变。

本发明第二方面提供一种AHU-377结晶型游离酸的制备方法，包括如下步骤，

1)将AHU-377游离酸溶解在合适的有机溶剂中；

2)降低溶液体系温度，和/或加入晶种，和/或加入适量反溶剂至溶液出现浑浊，析晶；

3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸。

作为进一步优选的方案，包括如下步骤，

1)将AHU-377游离酸在常温或加热状态下溶解在合适的有机溶剂中；

2)降低步骤1)中溶液体系的温度，和/或加入晶种，析晶；

3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸。

作为进一步优选的方案，包括如下步骤，

1)将AHU-377游离酸溶解在合适的有机溶剂中；

2)将步骤1)中的溶液与反溶剂相混合；

3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸。

优选的，步骤2)中与反溶剂相混合之前在反溶剂中预先加入AHU-377结晶型游离酸晶种。

所述的“相混合”是指将步骤1)中的溶液滴加到反溶剂之中或者将反溶剂滴加到步骤1)中的溶液之中。

作为更进一步优选的方案，上述制备方法中步骤1)所述合适的有机溶剂为选自醚类、环醚类、酯类、卤代烷烃、苯类有机溶剂或其混合物，包括但不限定于以下溶剂：自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其组合物，优选自乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物。

作为更进一步优选的方案，上述制备方法中步骤2)所述反溶剂是指极性较小的有机溶剂，包括但不限定于以下溶剂：正庚烷、正己烷、异辛烷、戊烷、环己烷、环戊烷、乙醚或其组合物；优选自正庚烷、正己烷、环己烷、乙醚或其组合物。

作为进一步优选的方案，上述制备方法中“溶解”是指本领域的普通技术人员一般的操作，通常可以适当的加热使AHU-377游离酸原料溶解或溶清，或者在常温下(20～25℃)加大溶剂的用量来使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为更进一步优选的方案，所述适当的加热优选将溶剂加热至40～80℃使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为更进一步优选的方案，所述加大溶剂的用量优选结晶溶剂的加入量为AHU-377游离酸的5-20倍体积质量比，使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为进一步优选的方案，上述制备方法中步骤2)所述加入晶种是指在AHU-377游离酸溶液中加入同系结晶体，加入晶种量以AHU-377游离酸质量比的0.1-20.0％为佳，以质量比的0.5-5.0％为最佳。可以理解，本领域技术人员也可以进一步增加晶种的加入量，如分批次加入同样可以达到本技术所能达到的技术效果，得到同一晶体。因此，对加入晶种的技术方案进行修改或者等同替换，其均应涵盖在本发明的精神之内。

作为进一步优选的方案，本发明步骤3)所得到的AHU-377结晶型游离酸其粉末X射线衍射图包括位于23.70±0.2°,15.84±0.2°,20.84±0.2°和8.56±0.2°,的衍射角(2θ)处的峰。

本发明第三方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的前述AHU-377结晶型游离酸以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明第四方面提供一种前述AHU-377结晶型游离酸、或包含治疗有效剂量的前述AHU-377结晶型游离酸的药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病、心血管、抗高血压的药物中的用途。

作为更进一步优选的方案，所述抗高血压的药物是指通过改善功效和具有更高的相应率而产生了更有效的抗高血压治疗的药物，包括但不限于抗恶性高血压、原发性高血压、肾血管性高血压、糖尿病性高血压、单纯收缩期高血压或其它继发性高血压药物。

本发明第五方面提供一种前述AHU-377结晶型游离酸、或包含治疗有效剂量的前述AHU-377结晶型游离酸的药物组合物在制备治疗或预防急慢性心衰如、充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动或有害的血管重构药物中的用途。

本发明第六方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的前述AHU-377结晶型游离酸和血管紧张素Ⅱ(AT1)受体拮抗剂，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

作为进一步优选的方案，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自洛沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、氯沙坦、沙普利沙坦、依利沙坦、他索沙坦、艾利沙坦或其可药用盐。

作为更进一步优选的方案，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自缬沙坦、阿齐沙坦或其可药用盐。

本发明第七方面提供一种前述药物组合物在制备治疗或预防心肌梗塞及其后遗症、动脉粥样硬化、心绞痛、糖尿病性或非糖尿病性肾机能不全、继发性醛固酮增多症、原发性或继发性肺高血压、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病的蛋白尿、肾血管高血压、糖尿病性视网膜病、偏头痛、外周血管病、雷诺氏病、腔的增生、认知机能障碍、青光眼或中风药物中的用途。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/药学上可接受的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以或其他组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

与现有技术相比，本发明具有一下优势：

1)本发明提供一种新的AHU-377游离酸晶型，改善了结晶性，增加了溶解性，减少了吸湿性以及提高了化学稳定性等。

2)本发明结晶方法可操作性强，工艺成熟。

3)本发明所得晶体利于药物应用，符合工业化生产需要。

附图说明

图1为AHU-377游离酸晶型I的X射线粉末衍射图，横坐标为角度2θ(°)，纵坐标为强度。

图2为AHU-377游离酸晶型I的差示量热扫描图(DSC)图，横坐标为温度(℃)，纵坐标位热流(W/g)。

图3为AHU-377游离酸晶型I的热重分析(TGA)图，横坐标为温度(℃)，纵坐标位为失重比例(％)。

具体实施方式

以下提供的具体实施例以及制备方法例将进一步举例说明本发明实施方案的特定方面。下列实施例的范围将不以任何方式限制本发明的范围。

方法和材料

AHU-377结晶型游离酸由它们的X射线粉末衍射图表征。因此，在具有使用CuKα辐射以反射方式操作的GADDS(一般面积衍射检测器系统)CS的BrukerD8DiscoverX射线粉末衍射仪上采集所述化合物的X射线粉末衍射图。管电压和电流量分别设置为40kV和40mA采集扫描。在3.0°至40°的2θ范围内扫描样品60秒的时期。针对2θ表示的峰位置，使用刚玉标准品校准衍射仪。在通常是20℃-30℃的室温下实施所有分析。使用用于4.1.14T版WNT软件的GADDS，采集和积分数据。使用2003年发行的具有9.0.0.2版Eva的DiffracPlus软件，分析衍射图。XRPD样品的制备，通过是将样品至于单晶硅片上，用玻璃片或等效物压样品粉末以确保样品的表面平坦并有适当的高度。然后将样品支架放入BrukerXRPD仪器，并使用上文描述的仪器参数采集X射线粉末衍射图。由包括以下的多种因素产生与这类X射线粉末衍射分析结果相关的测量差异：(a)样品制备物(例如样品高度)中的误差，(b)仪器误差，(c)校准差异，(d)操作人员误差(包括在测定峰位置时出现的那些误差)，和(e)物质的性质(例如优选的定向误差)。校准误差和样品高度误差经常导致所有峰在相同方向中的位移。一般地说，这个校准因子将使测量的峰位置与预期的峰位置一致并且可以在预期的2θ值±0.2°的范围中。

本发明原料AHU-377游离酸是根据专利US5217996A报道制备方法而得，产物为油状物。本发明实施例所得晶型的角度2θ(°)值和强度值(作为最高峰值的％)已列入表1中。

实施例1

称取200mgAHU-377游离酸(油状)置于20.0mL玻璃瓶中，然后加入4mL甲基叔丁基醚，搅拌溶清，缓慢加入正庚烷至出现浑浊(约5mL)，室温下(20-25℃)继续搅拌48小时，固液分离得到AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图如图1所示。

用差示量热扫描仪(DSC,型号TAQ2000)测量有AHU-377结晶型游离酸熔点。测量条件为从室温加热到250℃，升温速率为10℃每分钟，加热在氮气气氛下进行，氮气流量为20mL每分钟。AHU-377结晶型游离酸的DSC图如图2所示。AHU-377结晶型游离酸的熔点(onset点)为：94.3℃左右。

用热重分析仪(TGA，型号TAQ500)测量AHU-377结晶型游离酸的热失重情况。测量条件为从室温加热到300℃，升温速率为10℃每分钟，加热在氮气气氛下进行，氮气流量为50mL每分钟。AHU-377结晶型游离酸的TGA图如图3所示。在100℃以内几乎不失重，因此可以判定AHU-377结晶型游离酸为无水晶型。

实施例2

称取50mgAHU-377游离酸(油状)置于2.0mL玻璃瓶中，然后加入0.5mL乙酸异丙酯，加热至50℃，搅拌溶清，缓慢加入5.0mL正己烷，然后降温至室温(20-25℃)，继续保温搅拌48小时，固液分离得到AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图与图1一致。

实施例3

称取50mgAHU-377游离酸(油状)置于2.0mL玻璃瓶中，然后加入0.25mL甲苯，加热至80℃，搅拌溶清，然后降温至室温(20-25℃)，缓慢加入2.0mL无水乙醚，保温搅拌48小时，固液分离得到AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图与图1一致。

实施例4

称取50mgAHU-377游离酸(油状)置于2.0mL玻璃瓶中，然后加入0.5mL甲基叔丁基醚，加热至55-60℃，搅拌溶清，然后降温至室温(20-25℃)，继续保温搅拌48小时，固液分离得到AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图与图1一致。

实施例5

称取20mgAHU-377游离酸(油状)置于2.0mL玻璃瓶中，然后加入0.5mL乙酸乙酯，搅拌溶清，缓慢加入0.2mg实施例1晶体，室温下(20-25℃)继续搅拌24小时，固液分离得到AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图与图1一致。

实施例6

称取50mgAHU-377游离酸(油状)置于2.0mL玻璃瓶中，然后加入0.5mL乙酸异丙酯，加热至55-60℃，搅拌溶清，然后降温至室温(20-25℃)，缓慢加入0.5mg实施例1晶体，室温下(20-25℃)继续搅拌24小时，固液分离得到AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图与图1一致。

实施例7

称取20mgAHU-377游离酸(油状)置于20.0mL玻璃瓶中，然后加入2mL甲基叔丁基醚，溶解得到澄清溶液，备用。取2mg实施例1晶体，混悬在10mL正庚烷中，将AHU-377甲基叔丁基醚溶液缓慢滴加至正庚烷溶液中，滴加约1小时，边加边搅拌，固液分离得到AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图与图1一致。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (13)

1.一种AHU-377结晶型游离酸，其X射线粉末衍射图包括位于23.70±0.2°,15.84±0.2°,20.84±0.2°和8.56±0.2°,的衍射角(2θ)处的峰；优选其X射线粉末衍射图还包括位于17.06±0.2°,25.98±0.2°,18.01±0.2°,9.42±0.2°和26.91±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；更优选其X射线粉末衍射图进一步还包括位于34.70±0.2°,21.83±0.2°,25.69±0.2°,25.33±0.2°,11.67±0.2°和26.24±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；最优选其X射线粉末衍射图与图1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同。

2.制备如权利要求1所述的AHU-377结晶型游离酸的方法，其特征在于，包括如下步骤，

1)将AHU-377游离酸溶解在合适的有机溶剂中；

2)降低溶液体系温度，和/或加入晶种，和/或加入适量反溶剂至溶液出现浑浊，析晶；

3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，

1)将AHU-377游离酸在常温或加热状态下溶解在合适的有机溶剂中；

2)降低步骤1)中溶液体系的温度，和/或加入晶种，析晶；

3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，

1)将AHU-377游离酸溶解在合适的有机溶剂中；

2)将步骤1)中的溶液滴与反溶剂相混合；

3)固液分离得到AHU-377结晶型游离酸；

优选的，步骤2)中与反溶剂相混合之前在反溶剂中预先加入AHU-377结晶型游离酸晶种。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述合适的有机溶剂为选自卤醚类、环醚类、酯类、卤代烷烃、苯类有机溶剂或其混合物；优选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其组合物，更优选自乙酸异丙酯、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、异丙醚或其组合物。

6.根据权利要求2或权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述反溶剂选自正庚烷、正己烷、异辛烷、戊烷、环己烷、环戊烷、乙醚或其组合物；优选自正庚烷、正己烷、环己烷、乙醚或其组合物。

7.根据权利要求2-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述加入晶种是指在AHU-377游离酸溶液中加入同系结晶体，加入晶种量为AHU-377游离酸质量比的0.1-20.0％，优选自质量比的0.5-5.0％。

8.根据权利要求2-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所得到的AHU-377结晶型游离酸其X射线粉末衍射图包括位于23.70±0.2°,15.84±0.2°,20.84±0.2°和8.56±0.2°,的衍射角(2θ)处的峰。

9.一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物包含治疗有效剂量的如权利要求1所述的AHU-377结晶型游离酸以及药学上可接受的载体或赋形剂。

10.根据权利要求1所述的AHU-377结晶型游离酸、或权利要求9所述的药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病、心血管、抗高血压的药物中的用途；所述抗高血压的药物优选自抗恶性高血压、原发性高血压、肾血管性高血压、糖尿病性高血压、单纯收缩期高血压或其它继发性高血压药物；以及制备治疗或预防急慢性心衰或有害的血管重构药物中的用途，优选的，所述急慢性心衰选自充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动。

11.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自洛沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、氯沙坦、沙普利沙坦、依利沙坦、他索沙坦、艾利沙坦或其可药用盐；优选自缬沙坦、阿齐沙坦或其可药用盐。

13.一种根据权利要求9、11-12中任一项所述的药物组合物在制备治疗或预防心肌梗塞及其后遗症、动脉粥样硬化、心绞痛、糖尿病性或非糖尿病性肾机能不全、继发性醛固酮增多症、原发性或继发性肺高血压、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病的蛋白尿、肾血管高血压、糖尿病性视网膜病、偏头痛、外周血管病、雷诺氏病、腔的增生、认知机能障碍、青光眼或中风药物中的用途。