CN105367438A - AHU-377α-苯乙胺盐多晶型及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种AHU-377α-苯乙胺盐多晶型及其制备方法和应用。具体地，本发明公开了一种AHU-377α-苯乙胺盐晶型，其X射线粉末衍射图包括位于20.58±0.2°,24.28±0.2°,8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，或包括位于23.28±0.2°,18.9±0.2°,13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。通过将AHU-377制备成α-苯乙胺盐来改变AHU-377的理化性质，例如结晶性、溶解性、吸湿性等，本发明工艺成熟，可操作性强，所得产品质量高且均一稳定，化学稳定性，利于储存，具有广阔的应用前景。

Description

AHU-377α-苯乙胺盐多晶型及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及一种NEP抑制剂AHU-377α-苯乙胺盐晶型及其制备方法和应用。

背景技术

中性内肽酶(EC3.4.24.11；脑啡肽酶；必肽酶；NEP)是一种可以在芳族氨基酸的氨基末端上裂解各种肽底物的包含锌的金属蛋白酶。这种酶的底物非限制性地包括心钠素(ANF，也被称为ANP)、脑钠肽(BNP)、met和leu脑啡肽、缓激肽、神经激肽A和P物质。

ANF是一族血管舒张、利尿和抗高血压的肽类，一种形式——ANF99-126是在心脏扩张情况中由心脏释放的循环肽激素。ANF的功能是维持盐和水的体内平衡以及调节血压。ANF在循环中被至少两个过程迅速灭活：受体-介导的清除和在NEP进行的酶灭活。NEP抑制剂增强了实验动物进行药理学ANF注射后的低血压、利尿、促尿钠排泄和血浆ANF响应。通过两种特定的NEP抑制剂进行的ANF的增强，1988年，美国专利US4749688中一般性地公开了可以用NEP来增强ANF。同年，美国专利US4740499中公开了噻奥芬(thiorphan)和凯拉托芬也可以用于增强心房肽的应用。此外，NEP抑制剂可降低血压和发挥ANF-样作用如在一些形式的实验性高血压中的利尿和增加环鸟苷3’，5’-单磷酸(cGMP)排泄的作用。因为ANF的抗体将抵消血压的降低，所以NEP抑制剂的抗高血压作用是通过ANF介导的。长期和不进行控制的高血压血管疾病最终将导致靶器官如心和肾的各种病理学改变。持续的高血压也能导致中风的发生率增加。因此，强烈需要对抗高血压治疗的功效进行评估，即对除了血压降低以外的其它心血管终点事件进行检查以进一步发现联合治疗的益处。

1993年，GaryKsander等在美国专利US5217996中公开了一类联芳基取代的4-氨基丁酸衍生物，该类化合物被发现具有明显的NEP抑制活性，其中最具代表性的一个化合物为N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-对-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯(又称AHU-377)。

美国专利US5217996实施例1报道其2-甲基通常是以一对非对映异构体(R-或S-构型)的形式存在，AHU-377与2S-甲基非对映异构体的比例约为80:20，在实际生产制备过程中AHU-377通常以油状物出现，不利于其分离纯化和后续制剂开发和储存。AHU-377粗品经叔丁醇酯化、氢氧化钠碱水解后得到的AHU-377钠盐经二氯甲烷/正己烷重结晶后聚集状态不明，而且经发明人深入研究发现AHU-377钠盐吸湿性相当大，物质不稳定且不利于储存，因此，AHU-377作为药物活性成分，其产品质量、物质稳定性、储存或称量等均存在很大问题，其钠盐也没有解决上述问题，虽然专利US5217996和WO2007056546均公开了AHU-377还可以制备成各种盐型化合物，例如碱金属盐、碱土金属盐、胺盐、烷基胺盐、羟烷基胺盐等，但是，主要还是从AHU-377含有一个羧基的化学结构上推断得出，并未实际得到各种除钠盐之外的其它盐型化合物，不能解决AHU-377产品质量差、物质不稳定、难以储存及称量等问题。此外，该药的应用对象为有高血压和心衰类心血管疾病的病人，钠的摄入也会增加心血管负担，因此十分有必要将钠盐更换成不含钠离子的盐型，或其他类对心血管无害或有益的盐类。因此，鉴于现有技术存在的问题，有必要针对AHU-377或其钠盐开发出一种更稳定的游离酸聚集状态，以符合药物开发的需要。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，改善AHU-377游离酸或其钠盐的理化性质，发明人在深入研究的基础上制备得到了一种AHU-377α-苯乙胺盐晶型(α-苯乙胺，分子式为C₈H₁₁N，α-苯乙胺有两个立体异构体：(R)-(+)-α-苯乙胺与(S)-(-)-α-苯乙胺)。通过将AHU-377制备成α-苯乙胺盐来改变AHU-377游离酸或其钠盐的理化性质，例如结晶性、溶解性、吸湿性等。以及解决钠盐带来的心血管副作用的问题，尤其在治疗心衰伴有抑郁症并发症，有十分广阔的前景。

本发明第一方面提供一种AHU-377α-苯乙胺盐，其X射线粉末衍射图包括位于20.58±0.2°,24.28±0.2°,8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，或包括位于23.28±0.2°,18.9±0.2°,13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

本发明第二方面提供一种AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型(指定为晶型I)，其X射线粉末衍射图包括位于20.58±0.2°,24.28±0.2°,8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为进一步优选的方案，其X射线粉末衍射图还包括位于19.36±0.2°,15.16±0.2°,16.78±0.2°,18.84±0.2°和22.06±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，其X射线粉末衍射图还包括位于17.34±0.2°,7.52±0.2°,28.10±0.2°,29.66±0.2°,28.94±0.2°和10.96±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，最优选其X射线粉末衍射图与图1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表1所示：

表1

2θ(°)	强度％	2θ(°)	强度％
				7.52	7.4	19.4	22.8
8.38	41.7	20.6	100
				10.64	2.7	22.1	13.5
10.96	3.9	23.2	25.8
				13.64	3.9	24.3	52.1
15.16	22.2	27.2	3.8
				16.78	16.8	28.1	5.9

17.34	11.4	28.9	4.2
				17.74	3.3	29.7	4.4
18.84	14.9	31.8	3

本发明第三方面提供一种AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型(指定为晶型II)，其X射线粉末衍射图包括位于23.28±0.2°,18.9±0.2°,13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于3.13±0.2°,15.98±0.2°,18.36±0.2°,9.12±0.2°和32.38±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于10.88±0.2°,22.18±0.2°,21.92±0.2°,27.66±0.2°,20.34±0.2°和27.24±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，最优选其粉末X射线衍射图与图3中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表2所示：

表2

2θ(°)	强度％	2θ(°)	强度％
				3.13	23.7	22.18	10.1
7.06	6.6	23.28	100
				9.12	16.3	24.06	5.5
10.88	10.2	27.24	6.7
				13.70	32.3	27.66	7
14.72	29.5	29.74	4.3
				15.98	20.7	31.14	3.8
18.36	17.7	32.38	11.6
				18.90	68.9	32.98	3.3
20.34	6.8	35.42	3.4
				21.92	9.5

本文所使用的关于X射线衍射峰位置的术语“基本上相同的”意指考虑典型的峰位置和强度可变性。例如，本领域技术人员将理解，峰位置(2θ)将由于XRPD仪器不同，而造成测量值有所变化，有时这种变化达有时多达0.2°。此外，本领域技术人员将理解，XRPD样品制样方法，XRPD仪器，样品结晶度，样品用量以及晶体择优取向等因素将导致样品XRPD衍射图中相对峰强度的改变。

本发明第四方面提供一种AHU-377α-苯乙胺盐晶型的制备方法，包括，

1)将AHU-377游离酸溶解或混悬在合适的溶剂中，与等量或过量α-苯乙胺相混合制备生成AHU-377α-苯乙胺盐；

2)收集上述成盐反应过程中产物得到AHU-377α-苯乙胺盐晶型。

所述α-苯乙胺包括(R)-(+)-α-苯乙胺、(S)-(-)-α-苯乙胺。

作为进一步优选的方案，步骤1)所述合适的溶剂为结晶溶剂，包括水、水溶性溶剂或非水溶性溶剂。

作为更进一步优选的方案，所述水溶性溶剂选自醇类、酮类、环醚类、酰胺类、亚砜类有机溶剂或其混合物，包括但不限定于以下溶剂：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其混合物；所述非水溶性溶剂选自氯代烷烃、醚类、酯类、烷烃类、环烷烃类、苯类有机溶剂或其混合物，包括但不限定于以下溶剂：乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其组合物。

作为进一步优选的方案，所述溶解是指本领域的普通技术人员一般的操作，通常可以适当的加热使AHU-377游离酸原料溶解或溶清，或者加大溶剂的用量来使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为更进一步优选的方案，所述适当的加热优选将结晶溶剂加热至30～80℃使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为更进一步优选的方案，所述加大溶剂的用量优选结晶溶剂的加入量为AHU-377游离酸的1-200倍体积质量比，使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为进一步优选的方案，步骤2)所述的收集上述成盐反应过程中产物的步骤具体可以是直接收集上述成α-苯乙胺盐反应过程中析出的固体产物、或者通过挥发溶剂、或者加入反溶剂、或者直接降温析晶、或者加入晶种，得到AHU-377α-苯乙胺盐晶型；优选直接收集上述成α-苯乙胺盐反应过程中析出的固体产物得到AHU-377α-苯乙胺盐晶型。

作为更进一步优选的方案，所述反溶剂是指极性较小的有机溶剂，包括但不限定于以下溶剂：正庚烷、正己烷、异辛烷、戊烷、环己烷、环戊烷、乙醚或其组合物。

作为进一步优选的方案，本发明步骤2)所得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型其X射线粉末衍射图包括位于20.58±0.2°,24.28±0.2°,8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，或所得到的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐其X射线粉末衍射图包括位于23.28±0.2°,18.9±0.2°,13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

本发明第五方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的前述AHU-377α-苯乙胺盐(包括(R)-(+)-α-苯乙胺盐或(S)-(-)-α-苯乙胺盐)晶型以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明第六方面提供一种前述AHU-377α-苯乙胺盐(包括(R)-(+)-α-苯乙胺盐或(S)-(-)-α-苯乙胺盐)晶型、或包含治疗有效剂量的前述AHU-377α-苯乙胺盐(包括(R)-(+)-α-苯乙胺盐或(S)-(-)-α-苯乙胺盐)晶型的药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病、心血管、抗高血压的药物中的用途。

所述抗高血压的药物是指通过改善功效和具有更高的相应率而产生了更有效的抗高血压治疗的药物，包括但不限于抗恶性高血压、原发性高血压、肾血管性高血压、糖尿病性高血压、单纯收缩期高血压或其它继发性高血压药物。

本发明第七方面提供一种前述AHU-377α-苯乙胺盐晶型(包括(R)-(+)-α-苯乙胺盐或(S)-(-)-α-苯乙胺盐)、或包含治疗有效剂量的前述AHU-377α-苯乙胺盐(包括(R)-(+)-α-苯乙胺盐或(S)-(-)-α-苯乙胺盐)晶型的药物组合物在制备治疗或预防急慢性心衰以及心衰并发抑郁症如：充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动或有害的血管重构药物中的用途。

本发明第八方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的前述AHU-377α-苯乙胺盐(包括(R)-(+)-α-苯乙胺盐或(S)-(-)-α-苯乙胺盐)晶型和血管紧张素Ⅱ(AT1)受体拮抗剂，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

作为进一步优选的方案，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自洛沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、氯沙坦、沙普利沙坦、依利沙坦、他索沙坦、艾利沙坦或其可药用盐。

作为更进一步优选的方案，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自缬沙坦、阿齐沙坦或其可药用盐。

本发明第九方面提供一种前述药物组合物在制备治疗或预防心肌梗塞及其后遗症、动脉粥样硬化、心绞痛、糖尿病性或非糖尿病性肾机能不全、继发性醛固酮增多症、原发性或继发性肺高血压、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病的蛋白尿、肾血管高血压、糖尿病性视网膜病、偏头痛、外周血管病、雷诺氏病、腔的增生、认知机能障碍、青光眼或中风药物中的用途。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/药学上可接受的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以或其他组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

含有活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物质，例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素，或延长时间物质例如乙基纤维素、醋酸丁酸纤维素。

也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合的硬明胶胶囊，或其中活性成分与水溶性载体例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软明胶胶囊提供口服制剂。

水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂可以是天然产生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxycetanol)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷脱水山梨醇单油酸酯。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。

油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或矿物油例如液体石蜡中配制而成。油悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂例如丁羟茴醚或α-生育酚保存这些组合物。

通过加入水可使适用于制备水混悬也的可分散粉末和颗粒提供活性成分和用于混合的分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂可说明上述的例子。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油，或矿物油例如液体石蜡或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，例如大豆卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯例如山梨坦单油酸酯，和所述偏酯和环氧乙烷的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制糖浆和酏剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。

药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可在使用的可接受的溶媒和溶剂中有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。

药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如1,3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。

可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年龄、病人的体重、病人的健康状况、病人的行被、病人的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、AHU-377或其盐的日用量或药学上可接受的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。

本发明通过将AHU-377制备成α-苯乙胺盐来改变AHU-377的理化性质，例如结晶性、溶解性、吸湿性等，本发明工艺成熟，可操作性强，所得产品质量高且均一稳定，化学稳定性，利于储存以及AHU-377的分离纯化和手性纯度的提高。

附图说明

图1为AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型的XRPD图，横坐标为角度2θ(°)，纵坐标为强度。

图2为AHU-377(R)-(+)-α-苯乙盐晶型的DSC图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为热流(w/g)。

图3为AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型的XRPD图，横坐标为角度2θ(°)，纵坐标为强度。

图4为AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐型的DSC图，横坐标为温度(℃)，纵坐标为热流(w/g)。

图5为AHU-377与2-甲基S对映异构混合物的手性色谱图，横坐标为时间(分钟)，纵坐标为吸光度(mAU)。

图6为以AHU-377与2-甲基S对映异构混合物为原料，制备得到AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐的手性色谱图，横坐标为时间(分钟)，纵坐标为吸光度(mAU)。

具体实施方式

以下提供的具体实施例以及制备方法例将进一步举例说明本发明实施方案的特定方面。下列实施例的范围将不以任何方式限制本发明的范围。

方法和材料

AHU-377α-苯乙胺晶型由它们的X射线粉末衍射图表征。因此，在具有使用CuKα辐射以反射方式操作的GADDS(一般面积衍射检测器系统)CS的BrukerD8DiscoverX射线粉末衍射仪上采集所述盐的X射线粉末衍射图。管电压和电流量分别设置为40kV和40mA采集扫描。在3.0°至40°的2θ范围内扫描样品60秒的时期。针对2θ表示的峰位置，使用刚玉标准品校准衍射仪。在通常是20℃-30℃的室温下实施所有分析。使用用于4.1.14T版WNT软件的GADDS，采集和积分数据。使用2003年发行的具有9.0.0.2版Eva的DiffracPlus软件，分析衍射图。XRPD样品的制备，通过是将样品至于单晶硅片上，用玻璃片或等效物压样品粉末以确保样品的表面平坦并有适当的高度。然后将样品支架放入BrukerXRPD仪器，并使用上文描述的仪器参数采集粉末X射线衍射图。由包括以下的多种因素产生与这类X射线粉末衍射分析结果相关的测量差异：(a)样品制备物(例如样品高度)中的误差，(b)仪器误差，(c)校准差异，(d)操作人员误差(包括在测定峰位置时出现的那些误差)，和(e)物质的性质(例如优选的定向误差)。校准误差和样品高度误差经常导致所有峰在相同方向中的位移。一般地说，这个校准因子将使测量的峰位置与预期的峰位置一致并且可以在预期的2θ值±0.2°的范围中。

本发明原料AHU-377游离酸是根据专利US5217996A报道制备方法而得，本发明实施例所得各晶型的角度2θ(°)值和强度值(作为最高峰值的％)已列入表1和表2中。

在TAInstrumentsDSCQ2000上进行差示扫描量热法(DSC)。分别使用铟和蓝宝石针对电池常数和热容量校准仪器。通过将1-3mg的样品称量入铝盘，然后使用铝盖封盖所述铝盘制备样品。使用UniversalAnalysis2000分析数据。在室温开始试验，并且在氮气吹扫(流速是50ml/min)下，以10℃/分钟将样品加热至300℃。

非对映异构体的分析采用HPLC检测，手性色谱分析条件为：色谱柱：大赛璐ChiralpakAD-H(4.6*250mm，5um)；流动相A:环己烷：异丙醇：冰醋酸＝1000:10:1；流动相B：环己烷：异丙醇：冰醋酸＝800:200:1；流动相A：流动相B＝50:50；每针运行时间：22min；柱温：30℃；波长：254nm；流速：1.0ml/min。

实施例1

称取20mg(0.049mmol)AHU-377游离酸(油状)置于5.0mL玻璃瓶中，加入1.0mL乙酸异丙酯，搅拌溶清，加入5.9mg(0.049mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，继续搅拌反应48小时，收集反应产物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型其粉末X射线衍射图如图1所示，熔点：126.6℃(onset点)如图2所示。

实施例2

称取20mg(0.049mmol)AHU-377游离酸(油状)置于5.0mL玻璃瓶中，加入0.4mL异丙醇，搅拌溶清，加入6.5mg(0.053mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，继续搅拌反应48小时，收集反应产物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺晶型，其粉末X射线衍射图基本与如图1一致。

实施例3

称取20mg(0.049mmol)AHU-377游离酸(油状)置于5.0mL玻璃瓶中，加入0.2mL甲基叔丁基醚，加热至50℃搅拌溶清，加入5.9mg(0.049mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，降温至室温(20～25℃)继续搅拌反应48小时，收集反应产物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型，其粉末X射线衍射图基本与如图1一致。

实施例4

称取20mg(0.049mmol)AHU-377游离酸(油状)置于5.0mL玻璃瓶中，加入0.2mL二氯甲烷，加热至40℃搅拌溶清，加入6.2mg(0.051mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，降温至室温(20～25℃)继续搅拌反应48小时，收集反应产物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型，其粉末X射线衍射图基本与如图1一致。

实施例5

称取20mg(0.049mmol)AHU-377游离酸(油状)置于5.0mL玻璃瓶中，加入0.2mL95％乙醇，加热至60℃搅拌溶清，加入6.0mg(0.049mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，降温至室温(20～25℃)继续搅拌反应48小时，收集反应产物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型，其粉末X射线衍射图基本与如图1一致。

实施例6

称取20mg(0.049mmol)AHU-377游离酸(油状)置于5.0mL玻璃瓶中，加入1.0mL乙酸异丙酯，搅拌溶清，加入5.9mg(0.049mmol)(S)-(-)-α-苯乙胺，继续搅拌反应48小时，收集反应产物得到的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型其粉末X射线衍射图如图3所示，熔点：140.16℃(onset点)如图4所示。

实施例7

称取40mg(0.096mmol)AHU-377游离酸(AHU-377与2S-甲基非对映异构体的比例约为50:50，如图5所示,AHU-377保留时间为10分钟左右，2S-甲基非对映异构体保留时间为9分钟左右)置于5.0mL玻璃瓶中，加入2.0mL乙酸异丙酯，搅拌溶清，加入1mL5.9mg/mL(0.049mmol)(S)-(-)-α-苯乙胺乙酸异丙酯溶液，继续搅拌反应24小时，收集反应产物得到的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型。将取1mgAHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐加入1mL1％醋酸水溶液中，再加入1mL乙酸乙酯，强力震摇后，静置分层，取乙酸乙酯层用手性色谱分析AHU-377的非对映异构体的纯度，HPLC结果可知AHU-377的手性纯度大大提高，AHU-377与2S-甲基非对映异构体的比例约为99.5:0.5如谱图6所示。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (12)

1.一种AHU-377α-苯乙胺盐晶型，其X射线粉末衍射图包括位于20.58±0.2°,24.28±0.2°,8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，或包括位于23.28±0.2°,18.9±0.2°,13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

2.一种AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型，其X射线粉末衍射图包括位于20.58±0.2°,24.28±0.2°,8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；优选其X射线粉末衍射图还包括位于19.36±0.2°,15.16±0.2°,16.78±0.2°,18.84±0.2°和22.06±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；更优选其X射线粉末衍射图进一步还包括位于17.34±0.2°,7.52±0.2°,28.10±0.2°,29.66±0.2°,28.94±0.2°和10.96±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；最优选其X射线粉末衍射图与图1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同。

3.一种AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型，其X射线粉末衍射图包括位于23.28±0.2°,18.9±0.2°,13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；优选还包括位于3.13±0.2°,15.98±0.2°,18.36±0.2°,9.12±0.2°和32.38±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；更优选其X射线粉末衍射图进一步还包括位于10.88±0.2°,22.18±0.2°,21.92±0.2°,27.66±0.2°,20.34±0.2°和27.24±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；最优选其粉末X射线衍射图与图3中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同。

4.一种AHU-377α-苯乙胺盐晶型的制备方法，包括，

1)将AHU-377游离酸溶解或混悬在合适的溶剂中，与等量或过量α-苯乙胺相混合制备生成AHU-377α-苯乙胺盐；

2)收集上述成盐反应过程中产物得到AHU-377α-苯乙胺盐晶型；

所述α-苯乙胺包括(R)-(+)-α-苯乙胺、(S)-(-)-α-苯乙胺；步骤1)所述合适的溶剂为结晶溶剂，包括水、水溶性溶剂或非水溶性溶剂。

5.根据权利要求4所述的AHU-377α-苯乙胺盐晶型的制备方法，其特征在于，所述水溶性溶剂选自醇类、酮类、环醚类、酰胺类、亚砜类有机溶剂或其混合物，优选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其混合物；所述非水溶性溶剂选自氯代烷烃、醚类、酯类、烷烃类、环烷烃类、苯类有机溶剂或其混合物，优选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其组合物。

6.根据权利要求4所述的AHU-377α-苯乙胺盐晶型的制备方法，其特征在于，步骤2)所得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐其X射线粉末衍射图包括位于20.58±0.2°,24.28±0.2°,8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，或所得到的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐其X射线粉末衍射图包括位于23.28±0.2°,18.9±0.2°,13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

7.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的权利要求1所述的AHU-377α-苯乙胺盐晶型、权利要求2所述的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型或权利要求3所述的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型以及药学上可接受的载体或赋形剂。

8.权利要求1所述的AHU-377α-苯乙胺盐晶型、权利要求2所述的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型或权利要求3所述的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型，或包含治疗有效剂量的权利要求1所述的AHU-377α-苯乙胺盐晶型、权利要求2所述的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型或权利要求3所述的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型的药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病、心血管、抗高血压的药物中的用途；所述抗高血压的药物优选自抗恶性高血压、原发性高血压、肾血管性高血压、糖尿病性高血压、单纯收缩期高血压或其它继发性高血压药物。

9.一种权利要求1所述的AHU-377α-苯乙胺盐晶型、权利要求2所述的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型或权利要求3所述的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型，或包含治疗有效剂量的权利要求1所述的AHU-377α-苯乙胺盐晶型、权利要求2所述的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺盐晶型或权利要求3所述的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺盐晶型的药物组合物在制备治疗或预防急慢性心衰以及心衰并发抑郁症药物中的用途,优选的，所述急慢性心衰以及心衰并发抑郁症选自充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动或有害的血管重构药物中的用途。

10.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物中还包含血管紧张素Ⅱ(AT1)受体拮抗剂。

11.根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自洛沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、氯沙坦、沙普利沙坦、依利沙坦、他索沙坦、艾利沙坦或其可药用盐；优选自缬沙坦、阿齐沙坦或其可药用盐。

12.权利要求7或权利要求10所述药物组合物在制备治疗或预防心肌梗塞及其后遗症、动脉粥样硬化、心绞痛、糖尿病性或非糖尿病性肾机能不全、继发性醛固酮增多症、原发性或继发性肺高血压、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病的蛋白尿、肾血管高血压、糖尿病性视网膜病、偏头痛、外周血管病、雷诺氏病、腔的增生、认知机能障碍、青光眼或中风药物中的用途。