CN113457587A - 一种多重响应核壳结构纳米凝胶及其制备方法、应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多重响应核壳结构纳米凝胶及其制备方法、应用，属于凝胶制备的技术领域。具体包括以下步骤：步骤1、回流沉淀聚合法制备纳米凝胶水溶液；步骤2、于纳米凝胶核的外表面包覆壳聚糖，得壳聚糖包裹纳米凝胶；步骤3、于壳聚糖的外表面包覆透明质酸壳层，得到核壳机构纳米凝胶。本发明以壳聚糖和透明质酸包覆纳米凝胶核，制得具有核壳结构的纳米凝胶，得到的纳米水凝胶具有温度/pH/还原多重刺激响应性。本发明中包覆的透明质酸壳层能够与癌细胞表面的CD44受体特异性结合，因而纳米凝胶能够特异性靶向肿瘤细胞。
Description
技术领域
本发明属于凝胶制备的技术领域，特别是涉及一种多重响应核壳结构纳米凝胶及其制备方法、应用。
背景技术
纳米凝胶是指通过物理或化学交联形成的尺寸在1-1000nm范围内的水凝胶纳米颗粒。因而，纳米凝胶同时具有水凝胶和纳米颗粒的双重特性，容易被细胞吞噬、易穿透人体中的各种保护膜、且具有稳定性好、载药效率高等优势，近年来被大量应用于医疗诊断、传感和药物释放等领域。传统的纳米凝胶制备方法如常规乳液聚合、细乳液聚合、分散聚合等，反应时间较长，制备过程中均需加入稳定剂或者乳化剂，给微球的分离和提纯带来极大的困难，且影响其后续生物应用。回流沉淀聚合法具有操作简单、耗时短、无需添加乳化剂或稳定剂，反应过程容易控制等优点，且易于形成单分散纳米颗粒，为制备多功能纳米凝胶微球提供了新途径。然而，目前报道的回流沉淀聚合法制备的纳米凝胶均为单一聚合物结构，或金属材料为核的核壳结构，难以实现对双重化疗药物的同步高效负载及程控释放，且通常仅具有单重或双重响应性，难以满足人们不断增长的需求。因此，制备具有多重刺激响应性质的纳米凝胶，高效负载两种化疗药物，利用多种刺激响应功能及不同化疗药物的协同效应，满足化疗过程中更加严格和多样化的需求，是目前药物输送领域亟待解决的关键问题。
肿瘤的发生和发展是一个多步骤、多因素共同参与的复杂过程。使用小分子化疗药物杀死肿瘤细胞正逐步成为恶性肿瘤综合治疗的重要组成部分。然而，化疗的耐药性是当今恶性肿瘤治疗的一大难题，也是综合治疗失败的一个重要原因。目前负载单一抗肿瘤药物的载药系统在无数临床应用中发现在患者体内容易出现抗药性，无法满足长期稳定的抗肿瘤治疗需求，将多种药物设计于一个药物递送体系，有协同效应，可减少递送药物的剂量和副作用，增强肿瘤的治疗效果，同时可保证药物的有效递送，避免药物被过早清除排泄。因此，如何简单制备出负载双重化疗药物的药物载体，并且各自实现在不同环境刺激下的靶向释放并发挥疗效，是亟待解决的难题。
发明内容
本发明为解决上述背景技术中存在的技术问题，提供一种多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，同时提供该纳米凝胶作为抗肿瘤药物载体的应用。
本发明提供的多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，其中纳米凝胶核通过回流沉淀聚合法制备，中间层为壳聚糖，壳层为透明质酸，采用层层组装的方法通过静电作用包覆在纳米凝胶核上。
本发明采用以下技术方案：一种多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1、回流沉淀聚合法制备纳米凝胶水溶液；
步骤2、于纳米凝胶核的外表面包覆壳聚糖，得壳聚糖包裹纳米凝胶；
步骤3、于壳聚糖的外表面包覆透明质酸壳层，得到核壳机构纳米凝胶。
在进一步的实施例中，所述步骤1具体包括以下流程：
步骤101、将甲基丙烯酸或丙烯酸、N-异丙基丙烯酰胺、交联剂和引发剂于溶解液中混合，超声分散均匀后进行回流反应得到反应液；
步骤102、将反应液置于离心管中，离心分离去除反应液中的溶解液及未反应的单体和引发剂；
步骤103、用乙腈、乙醇和去离子水反复洗涤3~5次，离心分离即得高纯度的纳米凝胶水溶液。
在进一步的实施例中，所述步骤2具体包括以下流程：
步骤201、将壳聚糖溶解于浓度为0.5~3%的乙酸水溶液里，配制成壳聚糖水溶液；
步骤202、于常温下，向纳米凝胶水溶液中滴加壳聚糖水溶液，滴加时间为30 ~120min；
步骤203、滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h，高速离心分离沉淀；
步骤204、采用乙醇和水反复洗涤数次，即得壳聚糖包裹纳米凝胶。
在进一步的实施例中，所述步骤3具体包括以下流程：
步骤301、将透明质酸溶解在水溶液里，保持透明质酸质量分数为0.5~5wt%；
步骤302、常温条件下，向壳聚糖包裹纳米凝胶中滴加至步骤301的透明质酸溶液，滴加时间为30 ~120 min；
步骤303、滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h，高速离心分离沉淀；
步骤304、采用乙醇和水反复洗涤数次，即得核壳结构纳米凝胶。
在进一步的实施例中，回流反应的条件如下：于90~110℃的环境下反应0.5~2小时。
一种多重响应核壳结构纳米凝胶，所述纳米凝胶采用上述方法制备而成。
在进一步的实施例中，
甲基丙烯酸或丙烯酸 100；
N-异丙基丙烯酰胺 0~50；
交联剂 5~30；
引发剂 1~6；
壳聚糖 5~8；
透明质酸 5~8。
进一步优选为，
甲基丙烯酸或丙烯酸 100；
N-异丙基丙烯酰胺 20~30；
交联剂 10~20；
引发剂 2~3；
壳聚糖 7；
透明质酸 7。
在进一步的实施例中，所述交联剂包括：N,N'-双(丙稀酰)胱胺、双(2-甲基丙烯)乙氧基二硫、2,2-二硫二乙醇二丙烯酸酯、二甲基丙烯酸锌、二甲基丙烯酸亚铁、三甲基丙烯酸铁中的一种或几种；
所述引发剂包括：偶氮二异丙腈、偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、过氧化二苯甲酰中的一种或几种；
所述溶解液包括：乙腈、四氢呋喃、甲基异丁基酮、甲苯，或者乙腈-乙醇、乙腈-四氢呋喃、乙腈-水、乙腈-甲苯、乙醇-甲苯或甲基异丁基酮-乙腈混合液中的一种或几种（单体浓度为0.2wt%~20.0wt%），优选为乙腈（单体浓度1.0wt%）。
上述制备得到的纳米凝胶在抗肿瘤药物中的应用。
在进一步的实施例中，所述应用具体包括以下步骤：
步骤一、将甲基丙烯酸或丙烯酸、N-异丙基丙烯酰胺、交联剂和引发剂于溶解液中混合，超声分散均匀后进行回流反应得到反应液；
将反应液置于离心管中，离心分离去除反应液中的溶解液及未反应的单体和引发剂；
用乙腈、乙醇和去离子水反复洗涤3~5次，离心分离即得高纯度的纳米凝胶水溶液；
步骤二、取10 ~20 mL的纳米凝胶水溶液，向其中加入0.2~2 mL 的阿霉素溶液，放置在摇床中，控制速率为60~180 rpm，在15~30 ℃下孵育1~4 h，然后高速离心移去上清液，用蒸馏水洗涤3次除去游离阿霉素，即得阿霉素负载的纳米凝胶；
步骤三、将壳聚糖溶解在浓度为0.5~3%的乙酸水溶液里，配制成壳聚糖水溶液，壳聚糖质量分数为0.5~5wt%；
向纳米凝胶水溶液中滴加阿霉素负载纳米凝胶水溶液；常温条件下，缓慢向纳米凝胶溶液中滴加壳聚糖溶液，滴加时间为30 ~120 min；
滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h，离心分离沉淀；采用乙醇和水反复洗涤多次；
随后，向其中缓慢滴加透明质酸溶液，透明质酸质量分数为0.5~5wt%，滴加时间为30 ~120 min，滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h，离心分离沉淀，采用乙醇和水反复洗涤多次，即得阿霉素负载核壳结构纳米凝胶；
步骤四、取10 ~20 mL阿霉素负载核壳结构纳米凝胶，向其中加入1~2 mL四价顺铂注射液，放置在摇床中，控制速率为60~180 rpm，在15~30 ℃下孵育1~4 h，然后高速离心移去上清液，用蒸馏水洗涤3次除去游离顺铂，即得双重负载纳米凝胶，该双重负载纳米凝胶作为抗肿瘤药物阿霉素和顺铂的载体。
本发明的有益效果：
本发明制备工艺简单易行，原料易得，绿色环保。
本发明以壳聚糖和透明质酸包覆纳米凝胶核，制得具有核壳结构的纳米凝胶，得到的纳米水凝胶具有温度/pH/还原多重刺激响应性。肿瘤组织部位温度比正常组织略高，温度响应性有利于促进药物在肿瘤组织释放，pH响应性则促使药物在溶酶体、内涵体等酸性细胞器内更快速的释放。还原响应性有利于纳米凝胶在肿瘤细胞外低谷胱甘肽浓度的环境中保持稳定和长循环，减少药物泄露，而在肿瘤细胞内高谷胱甘肽浓度的环境中快速降解，降解为小分子量的线性链，从而快速释放药物。
本发明中包覆的透明质酸壳层能够与癌细胞表面的CD44受体特异性结合，因而纳米凝胶能够特异性靶向肿瘤细胞。
附图说明
图1 为实施例1的代表性纳米凝胶P(MAA-co-NIPAM)的透射电镜图。
图2 为实施例2的纳米凝胶的红外光谱图。
图3 为实施例3的核壳结构纳米凝胶的透射电镜图。
图4 为实施例4的纳米凝胶的平均粒径随温度的变化图。
图5 为实施例5的核壳结构纳米凝胶在不同pH值下的粒径图。
图6 为实施例6的MCF-7细胞与纳米凝胶共孵育24 h后的存活率。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的描述。需要说明的是，为了行文的简洁，略去了不同主题之间的相同技术内容。本领域的人员在阅读全文后，基于上下文整体，可以知晓上述略写内容。
传统的纳米凝胶制备方法如常规乳液聚合、细乳液聚合、分散聚合等，反应时间较长，制备过程中均需加入稳定剂或者乳化剂，给微球的分离和提纯带来极大的困难，且影响其后续生物应用。回流沉淀聚合法具有操作简单、耗时短、无需添加乳化剂或稳定剂，反应过程容易控制等优点，且易于形成单分散纳米颗粒，为制备多功能纳米凝胶微球提供了新途径。然而，目前报道的回流沉淀聚合法制备的纳米凝胶均为单一聚合物结构，或金属材料为核的核壳结构，难以实现对双重化疗药物的同步高效负载及程控释放，且通常仅具有单重或双重响应性，难以满足人们不断增长的需求。因此，制备具有多重刺激响应性质的纳米凝胶，高效负载两种化疗药物，利用多种刺激响应功能及不同化疗药物的协同效应，满足化疗过程中更加严格和多样化的需求，是目前药物输送领域亟待解决的关键问题。
实施例1
为解决上述问题，本实施例提供了一种多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1纳米凝胶水溶液的制备：通过回流沉淀聚合法制备P(MAA-co-NIPAM)纳米凝胶过程如下：将300 mg的甲基丙烯酸（MAA）、100 mg 的N-异丙基丙烯酰胺（NIPAM），60 mg交联剂N,N'-双(丙稀酰)胱胺 (BACy)、8 mg的引发剂AIBN溶解在40 mL乙腈溶液（单体浓度1.0wt%）中，并超声30 min促进其溶解。95℃条件下反应2 h。将反应液置于离心管中，超速离心（12000 rpm、5 min）分离固体物质，并用乙腈溶剂超声清洗三次，分离纯化所得微球。代表性纳米凝胶P(MAA-co-NIPAM)的透射电镜图如图1所示，可以看出，纳米凝胶微球呈球形结构，微球平均粒径约为180 nm，粒径分布均匀。其中，交联剂选用N,N'-双(丙稀酰)胱胺和双(2-甲基丙烯)乙氧基二硫；引发剂选用偶氮二异丙腈和偶氮二异丁腈。
实施例2
铁离子交联纳米凝胶核的制备
在100 mL的圆底烧瓶中，加入40 mL乙腈溶液，500 mg丙烯酸，60 mg三甲基丙烯酸铁，15 mg AIBN（引发剂），超声分散10 min后油浴加热到100℃，并在烧瓶上方用冷凝管保持回流状态，反应2 h。将反应产物离心(12,000 rpm，5 min)除去上层清液并用乙醇洗涤，反复三次，即得纳米凝胶。纳米凝胶的傅立叶变换红外光谱图如图2所示。其中1643cm-1处的吸收峰属于酰胺的伸缩振动吸收峰。在1520 cm-1和1374 cm-1处可观察到典型的金属羧酸盐带，表明纳米凝胶的成功制备。
实施例3
核壳结构纳米凝胶的制备
壳聚糖包裹纳米凝胶：取5 mL实施例1中制备的P(MAA-BACy)纳米凝胶溶液（质量浓度50 mg/mL）置于25 mL烧杯中备用，称取20mg的壳聚糖溶解于浓度为0.5~3%的乙酸水溶液（进一步优选为1%~2.5%，更优选为2%）里，配制成壳聚糖水溶液，控制壳聚糖质量分数为0.5~5wt%，进一步优选为1.5~4wt%，更优选为2.5wt%。于常温下，向纳米凝胶水溶液中滴加壳聚糖水溶液，滴加时间为30 ~120 min，进一步优选为50~100min，更优选为70min。滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h（进一步优选为2-5h，更优选为3.5h）高速离心分离沉淀；采用乙醇和水反复洗涤数次，即得壳聚糖包裹纳米凝胶。
核壳机构纳米凝胶的制备：将20mg的将透明质酸溶解在水溶液里，保持透明质酸质量分数为0.5~5wt%，进一步优选为1.5~3.5wt%，更优选为2.5wt%。常温条件下，向壳聚糖包裹纳米凝胶中滴加至步骤301的透明质酸溶液，滴加时间为30 ~120 min；进一步优选为50~100min，更优选为70min。滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h（进一步优选为2-5h，更优选为3.5h）高速离心分离沉淀；采用乙醇和水反复洗涤数次，即得核壳结构纳米凝胶。
本发明所制备的上述纳米凝胶的粒径为50 ~ 950 nm，多分散度为0.01~0.35
实施例4
纳米凝胶的温度响应性
利用实施例1中制备的纳米凝胶，将P(MAA-co-NIPAM)的PBS溶液（1 mg/mL）置于DLS样品池中，并进行程序升温，将样品分别在25 ℃、28 ℃、31 ℃、34 ℃、37 ℃和40 ℃条件下孵育10 min，并测定不同温度条件下的粒径大小。纳米凝胶平均粒径随温度的变化图如图4所示。通过DLS测量所得粒径结果可以看出，在25-31 ℃和40-43 ℃温度范围内，微球粒径变化较小，但在31-40 ℃范围内，纳米凝胶的粒径大幅度降低，由31℃时的314 nm降低到40 ℃时的183 nm。这是由于NIPAM基团内既有亲水性的酰胺基团，又有疏水性的异丙基导致的。当温度升高时，NIPAM与水分子之间的氢键相互作用变弱，高分子链间疏水作用增强，发生聚集，导致整个凝胶网络发生蜷缩，纳米凝胶宏观粒径变小。
实施例5
核壳结构纳米凝胶的还原响应性
取2 mL实施例3中制得的HA-CS- PMAA纳米凝胶溶液于5 mL离心管，加入GSH溶液，保持最终纳米凝胶溶液中GSH的浓度为10 mmol/L。通过动态光散射研究在37 ℃下孵育0h，0.5 h，3 h，5 h，9 h，24 h后凝胶微球的粒径分布变化，如图5所示。加入GSH一段时间后，粒径存在两个分布尺寸2000 nm和200 nm左右，由于GSH使纳米凝胶内起交联作用的BACy中的二硫键断裂，导致其解交联，发生降解及再聚集。
实施例6
纳米凝胶的细胞毒性测试
MCF-7人乳腺癌细胞在实验前24 h以每孔 6×103个细胞密度接种于96孔细胞培养板，在含 10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2培养箱中培养到一定密度后，分别加入纳米凝胶，保持其终浓度为50、80、100、150、200和300μg/mL。孵育24 h后，在每孔加入5 mg/mL的噻唑蓝(MTT)溶液20μL，37℃下继续孵育4 h，中止培养，小心吸去培养液。每孔加入100μL 二甲基亚砜（DMSO），振荡5 min，使结晶物充分溶解。用酶标仪（BioTek，ELX800）分别以490nm/630 nm 波长作为实验/参比波长，测其吸收值。细胞存活率按细胞存活率公式1计算，并以 6 个复孔的平均值作为最终结果。通过细胞活性(MTT)法，以MCF-7细胞为模型细胞，评价了制备所得纳米凝胶的细胞毒性，结果如图6所示。可以发现，当样品浓度低于50 μg/mL时，细胞存活率接近100%，当样品浓度上升至300 μg/mL时，细胞仍能保持90%以上的存活率，表明纳米凝胶具有良好的细胞相容性。
实施例7
纳米凝胶在抗肿瘤药物中的应用，所述应用具体包括以下步骤：
步骤一、将甲基丙烯酸或丙烯酸、N-异丙基丙烯酰胺、交联剂和引发剂于溶解液中混合，超声分散均匀后进行回流反应得到反应液；
将反应液置于离心管中，离心分离去除反应液中的溶解液及未反应的单体和引发剂；
用乙腈、乙醇和去离子水反复洗涤3~次，离心分离即得高纯度的纳米凝胶水溶液；
步骤二、取10 ~20 mL的纳米凝胶水溶液（进一步优选为15 mL，向其中加入0.2~2mL（进一步优选为1~1.5 mL，更优选为1.2 mL） 的阿霉素溶液，放置在摇床中，控制速率为120 rpm，在20 ℃下孵育3h，然后高速离心移去上清液，用蒸馏水洗涤3次除去游离阿霉素，即得阿霉素负载的纳米凝胶；
步骤三、将壳聚糖溶解在浓度为0.5~3%（进一步优选为1~1.5%，更优选为1.5%）的乙酸水溶液里，配制成壳聚糖水溶液，壳聚糖质量分数为2.5wt%；
向纳米凝胶水溶液中滴加阿霉素负载纳米凝胶水溶液；常温条件下，缓慢向纳米凝胶溶液中滴加壳聚糖溶液，滴加时间为30 ~120 min，进一步优选为50~100min，更优选为70min。
滴加结束后，继续搅拌反应4 h，离心分离沉淀；采用乙醇和水反复洗涤多次；
随后，向其中缓慢滴加透明质酸溶液，透明质酸质量分数为2.5wt%，滴加时间为30~120 min进一步优选为50~100min，更优选为70min，滴加结束后，继续搅拌反应4h，离心分离沉淀，采用乙醇和水反复洗涤多次，即得阿霉素负载核壳结构纳米凝胶；
步骤四、取20 mL阿霉素负载核壳结构纳米凝胶，向其中加入2 mL四价顺铂注射液，放置在摇床中，控制速率为120rpm，25℃下孵育3 h，然后高速离心移去上清液，用蒸馏水洗涤3次除去游离顺铂，即得双重负载纳米凝胶，该双重负载纳米凝胶作为抗肿瘤药物阿霉素和顺铂的载体。
本发明制备工艺简单易行，原料易得，绿色环保。
本发明以壳聚糖和透明质酸包覆纳米凝胶核，制得具有核壳结构的纳米凝胶，得到的纳米水凝胶具有温度/pH/还原多重刺激响应性。肿瘤组织部位温度比正常组织略高，温度响应性有利于促进药物在肿瘤组织释放，pH响应性则促使药物在溶酶体、内涵体等酸性细胞器内更快速的释放。还原响应性有利于纳米凝胶在肿瘤细胞外低谷胱甘肽浓度的环境中保持稳定和长循环，减少药物泄露，而在肿瘤细胞内高谷胱甘肽浓度的环境中快速降解，降解为小分子量的线性链，从而快速释放药物。
本发明中包覆的透明质酸壳层能够与癌细胞表面的CD44受体特异性结合，因而纳米凝胶能够特异性靶向肿瘤细胞。
本发明能够同时高效负载两种药物，有效解决了人体对单一药物的抗药性，两种药物的协同效应使其在生物医学尤其是癌症的治疗方面有很大应用前景。
Claims (10)
1.一种多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤1、回流沉淀聚合法制备纳米凝胶水溶液；
步骤2、于纳米凝胶核的外表面包覆壳聚糖，得壳聚糖包裹纳米凝胶；
步骤3、于壳聚糖的外表面包覆透明质酸壳层，得到核壳机构纳米凝胶。
2.根据权利要求1所述的一种多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤1具体包括以下流程：
步骤101、将甲基丙烯酸或丙烯酸、N-异丙基丙烯酰胺、交联剂和引发剂于溶解液中混合，超声分散均匀后进行回流反应得到反应液；
步骤102、将反应液置于离心管中，离心分离去除反应液中的溶解液及未反应的单体和引发剂；
步骤103、用乙腈、乙醇和去离子水反复洗涤3~5次，离心分离即得高纯度的纳米凝胶水溶液。
3.根据权利要求1所述的一种多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤2具体包括以下流程：
步骤201、将壳聚糖溶解于浓度为0.5~3%的乙酸水溶液里，配制成壳聚糖水溶液；
步骤202、于常温下，向纳米凝胶水溶液中滴加壳聚糖水溶液，滴加时间为30 ~120min；
步骤203、滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h，高速离心分离沉淀；
步骤204、采用乙醇和水反复洗涤数次，即得壳聚糖包裹纳米凝胶。
4.根据权利要求1所述的一种多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤3具体包括以下流程：
步骤301、将透明质酸溶解在水溶液里，保持透明质酸质量分数为0.5~5wt%；
步骤302、常温条件下，向壳聚糖包裹纳米凝胶中滴加至步骤301的透明质酸溶液，滴加时间为30 ~120 min；
步骤303、滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h，高速离心分离沉淀；
步骤304、采用乙醇和水反复洗涤数次，即得核壳结构纳米凝胶。
5.根据权利要求2所述的一种多重响应核壳结构纳米凝胶的制备方法，其特征在于，回流反应的条件如下：于90~110℃的环境下反应0.5~2小时。
6.一种多重响应核壳结构纳米凝胶，其特征在于，所述纳米凝胶采用如权利要求1至5任意一项所述的方法制备而成。
7.根据权利要求6所述的一种多重响应核壳结构纳米凝胶，其特征在于，按照质量比包括：
甲基丙烯酸或丙烯酸 100；
N-异丙基丙烯酰胺 0~50；
交联剂 5~30；
引发剂 1~6；
壳聚糖 5~8；
透明质酸 5~8。
8.根据权利要求6所述的一种多重响应核壳结构纳米凝胶，其特征在于，所述交联剂包括：N,N'-双(丙稀酰)胱胺、双(2-甲基丙烯)乙氧基二硫、2,2-二硫二乙醇二丙烯酸酯、二甲基丙烯酸锌、二甲基丙烯酸亚铁、三甲基丙烯酸铁中的一种或几种；
所述引发剂包括：偶氮二异丙腈、偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、过氧化二苯甲酰中的一种或几种；
所述溶解液包括：乙腈、四氢呋喃、甲基异丁基酮、甲苯，或者乙腈-乙醇、乙腈-四氢呋喃、乙腈-水、乙腈-甲苯、乙醇-甲苯或甲基异丁基酮-乙腈混合液中的一种或几种。
9.一种如权利要求7所述的纳米凝胶在抗肿瘤药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的纳米凝胶在抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述应用具体包括以下步骤：
步骤一、将甲基丙烯酸或丙烯酸、N-异丙基丙烯酰胺、交联剂和引发剂于溶解液中混合，超声分散均匀后进行回流反应得到反应液；
将反应液置于离心管中，离心分离去除反应液中的溶解液及未反应的单体和引发剂；
用乙腈、乙醇和去离子水反复洗涤3~5次，离心分离即得高纯度的纳米凝胶水溶液；
步骤二、取10 ~20 mL的纳米凝胶水溶液，向其中加入0.2~2 mL 的阿霉素溶液，放置在摇床中，控制速率为60~180 rpm，在15~30 ℃下孵育1~4 h，然后高速离心移去上清液，用蒸馏水洗涤3次除去游离阿霉素，即得阿霉素负载的纳米凝胶；
步骤三、将壳聚糖溶解在浓度为0.5~3%的乙酸水溶液里，配制成壳聚糖水溶液，壳聚糖质量分数为0.5~5wt%；
向纳米凝胶水溶液中滴加阿霉素负载纳米凝胶水溶液；常温条件下，缓慢向纳米凝胶溶液中滴加壳聚糖溶液，滴加时间为30 ~120 min；
滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h，离心分离沉淀；采用乙醇和水反复洗涤多次；
随后，向其中缓慢滴加透明质酸溶液，透明质酸质量分数为0.5~5wt%，滴加时间为30 ~120 min，滴加结束后，继续搅拌反应1-6 h，离心分离沉淀，采用乙醇和水反复洗涤多次，即得阿霉素负载核壳结构纳米凝胶；
步骤四、取10 ~20 mL阿霉素负载核壳结构纳米凝胶，向其中加入1~2 mL四价顺铂注射液，放置在摇床中，控制速率为60~180 rpm，在15~30 ℃下孵育1~4 h，然后高速离心移去上清液，用蒸馏水洗涤3次除去游离顺铂，即得双重负载纳米凝胶，该双重负载纳米凝胶作为抗肿瘤药物阿霉素和顺铂的载体。
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