CN113453716A - 兽用IgG Fc变体 - Google Patents
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Abstract
提供了与伴生动物的变体IgG Fc多肽相关的各种实施方案，所述变体IgG Fc多肽具有增加的蛋白A结合以易于纯化、减少的C1q结合以降低补体介导的免疫应答、减少的CD16结合(例如，以降低抗体依赖性细胞毒性(ADCC)诱导)、增加的稳定性和/或形成多聚体蛋白的能力。此外，提供了与包含此类变体IgG Fc多肽的抗体和融合蛋白相关的各种实施方案。在各种实施方案中，此类多肽可用于治疗伴生动物，如犬类、猫类和马类。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年12月27日提交的美国临时申请号62/785,680的优先权权益，将所述临时申请出于任何目的通过引用以其整体并入本文。
技术领域
本公开文本涉及伴生动物的变体IgG Fc多肽，所述变体IgG Fc多肽具有增强的特征，包括增加的蛋白A结合(例如，以易于纯化)、减少的C1q结合(例如，以降低补体介导的免疫应答)、减少的CD16结合(例如，以降低抗体依赖性细胞毒性(ADCC)诱导)、增加的稳定性和/或形成异二聚体蛋白的能力。本公开文本的变体IgG Fc多肽可以在伴生动物治疗剂中具有广泛的适用性。例如，变体IgG Fc多肽可用于设计和产生长效GLP1多肽以用于治疗伴生动物如犬类、猫类和马类的例如糖尿病、肥胖症或相关适应症。此外，变体IgG Fc多肽可用于设计和产生抗体或融合蛋白以用于治疗伴生动物的各种障碍。
背景技术
IgG Fc通过与FcRn、Fc受体和C1q的相互作用在Fc介导的功能中起重要作用。在伴生动物中，各种IgG亚型在这些功能上具有差异，在选择特定的IgG抗体或IgG Fc融合蛋白用于治疗性或诊断性应用时，通常会考虑所述差异。例如，IgG亚型对C1q或CD16具有弱的或无可测量的结合亲和力的能力可能是有利的。此外，IgG Fc结合蛋白A的能力对于使用蛋白A亲和纯化平台进行纯化可能是有用的。
然而，犬类、猫类和马类的大多数IgG Fc亚型不具有蛋白A结合特性、对CD16的弱的或无可测量的结合亲和力、以及对C1q的弱或无可测量的结合亲和力。例如，在四种犬类IgG Fc亚型(IgG-A、IgG-B、IgG-C和IgG-D)中，只有犬类IgG-B Fc对蛋白A具有明显的亲和力。同时，只有犬类IgG-AFc和IgG-D Fc没有或具有弱的C1q结合或CD16结合。包含具有降低的与C1q和/或CD16的结合和/或能够结合蛋白A的变体IgG Fc多肽的抗体和Fc融合蛋白是期望的。
发明内容
实施方案1.一种多肽，所述多肽包含至少一种治疗性多肽和/或至少一种抗体、和变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力；
b)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力；
c)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力；
d)铰链区，其包含相对于野生型猫类或马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成，如在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析确定的；
e)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述至少一个氨基酸取代是半胱氨酸，并且其中所述变体IgG Fc多肽能够相对于所述野生型猫类IgG Fc多肽形成至少一个另外的链间二硫键；
f)相对于野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽具有增加的对C1q和/或CD16的结合亲和力；和/或
g)CH1区，其包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代，或
ii)在对应于SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案2.一种连续多肽，所述连续多肽包含：
i)第一治疗性多肽和/或抗体(TPA1)；
ii)第一接头(L1)；
iii)伴生动物物种的变体Fc多肽(Fc)；
iv)任选地，第二接头(L2)；以及
v)任选地，第二治疗性多肽和/或抗体(TPA2)，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力；
b)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力；
c)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力；
d)铰链区，其包含相对于野生型猫类或马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成，如在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析确定的；和/或
e)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述至少一个氨基酸取代是半胱氨酸，并且其中所述变体IgG Fc多肽能够相对于所述野生型猫类IgG Fc多肽形成至少一个另外的链间二硫键；
f)相对于野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽具有增加的对C1q和/或CD16的结合亲和力；和/或
g)CH1区，其包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代，或
ii)在对应于SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案3.根据实施方案2所述的连续多肽，所述连续多肽包含：
式(I)：TPA1-L1-Fc
式(II)：Fc-L1-TPA1；
式(III)：TPA1-L1-Fc-L2-TPA2；
式(IV)：TPA1-L1-TPA2-L2-Fc；或
式(V)：Fc-L1-TPA1-L2-TPA2。
实施方案4.一种多聚体蛋白，所述多聚体蛋白包含：
i)第一治疗性多肽和/或抗体(TPA1)、和第一变体IgG Fc多肽，所述第一变体IgGFc多肽包含相对于第一野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，以及
ii)第二治疗性多肽和/或抗体(TPA2)、和第二变体IgG Fc多肽，所述第二变体IgGFc多肽包含相对于第二野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中
a)所述第一变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:1的位置138、SEQ ID NO:2的位置137、SEQ ID NO:4的位置137或SEQ ID NO:6的位置138的位置处的氨基酸取代；
ii)在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQID NO:69的位置154处的氨基酸取代；或
iii)在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的氨基酸取代；并且
b)所述第二变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:1的位置138、位置140和/或位置181，SEQ ID NO:2的位置137、位置139和/或位置180，SEQ ID NO:3的位置137、位置139和/或位置180，或SEQ ID NO:4的位置138、位置140和/或位置181的位置处的氨基酸取代；
ii)在对应于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:117或SEQID NO:118的位置154、位置156和/或位置197的位置处的氨基酸取代；或
iii)在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131、位置133和/或位置174的位置处的氨基酸取代。
实施方案5.根据实施方案4所述的多聚体蛋白，其中所述第一变体IgG Fc多肽和/或所述第二变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力；
b)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力；
c)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力；
d)铰链区，其包含相对于野生型猫类或马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成，如在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析确定的；
e)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述至少一个氨基酸取代是半胱氨酸，并且其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽能够相对于所述野生型猫类IgG Fc多肽形成至少一个另外的链间二硫键；和/或
f)相对于野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽具有增加的对C1q和/或CD16的结合亲和力；和/或
g)CH1区，其包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代，或
ii)在对应于SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案6.根据实施方案4或实施方案5所述的多聚体蛋白，其中所述第一野生型IgG Fc多肽和所述第二野生型IgG Fc多肽来自相同的IgG亚型。
实施方案7.根据实施方案4或实施方案5所述的多聚体蛋白，其中所述第一野生型IgG Fc多肽和所述第二野生型IgG Fc多肽来自不同的IgG亚型。
实施方案8.根据实施方案2至7中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中TPA2在存在时包含与TPA1相比不同的氨基酸序列。
实施方案9.根据实施方案2至8中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中TPA1和TPA2是不同的治疗性多肽或者是结合至不同靶标的抗体。
实施方案10.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的大于5x10-6M、大于1x10-5M、大于5x10-5M、大于1x10-4M、大于5x10-4M或大于1x10-3M的解离常数(Kd)与C1q和/或CD16结合。
实施方案11.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M的解离常数(Kd)与蛋白A结合。
实施方案12.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体犬类IgG-A或变体犬类IgG-D Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的小于5x10- 6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M的解离常数(Kd)与C1q和/或CD16结合。
实施方案13.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述伴生动物物种是犬类、猫类或马类。
实施方案14.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述野生型IgG Fc多肽是
a)犬类IgG-AFc、IgG-B Fc、IgG-C Fc或IgG-D Fc；
b)马类IgG1 Fc、IgG2 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc、IgG5 Fc、IgG6 Fc或IgG7 Fc；或
c)猫类IgG1a Fc、IgG1b Fc或IgG2 Fc。
实施方案15.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，所述CH1区包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、或SEQ ID NO:145的位置24和/或位置30处的至少一个氨基酸取代，或
b)在SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24和/或位置29处的至少一个氨基酸取代。
实施方案16.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，所述CH1区包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24的位置处的亮氨酸和/或在对应于其位置30的位置处的天冬酰胺；或
b)在对应于SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24的位置处的亮氨酸和/或在其位置29的位置处的天冬酰胺。
实施方案17.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，所述CH1区包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24处的亮氨酸和/或在其位置30处的天冬酰胺；或
b)在SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24处的亮氨酸和/或在其位置29处的天冬酰胺。
实施方案18.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含野生型或变体犬类或猫类轻链恒定区。
实施方案19.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含野生型或变体犬类或猫类轻链κ恒定区。
实施方案20.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区包含相对于野生型犬类或猫类轻链κ恒定区的至少一个氨基酸修饰，所述至少一个氨基酸修饰包括：
a)在对应于SEQ ID NO:150的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:156的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案21.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区包含相对于野生型犬类或猫类轻链κ恒定区的至少一个氨基酸修饰，所述至少一个氨基酸修饰包括：
a)在对应于SEQ ID NO:150的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:156的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案22.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区包含相对于野生型犬类或猫类轻链κ恒定区的至少一个氨基酸修饰，所述至少一个氨基酸修饰包括：
a)在对应于SEQ ID NO:150的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置22的位置处的精氨酸；或
b)在对应于SEQ ID NO:156的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置22的位置处的精氨酸。
实施方案23.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区包含相对于野生型犬类或猫类轻链κ恒定区的至少一个氨基酸修饰，所述至少一个氨基酸修饰包括：
a)在SEQ ID NO:150的位置11处的丙氨酸和/或其位置22处的精氨酸；或
b)在SEQ ID NO:156的位置11处的丙氨酸和/或其位置22处的精氨酸。
实施方案24.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16的位置处的氨基酸取代；
b)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置3的位置处的氨基酸取代；和/或
c)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置20的位置处的氨基酸取代。
实施方案25.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16的位置处的氨基酸取代；
b)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置3的位置处的氨基酸取代；和/或
c)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置20的位置处的氨基酸取代。
实施方案26.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16处的氨基酸取代；
b)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:51的位置3处的氨基酸取代；和/或
c)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:51的位置20处的氨基酸取代。
实施方案27.所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16的位置处或在其位置16处的脯氨酸；
b)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置3的位置处或在其位置3处的丝氨酸；和/或
c)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置20的位置处或在其位置20处的脯氨酸。
实施方案28.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含来自不同同种型的IgG Fc多肽的铰链区或铰链区的一部分。
实施方案29.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含来自野生型猫类IgG-1Fc多肽或来自野生型马类IgG1 Fc多肽的铰链区或铰链区的一部分。
实施方案30.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:69的位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15或位置16的位置处的半胱氨酸。
实施方案31.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:69的位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15或位置16的位置处的半胱氨酸。
实施方案32.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:69的位置14的位置处的半胱氨酸。
实施方案33.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:69的位置14处的半胱氨酸。
实施方案34.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的氨基酸取代、和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置23的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置24的位置处的氨基酸取代；
c)在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置80的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的氨基酸取代；
d)在对应于SEQ ID NO:50的位置15的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ IDNO:50的位置203的位置处的氨基酸取代；
e)在对应于SEQ ID NO:54的位置199的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQID NO:54的位置200的位置处的氨基酸取代；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:55的位置199的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ IDNO:55的位置200的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:55的位置201的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:55的位置202的位置处的氨基酸取代。
实施方案35.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的氨基酸取代、和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置23的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置24的位置处的氨基酸取代；
c)在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置80的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的氨基酸取代；
d)在对应于SEQ ID NO:50的位置15的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ IDNO:50的位置203的位置处的氨基酸取代；
e)在对应于SEQ ID NO:54的位置199的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQID NO:54的位置200的位置处的氨基酸取代；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:55的位置199的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ IDNO:55的位置200的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:55的位置201的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:55的位置202的位置处的氨基酸取代。
实施方案36.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:1的位置21处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:1的位置23处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:1的位置25处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:1的位置80处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:1的位置205处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:1的位置207处的氨基酸取代；
b)在SEQ ID NO:4的位置21处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:4的位置23处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:4的位置24处的氨基酸取代；
c)在SEQ ID NO:4的位置21处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:6的位置23处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:6的位置25处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:6的位置80处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:6的位置207处的氨基酸取代；
d)在SEQ ID NO:50的位置15处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:50的位置203处的氨基酸取代；
e)在SEQ ID NO:54的位置199处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:54的位置200处的氨基酸取代；和/或
f)在SEQ ID NO:55的位置199处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:55的位置200处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:55的位置201处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:55的位置202处的氨基酸取代。
实施方案37.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQID NO:1的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的丙氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的组氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置23的位置处的亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置24的位置处的异亮氨酸；
c)在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置80的位置处的甘氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的组氨酸；
d)在对应于SEQ ID NO:50的位置15的位置处的苏氨酸或缬氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:50的位置203的位置处的酪氨酸或缬氨酸；
e)在对应于SEQ ID NO:54的位置199的位置处的亮氨酸和/或在对应于SEQ IDNO:54的位置200的位置处的组氨酸；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:55的位置199的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:55的位置200的位置处的组氨酸、在对应于SEQ ID NO:55的位置201的位置处的天冬酰胺和/或在对应于SEQ ID NO:55的位置202的位置处的组氨酸。
实施方案38.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:1的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:1的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:1的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:1的位置80处的甘氨酸、在SEQ ID NO:1的位置205处的丙氨酸和/或在SEQ ID NO:1的位置207处的组氨酸；
b)在SEQ ID NO:3的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:4的位置23处的亮氨酸和/或在SEQ ID NO:4的位置24处的异亮氨酸；
c)在SEQ ID NO:6的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:6的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:6的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:6的位置80处的甘氨酸和/或在SEQ IDNO:6的位置207处的组氨酸；
d)在SEQ ID NO:50的位置15处的苏氨酸或缬氨酸和/或在SEQ ID NO:50的位置203处的酪氨酸或缬氨酸；
e)在SEQ ID NO:54的位置199处的亮氨酸和/或在SEQ ID NO:54的位置200处的组氨酸；和/或
f)在SEQ ID NO:55的位置199处的亮氨酸、在SEQ ID NO:55的位置200处的组氨酸、在SEQ ID NO:55的位置201处的天冬酰胺和/或在SEQ ID NO:55的位置202处的组氨酸。
实施方案39.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置93的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:4的位置93的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:49的位置87的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:52的位置87的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:53的位置87的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:56的位置87的位置处的氨基酸取代；或
c)在对应于SEQ ID NO:65的位置198的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ IDNO:66的位置198的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:67的位置198的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:68的位置198的位置处的氨基酸取代。
实施方案40.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置93的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:4的位置93的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:49的位置87的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:52的位置87的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:53的位置87的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:56的位置87的位置处的氨基酸取代；或
c)在对应于SEQ ID NO:65的位置198的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ IDNO:66的位置198的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:67的位置198的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:68的位置198的位置处的氨基酸取代。
实施方案41.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:2的位置93处的氨基酸取代或在SEQ ID NO:4的位置93处的氨基酸取代；
b)在SEQ ID NO:49的位置87处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:52的位置87处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:53的位置87处的氨基酸取代或在SEQID NO:56的位置87处的氨基酸取代；或
c)在SEQ ID NO:65的位置198处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:66的位置198处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:67的位置198处的氨基酸取代或在SEQ ID NO:68的位置198处的氨基酸取代。
实施方案42.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置93的位置处的精氨酸或在对应于SEQ ID NO:4的位置93的位置处的精氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:49的位置87的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:52的位置87的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:53的位置87的位置处的丝氨酸或在对应于SEQ ID NO:56的位置87的位置处的丝氨酸；或
c)在对应于SEQ ID NO:65的位置198的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:66的位置198的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:67的位置198的位置处的丙氨酸或在对应于SEQ ID NO:68的位置198的位置处的丙氨酸。
实施方案43.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:2的位置93处的精氨酸或在SEQ ID NO:4的位置93处的精氨酸；
b)在SEQ ID NO:49的位置87处的丝氨酸、在SEQ ID NO:52的位置87处的丝氨酸、在SEQ ID NO:53的位置87处的丝氨酸或在SEQ ID NO:56的位置87处的丝氨酸；或
c)在SEQ ID NO:65的位置198处的丙氨酸、在SEQ ID NO:66的位置198处的丙氨酸、在SEQ ID NO:67的位置198处的丙氨酸或在SEQ ID NO:68的位置198处的丙氨酸。
实施方案44.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置5的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置38的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置39的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置97的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:2的位置98的位置处的氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置5的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置38的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置39的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置97的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置98的位置处的氨基酸取代。
实施方案45.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置5的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置38的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置39的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置97的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:2的位置98的位置处的氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置5的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置38的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置39的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置97的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置98的位置处的氨基酸取代。
实施方案46.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:2的位置5处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:2的位置38处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:2的位置39处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:2的位置97处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:2的位置98处的氨基酸取代；或
b)在SEQ ID NO:4的位置5处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:4的位置38处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:4的位置39处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:4的位置97处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:4的位置98处的氨基酸取代。
实施方案47.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置38的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置39的位置处的精氨酸、在对应于SEQID NO:2的位置97的位置处的异亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:2的位置98的位置处的甘氨酸；或
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置38的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置39的位置处的精氨酸、在对应于SEQID NO:4的位置97的位置处的异亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置98的位置处的甘氨酸。
实施方案48.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:2的位置5处的脯氨酸、在SEQ ID NO:2的位置38处的甘氨酸、在SEQ ID NO:2的位置39处的精氨酸、在SEQ ID NO:2的位置97处的异亮氨酸和/或在SEQ IDNO:2的位置98处的甘氨酸；或
b)在SEQ ID NO:4的位置5处的脯氨酸、在SEQ ID NO:4的位置38处的甘氨酸、在SEQ ID NO:4的位置39处的精氨酸、在SEQ ID NO:4的位置97处的异亮氨酸和/或在SEQ IDNO:4的位置98处的甘氨酸。
实施方案49.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含：
a)变体犬类IgG-AFc多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置2的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置5的位置处的甲硫氨酸或赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置35的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置38的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:1的位置39的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置65的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ IDNO:1的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置93的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置96的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:1的位置97的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置98的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的丙氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的组氨酸；或
b)变体犬类IgG-D Fc多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:6的位置2的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置5的位置处的甲硫氨酸或赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置35的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置38的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:6的位置39的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置65的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ IDNO:6的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置93的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置96的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:6的位置97的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置98的位置处的丙氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的组氨酸。
实施方案50.一种多肽，所述多肽包含：
a)变体犬类IgG-A Fc多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置2的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置5的位置处的甲硫氨酸或赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置35的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置38的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:1的位置39的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置65的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ IDNO:1的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置93的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置96的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:1的位置97的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置98的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的丙氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的组氨酸；或
b)变体犬类IgG-D Fc多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:6的位置2的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置5的位置处的甲硫氨酸或赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置35的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置38的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:6的位置39的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置65的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ IDNO:6的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置93的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置96的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:6的位置97的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置98的位置处的丙氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的组氨酸。
实施方案51.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含：
a)变体犬类IgG-A Fc多肽，其包含在SEQ ID NO:1的位置2处的丙氨酸、在SEQ IDNO:1的位置5处的甲硫氨酸或赖氨酸、在SEQ ID NO:1的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:1的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:1的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:1的位置35处的缬氨酸、在SEQ ID NO:1的位置38处的天冬酰胺、在SEQ ID NO:1的位置39处的脯氨酸、在SEQ ID NO:1的位置65处的谷氨酸、在SEQ ID NO:1的位置80处的甘氨酸、在SEQ ID NO:1的位置93处的赖氨酸、在SEQ ID NO:1的位置96处的天冬酰胺、在SEQ ID NO:1的位置97处的赖氨酸、在SEQ ID NO:1的位置98处的丙氨酸、在SEQ ID NO:1的位置205处的丙氨酸和/或在SEQ ID NO:1的位置207处的组氨酸；或
b)变体犬类IgG-D Fc多肽，其包含在SEQ ID NO:6的位置2处的丙氨酸、在SEQ IDNO:6的位置5处的甲硫氨酸或赖氨酸、在SEQ ID NO:6的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:6的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:6的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:6的位置35处的缬氨酸、在SEQ ID NO:6的位置38处的天冬酰胺、在SEQ ID NO:6的位置39处的脯氨酸、在SEQ ID NO:6的位置65处的谷氨酸、在SEQ ID NO:6的位置80处的甘氨酸、在SEQ ID NO:6的位置93处的赖氨酸、在SEQ ID NO:6的位置96处的天冬酰胺、在SEQ ID NO:6的位置97处的赖氨酸、在SEQ ID NO:6的位置98处的丙氨酸和/或在SEQ ID NO:6的位置207处的组氨酸。
实施方案52.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体IgG Fc多肽，所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ IDNO:2的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸或在对应于SEQ ID NO:6的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:69的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸或在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸；或
c)在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的酪氨酸或色氨酸。
实施方案53.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ IDNO:2的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸或在对应于SEQ ID NO:6的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:69的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸或在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸；或
c)在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的酪氨酸或色氨酸。
实施方案54.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:1的位置138处的酪氨酸或色氨酸、在SEQ ID NO:2的位置137处的酪氨酸或色氨酸、在SEQ ID NO:4的位置137处的酪氨酸或色氨酸或在SEQ ID NO:6的位置138处的酪氨酸或色氨酸；或
b)在SEQ ID NO:69的位置154处的酪氨酸或色氨酸、在SEQ ID NO:65或SEQ IDNO:66的位置154处的酪氨酸或色氨酸或在SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154处的酪氨酸或色氨酸；和/或
c)在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131处的酪氨酸或色氨酸。
实施方案55.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体IgG Fc多肽，所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154的位置处的丝氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的丝氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:1的位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置156的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置156的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置156的位置处的丙氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置133的位置处的丙氨酸；和/或
c)在对应于SEQ ID NO:1的位置181的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置180的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置180的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置181的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置197的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置197的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置197的位置处的苏氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置174的位置处的苏氨酸。
实施方案56.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154的位置处的丝氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的丝氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:1的位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置156的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置156的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置156的位置处的丙氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置133的位置处的丙氨酸；和/或
c)在对应于SEQ ID NO:1的位置181的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置180的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置180的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置181的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置197的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置197的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置197的位置处的苏氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置174的位置处的苏氨酸。
实施方案57.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:1的位置138处的丝氨酸、在SEQ ID NO:2的位置137处的丝氨酸、在SEQ ID NO:4的位置137处的丝氨酸、在SEQ ID NO:6的位置138处的丝氨酸、在SEQ IDNO:69的位置154处的丝氨酸、在SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154处的丝氨酸、在SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154处的丝氨酸或在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131处的丝氨酸；
b)在SEQ ID NO:1的位置140处的丙氨酸、在SEQ ID NO:2的位置139处的丙氨酸、在SEQ ID NO:4的位置139处的丙氨酸、在SEQ ID NO:6的位置140处的丙氨酸、在SEQ IDNO:69的位置156处的丙氨酸、在SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置156处的丙氨酸、在SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置156处的丙氨酸或在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置133处的丙氨酸；和/或；
c)在SEQ ID NO:1的位置181处的苏氨酸、在SEQ ID NO:2的位置181处的苏氨酸、在SEQ ID NO:4的位置181处的苏氨酸、在SEQ ID NO:6的位置181处的苏氨酸、在SEQ IDNO:69的位置197处的苏氨酸、在SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置197处的苏氨酸、在SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置197处的苏氨酸或在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置174处的苏氨酸。
实施方案58.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述多肽或所述变体Fc多肽是糖基化的。
实施方案59.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述多肽或所述变体Fc多肽是非糖基化的。
实施方案60.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中L1和L2在存在时各自独立地是柔性接头。
实施方案61.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中L1和L2在存在时的氨基酸序列各自独立地包含100％、至少95％、至少90％、至少85％的丝氨酸和/或甘氨酸氨基酸残基。
实施方案62.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述多肽、连续多肽或多聚体多肽在C末端包含延伸部分。
实施方案63.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述多肽、连续多肽或多聚体多肽在C末端包含一个甘氨酸残基、两个甘氨酸残基、三个甘氨酸残基、四个甘氨酸残基、五个甘氨酸残基、六个甘氨酸残基、七个甘氨酸残基、八个甘氨酸残基或大于八个甘氨酸残基。
实施方案64.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述连续多肽在其C末端包含SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:160、SEQ IDNO:161、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:164或SEQ ID NO:165的氨基酸序列。
实施方案65.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述治疗性多肽TPA1和/或TPA2选自NGF多肽、NGF多肽的受体(例如，NGF多肽的受体的ECD)、TrkA多肽(例如，TrkA多肽的ECD)、LNGFR多肽(例如，LNGFR多肽的ECD)、TNFα多肽、TNFα多肽的受体、TNFR多肽(例如，TNFR多肽的ECD)、TNFR1多肽(例如，TNFR1多肽的ECD)、TNFR2多肽(例如，TNFR2多肽的ECD)、IL5多肽、IL5多肽的受体、IL5R多肽(例如，IL5R多肽的ECD)、IL5Rα多肽(例如，IL5Rα多肽的ECD)、IL6多肽、IL6多肽的受体、IL6R多肽(例如，IL6R多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17R多肽(例如，IL17R多肽的ECD)、IL17RA多肽(例如，IL17RA多肽的ECD)、IL17RB多肽(例如，IL17RB多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、IL23多肽、IL23多肽的受体、IL23R多肽(例如，IL23R多肽的ECD)、IL12Rβ1多肽(例如，IL12Rβ1多肽的ECD)、PDL1多肽、PDL1多肽的受体、PDL2多肽、PDL2多肽的受体、PD1多肽(例如，PD1多肽的ECD)、整联蛋白多肽(例如，ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7或ITGB8多肽)、整联蛋白多肽的受体、纤连蛋白多肽(例如，纤连蛋白多肽的ECD)、玻连蛋白多肽(例如，玻连蛋白多肽的ECD)、胶原蛋白多肽(例如，胶原蛋白多肽的ECD)、层粘连蛋白多肽(例如，层粘连蛋白多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD86多肽、CD86多肽的受体、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、B7-H3多肽、B7-H3多肽的受体(例如，B7-H3多肽的受体的ECD)、LAG-3多肽(例如，LAG-3多肽的ECD)、IL31多肽、IL31多肽的受体、IL31RA多肽(例如，IL31RA多肽的ECD)、OSMR多肽(例如，OSMR多肽的ECD)、IL4多肽、IL4R多肽的受体、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13多肽、IL13多肽的受体、IL13RA1多肽(例如，IL13RA1多肽的ECD)、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13Rα2多肽(例如，IL13Rα2多肽的ECD)、IL22多肽、IL22多肽的受体(例如，IL22多肽的ECD)、IL22Rα1多肽(例如，IL22Rα1多肽的ECD)、IL10Rβ2多肽(例如，IL10Rβ2多肽的ECD)、IL33多肽、IL33多肽的受体、IL1RL1多肽(例如，IL1RL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、TGFα多肽、TGFα多肽的受体、EGFR多肽(例如，EGFR多肽的ECD)、MMP9多肽、FGF多肽(例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22或FGF23多肽)、FGF多肽的受体、FGFR多肽(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽)、FGFR多肽的ECD(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、神经调节蛋白多肽(例如，神经调节蛋白同种型I、II、III、IV、V或VI多肽)、神经调节蛋白多肽的受体、HER多肽(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽)、HER多肽的ECD(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽的ECD)、EpCAM多肽(例如，EpCAM多肽的ECD)、CD20多肽(例如，CD20多肽的ECD)、CD20多肽的配体、CD19多肽(例如，CD19多肽的ECD)、CD19多肽的配体、CGRP多肽(例如，α-CGRP多肽或β-CGRP多肽)、CGRP多肽的受体、α-CGRP多肽的受体、β-CGRP多肽的受体、CALCRL多肽(例如，CALCRL多肽的ECD)、RAMP多肽(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽)、RAMP多肽的ECD(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽的ECD)、IGF多肽(例如，IGF-1或IGF-2多肽)、IGF多肽的受体(例如，IGF-1或IGF-2多肽的受体)、IGFR多肽(例如，IGFR1或IGFR2多肽)、IGFR多肽的ECD(例如，IGFR1或IGFR2多肽的ECD)、IGFBP多肽(例如，IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5或IGFBP6多肽)、VEGF多肽(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽)、VEGF多肽的受体(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽的受体)、VEGFR多肽(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽)、VEGFR多肽的ECD(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽的ECD)、FLT1受体多肽(例如，FLT1受体多肽的ECD)、IL36多肽(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽)、IL36多肽的受体(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽的受体)、IL36R多肽(例如，IL36R多肽的ECD)、IL1R1多肽(例如，IL1R1多肽的ECD)、IL1R2多肽(例如，IL1R2多肽的ECD)、IL1RL1多肽(IL1RL1多肽的ECD)、IL18R1多肽(IL18R1多肽的ECD)、细菌毒素多肽、外毒素多肽、内毒素多肽、肉毒神经毒素多肽、破伤风毒素多肽、葡萄球菌毒素多肽、CD52多肽(例如，CD52多肽的ECD)、CD52多肽的配体、SIGLEC10多肽、PCSK9多肽、PCSK9多肽的受体、LDLR多肽(例如，LDLR多肽的ECD)、CEA多肽(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽)、CEA多肽的ECD(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽的ECD)、BAFF多肽、BAFF多肽的受体、TRAF多肽(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRAF7多肽)、TRAF多肽的受体(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5多肽的受体)、BCMA多肽、BCMA多肽的ECD、SOST多肽、SOST多肽的受体、LRP多肽(例如，LRP5或LRP6多肽)、LRP多肽的ECD(例如，LRP5或LRP6多肽的ECD)、DLL多肽(例如，DLL4多肽)、DLL多肽的受体、锯齿状多肽(例如，JAG1或JAG多肽)、锯齿状多肽的受体(例如，JAG1或JAG多肽的受体)、NOTCH多肽(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽)、NOTCH多肽的配体(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽的配体)、VWF多肽、VWF多肽的受体、因子VIII多肽、因子VIII多肽的受体、血小板GP1b受体多肽(例如，血小板GP1b受体多肽的ECD)、整联蛋白αIIbβ3多肽(例如，整联蛋白αIIbβ3多肽的ECD)、IL2多肽、IL2多肽的受体、IL2R多肽(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽)、IL2R多肽的ECD(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽的ECD)、TGFβ多肽、TGFβ多肽的受体、饰胶蛋白聚糖多肽、EIF3I多肽、LTBP1多肽、TGFβR1多肽(例如，TGFβR1多肽的ECD)、YWHAE多肽、IgE多肽、IgE多肽的受体、Fc受体多肽(例如，FcεRI或FcεRII多肽)、Fc受体多肽的ECD(例如，FcεRI或FcεRII多肽的ECD)、KLK多肽(例如，KLK1、KLK2、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14或KLK15多肽)、Rankl多肽、Rankl多肽的受体、RANK多肽(例如，RANK多肽的ECD)、TSLP多肽、TSLP多肽的受体、CRLF2多肽(例如，CRLF2多肽的ECD)、IL7Rα多肽(例如，IL7Rα多肽的ECD)、S1P多肽、CD3多肽(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽)、CD3多肽的ECD(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD28多肽(例如，CD28多肽的ECD)、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、GnRH多肽、GNRH多肽的受体、GnRHR多肽(例如，GnRHR多肽的ECD)、ICAM多肽(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽)、ICAM多肽的受体(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽的受体)、JAM-A多肽、JAM-A多肽的受体、LFA-1多肽(例如，LFA-1多肽的ECD)、Nav1.7多肽、C5多肽(例如，C5a或C5b多肽)、C5多肽的受体(例如，C5a或C5b多肽的受体)、C5aR多肽(例如，C5aR多肽的ECD)、C5L2多肽(例如，C5L2多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17Ra多肽(例如，IL17Ra多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、EPO多肽、生长抑素多肽、GLP1多肽和胰高血糖素多肽。
实施方案66.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述治疗性多肽TPA1和/或TPA2是犬类多肽、猫类多肽或马类多肽。
实施方案67.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述抗体TPA1和/或TPA2是结合选自以下的靶多肽的抗体：NGF多肽、NGF多肽的受体(例如，NGF多肽的受体的ECD)、TrkA多肽(例如，TrkA多肽的ECD)、LNGFR多肽(例如，LNGFR多肽的ECD)、TNFα多肽、TNFα多肽的受体、TNFR多肽(例如，TNFR多肽的ECD)、TNFR1多肽(例如，TNFR1多肽的ECD)、TNFR2多肽(例如，TNFR2多肽的ECD)、IL5多肽、IL5多肽的受体、IL5R多肽(例如，IL5R多肽的ECD)、IL5Rα多肽(例如，IL5Rα多肽的ECD)、IL6多肽、IL6多肽的受体、IL6R多肽(例如，IL6R多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17R多肽(例如，IL17R多肽的ECD)、IL17RA多肽(例如IL17RA多肽的ECD)、IL17RB多肽(例如，IL17RB多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、IL23多肽、IL23多肽的受体、IL23R多肽(例如，IL23R多肽的ECD)、IL12Rβ1多肽(例如，IL12Rβ1多肽的ECD)、PDL1多肽、PDL1多肽的受体、PDL2多肽、PDL2多肽的受体、PD1多肽(例如，PD1多肽的ECD)、整联蛋白多肽(例如，ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7或ITGB8多肽)、整联蛋白多肽的受体、纤连蛋白多肽(例如，纤连蛋白多肽的ECD)、玻连蛋白多肽(例如，玻连蛋白多肽的ECD)、胶原蛋白多肽(例如，胶原蛋白多肽的ECD)、层粘连蛋白多肽(例如，层粘连蛋白多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD86多肽、CD86多肽的受体、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、B7-H3多肽、B7-H3多肽的受体(例如，B7-H3多肽的受体的ECD)、LAG-3多肽(例如，LAG-3多肽的ECD)、IL31多肽、IL31多肽的受体、IL31RA多肽(例如，IL31RA多肽的ECD)、OSMR多肽(例如，DOSMR多肽的EC)、IL4多肽、IL4R多肽的受体、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13多肽、IL13多肽的受体、IL13RA1多肽(例如，IL13RA1多肽的ECD)、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13Rα2多肽(例如，IL13Rα2多肽的ECD)、IL22多肽、IL22多肽的受体(例如，IL22多肽的ECD)、IL22Rα1多肽(例如，IL22Rα1多肽的ECD)、IL10Rβ2多肽(例如，IL10Rβ2多肽的ECD)、IL33多肽、IL33多肽的受体、IL1RL1多肽(例如，IL1RL1多肽的ED)、EGF多肽、EGF多肽的受体、TGFα多肽、TGFα多肽的受体、EGFR多肽(例如，EGFR多肽的ECD)、MMP9多肽、FGF多肽(例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22或FGF23多肽)、FGF多肽的受体、FGFR多肽(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽)、FGFR多肽的ECD(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、神经调节蛋白多肽(例如，神经调节蛋白同种型I、II、III、IV、V或VI多肽)、神经调节蛋白多肽的受体、HER多肽(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽)、HER多肽的ECD(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽的ECD)、EpCAM多肽(例如，EpCAM多肽的ECD)、CD20多肽(例如，CD20多肽的ECD)、CD20多肽的配体、CD19多肽(例如，CD19多肽的ECD)、CD19多肽的配体、CGRP多肽(例如，α-CGRP多肽或β-CGRP多肽)、CGRP多肽的受体、α-CGRP多肽的受体、β-CGRP多肽的受体、CALCRL多肽(例如，CALCRL多肽的ECD)、RAMP多肽(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽)、RAMP多肽的ECD(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽的ECD)、IGF多肽(例如，IGF-1或IGF-2多肽)、IGF多肽的受体(例如，IGF-1或IGF-2多肽的受体)、IGFR多肽(例如，IGFR1或IGFR2多肽)、IGFR多肽的ECD(例如，IGFR1或IGFR2多肽的ECD)、IGFBP多肽(例如，IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5或IGFBP6多肽)、VEGF多肽(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽)、VEGF多肽的受体(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽的受体)、VEGFR多肽(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽)、VEGFR多肽的ECD(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽的ECD)、FLT1受体多肽(例如，FLT1受体多肽的ECD)、IL36多肽(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽)、IL36多肽的受体(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽的受体)、IL36R多肽(例如，IL36R多肽的ECD)、IL1R1多肽(例如，IL1R1多肽的ECD)、IL1R2多肽(例如，IL1R2多肽的ECD)、IL1RL1多肽(IL1RL1多肽的ECD)、IL18R1多肽(IL18R1多肽的ECD)、细菌毒素多肽、外毒素多肽、内毒素多肽、肉毒神经毒素多肽、破伤风毒素多肽、葡萄球菌毒素多肽、CD52多肽(例如，CD52多肽的ECD)、CD52多肽的配体、SIGLEC10多肽、PCSK9多肽、PCSK9多肽的受体、LDLR多肽(例如，LDLR多肽的ECD)、CEA多肽(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽)、CEA多肽的ECD(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽的ECD)、BAFF多肽、BAFF多肽的受体、TRAF多肽(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRAF7多肽)、TRAF多肽的受体(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5多肽的受体)、BCMA多肽、BCMA多肽的ECD、SOST多肽、SOST多肽的受体、LRP多肽(例如，LRP5或LRP6多肽)、LRP多肽的ECD(例如，LRP5或LRP6多肽的ECD)、DLL多肽(例如，DLL4多肽)、DLL多肽的受体、锯齿状多肽(例如，JAG1或JAG多肽)、锯齿状多肽的受体(例如，JAG1或JAG多肽的受体)、NOTCH多肽(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽)、NOTCH多肽的配体(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽的配体)、VWF多肽、VWF多肽的受体、因子VIII多肽、因子VIII多肽的受体、血小板GP1b受体多肽(例如，血小板GP1b受体多肽的ECD)、整联蛋白αIIbβ3多肽(例如，整联蛋白αIIbβ3多肽的ECD)、IL2多肽、IL2多肽的受体、IL2R多肽(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽)、IL2R多肽的ECD(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽的ECD)、TGFβ多肽、TGFβ多肽的受体、饰胶蛋白聚糖多肽、EIF3I多肽、LTBP1多肽、TGFβR1多肽(例如，TGFβR1多肽的ECD)、YWHAE多肽、IgE多肽、IgE多肽的受体、Fc受体多肽(例如，FcεRI或FcεRII多肽)、Fc受体多肽的ECD(例如，FcεRI或FcεRII多肽的ECD)、KLK多肽(例如，KLK1、KLK2、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14或KLK15多肽)、Rankl多肽、Rankl多肽的受体、RANK多肽(例如，RANK多肽的ECD)、TSLP多肽、TSLP多肽的受体、CRLF2多肽(例如，CRLF2多肽的ECD)、IL7Rα多肽(例如，IL7Rα多肽的ECD)、S1P多肽、CD3多肽(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽)、CD3多肽的ECD(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD28多肽(例如，CD28多肽的ECD)、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、GnRH多肽、GNRH多肽的受体、GnRHR多肽(例如，GnRHR多肽的ECD)、ICAM多肽(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽)、ICAM多肽的受体(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽的受体)、JAM-A多肽、JAM-A多肽的受体、LFA-1多肽(例如，LFA-1多肽的ECD)、Nav1.7多肽、C5多肽(例如，C5a或C5b多肽)、C5多肽的受体(例如，C5a或C5b多肽的受体)、C5aR多肽(例如，C5aR多肽的ECD)、C5L2多肽(例如，C5L2多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17Ra多肽(例如，IL17Ra多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、EPO多肽、生长抑素多肽、GLP1多肽和胰高血糖素多肽。
实施方案68.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述抗体结合犬类靶多肽、猫类靶多肽或马类靶多肽。
实施方案69.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含与以下的氨基酸序列具有至少90％同一性、至少95％同一性、至少97％同一性或至少99％同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180和/或250。
实施方案70.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、57、58、59、60、61、62、63、64、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、148、149、150、151、154、155、157、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、271、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249和/或250。
实施方案71.一种多肽，其包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、57、58、59、60、61、62、63、64、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、148、149、150、151、154、155、157、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、271、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249和/或250。
实施方案72.根据前述实施方案中任一项所述的多肽、多聚体蛋白或连续多肽，其中所述至少一个氨基酸修饰或取代包括用氨基酸衍生物进行的氨基酸取代。
实施方案73.一种分离的核酸，其编码根据前述实施方案中任一项所述的多肽、多聚体蛋白或连续多肽。
实施方案74.一种宿主细胞，其包含根据实施方案74所述的核酸。
实施方案75.一种产生多肽的方法，其包括培养根据实施方案74所述的宿主细胞并分离所述多肽。
实施方案76.一种药物组合物，其包含根据实施方案1至72中任一项所述的多肽、多聚体蛋白或连续多肽，和药学上可接受的载体。
实施方案77.一种将细胞暴露于根据实施方案1至72或76中任一项所述的多肽、多聚体蛋白、连续多肽或药物组合物的方法。
实施方案78.根据实施方案77所述的方法，其中将所述细胞离体暴露于所述多肽、异二聚体蛋白、连续多肽或所述药物组合物。
实施方案79.根据实施方案77所述的方法，其中将所述细胞体内暴露于所述多肽、异二聚体蛋白、连续多肽或所述药物组合物。
实施方案80.根据实施方案77至79中任一项所述的方法，其中所述细胞是人类细胞、犬类细胞、猫类细胞或马类细胞。
实施方案81.一种将多肽递送至受试者的方法，其包括肠胃外施用根据实施方案1至72或76中任一项所述的多肽、多聚体蛋白、连续多肽或药物组合物。
实施方案82.一种将多肽递送至受试者的方法，其包括通过以下途径施用根据实施方案1至72或76中任一项所述的多肽、多聚体蛋白、连续多肽或药物组合物：肌内途径、腹膜内途径、脑脊髓内途径、皮下途径、动脉内途径、滑膜内途径、鞘内途径或吸入途径。
实施方案83.一种治疗患有糖尿病或肥胖症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至72或76中任一项所述的多肽、多聚体蛋白、连续多肽或药物组合物。
实施方案84.根据实施方案81至83中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类受试者。
实施方案85.根据实施方案81至83中任一项所述的方法，其中所述受试者是伴生动物物种。
实施方案86.根据实施方案85所述的方法，其中所述伴生动物物种是犬类、马类或猫类。
附图说明
图1示出了犬类IgG-A、B、C和D Fc序列的比对。框指示可能与蛋白A接触的区域。
图2A示出了在不存在和存在还原剂(DTT)的情况下，具有野生型猫类IgG2铰链和一个二硫键的GLP1-G8/GLP-2G_III_WTfeIgG2(SEQ ID NO:23；该图中的“GLP1 A变体”)和GLP1-G8_I_WTfeIgG2(SEQ ID NO:24；该图中的“GLP1 B变体”)的SDS-PAGE分析。
图2B示出了在不存在和存在还原剂(DTT)的情况下具有变体猫类IgG2铰链和两个二硫键的GLP1-G8/GLP-2G_III_VARfeIgG2(SEQ ID NO:25；该图中的“GLP1 MA变体”)和GLP1-G8_I_VARfeIgG2(SEQ ID NO:26；该图中的“GLP1 MB变体”)的SDS-PAGE分析。
序列说明
表1提供了本文引用的示例性序列的列表。
具体实施方式
描述了来自伴生动物(如犬类、马类和猫类)的变体IgG Fc多肽。在一些实施方案中，所述变体IgG Fc多肽具有增加的与蛋白A的结合、降低的与C1q的结合、降低的与CD16的结合、增加的稳定性、增加的重组产生、增加的铰链二硫化物形成和/或形成异二聚体多肽。在一些实施方案中，抗体、抗体片段或融合蛋白包含变体IgG Fc多肽。还提供了产生或纯化变体IgG Fc多肽的方法和将变体IgG Fc多肽施用至伴生动物的方法。
为方便读者，提供了以下本文所使用的术语的定义。
如本文所用，诸如KD的数字术语是基于科学测量计算的，因此受到适当的测量误差的影响。在一些情况下，数字术语可以包括化整到最接近的有效数字的数值。
如本文所用，“一种/个(a或an)”意指“至少一种/个”或“一种/个或多种/个”，除非另外说明。如本文所用，术语“或”意指“和/或”，除非另外说明。在多个从属权利要求的上下文中，当引用其他权利要求时，“或”的使用仅指替代方案中的那些权利要求。
示例性变体IgG Fc多肽
提供了新型的变体IgG Fc多肽，例如，用于增加对蛋白A的结合、降低对C1q的结合、降低对CD16的结合、增加稳定性、增加重组产生、增加铰链二硫化物形成和/或形成异二聚体蛋白测定的变体IgG Fc多肽。
“氨基酸序列”意指肽或蛋白质中的氨基酸残基序列。术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用以指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。氨基酸残基的此类聚合物可以含有天然或非天然氨基酸残基，并且包括但不限于氨基酸残基的肽、寡肽、二聚体、三聚体和多聚体。所述定义涵盖了全长蛋白质及其片段两者。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。此外，出于本公开文本的目的，“多肽”是指包括对天然序列的修饰如缺失、添加和取代(在本质上通常是保守的)的蛋白质，只要所述蛋白质保持期望的活性即可。这些修饰可能是故意的(如通过定点诱变)，或可能是偶然的(如通过产生蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误)。
术语“IgX Fc”或“IgX Fc多肽”是指源自特定抗体同种型(例如，IgG、IgA、IgD、IgE、IgM等)的Fc多肽，其中“X”表示抗体同种型。因此，“IgG Fc”表示Fc多肽源自γ链，“IgAFc”表示Fc多肽源自α链，“IgD Fc”表示Fc多肽源自δ链，“IgE Fc”表示Fc多肽源自ε链，“IgMFc”表示Fc多肽源自μ链等。在一些实施方案中，IgG Fc多肽包含铰链、CH2和CH3，但不包含CH1或CL。在一些实施方案中，IgG Fc多肽包含CH2和CH3，但不包含CH1、铰链或CL。在一些实施方案中，IgG Fc多肽包含CH1、铰链、CH2和CH3，具有或不具有CL1。在一些实施方案中，Fc多肽(如IgG Fc多肽)缺乏一个或多个C末端氨基酸，如1至20、1至15、1至10、1至5或1至2个氨基酸，同时保留生物活性。在一些实施方案中，生物活性是结合FcRn的能力、结合C1q的能力、结合CD16的能力和/或结合蛋白A的能力。Fc多肽的“效应子功能”是全部或部分由任何抗体响应于刺激而执行的作用或活性，并且可以包括补体结合(complement fixation)和/或ADCC(抗体依赖性细胞毒性)诱导。“IgX-N Fc”或“IgGXN Fc”表示Fc多肽源自抗体同种型的特定子类(如犬类IgG子类IgG-A、IgG-B、IgG-C或IgG-D；猫类IgG子类IgG1a、IgG1b或IgG2；或马类IgG子类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6或IgG7等)，其中“N”表示子类。
“铰链”是指Fc多肽或变体Fc多肽的任何部分，所述任何部分富含脯氨酸并且包含位于全长重链恒定区的CH1与CH2之间的至少一个半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，铰链能够在同一铰链区内(同一Fc多肽内)与单独Fc多肽的铰链区或与单独Fc多肽形成二硫键。在一些实施方案中，铰链包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个脯氨酸残基。
术语“伴生动物物种”是指适合作为人类伴侣的动物。在一些实施方案中，伴生动物物种是犬类(或狗)、猫类(或猫)或马类(或马)。在一些实施方案中，伴生动物物种是诸如犬类、猫类、狗、猫、兔、雪貂、豚鼠、啮齿动物等小型哺乳动物。在一些实施方案中，伴生动物物种是诸如马、牛、猪等家畜。
在一些实施方案中，IgX Fc多肽或IgX-N Fc多肽源自诸如狗、猫或马等伴生动物。在一些实施方案中，IgG Fc多肽分离自犬类γ重链，如IgG-A、IgG-B、IgG-C或IgG-D。在一些情况下，IgG Fc多肽分离自猫类γ重链，如IgG1a、IgG1b或IgG2。在其他情况下，IgG Fc多肽分离自马类γ重链，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6或IgG7。
除非另有说明，否则术语“IgX Fc”和“IgX Fc多肽”包括野生型IgX Fc多肽和变体IgX Fc多肽。
“野生型”是指天然存在的多肽或其片段的未突变形式。可以重组产生野生型多肽。
在一些实施方案中，野生型IgG Fc多肽包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ IDNO:56、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153。
“变体”是如下多肽，其与参考多肽的不同之处在于单个或多个非天然氨基酸取代、缺失和/或添加。在一些实施方案中，变体保留参考多肽的至少一种生物活性。在一些实施方案中，变体(例如，变体犬类IgG-A Fc、变体犬类IgG-C Fc、变体犬类IgG-D Fc、变体马类IgG2 Fc、变体马类IgG5 Fc、或变体马类IgG6 Fc)具有参考多肽基本上缺乏的活性。例如，在一些实施方案中，变体犬类IgG-A Fc、变体犬类IgG-C Fc、变体犬类IgG-D Fc、变体马类IgG2 Fc、变体马类IgG5 Fc或变体马类IgG6 Fc结合蛋白A。
如本文所用，关于核酸分子或多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”定义为在比对序列和引入空位(如果需要)以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分之后，参考序列中与特定核酸分子或多肽序列中的核苷酸或氨基酸残基相同的核苷酸或氨基酸残基的百分比。用于确定序列同一性百分比的比对可以以本领域熟知的多种方式来实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALINETM(DNASTAR)软件。本领域技术人类员可以确定用于测量比对的适当参数，包括为了在所比较的序列的全长上实现最大比对所需要的任何算法。
在一些实施方案中，在比对序列和引入空位(如果需要)以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分之后，变体与参考核酸分子或多肽具有至少约50％序列同一性。此类变体包括，例如，其中在多肽的N末端或C末端添加、缺失一个或多个氨基酸残基的多肽。在一些实施方案中，变体与参考核酸或多肽的序列具有至少约50％序列同一性、至少约60％序列同一性、至少约65％序列同一性、至少约70％序列同一性、至少约75％序列同一性、至少约80％序列同一性、至少约85％序列同一性、至少约90％序列同一性、至少约95％序列同一性、至少约97％序列同一性、至少约98％序列同一性或至少约99％序列同一性。
如本文所用，“对应于位置n的位置”(其中n是任何数)是指在比对主题多肽和参考多肽的氨基酸序列并引入空位后，与参考多肽的位置n对齐的主题多肽的氨基酸位置。用于确定主题多肽的位置是否对应于参考多肽的位置n的目的的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现，例如使用公众可获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、CLUSTAL OMEGA、ALIGN或MEGALIGNTM(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对的适当参数，包括为了在被比较的两个序列的全长上实现最大比对所需要的任何参数。在一些实施方案中，主题多肽和参考多肽具有不同的长度。
“点突变”是涉及单个氨基酸残基的突变。突变可能是氨基酸丢失、另一个氨基酸残基对一个氨基酸残基的取代或另外的氨基酸残基的插入。
“氨基酸取代”是指用另一种氨基酸替代多肽中的一种氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸取代是保守取代。表2中示出了非限制性的示例性保守氨基酸取代。可以将氨基酸取代引入目的分子中，并筛选产物的所需活性，例如，保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC或增强的药代动力学。
表2.
可根据常见的侧链特性将氨基酸分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代需要将这些类别之一的成员交换为另一类别。
如本文所用，“变体IgG Fc”是这样的IgG Fc多肽，其与参考IgG Fc多肽的不同之处在于单个或多个氨基酸取代、缺失和/或添加，并且基本上保留了参考IgG Fc多肽的至少一种生物活性。
如本文所用，“氨基酸衍生物”是指任何氨基酸、修饰的氨基酸和/或氨基酸类似物，而不是在人类中发现的20种常见的天然氨基酸之一。示例性氨基酸衍生物包括在人类中未发现的天然氨基酸(例如，可能在一些微生物中发现的硒代半胱氨酸和吡咯赖氨酸)和非天然氨基酸。示例性氨基酸衍生物包括但不限于通过化学产品制造商可商购的氨基酸衍生物(例如，于2017年5月6日访问的sigmaaldrich.com/chemistry/chemistry-products.html？TablePage＝16274965，将其通过引用并入本文)。可以使用利用宿主细胞、来源于真细菌合成酶的正交氨酰基-tRNA合成酶、正交tRNA和氨基酸衍生物的翻译系统在特定位置处将一种或多种氨基酸衍生物掺入多肽中。有关进一步说明，参见例如，美国专利号9,624,485。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含用氨基酸衍生物进行的氨基酸取代。在一些实施方案中，氨基酸衍生物是丙氨酸衍生物、半胱氨酸衍生物、天冬氨酸衍生物、谷氨酸衍生物、苯丙氨酸衍生物、甘氨酸衍生物、组氨酸衍生物、异亮氨酸衍生物、赖氨酸衍生物、亮氨酸衍生物、甲硫氨酸衍生物、天冬酰胺衍生物、脯氨酸衍生物、谷氨酰胺衍生物，精氨酸衍生物、丝氨酸衍生物、苏氨酸衍生物、缬氨酸衍生物、色氨酸衍生物或酪氨酸衍生物。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含伴生动物物种的变体IgG Fc多肽。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含变体犬类IgG Fc多肽、变体马类IgG Fc多肽或猫类IgGFc多肽。
具有修饰的蛋白A结合的示例性变体IgG Fc多肽
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有修饰的蛋白A结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽可以使用蛋白A柱色谱法纯化。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的位置21、位置23、位置25、位置80、位置205和/或位置207的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:4的位置21、位置23和/或位置24的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:6的位置21、位置23、位置25、位置80和/或位置207的位置处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:50的位置15和/或位置203的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ IDNO:54的位置199和/或位置200的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:55的位置199、位置200、位置201和/或202的位置处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:2的位置21、位置23、位置25、位置80、位置205和/或位置207处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:4的位置21、位置23和/或位置24处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:6的位置21、位置23、位置25、位置80和/或位置207处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:50的位置15和/或位置203处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:54的位置199和/或位置200处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:55的位置199、位置200、位置201和/或位置202处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的丙氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的组氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:4的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置23的位置处的亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置24的位置处的异亮氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ IDNO:6的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置80的位置处的甘氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的组氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:50的位置15的位置处的苏氨酸或缬氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:50的位置203的位置处的酪氨酸或缬氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:54的位置199的位置处的亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:54的位置200的位置处的组氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:55的位置199的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ IDNO:55的位置200的位置处的组氨酸、在对应于SEQ ID NO:55的位置201的位置处的天冬酰胺和/或在对应于SEQ ID NO:55的位置202的位置处的组氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:1的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:1的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:1的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:1的位置80处的甘氨酸、在SEQ ID NO:1的位置205处的丙氨酸和/或在SEQ ID NO:1的位置207处的组氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:4的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:4的位置23处的亮氨酸和/或在SEQ ID NO:4的位置24处的异亮氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:6的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:6的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:6的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:4的位置80处的甘氨酸和/或在SEQ ID NO:6的位置207处的组氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:50的位置15处的苏氨酸或缬氨酸和/或在SEQ ID NO:50的位置203处的酪氨酸或缬氨酸。在一些实施方案中，变体IgGFc多肽包含在SEQ ID NO:54的位置199处的亮氨酸和/或在SEQ ID NO:54的位置200处的组氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:55的位置199处的异亮氨酸、在SEQ ID NO:55的位置200处的组氨酸、在SEQ ID NO:55的位置201处的天冬酰胺和/或在SEQ ID NO:55的位置202处的组氨酸。
具有修饰的CD16结合的示例性变体IgG Fc多肽
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有修饰的CD16结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc可以具有降低的ADCC免疫应答。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的位置5、位置38、位置39、位置97和/或位置98的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:3的位置5、位置38、位置39、位置97和/或位置98的位置处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:2的位置5、位置38、位置39、位置97和/或位置98处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQID NO:4的位置5、位置38、位置39、位置97和/或位置98处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于其位置38的位置处的甘氨酸、在对应于其位置39的位置处的精氨酸、在对应于其位置97的位置处的异亮氨酸和/或在对应于其位置98的位置处的甘氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:4的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于其位置38的位置处的甘氨酸、在对应于其位置39的位置处的精氨酸、在对应于其位置97的位置处的异亮氨酸和/或在对应于其位置98的位置处的甘氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:2的位置5处的脯氨酸、在其位置38处的甘氨酸、在其位置39处的精氨酸、在其位置97处的异亮氨酸和/或在其位置98处的甘氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:4的位置5处的脯氨酸、在其位置38处的甘氨酸、在其位置39处的精氨酸、在其位置97处的异亮氨酸和/或在其位置98处的甘氨酸。
具有修饰的C1q结合的示例性变体IgG Fc多肽
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有修饰的C1q结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽可以具有降低的补体结合(complement fixation)。在一些实施方案中，变体IgG Fc可以具有降低的补体介导的免疫应答。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的位置93的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:4的位置93的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:49的位置87的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQID NO:52的位置87的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:53的位置87的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:56的位置87的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgGFc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置198的位置处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:2的位置93处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:4的位置93处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:49的位置87处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:52的位置87处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:53的位置87处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:56的位置87处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置198处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的位置93的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:4的位置93的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:49的位置87的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:52的位置87的位置处的丝氨酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ IDNO:53的位置87的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQID NO:56的位置87的位置处的丝氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置198的位置处的丙氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:2的位置93处的精氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:4的位置93处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:49的位置87处的丝氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:52的位置87处的丝氨酸。在一些实施方案中，变体IgGFc多肽包含在SEQ ID NO:53的位置87处的丝氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:56的位置87处的丝氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置198处的丙氨酸。
具有修饰的链间二硫键的示例性变体IgG Fc多肽
在一些实施方案中，变体猫类IgG Fc多肽相对于野生型猫类IgG Fc多肽具有至少一个另外的链间二硫键。在一些实施方案中，变体猫类IgG Fc多肽在铰链区中具有至少一个另外的链间二硫键。在一些实施方案中，具有至少一个另外的链间二硫键的变体猫类IgG2 Fc多肽相对于野生型猫类IgG Fc多肽具有增加的链间稳定性。在一些实施方案中，变体IgG多肽相对于野生型IgG Fc多肽具有对铰链区的至少一个氨基酸修饰。在一些实施方案中，野生型IgG Fc多肽是野生型猫类或马类IgG Fc多肽。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含来自不同同种型的IgG Fc多肽的铰链区或铰链区的一部分。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含来自野生型猫类IgG-1aFc多肽、来自野生型猫类IgG-1b Fc多肽或来自野生型马类IgG1 Fc多肽的铰链区。在一些实施方案中，变体IgG2 Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成。在一些实施方案中，增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成可以在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析来确定。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:69的位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15或位置16的位置处的半胱氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:69的位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15或位置16处的半胱氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置3的位置处和/或在对应于其位置20的位置处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:51的位置3处和/或在对应于其位置20的位置处的氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16的位置处的脯氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置3的位置处的丝氨酸和/或在对应于其位置20的位置处的脯氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16处的脯氨酸。在一些实施方案中，变体IgGFc多肽包含在SEQ ID NO:51的位置3处的丝氨酸和/或在其位置20处的脯氨酸。
用于多聚体多肽的示例性变体IgG Fc多肽
在某些实施方案中，本文所提供的多聚体多肽是双特异性抗体。双特异性抗体对两种不同的表位或靶分子具有结合特异性。在一些实施方案中，双特异性抗体与相同靶分子的两个不同表位结合。双特异性抗体可以是全长抗体或抗体片段。
在一些实施方案中，多聚体多肽包含含有“杵”突变的第一变体IgG Fc多肽和含有“臼”突变的第二变体IgG Fc多肽。非限制性示例性杵和臼突变例如描述于Merchant,A.M.等人An efficient route to human bispecific IgG.Nat Biotechnol,16(7):677-81(1998)中。
在一些实施方案中，变体犬类或变体猫类IgG Fc多肽包含杵突变。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:6的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ IDNO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的酪氨酸或色氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:1的位置138处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:2的位置137处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:4的位置137处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:6的位置138处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置154处的酪氨酸或色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131处的酪氨酸或色氨酸。
在一些实施方案中，变体犬类或变体猫类IgG Fc多肽包含臼突变。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于其位置140的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置181的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:2的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于其位置139的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置180的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于其位置139的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置180的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:6的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于其位置140的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置181的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68或SEQ ID NO:69的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于其位置156的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置197的位置处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的丝氨酸、在对应于其位置133的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置174的位置处的苏氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:1的位置138处的丝氨酸、在其位置140处的丙氨酸和/或在其位置181处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:2的位置137处的丝氨酸、在其位置139处的丙氨酸和/或在其位置181处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:4的位置137处的丝氨酸、在其位置139处的丙氨酸和/或在其位置181处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgGFc多肽包含在SEQ ID NO:6的位置138处的丝氨酸、在其位置140处的丙氨酸和/或在其位置181处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置154处的丝氨酸、在其位置156处的丙氨酸和/或在其位置197处的苏氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ IDNO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ IDNO:55或SEQ ID NO:56的位置131处的丝氨酸、在其位置133处的丙氨酸和/或在其位置174处的苏氨酸。
在一些实施方案中，连续多肽包含第一治疗性多肽或第一抗体和含有杵突变的变体犬类、猫类或马类IgG Fc多肽。在一些实施方案中，连续多肽包含第二治疗性多肽或第二抗体和含有臼突变的变体犬类、猫类或马类IgG Fc多肽。
示例性治疗性多肽和抗体
“细胞外结构域”(“ECD”)是多肽的延伸超过跨膜结构域到细胞外空间中的一部分。如本文所用，术语“细胞外结构域”可包含完整的细胞外结构域或可包含缺失一个或多个与其配体结合的氨基酸的截短的细胞外结构域。所述细胞外结构域的组成可取决于用于确定哪些氨基酸在膜中的算法。对于给定的蛋白质，不同的算法可预测不同的细胞外结构域，并且不同的系统可表达不同的细胞外结构域。
除非另有指示，否则如本文所用的“治疗性多肽”是这样的多肽，所述多肽包含来自任何脊椎动物来源的鉴定多肽的全部或一部分，所述任何脊椎动物来源包括哺乳动物如灵长类动物(例如人和食蟹猴)、啮齿动物(例如小鼠和大鼠)以及伴生动物(例如狗、猫和马类)。
本文的术语“抗体”以最广泛的含义使用并且包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体(例如双特异性T细胞衔接器(engager))和三特异性抗体)和抗体片段(如Fab、F(ab')2、ScFv、微抗体、双链抗体、三链抗体和四链抗体)，只要它们表现出所需的抗原结合活性即可。犬类、猫类和马类物种具有许多哺乳动物共有的不同种类(类别)的抗体。
术语抗体包括但不限于能够结合抗原的片段，如Fv、单链Fv(scFv)、Fab、Fab'、二-scFv、sdAb(单结构域抗体)和F(ab')2(包括化学连接的F(ab')2)。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，每个“Fab”片段都有一个抗原结合位点；和残留的“Fc”片段，这一名称反映了容易结晶的能力。胃蛋白酶处理产生F(ab')2片段，所述F(ab')2片段具有两个抗原组合位点并且仍然能够交联抗原。术语抗体还包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体和各种物种(诸如小鼠、人、食蟹猴、犬类、猫类、马类等)的抗体。此外，对于本文提供的所有抗体构建体，还考虑了具有来自其他生物的序列的变体。因此，如果公开了鼠形式的抗体，本领域技术人员将会想到如何将基于鼠序列的抗体转化为猫、狗、马等序列。抗体片段还包括单链scFv、串联二-scFv、双链抗体、串联三-sdcFv、微抗体等的取向。抗体片段还包括纳米抗体(sdAb，具有单个单体结构域的抗体，如一对重链可变结构域，没有轻链)。在一些实施方案中，抗体片段可以称为特定物种的(例如，小鼠scFv或犬类scFv)。这表示至少部分非CDR区的序列，而不是构建体的来源。在一些实施方案中，所述抗体包含标记或与第二部分缀合。
在一些实施方案中，治疗性多肽是NGF(或神经生长因子)多肽、NGF多肽的受体(例如，NGF多肽的受体的ECD)、TrkA多肽(例如，TrkA多肽的ECD)、LNGFR多肽(例如，LNGFR多肽的ECD)、TNFα(或肿瘤坏死因子α)多肽、TNFα多肽的受体、TNFR(或肿瘤坏死因子受体)多肽(例如，TNFR多肽的ECD)、TNFR1多肽(例如，TNFR1多肽的ECD)、TNFR2多肽(例如，TNFR2多肽的ECD)、IL5(或白介素5)多肽、IL5多肽的受体、IL5R(或白介素5受体)多肽(例如，IL5R多肽的ECD)、IL5Rα多肽(例如，IL5Rα多肽的ECD)、IL6(或白介素6)多肽、IL6多肽的受体、IL6R(或白介素6受体)多肽(例如，IL6R多肽的ECD)、IL17(或白介素17)多肽、IL17多肽的受体、IL17R(或白介素17受体)多肽(例如，IL17R多肽的ECD)、IL17RA多肽(例如IL17RA多肽的ECD)、IL17RB多肽(例如，IL17RB多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、IL23(或白介素23)多肽、IL23多肽的受体、IL23R(或白介素23受体)多肽(例如，IL23R多肽的ECD)、IL12Rβ1多肽(例如，IL12Rβ1多肽的ECD)、PDL(或程序性细胞死亡配体)多肽、PDL1多肽、PDL1多肽的受体、PDL2多肽、PDL2多肽的受体、PD1多肽(例如，PD1多肽的ECD)、整联蛋白多肽(例如，ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7或ITGB8多肽)、整联蛋白多肽的受体、纤连蛋白多肽(例如，纤连蛋白多肽的ECD)、玻连蛋白多肽(例如，玻连蛋白多肽的ECD)、胶原蛋白多肽(例如，胶原蛋白多肽的ECD)、层粘连蛋白多肽(例如，层粘连蛋白多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD86多肽、CD86多肽的受体、CTLA-4(或细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、B7-H3多肽、B7-H3多肽的受体(例如，B7-H3多肽的受体的ECD)、LAG-3(或淋巴细胞激活基因3)多肽(例如，LAG-3多肽的ECD)、IL31(或白介素31)多肽、IL31多肽的受体、IL31RA(白介素31受体A)多肽(例如，IL31RA多肽的ECD)、OSMR(或抑瘤素M受体)多肽(例如，OSMR多肽的ECD)、IL4(或白介素4)多肽、IL4R多肽的受体、IL4R(或白介素4受体)多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13(或白介素13受体)多肽、IL13多肽的受体、IL13RA1(或白介素13受体A1)多肽(例如，IL13RA1多肽的ECD)、IL4R(或白介素4受体)多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13Rα2(或白介素13受体α2)多肽(例如，IL13Rα2多肽的ECD)、IL22(或白介素22)多肽、IL22多肽的受体(例如，IL22多肽的ECD)、IL22Rα1(或白介素22受体α1)多肽(例如，IL22Rα1多肽的ECD)、IL10Rβ2(或白介素10受体β2)多肽(例如，IL10Rβ2多肽的ECD)、IL33(或白介素33)多肽、IL33多肽的受体、IL1RL1多肽(例如，IL1RL1多肽的ED)、EGF(或表皮生长因子)多肽、EGF多肽的受体、TGFα(或转化生长因子α)多肽、TGFα多肽的受体、EGFR(或表皮生长因子受体)多肽(例如，EGFR多肽的ECD)、MMP9(或基质金属蛋白酶9)多肽、FGF(或成纤维细胞生长因子)多肽(例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22或FGF23多肽)、FGF多肽的受体、FGFR(或成纤维细胞生长因子受体)多肽(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽)、FGFR多肽的ECD(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽的ECD)、EGF(或表皮生长因子)多肽、EGF多肽的受体、神经调节蛋白多肽(例如，神经调节蛋白同种型I、II、III、IV、V或VI多肽)、神经调节蛋白多肽的受体、HER(人表皮生长因子受体)多肽(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽)、HER多肽的ECD(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽的ECD)、EpCAM(或表皮细胞黏附分子)多肽(例如，EpCAM多肽的ECD)、CD20多肽(例如，CD20多肽的ECD)、CD20多肽的配体、CD19多肽(例如，CD19多肽的ECD)、CD19多肽的配体、CGRP(或降钙素基因相关肽)多肽(例如，α-CGRP多肽或β-CGRP多肽)、CGRP多肽的受体、α-CGRP多肽的受体、β-CGRP多肽的受体、CALCRL(或降钙素受体样)多肽(例如，CALCRL多肽的ECD)、RAMP(或受体活性修饰蛋白)多肽(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽)、RAMP多肽的ECD(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽的ECD)、IGF(或胰岛素样生长因子)多肽(例如，IGF-1或IGF-2多肽)、IGF多肽的受体(例如，IGF-1或IGF-2多肽的受体)、IGFR(或胰岛素样生长因子受体)多肽(例如，IGFR1或IGFR2多肽)、IGFR多肽的ECD(例如，IGFR1或IGFR2多肽的ECD)、IGFBP(或胰岛素样生长因子结合蛋白)多肽(例如，IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5或IGFBP6多肽)、VEGF(或血管内皮生长因子)多肽(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽)、VEGF多肽的受体(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF(或胎盘生长因子)多肽的受体)、VEGFR(或血管内皮生长因子受体)多肽(例如，VEGFR1、VEGFR2,或VEGFR3多肽)、VEGFR多肽的ECD(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽的ECD)、FLT1(或FMS样酪氨酸激酶1)受体多肽(例如，FLT1受体多肽的ECD)、IL36(或白介素36)多肽(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽)、IL36多肽的受体(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽的受体)、IL36R(或白介素36受体)多肽(例如，IL36R多肽的ECD)、IL1R1多肽(例如，IL1R1多肽的ECD)、IL1R2多肽(例如，IL1R2多肽的ECD)、IL1RL1多肽(IL1RL1多肽的ECD)、IL18R1多肽(IL18R1多肽的ECD)、细菌毒素多肽、外毒素多肽、内毒素多肽、肉毒神经毒素多肽、破伤风毒素多肽、葡萄球菌毒素多肽、CD52多肽(例如，CD52多肽的ECD)、CD52多肽的配体、SIGLEC10(或唾液酸结合Ig样凝集素10)多肽、PCSK9(或蛋白质原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型9)多肽、PCSK9多肽的受体、LDLR(或低密度脂蛋白受体)多肽(例如，LDLR多肽的ECD)、CEA(或癌胚抗原)多肽(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽)、CEA多肽的ECD(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽的ECD)、BAFF(或B细胞激活因子)多肽、BAFF多肽的受体、TRAF(或TNF受体相关因子)多肽(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRAF7多肽)、TRAF多肽的受体(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5多肽的受体)、BCMA多肽、BCMA(或B细胞成熟抗原)多肽的ECD、SOST多肽、SOST(或硬骨素)多肽的受体、LRP(或低密度脂蛋白受体相关蛋白)多肽(例如，LRP5或LRP6多肽)、LRP多肽的ECD(例如，LRP5或LRP6多肽的ECD)、DLL(或δ样)多肽(例如，DLL4多肽)、DLL多肽的受体、锯齿状多肽(例如，JAG1或JAG多肽)、锯齿状多肽的受体(例如，JAG1或JAG多肽的受体)、NOTCH多肽(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽)、NOTCH多肽的配体(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽的配体)、VWF(或血管性血友病因子)多肽、VWF多肽的受体、因子VIII多肽、因子VIII多肽的受体、血小板GP1b受体多肽(例如，血小板GP1b受体多肽的ECD)、整联蛋白αIIbβ3多肽(例如，整联蛋白αIIbβ3多肽的ECD)、IL2(或白介素2)多肽、IL2多肽的受体、IL2R(或白介素2受体)多肽(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽)、IL2R多肽的ECD(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽的ECD)、TGFβ(或转化生长因子β)多肽、TGFβ多肽的受体、饰胶蛋白聚糖多肽、EIF3I(或真核翻译起始因子3亚基1)多肽、LTBP1(或潜伏转化生长因子β结合蛋白1)多肽、TGFβR1多肽(例如，TGFβR1多肽的ECD)、YWHAE多肽、IgE多肽、IgE多肽的受体、Fc受体多肽(例如，FcεRI或FcεRII多肽)、Fc受体多肽的ECD(例如，FcεRI或FcεRII多肽的ECD)、KLK(或激肽释放酶)多肽(例如，KLK1、KLK2、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14或KLK15多肽)、Rankl(或核因子κ-B受体激活因子配体)多肽、Rankl多肽的受体、RANK(或核因子κ-B受体激活因子)多肽(例如，RANK多肽的ECD)、TSLP(或胸腺基质淋巴细胞生成素)多肽、TSLP多肽的受体、CRLF2(或细胞因子受体样因子2)多肽(例如，CRLF2多肽的ECD)、IL7Rα多肽(例如，IL7Rα多肽的ECD)、S1P(或特异性蛋白1)多肽、CD3多肽(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽)、CD3多肽的ECD(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD28多肽(例如，CD28多肽的ECD)、CTLA-4(或细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、GnRH(或促性腺激素释放激素)多肽、GNRH多肽的受体、GnRHR(或促性腺激素释放激素受体)多肽(例如，GnRHR多肽的ECD)、ICAM(或细胞间粘附分子)多肽(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽)、ICAM多肽的受体(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽的受体)、JAM-A多肽、JAM-A多肽的受体、LFA-1多肽(例如，LFA-1多肽的ECD)、Nav1.7多肽、C5(或补体组分5)多肽(例如，C5a或C5b多肽)、C5多肽的受体(例如，C5a或C5b多肽的受体)、C5aR多肽(例如，C5aR多肽的ECD)、C5L2多肽(例如，C5L2多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17Ra多肽(例如，IL17Ra多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、EPO多肽、生长抑素多肽、GLP1多肽、胰高血糖素多肽等。
在一些实施方案中，抗体是识别以下多肽中的一种或多种的抗体：NGF多肽、NGF多肽的受体(例如，NGF多肽的受体的ECD)、TrkA多肽(例如，TrkA多肽的ECD)、LNGFR多肽(例如，LNGFR多肽的ECD)、TNFα多肽、TNFα多肽的受体、TNFR多肽(例如，TNFR多肽的ECD)、TNFR1多肽(例如，TNFR1多肽的ECD)、TNFR2多肽(例如，TNFR2多肽的ECD)、IL5多肽、IL5多肽的受体、IL5R多肽(例如，IL5R多肽的ECD)、IL5Rα多肽(例如，IL5Rα多肽的ECD)、IL6多肽、IL6多肽的受体、IL6R多肽(例如，IL6R多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17R多肽(例如，IL17R多肽的ECD)、IL17RA多肽(例如IL17RA多肽的ECD)、IL17RB多肽(例如，IL17RB多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、IL23多肽、IL23多肽的受体、IL23R多肽(例如，IL23R多肽的ECD)、IL12Rβ1多肽(例如，IL12Rβ1多肽的ECD)、PDL1多肽、PDL1多肽的受体、PDL2多肽、PDL2多肽的受体、PD1多肽(例如，PD1多肽的ECD)、整联蛋白多肽(例如，ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7或ITGB8多肽)、整联蛋白多肽的受体、纤连蛋白多肽(例如，纤连蛋白多肽的ECD)、玻连蛋白多肽(例如，玻连蛋白多肽的ECD)、胶原蛋白多肽(例如，胶原蛋白多肽的ECD)、层粘连蛋白多肽(例如，层粘连蛋白多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD86多肽、CD86多肽的受体、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、B7-H3多肽、B7-H3多肽的受体(例如，B7-H3多肽的受体的ECD)、LAG-3多肽(例如，LAG-3多肽的ECD)、IL31多肽、IL31多肽的受体、IL31RA多肽(例如，IL31RA多肽的ECD)、OSMR多肽(例如，OSMR多肽的ECD)、IL4多肽、IL4R多肽的受体、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13多肽、IL13多肽的受体、IL13RA1多肽(例如，IL13RA1多肽的ECD)、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13Rα2多肽(例如，IL13Rα2多肽的ECD)、IL22多肽、IL22多肽的受体(例如，IL22多肽的ECD)、IL22Rα1多肽(例如，IL22Rα1多肽的ECD)、IL10Rβ2多肽(例如，IL10Rβ2多肽的ECD)、IL33多肽、IL33多肽的受体、IL1RL1多肽(例如，IL1RL1多肽的ED)、EGF多肽、EGF多肽的受体、TGFα多肽、TGFα多肽的受体、EGFR多肽(例如，EGFR多肽的ECD)、MMP9多肽、FGF多肽(例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22或FGF23多肽)、FGF多肽的受体、FGFR多肽(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽)、FGFR多肽的ECD(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、神经调节蛋白多肽(例如，神经调节蛋白同种型I、II、III、IV、V或VI多肽)、神经调节蛋白多肽的受体、HER多肽(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽)、HER多肽的ECD(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽的ECD)、EpCAM多肽(例如，EpCAM多肽的ECD)、CD20多肽(例如，CD20多肽的ECD)、CD20多肽的配体、CD19多肽(例如，CD19多肽的ECD)、CD19多肽的配体、CGRP多肽(例如，α-CGRP多肽或β-CGRP多肽)、CGRP多肽的受体、α-CGRP多肽的受体、β-CGRP多肽的受体、CALCRL多肽(例如，CALCRL多肽的ECD)、RAMP多肽(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽)、RAMP多肽的ECD(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽的ECD)、IGF多肽(例如，IGF-1或IGF-2多肽)、IGF多肽的受体(例如，IGF-1或IGF-2多肽的受体)、IGFR多肽(例如，IGFR1或IGFR2多肽)、IGFR多肽的ECD(例如，IGFR1或IGFR2多肽的ECD)、IGFBP多肽(例如，IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5或IGFBP6多肽)、VEGF多肽(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽)、VEGF多肽的受体(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽的受体)、VEGFR多肽(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽)、VEGFR多肽的ECD(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽的ECD)、FLT1受体多肽(例如，FLT1受体多肽的ECD)、IL36多肽(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽)、IL36多肽的受体(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽的受体)、IL36R多肽(例如，IL36R多肽的ECD)、IL1R1多肽(例如，IL1R1多肽的ECD)、IL1R2多肽(例如，IL1R2多肽的ECD)、IL1RL1多肽(IL1RL1多肽的ECD)、IL18R1多肽(IL18R1多肽的ECD)、细菌毒素多肽、外毒素多肽、内毒素多肽、肉毒神经毒素多肽、破伤风毒素多肽、葡萄球菌毒素多肽、CD52多肽(例如，CD52多肽的ECD)、CD52多肽的配体、SIGLEC10多肽、PCSK9多肽、PCSK9多肽的受体、LDLR多肽(例如，LDLR多肽的ECD)、CEA多肽(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽)、CEA多肽的ECD(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽的ECD)、BAFF多肽、BAFF多肽的受体、TRAF多肽(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRAF7多肽)、TRAF多肽的受体(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5多肽的受体)、BCMA多肽、BCMA多肽的ECD、SOST多肽、SOST多肽的受体、LRP多肽(例如，LRP5或LRP6多肽)、LRP多肽的ECD(例如，LRP5或LRP6多肽的ECD)、DLL多肽(例如，DLL4多肽)、DLL多肽的受体、锯齿状多肽(例如，JAG1或JAG多肽)、锯齿状多肽的受体(例如，JAG1或JAG多肽的受体)、NOTCH多肽(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽)、NOTCH多肽的配体(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽的配体)、VWF多肽、VWF多肽的受体、因子VIII多肽、因子VIII多肽的受体、血小板GP1b受体多肽(例如，血小板GP1b受体多肽的ECD)、整联蛋白αIIbβ3多肽(例如，整联蛋白αIIbβ3多肽的ECD)、IL2多肽、IL2多肽的受体、IL2R多肽(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽)、IL2R多肽的ECD(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽的ECD)、TGFβ多肽、TGFβ多肽的受体、饰胶蛋白聚糖多肽、EIF3I多肽、LTBP1多肽、TGFβR1多肽(例如，TGFβR1多肽的ECD)、YWHAE多肽、IgE多肽、IgE多肽的受体、Fc受体多肽(例如，FcεRI或FcεRII多肽)、Fc受体多肽的ECD(例如，FcεRI或FcεRII多肽的ECD)、KLK多肽(例如，KLK1、KLK2、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14或KLK15多肽)、Rankl多肽、Rankl多肽的受体、RANK多肽(例如，RANK多肽的ECD)、TSLP多肽、TSLP多肽的受体、CRLF2多肽(例如，CRLF2多肽的ECD)、IL7Rα多肽(例如，IL7Rα多肽的ECD)、S1P多肽、CD3多肽(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽)、CD3多肽的ECD(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD28多肽(例如，CD28多肽的ECD)、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、GnRH多肽、GNRH多肽的受体、GnRHR多肽(例如，GnRHR多肽的ECD)、ICAM多肽(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽)、ICAM多肽的受体(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽的受体)、JAM-A多肽、JAM-A多肽的受体、LFA-1多肽(例如，LFA-1多肽的ECD)、Nav1.7多肽、C5多肽(例如，C5a或C5b多肽)、C5多肽的受体(例如，C5a或C5b多肽的受体)、C5aR多肽(例如，C5aR多肽的ECD)、C5L2多肽(例如，C5L2多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17Ra多肽(例如，IL17Ra多肽的ECD)、EPO多肽、生长抑素多肽、GLP1多肽、胰高血糖素多肽等。
示例性变体IgG Fc多肽和融合分子
多肽和其他分子可以包含变体IgG Fc多肽。在一些实施方案中，融合分子包含变体IgG Fc多肽，如本文所述的变体IgG Fc多肽。在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含变体IgG Fc多肽，如本文所述的变体IgG Fc多肽。
如本文所用，“融合分子”是指包含一个或多个“融合配偶体”的分子。在一些实施方案中，融合配偶体是共价连接(“融合”)的。如果两个融合配偶体均是多肽，则融合配偶体多肽可以是连续氨基酸序列(即，连续多肽)的一部分。第一融合配偶体多肽可以连接至第二融合配偶体的N末端或C末端。在一些实施方案中，融合配偶体被翻译为来自编码两个融合配偶体的编码序列的单一多肽。融合配偶体可以通过其他手段，如例如除了肽键之外的化学连接而共价连接。可以使用许多将多肽共价连接至其他分子(例如，融合配偶体)的已知方法。在其他实施方案中，融合配偶体通过“接头”融合，所述接头由至少一个氨基酸或化学部分构成。在一些实施方案中，融合配偶体是非共价连接的。在一些此类实施方案中，它们可以例如使用结合对来连接。示例性结合对包括但不限于生物素和抗生物素蛋白或链霉亲和素、抗体及其抗原等。
在一些实施方案中，融合配偶体包括IgG Fc多肽和至少一种治疗性多肽和/或抗体。在一些实施方案中，融合配偶体包括IgG Fc多肽、第一治疗性多肽或抗体和第二治疗性多肽或抗体。在一些实施方案中，治疗性多肽可以连接至IgG Fc多肽的N末端或C末端。在一些实施方案中，抗体可以连接至IgG Fc多肽的N末端或C末端。
本文中的术语“连续多肽”用于意指氨基酸的不间断序列。连续多肽通常从单一连续DNA序列翻译。它可以通过基因工程来制得，例如，通过从第一蛋白质的DNA序列中去除终止密码子，然后在框内附加第二蛋白质的DNA序列，使得DNA序列表达为单一蛋白质。通常，这是通过将cDNA与现有基因一起框内克隆至表达载体中来完成的。
“接头”是指连接第一多肽与第二多肽的一个或多个氨基酸残基。
在一些实施方案中，接头是柔性的非结构性接头。在一些实施方案中，接头是富含甘氨酸、富含丝氨酸、或富含甘氨酸和丝氨酸的接头。在一些实施方案中，接头包含100％、至少95％、至少90％、或至少85％的丝氨酸和/或甘氨酸氨基酸残基。
如本文所用，“延伸部分”是指在C末端或N末端连接至多肽的一个或多个氨基酸残基。
在一些实施方案中，延伸部分是柔性的。在一些实施方案中，延伸部分向多肽增加柔性，而不干扰多肽的生物活性。在一些实施方案中，延伸部分增加多肽的溶解度。在一些实施方案中，延伸部分包含一个或多个甘氨酸残基。在一些实施方案中，延伸部分包含一个甘氨酸残基(SEQ ID NO:88)、两个甘氨酸残基(SEQ ID NO:89)、三个甘氨酸残基(SEQ IDNO:90)、四个甘氨酸残基(SEQ ID NO:91)、五个甘氨酸残基(SEQ ID NO:92)、六个甘氨酸残基(SEQ ID NO:93)、七个甘氨酸残基(SEQ ID NO:94)、八个甘氨酸残基(SEQ ID NO:95)或更多个甘氨酸残基。
在一些实施方案中，连续多肽包含IgG Fc多肽和GLP1多肽，所述IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、100、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、167、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198或199中的任一个的氨基酸序列，所述GLP1多肽包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，连续多肽包含IgG Fc多肽和GLP1多肽，所述IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、100、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、167、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198或199中的任一个的氨基酸序列，所述GLP1多肽包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，连续多肽包含IgG Fc多肽和GLP1多肽，所述IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、100、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、167、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198或199中的任一个的氨基酸序列，所述GLP1多肽包含SEQ IDNO:87的氨基酸序列。在一些实施方案中，连续多肽包含IgG Fc多肽和GLP1多肽，所述IgGFc多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、100、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、167、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198或199中的任一个的氨基酸序列，所述GLP1多肽包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列。在一些实施方案中，连续多肽包含IgG Fc多肽和GLP1多肽，所述IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、100、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、167、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198或199中的任一个的氨基酸序列，所述GLP1多肽包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列。
在一些实施方案中，连续多肽包含IgG Fc多肽和胰高血糖素多肽，所述IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、100、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、167、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198或199中的任一个的氨基酸序列，所述胰高血糖素多肽包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在一些实施方案中，连续多肽包含：
式(I)：TPA1-L1-Fc；
式(II)：Fc-L1-TPA1；
式(III)：TPA1-L1-Fc-L2-TPA2；
式(IV)：TPA1-L1-TPA2-L2-Fc；或
式(V)：Fc-L1-TPA1-L2-TPA2。
其中TPA1是第一治疗性多肽和/或抗体，TPA2是第二治疗性多肽和/或抗体(例如，相同的治疗性多肽、不同的治疗性多肽、相同的抗体或不同的抗体)，L1和L2是任选的接头；并且Fc是伴生动物物种的变体IgG Fc多肽。任选地，连续多肽包含信号序列。式I-V的构建体可以包含在任何TPA1或TPA2之后或之前的TPA3、TPA4、TPA5等。TPA3、TPA4、TPA5等是第三、第四、第五等治疗性多肽和/或抗体(例如，相同的治疗性多肽、不同的治疗性多肽、相同的抗体或不同的抗体)。
在一些实施方案中，Fc多肽是人IgG Fc。在一些实施方案中，Fc多肽是人IgG1 Fc、人IgG2 Fc、人IgG3 Fc或人IgG4 Fc。在一些实施方案中，Fc多肽是变体人IgG Fc。
在一些实施方案中，Fc多肽是来自伴生动物的IgG Fc。在一些实施方案中，Fc多肽是犬类IgG-A Fc、犬类IgG-B Fc、犬类IgG-C Fc、犬类IgG-D Fc。在一些实施方案中，Fc是马类IgG1 Fc、马类IgG2 Fc、马类IgG3 Fc、马类IgG4 Fc、马类IgG5 Fc、马类IgG6 Fc或马类IgG7 Fc。在一些实施方案中，Fc是猫类IgG1a Fc、猫类IgG1b Fc或猫类IgG2 Fc。
在一些实施方案中，Fc多肽是变体IgG Fc。在一些实施方案中，FC多肽是变体犬类IgG-A Fc、变体犬类IgG-B Fc、变体犬类IgG-C Fc、变体犬类IgG-D Fc。在一些实施方案中，Fc是变体马类IgG1 Fc、变体马类IgG2 Fc、变体马类IgG3 Fc、变体马类IgG4 Fc、变体马类IgG5 Fc、变体马类IgG6 Fc或变体马类IgG7 Fc。在一些实施方案中，Fc是变体猫类IgG1aFc、变体猫类IgG1b Fc或变体猫类IgG2 Fc。
在一些实施方案中，L1和L2在存在时各自独立地是柔性接头。在一些实施方案中，L1和L2在存在时的氨基酸序列各自独立地包含100％、至少95％、至少90％、至少85％的丝氨酸和/或甘氨酸氨基酸残基。
在一些实施方案中，连续多肽在其C末端包含延伸部分。在一些实施方案中，连续多肽在其C末端包含一个甘氨酸残基、两个甘氨酸残基、三个甘氨酸残基、四个甘氨酸残基、五个甘氨酸残基、六个甘氨酸残基、七个甘氨酸残基、八个甘氨酸残基或大于八个甘氨酸残基。在一些实施方案中，连续多肽在其C末端包含SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、SEQ IDNO:160、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:164或SEQ ID NO:165的氨基酸序列。
在一些实施方案中，连续多肽包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、57、58、59、60、61、62、63、64、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、148、149、150、151、154、155、157、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、271、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249和/或250。
可以将编码目的多肽(如本文所述的变体IgG Fc多肽或其他多肽)的核苷酸序列插入至适合在选择的宿主细胞中表达的表达载体中。可以通过培养用包含核苷酸序列的表达载体转染的宿主细胞来表达本文所述的变体IgG Fc多肽或其他多肽。
“载体”是可用于将DNA序列从一种生物体转移至另一种生物体或用于表达目的基因的质粒。载体通常包括复制起点和调节目的基因表达的调节序列，并且可以携带或可以不携带选择性标记基因，如抗生素抗性基因。载体适用于要在其中表达它的宿主细胞。当目的基因存在于载体中时，载体可以称为“重组载体”。
“宿主细胞”是指可以是或已经是载体或分离的多核苷酸的受体的细胞。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。示例性的真核细胞包括哺乳动物细胞，如灵长类动物或非灵长类动物细胞；真菌细胞，如酵母；植物细胞；和昆虫细胞。非限制性示例性哺乳动物细胞包括但不限于NS0细胞、
细胞(Crucell)、293细胞和CHO细胞，及其诸如293-6E、DG44、CHO-S和CHO-K细胞等衍生物。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且由于天然的、偶然的或故意的突变，所述后代可能不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态方面或基因组DNA互补序列方面)。宿主细胞包括在体内用编码本文提供的一个或多个氨基酸序列的一个或多个多核苷酸转染的细胞。
如本文所用，术语“分离的”是指已经与通常在自然界中发现或产生的至少一些组分分离的分子。例如，当多肽与产生它的细胞的至少一些组分分离时，称其为“分离的”。当多肽在表达后由细胞分泌时，将含有所述多肽的上清液与产生它的细胞物理分离，认为是“分离”所述多肽。类似地，当多核苷酸不是通常在自然界中发现的较大的多核苷酸(诸如例如，在DNA多核苷酸的情况下的基因组DNA或线粒体DNA)的一部分时，或例如在RNA多核苷酸的情况下与产生它的细胞的至少一些组分分离，多核苷酸被称为“分离的”。因此，包含在宿主细胞内的载体中的DNA多核苷酸可被称为“分离的”。
“信号序列”是指氨基酸残基或编码其的多核苷酸的序列，所述序列促进目的多肽的分泌，并且通常在多肽输出到细胞表面膜的外部时被切割。
在一些实施方案中，使用诸如尺寸排阻色谱法、离子交换色谱法、蛋白A柱色谱法、疏水相互作用色谱法和CHT色谱法等色谱法分离变体IgG Fc多肽或包含变体Fc多肽的连续多肽。
标记可以附接至变体IgG Fc多肽或包含变体Fc多肽的连续多肽上。“标记”意指附接至分子以使其可检测的部分。在一些实施方案中，用可检测部分标记变体IgG Fc多肽或包含变体Fc多肽的连续多肽，所述可检测部分包括但不限于放射性同位素、荧光标记和本领域已知的各种酶-底物标记。在一些实施方案中，标记是可以产生可通过视觉或仪器手段检测的信号的可检测标记物，例如，掺入放射性标记的氨基酸或将生物素基部分附接到多肽，所述生物素基部分可以通过加标记的抗生物素蛋白(例如，含有可以通过光学方法或比色法检测的荧光标记物或酶活性的链霉亲和素)检测。用于多肽的标记的例子包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如，3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho或153Sm)；色原、荧光标记(例如，FITC、罗丹明、镧系元素磷光体)、酶标记(例如，p-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)；化学发光标记物；生物素基团；由第二报吿分子识别的预定多肽表位(例如，亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)；和诸如钆螯合物等磁性剂。通常用于免疫测定的标记的代表性例子包括产生光的部分，例如吖啶鎓化合物；和产生荧光的部分，例如荧光素。在这方面，所述部分本身可以未被可检测地标记，但在与又另一种部分反应时可能变得可检测。用于进行上述各种免疫测定的一般技术是本领域普通技术人员已知的。
示例性变体IgG Fc多肽对蛋白A和/或C1q和/或CD16的亲和力
本文所述的变体IgG Fc多肽可以具有改变的对蛋白A和/或C1q和/或CD16的结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力。此类变体IgG Fc多肽可以通过蛋白A柱色谱法纯化。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力。此类变体IgG Fc多肽可以具有降低的补体介导的免疫应答。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力。此类变体IgG Fc多肽可以具有降低的ADCC免疫应答。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力和/或相对于野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力和/或相对于野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力。
如本文所用，“蛋白A”是包含蛋白A的全部或一部分的多肽，其能够结合野生型犬类IgG-B Fc、野生型马类IgG1 Fc、野生型马类IgG3 Fc、野生型马类IgG4 Fc、野生型马类IgG7 Fc、野生型猫类IgG1a Fc、野生型猫类IgG1b Fc或野生型猫类IgG2 Fc。
“C1q”或“C1q复合物”可互换用于指补体系统中涉及的蛋白质复合物或其一部分，可以结合野生型犬类IgG-B Fc、野生型犬类IgG-C Fc、野生型马类IgG1 Fc、野生型马类IgG3 Fc、野生型马类IgG4 Fc、野生型马类IgG7 Fc、野生型猫类IgG1a Fc或野生型猫类IgG1b Fc。
如本文所用，“CD16”是包含CD16的全部或一部分的多肽，其能够结合野生型犬类IgG-A Fc或野生型犬类IgG-D Fc。术语与物质“结合”是本领域熟知的术语，并且确定这种结合的方法也是本领域熟知的。如果分子与特定细胞或物质反应、缔合或具有亲和力，则称所述分子表现出“结合”，并且所述反应、缔合或亲和力可通过本领域已知的一种或多种方法(诸如例如免疫印迹、ELISA、KinEx A、生物层干涉法(BLI)、表面等离子体共振装置等)检测。
如本文所用，“蛋白A+”意指Fc多肽具有蛋白A结合亲和力。在一些实施方案中，蛋白A+Fc多肽包含至少一种增加蛋白A结合亲和力的氨基酸修饰。
如本文所用，“蛋白A-”意指Fc多肽具有低的或没有蛋白A结合亲和力。
如本文所用，“C1q+”意指Fc多肽具有C1q结合亲和力。
如本文所用，“C1q-”意指Fc多肽具有低的或没有C1q结合亲和力。在一些实施方案中，C1q-Fc多肽具有至少一种降低C1q结合亲和力的氨基酸修饰。
如本文所用，“CD16+”意指Fc多肽具有CD16结合亲和力。
如本文所用，“CD16-”意指Fc多肽具有低的或没有CD16结合亲和力。在一些实施方案中，CD16-Fc多肽具有至少一种降低CD16结合亲和力的氨基酸修饰。
术语“亲和力”意指在分子(例如，受体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，配体)之间的非共价相互作用的总和的强度。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常见方法(诸如例如免疫印迹、ELISA、KinEx A、生物层干涉法(BLI)或表面等离子体共振装置)来测量。
“表面等离子体共振”表示光学现象，其允许通过检测生物传感器基质内蛋白质浓度的变化来分析实时生物特异性相互作用，例如使用BIAcoreTM系统(BIAcoreInternational AB,a GE Healthcare公司,乌普萨拉,瑞典以及皮斯卡塔韦,新泽西州)。有关进一步说明，参见Jonsson等人(1993)Ann.Biol.Clin.51:19-26。
“生物层干涉法”是指光学分析技术，其分析在生物传感器尖端和内部参考层上从固定化蛋白质层反射的光的干涉图案。与生物传感器尖端结合的分子数量的变化引起可以实时测量的干涉图案的偏移。用于生物层干涉法的非限制性示例性装置是
系统(Pall ForteBio LLC)。参见例如Abdiche等人,2008,Anal.Biochem.377:209-277。
术语“KD”、“Kd”、“Kd”或“Kd值”可互换用于指受体-配体相互作用或抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x 10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x1011M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M的解离常数(KD)与蛋白A结合。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的大于5x10-6M、大于1x10-5M、大于5x10-5M、大于1x10-4M、大于5x10-4M或大于1x10-3M的解离常数(KD)与C1q和/或CD16结合。
在一些实施方案中，变体犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10- 12M或小于1x10-12M的解离常数(KD)与C1q和/或CD16结合。
在一些实施方案中，根据供应商的说明书，使用生物传感器(如
System(Pall ForteBio LLC，费利蒙，加利福尼亚州))，通过使用生物层干涉测定来测量IgG Fc多肽(如变体IgG Fc多肽)对蛋白A或对C1q或对CD16的KD。简言之，生物素化蛋白A或C1q或CD16结合至传感器尖端，并且监测IgG Fc多肽的缔合持续指定的时间或直到达到稳定状态。可以监测解离持续指定的时间或直到达到稳定状态。减去仅缓冲液的空白曲线以校正任何漂移。使用ForteBio数据分析软件将数据拟合至2:1结合模型以确定缔合速率常数(kon)、解离速率常数(koff)和Kd。平衡解离常数(KD)计算为koff/kon的比率。术语“kon”是指分子X与其配偶体Y的缔合的速率常数，并且术语“koff”是指分子X或配偶体Y与分子X/配偶体Y复合物解离的速率常数。
“增加”或“刺激”意指与参考相比使活性、功能或量增加、改善或增强。在一些实施方案中，“增加”或“刺激”意指相对于参考值引起总体增加约5％或更多、约10％或更多、约20％或更多、约30％或更多、约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多、约90％或更多、约100％或更多、约125％或更多、约200％或更多的能力。在一些实施方案中，“增加”或“刺激”意指相对于参考值引起总体增加约5％至约50％、约10％至约20％、约50％至约100％、约25％至约70％的能力。在一些实施方案中，“增加”或“刺激”意指引起总体增加50％或更多的能力。在一些实施方案中，“增加”或“刺激”意指引起总体增加75％、85％、90％、95％或更多的能力。在一些实施方案中，在相同的时间段内，相对于对照剂量(如安慰剂)，上述量在一段时间内被刺激或增加。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽相对于参考IgG Fc多肽能够以增加约5％或更多、约10％或更多、约20％或更多、约30％或更多、约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多、约90％或更多、约100％或更多、约125％或更多、约150％或更多、约200％或更多的亲和力结合至蛋白A。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽相对于参考IgG Fc多肽能够以增加约5％至约50％、约10％至约20％、约50％至约100％、约25％至约70％的亲和力结合至蛋白A。在一些实施方案中，参考IgG Fc多肽是野生型IgG Fc多肽。在一些实施方案中，参考IgG Fc多肽是不同的变体IgG Fc多肽。
“降低”或“抑制”意指与参考相比使活性、功能或量减少、降低或停滞。在一些实施方案中，“降低”或“抑制”意指相对于参考IgG Fc多肽引起总体减少约5％或更多、约10％或更多、约20％或更多、约30％或更多、约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多或约90％或更多的能力。在一些实施方案中，“降低”或“抑制”意指相对于参考值引起总体减少约5％至约50％、约10％至约20％、约50％至约100％、约25％至约70％的能力。在一些实施方案中，“降低”或“抑制”意指引起总体减少50％或更多的能力。在一些实施方案中，“降低”或“抑制”意指引起总体减少75％、85％、90％、95％或更多的能力。在一些实施方案中，在相同的时间段内，相对于对照剂量(如安慰剂)，上述量在一段时间内被抑制或减少。
在一些实施方案中，在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽相对于参考IgG Fc多肽能够以减少约5％或更多、约10％或更多、约20％或更多、约30％或更多、约40％或更多、约50％或更多、约60％或更多、约70％或更多、约80％或更多、约90％或更多的亲和力结合至C1q或CD16。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽相对于参考IgG Fc多肽能够以减少约5％至约50％、约10％至约20％、约50％至约100％、约25％至约70％的亲和力结合至C1q或CD16。在一些实施方案中，参考IgG Fc多肽是野生型IgG Fc多肽。在一些实施方案中，参考IgG Fc多肽是不同的变体IgG Fc多肽。
如本文所用，“参考”是指用于比较目的的任何样品、标准或水平。参考可以是野生型参考或变体参考。可以从健康或非患病样品中获得参考。在一些例子中，从伴生动物的未患病或未处理样品中获得参考。在一些例子中，从特定物种的一种或多种健康动物而不是被测试或治疗的动物获得参考。
示例性药物组合物
术语“药物配制品”和“药物组合物”是指呈使得一种或多种活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对所述配制品所施用的受试者具有不可接受的毒性的其他组分的制剂。
“药学上可接受的载体”是指用于与治疗剂一起使用的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包囊材料、配制助剂或本领域中常规的载体，所述载体和治疗剂共同构成用于施用至受试者的“药物组合物”。药学上可接受的载体在使用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且与配制品的其他成分相容。药学上可接受的载体适用于所用配制品。药学上可接受的载体的例子包括氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；诸如人血清白蛋白、犬类或其他动物白蛋白等的血清蛋白；诸如磷酸盐、柠檬酸盐、氨丁三醇或HEPES缓冲液等的缓冲液；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅或三硅酸镁等的电解质；聚乙烯吡咯烷酮，纤维素基物质；聚乙二醇；蔗糖；甘露糖醇；或包括但不限于精氨酸的氨基酸。
所述药物组合物可以以冻干形式储存。因此，在一些实施方案中，所述制备方法包括冻干步骤。然后可以在施用于狗、猫或马之前，将冻干的组合物重新配制，通常作为适用于肠胃外施用的水性组合物。在其他实施方案中，特别是当本文所述的变体IgG Fc多肽或其他多肽对热变性和氧化变性而言高度稳定时，所述药物组合物可以作为液体储存，即作为水性组合物储存，其可以直接或在适当稀释的情况下施用至狗、猫或马。可以用无菌注射用水(WFI)重构冻干的组合物。可以包括抑菌试剂，如苯甲醇。因此，本发明提供了固体或液体形式的药物组合物。
当施用时，所述药物组合物的pH可以在约pH 5至约pH 8的范围内。如果它们用于治疗目的，则本发明的组合物是无菌的。无菌可以通过本领域已知的几种方法中的任何一种来实现，包括通过无菌过滤膜(例如0.2微米膜)过滤。可以使用或不使用抗细菌剂来维持无菌。
Fc多肽和药物组合物的某些用途
包含本发明的变体Fc多肽(如变体IgG Fc多肽)的多肽或包含本发明的变体Fc多肽的药物组合物可用于延长伴生动物(包括但不限于犬类、猫类或马类)中的体内产品半衰期。
如本文所用，“治疗”是用于获得有益或期望的临床结果的途径。如本文所用，“治疗”包括哺乳动物(包括伴生动物)中疾病治疗剂的任何施用或应用。出于本公开文本的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于以下中的任何一个或多个：减轻一种或多种症状，降低疾病程度，预防或延迟疾病的传播，预防或延迟疾病的复发，延迟或减缓疾病的进展，改善疾病状态，抑制疾病或疾病进展，抑制或减缓疾病或疾病进展，停滞疾病发展和缓解(无论是部分还是全部)。“治疗”还涵盖降低增殖性疾病的病理后果。本文提供的方法考虑了这些治疗方面中的任何一个或多个。与上述一致，术语治疗不需要百分之百地去除所述障碍的所有方面。
物质/分子、激动剂或拮抗剂的“治疗有效量”可根据诸如待治疗的疾病类型，疾病状态，疾病的严重程度和病程，治疗目的的类型，任何既往治疗，临床病史，对先前治疗的反应，主治兽医的判断，动物的年龄、性别和体重，以及物质/分子、激动剂或拮抗剂在动物中引起期望反应的能力等因素而变化。治疗有效量也是治疗有益效果超过物质/分子、激动剂或拮抗剂的任何毒性或有害作用的量。治疗有效量可以按一次或多次施用来递送。“治疗有效量”是指在必要的剂量和持续必要的时间段的情况下能有效实现所需治疗或预防结果的量。
在一些实施方案中，将本文所述的变体IgG Fc多肽或其他多肽或包含所述变体IgG Fc多肽或其他多肽的药物组合物通过皮下施用、静脉内输注或肌内注射来肠胃外施用。在一些实施方案中，将本文所述的变体IgG Fc多肽或其他多肽或包含所述变体IgG Fc多肽或其他多肽的药物组合物以推注或通过连续输注一段时间来施用。在一些实施方案中，将本文所述的变体IgG Fc多肽或其他多肽或包含所述变体IgG Fc多肽或其他多肽的药物组合物通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、动脉内、滑膜内、鞘内或吸入途径来施用。
在一些实施方案中，将本文所述的变体IgG Fc多肽或其他多肽或包含所述变体IgG Fc多肽或其他多肽的药物组合物以下述量施用：在每剂0.0001mg/kg体重至100mg/kg体重的范围内、在每剂0.005mg/kg体重至20mg/kg体重的范围内、在每剂1mg/kg体重至10mg/kg体重的范围内、在0.5mg/kg体重至100mg/kg体重的范围内、在1mg/kg体重至100mg/kg体重的范围内、在5mg/kg体重至100mg/kg体重的范围内、在10mg/kg体重至100mg/kg体重的范围内、在20mg/kg体重至100mg/kg体重的范围内、在50mg/kg体重至100mg/kg体重的范围内、在1mg/kg体重至10mg/kg体重的范围内、在5mg/kg体重至10mg/kg体重的范围内、在0.5mg/kg体重至10mg/kg体重或在5mg/kg体重至50mg/kg体重的范围内。
在一些实施方案中，将本文所述的变体IgG Fc多肽或其他多肽或包含所述变体IgG Fc多肽或其他多肽的药物组合物一次性地或经一系列治疗而施用至伴生动物。在一些实施方案中，将所述剂量每周施用一次，持续至少连续两周或三周，并且在一些实施方案中，该治疗周期重复两次或更多次，任选地穿插有一周或多周未治疗。在其他实施方案中，将所述治疗有效剂量每天施用一次，持续连续二至五天，并且在一些实施方案中，该治疗周期重复两次或更多次，任选地穿插有一天或多天未治疗。
与一种或多种其他治疗剂“组合”施用包括以任何顺序同时(并行)和连续或依序施用。术语“并行”在本文中用于指两种或更多种治疗剂的施用，其中至少部分施用在时间上重叠或者一种治疗剂的施用相对于另一种治疗剂的施用在很短的时间内发生。例如，所述两种或更多种治疗剂以不超过约指定分钟数的时间间隔施用。术语“依序”在本文中用于指两种或更多种治疗剂的施用，其中在中断施用一种或多种药剂后继续施用一种或多种其他药剂，或者其中在施用一种或多种药剂之前施用一种或多种其他药剂。例如，以超过约指定分钟数的时间间隔施用所述两种或更多种治疗剂。如本文中所用，术语“与......结合”是指除了一种治疗模式之外还施用另一种治疗模式。因此，“与……结合”是指在向动物施用一种治疗模式之前、期间或之后施用另一种治疗模式。
在一些实施方案中，将所述剂量每周施用一次，持续至少连续两周或三周，并且在一些实施方案中，该治疗周期重复两次或更多次，任选地穿插有一周或多周未治疗。在其他实施方案中，将所述治疗有效剂量每天施用一次，持续连续二至五天，并且在一些实施方案中，该治疗周期重复两次或更多次，任选地穿插有一天或多天未治疗。
与一种或多种其他治疗剂“组合”施用包括以任何顺序同时(并行)和连续或依序施用。术语“并行”在本文中用于指两种或更多种治疗剂的施用，其中至少部分施用在时间上重叠或者一种治疗剂的施用相对于另一种治疗剂的施用在很短的时间内发生。例如，所述两种或更多种治疗剂以不超过约指定分钟数的时间间隔施用。术语“依序”在本文中用于指两种或更多种治疗剂的施用，其中在中断施用一种或多种药剂后继续施用一种或多种其他药剂，或者其中在施用一种或多种药剂之前施用一种或多种其他药剂。例如，以超过约指定分钟数的时间间隔施用所述两种或更多种治疗剂。如本文中所用，术语“与......结合”是指除了一种治疗模式之外还施用另一种治疗模式。因此，“与……结合”是指在向动物施用一种治疗模式之前、期间或之后施用另一种治疗模式。
以下实施例说明了本公开文本的具体方面，并不旨在以任何方式限制本公开文本。
实施例
实施例1
用于增加蛋白A结合
和/或减少补体结合和/或减少CD16结合的变体犬类IgG Fc多肽
使用蛋白A亲和力纯化抗体是成熟的过程。然而，在犬类IgG的四种亚型中，只有IgG-B Fc(例如，SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3)具有蛋白A结合亲和力。犬类IgG-A Fc(例如，SEQ ID NO:1)、IgG-C Fc(例如，SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5)和IgG-D Fc(例如，SEQ IDNO:6)具有弱的或无可测量的蛋白A结合亲和力。设计了变体犬类IgG-A Fc、IgG-C Fc和IgG-D Fc多肽以用于改变蛋白A结合。
此外，犬类IgG-B Fc和IgG-C Fc具有补体活性并且结合至C1q，而犬类IgG-A Fc和IgG-D Fc具有弱的或无可测量的对C1q的结合亲和力。为了潜在地降低C1q结合和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，设计了变体犬类IgG-B Fc和IgG-C Fc多肽。
此外，犬类IgG-B Fc和IgG-C Fc具有CD16结合活性。为了潜在地降低CD16与IgG-BFc和IgG-C Fc的结合，和/或潜在地降低ADCC，设计了变体犬类IgG-B Fc和IgG-C Fc多肽。
下表3汇总了犬类IgG Fc亚型的蛋白A和C1q结合特征。值得注意的是，没有一种野生型犬类IgG Fc亚型缺乏C1q结合并且结合蛋白A。
表3.
| 野生型犬类IgG Fc | 蛋白A结合 | C1q结合 | CD16结合 |
| IgG-A Fc | – | – | – |
| IgG-B Fc | + | + | + |
| IgG-C Fc | – | + | + |
| IgG-D Fc | – | – | – |
(-)表示低的或无可测量的结合活性。
使用三维蛋白质建模和蛋白质序列分析，鉴定了可能与蛋白A接触的犬类IgG-BFc的序列。图1示出了犬类IgG-A、IgG-B、IgG-C和IgG-D Fc序列的比对。框指示可能与蛋白A接触的区域。
使用两种途径来设计变体犬类IgG-A、IgG-C和IgG-D Fc多肽以用于增加蛋白A结合。对于第一种途径，将变体犬类IgG-A、IgG-C和IgG-D Fc多肽设计为具有与犬类IgG-B Fc相同的蛋白A结合基序序列(例如，分别为SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9)。对于第二种途径，将变体犬类IgG-A Fc I(21)T/Q(207)H(SEQ ID NO:10)、变体犬类IgG-C Fc I(21)T(SEQ ID NO:11)和变体犬类IgG-D Fc I(21)T/Q(207)H(SEQ ID NO:12)设计为在蛋白A结合区具有一个或两个氨基酸取代以对应于犬类IgG-B Fc序列。
此外，可以制备具有增加的蛋白A结合的变体犬类IgG-A Fc、IgG-C Fc和IgG-D Fc多肽，其具有表4中列出的一个或多个氨基酸取代。
表4.
*列出的氨基酸位置是相对于所指示的SEQ ID NO。
为了潜在地降低C1q与犬类IgG-B Fc和IgG-C Fc的结合，和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，可以制备变体犬类IgG-B Fc和IgG-C Fc多肽，其分别在对应于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的位置93的氨基酸位置处具有用除Lys外的任何氨基酸对Lys的氨基酸取代。这些氨基酸取代在犬类IgG-B Fc和IgG-C Fc与犬类IgG-A Fc和IgG-D Fc(了解它们未展现出补体活性)相比的蛋白质序列分析和3-D结构建模之后鉴定出。例如，可以制备变体犬类IgG-B Fc K(93)R(SEQ ID NO:13)和变体犬类IgG-C Fc K(93)R(SEQ ID NO:14)。与包含野生型犬类IgG-B Fc的融合蛋白相比，观察到人C1q与包含变体犬类IgG-B Fc K(93)R的融合蛋白之间的结合降低。
为了潜在地降低CD16与IgG-B Fc和IgG-C Fc的结合，和/或潜在地降低ADCC，可以制备具有表5中列出的一个或多个氨基酸取代的变体犬类IgG-B Fc和IgG-C Fc多肽(例如，SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ IDNO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28和/或SEQ ID NO:29)。所述一个或多个氨基酸取代在犬类IgG-B和IgG-C与IgG-A和IgG-D(了解它们未展现出ADCC活性)相比的蛋白质序列分析和3-D结构建模之后鉴定出。
表5.
*列出的氨基酸位置是相对于所指示的SEQ ID NO。
由于野生型犬类IgG-C Fc缺乏蛋白A结合并且具有C1q结合，因此可以通过将表4中列出的一个或多个氨基酸取代与K(93)R取代或K(93)X取代(其中X是除Lys外的任何氨基酸)组合来制备结合蛋白A并且具有降低的与C1q的结合的双重变体犬类IgG-C Fc(例如，SEQ ID NO:30)。可以通过将表5中列出的一个或多个氨基酸取代与K(93)R取代或K(93)X取代(其中X是除Lys外的任何氨基酸)组合来制备具有降低的与C1q的结合和降低的与CD16的结合的双重变体犬类IgG-B Fc或双重变体犬类IgG-C Fc(例如，SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33和/或SEQ ID NO:34)。可以通过将表4中列出的一个或多个氨基酸取代和表5中列出的一个或多个氨基酸取代与K(93)R取代或K(93)X取代(其中X是除Lys外的任何氨基酸)组合来制备结合蛋白A并且具有降低的与C1q和CD16的结合的三重变体犬类IgG-CFc。
可以确定任何变体犬类IgG Fc与蛋白A、CD16和/或C1q的结合，并且将其与另一种IgG Fc(例如，相应的野生型犬类IgG Fc、另一种野生型或变体犬类IgG Fc、或另一种伴生动物的野生型或变体IgG Fc等)与蛋白A、CD16和/或C1q的结合进行比较。
结合分析可以使用Octet生物传感器进行。简言之，可以将靶分子(例如，蛋白A、C1q、CD16等)生物素化并除去游离的未反应的生物素(例如，通过透析)。将生物素化的靶分子捕获在链霉亲和素传感器尖端上。监测靶分子与各种浓度(例如，10μg/mL)的IgG Fc多肽的缔合持续指定的时间或直到达到稳定状态。监测解离持续指定的时间或直到达到稳定状态。可以减去仅缓冲液的空白曲线以校正任何漂移。使用ForteBioTM数据分析软件将数据拟合至1:1结合模型以确定kon、koff和Kd。
实施例2
具有增加的蛋白A结合和/或增加的补体结合和/或增加的CD16结合的变体犬类IgG-A和IgG-D Fc多肽
基于被鉴定为参与实施例1中所述的蛋白A、C1q和CD16结合的氨基酸位置，为了潜在地增加蛋白A、C1q和/或CD16与犬类IgG-A Fc和IgG-DFc的结合，设计了功能获得性犬类IgG-A Fc和IgG-D Fc多肽。例如，可以将变体犬类IgG-A和IgG-D Fc多肽设计为在蛋白A结合区、C1q结合区和/或CD16结合区具有一个或多个氨基酸取代以对应于结合蛋白A、C1q和/或CD16的野生型犬类IgG Fc多肽的序列。
可以通过组合表6中列出的一个或多个氨基酸取代来制备单一、双重或三重变体犬类IgG-A和/或IgG-D多肽。例如，可以制备SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40和/或SEQ ID NO:41的变体犬类IgG-A Fc多肽，和SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:47和/或SEQ ID NO:48的变体犬类IgG-D Fc多肽。
表6.
可以确定任何变体犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽与蛋白A、C1q和/或CD16的结合，并且将其与另一种IgG Fc(例如，相应的野生型犬类IgG Fc、另一种野生型或变体犬类IgGFc、或另一种伴生动物的野生型或变体IgG Fc等)与蛋白A、C1q和/或CD16的结合进行比较。可以使用实施例1中描述的结合测定。
实施例3
用于增加蛋白A结合
和/或减少补体结合的变体马类IgG Fc多肽
在马类IgG的七种亚型中，IgG1 Fc(例如，SEQ ID NO:49)、IgG3 Fc(例如，SEQ IDNO:52)、IgG4 Fc(例如，SEQ ID NO:53)、IgG7 Fc(例如，SEQ ID NO:56)具有蛋白A结合亲和力。马类IgG2 Fc(例如，SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51)、IgG5 Fc(例如，SEQ ID NO:54)和IgG6 Fc(例如，SEQ ID NO:55)具有弱的或无可测量的蛋白A结合亲和力。设计了变体马类IgG2 Fc、IgG5 Fc和IgG6 Fc多肽以用于改变蛋白A结合。
此外，马类IgG2 Fc、IgG5 Fc和IgG6 Fc具有弱的或无可测量的对C1q的结合亲和力，而马类IgG1 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc和IgG7 Fc结合至C1q。为了潜在地降低C1q结合和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，设计了变体马类IgG1 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc和IgG7 Fc多肽。
下表7汇总了马类IgG Fc亚型的蛋白A和C1q结合特征。值得注意的是，没有一种野生型马类IgG Fc亚型缺乏C1q结合并且结合蛋白A。
表7.
| 野生型马类IgG Fc | 蛋白A结合 | C1q结合 |
| IgG1 Fc | + | + |
| IgG2 Fc | – | – |
| IgG3 Fc | + | + |
| IgG4 Fc | + | + |
| IgG5 Fc | – | – |
| IgG6 Fc | – | – |
| IgG7 Fc | + | + |
(-)表示低的或无可测量的结合活性。
使用三维蛋白质建模和蛋白质序列分析，鉴定了可能与蛋白A接触的马类IgG1Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc和IgG7 Fc的序列。可以制备具有增加的蛋白A结合的变体马类IgG2Fc、IgG5 Fc和IgG6 Fc多肽，其具有表8中列出的一个或多个氨基酸取代。
表8.
*列出的氨基酸位置是相对于所指示的SEQ ID NO。
例如，将变体马类IgG2 Fc、IgG5 Fc和IgG6 Fc多肽设计为在蛋白A结合区中具有一个或多个氨基酸取代以对应于确实结合蛋白A的野生型马类IgG Fc的序列。可以制备具有增加的蛋白A结合的变体马类IgG2 Fc F(203)Y(SEQ ID NO:57)；变体马类IgG2 Fc A(15)T/F(203)Y(SEQ ID NO:58)；变体马类IgG5 Fc V(199)L/E(200)Y(SEQ ID NO:59)；和变体马类IgG6 Fc I(199)L/R(200)H/H(201)N/T(202)H(SEQ ID NO:60)。
为了潜在地降低C1q与马类IgG1 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc和IgG7 Fc的结合，和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，可以制备变体犬类IgG1 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc和IgG7 Fc多肽，其分别在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56的位置87的氨基酸位置处具有用除Lys外的任何氨基酸对Lys的氨基酸取代。这些氨基酸取代在马类IgG1 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc和IgG7 Fc与马类IgG2 Fc、IgG5 Fc和IgG6 Fc(了解它们未展现出补体活性)相比的蛋白质序列分析和3-D结构建模之后鉴定出。例如，可以制备变体马类IgG1 Fc K(87)S(SEQ ID NO:61)、变体马类IgG3 Fc K(87)S(SEQ ID NO:62)、变体马类IgG4 Fc K(87)S(SEQ ID NO:63)和变体马类IgG7 Fc K(87)S(SEQ ID NO:64)。
可以确定任何变体马类IgG Fc与蛋白A和/或C1q的结合，并且将其与另一种IgGFc(例如，相应的野生型马类IgG Fc、另一种野生型或变体马类IgG Fc、或另一种伴生动物的野生型或变体IgG Fc等)与蛋白A和/或C1q的结合进行比较。可以使用实施例1中描述的结合测定。
实施例4
用于减少补体结合的变体猫类IgG Fc多肽
猫类IgG、IgG1a Fc(SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66)、IgG1b Fc(SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68)和IgG2 Fc(SEQ ID NO:69)的三种亚型中的每一种都具有蛋白A结合亲和力。然而，只有猫类IgG2 Fc具有弱的或无可测量的对C1q的结合亲和力，而猫类IgG1a Fc、IgG1b Fc结合至C1q。为了潜在地降低C1q结合和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，设计了变体猫类IgG1a Fc和IgG1b Fc多肽。
下表9汇总了猫类IgG Fc亚型的蛋白A和C1q结合特征。值得注意的是，没有一种野生型马类IgG Fc亚型缺乏C1q结合并且结合蛋白A。
表9.
| 野生型猫类IgG Fc | 蛋白A结合 | C1q结合 |
| IgG1a Fc | + | + |
| IgG1b Fc | + | + |
| IgG2 Fc | + | – |
(-)表示低的或无可测量的结合活性。
为了潜在地降低C1q与猫类IgG1a Fc和IgG1b Fc的结合，和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，可以制备变体猫类IgG1a Fc和IgG1b Fc多肽，其在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置198的氨基酸位置处具有用除Pro外的任何氨基酸对Pro的氨基酸取代。这些氨基酸取代在猫类IgG1a Fc和IgG1b Fc与猫类IgG2Fc(了解其未展现出补体活性)相比的蛋白质序列分析和3-D结构建模之后鉴定出。例如，可以制备变体猫类IgG1a Fc P(198)A(例如，SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:71)和变体猫类IgG1b Fc P(198)A(例如，SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73)。
可以确定任何变体猫类IgG Fc与C1q的结合，并且将其与另一种IgG Fc(例如，相应的野生型猫类IgG Fc、另一种野生型或变体猫类IgG Fc、或另一种伴生动物的野生型或变体IgG Fc等)与C1q的结合进行比较。可以使用实施例1中描述的结合测定。
实施例5
用于异二聚体蛋白的变体犬类、猫类和马类IgG Fc多肽
为了使得能够使用杵臼结构(knob-in-hole)异二聚化途径制备双特异性犬类、猫类或马类抗体或双功能犬类、猫类或马类Fc融合蛋白，研究了变体犬类IgG Fc多肽、变体猫类IgG Fc多肽和变体马类IgG Fc多肽的配对。通过以下方式来设计两个Fc多肽的配对：引入CH3界面突变，使得第一Fc多肽包含大体积的氨基酸(杵)，并且第二Fc多肽在相同的大概位置(臼)中包含较小的一个或多个氨基酸。
可以向作为杵的一条Fc链(异二聚体链1)中引入以下氨基酸取代：在对应于犬类IgG-A Fc(SEQ ID NO:1)或犬类IgG-D Fc(SEQ ID NO:6)的位置138的位置处的苏氨酸至酪氨酸或色氨酸的氨基酸取代(T138Y或T138W)，或者在对应于犬类IgG-B Fc(SEQ ID NO:2)或犬类IgG-C Fc(SEQ ID NO:4)的位置137的位置处的苏氨酸至酪氨酸或色氨酸的氨基酸取代(T137Y或T137W)。变体犬类IgG-A Fc、IgG-B Fc、IgG-C Fc和IgG-D Fc异二聚体链1的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ IDNO:78、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81。
可以向作为臼的第二Fc链(异二聚体链2)中引入以下氨基酸取代：在对应于犬类IgG-A(SEQ ID NO:1)或IgG-D(SEQ ID NO:6)的位置138的位置处的苏氨酸至丝氨酸的氨基酸取代、和/或在对应于其位置140的位置处的亮氨酸至丙氨酸的氨基酸取代、和/或在对应于其位置180的位置处的酪氨酸至苏氨酸的氨基酸取代(T138S、L140A和/或Y180T)，或者在对应于犬类IgG-B Fc(SEQ ID NO:2)或IgG-C(SEQ ID NO:4)的位置137的位置处的苏氨酸至丝氨酸的氨基酸取代、和/或在对应于其位置139的位置处的亮氨酸至丙氨酸的氨基酸取代、和/或在对应于其位置179的位置处的酪氨酸至苏氨酸的氨基酸取代(T137S、L139A和/或Y180T)。变体犬类IgG-A Fc、IgG-B Fc、IgG-C Fc和IgG-D Fc异二聚体链2的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:93。
可以向作为杵的一条Fc链(异二聚体链1)中引入以下氨基酸取代：在对应于猫类IgG1a Fc(SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66)、猫类IgG1b Fc(SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68)或猫类IgG2(SEQ ID NO:69)的位置154的位置处的苏氨酸至酪氨酸或色氨酸的氨基酸取代(T154Y或T154W)。变体猫类IgG1a Fc、IgG1b Fc和IgG2异二聚体链1的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:103。
可以向作为臼的第二Fc链(异二聚体链2)中引入以下氨基酸取代：在对应于IgG-1a(SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66)或IgG-1b Fc(SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68)或IgG2(SEQ ID NO:69)的位置154的位置处的苏氨酸至丝氨酸的氨基酸取代、和/或在对应于其位置156的位置处的亮氨酸至丙氨酸的氨基酸取代、和/或在对应于其位置197的位置处的酪氨酸至苏氨酸的氨基酸取代(T154S、L156A和/或Y197T)。变体猫类IgG1a Fc、IgG1b Fc和IgG2 Fc异二聚体链2的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQID NO:112和SEQ ID NO:113。
可以向作为杵的一条Fc链(异二聚体链1)中引入以下氨基酸取代：在对应于马类IgG1 Fc(SEQ ID NO:49)、马类IgG2 Fc(SEQ ID NO:50)、马类IgG3 Fc(SEQ ID NO:52)、马类IgG4 Fc(SEQ ID NO:53)、马类IgG5 Fc(SEQ ID NO:54)、马类IgG6 Fc(SEQ ID NO:55)或马类IgG7 Fc(SEQ ID NO:56)的位置131的位置处的苏氨酸至酪氨酸或色氨酸的氨基酸取代(T131Y或T131W)。变体IgG1 Fc、IgG2 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc、IgG5 Fc、IgG6 Fc和IgG7 Fc异二聚体链1的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:127。
可以向作为臼的第二Fc链(异二聚体链2)中引入以下氨基酸取代：在对应于马类IgG1 Fc(SEQ ID NO:49)、马类IgG2 Fc(SEQ ID NO:50)、马类IgG3 Fc(SEQ ID NO:52)、马类IgG4 Fc(SEQ ID NO:53)、马类IgG5 Fc(SEQ ID NO:54)、马类IgG6 Fc(SEQ ID NO:55)或马类IgG7 Fc(SEQ ID NO:56)的位置131的位置处的苏氨酸至丝氨酸的氨基酸取代、在对应于其位置133的位置处的亮氨酸至丙氨酸的氨基酸取代和/或在对应于其位置174的位置处的酪氨酸至苏氨酸的氨基酸取代(T131W、L133A和/或Y174T)。变体IgG1 Fc、IgG2 Fc、IgG3Fc、IgG4 Fc、IgG5 Fc、IgG6 Fc和IgG7 Fc异二聚体链2的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQID NO:134、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:141。
变体犬类IgG Fc异二聚体链1和2的配对、变体猫类IgG Fc异二聚体链1和2的配对以及变体马类IgG Fc异二聚体链1和2的配对可以允许Fc异二聚化，并且防止或减少Fc同二聚化。可以将一种犬类IgG亚型的异二聚体链1与相同或不同犬类IgG亚型的异二聚体链2组合。可以将一种猫类IgG亚型的异二聚体链1与相同或不同猫类IgG亚型的异二聚体链2组合。可以将一种马类IgG亚型的异二聚体链1与相同或不同马类IgG亚型的异二聚体链2组合。所述设计可以实现双特异性犬类、猫类或马类抗体的二聚化。此外，可以将两种不同的肽或蛋白质或不同蛋白质(例如，治疗性蛋白质)的组合与异二聚体Fc链融合。
例如，可以使用变体犬类IgG Fc异二聚体链或变体猫类IgG Fc异二聚体链产生双重GLP1和胰高血糖素分子，如与变体犬类IgG Fc异二聚体链1(例如，SEQ ID NO:74、75、76、77、78、79、80或81)融合的GLP1多肽(例如，SEQ ID NO:181)和与变体犬类IgG Fc异二聚体链2(例如，SEQ ID NO:82，83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93)融合的胰高血糖素多肽(例如，SEQ ID NO:182)。
双特异性抗体组合了两种抗体的特异性。为了促进重链与其预期的轻链特异性配对，CH1与轻链之间的界面氨基酸可以突变为在形状和/或电荷-电荷相互作用上是互补的。可以引入在对应于犬类IgG-A CH1(SEQ ID NO:142)、犬类IgG-B CH1(SEQ ID NO:143)、犬类IgG-C CH1(SEQ ID NO:144)或犬类IgG-D CH1(SEQ ID NO:145)的位置24的位置处的丙氨酸至亮氨酸的氨基酸取代和/或在对应于其位置30的位置处的丝氨酸至天冬酰胺的氨基酸取代(A24L和/或S30D)。变体犬类IgG-ACH1、IgG-B CH1、IgG-CCH1和IgG-D CH1的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148和SEQ ID NO:149。
可以引入在对应于犬类κ恒定区(SEQ ID NO:150)的位置11的位置处的苯丙氨酸至丙氨酸的氨基酸取代和/或在对应于其位置22的位置处的丝氨酸至精氨酸的氨基酸取代(F11A和/或S22R)。变体犬类κ恒定区的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:151。
可以引入在对应于猫类IgG1 CH1(SEQ ID NO:152)的位置24的位置处的丙氨酸至亮氨酸的氨基酸取代和/或在对应于其位置30的位置处的丝氨酸至天冬酰胺的氨基酸取代，或者在对应于猫类IgG2 CH1(SEQ ID NO:153)的位置24的位置处丙氨酸至亮氨酸的氨基酸取代和/或在对应于其位置29的位置处的丝氨酸至天冬酰胺的氨基酸取代。变体猫类IgG1 CH1和IgG2 CH1的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:155。
可以引入在对应于猫类κ恒定区(SEQ ID NO:156)的位置11的位置处的苯丙氨酸至丙氨酸的氨基酸取代和/或在对应于其位置22的位置处的丝氨酸至精氨酸的氨基酸取代(F11A和/或S22R)。变体猫类κ恒定区的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:157。
实施例6
变体IgG Fc融合蛋白
可以制备包含至少一种治疗性多肽和/或至少一种抗体以及本文所述的变体猫类、犬类或马类IgG Fc多肽(例如，具有改变的C1q、CD16和/或蛋白A结合亲和力的IgG Fc)的连续多肽。
例如，可以设计以下构建体：
式(I)：TPA1-L1-Fc；
式(II)：Fc-L1-TPA1；
式(III)：TPA1-L1-Fc-L2-TPA2；
式(IV)：TPA1-L1-TPA2-L2-Fc；或
式(V)：Fc-L1-TPA1-L2-TPA2。
其中TPA1是第一治疗性多肽和/或抗体，TPA2是第二治疗性多肽和/或抗体(例如，相同的治疗性多肽、不同的治疗性多肽、相同的抗体或不同的抗体)，L1和L2是任选的接头；并且Fc是伴生动物物种的变体IgG Fc多肽。任选地，连续多肽包含信号序列。式I-V的构建体可以包含在任何TPA1或TPA2之后或之前的TPA3、TPA4、TPA5等。TPA3、TPA4、TPA5等是第三、第四、第五等治疗性多肽和/或抗体(例如，相同的治疗性多肽、不同的治疗性多肽、相同的抗体或不同的抗体)。
例如，连续多肽可以包含治疗性多肽和如本文所述的变体猫类IgG1a Fc多肽(例如，SEQ ID NO:70、71、94、95、99、100、104、105、106、107、154、167或168)、变体猫类IgG1bFc多肽(例如，SEQ ID NO:72、73、96、97、101、102、108、109、110、111、154、169或170)或变体猫类IgG2 Fc多肽(例如，SEQ ID NO:98、103、112、113、155、166、171或178)。
连续多肽可以包含如本文所述的变体犬类IgG-A Fc多肽(例如，SEQ ID NO:7、10、35、36、37、38、39、40、41、74、78、82、86、90或146)、变体犬类IgG-B Fc多肽(例如，SEQ IDNO:13、15、16、17、18、19、20、21、22、31、32、75、79、83、87、91或147)、变体犬类IgG-C Fc多肽(例如，SEQ ID NO:8、11、14、23、24、25、26、27、28、29、30、33、34、76、80、84、88、92或148)或变体犬类IgG-D Fc多肽(例如，SEQ ID NO:9、12、42、43、44、45、46、47、48、77、81、85、89、93或149)。
连续多肽可以包含变体马类IgG1Fc多肽(例如，SEQ ID NO:61、114、121、128或135)、变体马类IgG2 Fc多肽(例如，SEQ ID NO:57、58、115、122、129、136、172、173、174、175、176或177)、变体马类IgG3Fc多肽(例如，SEQ ID NO:62、116、123、130或137)、变体马类IgG4 Fc多肽(例如，SEQ ID NO:63、117、124、131或138)、变体马类IgG5 Fc多肽(例如，SEQID NO:59、118、125、132或139)、变体马类IgG6 Fc多肽(例如，SEQ ID NO:60、119、126、133或140)或变体马类IgG7 Fc多肽(例如，SEQ ID NO:64、120、127、134或141)。
接头可以是柔性的非结构性接头，如富含甘氨酸和丝氨酸的接头。可以将柔性延伸部分添加至连续多肽的C末端。延伸部分可以包含一个甘氨酸残基(SEQ ID NO:158)、两个甘氨酸残基(SEQ ID NO:159)、三个甘氨酸残基(SEQ ID NO:160)、四个甘氨酸残基(SEQID NO:161)、五个甘氨酸残基(SEQ ID NO:162)、六个甘氨酸残基(SEQ ID NO:163)、七个甘氨酸残基(SEQ ID NO:164)、八个甘氨酸残基(SEQ ID NO:165)或更多个甘氨酸残基。
连续多肽可以包含TPA1、TPA2、TPA3、TPA4、TPA5等或选自以下的至少一种治疗性多肽：NGF多肽、NGF多肽的受体(例如，NGF多肽的受体的ECD)、TrkA多肽(例如，TrkA多肽的ECD)、LNGFR多肽(例如，LNGFR多肽的ECD)、TNFα多肽、TNFα多肽的受体、TNFR多肽(例如，TNFR多肽的ECD)、TNFR1多肽(例如，TNFR1多肽的ECD)、TNFR2多肽(例如，TNFR2多肽的ECD)、IL5多肽、IL5多肽的受体、IL5R多肽(例如，IL5R多肽的ECD)、IL5Rα多肽(例如，IL5Rα多肽的ECD)、IL6多肽、IL6多肽的受体、IL6R多肽(例如，IL6R多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17R多肽(例如，IL17R多肽的ECD)、IL17RA多肽(例如IL17RA多肽的ECD)、IL17RB多肽(例如，IL17RB多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、IL23多肽、IL23多肽的受体、IL23R多肽(例如，IL23R多肽的ECD)、IL12Rβ1多肽(例如，IL12Rβ1多肽的ECD)、PDL1多肽、PDL1多肽的受体、PDL2多肽、PDL2多肽的受体、PD1多肽(例如，PD1多肽的ECD)、整联蛋白多肽(例如，ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7或ITGB8多肽)、整联蛋白多肽的受体、纤连蛋白多肽(例如，纤连蛋白多肽的ECD)、玻连蛋白多肽(例如，玻连蛋白多肽的ECD)、胶原蛋白多肽(例如，胶原蛋白多肽的ECD)、层粘连蛋白多肽(例如，层粘连蛋白多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD86多肽、CD86多肽的受体、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、B7-H3多肽、B7-H3多肽的受体(例如，B7-H3多肽的受体的ECD)、LAG-3多肽(例如，LAG-3多肽的ECD)、IL31多肽、IL31多肽的受体、IL31RA多肽(例如，IL31RA多肽的ECD)、OSMR多肽(例如，OSMR多肽的ECD)、IL4多肽、IL4R多肽的受体、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13多肽、IL13多肽的受体、IL13RA1多肽(例如，IL13RA1多肽的ECD)、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13Rα2多肽(例如，IL13Rα2多肽的ECD)、IL22多肽、IL22多肽的受体(例如，IL22多肽的ECD)、IL22Rα1多肽(例如，IL22Rα1多肽的ECD)、IL10Rβ2多肽(例如，IL10Rβ2多肽的ECD)、IL33多肽、IL33多肽的受体、IL1RL1多肽(例如，IL1RL1多肽的ED)、EGF多肽、EGF多肽的受体、TGFα多肽、TGFα多肽的受体、EGFR多肽(例如，EGFR多肽的ECD)、MMP9多肽、FGF多肽(例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22或FGF23多肽)、FGF多肽的受体、FGFR多肽(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽)、FGFR多肽的ECD(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、神经调节蛋白多肽(例如，神经调节蛋白同种型I、II、III、IV、V或VI多肽)、神经调节蛋白多肽的受体、HER多肽(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽)、HER多肽的ECD(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽的ECD)、EpCAM多肽(例如，EpCAM多肽的ECD)、CD20多肽(例如，CD20多肽的ECD)、CD20多肽的配体、CD19多肽(例如，CD19多肽的ECD)、CD19多肽的配体、CGRP多肽(例如，α-CGRP多肽或β-CGRP多肽)、CGRP多肽的受体、α-CGRP多肽的受体、β-CGRP多肽的受体、CALCRL多肽(例如，CALCRL多肽的ECD)、RAMP多肽(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽)、RAMP多肽的ECD(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽的ECD)、IGF多肽(例如，IGF-1或IGF-2多肽)、IGF多肽的受体(例如，IGF-1或IGF-2多肽的受体)、IGFR多肽(例如，IGFR1或IGFR2多肽)、IGFR多肽的ECD(例如，IGFR1或IGFR2多肽的ECD)、IGFBP多肽(例如，IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5或IGFBP6多肽)、VEGF多肽(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽)、VEGF多肽的受体(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D,或PGF多肽的受体)、VEGFR多肽(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽)、VEGFR多肽的ECD(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽的ECD)、FLT1受体多肽(例如，FLT1受体多肽的ECD)、IL36多肽(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽)、IL36多肽的受体(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽的受体)、IL36R多肽(例如，IL36R多肽的ECD)、IL1R1多肽(例如，IL1R1多肽的ECD)、IL1R2多肽(例如，IL1R2多肽的ECD)、IL1RL1多肽(IL1RL1多肽的ECD)、IL18R1多肽(IL18R1多肽的ECD)、细菌毒素多肽、外毒素多肽、内毒素多肽、肉毒神经毒素多肽、破伤风毒素多肽、葡萄球菌毒素多肽、CD52多肽(例如，CD52多肽的ECD)、CD52多肽的配体、SIGLEC10多肽、PCSK9多肽、PCSK9多肽的受体、LDLR多肽(例如，LDLR多肽的ECD)、CEA多肽(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽)、CEA多肽的ECD(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽的ECD)、BAFF多肽、BAFF多肽的受体、TRAF多肽(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRAF7多肽)、TRAF多肽的受体(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5多肽的受体)、BCMA多肽、BCMA多肽的ECD、SOST多肽、SOST多肽的受体、LRP多肽(例如，LRP5或LRP6多肽)、LRP多肽的ECD(例如，LRP5或LRP6多肽的ECD)、DLL多肽(例如，DLL4多肽)、DLL多肽的受体、锯齿状多肽(例如，JAG1或JAG多肽)、锯齿状多肽的受体(例如，JAG1或JAG多肽的受体)、NOTCH多肽(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽)、NOTCH多肽的配体(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽的配体)、VWF多肽、VWF多肽的受体、因子VIII多肽、因子VIII多肽的受体、血小板GP1b受体多肽(例如，血小板GP1b受体多肽的ECD)、整联蛋白αIIbβ3多肽(例如，整联蛋白αIIbβ3多肽的ECD)、IL2多肽、IL2多肽的受体、IL2R多肽(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽)、IL2R多肽的ECD(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽的ECD)、TGFβ多肽、TGFβ多肽的受体、饰胶蛋白聚糖多肽、EIF3I多肽、LTBP1多肽、TGFβR1多肽(例如，TGFβR1多肽的ECD)、YWHAE多肽、IgE多肽、IgE多肽的受体、Fc受体多肽(例如，FcεRI或FcεRII多肽)、Fc受体多肽的ECD(例如，FcεRI或FcεRII多肽的ECD)、KLK多肽(例如，KLK1、KLK2、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14或KLK15多肽)、Rankl多肽、Rankl多肽的受体、RANK多肽(例如，RANK多肽的ECD)、TSLP多肽、TSLP多肽的受体、CRLF2多肽(例如，CRLF2多肽的ECD)、IL7Rα多肽(例如，IL7Rα多肽的ECD)、S1P多肽、CD3多肽(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽)、CD3多肽的ECD(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD28多肽(例如，CD28多肽的ECD)、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、GnRH多肽、GNRH多肽的受体、GnRHR多肽(例如，GnRHR多肽的ECD)、ICAM多肽(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽)、ICAM多肽的受体(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽的受体)、JAM-A多肽、JAM-A多肽的受体、LFA-1多肽(例如，LFA-1多肽的ECD)、Nav1.7多肽、C5多肽(例如，C5a或C5b多肽)、C5多肽的受体(例如，C5a或C5b多肽的受体)、C5aR多肽(例如，C5aR多肽的ECD)、C5L2多肽(例如，C5L2多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17Ra多肽(例如，IL17Ra多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、EPO多肽、生长抑素多肽、GLP1多肽、胰高血糖素多肽等。
连续多肽可以包含TPA1、TPA2、TPA3、TPA4、TPA5等或选自识别以下多肽中的一种或多种的抗体的至少一种抗体：NGF多肽、NGF多肽的受体(例如，NGF多肽的受体的ECD)、TrkA多肽(例如，TrkA多肽的ECD)、LNGFR多肽(例如，LNGFR多肽的ECD)、TNFα多肽、TNFα多肽的受体、TNFR多肽(例如，TNFR多肽的ECD)、TNFR1多肽(例如，TNFR1多肽的ECD)、TNFR2多肽(例如，TNFR2多肽的ECD)、IL5多肽、IL5多肽的受体、IL5R多肽(例如，IL5R多肽的ECD)、IL5Rα多肽(例如，IL5Rα多肽的ECD)、IL6多肽、IL6多肽的受体、IL6R多肽(例如，IL6R多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17R多肽(例如，IL17R多肽的ECD)、IL17RA多肽(例如IL17RA多肽的ECD)、IL17RB多肽(例如，IL17RB多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、IL23多肽、IL23多肽的受体、IL23R多肽(例如，IL23R多肽的ECD)、IL12Rβ1多肽(例如，IL12Rβ1多肽的ECD)、PDL1多肽、PDL1多肽的受体、PDL2多肽、PDL2多肽的受体、PD1多肽(例如，PD1多肽的ECD)、整联蛋白多肽(例如，ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7或ITGB8多肽)、整联蛋白多肽的受体、纤连蛋白多肽(例如，纤连蛋白多肽的ECD)、玻连蛋白多肽(例如，玻连蛋白多肽的ECD)、胶原蛋白多肽(例如，胶原蛋白多肽的ECD)、层粘连蛋白多肽(例如，层粘连蛋白多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD86多肽、CD86多肽的受体、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、B7-H3多肽、B7-H3多肽的受体(例如，B7-H3多肽的受体的ECD)、LAG-3多肽(例如，LAG-3多肽的ECD)、IL31多肽、IL31多肽的受体、IL31RA多肽(例如，IL31RA多肽的ECD)、OSMR多肽(例如，OSMR多肽的ECD)、IL4多肽、IL4R多肽的受体、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13多肽、IL13多肽的受体、IL13RA1多肽(例如，IL13RA1多肽的ECD)、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13Rα2多肽(例如，IL13Rα2多肽的ECD)、IL22多肽、IL22多肽的受体(例如，IL22多肽的ECD)、IL22Rα1多肽(例如，IL22Rα1多肽的ECD)、IL10Rβ2多肽(例如，IL10Rβ2多肽的ECD)、IL33多肽、IL33多肽的受体、IL1RL1多肽(例如，IL1RL1多肽的ED)、EGF多肽、EGF多肽的受体、TGFα多肽、TGFα多肽的受体、EGFR多肽(例如，EGFR多肽的ECD)、MMP9多肽、FGF多肽(例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22或FGF23多肽)、FGF多肽的受体、FGFR多肽(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽)、FGFR多肽的ECD(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、神经调节蛋白多肽(例如，神经调节蛋白同种型I、II、III、IV、V或VI多肽)、神经调节蛋白多肽的受体、HER多肽(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽)、HER多肽的ECD(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽的ECD)、EpCAM多肽(例如，EpCAM多肽的ECD)、CD20多肽(例如，CD20多肽的ECD)、CD20多肽的配体、CD19多肽(例如，CD19多肽的ECD)、CD19多肽的配体、CGRP多肽(例如，α-CGRP多肽或β-CGRP多肽)、CGRP多肽的受体、α-CGRP多肽的受体、β-CGRP多肽的受体、CALCRL多肽(例如，CALCRL多肽的ECD)、RAMP多肽(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽)、RAMP多肽的ECD(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽的ECD)、IGF多肽(例如，IGF-1或IGF-2多肽)、IGF多肽的受体(例如，IGF-1或IGF-2多肽的受体)、IGFR多肽(例如，IGFR1或IGFR2多肽)、IGFR多肽的ECD(例如，IGFR1或IGFR2多肽的ECD)、IGFBP多肽(例如，IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5或IGFBP6多肽)、VEGF多肽(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽)、VEGF多肽的受体(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽的受体)、VEGFR多肽(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽)、VEGFR多肽的ECD(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽的ECD)、FLT1受体多肽(例如，FLT1受体多肽的ECD)、IL36多肽(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽)、IL36多肽的受体(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽的受体)、IL36R多肽(例如，IL36R多肽的ECD)、IL1R1多肽(例如，IL1R1多肽的ECD)、IL1R2多肽(例如，IL1R2多肽的ECD)、IL1RL1多肽(IL1RL1多肽的ECD)、IL18R1多肽(IL18R1多肽的ECD)、细菌毒素多肽、外毒素多肽、内毒素多肽、肉毒神经毒素多肽、破伤风毒素多肽、葡萄球菌毒素多肽、CD52多肽(例如，CD52多肽的ECD)、CD52多肽的配体、SIGLEC10多肽、PCSK9多肽、PCSK9多肽的受体、LDLR多肽(例如，LDLR多肽的ECD)、CEA多肽(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽)、CEA多肽的ECD(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽的ECD)、BAFF多肽、BAFF多肽的受体、TRAF多肽(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRAF7多肽)、TRAF多肽的受体(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5多肽的受体)、BCMA多肽、BCMA多肽的ECD、SOST多肽、SOST多肽的受体、LRP多肽(例如，LRP5或LRP6多肽)、LRP多肽的ECD(例如，LRP5或LRP6多肽的ECD)、DLL多肽(例如，DLL4多肽)、DLL多肽的受体、锯齿状多肽(例如，JAG1或JAG多肽)、锯齿状多肽的受体(例如，JAG1或JAG多肽的受体)、NOTCH多肽(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽)、NOTCH多肽的配体(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3,或NOTCH4多肽的配体)、VWF多肽、VWF多肽的受体、因子VIII多肽、因子VIII多肽的受体、血小板GP1b受体多肽(例如，血小板GP1b受体多肽的ECD)、整联蛋白αIIbβ3多肽(例如，整联蛋白αIIbβ3多肽的ECD)、IL2多肽、IL2多肽的受体、IL2R多肽(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽)、IL2R多肽的ECD(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽的ECD)、TGFβ多肽、TGFβ多肽的受体、饰胶蛋白聚糖多肽、EIF3I多肽、LTBP1多肽、TGFβR1多肽(例如，TGFβR1多肽的ECD)、YWHAE多肽、IgE多肽、IgE多肽的受体、Fc受体多肽(例如，FcεRI或FcεRII多肽)、Fc受体多肽的ECD(例如，FcεRI或FcεRII多肽的ECD)、KLK多肽(例如，KLK1、KLK2、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14或KLK15多肽)、Rankl多肽、Rankl多肽的受体、RANK多肽(例如，RANK多肽的ECD)、TSLP多肽、TSLP多肽的受体、CRLF2多肽(例如，CRLF2多肽的ECD)、IL7Rα多肽(例如，IL7Rα多肽的ECD)、S1P多肽、CD3多肽(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽)、CD3多肽的ECD(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD28多肽(例如，CD28多肽的ECD)、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、GnRH多肽、GNRH多肽的受体、GnRHR多肽(例如，GnRHR多肽的ECD)、ICAM多肽(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽)、ICAM多肽的受体(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽的受体)、JAM-A多肽、JAM-A多肽的受体、LFA-1多肽(例如，LFA-1多肽的ECD)、Nav1.7多肽、C5多肽(例如，C5a或C5b多肽)、C5多肽的受体(例如，C5a或C5b多肽的受体)、C5aR多肽(例如，C5aR多肽的ECD)、C5L2多肽(例如，C5L2多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17Ra多肽(例如，IL17Ra多肽的ECD)、EPO多肽、生长抑素多肽、GLP1多肽、胰高血糖素多肽等。
实施例7
变体IgG Fc融合蛋白的分离
可以合成编码包含至少一种治疗性多肽或抗体和本文所述的变体猫类、犬类或马类IgG Fc多肽(例如，具有改变的C1q、CD16和/或蛋白A结合亲和力的IgG Fc)的连续多肽(如式I、II、III、IV和/或V的连续多肽)的核苷酸序列并将其克隆至单独的哺乳动物表达载体中。
可以将所得载体单独地转染至CHO细胞中。对于包含信号序列的连续多肽，可以收集并过滤含有无信号肽的连续多肽的上清液。可以使用蛋白A柱(
蛋白A亲和树脂，Repligen)亲和纯化包含具有蛋白A结合的Fc IgG多肽的连续多肽。可以通过HPLC凝胶过滤和/或在不存在和存在还原剂(DTT)的情况下的SDS-PAGE分析来评估所得蛋白质的二聚化、聚集和/或硫化物连接的存在。
实施例8
用于增加和/或增强二硫化物形成的变体IgG Fc多肽
使用若干种直系同源铰链结构的三维蛋白质建模分析来确定用于修饰猫类IgG2铰链以增加二硫化物形成的大致位置。为了增加猫类IgG2铰链处的二硫化物形成，可以通过用半胱氨酸取代氨基酸来修饰铰链序列。例如，通过在对应于SEQ ID NO:69的位置14的氨基酸位置处用半胱氨酸取代甘氨酸来制备具有修饰铰链的变体猫类IgG2 Fc(SEQ IDNO:166)。
使用对若干种直系同源铰链结构的另外三维蛋白质建模分析来修饰猫类和马类IgG铰链以增强二硫化物形成。为了增强猫类IgG铰链处的二硫化物形成，可以通过以下方式来修饰铰链序列：在对应于野生型或变体猫类IgG1a(SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66)、猫类IgG1b(SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68)、或猫类IgG2(SEQ ID NO:69)的位置16的位置处用脯氨酸取代赖氨酸(例如，K16P)。具有修饰铰链的变体猫类IgG多肽的氨基酸序列的例子包括SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:168和SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:171。
为了增强马类IgG铰链处的二硫化物形成，可以通过以下方式来修饰铰链序列：在对应于具有铰链的野生型或变体马类IgG(例如，IgG2 Fc(SEQ ID NO:51))的位置3的位置处用丝氨酸取代半胱氨酸和/或在对应于具有铰链的马类IgG(例如，IgG2 Fc(SEQ ID NO:51)的位置20的位置处用脯氨酸取代谷氨酰胺(例如，C3S和/或Q20P)。具有修饰铰链的变体马类IgG多肽的氨基酸序列的例子包括SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:173、SEQ ID NO:174、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:176和SEQ ID NO:177。
可以将上述氨基酸取代掺入至本文所述的野生型或变体Fc多肽的铰链中。
使用三维蛋白质建模来设计猫类和马类变体IgG Fc多肽，其包含来自不同IgG同种型的铰链区的序列以用于增强重组产生和改善铰链二硫化物形成。可以制备包含来自猫类IgG1a或IgG1b的铰链区的序列的变体猫类IgG2 Fc多肽(例如，SEQ ID NO:178)。此外，可以制备包含来自马类IgG1铰链区的序列的变体马类IgG2 Fc多肽(例如，SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180)。
可以确定变体IgG Fc多肽的重组产生的水平和/或铰链二硫化物形成的水平，并且通过在还原和非还原条件下的SDS-PAGE分析将其与另一种IgG Fc(例如，相同或不同同种型的相应野生型IgG Fc，或另一种伴生动物的野生型或变体IgG Fc)的所述水平进行比较。
实施例9
包含GLP1和变体Fc多肽的示例性连续多肽
基于式I(ssGLP1-G8_I_VARfeIgG2(SEQ ID NO:184))和式III(ssGLP1-G8/GLP1-2G_III_WTfeIgG2(SEQ ID NO:185))设计包含胰高血糖素样肽-1(GLP1)多肽和具有半胱氨酸铰链修饰的变体猫类IgG Fc的示例性连续多肽，将其在CHO细胞中表达，并且通过蛋白A色谱法纯化。切割信号序列后的分泌蛋白的氨基酸序列分别为SEQ ID NO 186和187。变体猫类IgG2构建体的SDS-PAGE分析显示，与野生型猫类IgG2构建体相比，在不存在还原剂的情况下，较低分子量带中的蛋白质的量减少(比较图2B与图2A)。这些结果表明，对于两种变体猫类IgG2构建体而言Fc共价配对均得到改善。
此外，使用差示扫描荧光测定法来评估连续多肽在不同pH下的稳定性，如平均熔点温度(n＝3)所反映的(下表10)。在pH 6下时，变体猫类IgG2铰链的稳定性增加最明显。例如，与具有野生型猫类IgG2(SEQ ID NO:188和189)的相应构建体(其Tm分别为55.2℃和56.9℃)相比，具有变体猫类IgG2(SEQ ID NO:186和187)的构建体在pH 6下展现出更高的Tm(56.9℃和59.7℃)。
表10.
NC＝由于未观察到明确的相变点而不存在曲线。
实施例10
蛋白质结合动力学
本文所述的连续多肽与靶分子的结合亲和力可以使用生物层干涉法(Octet)评估。简言之，可以将连续多肽或生物素化的靶分子捕获至链霉亲和素传感器尖端。可以监测不同浓度的第二结合配偶体的缔合九十秒。可以监测解离600秒。可以减去仅缓冲液空白曲线以校正任何漂移，并且可以使用ForteBioTM数据分析软件将数据拟合至1:1结合模型以确定kon、koff和Kd。用于稀释和所有结合步骤的缓冲液可以是：20mM磷酸盐，150mM NaCl，pH7.2。
实施例11
包含IL13R ECD、IL4R ECD和变体犬类IgG Fc多肽的示例性连续多肽
可以制备包含IL13受体的细胞外结构域(IL13R ECD；例如，SEQ ID NO:190、191、192、193、194或195)、IL4R的细胞外结构域(IL4RECD；例如，SEQ ID NO:196、197、198、199、200或201)和本文所述的变体IgG Fc多肽的连续多肽。例如，测试了包含SEQ ID NO:190的犬类IL13RECD、接头、SEQ ID NO:196的犬类IL4R ECD和a)含有铰链和氨基酸序列SEQ IDNO:2的野生型犬类IgG-B Fc多肽或者b)含有铰链和氨基酸序列SEQ ID NO:13的C1q-变体犬类IgG-B Fc多肽的连续多肽(分别为SEQ ID NO:271和202)。
进行生物传感器结合分析，以确定IL13R(ECD)-IL4R(ECD)-野生型犬类IgG-B Fc(SEQ ID NO:271)与IL13R(ECD)-IL4R(ECD)-变体犬类IgG-B Fc(SEQ ID NO:202)相比的与C1q的结合亲和力。简言之，将犬类IL4生物素化并捕获至链霉亲和素传感器尖端。将IL13R(ECD)-IL4R(ECD)-野生型犬类IgG-B Fc(25μg/mL)或IL13R(ECD)-IL4R(ECD)-变体犬类IgG-B Fc(25μg/mL)与IL4结合的生物传感器复合。随后，使用复合物来结合250μg/mL的人C1q(目录号204876-1MG；Sigma Aldrich)。测量了人C1q结合任一复合物的能力。与IL13R(ECD)-IL4R(ECD)-野生型犬类IgG-B Fc相比时，观察到人C1q与IL13R(ECD)-IL4R变体犬类IgG-B Fc之间的结合降低。
实施例12
长期稳定性
可以评估包含本文所述的变体Fc IgG多肽的连续多肽的长期稳定性。例如，可以将样品在2℃-8℃下以不同浓度(例如，浓度为1mg/mL、1.3mg/mL、5mg/mL和/或10mg/mL)在PBS(pH 7.2)中储存一段时间(例如，一天、六个月和/或一年)。为了评价稳定性，可以通过蛋白质结合测定和/或基于细胞的测定来分析所储存的样品。
实施例13
血清稳定性
可以评估包含本文所述的变体Fc IgG多肽的连续多肽的血清稳定性。例如，可以将样品在生理温度(例如，37℃)下与血清一起在PBS(pH 7.2)中储存一段时间(例如，6小时、12小时和/或24小时)以测试体外血清稳定性。为了评价稳定性，可以通过蛋白质结合测定和/或基于细胞的测定来分析所储存的样品。
实施例14
体内药代动力学
包含本文所述的变体Fc IgG多肽的连续多肽的体内药代动力学可以在通过注射(例如，皮下或静脉)将单剂量的连续多肽施用至伴生动物之后进行评估。可以在给药之前(时间0)和之后的一定时间段(例如，4小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时和/或168小时)采取血清样品，并且通过定量ELISA或其他手段测量连续多肽的浓度。可以将连续多肽的血清浓度相对于时间作图，并且可以确定平均血清半衰期(t1/2)、平均Tmax、平均Cmax和平均曲线下面积(AUC)。
定量ELISA可以使用针对治疗性多肽的抗体和针对IgG-Fc的HRP缀合的抗体来定量来自体内药代动力学研究的血清样品中的连续多肽。可以用针对治疗性靶标的抗体(例如，在包被缓冲液中为5μg/mL，100μl/孔)包被96孔板。可以将板密封并在4℃下孵育过夜。可以用1X TBST一式三份洗涤板，并且添加封闭缓冲液。在除去封闭缓冲液之后，可以添加参考标准品和样品在封闭缓冲液中的连续稀释物(例如，100μl/孔)，并且将板在室温下孵育2小时。可以用1X TBST一式三份洗涤板，并且添加针对IgG-Fc的HRP缀合的抗体(例如，在封闭缓冲液中为0.1μg/mL，100μl/孔)。在室温下孵育1小时后，可以用1X TBST洗涤板。可以添加TMB底物(例如，ScyTek，目录号TM1999)(100μl/孔)，并且使其在室温下孵育1分钟。可以通过添加2M H2SO4(例如，50μl/孔)来停止反应。可以测量450nm处的吸光度，并且计算血清样品中连续多肽的浓度。
此外，可以使用基于细胞的活性测定来评估相同血清样品中连续多肽的浓度，以确定通过ELISA检测的连续多肽是否具有生物活性。
Claims (86)
1.一种多肽，所述多肽包含至少一种治疗性多肽和/或至少一种抗体、和变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力；
b)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力；
c)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力；
d)铰链区，其包含相对于野生型猫类或马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成，如在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析确定的；
e)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述至少一个氨基酸取代是半胱氨酸，并且其中所述变体IgG Fc多肽能够相对于所述野生型猫类IgG Fc多肽形成至少一个另外的链间二硫键；
f)相对于野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgGFc多肽相对于所述野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽具有增加的对C1q和/或CD16的结合亲和力；和/或
g)CH1区，其包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代，或
ii)在对应于SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
2.一种连续多肽，所述连续多肽包含：
i)第一治疗性多肽和/或抗体(TPA1)；
ii)第一接头(L1)；
iii)伴生动物物种的变体Fc多肽(Fc)；
iv)任选地，第二接头(L2)；以及
v)任选地，第二治疗性多肽和/或抗体(TPA2)，
其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力；
b)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力；
c)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力；
d)铰链区，其包含相对于野生型猫类或马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成，如在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析确定的；和/或
e)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述至少一个氨基酸取代是半胱氨酸，并且其中所述变体IgG Fc多肽能够相对于所述野生型猫类IgG Fc多肽形成至少一个另外的链间二硫键；
f)相对于野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgGFc多肽相对于所述野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽具有增加的对C1q和/或CD16的结合亲和力；和/或
g)CH1区，其包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代，或
ii)在对应于SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
3.根据权利要求2所述的连续多肽，所述连续多肽包含：
式(I)：TPA1-L1-Fc
式(II)：Fc-L1-TPA1；
式(III)：TPA1-L1-Fc-L2-TPA2；
式(IV)：TPA1-L1-TPA2-L2-Fc；或
式(V)：Fc-L1-TPA1-L2-TPA2。
4.一种多聚体蛋白，所述多聚体蛋白包含：
i)第一治疗性多肽和/或抗体(TPA1)、和第一变体IgG Fc多肽，所述第一变体IgG Fc多肽包含相对于第一野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，以及
ii)第二治疗性多肽和/或抗体(TPA2)、和第二变体IgG Fc多肽，所述第二变体IgG Fc多肽包含相对于第二野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中
a)所述第一变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:1的位置138、SEQ ID NO:2的位置137、SEQ ID NO:4的位置137或SEQ ID NO:6的位置138的位置处的氨基酸取代；
ii)在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ IDNO:69的位置154处的氨基酸取代；或
iii)在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的氨基酸取代；并且
b)所述第二变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:1的位置138、位置140和/或位置181，SEQ ID NO:2的位置137、位置139和/或位置180，SEQ ID NO:3的位置137、位置139和/或位置180，或SEQ ID NO:4的位置138、位置140和/或位置181的位置处的氨基酸取代；
ii)在对应于SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:117或SEQ IDNO:118的位置154、位置156和/或位置197的位置处的氨基酸取代；或
iii)在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131、位置133和/或位置174的位置处的氨基酸取代。
5.根据权利要求4所述的多聚体蛋白，其中所述第一变体IgG Fc多肽和/或所述第二变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白A的结合亲和力；
b)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力；
c)相对于伴生动物物种的野生型IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力；
d)铰链区，其包含相对于野生型猫类或马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸修饰，其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成，如在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析确定的；
e)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述至少一个氨基酸取代是半胱氨酸，并且其中所述第一和/或第二变体IgG Fc多肽能够相对于所述野生型猫类IgG Fc多肽形成至少一个另外的链间二硫键；和/或
f)相对于野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgGFc多肽相对于所述野生型犬类IgG-A或IgG-D Fc多肽具有增加的对C1q和/或CD16的结合亲和力；和/或
g)CH1区，其包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
i)在对应于SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代，或
ii)在对应于SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
6.根据权利要求4或权利要求5所述的多聚体蛋白，其中所述第一野生型IgG Fc多肽和所述第二野生型IgG Fc多肽来自相同的IgG亚型。
7.根据权利要求4或权利要求5所述的多聚体蛋白，其中所述第一野生型IgG Fc多肽和所述第二野生型IgG Fc多肽来自不同的IgG亚型。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中TPA2在存在时包含与TPA1相比不同的氨基酸序列。
9.根据权利要求2至8中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中TPA1和TPA2是不同的治疗性多肽或者是结合至不同靶标的抗体。
10.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的大于5x10-6M、大于1x10-5M、大于5x10-5M、大于1x10-4M、大于5x10-4M或大于1x10-3M的解离常数(Kd)与C1q和/或CD16结合。
11.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M的解离常数(Kd)与蛋白A结合。
12.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体犬类IgG-A或变体犬类IgG-D Fc多肽以如通过生物层干涉法测量的小于5x10-6M、小于1x10- 6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M的解离常数(Kd)与C1q和/或CD16结合。
13.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述伴生动物物种是犬类、猫类或马类。
14.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述野生型IgG Fc多肽是
a)犬类IgG-A Fc、IgG-B Fc、IgG-C Fc或IgG-D Fc；
b)马类IgG1 Fc、IgG2 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc、IgG5 Fc、IgG6 Fc或IgG7 Fc；或
c)猫类IgG1a Fc、IgG1b Fc或IgG2 Fc。
15.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，所述CH1区包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144、或SEQ ID NO:145的位置24和/或位置30处的至少一个氨基酸取代，或
b)在SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24和/或位置29处的至少一个氨基酸取代。
16.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，所述CH1区包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24的位置处的亮氨酸和/或在对应于其位置30的位置处的天冬酰胺；或
b)在对应于SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24的位置处的亮氨酸和/或在其位置29的位置处的天冬酰胺。
17.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，所述CH1区包含相对于野生型犬类或猫类IgG CH1区的至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:142、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145的位置24处的亮氨酸和/或在其位置30处的天冬酰胺；或
b)在SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的位置24处的亮氨酸和/或在其位置29处的天冬酰胺。
18.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含野生型或变体犬类或猫类轻链恒定区。
19.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含野生型或变体犬类或猫类轻链κ恒定区。
20.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区包含相对于野生型犬类或猫类轻链κ恒定区的至少一个氨基酸修饰，所述至少一个氨基酸修饰包括：
a)在对应于SEQ ID NO:150的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:156的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。
21.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区包含相对于野生型犬类或猫类轻链κ恒定区的至少一个氨基酸修饰，所述至少一个氨基酸修饰包括：
a)在对应于SEQ ID NO:150的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:156的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。
22.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区包含相对于野生型犬类或猫类轻链κ恒定区的至少一个氨基酸修饰，所述至少一个氨基酸修饰包括：
a)在对应于SEQ ID NO:150的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置22的位置处的精氨酸；或
b)在对应于SEQ ID NO:156的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于其位置22的位置处的精氨酸。
23.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区包含相对于野生型犬类或猫类轻链κ恒定区的至少一个氨基酸修饰，所述至少一个氨基酸修饰包括：
a)在SEQ ID NO:150的位置11处的丙氨酸和/或其位置22处的精氨酸；或
b)在SEQ ID NO:156的位置11处的丙氨酸和/或其位置22处的精氨酸。
24.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16的位置处的氨基酸取代；
b)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置3的位置处的氨基酸取代；和/或
c)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置20的位置处的氨基酸取代。
25.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16的位置处的氨基酸取代；
b)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置3的位置处的氨基酸取代；和/或
c)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置20的位置处的氨基酸取代。
26.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16处的氨基酸取代；
b)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:51的位置3处的氨基酸取代；和/或
c)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:51的位置20处的氨基酸取代。
27.所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)相对于野生型猫类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:69的位置16的位置处或在其位置16处的脯氨酸；
b)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置3的位置处或在其位置3处的丝氨酸；和/或
c)相对于野生型马类IgG Fc多肽的至少一个氨基酸取代，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:51的位置20的位置处或在其位置20处的脯氨酸。
28.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含来自不同同种型的IgG Fc多肽的铰链区或铰链区的一部分。
29.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含来自野生型猫类IgG-1Fc多肽或来自野生型马类IgG1 Fc多肽的铰链区或铰链区的一部分。
30.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:69的位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15或位置16的位置处的半胱氨酸。
31.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:69的位置8、位置9、位置10、位置11、位置12、位置13、位置14、位置15或位置16的位置处的半胱氨酸。
32.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:69的位置14的位置处的半胱氨酸。
33.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:69的位置14处的半胱氨酸。
34.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的氨基酸取代、和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置23的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置24的位置处的氨基酸取代；
c)在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置80的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的氨基酸取代；
d)在对应于SEQ ID NO:50的位置15的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:50的位置203的位置处的氨基酸取代；
e)在对应于SEQ ID NO:54的位置199的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ IDNO:54的位置200的位置处的氨基酸取代；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:55的位置199的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:55的位置200的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:55的位置201的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:55的位置202的位置处的氨基酸取代。
35.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的氨基酸取代、和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置23的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置24的位置处的氨基酸取代；
c)在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:6的位置80的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的氨基酸取代；
d)在对应于SEQ ID NO:50的位置15的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:50的位置203的位置处的氨基酸取代；
e)在对应于SEQ ID NO:54的位置199的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ IDNO:54的位置200的位置处的氨基酸取代；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:55的位置199的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:55的位置200的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:55的位置201的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:55的位置202的位置处的氨基酸取代。
36.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:1的位置21处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:1的位置23处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:1的位置25处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:1的位置80处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:1的位置205处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:1的位置207处的氨基酸取代；
b)在SEQ ID NO:4的位置21处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:4的位置23处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:4的位置24处的氨基酸取代；
c)在SEQ ID NO:4的位置21处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:6的位置23处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:6的位置25处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:6的位置80处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:6的位置207处的氨基酸取代；
d)在SEQ ID NO:50的位置15处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:50的位置203处的氨基酸取代；
e)在SEQ ID NO:54的位置199处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:54的位置200处的氨基酸取代；和/或
f)在SEQ ID NO:55的位置199处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:55的位置200处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:55的位置201处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:55的位置202处的氨基酸取代。
37.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ IDNO:1的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的丙氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的组氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置23的位置处的亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置24的位置处的异亮氨酸；
c)在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ IDNO:6的位置80的位置处的甘氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的组氨酸；
d)在对应于SEQ ID NO:50的位置15的位置处的苏氨酸或缬氨酸和/或在对应于SEQ IDNO:50的位置203的位置处的酪氨酸或缬氨酸；
e)在对应于SEQ ID NO:54的位置199的位置处的亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:54的位置200的位置处的组氨酸；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:55的位置199的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:55的位置200的位置处的组氨酸、在对应于SEQ ID NO:55的位置201的位置处的天冬酰胺和/或在对应于SEQ ID NO:55的位置202的位置处的组氨酸。
38.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:1的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:1的位置23处的亮氨酸、在SEQID NO:1的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:1的位置80处的甘氨酸、在SEQ ID NO:1的位置205处的丙氨酸和/或在SEQ ID NO:1的位置207处的组氨酸；
b)在SEQ ID NO:3的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:4的位置23处的亮氨酸和/或在SEQ ID NO:4的位置24处的异亮氨酸；
c)在SEQ ID NO:6的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:6的位置23处的亮氨酸、在SEQID NO:6的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:6的位置80处的甘氨酸和/或在SEQ ID NO:6的位置207处的组氨酸；
d)在SEQ ID NO:50的位置15处的苏氨酸或缬氨酸和/或在SEQ ID NO:50的位置203处的酪氨酸或缬氨酸；
e)在SEQ ID NO:54的位置199处的亮氨酸和/或在SEQ ID NO:54的位置200处的组氨酸；和/或
f)在SEQ ID NO:55的位置199处的亮氨酸、在SEQ ID NO:55的位置200处的组氨酸、在SEQ ID NO:55的位置201处的天冬酰胺和/或在SEQ ID NO:55的位置202处的组氨酸。
39.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置93的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:4的位置93的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:49的位置87的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:52的位置87的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:53的位置87的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:56的位置87的位置处的氨基酸取代；或
c)在对应于SEQ ID NO:65的位置198的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:66的位置198的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:67的位置198的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:68的位置198的位置处的氨基酸取代。
40.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置93的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:4的位置93的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:49的位置87的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:52的位置87的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:53的位置87的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:56的位置87的位置处的氨基酸取代；或
c)在对应于SEQ ID NO:65的位置198的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:66的位置198的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:67的位置198的位置处的氨基酸取代或在对应于SEQ ID NO:68的位置198的位置处的氨基酸取代。
41.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:2的位置93处的氨基酸取代或在SEQ ID NO:4的位置93处的氨基酸取代；
b)在SEQ ID NO:49的位置87处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:52的位置87处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:53的位置87处的氨基酸取代或在SEQ ID NO:56的位置87处的氨基酸取代；或
c)在SEQ ID NO:65的位置198处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:66的位置198处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:67的位置198处的氨基酸取代或在SEQ ID NO:68的位置198处的氨基酸取代。
42.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置93的位置处的精氨酸或在对应于SEQ ID NO:4的位置93的位置处的精氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:49的位置87的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:52的位置87的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:53的位置87的位置处的丝氨酸或在对应于SEQID NO:56的位置87的位置处的丝氨酸；或
c)在对应于SEQ ID NO:65的位置198的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:66的位置198的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:67的位置198的位置处的丙氨酸或在对应于SEQ ID NO:68的位置198的位置处的丙氨酸。
43.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:2的位置93处的精氨酸或在SEQ ID NO:4的位置93处的精氨酸；
b)在SEQ ID NO:49的位置87处的丝氨酸、在SEQ ID NO:52的位置87处的丝氨酸、在SEQID NO:53的位置87处的丝氨酸或在SEQ ID NO:56的位置87处的丝氨酸；或
c)在SEQ ID NO:65的位置198处的丙氨酸、在SEQ ID NO:66的位置198处的丙氨酸、在SEQ ID NO:67的位置198处的丙氨酸或在SEQ ID NO:68的位置198处的丙氨酸。
44.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置5的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置38的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置39的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置97的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:2的位置98的位置处的氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置5的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置38的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置39的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置97的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置98的位置处的氨基酸取代。
45.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置5的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置38的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置39的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:2的位置97的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:2的位置98的位置处的氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置5的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置38的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置39的位置处的氨基酸取代、在对应于SEQ ID NO:4的位置97的位置处的氨基酸取代和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置98的位置处的氨基酸取代。
46.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:2的位置5处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:2的位置38处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:2的位置39处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:2的位置97处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:2的位置98处的氨基酸取代；或
b)在SEQ ID NO:4的位置5处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:4的位置38处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:4的位置39处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:4的位置97处的氨基酸取代和/或在SEQ ID NO:4的位置98处的氨基酸取代。
47.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:2的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置38的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置39的位置处的精氨酸、在对应于SEQ IDNO:2的位置97的位置处的异亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:2的位置98的位置处的甘氨酸；或
b)在对应于SEQ ID NO:4的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置38的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置39的位置处的精氨酸、在对应于SEQ IDNO:4的位置97的位置处的异亮氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:4的位置98的位置处的甘氨酸。
48.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:2的位置5处的脯氨酸、在SEQ ID NO:2的位置38处的甘氨酸、在SEQ IDNO:2的位置39处的精氨酸、在SEQ ID NO:2的位置97处的异亮氨酸和/或在SEQ ID NO:2的位置98处的甘氨酸；或
b)在SEQ ID NO:4的位置5处的脯氨酸、在SEQ ID NO:4的位置38处的甘氨酸、在SEQ IDNO:4的位置39处的精氨酸、在SEQ ID NO:4的位置97处的异亮氨酸和/或在SEQ ID NO:4的位置98处的甘氨酸。
49.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含：
a)变体犬类IgG-A Fc多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置2的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置5的位置处的甲硫氨酸或赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQID NO:1的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置35的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置38的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:1的位置39的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置65的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置93的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置96的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:1的位置97的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置98的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的丙氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的组氨酸；或
b)变体犬类IgG-D Fc多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:6的位置2的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置5的位置处的甲硫氨酸或赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置35的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置38的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:6的位置39的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置65的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置93的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置96的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:6的位置97的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置98的位置处的丙氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的组氨酸。
50.一种多肽，所述多肽包含：
a)变体犬类IgG-AFc多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:1的位置2的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置5的位置处的甲硫氨酸或赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ IDNO:1的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置35的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置38的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:1的位置39的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置65的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置93的位置处的赖氨酸、在对应于SEQID NO:1的位置96的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:1的位置97的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置98的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处的丙氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:1的位置207的位置处的组氨酸；或
b)变体犬类IgG-D Fc多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:6的位置2的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置5的位置处的甲硫氨酸或赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置35的位置处的缬氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置38的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:6的位置39的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置65的位置处的谷氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置93的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置96的位置处的天冬酰胺、在对应于SEQ ID NO:6的位置97的位置处的赖氨酸、在对应于SEQ ID NO:6的位置98的位置处的丙氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:6的位置207的位置处的组氨酸。
51.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含：
a)变体犬类IgG-AFc多肽，其包含在SEQ ID NO:1的位置2处的丙氨酸、在SEQ ID NO:1的位置5处的甲硫氨酸或赖氨酸、在SEQ ID NO:1的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:1的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:1的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:1的位置35处的缬氨酸、在SEQ ID NO:1的位置38处的天冬酰胺、在SEQ ID NO:1的位置39处的脯氨酸、在SEQ IDNO:1的位置65处的谷氨酸、在SEQ ID NO:1的位置80处的甘氨酸、在SEQ ID NO:1的位置93处的赖氨酸、在SEQ ID NO:1的位置96处的天冬酰胺、在SEQ ID NO:1的位置97处的赖氨酸、在SEQ ID NO:1的位置98处的丙氨酸、在SEQ ID NO:1的位置205处的丙氨酸和/或在SEQ IDNO:1的位置207处的组氨酸；或
b)变体犬类IgG-D Fc多肽，其包含在SEQ ID NO:6的位置2处的丙氨酸、在SEQ ID NO:6的位置5处的甲硫氨酸或赖氨酸、在SEQ ID NO:6的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:6的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:6的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:6的位置35处的缬氨酸、在SEQ ID NO:6的位置38处的天冬酰胺、在SEQ ID NO:6的位置39处的脯氨酸、在SEQ IDNO:6的位置65处的谷氨酸、在SEQ ID NO:6的位置80处的甘氨酸、在SEQ ID NO:6的位置93处的赖氨酸、在SEQ ID NO:6的位置96处的天冬酰胺、在SEQ ID NO:6的位置97处的赖氨酸、在SEQ ID NO:6的位置98处的丙氨酸和/或在SEQ ID NO:6的位置207处的组氨酸。
52.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体IgG Fc多肽，所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸或在对应于SEQ ID NO:6的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:69的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸或在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸；或
c)在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的酪氨酸或色氨酸。
53.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的酪氨酸或色氨酸或在对应于SEQ ID NO:6的位置138的位置处的酪氨酸或色氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:69的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸、在对应于SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸或在对应于SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154的位置处的酪氨酸或色氨酸；或
c)在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的酪氨酸或色氨酸。
54.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:1的位置138处的酪氨酸或色氨酸、在SEQ ID NO:2的位置137处的酪氨酸或色氨酸、在SEQ ID NO:4的位置137处的酪氨酸或色氨酸或在SEQ ID NO:6的位置138处的酪氨酸或色氨酸；或
b)在SEQ ID NO:69的位置154处的酪氨酸或色氨酸、在SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154处的酪氨酸或色氨酸或在SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的位置154处的酪氨酸或色氨酸；和/或
c)在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131处的酪氨酸或色氨酸。
55.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含变体IgG Fc多肽，所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置154的位置处的丝氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的丝氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:1的位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置156的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置156的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置156的位置处的丙氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置133的位置处的丙氨酸；和/或
c)在对应于SEQ ID NO:1的位置181的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置180的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置180的位置处的苏氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置181的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置197的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置197的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置197的位置处的苏氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置174的位置处的苏氨酸。
56.一种多肽，所述多肽包含变体IgG Fc多肽，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置137的位置处的丝氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置138的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154的位置处的丝氨酸、在对应于SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置154的位置处的丝氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131的位置处的丝氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:1的位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置156的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置156的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置156的位置处的丙氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置133的位置处的丙氨酸；和/或
c)在对应于SEQ ID NO:1的位置181的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:2的位置180的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:4的位置180的位置处的苏氨酸、在对应于SEQID NO:6的位置181的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:69的位置197的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置197的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置197的位置处的苏氨酸或在对应于SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置174的位置处的苏氨酸。
57.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:1的位置138处的丝氨酸、在SEQ ID NO:2的位置137处的丝氨酸、在SEQID NO:4的位置137处的丝氨酸、在SEQ ID NO:6的位置138处的丝氨酸、在SEQ ID NO:69的位置154处的丝氨酸、在SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置154处的丝氨酸、在SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置154处的丝氨酸或在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置131处的丝氨酸；
b)在SEQ ID NO:1的位置140处的丙氨酸、在SEQ ID NO:2的位置139处的丙氨酸、在SEQID NO:4的位置139处的丙氨酸、在SEQ ID NO:6的位置140处的丙氨酸、在SEQ ID NO:69的位置156处的丙氨酸、在SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置156处的丙氨酸、在SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置156处的丙氨酸或在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置133处的丙氨酸；和/或；
c)在SEQ ID NO:1的位置181处的苏氨酸、在SEQ ID NO:2的位置181处的苏氨酸、在SEQID NO:4的位置181处的苏氨酸、在SEQ ID NO:6的位置181处的苏氨酸、在SEQ ID NO:69的位置197处的苏氨酸、在SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66的位置197处的苏氨酸、在SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的位置197处的苏氨酸或在SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的位置174处的苏氨酸。
58.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述多肽或所述变体Fc多肽是糖基化的。
59.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述多肽或所述变体Fc多肽是非糖基化的。
60.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中L1和L2在存在时各自独立地是柔性接头。
61.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中L1和L2在存在时的氨基酸序列各自独立地包含100％、至少95％、至少90％、至少85％的丝氨酸和/或甘氨酸氨基酸残基。
62.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述多肽、连续多肽或多聚体多肽在C末端包含延伸部分。
63.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述多肽、连续多肽或多聚体多肽在C末端包含一个甘氨酸残基、两个甘氨酸残基、三个甘氨酸残基、四个甘氨酸残基、五个甘氨酸残基、六个甘氨酸残基、七个甘氨酸残基、八个甘氨酸残基或大于八个甘氨酸残基。
64.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述连续多肽在其C末端包含SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、SEQ ID
NO:160、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:164或SEQ IDNO:165的氨基酸序列。
65.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述治疗性多肽TPA1和/或TPA2选自NGF多肽、NGF多肽的受体(例如，NGF多肽的受体的ECD)、TrkA多肽(例如，TrkA多肽的ECD)、LNGFR多肽(例如，LNGFR多肽的ECD)、TNFα多肽、TNFα多肽的受体、TNFR多肽(例如，TNFR多肽的ECD)、TNFR1多肽(例如，TNFR1多肽的ECD)、TNFR2多肽(例如，TNFR2多肽的ECD)、IL5多肽、IL5多肽的受体、IL5R多肽(例如，IL5R多肽的ECD)、IL5Rα多肽(例如，IL5Rα多肽的ECD)、IL6多肽、IL6多肽的受体、IL6R多肽(例如，IL6R多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17R多肽(例如，IL17R多肽的ECD)、IL17RA多肽(例如IL17RA多肽的ECD)、IL17RB多肽(例如，IL17RB多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、IL23多肽、IL23多肽的受体、IL23R多肽(例如，IL23R多肽的ECD)、IL12Rβ1多肽(例如，IL12Rβ1多肽的ECD)、PDL1多肽、PDL1多肽的受体、PDL2多肽、PDL2多肽的受体、PD1多肽(例如，PD1多肽的ECD)、整联蛋白多肽(例如，ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7或ITGB8多肽)、整联蛋白多肽的受体、纤连蛋白多肽(例如，纤连蛋白多肽的ECD)、玻连蛋白多肽(例如，玻连蛋白多肽的ECD)、胶原蛋白多肽(例如，胶原蛋白多肽的ECD)、层粘连蛋白多肽(例如，层粘连蛋白多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD86多肽、CD86多肽的受体、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、B7-H3多肽、B7-H3多肽的受体(例如，B7-H3多肽的受体的ECD)、LAG-3多肽(例如，LAG-3多肽的ECD)、IL31多肽、IL31多肽的受体、IL31RA多肽(例如，IL31RA多肽的ECD)、OSMR多肽(例如，OSMR多肽的ECD)、IL4多肽、IL4R多肽的受体、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13多肽、IL13多肽的受体、IL13RA1多肽(例如，IL13RA1多肽的ECD)、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13Rα2多肽(例如，IL13Rα2多肽的ECD)、IL22多肽、IL22多肽的受体(例如，IL22多肽的ECD)、IL22Rα1多肽(例如，IL22Rα1多肽的ECD)、IL10Rβ2多肽(例如，IL10Rβ2多肽的ECD)、IL33多肽、IL33多肽的受体、IL1RL1多肽(例如，IL1RL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、TGFα多肽、TGFα多肽的受体、EGFR多肽(例如，EGFR多肽的ECD)、MMP9多肽、FGF多肽(例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22或FGF23多肽)、FGF多肽的受体、FGFR多肽(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽)、FGFR多肽的ECD(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、神经调节蛋白多肽(例如，神经调节蛋白同种型I、II、III、IV、V或VI多肽)、神经调节蛋白多肽的受体、HER多肽(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽)、HER多肽的ECD(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽的ECD)、EpCAM多肽(例如，EpCAM多肽的ECD)、CD20多肽(例如，CD20多肽的ECD)、CD20多肽的配体、CD19多肽(例如，CD19多肽的ECD)、CD19多肽的配体、CGRP多肽(例如，α-CGRP多肽或β-CGRP多肽)、CGRP多肽的受体、α-CGRP多肽的受体、β-CGRP多肽的受体、CALCRL多肽(例如，CALCRL多肽的ECD)、RAMP多肽(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽)、RAMP多肽的ECD(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽的ECD)、IGF多肽(例如，IGF-1或IGF-2多肽)、IGF多肽的受体(例如，IGF-1或IGF-2多肽的受体)、IGFR多肽(例如，IGFR1或IGFR2多肽)、IGFR多肽的ECD(例如，IGFR1或IGFR2多肽的ECD)、IGFBP多肽(例如，IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5或IGFBP6多肽)、VEGF多肽(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽)、VEGF多肽的受体(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽的受体)、VEGFR多肽(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽)、VEGFR多肽的ECD(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽的ECD)、FLT1受体多肽(例如，FLT1受体多肽的ECD)、IL36多肽(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽)、IL36多肽的受体(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽的受体)、IL36R多肽(例如，IL36R多肽的ECD)、IL1R1多肽(例如，IL1R1多肽的ECD)、IL1R2多肽(例如，IL1R2多肽的ECD)、IL1RL1多肽(IL1RL1多肽的ECD)、IL18R1多肽(IL18R1多肽的ECD)、细菌毒素多肽、外毒素多肽、内毒素多肽、肉毒神经毒素多肽、破伤风毒素多肽、葡萄球菌毒素多肽、CD52多肽(例如，CD52多肽的ECD)、CD52多肽的配体、SIGLEC10多肽、PCSK9多肽、PCSK9多肽的受体、LDLR多肽(例如，LDLR多肽的ECD)、CEA多肽(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽)、CEA多肽的ECD(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽的ECD)、BAFF多肽、BAFF多肽的受体、TRAF多肽(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRAF7多肽)、TRAF多肽的受体(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5多肽的受体)、BCMA多肽、BCMA多肽的ECD、SOST多肽、SOST多肽的受体、LRP多肽(例如，LRP5或LRP6多肽)、LRP多肽的ECD(例如，LRP5或LRP6多肽的ECD)、DLL多肽(例如，DLL4多肽)、DLL多肽的受体、锯齿状多肽(例如，JAG1或JAG多肽)、锯齿状多肽的受体(例如，JAG1或JAG多肽的受体)、NOTCH多肽(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽)、NOTCH多肽的配体(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽的配体)、VWF多肽、VWF多肽的受体、因子VIII多肽、因子VIII多肽的受体、血小板GP1b受体多肽(例如，血小板GP1b受体多肽的ECD)、整联蛋白αIIbβ3多肽(例如，整联蛋白αIIbβ3多肽的ECD)、IL2多肽、IL2多肽的受体、IL2R多肽(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽)、IL2R多肽的ECD(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽的ECD)、TGFβ多肽、TGFβ多肽的受体、饰胶蛋白聚糖多肽、EIF3I多肽、LTBP1多肽、TGFβR1多肽(例如，TGFβR1多肽的ECD)、YWHAE多肽、IgE多肽、IgE多肽的受体、Fc受体多肽(例如，FcεRI或FcεRII多肽)、Fc受体多肽的ECD(例如，FcεRI或FcεRII多肽的ECD)、KLK多肽(例如，KLK1、KLK2、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14或KLK15多肽)、Rankl多肽、Rankl多肽的受体、RANK多肽(例如，RANK多肽的ECD)、TSLP多肽、TSLP多肽的受体、CRLF2多肽(例如，CRLF2多肽的ECD)、IL7Rα多肽(例如，IL7Rα多肽的ECD)、S1P多肽、CD3多肽(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽)、CD3多肽的ECD(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD28多肽(例如，CD28多肽的ECD)、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、GnRH多肽、GNRH多肽的受体、GnRHR多肽(例如，GnRHR多肽的ECD)、ICAM多肽(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽)、ICAM多肽的受体(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽的受体)、JAM-A多肽、JAM-A多肽的受体、LFA-1多肽(例如，LFA-1多肽的ECD)、Nav1.7多肽、C5多肽(例如，C5a或C5b多肽)、C5多肽的受体(例如，C5a或C5b多肽的受体)、C5aR多肽(例如，C5aR多肽的ECD)、C5L2多肽(例如，C5L2多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17Ra多肽(例如，IL17Ra多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、EPO多肽、生长抑素多肽、GLP1多肽和胰高血糖素多肽。
66.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述治疗性多肽TPA1和/或TPA2是犬类多肽、猫类多肽或马类多肽。
67.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述抗体TPA1和/或TPA2是结合选自以下的靶多肽的抗体：NGF多肽、NGF多肽的受体(例如，NGF多肽的受体的ECD)、TrkA多肽(例如，TrkA多肽的ECD)、LNGFR多肽(例如，LNGFR多肽的ECD)、TNFα多肽、TNFα多肽的受体、TNFR多肽(例如，TNFR多肽的ECD)、TNFR1多肽(例如，TNFR1多肽的ECD)、TNFR2多肽(例如，TNFR2多肽的ECD)、IL5多肽、IL5多肽的受体、IL5R多肽(例如，IL5R多肽的ECD)、IL5Rα多肽(例如，IL5Rα多肽的ECD)、IL6多肽、IL6多肽的受体、IL6R多肽(例如，IL6R多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17R多肽(例如，IL17R多肽的ECD)、IL17RA多肽(例如IL17RA多肽的ECD)、IL17RB多肽(例如，IL17RB多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、IL23多肽、IL23多肽的受体、IL23R多肽(例如，IL23R多肽的ECD)、IL12Rβ1多肽(例如，IL12Rβ1多肽的ECD)、PDL1多肽、PDL1多肽的受体、PDL2多肽、PDL2多肽的受体、PD1多肽(例如，PD1多肽的ECD)、整联蛋白多肽(例如，ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA10、ITGA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7或ITGB8多肽)、整联蛋白多肽的受体、纤连蛋白多肽(例如，纤连蛋白多肽的ECD)、玻连蛋白多肽(例如，玻连蛋白多肽的ECD)、胶原蛋白多肽(例如，胶原蛋白多肽的ECD)、层粘连蛋白多肽(例如，层粘连蛋白多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD86多肽、CD86多肽的受体、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、B7-H3多肽、B7-H3多肽的受体(例如，B7-H3多肽的受体的ECD)、LAG-3多肽(例如，LAG-3多肽的ECD)、IL31多肽、IL31多肽的受体、IL31RA多肽(例如，IL31RA多肽的ECD)、OSMR多肽(例如，OSMR多肽的ECD)、IL4多肽、IL4R多肽的受体、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13多肽、IL13多肽的受体、IL13RA1多肽(例如，IL13RA1多肽的ECD)、IL4R多肽(例如，IL4R多肽的ECD)、IL13Rα2多肽(例如，IL13Rα2多肽的ECD)、IL22多肽、IL22多肽的受体(例如，IL22多肽的ECD)、IL22Rα1多肽(例如，IL22Rα1多肽的ECD)、IL10Rβ2多肽(例如，IL10Rβ2多肽的ECD)、IL33多肽、IL33多肽的受体、IL1RL1多肽(例如，IL1RL1多肽的ED)、EGF多肽、EGF多肽的受体、TGFα多肽、TGFα多肽的受体、EGFR多肽(例如，EGFR多肽的ECD)、MMP9多肽、FGF多肽(例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22或FGF23多肽)、FGF多肽的受体、FGFR多肽(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽)、FGFR多肽的ECD(例如，FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4或FGFRL1多肽的ECD)、EGF多肽、EGF多肽的受体、神经调节蛋白多肽(例如，神经调节蛋白同种型I、II、III、IV、V或VI多肽)、神经调节蛋白多肽的受体、HER多肽(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽)、HER多肽的ECD(例如，HER1、HER2、HER3或HER4多肽的ECD)、EpCAM多肽(例如，EpCAM多肽的ECD)、CD20多肽(例如，CD20多肽的ECD)、CD20多肽的配体、CD19多肽(例如，CD19多肽的ECD)、CD19多肽的配体、CGRP多肽(例如，α-CGRP多肽或β-CGRP多肽)、CGRP多肽的受体、α-CGRP多肽的受体、β-CGRP多肽的受体、CALCRL多肽(例如，CALCRL多肽的ECD)、RAMP多肽(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽)、RAMP多肽的ECD(例如，RAMP1、RAMP2或RAMP3多肽的ECD)、IGF多肽(例如，IGF-1或IGF-2多肽)、IGF多肽的受体(例如，IGF-1或IGF-2多肽的受体)、IGFR多肽(例如，IGFR1或IGFR2多肽)、IGFR多肽的ECD(例如，IGFR1或IGFR2多肽的ECD)、IGFBP多肽(例如，IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5或IGFBP6多肽)、VEGF多肽(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽)、VEGF多肽的受体(例如，VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PGF多肽的受体)、VEGFR多肽(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽)、VEGFR多肽的ECD(例如，VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3多肽的ECD)、FLT1受体多肽(例如，FLT1受体多肽的ECD)、IL36多肽(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽)、IL36多肽的受体(例如，IL36A、IL36B或IL36G多肽的受体)、IL36R多肽(例如，IL36R多肽的ECD)、IL1R1多肽(例如，IL1R1多肽的ECD)、IL1R2多肽(例如，IL1R2多肽的ECD)、IL1RL1多肽(IL1RL1多肽的ECD)、IL18R1多肽(IL18R1多肽的ECD)、细菌毒素多肽、外毒素多肽、内毒素多肽、肉毒神经毒素多肽、破伤风毒素多肽、葡萄球菌毒素多肽、CD52多肽(例如，CD52多肽的ECD)、CD52多肽的配体、SIGLEC10多肽、PCSK9多肽、PCSK9多肽的受体、LDLR多肽(例如，LDLR多肽的ECD)、CEA多肽(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽)、CEA多肽的ECD(例如，CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e或CD66f多肽的ECD)、BAFF多肽、BAFF多肽的受体、TRAF多肽(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5、TRAF6、TRAF7多肽)、TRAF多肽的受体(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF4、TRAF5多肽的受体)、BCMA多肽、BCMA多肽的ECD、SOST多肽、SOST多肽的受体、LRP多肽(例如，LRP5或LRP6多肽)、LRP多肽的ECD(例如，LRP5或LRP6多肽的ECD)、DLL多肽(例如，DLL4多肽)、DLL多肽的受体、锯齿状多肽(例如，JAG1或JAG多肽)、锯齿状多肽的受体(例如，JAG1或JAG多肽的受体)、NOTCH多肽(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽)、NOTCH多肽的配体(例如，NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3或NOTCH4多肽的配体)、VWF多肽、VWF多肽的受体、因子VIII多肽、因子VIII多肽的受体、血小板GP1b受体多肽(例如，血小板GP1b受体多肽的ECD)、整联蛋白αIIbβ3多肽(例如，整联蛋白αIIbβ3多肽的ECD)、IL2多肽、IL2多肽的受体、IL2R多肽(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽)、IL2R多肽的ECD(例如，IL2Rα、IL2Rβ或IL2Rγ多肽的ECD)、TGFβ多肽、TGFβ多肽的受体、饰胶蛋白聚糖多肽、EIF3I多肽、LTBP1多肽、TGFβR1多肽(例如，TGFβR1多肽的ECD)、YWHAE多肽、IgE多肽、IgE多肽的受体、Fc受体多肽(例如，FcεRI或FcεRII多肽)、Fc受体多肽的ECD(例如，FcεRI或FcεRII多肽的ECD)、KLK多肽(例如，KLK1、KLK2、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14或KLK15多肽)、Rankl多肽、Rankl多肽的受体、RANK多肽(例如，RANK多肽的ECD)、TSLP多肽、TSLP多肽的受体、CRLF2多肽(例如，CRLF2多肽的ECD)、IL7Rα多肽(例如，IL7Rα多肽的ECD)、S1P多肽、CD3多肽(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽)、CD3多肽的ECD(例如，CD3γ多肽、CD3δ多肽或CD3ε多肽的ECD)、CD80多肽、CD80多肽的受体、CD28多肽(例如，CD28多肽的ECD)、CTLA-4多肽(例如，CTLA-4多肽的ECD)、GnRH多肽、GNRH多肽的受体、GnRHR多肽(例如，GnRHR多肽的ECD)、ICAM多肽(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽)、ICAM多肽的受体(例如，ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4或ICAM-5多肽的受体)、JAM-A多肽、JAM-A多肽的受体、LFA-1多肽(例如，LFA-1多肽的ECD)、Nav1.7多肽、C5多肽(例如，C5a或C5b多肽)、C5多肽的受体(例如，C5a或C5b多肽的受体)、C5aR多肽(例如，C5aR多肽的ECD)、C5L2多肽(例如，C5L2多肽的ECD)、IL17多肽、IL17多肽的受体、IL17Ra多肽(例如，IL17Ra多肽的ECD)、IL17RC多肽(例如，IL17RC多肽的ECD)、EPO多肽、生长抑素多肽、GLP1多肽和胰高血糖素多肽。
68.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述抗体结合犬类靶多肽、猫类靶多肽或马类靶多肽。
69.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，其中所述变体IgG Fc多肽包含与以下的氨基酸序列具有至少90％同一性、至少95％同一性、至少97％同一性或至少99％同一性的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180和/或250。
70.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、连续多肽或多聚体蛋白，所述多肽、连续多肽或多聚体蛋白包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、57、58、59、60、61、62、63、64、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、148、149、150、151、154、155、157、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、271、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249和/或250。
71.一种多肽，其包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、57、58、59、60、61、62、63、64、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、148、149、150、151、154、155、157、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、271、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249和/或250。
72.根据前述权利要求中任一项所述的多肽、多聚体蛋白或连续多肽，其中所述至少一个氨基酸修饰或取代包括用氨基酸衍生物进行的氨基酸取代。
73.一种分离的核酸，其编码根据前述权利要求中任一项所述的多肽、多聚体蛋白或连续多肽。
74.一种宿主细胞，其包含根据权利要求73所述的核酸。
75.一种产生多肽的方法，其包括培养根据权利要求74所述的宿主细胞并分离所述多肽。
76.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至72中任一项所述的多肽、多聚体蛋白或连续多肽，和药学上可接受的载体。
77.一种将细胞暴露于根据权利要求1至72或76中任一项所述的多肽、多聚体蛋白、连续多肽或药物组合物的方法。
78.根据权利要求77所述的方法，其中将所述细胞离体暴露于所述多肽、异二聚体蛋白、连续多肽或所述药物组合物。
79.根据权利要求77所述的方法，其中将所述细胞体内暴露于所述多肽、异二聚体蛋白、连续多肽或所述药物组合物。
80.根据权利要求77至79中任一项所述的方法，其中所述细胞是人类细胞、犬类细胞、猫类细胞或马类细胞。
81.一种将多肽递送至受试者的方法，其包括肠胃外施用根据权利要求1至72或76中任一项所述的多肽、多聚体蛋白、连续多肽或药物组合物。
82.一种将多肽递送至受试者的方法，其包括通过以下途径施用根据权利要求1至72或76中任一项所述的多肽、多聚体蛋白、连续多肽或药物组合物：肌内途径、腹膜内途径、脑脊髓内途径、皮下途径、动脉内途径、滑膜内途径、鞘内途径或吸入途径。
83.一种治疗患有糖尿病或肥胖症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至72或76中任一项所述的多肽、多聚体蛋白、连续多肽或药物组合物。
84.根据权利要求81至83中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类受试者。
85.根据权利要求81至83中任一项所述的方法，其中所述受试者是伴生动物物种。
86.根据权利要求85所述的方法，其中所述伴生动物物种是犬类、马类或猫类。
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