CN113444808B - Loc114108859及其新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及LOC114108859及其新用途。脂肪不仅可以影响肉品质，也会影响健康，为探讨家畜脂肪发育的分子机制，本研究以多浪羊与小尾寒羊皮下脂肪组织为研究对象，使用RNA‑seq技术对基因进行测序分析并使用分子实验进行验证，获得与绵羊皮下脂肪相关的lncRNA及其靶基因。本发明为培育优质肉用绵羊及预防治疗肥胖、脂代谢综合征等疾病提供基础。

Description

LOC114108859及其新用途

技术领域

本发明属于农业基因工程技术领域，具体涉及LOC114108859及其新用途。

背景技术

脂肪不仅可以影响肉品质，也会影响健康。对人类来说过度的脂肪沉积会造成肥胖并且还会引起一系列代谢综合征，对动物来说会造成肉品质的不佳。羊的品种不同，其脂肪沉积能力也有所差异。多浪羊与小尾寒羊同为我国优质地方绵羊品种，但是多浪羊相对于小尾寒羊来说脂肪沉积能力更强，属于肉脂兼用型绵羊，而小尾寒羊属于短瘦尾型绵羊，皮下脂肪较少，二者的差异为我们研究绵羊脂肪沉积提供了良好素材。

lncRNA是一种不低于200个核苷酸的重要调控性非编码RNA，大部分lncRNA含有3'多聚腺苷酸(poly A)尾和5'帽子结构，通过互补配对与核酸分子结合。lncRNA一级结构的核酸顺序具有较低的保守性，二级结构以及更高级结构更加稳定，可凭借自身高效折叠能力实现。以lncRNA相对于基因组上蛋白编码基因的位置为依据将它分为五类，包括内含子区(intronic)lncRNA、基因间(intergenic)lncRNA、反/正义链(anti/sense)lncRNA和双向(bidirectional)lncRNA。lncRNA可以影响包括转录、转录后及表观遗传等多层面的基因表达，进而影响脂质代谢以及成脂分化，间接影响肉质。

为探讨脂肪发育的分子机制，本研究以多浪羊与小尾寒羊皮下脂肪组织为研究对象，使用RNA-seq技术对基因进行测序分析，以期为培育优质肉用绵羊及预防治疗肥胖、脂代谢综合征等疾病提供基础。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种与绵羊脂肪相关的lncRNA，所述lncRNA 是经过测序及生物信息学分析筛选并使用分子实验验证获得的。

一种与绵羊脂肪相关的lncRNA，所述lncRNA为LOC114108859，序列与SEQ ID NO.1具有90％以上序列同源性。

优选的，LOC114108859序列与SEQ ID NO.1具有95％以上序列同源性；更优选的，长链非编码RNA序列为SEQ ID NO.1。

优选的，脂肪为皮下脂肪或肌内脂肪。

本发明的第二目的是提供一种检测与绵羊脂肪或肉用性能相关的试剂。

所述试剂通过测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样本中LOC114108859基因及其靶基因的表达水平。

优选的，所述LOC114108859基因的靶基因为SCD基因。

所述肉用性能是指产肉量、胴体组成、肉中脂肪含量、肉品等级、脂肪色泽、肌内脂肪含量等方面的性能。

优选的，脂肪为皮下脂肪或肌内脂肪。

本发明的第三目的是提供一种检测与绵羊脂肪或肉用性能相关的试剂盒。

所述试剂盒包含进行DNA微阵列、寡核苷酸微阵列、RNA印迹法、RNase保护试验和反转录聚合酶链反应所必需的DNA芯片、寡核苷酸芯片、探针或引物，以检测LOC114108859基因及其靶基因的表达水平。

优选的，该试剂盒包括QPCR实验中使用的反转录引物和/或扩增引物，所述反转录引物是Oligo(dT)特异性的RT引物。

优选的，试剂盒包含用于核酸扩增的引物对，检测LOC114108859基因的表达水平。

本发明的第四目的是提供LOC114108859及其靶基因用于制备与绵羊脂肪或肉用性能相关的检测试剂中的应用。

优选的，通过测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样本中LOC114108859基因及其靶基因的表达水平。

优选的，核酸扩增技术采用一对特异性引物扩增LOC114108859基因；核酸杂交包括与LOC114108859基因的核酸序列杂交的探针。

优选的，用于核酸扩增的引物对序列为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。

优选的，所述样本为组织。更优选的，样本为脂肪组织。

本发明的第五目的是上述lncRNA、试剂及试剂盒在检测与绵羊脂肪或肉用性能相关产品中的应用。

本发明的第六目的是上述lncRNA、试剂及试剂盒在选育肉用绵羊中的应用。

“多核苷酸”或“核酸”在本文中可互换使用，指任何长度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸，核糖核苷酸，经过修饰的核苷酸或碱基，和/或其类似物，或者是可通过DNA或RNA聚合酶，或者通过合成反应掺入聚合物中的任何底物。如此，例如，本文中所定义的多核苷酸包括但不限于单链和双链DNA，包含单链区和双链区的DNA，单链和双链RNA，及包含单链区和双链区的RNA，包含DNA和RNA的杂合分子，它可以是单链的，或者更典型的是双链的，或者包含单链区和双链区。另外，术语“多核苷酸”在用于本文时指包含RNA或DNA或RNA和DNA二者的三链区。此类区中的链可来自相同分子或来自不同分子。所述区可包含一种或多种分子的整个，但是更典型的是只包含有些分子的一个区。三股螺旋区的分子之一常是寡核苷酸。术语“多核苷酸”明确包括cDNA。

多核苷酸可包含经过修饰的核苷酸，诸如甲基化核苷酸及其类似物。对核苷酸结构的修饰可以在装配聚合物之前或之后进行。核苷酸序列可以由非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在合成后进一步修饰，诸如通过与标记物缀合。其它类型的修饰包括例如“帽”，将一个或多个天然存在的核苷酸用类似物替代，核苷酸间修饰诸如例如具有不带电荷连接(例如甲基膦酸酯，磷酸三酯，磷酰胺酯(phosphoamidate)，氨基甲酸酯等)和具有带电荷连接(例如硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯等)的修饰，含有悬垂模块(pendant moiety)诸如例如蛋白质(例如核酸酶，毒素，抗体，信号肽，聚L-赖氨酸等)的修饰，具有嵌入剂(例如吖啶，补骨脂素等)的修饰，含有螯合剂(例如金属，放射性金属，硼，氧化性金属等)的修饰，含有烷化剂的修饰，具有经修饰连接(例如α端基异构核酸)的修饰，以及未修饰形式的多核苷酸。另外，通常存在于糖类中的任何羟基基团可以用例如膦酸基团，磷酸基团替换，用标准保护基团保护，或活化以制备与别的核苷酸的别的连接，或者可缀合至固体或半固体支持物。可磷酸化或者用胺或1-20个碳原子的有机加帽基团模块取代5’和3’末端OH。其它羟基也可衍生成标准保护基团。多核苷酸也可含有本领域普遍知道的核糖或脱氧核糖糖类的类似物形式，包括例如2’-氧-甲基-，2’-氧-烯丙基-，2’-氟-或2’-叠氮-核糖，碳环糖类似物，α-端基异构糖，差向异构糖诸如阿拉伯糖，木糖或来苏糖，吡喃糖，呋喃糖，景天庚酮糖，无环类似物及脱碱基核苷类似物诸如甲基核糖核苷。可用备选连接基团替换一个或多个磷酸二酯连接。并非多核苷酸中的所有连接都必需是相同的。多核苷酸可含有一处或多处不同类型的本文中描述的修饰和/或多处相同类型的修饰。前述描述适用于本文中提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。

如本文中所使用的，“寡核苷酸”一般指短的，单链的多核苷酸，其在长度上小于约250个核苷酸，但这不是必须的。寡核苷酸可以是合成的。术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”并不互相排斥。上文关于多核苷酸的描述同样且完全可适用于寡核苷酸。

如本文所用“引物”指能够与核酸杂交并允许互补核酸的聚合作用(一般通过提供游离的3’-OH基团)的单链多核苷酸。

本发明可以利用本领域内已知的任何方法测定基因表达。本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本发明的重要方面。这些技术包括但不限于：核酸测序、核酸杂交、核酸扩增技术。

核酸测序技术的示例性非限制性实例包括但不限于链终止子(Sanger)测序和染料终止子测序。本领域的普通技术人员将认识到，由于RNA在细胞中不太稳定并且在实验中更易受到核酸酶攻击，因此在测序前通常将RNA逆转录成DNA。

核酸测序技术的另一示例性非限制性实例包括下一代测序(深度测序/高通量测序)，高通量测序技术是一种基于单分子簇的边合成边测序技术，基于专有的可逆终止化学反应原理。测序时将基因组的DNA的随机片段附着到光学透明的玻璃表面，这些DNA片段经过延伸和桥式扩增后，在玻璃表面形成数以亿计的簇，每个簇是具有数千份相同模板的单分子簇，然后利用带荧光基团的四种特殊脱氧核糖核苷酸，通过可逆性的边合成边测序技术对待测的模板DNA进行测序。

核酸杂交技术的示例性非限制性实例包括但不限于原位杂交(ISH)、微阵列和Southern或Northern印迹。原位杂交(ISH)是一种使用标记的互补DNA或RNA链作为探针以定位组织一部分或切片(原位)或者如果组织足够小则为整个组织(全组织包埋ISH)中的特异性DNA或RNA序列的杂交。DNA ISH可用于确定染色体的结构。RNA ISH用于测量和定位组织切片或全组织包埋内的mRNA和其他转录本(例如，ncRNA)。通常对样本细胞和组织进行处理以原位固定靶转录本，并增加探针的进入。探针在高温下与靶序列杂交，然后将多余的探针洗掉。分别使用放射自显影、荧光显微术或免疫组织化学，对组织中用放射、荧光或抗原标记的碱基标记的探针进行定位和定量。ISH也可使用两种或更多种通过放射性或其他非放射性标记物标记的探针，以同时检测两种或更多种转录本。

本发明可在检测前或与检测同时地对核酸(例如，ncRNA)进行扩增。核酸扩增技术的示例性非限制性实例包括但不限于：聚合酶链式反应(PCR)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、转录介导的扩增(TMA)、连接酶链式反应(LCR)、链置换扩增(SDA)和基于核酸序列的扩增(NASBA)。本领域的普通技术人员将认识到，某些扩增技术(例如，PCR)需要在扩增前将RNA逆转录成DNA(例如，RT-PCR)，而其他扩增技术则直接扩增RNA(例如，TMA和NASBA)。

通常称为PCR的聚合酶链式反应使用变性、引物对与相反链的退火以及引物延伸的多个循环，以指数方式增加靶核酸序列的拷贝数；TMA的转录介导的扩增(在基本上恒定的温度、离子强度和pH的条件下自身催化地合成靶核酸序列的多个拷贝，其中靶序列的多个RNA拷贝自身催化地生成另外的拷贝；LCR的连接酶链式反应使用与靶核酸的相邻区域杂交的两组互补DNA寡核苷酸；其他扩增方法包括例如：通常称为NASBA的基于核酸序列的扩增；使用RNA复制酶(通常称为Qβ复制酶)扩增探针分子本身的扩增；基于转录的扩增方法；以及自我维持的序列扩增。

在本发明中，试剂盒包括检测LOC114108859的试剂，以及选自下组的一种或多种物质：容器、使用说明书、阳性对照物、阴性对照物、缓冲剂、助剂或溶剂。

本发明的试剂盒中还可附有试剂盒的使用说明书，其中记载了如何采用试剂盒进行检测，和如何利用检测结果对肿瘤发展进行判断、对治疗方案进行选择

本发明的优点和有益效果：(1)首次发现了序列如SEQ ID NO：1所示的lncRNA及其与绵羊肉用性能相关；(2)在实际生产中，可以通过调控lncRNA的表达，从而改善绵羊的肉用性能，提高肉感，因此本发明为畜牧业生产提供了理论基础和技术启示。

附图说明

图1为脂肪组织差异表达mRNA GO注释；

图2为脂肪组织差异表达mRNA KEGG通路富集分析；

图3为差异表达基因qRT-PCR验证结果。(a)表示多浪羊与小尾寒羊皮下脂肪组织中lncRNA验证结果；(b)表示多浪羊与小尾寒羊皮下脂肪组织中mRNA验证结果；

图4为LOC114108859基因差异表达qRT-PCR验证结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。

实施例1样品的采集剂RNA提取

1.1样品的采集

本试验以脂肪沉积存在差异的多浪羊(D)与小尾寒羊(X)为对象进行研究。选取的羊只均为成年雌性，并且个体体况良好、健壮无病，体重相近(约50kg)，每组有三个生物学重复。

1.2样本RNA的提取和质量检测

取出各样品中等量的脂肪组织用作提取总RNA，确保整个流程在无菌环境下进行，步骤如下：

(1)分别在加有液氮的研钵里研磨脂肪组织；

(2)将研磨好的组织放入加有Trizol试剂的离心管中静置；

(3)加入氯仿混匀并在室温下静置10分钟；

(4)放入离心机中，在4℃条件下，转速12000，离心15分钟；

(5)将最上层无色液体放入RNase free管中，用等量异丙醇来沉淀RNA，室温下混合均匀静置10分钟；

(6)再次在温度为4℃、转速为12000条件下离心15分钟；

(7)将上清液去除，在沉淀中加入乙醇(75％)充分混匀后，再一次在上述条件下离心；

(8)去除上清液，继续加乙醇清洗RNA2-3次；

(9)弃乙醇，沉淀干燥处理5-10分钟；

(10)最后沉淀物用RNA无酶水处理。

为保证总RNA纯度及完整性，将其进行质量检测：

建库测序的要求是RNA总量不少于2ug，对longRNA(mRNA、lncRNA、circRNA)的文库构建采用TruSeqTM Stranded Total RNA Kit试剂盒，RNA总量为2μg，浓度在100ng/μL以上，OD260/280范围是1.8-2.2。

分别对多浪羊和小尾寒羊的6个皮下脂肪组织提取总RNA并进行质量检测，结果可见28S条带亮度相对于18S来说均显著较高；各样本RNA浓度高于200ng/μl；RIN值均大于8，OD260/280≥1.8，OD260/230≥1.0，说明RNA没有被碳水化合物和蛋白质等杂质污染，且完整性较好，可在后续试验中继续应用。

实施例2测序及数据分析

使用Illumina NovaSeq 6000测序平台测序。对longRNA-seq数据的质控用软件Fastp进行。序列比对分析所用参考物种为绵羊(Ovis_aries)，在NCBI数据库中获得参考基因组(GCF_002742125.1)。非编码RNA不仅包括lncRNA，所以应对结果进行鉴定，包括了已知lncRNA鉴定、新lncRNA预测和lncRNA统计三方面。从lncRNA相关数据下载已经报道的lncRNA序列，主要包括Ensembl和NCBI数据库，然后基于这两个数据库进行已知lncRNA的鉴定。根据转录组的拼接结果，以及lncRNA的长度大于200bp并且不能编码蛋白的特点为筛选条件，最终预测得到新的lncRNA。

样本表达量差异分析。对mRNA与lncRNA均使用RSEM软件进行定量，TPM作为表达量衡量指标。RSEM对测序数据表达量的计算可以通过单端或双端进行，并且可以区分转录本属于同一基因的不同亚型。TPM是来自于某转录本的读段数(每百万读段中)，先均一化基因长度，然后再均一化测序深度。DESeq2是基于负二项分布的统计分析软件，可在设有生物学重复的试验中应用，设置筛选条件为：Pvalue＜0.05，|log2FC|≥1筛选多浪羊和小尾寒羊皮下脂肪组织(D-PFvs X-PF)中lncRNA与mRNA，筛选出来的结果用作下一步分析。差异表达分析显示，lncRNAs有107个(上调68，下调39)，mRNAs有2439个(上调1102，下调1337)在多浪羊与小尾寒羊皮下脂肪组织中差异表达。

为了了解差异表达基因以及基因产物的功能，使用GO注释对差异表达基因进行三方面的注释分析，包括生物过程、细胞成分和分子功能。存在于多浪羊与小尾寒羊皮下脂肪组织的1329个差异表达基因中共有1135个具有GO注释，并且共富集到1281条目，其中显著富集的条目有261。如图1所示，在生物过程中，差异表达基因在脂肪酸衍生物代谢过程(fatty acid derivative metabolicprocess)、脂肪细胞分化的调控(regulation of fatcell differentiation)与脂肪酰基辅酶A代谢过程(fatty-acyl-CoA metabolicprocess)等过程中显著富集；分子功能，主要富集于货物受体活性(cargo receptoractivity)与碳水化合物结合(carbohydrate binding)等条目中；细胞组分中，主要富集在细胞外基质(extracellular matrixmembrane part)、质膜的固有成分(intrinsiccomponent ofmembrane)等与细胞质、膜系统相关条目中。通过GO富集分析发现，差异表达基因主要调控了多浪羊与小尾寒羊脂肪细胞的分化及脂质代谢等过程。

KEGG富集分析结果显示，有943个基因具有KEGG注释，并且注释到了306个信号通路中，其中显著富集的通路有20条。通路富集结果表明差异表达基因大量富集到与脂质代谢相关通路，如图2所示，包括TGF-beta信号通路、不饱和脂肪酸的生物合成(Biosynthesisof unsaturated fatty acids)、PI3K-Akt信号通路、花生四烯酸代谢(Arachidonic acidmetabolism)、胰岛素抵抗(Insulinresistance)等信号通路中。以上结果表明，多浪羊和小尾寒羊皮下脂肪组织中差异表达基因参与了多个与脂细胞分化、脂代谢等相关通路，与此同时还参与了与代谢疾病相关的通路中。

预测样本中差异表达lncRNA靶基因。lncRNAs有顺式(cis)和反式(trans)这两种作用模式。cis作用靶基因原理表示lncRNA的功能与相邻编码基因具有密切联系，编码蛋白上下游的lncRNA可能与启动子或共表达基因其他顺式作用元件有交叉，因此在转录或转录后水平调控基因表达。若一个lncRNA具有cis调控作用，则基因表达情况与近周相同，并且该基因失活后会对周围及附近同一位点的基因表达产生影响。trans作用靶基因预测表示，lncRNA的功能与编码基因的位置不相关，而是受共表达的蛋白编码基因影响，即当lncRNA与远距离基因在表达量上正或负相关时，对靶基因的预测就可以以lncRNA与蛋白编码基因的表达量相关性为依据。

过对多浪羊与小尾寒羊差异表达的lncRNA与差异表达的mRNA进行靶关系预测。处于lncRNA上下游100kb范围的基因为cis作用的靶基因，与差异表达lncRNA共表达的相关性系数绝对值大于0.9并且显著性Padjust值小于0.01的基因作为其trans作用靶基因。从得到的靶基因中选取与脂肪发育相关基因，对靶向到这些基因上的lncRNA发挥的潜在作用进行研究。将lncRNA-mRNA利用Cytoscape软件进行网络图的绘制。可以更直接的看到lncRNA与mRNA的靶向关系。图中存在Degree超过30的节点有LOC114114983、LOC105603235、LOC114110986、LOC101116622、LOC114113946、LOC105616344、LOC114108859、LOC105614707、LOC114118103、LOC105607267、LOC101107129、RTL8C。这些关键的lncRNAs为后续研究奠定了基础。将富集到与脂肪代谢及相关疾病通路中的基因间靶向关系做部分展示(表1)。

表1 lncRNA靶向作用情况

SCD是一种内质网结合酶，是参与单不饱和脂肪酸生物合成的重要酶，并且具有多种亚型，其中SCD1是SREBP1调控的下游基因，当SCD1的启动子上的固醇调节原件与SREBP1c转录因子结合后，转录上调，脂质合成增加。由于PPARγ2对甘油三酯合成以及脂肪酸吸收的相关基因具有调控功能，所以PPARγ2在脂质代谢过程中具有重要作用，其中SCD1就可以作为它的靶基因。此外SCD作为调控脂代谢的关键基因，还可以被类固醇激素、甲状腺激素、共轭亚油酸等影响表达水平。本研究中，LOC114108859靶向SCD基因，使其在多浪羊皮下脂肪组织中上调表达，表明LOC114108859及SCD对于多浪羊皮下脂肪的沉积具有促进作用。

实施例3实时荧光定量PCR检测验证

3.1测序结果的可靠性验证

本实验在两个比较组(多浪羊和小尾寒羊)之间随机选择差异表达的lncRNA和mRNA进行PCR检测，每个基因3个重复，验证每个lncRNA和mRNA的表达趋势，主要方法如下：

逆转录

利用试剂盒，逆转录体系为：总RNA 0.5μg，5×TransScript All-in-oneSuperMix for qPCR 5μl，gDNARemover 0.5μl，Nuclease-free无酶水加至10μl。反应程序为：ABI 9700PCR仪上保温15分钟，85℃5秒失活RT酶和gDNA Remover。逆转录后加入Nuclease-free无酶水90μl，储存在负20℃环境中。

表2 PCR反应体系

将准备好的PCR Mix分装至384孔板，依次加入1μl相应的cDNA，每个脂肪样品做3个复孔。贴膜刮平后振荡混匀，离心机2000rpm离心1分钟。结束后取出384孔板。PCR程序为：94℃30秒；94℃5秒，60℃30秒，45次循环。结束后，检测产物特异性。从60℃到97℃过程中需缓慢升温。

反应结束后导出数据，用2^-ΔΔCt法计算样本相对表达情况，t-检验统计分析相对表达情况，数据显示为平均数±标准差(Mean±SD)，P＜0.05为显著。

PCR数据分析及结果

随机选择14个差异基因进行qRT-PCR验证，来证明测序结果的可靠性，结果表明，LOC114108859、LOC105614707、LOC114117814在多浪羊皮下脂肪组织中上调表达(图3a)，LOC114116830、LOC114112974、LOC105605445在多浪羊皮下脂肪组织中下调表达。LOC101113583、FADS1、PTGS2、PCK1、PPP2R5A在多浪羊皮下脂肪组织中上调表达，MGST3、COL1A1、AKT3在多浪羊皮下脂肪组织中下调表达(图3b)。图中：*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001，验证结果显示与测序结果相吻合，表明测序结果可靠。

3.2候选基因的验证

本实验分别收集20只多浪羊和小尾寒羊，在两个组之间对差异表达的LOC114108859进行PCR检测，每个基因3个重复，验证LOC114108859基因差异表达情况，实验步骤同3.1。

PCR数据分析及结果，利用2^-△△Ct法计算LOC114108859基因在各个样本间的相对表达量，数据表示为平均数±标准差(Mean±SD)，P<0.05表示该基因在两组间差异显著。结果表明，LOC114108859基因在多浪羊皮下脂肪组织中显著上调表达。

表3

通过功能注释及富集分析筛选得到与脂肪沉积紧密相关的基因，并与差异lncRNA进行靶关系预测。LOC114108859可能靶向SCD来调控两品种绵羊皮下脂肪的代谢以及脂肪细胞的分化，荧光定量PCR实验结果进一步验证了该结论。

序列表

<110> 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

<120> LOC114108859及其新用途

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1264

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atctccttca gaatggactg gttggatctc cttgcagtcc aagggactct caggagtctt 60

ctccaacacc acagtgcgaa cgcatcagtt cagctgacca gttatagccc caaaactaga 120

aaagcgccag cacacggttg agtgagagcg tgtcttcctg aacagcagtg cccgtctgcc 180

ctgctggggg cttggccgca cgcacccttt taccaaatca agtacatact gacctccctt 240

ttttctcttt ttaaattttt acttttttaa ttaaaaaagg tttttattgg gttggccaaa 300

aagttcattt ggcttcccag taagatggtc tagtagcgct tgtctttaat tccactggag 360

acgatcgtgt tatactgtcc cataatacct gtgatagcag cgtgcattaa aaaaaaagac 420

caaaaaaaaa aaaaaagacc aaaaacaccg caactggcga atttctgtgt agctatttta 480

atactgaaga tggaagaaaa aactacattt ccagcacatt atgctctatt atttcaagaa 540

aggtaaagac ataactgaaa cacacacaga agatttgtgc agcgtagggg aggttttgtg 600

actgatccaa tgtgtcaaag tggcttgcaa acagtgctgg agtaggggcg ccttcttacc 660

ccagggagtc ttcctggtcc agggactgac cctgcgtctc ctgctcgggc aggtggatcc 720

ctcaccactg agccaccagg gatgaaggtg atgtgcacgg ggcgggaggg ggtcctccct 780

tacgagctct ttctggaaag ccaagcgact gattccagca agcactgctc ccagtcaggc 840

cactgaacac tgaacaaaag cgtctggaat cagtcgacag aaaacacata attttccatc 900

aggaaaccca ggaccgcgtg tttccccgac gagcagggcc aggtcttcgg tgcagcacgt 960

gggatcttca gttggggcgt gtgcggtcta gttccctgac cagggatcaa acccaggccc 1020

cctgcactgt gagtgtggag tattagccat gagacagcca ggaagtccct acaagattct 1080

cttaatggaa agaatttcag ttccctgtga aaagactgtc aaagggaagg ggaacagttc 1140

tttgctcaaa aaattaaaca gttttgggag gatggaatcc tgaaggggcc tgaaaaatgg 1200

caggaggtag tggaataaaa tgctgaagac actgttcagt aaggttgttg gtgactatga 1260

aaaa 1264

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tgtgatagca gcgtgcatta 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

agctacacag aaattcgcc 19

Claims (7)

1.LOC114108859用于制备绵羊皮下脂肪检测试剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样本中LOC114108859基因的表达水平。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，核酸扩增技术采用一对特异性引物扩增LOC114108859基因；核酸杂交包括与LOC114108859基因的核酸序列杂交的探针。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，引物序列为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述样本为组织。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述样本为脂肪组织。

7.试剂盒在检测绵羊皮下脂肪中的应用，所述试剂盒包含进行DNA微阵列、寡核苷酸微阵列、RNA印迹法、RNase保护试验和反转录聚合酶链反应所必需的DNA芯片、寡核苷酸芯片、探针或引物，以检测LOC114108859基因的表达水平。

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