CN113440501A - 甘草查尔酮a在制备抗过敏药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了甘草查尔酮A在制备抗过敏药物中的应用，通过比较肥大细胞脱颗粒程度、小鼠足趾肿胀程度、足趾伊文斯蓝渗出程度、体温下降程度以评价待测药物组、生理盐水对照组及正常对照组，以评价药物对过敏性疾病的治疗效果，确定甘草查尔酮A能够用于抗过敏药物的制备。甘草查尔酮A能够有效减轻小鼠局部及系统性过敏反应症状；减少肥大细胞脱颗粒，对过敏引起的症状具有显著改善作用。
Description
技术领域
本发明属于抗过敏药物制备技术领域，涉及甘草查尔酮A在制备抗过敏药物中的应用。
背景技术
过敏反应是一类机体的免疫应答反应。一般是指抗原(或半抗原)再次进入致敏的机体与其特异性抗体相结合而激发的不良反应。过敏反应需要重复暴露于抗原中，首次暴露时，通过引起体内淋巴细胞对抗原产生特异性IgE而完成致敏过程；当机体再次暴露于抗原时，抗原与肥大细胞表面的IgE结合而引起过敏反应的发生。整个过程需要固有免疫和适应性免疫。与肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒、激活补体系统，引起释放组胺或其他血管活性因子等生物活性介质有关。肥大细胞上FcεRⅠ受体，被认为是过敏反应发生的重要受体，能够于多个IgE 抗体发生交联反应。当抗体与交联的IgE-FcεRⅠ受体形成复合物时，肥大细胞即发生脱颗粒，引发过敏反应。
近年来，临床上过敏性疾病的发生愈发常见，且表现出低龄化、城镇化趋势。患者血清IgE显著升高且多病情反复，难以根治。而目前针对此类疾病的药物均是在过敏反应机制下游的症状控制阶段作用，肥大细胞等释放的致敏介质仍存在于体内，具有潜在毒性。IgE单克隆抗体使用不便，且价格昂贵。长期使用上述药物会引起多种不良反应。
甘草为豆科植物甘草的干燥根和根茎，其味甘，平，归心、肺、脾、胃经，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效。甘草中主要含有三萜皂苷类、黄酮类和多糖类成分，临床上以生品和炮制品入药。甘草经炮制后理化性质、性味功效等发生了改变。生甘草性味甘偏凉，常被用于清热解毒、化痰止咳，蜜炙后性味甘温，有补脾益气的功效。现代药理研究表明，炙甘草在抗心律失常、增强免疫及镇痛方面的效果均显著优于生甘草。
甘草查尔酮A(licochalcone A)是从甘草属植物中分离纯化的黄酮类化合物。现有技术研究报道，甘草查尔酮A有抗炎、抗癌、抗肿瘤、抑菌、体内代谢和抗疟抗寄生虫等方面的作用，但并未见关于甘草查尔酮A作为抗过敏药物的相关应用报道。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供甘草查尔酮A在制备抗过敏药物中的应用。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明公开了甘草查尔酮A在制备抗过敏的药物中的应用。
优选地，所述的药物为降低过敏反应细胞脱颗粒的药物。
进一步优选地，所述的药物为抑制肥大细胞β-氨基己糖苷酶释放的药物。
优选地，所述的药物为降低局部皮肤类过敏反应炎性浸润的药物。
进一步优选地，甘草查尔酮A呈剂量依赖性地抑制足趾局部皮肤过敏性反应。
优选地，所述的药物为减轻全身性过敏的药物。
优选地，甘草查尔酮A呈剂量依赖性地抑制OVA引起的动物体温下降。
优选地，所述的药物用于抑制过敏反应时，动物给药量为10-100mg/kg。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明公开了甘草查尔酮A对于改善过敏性症状有明确的治疗效果，通过比较小鼠腹腔肥大细胞脱颗粒、足趾肿胀程度、足趾伊文斯蓝渗出程度、评价待测药物组、生理盐水对照组及正常对照组，以评价药物对过敏性疾病的治疗效果，确定甘草查尔酮A能够用于抗过敏药物的制备。甘草查尔酮A能够有效减轻小鼠局部及系统性过敏反因症状；减少肥大细胞脱颗粒，对过敏引起的症状具有显著改善作用。
附图说明
图1为甘草查尔酮A对OVA引发的C57小鼠足趾肿胀的抑制结果图；
图2为甘草查尔酮A对OVA引发的C57小鼠足趾伊文思蓝渗出的抑制结果；
图3为甘草查尔酮A对OVA引发的C57小鼠体温下降的抑制结果；
图4为甘草查尔酮A对OVA引发的小鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的抑制结果。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
下面结合附图对本发明做进一步详细描述：
实施例1甘草查尔酮A抑制OVA引起的小鼠足趾肿胀、伊文思蓝渗出
1、实验材料
卵清蛋白(OVA购于SIGMA公司)，6-8周龄雄性C57小鼠(购于西安交通大学实验动物中心)，甘草查尔酮A(购于宝鸡辰光)，0.4％伊文思蓝溶液，3.5％水合氯醛溶液，PBS溶液，生理盐水，丙酮。
所述甘草查尔酮A的结构式如下：
2、实验方法
将小鼠分为空白对照组、阳性对照组和各浓度的甘草查尔酮A给药组。提前一周腹腔注射20μg/mL OVA溶液致敏。用0.5％CMC-Na溶液配制不同浓度的甘草查尔酮A溶液(分别为20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg)灌胃给药。30min后， 3.5％的水合氯醛溶液麻醉小鼠，尾静脉注射0.4％伊文思蓝溶液。测量各组小鼠左右脚掌的厚度，随后用微量注射器在左脚掌皮下5μL浓度为50μg/mL的OVA 溶液，右脚掌皮下等体积的PBS溶液。15分钟后，处死小鼠。再次测量各组小鼠脚掌厚度。剪下小鼠足部，烘干，称量重量。破碎足趾，用丙酮：生理盐水(7：3)溶解足趾中的伊文思蓝，并在620nm处测量吸光度，计算单位体积吸光度。
3、实验结果
结果参见图1、2，图1、2中，横坐标为浓度，纵坐标为组织肿胀百分比或伊文思蓝渗出程度；相对于空白对照组，50μg/mL的OVA可以显著性引起C57 小鼠足趾肿胀及伊文思蓝渗出，随着浓度增大，甘草查尔酮A可以剂量依赖性地抑制C57小鼠足趾局部过敏性反应。
实施例2甘草查尔酮A抑制OVA引起的小鼠体温下降
1、实验材料
OVA(购于SIGMA公司)，6-8周龄雄性C57小鼠(购于西安交通大学实验动物中心)，甘草查尔酮A(购于宝鸡辰光)，小鼠体温仪。
2、实验方法
将小鼠分为空白对照组、阳性对照组和各浓度的甘草查尔酮A给药组。提前一周腹腔注射20μg/mL OVA溶液致敏。用0.5％CMC-Na溶液配制不同浓度的甘草查尔酮A溶液(分别为20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg)灌胃给药。30min后，尾静脉注射100μg/mL OVA溶液，空白对照组注射等体积生理盐水。每3分钟检测一次小鼠肛温，累计检测30分钟。
3、实验结果
结果参见图3，相对于空白对照组，OVA可以显著性引起C57小鼠体温下降，甘草查尔酮A可以剂量依赖性地抑制C57小鼠体温下降。
实施例3甘草查尔酮A抑制小鼠肥大细胞脱颗粒
1、实验材料
6-8周龄雄性C57小鼠(购于西安交通大学实验动物中心)，甘草查尔酮A (购于宝鸡辰光)，小鼠β-氨基糖苷底物试剂盒(购于北京义翘)。
全自动微板读取仪购于Bio-Rad公司(加利福尼亚，美国)。
细胞系：小鼠腹腔肥大细胞PBMC培养在5％CO2，37℃的环境中。培养基每周用新鲜培养基半置换使细胞维持在2×106个细胞每毫升的密度。TM缓冲溶液(组成(g/L)：6.954的NaCl，0.353的KCl，2.383的HEPES，0.162的 KH2PO4，0.282的CaCl2，0.143的MgSO4，0.991的葡萄糖，1的牛血清白蛋白。 Triton X-100购于科昊生物工程公司(西安，中国)，D-glucose天津科密欧化学试剂公司(天津，中国)，牛血清白蛋白和HEPES购自MP生物医学有限公司(法国)。
2.β-氨基己糖苷酶释放
提取小鼠腹腔肥大细胞(PBMC)，将细胞接种于96孔板中，3000个细胞/ 孔，加入DNP-IgE(1μg/ml)培养过夜，1500rpm离心5min后，吸弃原培养基，加入不同浓度药物，37℃孵育30min，加入DNP-HSA(1μg/ml)孵育30min，后1500rpm离心5min，各孔分别吸取50μL至新孔。再将阴性对照组的剩余TM 缓冲液吸弃后，加90μL 0.1％Triton X-100裂解液，吹打静置5min，1500rpm 离心5min后取50μL至新孔为裂解组。向各孔加入50μLβ-氨基己糖。37℃孵育90min后加入150μL/孔的Na2CO3/NaHCO3终止液，放置于摇床上以50转/min 的频率混匀2min，于405nm测定其吸光度。
按以下公式计算β-氨基己糖苷酶释放率。
β-氨基己糖苷酶释放率＝(测试组OD值/(空白对照组OD值+裂解组OD)) ×100％；
其中，所述测试组OD值为空白对照组OD值、给药组OD值或者阴性对照组OD值。
3.实验结果
甘草查尔酮A抑制由小鼠肥大细胞β-氨基己糖苷酶释放结果展示在图4中，其中，blank为空白对照组，control为IgE刺激但不加甘草查尔酮A组，不同浓度表示给药组中的甘草查尔酮A的浓度。从图4可以看出，甘草查尔酮A可以抑制肥大细胞脱颗粒。
以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。
Claims (8)
1.甘草查尔酮A在制备抗过敏的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为降低过敏反应细胞脱颗粒的药物。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的药物为抑制肥大细胞β-氨基己糖苷酶释放的药物。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为降低局部皮肤类过敏反应炎性浸润的药物。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，甘草查尔酮A呈剂量依赖性地抑制足趾局部皮肤过敏性反应。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为减轻全身性过敏的药物。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，甘草查尔酮A呈剂量依赖性地抑制OVA引起的动物体温下降。
8.如权利要求1～7中任意一项所述的应用，其特征在于，所述的药物用于抑制过敏反应时，动物给药量为10-100mg/kg。
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| CN115887430A (zh) * | 2022-09-19 | 2023-04-04 | 同济大学 | 甘草查尔酮a在免疫细胞增殖上的应用 |
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