CN113425907A - 一种心包膜材料及其制备方法和用途 - Google Patents
一种心包膜材料及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113425907A CN113425907A CN202010208263.7A CN202010208263A CN113425907A CN 113425907 A CN113425907 A CN 113425907A CN 202010208263 A CN202010208263 A CN 202010208263A CN 113425907 A CN113425907 A CN 113425907A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- immersing
- pericardium
- temperature
- gene
- animal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 title claims abstract description 62
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 31
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 claims abstract description 30
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 238000004506 ultrasonic cleaning Methods 0.000 claims description 24
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 16
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 12
- AZKVWQKMDGGDSV-BCMRRPTOSA-N Genipin Chemical compound COC(=O)C1=CO[C@@H](O)[C@@H]2C(CO)=CC[C@H]12 AZKVWQKMDGGDSV-BCMRRPTOSA-N 0.000 claims description 9
- AZKVWQKMDGGDSV-UHFFFAOYSA-N genipin Natural products COC(=O)C1=COC(O)C2C(CO)=CCC12 AZKVWQKMDGGDSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 8
- 101000856513 Homo sapiens Inactive N-acetyllactosaminide alpha-1,3-galactosyltransferase Proteins 0.000 claims description 8
- 102100025509 Inactive N-acetyllactosaminide alpha-1,3-galactosyltransferase Human genes 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 8
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 claims description 7
- 108010043645 Transcription Activator-Like Effector Nucleases Proteins 0.000 claims description 7
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 claims description 7
- 239000012567 medical material Substances 0.000 claims description 6
- 101000902205 Homo sapiens Inactive cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase Proteins 0.000 claims description 5
- 102100022247 Inactive cytidine monophosphate-N-acetylneuraminic acid hydroxylase Human genes 0.000 claims description 5
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 claims description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 5
- 102000009839 Endothelial Protein C Receptor Human genes 0.000 claims description 4
- 108010009900 Endothelial Protein C Receptor Proteins 0.000 claims description 4
- 241000881705 Porcine endogenous retrovirus Species 0.000 claims description 4
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 4
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 claims description 3
- 238000010453 CRISPR/Cas method Methods 0.000 claims description 3
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 claims description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 18
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 25
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 19
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 11
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 8
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 7
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 7
- XFZJEEAOWLFHDH-UHFFFAOYSA-N (2R,2'R,3R,3'R,4R)-3,3',4',5,7-Pentahydroxyflavan(48)-3,3',4',5,7-pentahydroxyflavan Natural products C=12OC(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)C(O)CC2=C(O)C=C(O)C=1C(C1=C(O)C=C(O)C=C1O1)C(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 XFZJEEAOWLFHDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CWEZAWNPTYBADX-UHFFFAOYSA-N Procyanidin Natural products OC1C(OC2C(O)C(Oc3c2c(O)cc(O)c3C4C(O)C(Oc5cc(O)cc(O)c45)c6ccc(O)c(O)c6)c7ccc(O)c(O)c7)c8c(O)cc(O)cc8OC1c9ccc(O)c(O)c9 CWEZAWNPTYBADX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MOJZMWJRUKIQGL-FWCKPOPSSA-N Procyanidin C2 Natural products O[C@@H]1[C@@H](c2cc(O)c(O)cc2)Oc2c([C@H]3[C@H](O)[C@@H](c4cc(O)c(O)cc4)Oc4c3c(O)cc(O)c4)c(O)cc(O)c2[C@@H]1c1c(O)cc(O)c2c1O[C@@H]([C@H](O)C2)c1cc(O)c(O)cc1 MOJZMWJRUKIQGL-FWCKPOPSSA-N 0.000 description 6
- 101000718529 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) Alpha-galactosidase Proteins 0.000 description 6
- NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N alpha-D-Gal-(1->3)-beta-D-Gal-(1->4)-D-GlcNAc Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- HGVVOUNEGQIPMS-UHFFFAOYSA-N procyanidin Chemical compound O1C2=CC(O)=CC(O)=C2C(O)C(O)C1(C=1C=C(O)C(O)=CC=1)OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C(O)=C1 HGVVOUNEGQIPMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002414 procyanidin Polymers 0.000 description 6
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 description 4
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 3
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 3
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 206010060954 Abdominal Hernia Diseases 0.000 description 2
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 2
- 241000258957 Asteroidea Species 0.000 description 2
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 2
- 241000700108 Ctenophora <comb jellyfish phylum> Species 0.000 description 2
- 241000258955 Echinodermata Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 2
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 2
- 241000242583 Scyphozoa Species 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- -1 cells Substances 0.000 description 2
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 2
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 description 1
- 241001519451 Abramis brama Species 0.000 description 1
- 241000208140 Acer Species 0.000 description 1
- 241000334163 Amphiprion percula Species 0.000 description 1
- 241000338116 Amyda Species 0.000 description 1
- 241000283084 Balaenoptera musculus Species 0.000 description 1
- 241000876438 Brachymystax Species 0.000 description 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 1
- 244000140995 Capparis spinosa Species 0.000 description 1
- 235000017336 Capparis spinosa Nutrition 0.000 description 1
- 235000014653 Carica parviflora Nutrition 0.000 description 1
- 241001529572 Chaceon affinis Species 0.000 description 1
- 241000270617 Cheloniidae Species 0.000 description 1
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 241000238586 Cirripedia Species 0.000 description 1
- 241000243321 Cnidaria Species 0.000 description 1
- 241001481833 Coryphaena hippurus Species 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101000831205 Danio rerio Dynein axonemal assembly factor 11 Proteins 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 102100024282 Dynein axonemal assembly factor 11 Human genes 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000257465 Echinoidea Species 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241001596816 Halieutaea stellata Species 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 241001559542 Hippocampus hippocampus Species 0.000 description 1
- 241000251511 Holothuroidea Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000831210 Homo sapiens Dynein axonemal assembly factor 11 Proteins 0.000 description 1
- 241001136306 Hydrophiidae Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001471424 Manta birostris Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001455233 Obelia Species 0.000 description 1
- 241000283144 Odontoceti Species 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 241000269940 Pantodon buchholzi Species 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 description 1
- 241000283216 Phocidae Species 0.000 description 1
- 241000283222 Physeter catodon Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000206572 Rhodophyta Species 0.000 description 1
- 241001417495 Serranidae Species 0.000 description 1
- 241000392375 Sinonovacula constricta Species 0.000 description 1
- 241000980706 Takifugu obscurus Species 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 241001125843 Trichiuridae Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 210000001765 aortic valve Anatomy 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 108010005493 bovine serum albumin-galactose (39) Proteins 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 241001233037 catfish Species 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 125000005179 haloacetyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 241000238565 lobster Species 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000004894 snout Anatomy 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
- A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
- A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
- A61L2300/414—Growth factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/20—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of the heart, e.g. heart valves
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明涉及生物材料领域，具体涉及一种取自基因编辑动物的心包膜材料，进一步进行优化的脱细胞处理技术和交联技术处理，由此制备的心包膜材料及其用途。本发明提供的心包膜材料免疫原性低，且生物相容性好，可用于临床瓣膜、补片等领域。
Description
技术领域
本发明涉及生物材料领域，特别涉及一种心包膜材料及其制备方法和用途。
背景技术
心包膜材料已广泛用于临床瓣膜、补片等。面对异种心包膜材料存在的免疫原性问题，一般通过去除各种组织器官中的异种细胞或戊二醛交联等方法降低其免疫原性。常规高浓度试剂或一次性处理方式，比如，仅从脱细胞程度上说，均可制备出脱细胞程度较高的产品，但不可避免的导致细胞外基质成分的丢失，尤其是可溶性的蛋白多糖和糖蛋白成分，从临床应用效果来看，处理后心包膜材料的力学强度或生物学活性等仍不令人满意。比如，目前临床上生物瓣膜来自戊二醛固定的非基因编辑普通猪或者牛组织的心脏瓣膜。虽然成功应用于临床,但是存在一些不足之处影响瓣膜功能。现有瓣膜材料的钙化导致结构性瓣膜退化，引起瓣膜狭窄和关闭不全，使发病率和死亡率上升，极大地影响瓣膜正常工作。现有报道的解决钙化方法主要思路包括戊二醛残留醛基消除，提高材料稳定性等方法，提高材料抗钙化效率有限。瓣膜的衰败损毁，使用寿命不长，需要再次进行瓣膜置换术，给患者和国家带来沉重经济负担，这成为业界亟待解决的重大难题。为了提高心包膜材料性能，满足临床治疗效果，需要进一步优化降低生物材料免疫原性的技术方案。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种心包膜材料及其制备方法和用途。利用本发明加工制备的心包膜材料，不含活细胞，通过基因编辑技术从原材料源头降低其免疫原性，使用优化的脱细胞处理技术和交联技术进一步降低其免疫原性。本发明提供的心包膜材料免疫原性低，且生物相容性好，可用于临床瓣膜、补片等领域，在使用过程中可以结合活性分子和/或活细胞。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种心包膜材料的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、繁育基因编辑动物；
步骤2、采集步骤1所述动物的心包膜作为原料；
步骤3、取步骤2制得的所述原料脱细胞；
步骤4、取步骤3制得的材料交联化；
其中，步骤3具体为：
超声波清洗，20～100KHz处理30min～6h，功率500W～5KW，温度为0～40℃；
浸没于0.001～5wt.％SDS溶液中1～24h，振荡频率为100～1000rpm，温度为0～40℃；
超声波清洗，40～80KHz处理3～6h，功率1～5KW，温度为20～40℃；
浸没于0.001～1wt.％SDS溶液中3～6h，振荡频率为100～500rpm，温度为20～40℃；
超声波清洗，60～100KHz处理3～6h，功率1～5KW，温度为20～40℃。
步骤4具体为：
浸没于0.00001～5wt.％京尼平溶液中0.5～12h，浸没温度为0～40℃，重复浸没1～10次；
浸没于0.001～1wt.％戊二醛溶液中0.5～24h，浸没温度为25～40℃，重复浸没1～5次；
浸没于0.005～5wt.％原花青素溶液中0.5～12h，浸没温度为25～40℃，重复浸没1～5次。
在本发明的一些具体实施方案中，步骤3具体为：
超声波清洗，100KHz处理6h，功率5KW，温度为30℃；
浸没于0.001wt.％SDS溶液中24h，振荡频率为1000rpm，温度为30℃；
超声波清洗，40KHz处理3，功率1KW，温度为20℃；
浸没于1wt.％SDS溶液中3，振荡频率为100rpm，温度为20℃；
超声波清洗，80KHz处理3h，功率5KW，温度为40℃；
步骤4具体为：
浸没于0.01wt.％京尼平溶液中12h，浸没温度为30℃，重复浸没3次；
浸没于0.001wt.％戊二醛溶液中24h，浸没温度为25℃，重复浸没2次；
浸没于0.005wt.％原花青素溶液中2h，浸没温度为37℃，重复浸没5次。
本发明的一些具体实施方案中，步骤3具体为：
超声波清洗，20KHz处理4h，功率1KW，温度为20℃；
浸没于5wt.％SDS溶液中6h，振荡频率为300rpm，温度为20℃；
超声波清洗，80KHz处理3h，功率5KW，温度为40℃；
浸没于1wt.％SDS溶液中2h，振荡频率为250rpm，温度为30℃；
超声波清洗，100KHz处理3h，功率5KW，温度为20℃。
步骤4具体为：
浸没于0.00001wt.％京尼平溶液中10h，浸没温度为30℃，重复浸没10次；
浸没于1wt.％戊二醛溶液中2h，浸没温度为25℃，重复浸没5次；
浸没于0.2wt.％原花青素溶液中4h，浸没温度为30℃，重复浸没2次。
本发明的一些具体实施方案中，步骤3具体为：
超声波清洗，60KHz处理5h，功率3KW，温度为30℃；
浸没于0.01wt.％SDS溶液中10h，振荡频率为400rpm，温度为28℃；
超声波清洗，50KHz处理4.5h，功率3KW，温度为37℃；
浸没于0.5wt.％SDS溶液中3.5h，振荡频率为450rpm，温度为25℃；
超声波清洗，70KHz处理5.5h，功率2KW，温度为20℃。
步骤4具体为：
浸没于0.00005wt.％京尼平溶液中8h，浸没温度为35℃，重复浸没4次；
浸没于0.05wt.％戊二醛溶液中3h，浸没温度为30℃，重复浸没2次；
浸没于0.07wt.％原花青素溶液中2h，浸没温度为30℃，重复浸没3次。
在本发明的一些具体实施方案中，所述基因编辑包括巨型核酸酶(Meganuclease)、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)或成簇规律间隔短回文重复(CRISPR/Cas)系统中的至少一种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述基因编辑包括基因敲除和/或基因转入；
所述基因敲除中敲除的基因包括GGTA1、CMAH、β4GalNT2或PERV中的至少一种；
基因转入中转入的基因包括hCD46、hCD55、hCD47、LEA29Y、hTBM、hTFPI或EPCR中的至少一种。
在本发明的一些具体实施方案中，所述动物包括猪、牛、羊、马、猴、狗、兔、鸡、鼠、蚕、鱼、海洋生物、驴中的至少一种；所述动物为基因编辑后稳定传代3代以上的动物。在另一些具体实施方案中，选用基因编辑后稳定传代6代的动物制备心包膜材料。
所述鱼包括淡水鱼类。
所述海洋生物包括海洋动物和海洋植物；所述海洋动物包括海洋哺乳动物、海洋爬行动物、海洋鱼类、海洋节肢动物、藤壶、海洋软体动物、海洋棘皮动物或海洋腔肠动物中的一种或多种。所述海洋哺乳动物包括蓝鲸、抹香鲸、虎鲸、齿鲸、海豚、海豹、海狮、儒艮中的一种或多种。所述海洋爬行动物包括海蛇、海龟中的一种或多种。所述海洋鱼类包括前口蝠鲼、电鳐、刺鳐、星鳐、何氏鳐、中国团扇鳐、瞻星鱼、电鳗、康吉鳗、电鲶、箱鲀、鲂鮄、海马、石首鱼类、象鼻鱼、鲨鱼、蝴蝶鱼、刺盖鱼、甲尻鱼、石斑鱼、粗皮鲷、躄鱼、蝙蝠鱼、小丑鱼、带鱼、龙头鱼、烛光鱼、翻车鱼中的一种或多种。所述海洋节肢动物包括鲎、虾、蟹中的一种或多种。所述海洋软体动物包括石鳖、螠蛏、海兔中的一种或多种。所述海洋棘皮动物包括海星、海胆、海参中的一种或多种。所述海洋腔肠动物包括水母、薮枝螅、海蜇、珊瑚或海葵中的一种或多种。所述海洋植物包括浮游藻和底栖藻；所述底栖藻包括绿藻类、褐藻类和红藻类。
在上述研究的基础上，本发明还提供了所述的方法制得的心包膜材料。
本发明还提供了所述的心包膜材料在制备组织工程材料、再生医学材料、转化医学材料中的应用。具体应用包括但不限于如下：
心脏或组织修补材料，如牛或猪心包生物瓣膜。
在上述研究的基础上，本发明还提供了组合物，包括本发明所述的动物源性心包膜材料以及医学或药学上可接受的活性分子或活细胞，所述活性分子包括生长因子；所述活细胞包括干细胞。
本发明还提供了所述的组合物在组织工程、再生医学、转化医学中的应用。具体应用包括但不限于如下：心脏或组织修补材料，如牛或猪心包生物瓣膜。
本发明提供了一种心包膜材料及其制备方法和用途。(1)“基因编辑技术”，通过基因编辑技术获得低免疫原性动物，采集心包膜原材料，即通过基因编辑技术从材料来源上降低动物源性心包膜材料的免疫原性；(2)“渐次脱细胞技术”，不同于常规方法(如高浓度试剂一次性脱细胞)，采用“少量多次”的原则进行脱细胞处理，比如，通过多次循环使用超声、十二烷基硫酸钠(SDS)溶液浸泡等步骤脱除心包膜原材料中的细胞、多糖等活性成分，降低其免疫原性且尽量减少对生物活性的影响；(3)“渐次交联技术”，不同于常规方法(如高浓度交联剂一次性交联)，通过低浓度交联剂多次交联进一步封闭其免疫抗原活性位点。利用本发明加工制备的心包膜材料，不含活细胞，通过基因编辑技术从原材料源头降低其免疫原性，使用优化的脱细胞处理技术和交联技术进一步降低其免疫原性。本发明的心包膜材料用于临床瓣膜、补片等使用，在使用过程中可以结合活性分子或活细胞。
本发明制备心包膜材料的方法，涉及基因编辑技术，与常规方法不同(通过物理、化学、生物方法对既有动物组织/器官进行处理)，基因编辑技术是对目标基因进行定点“编辑”，实现对特定DNA片段的修饰，从心包膜材料的源头(采集动物)降低其免疫原性。此过程中，根据心包膜材料的特点，经过筛选确定编辑系统、目标基因、动物种类等，其中目标基因范围包括GGTA1、CMAH、β4GalNT2和PERV等敲除基因，以及hCD46、hCD55、hCD47、LEA29Y、hTBM、hTFPI和EPCR等转入基因。以α-Gal为例，当心包膜材料中残留的异种抗原进入人体内时，会引发超急性免疫排斥反应，这种免疫排斥反应的主要靶抗原被认为是由存在于动物组织中的α-Gal抗原引起的，α-Gal抗原存在于除人和高等灵长动物以外的大部分哺乳动物体内；通过基因编辑技术开发α-Gal抗原敲除(GTKO)心包膜材料，可以明显降低其免疫原性。
另一方面，本发明制备心包膜的方法，涉及脱细胞技术和交联技术，与常规方法不同(如高浓度SDS溶液单次脱细胞或高浓度戊二醛单次交联)，根据基因编辑技术降低其免疫原性的效果，将优化脱细胞处理和交联处理，比如，低浓度SDS溶液多次脱细胞或低浓度戊二醛多次交联，通过温和的处理方式尽量减小处理过程中对材料生物活性等影响。
因此，本发明提供的心包膜材料及其制备方法和用途具有重要的现实意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示实施例1与对比例1的免疫组化检测结果；
图2示实施例1与对比例1的组织相容性测试结果；
图3示实施例2与对比例2的免疫组化检测结果；
图4示实施例2与对比例2的组织相容性测试结果；
图5示实施例3与对比例3的免疫组化检测结果；
图6示实施例3与对比例3的组织相容性测试结果。
具体实施方式
本发明公开了一种心包膜材料及其制备方法和用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供了一种心包膜材料的制备方法，包括如下步骤：
a.繁育基因编辑技术动物；
b.采集基因编辑动物的心包膜作为原材料；
c.将原材料进行多次循环处理，比如，处理方式包括超声、十二烷基硫酸钠(SDS)溶液浸泡；
d.将处理后材料多次浸没于交联剂溶液中。
在一些实施例中，所述基因编辑技术包括巨型核酸酶(Meganuclease)、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)和成簇规律间隔短回文重复(CRISPR/Cas)系统中的至少一种。
在一些实施例中，所述基因编辑技术包括基因敲除和基因转入两种，其中，敲除的基因包括GGTA1、CMAH、β4GalNT2和PERV中的至少一种，转入的基因包括hCD46、hCD55、hCD47、LEA29Y、hTBM、hTFPI和EPCR中的至少一种。
在一些实施例中，所述动物包括猪、牛、羊、马、猴、狗、兔、鸡、鼠、蚕、鱼、海洋生物、驴中的至少一种；所述的动物为基因编辑后稳定传代3代以上的动物，进一步的，选用基因编辑后稳定传代6代的动物制备心包膜材料。
在一些实施例中，所述超声处理中超声频率为20～100KHz，处理时间为30min～6h，超声功率为500W～5KW，超声温度为0～40℃；所述SDS处理中SDS浓度范围为0.001～5wt.％，振荡频率为100～1000rpm，处理温度为0～40℃，处理时间为1～24h；所述多次循环处理是将上述处理方法进行组合使用，每种处理方法的使用次数为0～10次。
在一些实施例中，所述交联剂包括化学交联剂和生物交联剂中的至少一种；进一步的，化学交联剂包括醛类、亚氨酸酯类、N-羟基琥珀酰亚胺酯类(NHS酯)、马来酰亚胺类、卤乙酰基类、二硫代联吡啶、酰肼类、碳二亚酰胺类中的至少一种；更进一步的，醛类包括戊二醛、多聚甲醛中的至少一种；生物交联剂包括原花青素、京尼平中的至少一种；交联剂浓度范围为0.00001～5wt.％，浸没温度为0～40℃，单次浸没时间为0.5～24h，浸没次数为1～10次。
本发明还提供了所述的方法制备的心包膜材料。
本发明还提供了所述的心包膜材料在制备组织工程材料、再生医学材料、转化医学材料中的应用，在使用过程中可以结合活性分子和/或活细胞，活性分子包括生长因子；活细胞包括干细胞。
本发明提供的心包膜材料及其制备方法和用途中所用试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
一种猪源心包膜材料及其制备方法和在心脏瓣膜中的应用。
制备方法如下：
a.通过CRISPR/Cas9系统基因编辑制备敲除GGTA1的猪，使用稳定传代6代的基因编辑猪；
b.采集基因编辑猪的心包膜作为原材料；
c.将心包膜原材料进行如下处理：
c1.超声波清洗，100KHz处理6h，功率5KW，温度为30℃；
c2.浸没于0.001wt.％SDS溶液中24h，振荡频率为1000rpm，温度为30℃；
c3.超声波清洗，40KHz处理3，功率1KW，温度为20℃；
c4.浸没于1wt.％SDS溶液中3，振荡频率为100rpm，温度为20℃；
c5.超声波清洗，80KHz处理3h，功率5KW，温度为40℃；
d.浸没于0.01wt.％京尼平溶液中12h，浸没温度为30℃，重复浸没3次；
浸没于0.001wt.％戊二醛溶液中24h，浸没温度为25℃，重复浸没2次；
浸没于0.005wt.％原花青素溶液中2h，浸没温度为37℃，重复浸没5次。
通过以上步骤制备的猪源心包膜材料，进一步开发介入式心脏瓣膜产品，用于经导管主动脉瓣置入术(Transcatheter Aortic Valve Implantation,TAVI)。
对比例1
采集普通猪心包膜。脱细胞处理为：浸没于0.5wt.％SDS溶液中48h，振荡频率为100rpm，温度为25℃。交联处理为：浸没于1wt.％戊二醛溶液中6h，浸没温度为25℃。
效果例1免疫原性测试
1.1Gal含量检测：通过人α半乳糖苷酶(αGAL)ELISA试剂盒定量检测样品中Gal含量。
结果如下：
参照行业标准《组织工程医疗器械产品动物源性支架材料残留αGal抗原检测》(YY/T1561-2017)中的方法,按照中检院器械所质量评价室的“动物源医疗器槭中残留α-Gal抗原含量和Gal抗原清除率检测标准操作规范”(NIFDC-SOP-F-T-3001)进行检测，敲除GGTA1的猪(GTKO猪，实施例1用猪)心包膜样品的Gal抗原含量低于最低检测限(湿重)，对照组野生猪(对比例1用猪)Gal抗原含量为6.15±0.87×1015个/mg(湿重)，最低检测限为0.03125(相对于Gal-BSA)ug/mL(相当于8.25×1011个抗原表位/每个反应)。说明实施例1样品具有更低的免疫原性。
1.2免疫组化检测：在大鼠皮下植入样品，经特定时间后，处死实验大鼠，取出植入材料以及周围皮肤组织，用4wt.％多聚甲醛固定液固定，用CD68单抗做免疫组化染色。
结果如图1所示：
CD68单抗进行免疫组化染色，主要标识由于免疫排斥反应测试样品中出现的巨噬细胞(深棕色)。结果表明，经过1个月大鼠皮下植入，实施例1样品基本没有发现巨噬细胞，而对比例1发现大量巨噬细胞，说明实施例1样品的免疫原性远远低于对比例1。
效果例2生物活性测试
2.1组织相容性检测：将样品植入大鼠肌肉内，经特定时间后，处死实验大鼠，取出植入材料以及周围肌肉组织，用4wt.％多聚甲醛固定液固定，进行HE染色。
结果如图2所示：
HE染色表明，经过1个月大鼠肌肉植入，实施例1样品和周围肌肉组织完全融合，细胞进入样品生长，而对比例1样品和周围肌肉组织有明显界限，说明实施例1样品的生物活性更好。
实施例2
一种牛源心包膜材料及其制备方法和在腹壁疝气修补中的应用。
制备方法如下：
a.通过TALEN系统基因编辑制备敲除GGTA1、CMAH的牛，使用稳定传代4代的基因编辑牛；
b.采集基因编辑牛的心包膜作为原材料；
c.将心包膜原材料进行如下处理：
c1.超声波清洗，20KHz处理4h，功率1KW，温度为20℃；
c2.浸没于5wt.％SDS溶液中6h，振荡频率为300rpm，温度为20℃；
c3.超声波清洗，80KHz处理3h，功率5KW，温度为40℃；
c4.浸没于1wt.％SDS溶液中2h，振荡频率为250rpm，温度为30℃；
c5.超声波清洗，100KHz处理3h，功率5KW，温度为20℃。
d.浸没于0.00001wt.％京尼平溶液中10h，浸没温度为30℃，重复浸没10次；
浸没于1wt.％戊二醛溶液中2h，浸没温度为25℃，重复浸没5次；
浸没于0.2wt.％原花青素溶液中4h，浸没温度为30℃，重复浸没2次。
通过以上步骤制备的牛源心包膜材料，进一步开发腹壁疝气修补产品。
对比例2
采集普通牛心包膜。脱细胞处理为：浸没于1wt.％SDS溶液中12h，振荡频率为300rpm，温度为30℃。交联处理为：浸没于2wt.％戊二醛溶液中12h，浸没温度为30℃。
效果例3免疫原性测试
3.1免疫组化检测：在大鼠皮下植入样品，经特定时间后，处死实验大鼠，取出植入材料以及周围皮肤组织，用4wt.％多聚甲醛固定液固定，用CD68单抗做免疫组化染色。
结果如图3所示：
CD68单抗进行免疫组化染色，主要标识由于免疫排斥反应测试样品中出现的巨噬细胞(深棕色)。结果表明，经过1个月大鼠皮下植入，实施例2样品基本发现少量巨噬细胞，而对比例2发现大量巨噬细胞，说明实施例2样品的免疫原性低于对比例2。
效果例4生物活性测试
4.1组织相容性检测：将样品植入大鼠肌肉内，经特定时间后，处死实验大鼠，取出植入材料以及周围肌肉组织，用4wt.％多聚甲醛固定液固定，进行HE染色。
结果如图4所示：
HE染色表明，经过1个月大鼠肌肉植入，实施例2样品和周围肌肉组织融合情况比对比例2样品更好，说明实施例2样品的生物活性更好。
实施例3
一种猴源心包膜材料及其制备方法和在脑补片中的应用。
制备方法如下：
a.通过ZFNs系统基因编辑制备敲除GGTA1、β4GalNT2，转入hTBM的猴，使用稳定传代3代的基因编辑猴；
b.采集基因编辑猴的心包膜作为原材料；
c.将心包膜原材料进行如下处理：
c1.超声波清洗，60KHz处理5h，功率3KW，温度为30℃；
c2.浸没于0.01wt.％SDS溶液中10h，振荡频率为400rpm，温度为28℃；
c3.超声波清洗，50KHz处理4.5h，功率3KW，温度为37℃；
c4.浸没于0.5wt.％SDS溶液中3.5h，振荡频率为450rpm，温度为25℃；
c5.超声波清洗，70KHz处理5.5h，功率2KW，温度为20℃。
d.浸没于0.00005wt.％京尼平溶液中8h，浸没温度为35℃，重复浸没4次；
浸没于0.05wt.％戊二醛溶液中3h，浸没温度为30℃，重复浸没2次；
浸没于0.07wt.％原花青素溶液中2h，浸没温度为30℃，重复浸没3次。
通过以上步骤制备的猴源心包膜材料，进一步开发脑补片产品。
对比例3
采集普通猴心包膜。脱细胞处理为：浸没于5wt.％SDS溶液中12h，振荡频率为500rpm，温度为20℃。交联处理为：浸没于5wt.％戊二醛溶液中12h，浸没温度为30℃。
效果例5免疫原性测试
5.1免疫组化检测：在大鼠皮下植入样品，经特定时间后，处死实验大鼠，取出植入材料以及周围皮肤组织，用4wt.％多聚甲醛固定液固定，用CD3单抗做免疫组化染色。
结果如图5所示：CD3单抗进行免疫组化染色，主要标识由于免疫排斥反应测试样品中出现的T细胞(深棕色)。结果表明，经过1个月大鼠皮下植入，实施例3样品基本发现少量T细胞，而对比例3发现大量T细胞，说明实施例3样品的免疫原性低于对比例3。
效果例6生物活性测试
6.1组织相容性检测：将样品植入大鼠肌肉内，经特定时间后，处死实验大鼠，取出植入材料以及周围肌肉组织，用4wt.％多聚甲醛固定液固定，进行HE染色。
结果如图6所示：HE染色表明，经过1个月大鼠肌肉植入，实施例3样品和周围肌肉组织融合情况比对比例3样品更好，说明实施例3样品的生物活性更好。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种心包膜材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、繁育基因编辑动物；
步骤2、采集步骤1所述动物的心包膜作为原料；
步骤3、取步骤2制得的所述原料脱细胞；
步骤4、取步骤3制得的材料交联化；
其中，步骤3具体为：
超声波清洗，20～100KHz处理30min～6h，功率500W～5KW，温度为0～40℃；
浸没于0.001～5wt.％SDS溶液中1～24h，振荡频率为100～1000rpm，温度为0～40℃；
超声波清洗，40～80KHz处理3～6h，功率1～5KW，温度为20～40℃；
浸没于0.001～1wt.％SDS溶液中3～6h，振荡频率为100～500rpm，温度为20～40℃；
超声波清洗，60～100KHz处理3～6h，功率1～5KW，温度为20～40℃；
步骤4具体为：
浸没于0.00001～5wt.％京尼平溶液中0.5～12h，浸没温度为0～40℃，重复浸没1～10次；
浸没于0.001～1wt.％戊二醛溶液中0.5～24h，浸没温度为25～40℃，重复浸没1～5次；
浸没于0.005～5wt.％原花青素溶液中0.5～12h，浸没温度为25～40℃，
重复浸没1～5次。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因编辑包括巨型核酸酶(Meganuclease)、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)或成簇规律间隔短回文重复(CRISPR/Cas)系统中的至少一种。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述基因编辑包括基因敲除和/或基因转入；
所述基因敲除中敲除的基因包括GGTA1、CMAH、β4GalNT2或PERV中的至少一种；
基因转入中转入的基因包括hCD46、hCD55、hCD47、LEA29Y、hTBM、hTFPI或EPCR中的至少一种。
4.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述动物包括猪、牛、羊、马、猴、狗、兔、鸡、鼠、蚕、鱼、海洋生物、驴中的至少一种；所述动物为基因编辑后稳定传代3代以上的动物；优选的，选用基因编辑后稳定传代6代的动物制备心包膜材料。
5.如权利要求1至4任一项所述的方法制得的动物源性心包膜材料。
6.如权利要求5所述的动物源性心包膜材料在制备组织工程材料、再生医学材料、转化医学材料中的应用。
7.组合物，其特征在于，包括如权利要求6所述的动物源性心包膜材料以及医学上可接受的辅料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010208263.7A CN113425907A (zh) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | 一种心包膜材料及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010208263.7A CN113425907A (zh) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | 一种心包膜材料及其制备方法和用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113425907A true CN113425907A (zh) | 2021-09-24 |
Family
ID=77752610
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010208263.7A Pending CN113425907A (zh) | 2020-03-23 | 2020-03-23 | 一种心包膜材料及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113425907A (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1775304A (zh) * | 2005-11-30 | 2006-05-24 | 中国科学院上海硅酸盐研究所 | 具有生物活性的人工生物瓣瓣膜的制备方法 |
| CN104189956A (zh) * | 2014-08-27 | 2014-12-10 | 陕西瑞盛生物科技有限公司 | 一种可注射填充植入剂及其制备方法 |
| CN104623732A (zh) * | 2013-11-13 | 2015-05-20 | 中国科学院上海硅酸盐研究所 | 人工生物心脏瓣膜材料及制备方法和用途 |
| CN104998299A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-10-28 | 陕西博与再生医学有限公司 | 一种脱细胞抗钙化心脏补片及其制备方法 |
| CN105194735A (zh) * | 2015-10-30 | 2015-12-30 | 成都青山利康药业有限公司 | 一种脱细胞生物羊膜及种以及京尼平交联脱细胞生物羊膜的制备方法 |
| CN108261565A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-07-10 | 北京桀亚莱福生物技术有限责任公司 | 一种疝补片、制备方法及其在疝修补中的应用 |
| CN108642054A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-12 | 武汉博杰生物医学科技有限公司 | 降低免疫原性sgRNA、低免疫原性敷料及其制备方法 |
| CN109078226A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-25 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种微孔隙脱细胞猪主动脉基质 |
-
2020
- 2020-03-23 CN CN202010208263.7A patent/CN113425907A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1775304A (zh) * | 2005-11-30 | 2006-05-24 | 中国科学院上海硅酸盐研究所 | 具有生物活性的人工生物瓣瓣膜的制备方法 |
| CN104623732A (zh) * | 2013-11-13 | 2015-05-20 | 中国科学院上海硅酸盐研究所 | 人工生物心脏瓣膜材料及制备方法和用途 |
| CN104189956A (zh) * | 2014-08-27 | 2014-12-10 | 陕西瑞盛生物科技有限公司 | 一种可注射填充植入剂及其制备方法 |
| CN104998299A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-10-28 | 陕西博与再生医学有限公司 | 一种脱细胞抗钙化心脏补片及其制备方法 |
| CN105194735A (zh) * | 2015-10-30 | 2015-12-30 | 成都青山利康药业有限公司 | 一种脱细胞生物羊膜及种以及京尼平交联脱细胞生物羊膜的制备方法 |
| CN108261565A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-07-10 | 北京桀亚莱福生物技术有限责任公司 | 一种疝补片、制备方法及其在疝修补中的应用 |
| CN108642054A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-12 | 武汉博杰生物医学科技有限公司 | 降低免疫原性sgRNA、低免疫原性敷料及其制备方法 |
| CN109078226A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-25 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种微孔隙脱细胞猪主动脉基质 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6728307B2 (ja) | 組織製品の酵素処理方法 | |
| EP0306256B1 (en) | Bioprosthetic valve | |
| US5720777A (en) | Biological material pre-fixation treatment | |
| CN109651627B (zh) | 天然聚合物交联剂及其在制备抗钙化生物瓣膜中的应用 | |
| ES2846758T3 (es) | Métodos para eliminar la alfa-galactosa | |
| KR101717234B1 (ko) | 생체적합성 각막 생성방법 및 생체적합성 조직 탈세포 처리 조성물 | |
| US20090043383A1 (en) | Genetically modified heart valve xenografts | |
| JP2008228744A (ja) | 生体由来移植用組織の石灰化を抑制するための処理方法および処理された組織 | |
| US20100023124A1 (en) | Biological nasal bridge implant and method of manufacturing | |
| KR101217136B1 (ko) | 이종 이식용 생체 조직 및 그 제조 방법 | |
| AU2003289048B2 (en) | Method of treating biological tissue by microwave-irradiation | |
| KR102182882B1 (ko) | 돼지 진피-유래 치과용 차폐막 및 이의 제조방법 | |
| CN113425907A (zh) | 一种心包膜材料及其制备方法和用途 | |
| CN113425905A (zh) | 一种血管材料及其制备方法和用途 | |
| CN113429475A (zh) | 一种胶原材料及其制备方法和用途 | |
| CN113425904A (zh) | 一种口腔补片材料及其制备方法和用途 | |
| CN113425912A (zh) | 一种脱细胞真皮材料及其制备方法和用途 | |
| CN113425906A (zh) | 一种软骨材料及其制备方法和用途 | |
| CN113425900A (zh) | 一种胶原水凝胶材料及其制备方法和用途 | |
| KR101324508B1 (ko) | 바이오 스캐폴드에서 이종 면역원 및 레트로바이러스를 제거하는 방법 | |
| EP2873428A1 (en) | Substrate for formation of membrane-like connective tissue and production method for membrane-like connective tissue using same | |
| JP2011041716A (ja) | 生体組織の処理方法 | |
| US20010032015A1 (en) | In vitro modification of cardiac valvular xenografts | |
| JP2014030596A (ja) | 人工角膜及び人工角膜の生産方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210924 |