CN113418916A - 肌酐定量快速检测试纸条及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肌酐定量快速检测试纸条，包括底板以及从一端到另一端依次设置在所述底板上的样品垫、酶工作垫、NC膜、PC薄膜，且样品垫的另一端搭在酶工作垫的一端，酶工作垫的另一端搭在NC膜的一端；所述PC薄膜远离NC膜的一端被支起，使PC薄膜的另一端部分悬空在NC膜的另一端上方，且在PC薄膜靠近NC膜的一面，当下压PC薄膜后与NC膜接触的区域均匀涂布有显色剂。还公开了一种肌酐定量快速检测试纸条的制备方法及试剂盒。本发明采用侧向层析技术以及反应区与加样区分离的设计，通过下压接触显色的方式，显色快速且均匀。
Description
技术领域
本发明涉及医疗检测技术领域，特别是涉及一种肌酐定量快速检测试纸条及其制备方法。
背景技术
随着糖尿病肾病机制的研究进展，早期预测糖尿病肾病的指标也逐渐被发现及应用于临床，但目前诊断糖尿病肾病的金标准是测定24小时尿或者过夜时段尿微量白蛋白的排泄率。而采集24小时尿或过夜时段尿液标本留取麻烦、费时、患者依从性差。因此，限制了两者在临床上的应用。研究表明尿蛋白/尿肌酐比(urinary albumin-to-creatinineratio，ACR)测定是糖尿病早期肾损伤的敏感指标，并且可用来监测尿蛋白排泄情况，利用尿肌酐(Ucr)矫正的办法使随机尿微量白蛋白的结果稳定可靠。首先，在正常情况下或肾轻度受损时肌酐排出量基本上保持恒定的；其次，尿微量白蛋白与尿肌酐的排出量均受相同的因素影响而产生波动，因此个体中尿微量白蛋白和肌酐比值则保持相对恒定，避免了单独观察某一个指标会产生的片面性；而且收集单次晨尿检测其尿微量白蛋白/肌酐比值的方法具有简单、快捷等优点。
目前，用于定量检测尿肌酐的干化学试纸产品种类较少，且大都为纵向垂直检测试纸，样品区和反应区在同一位置，上方加样，在下方检测孔检测。因而会造成因加样区与显色区在同一位置，显色易受到样本干扰；试剂层、指示剂层接触，指示剂层易变色等问题。
因此亟需提供一种新型的肌酐定量检测试纸条来解决上述问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种肌酐定量快速检测试纸条及其制备方法，采用侧向层析技术以及反应区与加样区分离的设计，通过下压接触显色的方式，显色快速且均匀。
为解决上述技术问题，本发明采用的第一个技术方案是：提供一种肌酐定量快速检测试纸条，包括底板以及从一端到另一端依次设置在所述底板上的样品垫、酶工作垫、NC膜、PC薄膜，且样品垫的另一端搭在酶工作垫的一端，酶工作垫的另一端搭在NC膜的一端；
所述PC薄膜远离NC膜的一端被支起，使PC薄膜的另一端部分悬空在NC膜的另一端上方，且在PC薄膜靠近NC膜的一面，当下压PC薄膜后与NC膜接触的区域均匀涂布有显色剂。
在本发明一个较佳实施例中，所述酶工作垫包括10—50KU/L的肌酐酶、10—30KU/L的肌酸酶、10—30KU/L的肌氨酸氧化酶。
在本发明一个较佳实施例中，所述酶工作垫还包括10—30KU/L的辣根过氧化物酶、10—30KU/L抗坏血酸氧化酶、1.0—2.0g/L海藻糖、0.15—0.35g/L牛血清白蛋白、1.0—3.0g/L复合酶稳定剂。
在本发明一个较佳实施例中，所述样品垫、酶工作垫的材质采用玻璃纤维膜或滤血膜或无纺布或层析纸或滤纸。
为解决上述技术问题，本发明采用的第二个技术方案是：提供一种肌酐定量快速检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备样品垫：
使用pH8.0—9.0的TAPS缓冲液浸泡膜材，并采用除湿或37℃烘干方法干燥1—2h，获得样品垫；
(2)制备酶工作垫：
使用酶工作液浸泡膜材，并采用低温真空干燥的方式干燥完全，获得酶工作垫；
(3)制备PC薄膜：
将0.1％—1％的显色剂溶液均匀涂布到PC薄膜磨砂面的指定区域，50℃烘箱中干燥5—10min，得到涂布显色剂的PC薄膜；
(4)组装：
将处理好的样品垫、酶工作垫切条，与NC膜和涂布显色剂的PC薄膜组装在底板上，然后按照规定宽度斩切制成试条。
在本发明一个较佳实施例中，所述酶工作液包括0.15—0.25mmol/L pH为7.0—7.5的PBS缓冲液、10—50KU/L的肌酐酶、10—30KU/L的肌酸酶、10—30KU/L的肌氨酸氧化酶、10—30KU/L的辣根过氧化物酶、10—30KU/L抗坏血酸氧化酶、1.0—2.0g/L海藻糖、0.15—0.35g/L牛血清白蛋白、1.0—3.0g/L复合酶稳定剂。
在本发明一个较佳实施例中，在步骤(3)中，所述指定区域为当下压PC薄膜后与NC膜接触的区域。
为解决上述技术问题，本发明采用的第三个技术方案是：提供一种肌酐定量快速检测试剂盒，包括壳体及设置在壳体内的如上所述的肌酐定量快速检测试纸条。
在本发明一个较佳实施例中，所述壳体上方设置有加样孔和检测孔。
本发明的有益效果是：
(1)本发明通过结合酶法与侧向层析技术，降低了纵向垂直检测试纸中样本组份对显色反应的干扰；
(2)所述试纸条的PC薄膜的部分区域悬空在NC膜上方，使得反应区与加样区分离，通过采用下压接触显色的方式，使得试剂层与指示剂层分离，不仅解决了指示剂易变色的问题，而且能够控制显色反应的启动时间，并能限定显色区域，使得显色均匀、快速；
(3)所述试纸条的制作工艺简单、经济且检测快速，能够配合尿微量白蛋白定量检测试纸对尿液样本进行尿蛋白/尿肌酐比(ACR)测定，适用于临床应用检测；
(4)本发明通过对膜材的选用可以方便地更改设计为可以检测血清、血液等样本的试纸条，可以作为一种研制其他项目的干化学方法，例如采用玻璃纤维膜材，可设计为尿肌酐检测试纸条；采用滤血膜材，可设计为检测血清、血液等样本的试纸条。
附图说明
图1是本发明所述肌酐定量快速检测试纸条一较佳实施例的结构示意图。
附图中各部件的标记如下：1、底板，2、样品垫，3、酶工作垫，4、NC膜，5、PC薄膜。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
请参阅图1，本发明实施例包括：
一种肌酐定量快速检测试纸条，包括底板1以及从一端到另一端依次设置在所述底板1上的样品垫2(SP)、酶工作垫3(EP)、NC膜4、PC薄膜5，且样品垫2的另一端搭在酶工作垫3的一端，酶工作垫3的另一端搭在NC膜4的一端；所述PC薄膜5远离NC膜4的一端被支起，使PC薄膜5的另一端部分悬空在NC膜4的另一端上方，且在PC薄膜5靠近NC膜4的一面，当下压PC薄膜5后与NC膜4接触的区域均匀涂布有显色剂。优选的，所述PC薄膜5被支起的方式可采用热熔胶支起并固定，或双面胶支起并固定。
进一步的，所述样品垫2和酶工作垫3的膜材除了是玻璃纤维膜外，还可以是其它有相同或相似作用的膜材，如滤血膜、无纺布、层析纸、滤纸等。所述PC薄膜5为哑光磨砂材质，所述底板1为PVC衬底或胶板。
所述酶工作垫3采用0.15—0.25mmol/L pH为6.0—8.0的PBS缓冲液浸泡，其中包含10—50KU/L的肌酐酶、10—30KU/L的肌酸酶、10—30KU/L的肌氨酸氧化酶、10—30KU/L的辣根过氧化物酶、10—30KU/L抗坏血酸氧化酶、1.0—2.0g/L海藻糖、0.15—0.35g/L牛血清白蛋白(BSA)、1.0—3.0g/L复合酶稳定剂。
该检测试纸运用干化学技术，与配套仪器使用，实现对尿液中肌酐(Cr)的定量检测，可用来监测尿肌酐(Ucr)的排泄情况。
以测试尿肌酐为例，将30ul尿液样本滴入试纸条加样区,样本经过样品垫2层析到酶工作垫3上，样本将预先干燥在酶工作垫3上的酶试剂复溶，进一步的样本带动试剂层析到NC膜4的反应区，层析过程样本中的Cr与肌酐酶、肌酸酶和肌氨酸氧化酶反应生成过氧化氢并在反应区富集，通过检测仪器的下压装置将涂布显色剂的PC薄膜5下压，使得PC薄膜5涂布显色剂面与NC膜4反应区紧密接触，此时生成的过氧化氢在辣根过氧化物酶的催化下与显色剂反应生成蓝色染料。样本中的Cr浓度越大，反应区生成染料的速度越快，信号强度变化速率反应了样本中Cr的浓度。通过仪器检测反应区的信号强度变化速率，拟合出Cr浓度与信号强度变化速率标准曲线，从而计算出样本中Cr的浓度。
本发明实施例还提供一种肌酐定量快速检测试剂盒，包括壳体及设置在壳体内的如上所述的肌酐定量快速检测试纸条。所述壳体上方设置有加样孔和检测孔。
本发明实施例还提供了所述肌酐定量快速检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备样品垫2：
使用pH8.0—9.0的TAPS缓冲液浸泡膜材，并采用除湿或37℃烘干方法干燥1—2h，获得样品垫2；
(2)制备酶工作垫3：
使用酶工作液浸泡膜材，并采用低温真空干燥的方式(4℃冰箱过夜干燥，或4℃真空干燥1—2h)干燥完全，获得酶工作垫3；
其中，所述酶工作液的基质是0.15—0.25mmol/L pH为7.0—7.5的PBS缓冲液，其中包含10—50KU/L的肌酐酶、10—30KU/L的肌酸酶、10—30KU/L的肌氨酸氧化酶、10—30KU/L的辣根过氧化物酶、10—30KU/L抗坏血酸氧化酶、1.0—2.0g/L海藻糖、0.15—0.35g/L BSA、1.0—3.0g/L复合酶稳定剂。
(3)制备PC薄膜：
将0.1％—1％的显色剂溶液均匀涂布到PC薄膜5磨砂面的指定区域，50℃烘箱中，干燥5—10min，得到涂布显色剂的PC薄膜5；
所述指定区域为当下压PC薄膜5后，PC薄膜5与NC膜4接触的区域。优选的，单个试纸条的该区域大小为6*10mm。
(4)组装：
将处理好的样品垫2、酶工作垫3切条，与NC膜4和涂布显色剂的PC薄膜5组装在底板1上，然后按照规定宽度斩切制成试条。
根据上述方法在相同生产环境条件下制备的试条及其配套检测设备，取Cr的高、中、低3种浓度的标品，各水平重复测定10次，计算变异系数(CV)，Cr的高、中、低3种浓度分别为5mM、15mM、25mM。
同一批试剂生产的试条，测试其批内CV，结果如下表：
| 项目 | 高浓度 | 中浓度 | 低浓度 |
| Cr均值(mM) | 24.84 | 16.26 | 4.89 |
| CV(％) | 8.46 | 6.24 | 4.05 |
根据上述方法在相同生产环境条件下制备三批试剂生产的试条，取Cr的高、中、低3种浓度的标品，使用配套设备进行测试，每个批号测试3次，分别计算每批3次测定的均值，测试其批间CV，结果如下表：
上述结果显示，批内、批间CV均在15％以内。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (9)
1.一种肌酐定量快速检测试纸条，其特征在于，包括底板以及从一端到另一端依次设置在所述底板上的样品垫、酶工作垫、NC膜、PC薄膜，且样品垫的另一端搭在酶工作垫的一端，酶工作垫的另一端搭在NC膜的一端；
所述PC薄膜远离NC膜的一端被支起，使PC薄膜的另一端部分悬空在NC膜的另一端上方，且在PC薄膜靠近NC膜的一面，当下压PC薄膜后与NC膜接触的区域均匀涂布有显色剂。
2.根据权利要求1所述的肌酐定量快速检测试纸条，其特征在于，所述酶工作垫包括10—50KU/L的肌酐酶、10—30KU/L的肌酸酶、10—30KU/L的肌氨酸氧化酶。
3.根据权利要求1所述的肌酐定量快速检测试纸条，其特征在于，所述酶工作垫还包括10—30KU/L辣根过氧化物酶、10—30KU/L抗坏血酸氧化酶、1.0—2.0g/L海藻糖、0.15—0.35g/L牛血清白蛋白、1.0—3.0g/L复合酶稳定剂。
4.根据权利要求1所述的肌酐定量快速检测试纸条，其特征在于，所述样品垫、酶工作垫的材质采用玻璃纤维膜或滤血膜或无纺布或层析纸或滤纸。
5.一种肌酐定量快速检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备样品垫：
使用pH8.0—9.0的TAPS缓冲液浸泡膜材，并采用除湿或37℃烘干方法干燥1—2h，获得样品垫；
(2)制备酶工作垫：
使用酶工作液浸泡膜材，并采用低温真空干燥的方式干燥完全，获得酶工作垫；
(3)制备PC薄膜：
将0.1％—1％的显色剂溶液均匀涂布到PC薄膜磨砂面的指定区域，50℃烘箱中干燥5—10min，得到涂布显色剂的PC薄膜；
(4)组装：
将处理好的样品垫、酶工作垫切条，与NC膜和涂布显色剂的PC薄膜组装在底板上，然后按照规定宽度斩切制成试条。
6.根据权利要求5所述的肌酐定量快速检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述酶工作液包括0.15—0.25mmol/L pH为7.0—7.5的PBS缓冲液、10—50KU/L的肌酐酶、10—30KU/L的肌酸酶、10—30KU/L的肌氨酸氧化酶、10—30KU/L的辣根过氧化物酶、10—30KU/L抗坏血酸氧化酶、1.0—2.0g/L海藻糖、0.15—0.35g/L牛血清白蛋白、1.0—3.0g/L复合酶稳定剂。
7.根据权利要求5所述的肌酐定量快速检测试纸条的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述指定区域为当下压PC薄膜后与NC膜接触的区域。
8.一种肌酐定量快速检测试剂盒，其特征在于，包括壳体及设置在壳体内的如权利要求1至4任一项所述的肌酐定量快速检测试纸条。
9.根据权利要求7所述的肌酐定量快速检测试剂盒，其特征在于，所述壳体上方设置有加样孔和检测孔。
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