CN113398107B - 2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的新应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了2‑苯甲酰胺基‑1,4‑萘醌的新应用。具体而言，本发明提供了2‑苯甲酰胺基‑1,4‑萘醌在制备抑制肿瘤细胞的制剂中的应用，其中，所述肿瘤细胞包括肺癌细胞和/或乳腺癌细胞。本发明进一步发现，2‑苯甲酰胺基‑1,4‑萘醌和维生素C联用可产生协同作用，能高效抑制肺癌细胞和/或乳腺癌细胞活力，诱导细胞凋亡和/或促进细胞自噬。

Description

2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的新应用
技术领域
本发明是关于2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的新应用，具体地说，是关于2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌显著抑制乳腺癌及肺癌细胞的活力并促进肿瘤细胞凋亡及自噬的应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的2020年全球最新癌症负担数据，预估了全球185个国家36种癌症类型的最新发病率、死亡率情况，以及癌症发展趋势。这项最新预估数据显示，全球乳腺癌新发病例已高达226万例，超过了肺癌的220万例，乳腺癌发病例取代肺癌，成为全球第一大癌症。但据统计2020年肺癌的全球死亡率依然稳居第一。肺癌和乳腺癌的高发病率和高致死率，已经成为严重影响和威胁人类健康与生存的恶性肿瘤之一。
近年来，对于肺癌和乳腺癌的治疗依然是以手术为主、放疗和化疗为辅的方法。虽然目前的免疫治疗对肿瘤的治疗有较明显的改善，但还是大量存在治疗效果差，复发及转移的问题。而目前对于肺癌和乳腺癌的治疗还是以传统的化疗为主，如何找到有效抑制乳腺癌及肺癌的化疗药物，是目前亟待解决的问题。
发明内容
本发明的一个目的在于开发一种安全有效的抗乳腺癌及肺癌的药物活性成分。
本案发明人通过体外实验证实了2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌对肺癌和乳腺癌具有抑制作用。在体外实验中，通过对2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌进行抗肺癌和乳腺癌细胞活性实验研究发现，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌对于实验用肺癌和乳腺癌细胞具有明显的活力抑制效果。且通过细胞克隆实验发现，PPM-18能够明显抑制肺癌和乳腺癌细胞的克隆生长。另外，以明场观察2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌处理后肺癌和乳腺癌细胞的形态，发现2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌可显著诱导细胞的死亡。本发明还发现2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌能显著诱导肺癌和乳腺癌细胞凋亡和自噬的发生。更进一步，当-苯甲酰胺基-1,4-萘醌与维生素C联用，其抑制肿瘤细胞的效果更为显著，且可显著降低2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的剂量，降低副作用和成本。
从而，一方面，本发明提供了2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌在制备抑制肿瘤细胞的制剂中的应用，其中，所述肿瘤细胞包括肺癌细胞和/或乳腺癌细胞。
2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌(2-benzamido-1,4-naphthoquinoe，又名NQN1，PPM-18)结构式如下：
Figure BDA0003196080150000021
2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的中心结构是一个萘醌环，和许多VK化合物类似。据文献报道，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌可以在体内体外抑制NF-κB的激活，通过这种作用，它抑制了脂多糖处理的巨噬细胞中iNOS(诱导型一氧化氮合成酶)的表达，从而抑制炎症和败血症的发生。同时，它也是HDAC(组蛋白去乙酰化酶)的抑制剂。此外，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌能够通过扮演一个在线粒体呼吸链(电子传递链上)电子载体的角色而增强线粒体电子传递链上的电子传递，增强线粒体有氧呼吸(氧气消耗)，推动线粒体呼吸链的ATP合成，从而可以抑制斑马鱼和小鼠的癫痫。CN 109172557 A报道了2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌在较高剂量下诱导膀胱癌细胞凋亡的作用，但并没有记载或启示对于其他肿瘤细胞的作用。
本发明发现了2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌作为活性成分对肺癌细胞和/或乳腺癌细胞的抑制作用。
根据本发明的具体实施方案，本发明的2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的应用中，所述抑制肿瘤细胞包括：
抑制肿瘤细胞活力；
抑制肿瘤细胞克隆形成；
促进肿瘤细胞出现死亡形态；
诱导肿瘤细胞凋亡；和/或
促进肿瘤细胞自噬。
根据本发明的具体实施方案，本发明的2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的应用中，所述促进肿瘤细胞自噬包括促进自噬相关蛋白的表达。
根据本发明的具体实施方案，本发明的2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的应用中，所述2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌是与维生素C联合用于制备抑制肿瘤细胞的制剂。
根据本发明的具体实施方案，本发明的2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的应用中，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌与维生素C联用的用量比例为(1μM-5μM)：(1mM-5mM)。
另一方面，本发明还提供了2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用，其中，所述肿瘤包括人肺癌和/或乳腺癌。
根据本发明的具体实施方案，本发明的2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的应用中，所述治疗肿瘤为在细胞水平或个体水平治疗。
根据本发明的具体实施方案，本发明的2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的应用中，所述2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌是与维生素C联合用于制备治疗肿瘤的药物。
根据本发明的具体实施方案，本发明的2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的应用中，所述药物通过以下至少一种途径用于治疗肿瘤：
抑制肿瘤细胞活力；
抑制肿瘤细胞克隆形成；
促进肿瘤细胞出现死亡形态；
诱导肿瘤细胞凋亡；和/或
促进肿瘤细胞自噬。
本发明中，所述“治疗”包括改善、预防或逆转疾病或失调或其至少一种明显的症状，改善、预防或逆转与正在治疗的疾病或失调相关的至少一种可测量的物理参数，和/或在身体上(例如，明显症状的稳定)和/或生理上(例如，物理参数的稳定)抑制或减缓疾病或失调的进展。
根据本发明的具体实施方案，本发明在应用时，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌与维生素C可分别给予或是混合后给予受试者。当2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌与维生素C分别给予受试者时，可在同一时间段内、或是间隔时间内给予受试者。
根据本发明的优选具体实施方案，本发明在应用时，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌与维生素C应以有效量的剂量给予受试者。本发明的实验研究表明，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌与肿瘤细胞接触的有效量可为5μM或更低，例如1μM-5μM；维生素C与肿瘤细胞接触的有效量可为5mM或更低，例如1mM-5mM。
根据本发明的具体实施方案，本发明中，所述2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌可以为化学合成的。
综合而言，本发明的研究表明，在细胞水平上2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌对于肺癌和乳腺癌细胞具有明显强烈细胞活力抑制作用。进一步地，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌可以在肿瘤细胞内诱发肺癌和乳腺癌细胞发生凋亡和自噬。此外，当-苯甲酰胺基-1,4-萘醌与维生素C联用，其抑制肺癌和乳腺癌细胞的效果更为显著，且可显著降低2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌的剂量，降低副作用和成本，是非常有前景的肿瘤治疗新药。
附图说明
图1A-图1C是实施例1中PPM-18对肺癌A549和乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231的细胞活力抑制效应对比图。其中，图1A是A549细胞在不同PPM-18剂量下的细胞活力图；图1B是MCF-7细胞在不同PPM-18剂量下的细胞活力图；图1C是MDA-MB-231细胞在不同PPM-18剂量下的细胞活力图。
图2是实施例2中PPM-18对肺癌A549和乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231的细胞克隆形成的抑制图。
图3是实施例3中PPM-18诱导肺癌和乳腺癌细胞死亡形态结果图。
图4是实施例4中PPM-18诱导肺癌和乳腺癌细胞在不同PPM-18剂量下的流式检测细胞凋亡图。
图5是实施例5中PPM-18诱导肺癌和乳腺癌细胞凋亡和自噬。其方法是通过免疫印迹实验检测凋亡及自噬相关蛋白的表达。凋亡蛋白：cleaved caspase-9；自噬蛋白：P62和LC3B；内参蛋白：GAPDH。
图6A与图6B为PPM-18和Vitamin C联合用药抑制非小细胞肺癌A549细胞、三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞系细胞活力和克隆形成。其中，图6A显示PPM-18和Vitamin C联合用药抑制多种癌细胞系细胞活力。图6B显示PPM-18和Vitamin C联合用药抑制多种癌细胞系的克隆形成能力。图中显示的P为5μM的PPM-18的缩写，C为5mM的Vitamin C的缩写，P+C为5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C联合用药。
图7A与图7B为PPM-18和Vitamin C联合用药对人正常细胞L02无明显细胞活力抑制效应的实验结果。其中，图7A显示PPM-18和Vitamin C联合用药对L02细胞活力无明显抑制效应。图7B显示PPM-18和Vitamin C联合用药对L02细胞克隆形成能力没有明显影响。图中显示的P为5μM的PPM-18的缩写，C为5mM的Vitamin C的缩写，P+C为5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C联合用药。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例中所用的PPM-18为化学合成的药物，母液(DMSO溶解)保存在-80℃中，其水溶液现配现用，且注意避光。
实施例1、PPM-18可以抑制肺癌和乳腺癌的细胞活力
本实施例中，PPM-18抑制肺癌和乳腺癌的细胞活力实验主要包括以下步骤：
(1-1)细胞培养：将实验用肺癌和乳腺癌细胞进行体外培养，待细胞长到对数生长期，进行消化传代种板；
(1-2)种96孔板：将肺癌和乳腺癌细胞系A549和MCF-7、MDA-MB-231用含10％胎牛血清培养液制成单个细胞悬液，以每孔10000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μL，培养至细胞丰度达到80％-90％(一般培养24h)；
(1-3)加药处理：培养24h后，轻轻吸取掉旧培养液，用不同浓度PPM-18(0μM，1μM，5μM，10μM，15μM，20μM，30μM，50μM)分别处理培养的细胞，加药处理时间24h；
(1-4)MTS检测：培养24h后，每孔加入20μL的MTS检测试剂，37℃避光孵育1-2h，然后选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值，记录结果，并根据记录结果，绘制PPM-18的细胞活力检测结果图。
实验结果请参见图1A、图1B和图1C。结果说明：如图所示，选取了0μM、1μM、5μM、10μM、15μM、20μM、30μM和50μM这8个浓度，分别加药处理24h，发现PPM-18呈现浓度梯度依赖的方式抑制肺癌和乳腺癌细胞活力，并通过计算IC50，得出PPM-18对A549的IC50作用浓度为15.52μM，对MCF-7的IC50作用浓度为7.82μM，对MDA-MB-231细胞的IC50作用浓度为21.30μM。通过MTS实验结果说明在细胞水平上PPM-18对于肺癌A549和乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231具有明显强烈细胞活力抑制作用。
实施例2、PPM-18抑制肺癌和乳腺癌细胞克隆形成
实验主要包括以下实验步骤：
(2-1)细胞培养：将实验用肺癌和乳腺癌细胞进行体外培养，待细胞长到对数生长期，进行消化传代种板；
(2-2)收集细胞：将培养瓶中生长到对数生长期的肺癌和乳腺癌细胞(细胞数约为5*106)，PBS润洗，加入胰蛋白酶于37℃细胞培养箱中消化2分钟，然后加入含胎牛血清的培养基终止消化作用，并转移到15ml离心管中，于1500rpm，离心5min；
(2-3)稀释种板：离心结束，弃掉上清液，留下细胞沉淀，并加入1ml新鲜的培养液，轻柔吹打混匀，同时，取2只1.5ml的EP管，分别加入1ml新鲜的培养液。取15ml离心管中的细胞悬液100μL加入到其中的一只1.5ml EP管中，轻轻吹打混匀，然后从中取出100μL加入到另一只1.5ml EP管中，再次轻轻吹打混匀。然后从第二只1.5ml EP管中取出100μL加入到装有12ml新鲜的培养液的15ml离心管中，混匀后种12孔板，每孔1ml。以这种方式稀释种板，12孔板中每孔约200-500个细胞；
(2-4)加药处理：待12孔板中的细胞贴壁培养3-4天后，吸取掉旧培养液，加入浓度梯度的PPM-18(0μM、1μM、5μM、10μM、15μM、20μM)，处理12h，然后吸取掉含药物培养基，加入不含药物的新鲜培养液继续培养4-5天；
(2-5)克隆形成：待形成肉眼可见的细胞克隆后，终止培养。吸取掉板中的旧培养液，每孔加入1ml PBS润洗一遍，然后加入无水甲醇固定10分钟，用PBS洗涤三次，再加入结晶紫染色30分钟，并于30分钟后，PBS润洗3-4遍，然后将板子避光干燥，并拍照和计算每组克隆形成数。
实验结果请参见图2。如图2所示，随着PPM-18浓度梯度的上升，其对3种癌细胞系的克隆形成呈现梯度抑制效果。且当浓度达到20μM时，克隆形成率趋近于零，进一步说明PPM-18对肺癌和乳腺癌细胞具有显著的抑制效果。
实施例3、PPM-18促进肺癌和乳腺癌细胞出现明显的死亡形态
本实施例中，用倒置荧光显微镜观察PPM-18诱导细胞死亡形态，主要包括以下实验步骤：
(3-1)细胞培养：将培养瓶中的细胞在37℃、5％的CO2的细胞培养箱中培养至细胞处于对数生长期；
(3-2)细胞种板：将处于对数生长期的细胞加入PBS润洗、胰酶消化后，加入12ml的新鲜的培养液轻轻吹打混匀，种12孔板，每孔1ml细胞悬液，上下左右来回晃动5次，置于细胞培养箱中培养48h，培养24h时换液一次；
(3-3)加药处理：48h后，细胞处于90％-100％的丰度，然后加PPM-18处理(PPM-18的浓度为0μM、1μM、5μM、10μM、15μM、20μM)24h；
(3-4)细胞固定：药物处理结束，弃掉含药物的上清液，用PBS洗涤一遍，随后每孔加入200μL的4％的多聚甲醛。室温摇床固定10分钟；
(3-5)DAPI染色：固定之后，PBS润洗3遍；每孔加入含DAPI染色液200μL室温避光染色10分钟；随后PBS润洗三遍；(DAPI：细胞核染料)
(3-6)倒置荧光显微镜拍摄细胞形态。
实验结果请参见图3。如图3所示，随着PPM-18浓度梯度的上升，3种癌细胞系呈现明显的细胞死亡形态，且呈现浓度梯度依赖性。
实施例4、PPM-18可以诱导肺癌和乳腺癌细胞凋亡
本实施例中，用流式检测PPM-18诱导细胞凋亡，主要包括以下实验步骤：
(4-1)细胞培养：将培养瓶中的细胞在37℃、5％的CO2的细胞培养箱中培养至细胞处于对数生长期；
(4-2)细胞种板：将处于对数生长期的细胞加入PBS润洗、胰酶消化后，加入12ml的新鲜的培养液轻轻吹打混匀，种12孔板，每孔1ml细胞悬液，上下左右来回晃动5次，置于细胞培养箱中培养48h，培养24h时换液一次；
(4-3)加药处理：48h后，细胞处于90％-100％的丰度，然后加PPM-18处理(PPM-18的浓度为0μM、5μM、10μM、15μM)24h；
(4-4)收集细胞：24h后，将12孔板中的细胞收集于15ml离心管中，转速1500rpm离心5分钟，弃去上清液后加入PBS缓冲液1ml离心洗涤1次；
(4-5)加入凋亡检测试剂：采用庄盟的凋亡检测试剂盒进行细胞凋亡的检测，其具体过程为用双蒸水稀释binding buffer，取500μL 1x binding buffer重悬细胞，每管加入5μL Annexin V-FITC和10μL的PI；轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育5分钟；
如图4所示，通过流式检测，确实PPM-18诱导了肺癌和乳腺癌细胞凋亡。对于肺癌细胞A549，在15μM的PPM-18浓度下，其凋亡率达到了19.25％，此时对照组凋亡率为8.23％左右，凋亡率上调了2.3倍。对于乳腺癌细胞MCF-7，在15μM的PPM-18浓度下，其凋亡率达到了79.73％，此时对照组凋亡率仅为4.69％左右，凋亡率上调了17倍。
实施例5、PPM-18诱导肺癌和乳腺癌细胞凋亡及自噬蛋白的表达
采用western blot检测细胞凋亡及自噬蛋白表达包括以下步骤：
(5-1)细胞培养：将培养瓶中的细胞在37℃、5％的CO2的细胞培养箱中培养至细胞处于对数生长期；
(5-2)细胞种板：将处于对数生长期的细胞加入PBS润洗消化后，加入12ml的新鲜的培养液轻轻吹打混匀，种6孔板，每孔2ml细胞悬液，上下左右来回晃动5次，置于细胞培养箱中培养48h，培养24h时换液一次；
(5-3)加药处理：48h后，细胞处于90％-100％的丰度，然后加PPM-18处理(PPM-18的浓度为0μM、5μM、10μM、15μM)24h；
(5-4)提取样品蛋白：去除含药物培养液后加1ml PBS冲洗一遍；然后加入含有蛋白酶及磷酸酶抑制剂的裂解液，在冰上裂解30min；12000rpm，离心20min，收集上清；进行蛋白浓度测定；加入蛋白上样缓冲液，100℃，煮沸5min，进行蛋白变性；
(5-5)电泳：配置10％的分离胶，5％的浓缩胶；根据蛋白浓度，决定上样体积；跑电泳，初始电压50V，跑30min，之后调成电压80V，跑2h；根据目标蛋白分子量，进行切胶操作；
(5-6)转膜：将切下的胶置于转膜板上，按照三明治模型加上海绵、滤纸和PVDF膜。设置电流300mA，转膜1h；
(5-7)封闭和孵抗：将含有目的蛋白的PVDF膜放置于脱脂牛奶中室温摇床封闭3h；一抗(1:2000稀释)4℃摇床过夜；二抗(1：10000稀释)，室温摇床避光孵育3h；TBST洗涤3次，每次30min；
(5-8)显影。
图5显示了PPM-18诱导肺癌A549和乳腺癌细胞MCF-7凋亡及自噬的发生。
通过western检测凋亡相关蛋白caspase-9的切割片段，发现随着浓度梯度的上升，在A549和MCF-7细胞中均发现有明显的上调。并且通过western检测自噬相关蛋白P62和LC3B的表达，发现随着PPM-18浓度梯度的上升，P62的蛋白表达有明显的下调，LC3B的蛋白表达有明显的上升，证明PPM-18确实在A549和MCF-7细胞中促进自噬的发生。
实施例6、PPM-18和Vitamin C联合用药可以抑制肺癌、乳腺癌细胞活力和克隆的形成
本实施例中，PPM-18和Vitamin C联合用药抑制肺癌、乳腺癌细胞系细胞活力实验主要包括以下步骤：
(6-1)细胞培养：将实验用癌细胞进行体外培养，待细胞长到对数生长期，进行消化传代种板；
(6-2)种96孔板：将多种癌细胞系细胞用含10％胎牛血清培养液制成单个细胞悬液，以每孔10000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μl，培养至细胞丰度达到80％-90％(一般培养24h)；
(6-3)加药处理：培养24h后，轻轻吸掉旧培养液，用5μM的PPM-18和5mM的VitaminC联合用药以及5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C单一药物分别处理培养的细胞，加药处理时间24h；
(6-4)MTT检测：培养24h后，每孔加入20μL的MTT检测试剂，37℃避光孵育1-2h，然后选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值，记录结果，并根据记录结果，绘制PPM-18和Vitamin C联合用药的细胞活力检测结果图。
PPM-18和Vitamin C联合用药抑制肺癌、乳腺癌细胞系细胞克隆形成实验主要包括以下实验步骤：
(6-a)细胞培养：将实验用癌细胞进行体外培养，待细胞长到对数生长期，进行消化传代种板；
(6-b)收集细胞：将培养瓶中生长到对数生长期的癌细胞(细胞数约为5*106)，PBS润洗，加入胰蛋白酶于37℃细胞培养箱中消化2分钟，然后加入含胎牛血清的MEM培养基终止消化作用，并转移到15ml离心管中，于1500rpm，离心5min；
(6-c)稀释种板：离心结束，弃掉上清液，留下细胞沉淀，并加入1ml新鲜的MEM培养液，轻柔吹打混匀，同时，取2只1.5ml的EP管，分别加入1ml新鲜的MEM培养液。取15ml离心管中的细胞悬液100μL加入到其中的一只1.5ml EP管中，轻轻吹打混匀，然后从中取出100μL加入到另一只1.5ml EP管中，再次轻轻吹打混匀。然后从第二只1.5ml EP管中取出100μL加入到装有12ml新鲜MEM培养液的15ml离心管中，混匀后种12孔板，每孔1ml。以这种方式稀释种板，12孔板中每孔约200-500个细胞；
(6-d)加药处理：待12孔板中的细胞贴壁培养4-7天后，吸掉旧培养液，加入5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C联合用药以及5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C单一药物，刺激1h，然后吸取掉含药物培养基，加入不含药物的新鲜MEM培养液继续培养4-7天；
(6-e)克隆形成：待形成肉眼可见的细胞克隆后，终止培养。吸取掉板中的旧培养液，每孔加入1ml PBS润洗一遍，然后加入无水甲醇固定10分钟，用PBS洗涤三次，再加入结晶紫染色30分钟，并于30分钟后，PBS润洗3-4遍，然后将板子避光干燥，并拍照留存。
实验结果请参见图6A和图6B。结果说明：PPM-18和Vitamin C联合用药可以抑制肺癌、乳腺癌细胞活力和克隆的形成。
如图6A所示，通过MTT实验，得出PPM-18和Vitamin C联合用药能够有效抑制肺癌、乳腺癌细胞系细胞的活力。
MTT实验可以短期快速验证药物对细胞的作用，接下来用细胞克隆实验来进一步验证PPM-18和Vitamin C联合用药在长期增殖中对肺癌、乳腺癌细胞的作用效果。如图6B所示，在PPM-18和Vitamin C联合用药处理下，其对克隆形成抑制效果显著。5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C两种单独的药物都没有起到明显抑制作用，而5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C进行联合用药具有协同杀死肺癌、乳腺癌细胞系细胞的作用。
此外，本发明还考察了PPM-18和Vitamin C联合用药对人正常肝细胞L02的影响。结果如图7A所示，通过MTT实验，得出PPM-18和Vitamin C联合用药处理对正常细胞L02活力无明显影响。用细胞克隆实验来进一步验证PPM-18和Vitamin C联合用药在长期增殖中对正常细胞的作用效果，结果如图7B所示，在PPM-18和Vitamin C联合用药处理下，其对正常细胞克隆的形成无明显影响。而两种单独的药物也都没有抑制作用，说明5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C具有选择性杀死肿瘤细胞的作用，而对人正常细胞没有明显影响，说明5μM的PPM-18和5mM的Vitamin C在细胞水平具有一定的安全性。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌在制备抑制肿瘤细胞的制剂中的应用，所述肿瘤细胞为肺癌细胞和/或乳腺癌细胞；所述2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌是与维生素C联合用于制备抑制肿瘤细胞的制剂，2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌与维生素C联用的用量比例为5μM：5mM；
其中，所述抑制肿瘤细胞为：抑制肿瘤细胞活力；抑制肿瘤细胞克隆形成；促进肿瘤细胞出现死亡形态；诱导肿瘤细胞凋亡；和/或促进肿瘤细胞自噬；所述促进肿瘤细胞自噬包括促进自噬相关蛋白的表达。
2.2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用，其中，所述肿瘤为人肺癌和/或乳腺癌；所述2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌是与维生素C联合用于制备治疗肿瘤的药物。
3.根据权利要求2所述的应用，其中，所述治疗肿瘤为在细胞水平或个体水平治疗。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其中，所述药物通过以下至少一种途径用于治疗肿瘤：
抑制肿瘤细胞活力；
抑制肿瘤细胞克隆形成；
促进肿瘤细胞出现死亡形态；
诱导肿瘤细胞凋亡；和/或
促进肿瘤细胞自噬。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其中，所述2-苯甲酰胺基-1,4-萘醌为化学合成的。
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