CN113391068A - 用于bace1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 - Google Patents
用于bace1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113391068A CN113391068A CN202110646687.6A CN202110646687A CN113391068A CN 113391068 A CN113391068 A CN 113391068A CN 202110646687 A CN202110646687 A CN 202110646687A CN 113391068 A CN113391068 A CN 113391068A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bace1
- antibody
- magnetic
- solution
- kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 title claims abstract description 102
- 101000894895 Homo sapiens Beta-secretase 1 Proteins 0.000 title claims abstract description 101
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 46
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims abstract description 42
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 90
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 34
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 30
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 28
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 27
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 claims description 20
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 15
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 14
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 13
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 claims description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 11
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 10
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 10
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 10
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 6
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 claims description 6
- 102100031013 Transgelin Human genes 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 claims description 6
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 claims description 6
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 4
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 claims description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 claims description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 4
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims description 4
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 claims description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 abstract description 8
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 abstract description 7
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- -1 succinimidyl Chemical group 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 3
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 3
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 3
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-ylideneazanium;chloride Chemical compound Cl.N=C1CCCS1 ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 2
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 2
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 101710150192 Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000031124 Dementia Alzheimer type Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000823051 Homo sapiens Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 1
- 101000894883 Homo sapiens Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000574446 Mus musculus Alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme Proteins 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108091007737 beta-secretases Proteins 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003930 cognitive ability Effects 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N levobunolol Chemical compound O=C1CCCC2=C1C=CC=C2OC[C@@H](O)CNC(C)(C)C IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000003946 protein process Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 230000007507 senile plaque formation Effects 0.000 description 1
- 208000022288 senile plaque formation Diseases 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明公开了用于人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(以下简称BACE1)的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，所述的试剂盒包括校准品、质控品、磁微粒混悬液、抗体标记物、浓缩洗液、发光底物；所述的校准品由BACE1抗原配置而成；所述的质控品为含有一定浓度的BACE1抗原，由质控品稀释液配置而成；所述的磁微粒混悬液含有一定浓度磁微粒标记的BACE1抗体溶液。本发明的有益效果是，本发明的试剂盒具有灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好、快速定量检测的优点。
Description
技术领域
本发明涉及试剂盒检测技术领域，特别是用于检测人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其方法。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)是一种伴有认知、行为和功能失常的进行性的常见神经退行性疾病，其主要病理特征为老年斑形成、神经元缺失、神经原纤维缠结。主要影响老年人的认知以及行为能力，主要影响60岁以上的人群，目前还没有有效的治疗手段。其发病主要与淀粉样β蛋白(β-amyloid，AP)异常沉积有关。老年斑的主要组分即为Aβ，由β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein，APP)相继被β-分泌酶和γ-分泌酶切割后形成。目前β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)和β位点APP裂解酶2(BACE2)被认为是两个主要的β-分泌酶。研究表明BACE1在β淀粉样前体蛋白过程中起到关键的作用。故在此过程中，脑脊液中BACE1的含量可以较好地反映神经元的活性。
人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)，是在外周神经细胞中形成髓鞘的一种重要的天冬氨酸蛋白酶，是一种包含两个活性位点的跨膜蛋白。神经细胞通过神经突互相联系，阿尔茨海默疾病患者中，神经原轴突显示进行性退化，BACE1被认为是预测阿尔茨海默疾病进展的较好的生物标志物。目前可用于β位淀粉样前体蛋白裂解酶1检测方法主要有放射免疫测定法RIA，酶联免疫法(ELISA)和免疫层析法等。这些方法均有一定的缺陷，RIA污染大，ELISA法操作过程复杂，检测时间过长，不利于实现BACE1的自动化检测，免疫层析法检测重复性差、灵敏低。因此，目前尚需一种污染小、灵敏度高、操作简单、自动化程度高，特异性好的BACE1的快速定量检测试剂盒及其使用方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒。本发明的试剂盒具有灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好、快速定量检测的优点。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，本发明所述的试剂盒包括校准品、质控品、磁微粒混悬液、抗体标记物、浓缩洗液、发光底物；所述的校准品由BACE1抗原配置而成；所述的质控品为含有一定浓度的BACE1抗原，由质控品稀释液配置而成；所述的磁微粒混悬液含有一定浓度磁微粒标记的BACE1抗体溶液。
本发明所述的磁微粒混悬液制备方法如下所示。
1)洗涤：20μL磁微粒原液，磁架上分离弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀5分钟，磁架上分离弃去上清液，反复洗涤5次；
2)活化：加入50μL的50mg/mLEDC、50mg/mL NHS，200r/min，活化0.5-1h；EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到；
3)洗涤：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀，磁架上分离弃去上清液，洗涤2次；
4)包被：加入MES缓冲液和预包被抗体，磁微粒和抗体的质量比为80:1，混匀后，室温反应10-16h；
5)封闭：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入100-300μL磁微粒封闭液，摇匀后，室温反应10-16h；
6)将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入一定的磁珠封保液，得到BACE1磁微粒混悬液。
本发明所述的抗体标记物为含有一定浓度的碱性磷酸酶标记的BACE1抗体溶液或吖啶酯标记的BACE1抗体溶液。
本发明所述的碱性磷酸酶标记抗体制备方法如下所示。
1)BACE1抗体与碱性磷酸酶，碱性磷酸酶的质量为抗体的2倍，分别除盐、浓缩，然后加入活化剂，室温，分别活化30min。除盐使用SepHadex G25凝胶柱子除盐。BACE1抗体活化用到的活化剂为2IT(2-Iminothiolane hydrochloride)，碱性磷酸酶活化用到的活化剂为SMCC(Succinimidy 4-(N-maleimidomethy1)cyclohexane-1-carboxylate)；
2)活化后的BACE1抗体与碱性磷酸酶可按照质量比例进行混合后反应。然后进行终止反应和分离纯化，除去未结合的BACE1抗体与碱性磷酸酶，制备得到抗体标记物浓缩液，保存于2-8℃。终止反应过程中，首先加入10mM马来酰亚胺，室温反应10min。再加入乙醇胺100mM的量。分离纯化柱为SuperdexTM200。
本发明所述的吖啶酯标记抗体制备方法如下所示：
1)BACE1抗体与吖啶酯，吖啶酯的质量为抗体的50倍，充分混匀，37度反应2小时以上，加入赖氨酸终止反应；
2)将标记后的吖啶酯标记抗体用脱盐层析柱纯化，收集纯化后的吖啶酯标记抗体。
本发明试剂盒检测方法如下所示：
1)免疫反应：25μL样本/质控品、20μL磁微粒、50μL抗体标记物，37℃温育30min，洗涤6次。
2)磁分离：在磁场中将磁微粒沉降，去上清，加入100μL的洗涤液，在磁场中将磁微粒沉降，去上清，重复3次，除去未结合的抗体；
3)检测读数：加入发光底物，室温反应，5min内检测发光值。
4)计算：该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与BACE1的含量成正比。选择适当的曲线拟和方式建立标准曲线。本试剂盒推荐采用四参数拟和方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光强度值的对数(log)值为y轴建立标准曲线，根据待测样品的发光强度值回算相应的浓度值。
本发明所述的校准品为含有BACE1抗原的校准品。
所述的校准品配置方法：用含有1％BSA的Tris缓冲液作为校准品稀释液，用校准品稀释液梯度稀释BACE1抗原，稀释至工作浓度，分别为1，40，80，200，400，800ng/mL。
本发明所述的质控品为含有BACE1抗原的质控品。
所述的质控品配置方法：用含有1％BSA的Tris缓冲液作为质控品稀释液，BACE1抗原用质控品稀释液梯度稀释至80ng/mL和200ng/mL。
本发明所述试剂盒的性能指标确定方法：
1)准确度：将浓度约为800ng/mL(允许其浓度偏差为±20％)的BACE1标准样本A加入到浓度范围在15～60ng/mL的BACE1样本B中，所加入样本A与样本B之间的体积比为1：9，用试剂盒检测混合后的样本，重复检测3次，根据下面公式计算回收率(R)，
式中：R-回收率；V-加入A液体积；V0-血清B的体积；C-血清样品加入A液后的检测浓度；C0-血清样品B的检测浓度；Cs-A液的浓度；
2)空白限：用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的吸光值，计算其平均值M和标准差SD，得出M+2SD所对应的吸光值，根据试剂盒所用校准品的定标曲线，将M+2SD所对应的吸光值带入方程，求出对应的浓度值，即为空白限；
3)重复性：检测高、低两种不同浓度的质控品，各重复检测10次，分别计算10次检测结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV＝SD/M*100％得出变异系数CV，CV值应不大于10％；
4)批间重复性：分别用三批试剂，检测高、低两种不同浓度的质控品，每次各重复检测10次，分别计算30次检测结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV＝SD/M*100％得出变异系数CV，CV值应不大于15％；
5)线性：将接近线性区间上限的BACE1高值样本用阴性血清按一定比例稀释为至少5个浓度，其中低值浓度的样本须接近线性区间的下限；用试剂盒将每一浓度重复检测2次，分别求出检测结果的均值yi；以稀释比例xi为自变量，以检测结果均值yi为因变量求出线性回归方程；计算线性回归的相关系数r，r≥0.9900。
本发明所述试剂盒的评价结果参数限定：
1)准确度：通过稀释回收评价准确度，结果在85％～115％之间；
2)空白限：不大于0.1ng/mL；
3)重复性：分析内重复性≤10％，分析间重复性≤15％；
4)剂量-反应曲线线性：在0.1-800ng/mL范围内，剂量-反应曲线相关性系数r≥0.99；
5)样本测定：对50例AD患者样本进行比较测定，并与酶联免疫法测定进行比较，BACE1临床符合率95％以上，线性相关性r达到0.95以上。
本发明用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，具有以下优点：1、本试剂盒实现了人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)定量检测。2、利用化学发光和磁微粒免疫分离技术相结合，操作便捷，可实现自动化操作，确保人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)检测的灵敏度和准确度。3、采用碱性磷酸酶标记检测技术，灵敏度高，稳定性较好；4、采用吖啶酯标记检测技术，发光体系简单，不需要催化剂，节省成本，检测时间更快，是磁微粒化学发光免疫检测方法未来发展主方向；5、本发明的试剂盒作为产品，可以满足社会商业需求。
附图说明
图1为本发明试剂盒使用步骤原理步骤示意图。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。
实施例：用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，所述的试剂盒组成包括：校准品、质控品、磁微粒混悬液、抗体标记物、浓缩洗液、发光底物，
其中校准品由BACE1抗原配置而成，用于建立校准曲线；
质控品为含有一定浓度的BACE1抗原，由质控品稀释液配置而成。
上述的磁微粒混悬液含有一定浓度磁微粒标记的BACE1抗体溶液。
上述的磁微粒混悬液制备方法如下所示。
1)洗涤：20μL磁微粒原液，磁架上分离弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀5分钟，磁架上分离弃去上清液，反复洗涤5次。
2)活化：加入50μL的50mg/mLEDC、50mg/mL NHS，200r/min，活化0.5-1h。EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到。
3)洗涤：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀，磁架上分离弃去上清液，洗涤2次。
4)包被：加入MES缓冲液和预包被抗体，(磁微粒和抗体的质量比为80:1)混匀后，室温反应10-16h。
5)封闭：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入100-300μL磁微粒封闭液，摇匀后，室温反应10-16h。
6)将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入一定的磁珠封保液，得到BACE1磁微粒混悬液。
上述的抗体标记物为含有一定浓度的碱性磷酸酶标记的BACE1抗体溶液或吖啶酯标记的BACE1抗体溶液。
上述的碱性磷酸酶标记抗体制备方法如下所示。
1)BACE1抗体与碱性磷酸酶(碱性磷酸酶的质量为抗体的2倍)分别除盐、浓缩，然后加入活化剂，室温，分别活化30min。除盐使用SepHadex G25凝胶柱子除盐。BACE1抗体活化用到的活化剂为2IT(2-Iminothiolane hydrochloride)，碱性磷酸酶活化用到的活化剂为SMCC(Succinimidy 4-(N-maleimidomethy1)cyclohexane-1-carboxylate)。
2)活化后的BACE1抗体与碱性磷酸酶可按照质量比例进行混合后反应。然后进行终止反应和分离纯化，除去未结合的BACE1抗体与碱性磷酸酶，制备得到抗体标记物浓缩液，保存于2-8℃。终止反应过程中，首先加入10mM马来酰亚胺，室温反应10min。再加入乙醇胺100mM的量。分离纯化柱为SuperdexTM200。
上述的吖啶酯标记抗体制备方法如下所示。
1)BACE1抗体与吖啶酯(吖啶酯的质量为抗体的50倍)，充分混匀，37度反应2小时以上，加入赖氨酸终止反应。
2)将标记后的吖啶酯标记抗体用脱盐层析柱纯化，收集纯化后的吖啶酯标记抗体。
上述的校准品为含有BACE1抗原的校准品。
上述的校准品配置方法：用含有1％BSA的Tris缓冲液作为校准品稀释液，用校准品稀释液梯度稀释BACE1抗原，稀释至工作浓度，分别为1，40，80，200，400，800ng/mL。
上述的质控品为含有BACE1抗原的质控品。
上述的质控品配置方法：用含有1％BSA的Tris缓冲液作为质控品稀释液，BACE1抗原用质控品稀释液梯度稀释至80ng/mL和200ng/mL。
上述的浓缩洗液为包含Tween-20的磷酸盐缓冲液。
发光底物液为碱性磷酸酶的发光底物溶液或吖啶酯的发光底物溶液。
将上述各组分，组装成试剂盒，贮存于2-8℃。
试剂盒检测方法如下所示：
1)免疫反应：25μL样本/质控品、20μL磁微粒、50μL抗体标记物，37℃温育30min，洗涤6次。
2)磁分离：在磁场中将磁微粒沉降，去上清，加入100μL的洗涤液，在磁场中将磁微粒沉降，去上清，重复3次，除去未结合的抗体；
3)检测读数：加入发光底物，室温反应，5min内检测发光值。
4)计算：该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与BACE1的含量成正比。选择适当的曲线拟和方式建立标准曲线。本试剂盒推荐采用四参数拟和方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光强度值的对数(log)值为y轴建立标准曲线，根据待测样品的发光强度值回算相应的浓度值。
具体制备过程中使用的BACE1抗体为Abcam公司提供，使用的BACE1抗原为Abcam公司提供。吖啶酯购自英国BBI公司，2-IT购自thermo fisher scientific公司，SMCC购自thermo fisher scientific公司，磁微粒购自thermo fisher scientific公司，EDC购自sigma公司，NHS购自sigma公司。
磁微粒混悬液制备
1)洗涤：20μL磁微粒原液，磁架上分离弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀5分钟，磁架上分离弃去上清液，反复洗涤5次。
2)活化：加入50μL的50mg/mLEDC、50mg/mL NHS，200r/min，活化0.5-1h。EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到。
3)洗涤：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀，磁架上分离弃去上清液，洗涤2次。
4)包被：加入MES缓冲液和预包被抗体，(磁微粒和抗体的质量比为80:1)混匀后，室温反应10-16h。
5)封闭：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入100-300μL磁微粒封闭液，摇匀后，室温反应10-16h。
6)将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入一定的磁珠封保液，得到BACE1磁微粒混悬液。
抗体标记物制备
碱性磷酸酶标记抗体制备
1)除盐：将抗体的缓冲体系使用脱盐柱换成TSE缓冲液；将碱性磷酸酶的缓冲体系使用脱盐柱换成ALP透析缓冲液pH 7.6(碱性磷酸酶的质量为抗体的2倍)。除盐使用SepHadex G25凝胶柱子除盐。
2)离心浓缩：抗体的浓度在2-4mg/mL范围内，碱性磷酸酶的浓度在3-5mg/mL范围内。
3)活化：2IT溶解于2-IT稀释液配制成13.5mg/ml，室温，活化抗体30min。SMCC溶解于DMF配制成6.5mg/ml，室温，活化抗体30min。BACE1抗体活化用到的活化剂为2IT(2-Iminothiolane hydrochloride)，碱性磷酸酶活化用到的活化剂为SMCC(Succinimidy 4-(N-maleimidomethy1)cyclohexane-1-carboxylate)。
4)反应：抗体与碱性磷酸酶的反应可按照质量比例进行混合后反应。放于2-8℃中反应12h以上。
5)终止反应：首先，加入10mM马来酰亚胺，室温反应10min。再加入乙醇胺100mM的量终止反应。
6)分离纯化：用纯化柱SuperdexTM200分离纯化，除去未结合的BACE1抗体和碱性磷酸酶抗体标记物浓缩液保存于2-8℃。
7)抗体标记物：将抗体标记物浓缩液，用含有1％BSA，0.1％Tween-20，0.1％P-300的Tris缓冲液作为抗体标记物稀释液进行稀释，稀释比例为1:1000-1:3000.
吖啶酯标记抗体制备
1)反应：抗体的浓度在1-5mg/mL范围内，吖啶酯浓度在5-10mmol/L，抗体与吖啶酯的反应可按照质量比例进行混合后反应。放于37℃中反应2h以上。
2)封闭：加入浓度为5-15g/L的赖氨酸溶液封闭15-60min。
3)纯化：使用脱盐层析柱纯化，除去未结合的BACE1抗体和吖啶酯。加入抗体标记物等体积的甘油，-20℃保存。
4)抗体标记物：将标记抗体浓缩液，用含有1％BSA，0.1％Tween-20，0.1％P-300的Tris缓冲液作为抗体标记物稀释液进行稀释，稀释比例为1:1000-1:5000.
上述的校准品为含有BACE1抗原的校准品。
上述的校准品配置方法：用含有1％BSA的Tris缓冲液作为校准品稀释液，用校准品稀释液梯度稀释BACE1抗原，稀释至工作浓度，分别为1，40，80，200，400，800ng/mL。
上述的质控品为含有BACE1抗原的质控品。
上述的质控品配置方法：用含有1％BSA的Tris缓冲液作为质控品稀释液，BACE1抗原用质控品稀释液梯度稀释至80ng/mL和200ng/mL。
上述的浓缩洗液为包含Tween-20的磷酸盐缓冲液，洗涤液工作浓度：用纯化水稀释10倍使用。
上述的发光底物液为碱性磷酸酶发光底物溶液或吖啶酯的发光底物溶液。
试剂盒检测方法如下所示：
1)免疫反应：25μL样本/质控品、20μL磁微粒、50μL抗体标记物，37℃温育30min，洗涤6次。
2)磁分离：在磁场中将磁微粒沉降，去上清，加入100μL的洗涤液，在磁场中将磁微粒沉降，去上清，重复3次，除去未结合的抗体；
3)检测读数：加入发光底物检测发光值。
4)计算：该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与BACE1的含量成正比。选择适当的曲线拟和方式建立标准曲线。本试剂盒推荐采用四参数拟和方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光强度值的对数(log)值为y轴建立标准曲线，根据待测样品的发光强度值回算相应的浓度值。
本发明试剂盒的性能指标
1)准确度：将浓度约为800ng/mL(允许其浓度偏差为±20％)的BACE1样本A加入到浓度范围在15～60ng/mL的BACE1样本B中，所加入样本A与样本B之间的体积比为1：9，用试剂盒检测混合后的样本，重复检测3次，根据下面公式计算回收率(R)，
式中：R-回收率；V-加入A液体积；V0-血清B的体积；C-血清样品加入A液后的检测浓度；C0-血清样品B的检测浓度；Cs-A液的浓度。回收率在85％～115％之间。
2)空白限：用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的吸光值，计算其平均值(M)和标准差(SD)，得出M+2SD所对应的吸光值，根据试剂盒所用校准品的定标曲线，将M+2SD所对应的吸光值带入方程，求出对应的浓度值，即为空白限。
3)重复性：检测高、低两种不同浓度的质控品，各重复检测10次，分别计算10次检测结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV＝SD/M*100％得出变异系数CV，CV值应不大于10％。
4)批间重复性：分别用三批试剂，检测高、低两种不同浓度的质控品，每次各重复检测10次，分别计算30次检测结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV＝SD/M*100％得出变异系数CV，CV值应不大于15％。
5)线性：将接近线性区间上限的BACE1高值样本用阴性血清按一定比例稀释为至少5个浓度，其中低值浓度的样本须接近线性区间的下限。用试剂盒将每一浓度重复检测2次，分别求出检测结果的均值(yi)。以稀释比例(xi)为自变量，以检测结果均值(yi)为因变量求出线性回归方程。计算线性回归的相关系数(r)，r≥0.9900.
本方法评价结果
1)准确度：通过稀释回收评价准确度，结果在85％～115％之间。
2)空白限：不大于0.1ng/mL。
3)重复性：分析内重复性≤10％，分析间重复性≤15％。
4)剂量-反应曲线线性：在0.1-800ng/mL范围内，剂量-反应曲线相关性系数r≥0.99.
5)样本测定：对50例AD患者样本进行比较测定，并与酶联免疫法测定进行比较，BACE1临床符合率95％以上，线性相关性r达到0.95以上。
本发明利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合，定量检测人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的含量，实现高通量，自动化对人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的定量检测。
以上对本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施方式及实施方式中的特征可以相互组合。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括校准品、质控品、磁微粒混悬液、抗体标记物、浓缩洗液、发光底物；所述的校准品由BACE1抗原配置而成；
所述的质控品为含有一定浓度的BACE1抗原，由质控品稀释液配置而成；
所述的磁微粒混悬液含有一定浓度磁微粒标记的BACE1抗体溶液。
2.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的磁微粒混悬液制备方法如下所示：
1)洗涤：20μL磁微粒原液，磁架上分离弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀5分钟，磁架上分离弃去上清液，反复洗涤5次；
2)活化：加入50μL的50mg/mLEDC、50mg/mL NHS，200r/min，活化0.5-1h；EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到；
3)洗涤：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀，磁架上分离弃去上清液，洗涤2次；
4)包被：加入MES缓冲液和预包被抗体，磁微粒和抗体的质量比为80:1，混匀后，室温反应10-16h；
5)封闭：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入100-300μL磁微粒封闭液，摇匀后，室温反应10-16h；
6)将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入一定的磁珠封保液，得到BACE1磁微粒混悬液。
3.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的抗体标记物为含有一定浓度的碱性磷酸酶标记的BACE1抗体溶液或吖啶酯标记的BACE1抗体溶液。
4.根据权利要求3所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的碱性磷酸酶标记抗体制备方法如下所示：
1)BACE1抗体与碱性磷酸酶，碱性磷酸酶的质量为抗体的2倍，分别除盐、浓缩，然后加入活化剂，室温，分别活化30min；除盐使用SepHadex G25凝胶柱子除盐；BACE1抗体活化用到的活化剂为2IT，碱性磷酸酶活化用到的活化剂为SMCC；
2)活化后的BACE1抗体与碱性磷酸酶可按照质量比例进行混合后反应；然后进行终止反应和分离纯化，除去未结合的BACE1抗体与碱性磷酸酶，制备得到抗体标记物浓缩液，保存于2-8℃；终止反应过程中，首先加入10mM马来酰亚胺，室温反应10min；再加入乙醇胺100mM的量；分离纯化柱为SuperdexTM200。
5.根据权利要求3所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的吖啶酯标记抗体制备方法如下所示：
1)BACE1抗体与吖啶酯，吖啶酯的质量为抗体的50倍，充分混匀，37度反应2小时以上，加入赖氨酸终止反应；
2)将标记后的吖啶酯标记抗体用脱盐层析柱纯化，收集纯化后的吖啶酯标记抗体。
6.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：试剂盒检测方法如下所示：
1)免疫反应：25μL样本/质控品、20μL磁微粒、50μL抗体标记物，37℃温育30min，洗涤6次；
2)磁分离：在磁场中将磁微粒沉降，去上清，加入100μL的洗涤液，在磁场中将磁微粒沉降，去上清，重复3次，除去未结合的抗体；
3)检测读数：加入发光底物，室温反应，5min内检测发光值；
4)计算：该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与BACE1的含量成正比；选择适当的曲线拟和方式建立标准曲线；本试剂盒推荐采用四参数拟和方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光强度值的对数log值为y轴建立标准曲线，根据待测样品的发光强度值回算相应的浓度值。
7.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的校准品为含有BACE1抗原的校准品；
所述的校准品配置方法：用含有1％BSA的Tris缓冲液作为校准品稀释液，用校准品稀释液梯度稀释BACE1抗原，稀释至工作浓度，分别为1，40，80，200，400，800ng/mL。
8.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述的质控品为含有BACE1抗原的质控品；
所述的质控品配置方法：用含有1％BSA的Tris缓冲液作为质控品稀释液，BACE1抗原用质控品稀释液梯度稀释至80ng/mL和200ng/mL。
9.根据权利要求1所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的性能指标确定方法：
1)准确度：将浓度约为800ng/mL的标准样本A加入到浓度范围在15～60ng/mL的样本B中，所加入标准样本A与样本B之间的体积比为1：9，用试剂盒检测混合后的样本，重复检测3次，根据下面公式计算回收率(R)，
式中：R-回收率；V-加入A液体积；V0-血清B的体积；C-血清样品加入A液后的检测浓度；C0-血清样品B的检测浓度；Cs-A液的浓度；
2)空白限：用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果的吸光值，计算其平均值M和标准差SD，得出M+2SD所对应的吸光值，根据试剂盒所用校准品的定标曲线，将M+2SD所对应的吸光值带入方程，求出对应的浓度值，即为空白限；
3)重复性：检测高、低两种不同浓度的质控品，各重复检测10次，分别计算10次检测结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV＝SD/M*100％得出变异系数CV，CV值应不大于10％；
4)批间重复性：分别用三批试剂，检测高、低两种不同浓度的质控品，每次各重复检测10次，分别计算30次检测结果的平均值M和标准差SD，根据公式CV＝SD/M*100％得出变异系数CV，CV值应不大于15％；
5)线性：将接近线性区间上限的BACE1高值样本用阴性血清按一定比例稀释为至少5个浓度，其中低值浓度的样本须接近线性区间的下限；用试剂盒将每一浓度重复检测2次，分别求出检测结果的均值yi；以稀释比例xi为自变量，以检测结果均值yi为因变量求出线性回归方程；计算线性回归的相关系数r，r≥0.9900。
10.根据权利要求9所述的用于BACE1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的评价结果参数限定：
1)准确度：通过稀释回收评价准确度，结果在85％～115％之间；
2)空白限：不大于0.1ng/mL；
3)重复性：分析内重复性≤10％，分析间重复性≤15％；
4)剂量-反应曲线线性：在0.1-800ng/mL范围内，剂量-反应曲线相关性系数r≥0.99；
5)样本测定：对50例AD患者样本进行比较测定，并与酶联免疫法测定进行比较，BACE1临床符合率95％以上，线性相关性r达到0.95以上。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110646687.6A CN113391068A (zh) | 2021-06-10 | 2021-06-10 | 用于bace1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110646687.6A CN113391068A (zh) | 2021-06-10 | 2021-06-10 | 用于bace1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113391068A true CN113391068A (zh) | 2021-09-14 |
Family
ID=77620187
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110646687.6A Pending CN113391068A (zh) | 2021-06-10 | 2021-06-10 | 用于bace1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113391068A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20140070468A (ko) * | 2012-11-30 | 2014-06-10 | 한국과학기술연구원 | 바이오마커 진단 방법 및 바이오마커 진단 키트 |
| CN109073661A (zh) * | 2016-05-04 | 2018-12-21 | 欧蒙医学诊断技术有限公司 | 用于神经学疾病的诊断的测定法 |
| CN109580956A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-05 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 用于检测β淀粉样蛋白(Aβ)的磁微粒分离化学发光免疫测定法 |
| CN111273042A (zh) * | 2020-01-21 | 2020-06-12 | 迈克生物股份有限公司 | 抗缪勒氏管激素检测试剂盒 |
| CN112684166A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-04-20 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 |
| CN112823048A (zh) * | 2018-07-27 | 2021-05-18 | 维拉维斯公司 | 消除和富集的方法 |
-
2021
- 2021-06-10 CN CN202110646687.6A patent/CN113391068A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20140070468A (ko) * | 2012-11-30 | 2014-06-10 | 한국과학기술연구원 | 바이오마커 진단 방법 및 바이오마커 진단 키트 |
| CN109073661A (zh) * | 2016-05-04 | 2018-12-21 | 欧蒙医学诊断技术有限公司 | 用于神经学疾病的诊断的测定法 |
| CN112823048A (zh) * | 2018-07-27 | 2021-05-18 | 维拉维斯公司 | 消除和富集的方法 |
| CN109580956A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-05 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 用于检测β淀粉样蛋白(Aβ)的磁微粒分离化学发光免疫测定法 |
| CN111273042A (zh) * | 2020-01-21 | 2020-06-12 | 迈克生物股份有限公司 | 抗缪勒氏管激素检测试剂盒 |
| CN112684166A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-04-20 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108362688B (zh) | 一种25羟基维生素d磁微粒化学发光检测试剂盒 | |
| CN111679086A (zh) | 一种hbp的磁微粒化学发光法检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN111307789B (zh) | 一种叶酸检测试剂盒及检测方法 | |
| JP4426103B2 (ja) | 生物流体中のβ−ラクタム環を含む抗生物質を測定するための方法 | |
| Kivirand et al. | Biosensors for the detection of antibiotic residues in milk | |
| CN113281522A (zh) | 阿尔茨海默相关神经丝蛋白化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN112162101A (zh) | 一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒及其检测方法 | |
| EP1724582B1 (en) | Measurement value lowering inhibitor for immunoassay method and immunoassay method using the same | |
| CN113687074A (zh) | 基于磁分离脱氧核酶并循环切割的凝血酶检测方法及凝血酶试剂盒 | |
| Singampalli et al. | Rapid magneto-enzyme-linked immunosorbent assay for ultrasensitive protein detection | |
| CN112269025A (zh) | 一种白介素-6化学发光测定试剂盒及其制备方法 | |
| CN112255416A (zh) | 使用磁微粒化学发光定量检测hbp的试剂盒及其制备、检测方法 | |
| CN111289758A (zh) | 用于h-fabp定量检测的试剂盒、h-fabp定量检测的方法 | |
| US11061024B2 (en) | Analyte detection and methods therefor | |
| CN113391068A (zh) | 用于bace1的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 | |
| JP4434015B2 (ja) | 化学発光増強剤 | |
| US20220018856A1 (en) | Antibody conjugate | |
| US9075049B2 (en) | Immunoassay method and reagent therefor | |
| CN111487409A (zh) | 一种s100b蛋白的化学发光法检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN115201183A (zh) | 一种单人份S100β蛋白化学发光测定试剂盒及其测定方法 | |
| CN113391073A (zh) | 用于nptx2的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 | |
| JPH02503599A (ja) | 固相タンパク質アッセイ | |
| CN116106559A (zh) | 一种生物素与抗体偶联比检测试剂盒及其应用 | |
| CN113125761A (zh) | 用于降钙素原检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法 | |
| CN116819072B (zh) | 一种用于抗aqp4自身抗体检测的抗原蛋白组合物及化学发光检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |