CN113372233A - 氯丙那林半抗原和人工抗原及其制备方法与应用 - Google Patents

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CN113372233A CN202010158359.7A CN202010158359A CN113372233A CN 113372233 A CN113372233 A CN 113372233A CN 202010158359 A CN202010158359 A CN 202010158359A CN 113372233 A CN113372233 A CN 113372233A
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Abstract

本发明公开了氯丙那林半抗原和人工抗原及其制备方法与应用，该氯丙那林半抗原的结构式为
Figure DDA0002404886460000011
和
Figure DDA0002404886460000012
中的一种，该氯丙那林人工抗原由上述氯丙那林半抗原与载体蛋白偶联后得到。利用该氯丙那林人工抗原免疫动物，可得到效价高，灵敏度高的特异性抗体，本发明所提供的氯丙那林半抗原及其制备的抗体，为建立快速、简便、价廉、灵敏、特异的氯丙那林药物检测方法提供了新手段；利用本发明提供的半抗原与载体蛋白的偶联物制备氯丙那林抗体，制备过程简单、经济，抗体的检测灵敏度高、实用价值高。本发明在兽药残留检测中具有良好的应用前景。

Description

氯丙那林半抗原和人工抗原及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及免疫检测领域，具体涉及氯丙那林半抗原和人工抗原 及其制备方法与应用。
背景技术
氯丙那林(Clorprenaline，CLP)属于选择性β2-受体激动剂类药物， 因其具有明显的支气管扩张作用，可用于治疗支气管炎、喘息性支气 管炎等，故又名氯喘，化学名为1-(2-氯苯基)-2-异丙基氨基-乙醇， 其硫酸盐为白色或类白色结晶性粉末。
氯丙那林在动物体内代谢缓慢且具有蓄积毒性，通过食物链的传 递易对人类的健康造成危害。
除了从源头上控制氯丙那林的使用外，对动物源食品中药物的残 留进行检测及监控，也是保障食品安全的重要措施，因此，有必要建 立简便、快速、灵敏的残留检测方法。
目前，氯丙那林残留的检测方法主要是液相色谱(HPLC)或色谱 -质谱联用(LC-MS)等理化分析方法，而这些方法均需要昂贵的仪器、 复杂的样品前处理和专业人员操作，繁琐费时、检测成本较高，且不 能现场操作，不适于大批量样本的快速筛查。
以抗原和抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的免疫分析技术， 以其速度快、成本低、灵敏度高等优点，目前被广泛用于食源性样本 中药物残留的快速筛选。因此，通过氯丙那林半抗原和人工抗原制备 性能优异的抗体是非常有必要的。
发明内容
本发明的目的是提供氯丙那林半抗原和人工抗原及其制备方法与 应用。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明一方面提供了氯丙那林半抗原，其结构式为如下式(I)、 式(II)和式(III)中的一种：
Figure BDA0002404886440000021
本发明另一方面提供了上述氯丙那林半抗原的制备方法，包括以 下步骤：
S1、2-氯苯甲醛发生加成环化反应制备化合物2；
S2、化合物2与邻苯二甲酸亚胺反应得到化合物4；
S3、化合物4反应制备化合物5；
S4、化合物5和化合物6反应得到化合物7；
S5、化合物7发生酯基水解反应得到所述氯丙那林半抗原。
其中：
所述化合物2、化合物4和化合物5的结构式分别如下：
Figure BDA0002404886440000022
Figure BDA0002404886440000031
所述化合物6的结构式为
Figure BDA0002404886440000032
中的一种；
所述化合物7的结构式为
Figure BDA0002404886440000033
中的一种。
进一步地，在上述技术方案中，上述氯丙那林半抗原的制备方法， 具体包括以下步骤：
S1、将碘化三甲基磺铵溶于二甲基亚砜和四氢呋喃的混合物中， 加入NaH后室温搅拌，再将2-氯苯甲醛逐滴加入后室温搅拌，加水后 用乙酸乙酯萃取，依次用水和饱和NaCl水溶液冲洗后，再用无水 Na2SO4脱水，并在减压条件下将溶剂完全蒸发得到化合物2；
S2、将化合物2、邻苯二甲酸亚胺和吡啶在叔丁醇中加热回流6h， 随后抽真空除去溶剂得到残渣，再向残渣中加入二氯甲烷，依次用水 和0.5mol/L的HCl溶液冲洗后，再用无水Na2SO4脱水，最后去除溶 剂后净化得到化合物4；
S3、将化合物4与水合肼在乙醇中室温搅拌混合12h，过滤后将 滤液经减压浓缩直至干燥，层析得到化合物5；
S4、将化合物5溶于二氯甲烷中，加入化合物6，在30℃下搅拌 15min后加入乙酸，并在30min内分3次加入NaBH(OAc)3，在30℃ 下搅拌3h后，倒入NaHCO3溶液中，搅拌至没有气体产生，分离有机 层后，用二氯甲烷提取水层，用无水Na2SO4干燥合成的有机层，去除 溶剂后层析纯化，得到化合物7；
S5、将化合物7溶于NaOH溶液中回流加热5h，冷却至常温后， 加入0.5mol/L的HCl溶液将pH值调节为7.0，浓缩后得到残留物，用 体积比3：1的二氯甲烷和甲醇的混合物提取残留物后过滤，将得到的 有机层在真空中浓缩得到所述氯丙那林半抗原。
具体地，在本发明的一个具体实施方式中，如图1所示的合成路 线，上述氯丙那林半抗原采用以下方法制得：
S1、将73.6g碘化三甲基磺铵溶于100ml DMSO和150ml THF 的混合物中，0℃条件下加入NaH(14.4g，溶于60％的矿物油中)， 室温搅拌30min，再将25.29g 2-氯苯甲醛逐滴加入，室温搅拌1h，加 400ml水，再用EtOAc(250ml×2)萃取，依次用水(200ml)和饱 和NaCl水溶液(150ml×2)冲洗后，再用无水Na2SO4干燥，并在减 压条件下将溶剂完全蒸发，得到30.02g亮黄色油状的化合物2；
S2、将30.02g化合物2、23.54g邻苯二甲酸亚胺和14.22g吡啶 混合于250ml t-BuOH中，加热回流6h，随后抽真空除去溶剂得到残 渣，再向残渣中加入600ml DCM，依次用水(300ml×2)和0.5mol/L HCl溶液(400ml×2)冲洗后，再用无水Na2SO4干燥，最后去除溶剂 后得到残留物40g，净化(硅胶，DCM为洗脱剂)得到25.02g黄色 粉末状的化合物4；
S3、将25.02g化合物4与20.73g水合肼(88％)在100ml EtOH 中混合，室温搅拌混合12h，过滤后将滤液经减压浓缩直至干燥，硅 胶闪蒸柱层析(洗脱液MeOH：DCM＝50：1)纯化，得到4.7g淡黄 色固体状的化合物5；
S4、将4.7g化合物5溶于400ml DCM中，加入
Figure BDA0002404886440000041
3.78g，在30℃下搅拌15min后加入40ml AcOH，并在30min内分 3次加入25.43g NaBH(OAc)3，在30℃下搅拌3h后，倒入500ml NaHCO3溶液中，用力搅拌至没有气体产生，分离有机层后，用200ml DCM提取水层，用无水Na2SO4干燥合成的有机层，去除溶剂得到6g 淡黄色油状化合物，硅胶闪蒸柱层析(洗脱液MeOH：DCM＝50：1) 纯化，得到1.81g黄色油状的
Figure BDA0002404886440000051
S5、将1.81g黄色油状的
Figure BDA0002404886440000052
溶于NaOH溶液 (2.8g，溶于10ml水)中回流加热5h，冷却至常温后，加入0.5mol/L 的HCl溶液将pH值调节为7.0，浓缩后得到残留物，用体积比3：1 的DCM和MeOH的混合物(120ml×3)提取残留物后过滤，将得到 的有机层在真空中浓缩，得到淡黄色泡沫，最后收集得到1.60g结构 式如式(I)所示的氯丙那林半抗原。
第三方面，本发明提供了氯丙那林人工抗原，是由所述氯丙那林 半抗原与载体蛋白偶联后得到。所述氯丙那林人工抗原可以作为免疫 原也可以作为包被原。
具体地，在上述技术方案中，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、 卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。
第四方面，本发明提供了所述氯丙那林人工抗原的制备方法，采 用碳二亚胺或混合酸酐法将所述氯丙那林半抗原与载体蛋白偶联制得 氯丙那林人工抗原。
具体地，在上述技术方案中，采用活化酯法将所述载体蛋白偶联 于所述氯丙那林半抗原的羧基碳上。
具体地，在上述技术方案中，采用活化酯法将所述氯丙那林半抗 原的羧基与所述载体蛋白上的赖氨酸偶联，生成酰胺键。
优选地，在上述技术方案中，式(I)所示的氯丙那林半抗原与载 体蛋白的偶联摩尔比为6-15：1。
进一步优选地，在上述技术方案中，式(I)所示的氯丙那林半抗 原与载体蛋白的偶联摩尔比为10.4：1。
第五方面，本发明提供了由所述氯丙那林人工抗原制备的特异性 抗体，包括多克隆抗体和单克隆抗体。
第六方面，本发明提供了所述氯丙那林半抗原或所述氯丙那林人 工抗原的以下任一应用：
①在制备抗氯丙那林特异性抗体中的应用；
②在检测抗氯丙那林特异性抗体中的应用。
第七方面，本发明提供了抗氯丙那林多克隆抗体，由所述人工抗 原免疫实验动物获得。
优选地，在上述技术方案中，所述氯丙那林人工抗原由所述氯丙 那林半抗原与钥孔血蓝蛋白偶联得到。
第八方面，本发明提供了所述特异性抗体或所述多克隆抗体制备 的氯丙那林检测试剂或试剂盒。
第九方面，本发明提供了所述特异性抗体或所述多克隆抗体的以 下任一应用：
(1)在检测氯丙那林及其同类药物中的应用；
(2)在制备氯丙那林及其同类药物的免疫层析试纸条中的应用；
(3)在制备氯丙那林及其同类药物的胶体金检测试纸条中的应 用。
优选地，在上述技术方案中，所述抗凝血鼠药包括但不限于莱克 多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、溴布特罗、特布他林、西马特罗、氯 丙那林、妥布特罗、西布特罗、马布特罗、克伦普罗、班布特罗、齐 帕特罗、克伦巴胺、马喷特罗。
此外，本发明还提供了基于所述多克隆抗体和包被原建立的快速、 灵敏、广谱的氯丙那林的酶联免疫分析方法。
优选地，在上述技术方案中，所述包被原由所述氯丙那林半抗原 与牛血清白蛋白偶联得到。
本发明具有下列优点及有益效果：
(1)本发明首次公开了一种新型的氯丙那林半抗原、人工抗原及 其制备方法，用所述氯丙那林人工抗原免疫动物，可得到效价高，灵 敏度高的特异性抗体，本发明所提供的氯丙那林半抗原及其制备的抗 体，为建立快速、简便、价廉、灵敏、特异的氯丙那林药物检测方法 提供了新手段；
(2)利用本发明提供的半抗原与载体蛋白的偶联物制备氯丙那林 抗体，制备过程简单、经济，抗体的检测灵敏度高、实用价值高。本 发明在兽药残留检测中具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中式(I)所示氯丙那林半抗原的合成路线 路线图；
图2为本发明实施例1中制备得到的氯丙那林半抗原CLP-1核磁 共振氢谱；
图3为本发明实施例1中制备得到的氯丙那林半抗原CLP-2核磁 共振氢谱；
图4为本发明实施例3中氯丙那林包被原MALDI-TOF谱图；
图5为本发明实施例5中氯丙那林酶联免疫分析标准曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例，对本发明的具体实施方式作进一步 详细描述。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的保护范围， 本发明的保护范围以权利要求书为准。
若未特别指明，本发明实施例中所用的实验试剂和材料等均可市 售获得；若未具体指明，本发明实施例中所用的技术手段均为本领域 技术人员所熟知的常规手段。
实施例1氯丙那林半抗原的制备和鉴定
如图1所示，其制备过程具体包括如下步骤：
S1、将73.6g碘化三甲基磺铵溶于100ml DMSO和150ml THF 的混合物中，0℃条件下加入NaH(14.4g，溶于60％的矿物油中)， 室温搅拌30min，再将25.29g 2-氯苯甲醛逐滴加入，室温搅拌1h，加 400ml水，再用EtOAc(250ml×2)萃取，依次用水(200ml)和饱 和NaCl水溶液(150ml×2)冲洗后，再用无水Na2SO4干燥，并在减 压条件下将溶剂完全蒸发，得到30.02g亮黄色油状的化合物2；
S2、将30.02g化合物2、23.54g邻苯二甲酸亚胺和14.22g吡啶 混合于250ml t-BuOH中，加热回流6h，随后抽真空除去溶剂得到残 渣，再向残渣中加入600ml DCM，依次用水(300ml×2)和0.5mol/L HCl溶液(400ml×2)冲洗后，再用无水Na2SO4干燥，最后去除溶剂 后得到残留物40g，净化(硅胶，DCM为洗脱剂)得到25.02g黄色 粉末状的化合物4；
S3、将25.02g化合物4与20.73g水合肼(88％)在100ml EtOH 中混合，室温搅拌混合12h，过滤后将滤液经减压浓缩直至干燥，硅 胶闪蒸柱层析(洗脱液MeOH：DCM＝50：1)纯化，得到4.7g淡黄 色固体状的化合物5；
S4、称取4.1g步骤S3中制备的化合物5溶于400ml DCM中， 加入3.78g
Figure BDA0002404886440000081
在30℃下搅拌15min后加入40ml AcOH，并在30min内分3次加入25.43g NaBH(OAc)3，在30℃下搅 拌3h后，倒入500ml NaHCO3溶液中，用力搅拌至没有气体产生，分 离有机层后，用200ml DCM提取水层，用无水Na2SO4干燥有机层， 去除溶剂得到6g淡黄色油状化合物，硅胶闪蒸柱层析(洗脱液MeOH： DCM＝50：1)纯化，得到1.81g黄色油状的
Figure BDA0002404886440000082
S5、将1.81g黄色油状的
Figure BDA0002404886440000083
溶于NaOH溶液 (2.8g，溶于10ml水)中回流加热5h，冷却至常温后，加入0.5mol/L 的HCl溶液将pH值调节为7.0，浓缩后得到残留物，用体积比3：1 的DCM和MeOH的混合物(120ml×3)提取残留物后过滤，将得到 的有机层在真空中浓缩，得到淡黄色泡沫，最后收集得到1.60g氯丙 那林半抗原目标产物CLP-1。
氯丙那林半抗原目标产物CLP-1鉴定，过程如下：将收集得到的 氯丙那林半抗原经核磁共振氢谱(1H-NMR)测定，结构如图2所示， 分析图2的结果可知：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.99-1.01(m,3H), 1.24-1.29(m,1H),1.41-1.52(m,3H),2.04(t,J＝6.4Hz,2H),2.45-2.57 (m,1H),2.67-2.82(m,2H),3.17(s,1H),4.98-5.03(m,1H),5.99(s,br,2H),7.24-7.29(m,1H),7.33-7.38(m,2H),7.61(d,J＝7.6Hz,1H)。
氯丙那林半抗原目标产物CLP-2的制备与上述CLP-1的制备类 似，区别在于，在步骤S4中，用
Figure BDA0002404886440000091
代替
Figure BDA0002404886440000092
与化合物5发生反应，从而得到结构式为
Figure BDA0002404886440000093
的化合物 7，随后将结构式为
Figure BDA0002404886440000094
的化合物7发生酯基水解反应 得到白色固体状氯丙那林半抗原目标产物CLP-2。
相应地，氯丙那林半抗原目标产物CLP-2鉴定，过程如下：将收 集得到的氯丙那林半抗原经核磁共振氢谱(1H-NMR)测定，结构如图 3所示，分析图3的结果可知：1H NMR(400MHz,CD3OD-d6)δ2.54(t, J＝6.0Hz,2H),3.00-3.05(m,1H),3.17-3.21(m,1H),3.24-3.34(m,3H), 5.35-5.38(m,1H),7.30-7.34(m,1H),7.38-7.41(m,2H),7.70-7.72(m, 1H)。
氯丙那林半抗原目标产物CLP-3的制备与上述CLP-1的制备类似， 区别在于，在步骤S4中，用
Figure BDA0002404886440000095
代替
Figure BDA0002404886440000096
与化合 物5发生反应，从而得到结构式为
Figure BDA0002404886440000097
的化合物7，随 后将结构式为
Figure BDA0002404886440000098
的化合物7发生酯基水解反应得到白 色固体状氯丙那林半抗原目标产物CLP-3。
实施例2氯丙那林免疫抗原CLP-1-钥孔血蓝蛋白的制备
制备过程具体包括如下步骤：
S1、分别取0.1mmol实施例1得到的氯丙那林半抗原CLP-1、40mg N，N’-dicyclohexylcarbodiimide(DCC)和25mg N-hydroxysuccinimide (NHS)加入到1mL DMF中，室温搅拌过夜，对半抗原羧基进行酯 化(活化)；
S2、将步骤S1中的活化产物取出，在4000rpm下离心10min；
S3、称取100mg的钥孔血蓝蛋白KLH，溶于20mL预冷的磷酸 盐缓冲液PBS中；
S4、取步骤S2中活化产物离心后的上清液，逐滴缓慢加入到步骤 S3中的KLH溶液中，在4℃条件下搅拌过夜；
S5、将步骤S4中的反应产物置于透析袋中，在5L透析液中透析 过夜；
S6、取出步骤S5中的透析产物，分装后冻存于-70℃冰柜，即为 氯丙那林免疫原CLP-1-KLH。
实施例3氯丙那林检测用包被原CLP-1-牛血清白蛋白的制备
制备过程具体包括如下步骤：
S1、取0.5mmol实施例1得到的氯丙那林半抗原CLP-1、200mg N， N’-dicyclohexylcarbodiimide(DCC)和100mg N-hydroxysuccinimide(N HS)加入到1mL DMF中，室温搅拌过夜，对半抗原羧基进行酯化(活 化)；
S2、将步骤S1中的活化产物取出，在4000rpm下离心10min；
S3、称取500mg的牛血清白蛋白BSA，溶于20mL预冷的磷酸 盐缓冲液PBS中；
S4、取步骤S2中活化产物离心后的上清液，逐滴缓慢加入到步骤 S3中的BSA溶液中，在4℃条件下搅拌过夜；
S5、将步骤S4中的反应产物置于透析袋中，透析三天，每8h更 换一次透析液；
S6、取出步骤S5中的透析产物，分装后冻存于-20℃冰柜，即为 包被原CLP-1-BSA。
最后，取上述合成得到的氯丙那林包被原CLP-1-BSA经MALDI- TOF测定，结果如图4所示，其主峰的m/z为68684.7，表明半抗原 CLP-1与载体蛋白BSA偶联成功，其偶联摩尔比为10.4：1。
实施例4氯丙那林检测用多克隆抗体的制备
以实施例2制备的偶联物CLP-1-KLH为免疫原，免疫50只6-8 周龄雌性BALB/c小鼠(SPF级别)，免疫程序为一次基础免疫及数次 加强免疫。
首次免疫时将100μg免疫原与等体积的弗氏完全佐剂混合，进行 乳化。蛋白乳液多点注射于小鼠的颈背部皮下，200μL/只进行基础免 疫。
将50μg免疫原与等体积的弗氏不完全佐剂混合，进行乳化。
在首次免疫后4周进行第一次加强免疫，后3周进行第二次加强 免疫，后3周进行第三次加强免疫，体积均为200μL/只。
从免疫二次起，每次免疫后第8天眼眶采血，分离血清，间接竞 争ELISA检测血清抗体的效价，识别药物的种类，以及半数抑制浓度 (IC50)。
选择效价高、IC50值低的小鼠，摘除眼球，收集血液，离心获得 抗血清，即为氯丙那林多克隆抗体。
实施例5氯丙那林酶联免疫分析方法的建立
1、试剂配制
包被缓冲液：Na2CO3 1.59g，NaHCO3 2.93g，加蒸馏水至1L， 混匀。
封闭缓冲液：小牛血清50mL，蔗糖50g，酪蛋白2.5g， Na2HPO4·12H2O 5.8g，NaH2PO4·2H2O 0.593g，NaCl 8g，proclin 300 300μL，加蒸馏水定容至1L，混匀，置4℃冰箱保存。
抗体稀释液：NaH2PO4·2H2O 0.6g，Na2HPO4 1.072g，NaCl 16 g，KCl 0.4g，proclin300 200μL，triton X-100 500μL，加蒸馏水至1 L，混匀，置4℃冰箱保存。
标准品稀释液：Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaH2PO4·2H2O 0.59g， NaCl 8.5g，KCl0.2g，加蒸馏水水定容至1L，混匀。
酶标抗体稀释液：NaH2PO4·2H2O 0.6g，Na2HPO4 1.072g，NaCl 16g，KCl 0.4g，proclin 300 200μL，蒸馏水950mL，溶解后加入50 mL已灭活小牛血清，混匀，置4℃冰箱保存。
洗涤缓冲液(20×)：Na2HPO4·12H2O 23.2g，KH2PO4 2g，NaCl 64g，KCl 0.036g，Tween-20 20mL，proclin 300 300μL，加水980 mL定容至1L，稀释20倍使用。
底物缓冲液：Na2HPO4·12H2O 3.68g，柠檬酸0.933g，加蒸馏水 至100mL。
TMB储存液：取10mg TMB溶于4mL乙二醇，避光保存。
底物液：取TMB储存液0.4mL，底物缓冲液10mL，30％H2O2 10μL，避光保存。
终止缓冲液：取98％浓硫酸22.2mL，加蒸馏水177.8mL，混 匀。
2、方阵滴定
采用方阵滴定法筛选最佳的包被原浓度和抗体稀释度。使用包被 缓冲液将包被原倍比稀释成1：2000、1：4000、1：8000、1：16000、 1：32000和1：64000，从第1至第12列依次纵向加入96孔酶标板中， 包被，每个稀释度设置1个重复。
使用抗体稀释液将多克隆抗体倍比稀释成1：2000、1：4000、1： 8000、1：16000、1：32000、1：64000、1：128000和1：256000，从 第1至第8行依次横向加入96孔酶标板，做间接ELISA；同时，每一 个包被原、抗体浓度组合，加入1ng/mL(1ppb)的氯丙那林，进行 竞争反应。
方阵滴定结果见表1，初步选择OD值接近2.0，相邻两孔OD值 有较大变化，且竞争较好的包被浓度及对应的抗体稀释度组合；从表1 中选择包被原1：32000的浓度和抗体1：64000的稀释度组合。
表1方阵滴定法
Figure BDA0002404886440000131
3、标准曲线建立
将莱克多巴胺、克伦特罗、溴布特罗、特布他林、西马特罗、氯 丙那林、妥布特罗、西布特罗、马布特罗、齐帕特罗、马喷特罗等标 准品配制8个浓度梯度，每个浓度3个平行孔，做间接竞争ELISA， 绘制标准曲线，计算IC50值，其中氯丙那林的标准曲线如图5所示。
4、交叉反应率测定
将上述IC50值与氯丙那林的IC50值对比，得到交叉反应率，结果 如下表2所示。本研究建立的间接竞争ELISA方法对所测定的11种β2 受体激动剂类药物存在一定程度的交叉反应率。
表2 ELISA方法IC50值及抗体交叉反应率
Figure BDA0002404886440000132
Figure BDA0002404886440000141
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详 尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本 领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础 上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.氯丙那林半抗原，其特征在于，其结构式为如下式(I)、式(II)和式(III)中的一种：
Figure FDA0002404886430000011
2.权利要求1所述氯丙那林半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、2-氯苯甲醛发生加成环化反应制备化合物2；
S2、化合物2与邻苯二甲酸亚胺反应得到化合物4；
S3、化合物4反应制备化合物5；
S4、化合物5和化合物6反应得到化合物7；
S5、化合物7发生酯基水解反应得到所述氯丙那林半抗原；
其中：
所述化合物2、化合物4和化合物5的结构式分别如下：
Figure FDA0002404886430000012
Figure FDA0002404886430000021
所述化合物6的结构式为
Figure FDA0002404886430000022
中的一种；
所述化合物7的结构式为
Figure FDA0002404886430000023
中的一种。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将碘化三甲基磺铵溶于二甲基亚砜和四氢呋喃的混合物中，加入NaH后室温搅拌，再将2-氯苯甲醛逐滴加入后室温搅拌，加水后用乙酸乙酯萃取，依次用水和饱和NaCl水溶液冲洗后，再用无水Na2SO4脱水，并在减压条件下将溶剂完全蒸发得到化合物2；
S2、将化合物2、邻苯二甲酸亚胺和吡啶在叔丁醇中加热回流6h，随后抽真空除去溶剂得到残渣，再向残渣中加入二氯甲烷，依次用水和0.5mol/L的HCl溶液冲洗后，再用无水Na2SO4脱水，最后去除溶剂后净化得到化合物4；
S3、将化合物4与水合肼在乙醇中室温搅拌混合12h，过滤后将滤液经减压浓缩直至干燥，层析得到化合物5；
S4、将化合物5溶于二氯甲烷中，加入化合物6，在30℃下搅拌15min后加入乙酸，并在30min内分3次加入NaBH(OAc)3，在30℃下搅拌3h后，倒入NaHCO3溶液中，搅拌至没有气体产生，分离有机层后，用二氯甲烷提取水层，用无水Na2SO4干燥合成的有机层，去除溶剂后层析纯化，得到化合物7；
S5、将化合物7溶于NaOH溶液并回流加热5h，冷却至常温后，加入0.5mol/L的HCl溶液将pH值调节为7.0，浓缩后得到残留物，用体积比3：1的二氯甲烷和甲醇的混合物提取残留物后过滤，将得到的有机层在真空中浓缩得到所述氯丙那林半抗原。
4.氯丙那林人工抗原，其特征在于，由权利要求1所述氯丙那林半抗原与载体蛋白偶联后得到；
其中，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。
5.权利要求4所述氯丙那林人工抗原的制备方法，其特征在于，采用碳二亚胺或混合酸酐法将所述氯丙那林半抗原与载体蛋白偶联制得氯丙那林人工抗原。
6.由权利要求4所述氯丙那林人工抗原制备的特异性抗体，其特征在于，包括多克隆抗体和单克隆抗体。
7.权利要求1所述氯丙那林半抗原或权利要求4所述氯丙那林人工抗原的以下任一应用：
①在制备抗氯丙那林特异性抗体中的应用；
②在检测抗氯丙那林特异性抗体中的应用。
8.抗氯丙那林多克隆抗体，其特征在于，由权利要求4所述氯丙那林人工抗原免疫实验动物获得；
优选地，所述氯丙那林人工抗原由所述氯丙那林半抗原与钥孔血蓝蛋白偶联得到。
9.由权利要求6所述特异性抗体或权利要求8所述多克隆抗体制备的氯丙那林检测试剂或试剂盒。
10.权利要求6所述特异性抗体或权利要求8所述多克隆抗体的以下任一应用：
(1)在检测氯丙那林及其同类药物中的应用；
(2)在制备氯丙那林及其同类药物的免疫层析试纸条中的应用；
(3)在制备氯丙那林及其同类药物的胶体金检测试纸条中的应用；
优选地，所述氯丙那林及其同类药物选自莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、溴布特罗、特布他林、西马特罗、氯丙那林、妥布特罗、西布特罗、马布特罗、克伦普罗、班布特罗、齐帕特罗、克伦巴胺、马喷特罗。
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