CN113368123A

CN113368123A - 鼠李糖基淫羊藿次苷ii在肌肉修复和再生中的应用

Info

Publication number: CN113368123A
Application number: CN202110773865.1A
Authority: CN
Inventors: 王新峦; 秦岭; 曹会娟; 李玲; 杨文耀; 黄翠珊; 施科达
Original assignee: Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Current assignee: Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Priority date: 2021-07-08
Filing date: 2021-07-08
Publication date: 2021-09-10
Anticipated expiration: 2041-07-08
Also published as: CN113368123B

Abstract

本发明涉及鼠李糖基淫羊藿次苷II在肌肉修复和再生中的应用。具体公开了鼠李糖基淫羊藿次苷II在制备用于治疗或预防肌肉疾病、促进肌肉修复或促进肌肉再生的药物或试剂中的应用。所述肌肉损伤为创伤性肌肉损伤或非创伤性肌肉损伤。所述非创伤性肌肉损伤选自肌源性肌肉萎缩、废用性肌肉萎缩、肌肉营养不良、肌肉减少症、肌肉病变、肌无力。本发明首次证明了鼠李糖基淫羊藿次苷II在促进肌细胞增殖或分化、提高肌管数量、促进肌管形成、提高肌管长度、提高肌管宽度、促进成肌细胞分化或促进肌细胞融合等方面的作用。拓宽了鼠李糖基淫羊藿次苷II的应用方向，同时为肌肉相关疾病提供了治疗途径。

Description

鼠李糖基淫羊藿次苷II在肌肉修复和再生中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及鼠李糖基淫羊藿次苷II在肌肉修复和再生中的应用。

背景技术

骨骼肌创伤性损伤，如跌倒、扭伤，是运动医学中常见的损伤，发生率在10-55％。骨骼肌自身具有修复能力，当机体受到损伤后，会快速进入修复和再生期。但经过反复过度使用、严重外伤等过程后，这种再生能力会明显降低。由于修复速率的减缓，受伤部位容易形成瘢痕组织，导致肌肉的收缩性能下降，同时增加二次损伤的概率，对今后的生活及运动造成严重不良后果。

骨骼肌的发育和再生离不开卫星细胞的增殖分化，当卫星细胞接受到肌肉受损的信号后，激活自身向成肌细胞分化，形成大量肌管，肌管之间相互融合，以此达到修复和再生的目的。这种修复不单单依靠卫星细胞，还需要各细胞之间的联系和肌肉发生期间特定基因的激活，如：生肌调节因子家族(MRFs)在其中起到了关键性作用，主要调控成肌细胞分化、融合和肌管形成等方面。

骨骼肌非创伤性损伤，如骨骼肌萎缩，主要症状为肌肉纤维变细甚至消失，会导致肌肉体积减小、肌肉功能障碍等肌肉相关的问题。肌肉萎缩包括神经源性、肌源性、废用性肌萎缩三类，容易导致肌无力、引发跌倒，致使患者长期卧床，最终影响患者的独立性和生活质量。肌肉萎缩后的恢复和重建的时期主要依靠锻炼，但是如果患者为老年人或者刚刚进行过重大手术则不能进行有效锻炼。目前，针对肌肉萎缩过程中的肌肉细胞修复和再生的有效治疗药物较少。

鼠李糖基淫羊藿次苷II(2″-O-rahmnosyl icariside II)是中药淫羊藿的茎叶经过干燥后的提取物中的活性成分。淫羊藿为小檗科淫羊藿属(Epimedium)植物。始载于《神农本草经》，有温肾壮阳、强筋骨、袪风湿的功效，目前《中国药典》收录五种淫羊藿植物，包括淫羊藿(E.Brevicornum)、箭叶淫羊藿(E.Sagittatum)、柔毛淫羊藿(E.Pubescens)、巫山淫羊藿(E.Wushanense)和朝鲜淫羊藿(E.Koreanum)。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供鼠李糖基淫羊藿次苷II在促进成肌分化和肌管形成，并且帮助抵抗骨骼肌创伤性和非创伤性损伤后修复和再生的药物。

本发明一个方面提供了鼠李糖基淫羊藿次苷II在制备用于治疗或预防由于肌细胞数量下降、肌细胞变小或肌细胞老化导致的肌肉疾病，或者用于促进肌肉修复、促进肌肉再生的药物中的应用。

进一步地，所述肌肉疾病为骨骼肌相关疾病。

进一步地，所述肌肉损伤为创伤性肌肉损伤或非创伤性肌肉损伤。

进一步地，所述非创伤性肌肉损伤选自肌源性肌肉萎缩、废用性肌肉萎缩、肌肉营养不良、肌肉减少症、肌肉病变、肌无力。

本发明另一个方面提供了鼠李糖基淫羊藿次苷II在制备用于促进肌细胞增殖或分化、提高肌管数量、促进肌管形成、提高肌管长度、提高肌管宽度、促进成肌细胞分化、促进肌细胞融合的药物或试剂中的用途。

本发明再一个方面提供了鼠李糖基淫羊藿次苷II在制备提高肌分化过程中的Myog或Mymk基因的表达、促进肌管特异性蛋白Myosin 4基因的表达或蛋白的翻译的药物或试剂中的用途。

本发明再一个方面提供了一种治疗或预防肌肉疾病、促进肌肉修复或促进肌肉再生的药物组合物，所述药物组合物中包含鼠李糖基淫羊藿次苷II。

进一步地，所述的鼠李糖基淫羊藿次苷II作为药物组合物中的唯一活性成分。

本发明再一个方面提供了一种提高成肌分化过程中的Myog或Mymk基因的表达、促进肌管特异性蛋白Myosin 4基因的表达或蛋白的翻译的试剂，所述试剂中包含鼠李糖基淫羊藿次苷II。

本发明再一个方面提供了一种治疗或预防肌肉疾病、促进肌肉修复或促进肌肉再生的方法，所述方法包括将鼠李糖基淫羊藿次苷II施用于受试者的步骤。

本发明再一个方面提供了一种促进肌细胞增殖或分化、提高肌管数量、促进肌管形成、提高肌管长度、提高肌管宽度、促进成肌细胞分化或促进肌细胞融合的方法，所述方法包括将鼠李糖基淫羊藿次苷II施用于受试者或肌细胞的步骤。

本发明再一个方面提供了一种提高肌分化过程中的Myog或Mymk基因的表达、促进肌管特异性蛋白Myosin 4基因的表达或蛋白的翻译的方法，所述方法包括将鼠李糖基淫羊藿次苷II施用于受试者或肌细胞的步骤。

进一步地，上述的方法为非诊断或治疗目的的。

有益效果

本发明首次证明了鼠李糖基淫羊藿次苷II在促进肌细胞增殖或分化、提高肌管数量、促进肌管形成、提高肌管长度、提高肌管宽度、促进成肌细胞分化或促进肌细胞融合等方面的作用。因此，鼠李糖基淫羊藿次苷II可以应用于治疗或预防肌肉疾病、促进肌肉修复或促进肌肉再生。

附图说明

图1为具有淫羊藿素母核的化合物结构分析。

图2为六种化合物诱导C2C12细胞成肌管形成Myosin 4-488荧光染色图片。

图3为不同浓度鼠李糖基淫羊藿次苷II对C2C12细胞向肌管形成的Myosin 4-488荧光染色图片。

具体实施方式

为了使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细的说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。

在本发明的技术方案中，鼠李糖基淫羊藿次苷II可以从植物中分离得到也可以通过化学合成得到，其提取和合成所用的基本原料与技术已有相关论文。鼠李糖基淫羊藿次苷II是淫羊藿的成分之一，英文名为：2″-O-rahmnosyl icariside II(2-(Hydroxymethyl)-4-[(1R)-1-hydroxy-2-{[6-(4-phenylbutoxy)hexyl]a mino}ethyl]phenol)，化学式为C₃₃H₄₀O₁₄，分子式如下所示。

在本发明中，术语“预防”是指通过给予本发明所述的药物组合物或保健功能性食品组合物来抑制或延迟肌肉疾病或其至少一种症状的发生的任何动作。此外，它还包括对病情缓解的受试者进行治疗，以预防或抑制复发。

在本发明中，术语“治疗”是指通过给予本发明所述的药物组合物来改善或有益地改变症状的任何动作，例如缓解、减轻或消除肌肉疾病或其至少一种症状。

在本发明中，术语“药物组合物”是指为特定目的而给予的组合物。在本发明中是指被给予以预防或治疗肌肉疾病或其至少一种症状。

本发明下述实施例所用淫羊藿次苷II(Icariside II)、淫羊藿素(Icaritin)、朝藿定A(Epimedin A)、朝藿定B(Epimedin B)、朝藿定C(Epimedin C)，均购买于成都瑞芬思生物科技有限公司。产品货号依次为：113558-15-9、118525-40-9、110623-72-8、110623-73-9、110642-44-9，纯度均≥98％。化合物结晶用生物级二甲基亚枫(DMSO)溶解，配成10mM的储存液，于4℃冰箱保存，待用。鼠李糖基淫羊藿次苷II为白色结晶粉末，分子量为：660.66，产品货号：135293-13-9，批号：wkq19051304，纯度：≥98％。本发明所用的鼠李糖基淫羊藿次苷II用生物用干甲基亚枫(DMSO)溶解，配成10mM的储存液，于4℃冰箱保存，待用。

实施例一具有淫羊藿素母核的化合物安全浓度测定及促成肌管性能评价。

淫羊藿中包含多种有效成分，本发明从淫羊藿素母核出发挑选6种具体化合物进行评价。各个化合物结构和关系见图1。在本实施例中，成肌细胞C2C12细胞来源于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，细胞用含5％胎牛血清和1％双抗a-MEM培养基培养。细胞按2千细胞每孔接种于96孔板中，细胞种板24小时后，开始给药处理。实验分为正常组(Normal)，鼠李糖基淫羊藿次苷II组(2″-O-rahmnosyl icariside II)，淫羊藿次苷II组(Icariside II)，淫羊藿素组(Icaritin)，朝藿定A组(Epimedin A)，朝藿定B组(EpimedinB)，朝藿定C组(Epimedin C)，每组的药物浓度均分别为0.01、0.1、1、10μM的剂量，药物分别作用48和72小时后，利用10％的CCK-8试剂孵育3小时，在490nm波长下测定OD值，结果如下表所示。实验数据以平均值(Mean)±标准差(SD)表示，应用SPSS 25.0进行数据处理，采用ANOVA检验进行统计学分析，统计分析药物组与其对应的正常组的P值，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

表1-1鼠李糖基淫羊藿次苷II的药物安全浓度检测

表1-2淫羊藿次苷II的药物安全浓度检测

表1-3淫羊藿素的药物安全浓度检测

表1-4朝藿定A的药物安全浓度检测

表1-5朝藿定B的药物安全浓度检测

表1-6朝藿定C的药物安全浓度检测

根据上述安全浓度测定后，选择给药剂量。

成肌细胞C2C12细胞来源于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，细胞用含10％胎牛血清和1％双抗α-MEM培养基培养。细胞按1万细胞每孔接种于48孔板中，培养2天后，细胞密度约80％时，开始实验。实验分为正常组(Normal)，成肌分化对照组(Control)，成肌分化+淫羊藿次苷II低、高剂量组(Icariside II：0.1μM,1μM)，成肌分化+朝藿定A低、高剂量组(Epimedin A：1μM,10μM)，成肌分化+朝藿定B低、高剂量组(EpimedinB：1μM,10μM)，成肌分化+淫羊藿素低、高剂量组(Icaritin：1μM,10μM)，成肌分化+淫羊藿苷低、高剂量组(Icariin：0.1μM,1μM)，成肌分化+鼠李糖基淫羊藿次苷II低、高剂量组(2″-O-rahmnosyl icariside II：1μM,10μM)，实验过程中，正常组细胞采用含5％胎牛血清和1％双抗α-MEM培养基继续培养；对照组采用含2％的马血清和1％双抗α-MEM培养基诱导C2C12细胞向成肌细胞分化；药物组则在成肌分化培养基中加入相应剂量的鼠李糖基淫羊藿次苷II，药物终浓度分别为0.1μM,1μM,10μM。实验持续观察4天，每隔2天更换一次相应的培养液。实验终点时，细胞用4％多聚甲醛(中性)固定30分钟，然后用0.1％Triton-100室温处理10分钟，磷酸盐缓冲液清洗3次后，加入特异性肌球蛋白抗体Myosin 4-488染液(浓度1％)，4℃过夜，第二天，弃去染液，磷酸盐缓冲液清洗3次，于激发光为488nm处荧光拍照，结果见图2。

结果显示：六个化合物中，虽然均具有类似的母核，且大部分化合物具有糖类基团，但是其促进肌肉分化的能力差异较大。仅鼠李糖基淫羊藿次苷II具有较好的促进肌管形成，增加肌管数量、宽度和长度的能力，而其他化合物具有较高的或者轻微的抑制肌管形成的作用。

表1-7：成肌分化诱导后4天肌管面积(mm²)(n＝2)

分组	平均值	SD	相对对照组变化
				正常组	0.4294	0.1295	62％
对照组	0.6874	0.0436	100％
				鼠李糖基淫羊藿次苷II组-10μM	0.7243	0.1299	105％
淫羊藿次苷II组-1μM	0.3989	0.0876	58％
				淫羊藿素组-10μM	0.6541	0.0516	95％
朝藿定A组-10μM	0.5203	0.0368	76％
				朝藿定B组-10μM	0.6498	0.1549	95％
朝藿定C组-10μM	0.6171	0.2142	90％

实施例二：鼠李糖基淫羊藿次苷II对C2C12细胞向肌管形成调控的影响。

成肌细胞C2C12细胞来源于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，细胞用含10％胎牛血清和1％双抗α-MEM培养基培养。细胞按1万细胞每孔接种于48孔板中，培养2天后，细胞密度约80％时，开始实验。实验分为正常组(Normal)，成肌分化对照组(Control)，成肌分化+鼠李糖基淫羊藿次苷II低、中、高剂量组(2″-O-rahmnosylicariside II：0.1μM,1μM,10μM)，实验过程中，正常组细胞采用含5％胎牛血清和1％双抗α-MEM培养基继续培养；对照组采用含2％的马血清和1％双抗α-MEM培养基诱导C2C12细胞向成肌细胞分化；药物组则在成肌分化培养基中加入相应剂量的鼠李糖基淫羊藿次苷II，药物终浓度分别为0.1μM,1μM,10μM。实验持续观察4天，每隔2天更换一次相应的培养液。实验终点时，细胞用4％多聚甲醛(中性)固定30分钟，然后用0.1％Triton-100室温处理10分钟，磷酸盐缓冲液清洗3次后，加入特异性肌球蛋白抗体Myosin 4-488染液(浓度1％)，4℃过夜，第二天，弃去染液，磷酸盐缓冲液清洗3次，于激发光为488nm处荧光拍照，结果见图3。图片导入Image-Pro Plus software(Version 6.0,Media Cybernetics,American)定量肌管数量，肌管长度，肌管宽度。实验数据以Mean±SD表示，应用Graphpad prism 6software(Graphpad Software Inc,San Diego,CA,USA)进行数据处理，采用ANOVA检验进行统计学分析，p<0.05有统计学意义。

结果显示：鼠李糖基淫羊藿次苷II促进肌管形成，增加肌管数量，还可增加肌管的宽度和长度，且具有统计学差异。

表2-1：成肌分化诱导后4天肌管数量(1/μm)(n＝4)。

a:统计分析正常组与对照组的P值；b:统计分析药物组与Control组的P值；**p<0.01；***p<0.001.

表2-2：成肌分化诱导后4天肌管长度(μm)(n＝4)。

a:统计分析正常组与对照组的P值；b:统计分析药物组与Control组的P值；***p<0.001.

表2-3：成肌分化诱导后4天肌管宽度(μm)(n＝4)。

a:统计分析正常组与对照组的P值；b:统计分析药物组与Control组的P值；*p<0.05；**p<0.01；****p<0.0001.

实施例三：在该实验中，评价鼠李糖基淫羊藿次苷II对C2C12细胞向成肌分化、肌细胞融合的调控情况。

C2C12细胞来源于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，细胞用含10％胎牛血清和1％双抗α-MEM培养基培养。细胞按3万细胞每孔接种于12孔板中，培养2天后，细胞密度约80％时开始实验。实验分为正常组(Normal)，诱导成肌分化对照组(Control)，诱导成肌分化+鼠李糖基淫羊藿次苷II组(10μM)。实验过程中，正常组细胞在实验开始时收集细胞提取mRNA。对照组采用含2％的马血清和1％双抗α-MEM培养基诱导C2C12细胞向成肌细胞分化，药物组由在成肌分化培养基中加入相应剂量的鼠李糖基淫羊藿次苷II，终浓度为10μM。实验持续观察3天，每隔1天更换1次相应的培养液。对照组细胞和药物组细胞在实验后1天、2天、3天收集细胞提取mRNA。mRNA用AxygenRNA提取试剂盒提取纯化，纯化的mRNA用TaKaRa逆转录试剂盒得到cDNA，cDNA用

Green PCR Master Mix试剂盒进行扩增，用进行裂解，扩增引物如下所示。

M-GAPDH上游引物3’-CATGTTCCAGTATGACTCCACTC-5’SEQ ID NO.1

下游引物3’-GGCCTCACCCCATTTGATGT-5’SEQ ID NO.2

M-Myog上游引物3’-GAGGAAGTCTGTGTCGGTGG-5’SEQ ID NO.3

下游引物3’-CCACGATGGACGTAAGGGAG-5’SEQ ID NO.4

M-Mymk上游引物3’-GAGCACTTAAGCCCTCCTTGT-5’SEQ ID NO.5

下游引物3’-CCCAGCCTTCTTGTTGACCT-5’SEQ ID NO.6

该实验检测了成肌分化培养后第1天和第2天的成肌分化相关的转录因子Myog，以及成肌分化后第2天和第3天的肌细胞融合因子Mymk。实验数据以Mean±SD表示，应用Graphpad prism 6software(Graphpad Software Inc,San Diego,CA,USA)进行数据处理，采用ANOVA检验进行统计学分析，p<0.05有统计学意义。

结果显示：鼠李糖基淫羊藿次苷II促进成肌分化和肌细胞融合，鼠李糖基淫羊藿次苷II可上调成肌分化过程中的Myog和Mymk基因的表达水平，且具有统计学差异。

表3-1：成肌分化诱导后Myog基因表达相对于正常组(Normal)的增加倍数(n＝3)。

a:统计分析正常组与对照组的P值；b:统计分析药物组与Control组的P值；d：天；*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001.

表3-2：成肌分化诱导后Mymk基因表达相对于正常组(Normal)的增加倍数(n＝3)。

a:统计分析正常组与对照组的P值；b:统计分析药物组与Control组的P值；d:天；*p<0.05；**p<0.01；****p<0.0001.

实施例四：鼠李糖基淫羊藿次苷II对C2C12细胞成肌分化后期特异性肌管蛋白表达的情况。

C2C12细胞来源于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，细胞用含10％胎牛血清和1％双抗α-MEM培养基培养。细胞按3万细胞每孔接种于12孔板中，培养2天后，细胞密度约80％时，开始实验。实验分为正常组(Normal)，成肌分化对照组(Control)，成肌分化+鼠李糖基淫羊藿次苷II组(2″-O-rahmnosyl icariside II-10μM)。实验过程中，正常组细胞在实验开始时收集细胞提取mRNA；对照组采用含2％的马血清和1％双抗α-MEM培养基诱导C2C12细胞向成肌细胞分化，药物组则在成肌分化培养基中加入相应剂量的鼠李糖基淫羊藿次苷II，终浓度为10μM。实验持续观察3天，每隔1天更换1次相应的培养液。对照组细胞和药物组细胞在实验后第2天和第3天收集细胞提取mRNA。mRNA用AxygenRNA提取试剂盒提取纯化，纯化的mRNA用TaKaRa逆转录试剂盒得到cDNA，cDNA用

Green PCRMaster Mix试剂盒进行扩增，用进行裂解，扩增引物如下所示。该实验检测了成肌分化后第2天和第3天的特异性肌球蛋白Myh4的mRNA水平。

M-GAPDH上游引物3’-CATGTTCCAGTATGACTCCACTC-5’SEQ ID NO.1

下游引物3’-GGCCTCACCCCATTTGATGT-5’SEQ ID NO.2

M-Myh4上游引物3’-CTCACCTACCAGACCGAGGA-5’SEQ ID NO.7

下游引物3’-CTCCTGTCACCTCTCAACAGA-5’SEQ ID NO.8

另外细胞按1万细胞每孔接种于48孔板中，培养2天后，细胞密度约80％时采用含2％的马血清和1％双抗α-MEM培养基诱导C2C12细胞向成肌细胞分化。实验分为正常组(Normal)，成肌分化对照组(Control)，成肌分化+鼠李糖基淫羊藿次苷II组(10μM)。实验过程中，正常组细胞采用含5％胎牛血清和1％双抗α-MEM培养基继续培养；对照组采用含2％的马血清和1％双抗α-MEM培养基诱导C2C12细胞向成肌细胞分化；药物组则在成肌分化培养基中加入相应剂量的鼠李糖基淫羊藿次苷II，药物终浓度分别为0.1μM,1μM,10μM。实验持续观察4天，每隔2天更换一次相应的培养液。实验终点时，细胞用4％多聚甲醛(中性)固定30分钟，然后用0.1％Triton-100室温处理10分钟，磷酸盐缓冲液清洗3次后，加入特异性肌球蛋白特异性抗体Myosin 4-488染液(浓度1％)，4℃过夜，第二天，弃去染液，磷酸盐缓冲液清洗3次，于激发光为488nm处荧光拍照。图片导入Image-Pro Plus software(Version6.0,Media Cybernetics,American)进行定量Myosin 4荧光强度。实验数据以Mean±SD表示，应用Graphpad prism 6software(Graphpad Software Inc,San Diego,CA,USA)进行数据处理，采用ANOVA检验进行统计学分析，p<0.05有统计学意义。结果显示：鼠李糖基淫羊藿次苷II促进肌管特异性蛋白Myosin 4的基因和蛋白水平上的表达，且具有统计学差异。

表4-1：成肌分化诱导后Myh4基因表达相对于正常组(Normal)的增加倍数(n＝3)。

a:统计分析正常组与对照组的P值；b:统计分析药物组与对照组的P值；d:天；**p<0.01；***p<0.001.

表4-2：成肌分化诱导后Myosin 4蛋白表达相对于正常组(Normal)的增加倍数(n＝3)。

a:统计分析正常组与对照组的P值；b:统计分析药物组与Control组的P值；d:天；*p<0.05；**p<0.01。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院深圳先进技术研究院

<120> 鼠李糖基淫羊藿次苷II在肌肉修复和再生中的应用

<130> CP121010497C

<160> 8

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

catgttccag tatgactcca ctc 23

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ggcctcaccc catttgatgt 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gaggaagtct gtgtcggtgg 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

ccacgatgga cgtaagggag 20

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

gagcacttaa gccctccttg t 21

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

cccagccttc ttgttgacct 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

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<400> 7

ctcacctacc agaccgagga 20

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

ctcctgtcac ctctcaacag a 21

Claims

1.鼠李糖基淫羊藿次苷II在制备用于治疗或预防由于肌细胞数量下降、肌细胞变小或肌细胞老化导致的肌肉疾病，或者用于促进肌肉修复、促进肌肉再生的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肌肉损伤包括：创伤性肌肉损伤或非创伤性肌肉损伤。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述非创伤性肌肉损伤包括如下任意一种或多种：肌源性肌肉萎缩；废用性肌肉萎缩；肌肉营养不良；肌肉减少症；肌肉病变；肌无力。

4.鼠李糖基淫羊藿次苷II在制备用于促进肌细胞增殖或分化、提高肌管数量、促进肌管形成、提高肌管长度、提高肌管宽度、促进成肌细胞分化、促进肌细胞融合的药物或试剂中的用途。

5.鼠李糖基淫羊藿次苷II在制备提高肌分化过程中的Myog或Mymk基因的表达、促进肌管特异性蛋白Myosin 4基因的表达或蛋白的翻译的药物或试剂中的用途。

6.一种治疗或预防肌肉疾病、促进肌肉修复或促进肌肉再生的药物组合物，所述药物组合物中包含鼠李糖基淫羊藿次苷II。

7.一种提高成肌分化过程中的Myog或Mymk基因的表达、促进肌管特异性蛋白Myosin4基因的表达或蛋白的翻译的试剂，所述试剂中包含鼠李糖基淫羊藿次苷II。

8.一种治疗或预防肌肉疾病、促进肌肉修复或促进肌肉再生的方法，所述方法包括将鼠李糖基淫羊藿次苷II施用于受试者的步骤。

9.一种促进肌细胞增殖或分化、提高肌管数量、促进肌管形成、提高肌管长度、提高肌管宽度、促进成肌细胞分化或促进肌细胞融合的方法，所述方法包括：将鼠李糖基淫羊藿次苷II或包含鼠李糖基淫羊藿次苷II的药物组合物，施用于受试者或肌细胞的步骤。

10.一种提高肌分化过程中的Myog或Mymk基因的表达、促进肌管特异性蛋白Myosin4基因的表达或蛋白的翻译的方法，所述方法包括将鼠李糖基淫羊藿次苷II施用于受试者或肌细胞的步骤。