CN113340881B - 目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法 - Google Patents

目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法，通过Ag‑S键将DNA S1连接到AgNPs@Ru‑MOF材料上，再将此材料的溶液、DNA S3溶液、DNA S2与二茂铁甲酸混合孵育后的溶液依次修饰到预处理后的GCE电极表面制成适配体传感器，当目标物鱼腥藻毒素存在时，能够触发DNA S3的第二结构，从而导致DNA S1与DNA S2形成银离子可识别的特殊结构，之后随着H2O2的加入，H2O2能够刻蚀银纳米粒子，生成银离子，银离子通过识别切割位点切割DNA S2释放出抑制物二茂铁，诱导电极表面钌的电化学发光，实现对于鱼腥藻毒素的定量检测。

Description

目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法
技术领域
本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法，具体涉及一种基于ECL-RET的AgNPs@Ru-MOF探针的目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法。
背景技术
Anatoxin-a(ATX-a，鱼腥藻毒素)是最小的一种神经毒素(Mol.Wt，165.23Da)，是一种生物碱，会影响乙酰胆碱的正常释放并引起神经肌肉过度兴奋和抽搐，最终导致呼吸受限和窒息。迄今为止，已经报道了许多用于鱼腥藻毒素的分析方法。例如，塞缪尔·哈达德(Samuel P.Haddad)小组使用同位素稀释液相色谱串联质谱法测定鱼腥藻毒素。AzevedoJ’小组开发了一种平台，该平台可通过具有UV和荧光的高效液相色谱法来检测鱼腥藻毒素。然而，它们中的大多数具有耗时，仪器昂贵或需要专业技术人员的缺点，这限制了它们在实践中的应用。
快速，准确，便捷的鱼腥藻毒素检测方法是必不可少的。在过去的几十年中，具有快速响应，高选择性，低检测限，低背景信号等优点的电化学发光(ECL)在生物分析和成像领域受到了广泛的关注。但是，传统的ECL发光体，如鲁米诺和Ru(bpy)3 2+，多环芳烃(PAH)可能会泄漏，导致ECL效率低。
依赖金属离子的DNA酶通常具有很高的选择性，并且不影响DNA酶的活性，但它需要特定的金属离子才能裂解底物链。来自金属离子依赖性DNA酶的传感方法可以使信号分子之间的信号差更近或更远从而可以有效避免来自其他因素的干扰，这通常需要靶标和金属离子共存。分析鱼腥藻毒素依赖金属离子依赖的DNAzyme电化学发光的纳米杂交体系的研究较少，现有技术中也没有用来检测鱼腥藻毒素的电化学发光生物传感器。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用以及鱼腥藻毒素的定量检测方法。该适配体传感器是基于ECL-RET的AgNPs@Ru-MOF探针构建的，根据本发明的方法构建的适配体传感器，仅利用电致化学发光仪即可实现对于鱼腥藻毒素的定量检测，且操作简单，背景低，灵敏度高，选择性高。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将AgNPs@Ru-MOF材料分散在去离子水中制备成AgNPs@Ru-MOF溶液，并将其与DNA S1溶液混合孵育，得到S1-AgNPs@Ru-MOF溶液；
所述DNA S1的基因序列为：
5’-(SH)-C6-TTTCGCCATCTTTAGGCGTTAACGGGGCAGCGTATAGTGAGC-(NH2)-3’；
(2)GCE电极抛光处理后，在脱落酸溶液中进行电化学沉积反应得到羧基修饰的ABA/GCE，再将置于EDC和NHS的混合溶液中活化，得到预处理后的GCE电极；
(3)将所述预处理后的GCE电极在所述S1-AgNPs@Ru-MOF溶液混合孵育，洗涤后干燥得到S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极；
(4)将所述S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极在DNA S3溶液中进行孵育，洗涤后干燥得到S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极；
所述DNA S3的基因序列为：
5’-GCTCACTATACGCTGCCCCGTTAACGCCTAA-TGGCGACAAGAAGACGTACAAACACGCACCAGGCCGGAGTGGAGTATTCTGAGGTCGG-3’；其包含可特异性识别鱼腥藻毒素的适配体DNA；
(5)将DNA S2溶液与二茂铁甲酸溶液及EDC、NHS溶液混合孵育，得到S2-Fc溶液；
所述DNA S2的基因序列为：
5’-C6-GCTCACTATrAGGAAGATGGCGAAA-(NH2)-3’；其为含有银离子特异性切割位点的底物链DNA；
(6)将所述S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在S2-Fc溶液中，混合孵育，洗涤后晾干，即可得到所述目标物和氧化还原双响应适配体传感器。
所述DNA S1溶液、DNA S2溶液、DNA S3溶液是分别将DNA S1、DNA S2、DNA S3溶解在PH＝7.4的10mM Tris-HCl缓冲溶液中得到，三者的浓度均为1μM。
所述孵育的温度均为35～38℃；所述步骤(1)、(3)、(4)、(5)、(6)中的孵育时间分别为8～12h、1.5～2.5h、1.5～2.5h、8～12h、1.5～3.0h。
所述目标物和氧化还原双响应适配体传感器的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)将AgNPs@Ru-MOF材料分散在去离子水中制备成浓度为1mg/mL AgNPs@Ru-MOF溶液，将20μL AgNPs@Ru-MOF溶液与20μL 1μM DNA S1溶液混合孵育8～12h，得到S1-AgNPs@Ru-MOF溶液；
(2)GCE电极抛光处理后，置于含1mM脱落酸溶液中，以银/氯化银为参比电极、铂丝为对电极，以10mV/s扫描电位0.4～1.2V进行电沉积，三次循环后得到羧基修饰的ABA/GCE，再将其置于含等摩尔的EDC、NHS的混合溶液中浸泡2h，得到预处理后的GCE电极；
(3)将预处理后的GCE电极浸润在20μL所述S1-AgNPs@Ru-MOF溶液中1.5～2.5h，洗涤干燥后得到S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极；
(4)将所述S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在10μL 1μM DNA S3溶液中，混合孵育1.5～2.5h，洗涤干燥后得到S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE；
(5)将20μL 1μM DNA S2溶液与100μL 1μM二茂铁甲酸溶液、8μL 5mM EDC、8μL 5mMNHS混合孵育8～12h，得到S2-Fc溶液；
(6)将所述S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在10μL所述S2-Fc溶液中，混合孵育1.5～3.0h，洗涤干燥后即可得到所述目标物和氧化还原双响应适配体传感器。
本发明还提供了利用所述的制备方法制备得到的目标物和氧化还原双响应适配体传感器。
本发明还提供了所述目标物和氧化还原双响应适配体传感器在定量检测鱼腥藻毒素中的应用。
本发明还提供了一种定量检测鱼腥藻毒素的方法，所述方法包括以下步骤：
A、利用本发明所述的制备方法制备得到多组目标物和氧化还原双响应适配体传感器；
B、将步骤A中的各适配体传感器分别放入系列浓度的鱼腥藻毒素水溶液中浸泡至少2.0h，然后清洗；
C、再将各适配体传感器放入过氧化氢溶液中浸泡至少2.0h，然后取出晾干；
D、分别以步骤C处理之后的适配体传感器作为工作电极、银/氯化银为参比电极、铂丝为对电极组成三电极体系，使用MPI-E型ECL分析仪在pH＝7.5的含有20mM三丙胺的0.1M PBS缓冲溶液中测试各电极体系的电化学发光信号强度；
E、以鱼腥藻毒素水溶液浓度为横坐标，电化学发光信号强度值为纵坐标构建线性曲线得出线性方程，进而可检测出待测鱼腥藻毒素的浓度。
步骤B中，鱼腥藻毒素水溶液的浓度分别为0.001mg/mL、0.01mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL；所述清洗为使用PH＝7.4的10mMTris-HCl缓冲溶液洗涤。
步骤C中，所述过氧化氢溶液的浓度为0.1M。
步骤E中，所述线性方程为：I＝5989.07+6081.11c，其中I为电化学发光信号强度值，c为鱼腥藻毒素的浓度，单位为mg/mL；所述线性方程的线性相关系数为0.998。
本发明提供的目标物和氧化还原双响应适配体传感器的制备方法中，以AgNPs@Ru-MOF材料为原料，该材料是通过UiO-66-NH2负载电化学发光物质Ru(bpy)3 2+得到Ru-MOF材料，再在Ru-MOF材料的表面沉降银纳米粒子得到AgNPs@Ru-MOF材料，其表面沉降的银纳米粒子不仅能够有效阻止钌从金属有机框架中泄露，还能够阻止钌与共反应物接触，从而抑制了钌的发光，使得该体系具有低背景信号、降低假阳信号的特点。
随后通过Ag-S键将DNA S1连接到AgNPs@Ru-MOF材料上，再将此材料的溶液修饰到预处理的GCE电极表面得到S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极；经脱落酸修饰后再经EDC和NHS活化的GCE电极表面富含活性羟基，活性羟基可与DNA S1上的氨基反应形成稳定的酰胺键，通过化学键修饰使其与DNA S1结合的更稳定；然后将可特异性识别鱼腥藻毒素的适配体DNA S3通过碱基配对与其连接得到S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE；通过酰胺键在DNA S2一端修饰二茂铁得到S2-Fc，再将S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在S2-Fc溶液中，同样通过碱基互补配对，将S2-Fc修饰到了电极上，这样二茂铁几乎完全抑制了MOF中钌的发光，同时DNA S1和DNA S3的连接封锁住了银离子特异性识别位点。
当目标物鱼腥藻毒素存在时，能够触发DNA S3的第二结构，从而进一步形成银离子可识别的特殊结构，之后随着H2O2的加入，H2O2能够刻蚀银纳米粒子，生成银离子，银离子通过识别切割位点切割DNA S2释放出抑制物二茂铁，释放MOF中钌的电化学发光。利用此性质可以实现对于鱼腥藻毒素的定量检测。特别地，该电化学发光传感器要求目标物鱼腥藻毒素与H2O2同时存在，才能够完全诱导电化学发光。利用电化学发光分析仪记录30秒内的电化学发光强度即可对鱼腥藻毒素进行定量的检测。该分析方法具有低背景、灵敏度高、选择性高，操作方便的特点。
附图说明
图1为基于本发明中的目标物和氧化还原双响应适配体传感器定量检测鱼腥藻毒素的方法示意图；
图2为不同程度的修饰电极的测量时间为横坐标，电化学发光信号强度为纵坐标构建的曲线图；
图3为以鱼腥藻毒素水溶液的浓度为横坐标，电化学发光信号强度为纵坐标构建的点阵曲线图；
图4为以鱼腥藻毒素水溶液的浓度为横坐标，电化学信号强度为纵坐标构建的线性关系图。
图5为以圆柱精子蛋白酶(CYN)，微囊藻毒素(MC-LR)，结节霉素(NOD)，黄曲霉毒素(AFT)为对照ECL信号对比图。
具体实施方式
下面结合实施例及说明书附图对本发明进行详细说明。
本发明中使用的AgNPs@Ru-MOF(AgNPs@Ru-UiO-66-NH2材料)材料参照中国专利CN109651621 A中的实施例1中的方法进行制备。
本发明中的DNA S1溶液、DNA S2溶液、DNA S3溶液是分别将DNA S1、DNA S2、DNAS3溶解在PH＝7.4的10mM Tris-HCl缓冲溶液中得到，三者的浓度均为1μM；
脱落酸溶液为将脱落酸(ABA)溶解在0.1M pH＝7.4的PBS缓冲溶液中得到，其浓度为1mM；
EDC和NHS的混合溶液为将等摩尔的EDC和NHS溶解水中得到，混合溶液中EDC的摩尔浓度为5mM；
其他的溶液，如无特殊说明均为各物质的水溶液；
电化学发光测试采用MPI-E型ECL分析仪，其工作电位为0-1.4V，扫描速度为100mV/s，PMT为400V。
实施例1
一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器的制备方法，包括以下步骤：
(1)将AgNPs@Ru-MOF材料分散在去离子水中制备成浓度为1mg/mL AgNPs@Ru-MOF溶液，将20μL AgNPs@Ru-MOF溶液与20μL 1μM DNA S1溶液混合孵育12h，得到S1-AgNPs@Ru-MOF溶液；
(2)用氧化铝浆抛光GCE电极成镜面，用超纯水清洗干净，用氮气干燥；将抛光处理后的GCE电极置于2mL 1mM ABA溶液中，以银/氯化银为参比电极、铂丝为对电极，以10mV/s扫描电位0.4～1.2V进行电沉积，三次循环后得到羧基修饰的ABA/GCE，再将其置于1mL含等摩尔的EDC、NHS的混合溶液中浸泡2h，混合溶液中EDC的浓度为5mM，用乙醇和超纯水依次清洗，得到预处理后的GCE电极；
(3)将预处理后的GCE浸润在20μL所述S1-AgNPs@Ru-MOF溶液中2.0h，并使用Tris-HCl洗涤3次，取出干燥后得到S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极；
(4)将所述S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在10μL 1μM DNA S3溶液中，混合孵育2.0h，并使用Tris-HCl洗涤3次，取出晾干得到S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE；
(5)将20μL 1μM DNA S2溶液与100μL 1μM二茂铁甲酸溶液、8μL 5mM EDC、8μL 5mMNHS混合孵育8～12h，得到S2-Fc溶液；
(6)将所述S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在10μL所述S2-Fc溶液中，混合孵育2.0h，并使用Tris-HCl洗涤3次，取出后干燥，即可得到所述目标物和氧化还原双响应适配体传感器。
实施例2
一种定量检测鱼腥藻毒素的方法，包括以下步骤：
A、利用实施例1中的制备方法制备得到多组适配体传感器；
B、将步骤A中的各配体传感器分别放入10μL 0.001mg/mL、0.01mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL浓度的鱼腥藻毒素水溶液中浸泡至少2.0h，然后使用PH＝7.4的10mM Tris-HCl缓冲溶液清洗；
C、再将各电化学发光生物传感器放入1mL 0.1mol/L过氧化氢水溶液中浸泡至少2.0h，然后取出晾干；
D、分别以步骤C处理之后的各电化学发光生物传感器作为工作电极、银/氯化银为参比电极、铂丝为对电极组成三电极体系，使用MPI-E型ECL分析仪在8mL pH＝7.5的含有20mM三丙胺的0.1M PBS缓冲溶液中测试各电极体系的电化学发光信号强度；
E、以鱼腥藻毒素水溶液浓度为横坐标，电化学发光信号强度值为纵坐标构建线性曲线，如图4所示，得出线性方程I＝5989.07+6081.11c，其中，I为电化学发光信号强度值，c为鱼腥藻毒素水溶液的浓度，单位为mg/mL；所述线性方程的线性相关系数为0.998；进而可检测出待测鱼腥藻毒素的浓度。
对比例1
将按照实施例1中的方法制备的电化学发光生物传感器(电极A)；
将按照实施例1中的方法制备的电化学发光生物传感器(电极A)浸没于10μL0.1mg/mL ATX-a溶液中孵育1小时，并使用Tris-HCl洗涤3次，晾干后得到电极B；
将按照实施例1中的方法制备的电化学发光生物传感器(电极A)浸没于1mL 0.1MH2O2反应2小时，并使用Tris-HCl洗涤3次，晾干后得到电极C；
将按照实施例1中的方法制备的电化学发光生物传感器(电极A)浸没于10μL0.4mg/mL ATX-a溶液中孵育1小时，再和1mL 0.1M H2O2反应2小时，并使用Tris-HCl洗涤3次，晾干后得到电极D；
分别以电极A、电极B、电极C、电极D为工作电极、银/氯化银为参比电极、铂丝为对电极，使用MPI-E型ECL分析仪在8mL pH＝7.5的含有20mM三丙胺的0.1M PBS缓冲溶液中记录30s内的各电极体系的电化学发光信号强度，结果如图2所示，从图中可以看出单独的H2O2存在时，仅能检测到微弱的电化学发光信号，只有当目标物鱼腥藻毒素与H2O2共同存在时，才具有明显的电化学发光信号。这是因为在加入鱼腥藻毒素后，鱼腥藻毒素会与DNA S3链结合，进一步引起DNA S1构象的改变，在H2O2的存在下，H2O2会刻蚀银纳米粒子，释放出大量的Ag+，Ag+继续切割DNA S2，导致二茂铁的释放，导致钌能够在电激发下发光。
选择性实验
将按照实施例1中的方法制备的电化学发光生物传感器(电极A)分别浸没于10μL0.4mg/mL的圆柱精子蛋白酶(CYN)溶液、微囊藻毒素(MC-LR)溶液、结节霉素(NOD)溶液、黄曲霉毒素(AFT)溶液、ATX-a溶液中孵育1小时，再和1mL 0.1M H2O2反应2小时，并使用Tris-HCl洗涤3次，晾干后得到各电极。
分别以上述得到的各电极为工作电极、银/氯化银为参比电极、铂丝为对电极，使用MPI-E型ECL分析仪在8mL pH＝7.5的含有20mM三丙胺的0.1M PBS缓冲溶液中记录30s内的各电极体系的电化学发光信号强度，结果如图5所示。从图中可以看出只有在加入目标物ATX-a时，电极体系才显示出较强的化学发光信号，可见本发明构建的目标物和氧化还原双响应适配体传感器对鱼腥藻毒素具有高选择性。
上述参照实施例对一种目标物和氧化还原双响应适配体传感器及其制备方法和应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种用于定量检测鱼腥藻毒素的目标物和氧化还原双响应适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将AgNPs@Ru-MOF材料分散在去离子水中制备成AgNPs@Ru-MOF溶液，并将其与DNAS1溶液混合孵育，得到S1-AgNPs@Ru-MOF溶液；
所述DNA S1的基因序列为：
Figure FDA0004124935770000011
(2)GCE电极抛光处理后，在脱落酸溶液中进行电化学沉积反应得到羧基修饰的ABA/GCE，再将置于EDC和NHS的混合溶液中活化，得到预处理后的GCE电极；
(3)将所述预处理后的GCE电极在所述S1-AgNPs@Ru-MOF溶液混合孵育，洗涤后干燥得到S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极；
(4)将所述S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极在DNA S3溶液中进行孵育，洗涤后干燥得到S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极；
所述DNA S3的基因序列为：
5’-GCTCACTATACGCTGCCCCGTTAACGCCTAA-TGGCGACAAGAAGA CGTACAAACACGCACCAGGCCGGAGTGGAGTATTCTGAGGTCGG-3’；
(5)将DNA S2溶液与二茂铁甲酸溶液及EDC、NHS溶液混合孵育，得到S2-Fc溶液；
所述DNA S2的基因序列为：
Figure FDA0004124935770000012
(6)将所述S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在S2-Fc溶液中，混合孵育，洗涤后晾干，即可得到所述目标物和氧化还原双响应适配体传感器；
所述DNA S1溶液、DNA S2溶液、DNA S3溶液是分别将DNA S1、DNA S2、DNA S3溶解在PH＝7.4的10mM Tris-HCl缓冲溶液中得到，三者的浓度均为1μM。
2.根据权利要求1所述的用于定量检测鱼腥藻毒素的目标物和氧化还原双响应适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述孵育的温度均为35～38℃；所述步骤(1)、(3)、(4)、(5)、(6)中的孵育时间分别为8～12h、1.5～2.5h、1.5～2.5h、8～12h、1.5～3.0h。
3.根据权利要求1或2所述的用于定量检测鱼腥藻毒素的目标物和氧化还原双响应适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
(1)将AgNPs@Ru-MOF材料分散在去离子水中制备成浓度为1mg/mL AgNPs@Ru-MOF溶液，将20μL AgNPs@Ru-MOF溶液与20μL 1μM DNA S1溶液混合孵育8～12h，得到S1-AgNPs@Ru-MOF溶液；
(2)GCE电极抛光处理后，置于含1mM脱落酸溶液中，以银/氯化银为参比电极、铂丝为对电极，以10mV/s扫描电位0.4～1.2V进行电沉积，三次循环后得到羧基修饰的ABA/GCE，再将其置于含等摩尔的EDC、NHS的混合溶液中浸泡2h，得到预处理后的GCE电极；
(3)将预处理后的GCE电极浸润在20μL所述S1-AgNPs@Ru-MOF溶液中1.5～2.5h，洗涤干燥后得到S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极；
(4)将所述S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在10μL 1μM DNA S3溶液中，混合孵育1.5～2.5h，洗涤干燥后得到S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE；
(5)将20μL 1μM DNA S2溶液与100μL 1μM二茂铁甲酸溶液、8μL 5mM EDC、8μL 5mM NHS混合孵育8～12h，得到S2-Fc溶液；
(6)将所述S3/S1-AgNPs@Ru-MOF/GCE电极浸润在10μL所述S2-Fc溶液中，混合孵育1.5～3.0h，洗涤干燥后即可得到所述目标物和氧化还原双响应适配体传感器。
4.如权利要求1-3任意一项所述的制备方法制备得到的用于定量检测鱼腥藻毒素的目标物和氧化还原双响应适配体传感器。
5.如权利要求4所述的用于定量检测鱼腥藻毒素的目标物和氧化还原双响应适配体传感器在定量检测鱼腥藻毒素中的应用。
6.一种定量检测鱼腥藻毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
A、利用权利要求1-3任意一项所述的制备方法制备得到多组目标物和氧化还原双响应适配体传感器；
B、将步骤A中的各适配体传感器分别放入系列浓度的鱼腥藻毒素水溶液中浸泡至少2.0h，然后清洗；
C、再将各适配体传感器放入过氧化氢溶液中浸泡至少2.0h，然后取出晾干；
D、分别以步骤C处理之后的适配体传感器作为工作电极、银/氯化银为参比电极、铂丝为对电极组成三电极体系，使用MPI-E型ECL分析仪在pH＝7.5的含有20mM三丙胺的0.1MPBS缓冲溶液中测试各电极体系的电化学发光信号强度；
E、以鱼腥藻毒素水溶液浓度为横坐标，电化学发光信号强度值为纵坐标构建线性曲线得出线性方程，进而可检测出待测鱼腥藻毒素的浓度。
7.根据权利要求6所述的定量检测鱼腥藻毒素的方法，其特征在于，步骤B中，鱼腥藻毒素水溶液的浓度分别为0.001mg/mL、0.01mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL；所述清洗为使用PH＝7.4的10mM Tris-HCl缓冲溶液洗涤。
8.根据权利要求6所述的定量检测鱼腥藻毒素的方法，其特征在于，步骤C中，所述过氧化氢溶液的浓度为0.1M。
9.根据权利要求6所述的定量检测鱼腥藻毒素的方法，其特征在于，步骤E中，所述线性方程为：I＝5989.07+6081.11c，其中I为电化学发光信号强度值，c为鱼腥藻毒素水溶液的浓度，单位为mg/mL；所述线性方程的线性相关系数为0.998。
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