CN113337426A

CN113337426A - 一株庆笙红球菌rycs-1及其培养方法和应用

Info

Publication number: CN113337426A
Application number: CN202110600382.1A
Authority: CN
Inventors: 邹平; 陈芊如; 李义强; 余佳敏; 李斌; 胡希好; 丁蓬勃; 赵福彬; 荆常亮
Original assignee: Shandong Qingdao Tobacco Co ltd; China National Tobacco Corp Sichuan Branch; Qingzhou Tobacco Research Institute of China National Tobacco Corp of Institute of Tobacco Research of CAAS
Current assignee: Shandong Qingdao Tobacco Co ltd; China National Tobacco Corp Sichuan Branch; Qingzhou Tobacco Research Institute of China National Tobacco Corp of Institute of Tobacco Research of CAAS
Priority date: 2021-05-31
Filing date: 2021-05-31
Publication date: 2021-09-03
Anticipated expiration: 2041-05-31
Also published as: CN113337426B

Abstract

本发明涉及一株庆笙红球菌RYCS‑1及其培养方法和应用，属于农药降解技术领域。本发明提供了一株庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)RYCS‑1，所述庆笙红球菌RYCS‑1的保藏编号为CGMCC No.22005。本发明所述庆笙红球菌RYCS‑1能够显著降低烟叶中多菌灵残留，能够明显降低烟叶中农药多菌灵最终残留水平。

Description

一株庆笙红球菌RYCS-1及其培养方法和应用

技术领域

本发明涉及农药降解技术领域，具体涉及一株庆笙红球菌(Rhodococcusqingshengii)RYCS-1及其培养方法和应用。

背景技术

多菌灵(英文通用名：Carbendazim)：

化学分子式：C₉H₉N₃O₂。相对分子质量：191.19。

该产品为无味的粉末产品，当温度达到215～217℃时开始升华，温度大于290℃时熔融，当温度达到306℃时开始分解，该产品不溶于水，微溶于丙酮、氯仿和其他的有机溶剂，可溶于无机酸及醋酸，并形成相应的盐。该产品的纯品为白色结晶固体，原药为棕色粉末状。化学性质较为稳定。结构式如式I所示：

式I多菌灵结构式

多菌灵又称棉萎灵、苯并咪哇44号，是一种广谱、内吸性杀菌剂。多菌灵对多种由真菌引起的作物病害有防治效果，作用机制是干扰脱氧核糖核酸(DNA)的合成，特别是与核苷的生成过程受阻有关。在病原物细胞分裂过程中，多菌灵可与纺锤丝的微管蛋白质相结合从而对有丝分裂进行干扰。多菌灵因其化学性质比较稳定，在环境中残留期较长，属于持久性污染物。这对哺乳动物存在一定的毒害作用，它可引发动物的内分泌紊乱，致畸致癌甚至导致染色体畸变，从而影响后代繁衍等。由多菌灵引起的环境污染和危害正日益受到关注，因此，多菌灵的残留降解问题，亟待解决。

多菌灵作为一种内吸性杀菌剂，具有高效、低毒、广谱的特点，虽然未在烟草登记，但它对烟草白粉病、根黑腐病、赤霉病等有较好的效果，生产中往往有违规在烟草上使用的情况，导致在烟草产品中检出率高，影响烟叶的品质与安全。

多菌灵的有效降解方式主要为光化学降解和生物降解，微生物可通过各种代谢途径把有机农药完全降解为氮氧化合物、CO₂和H₂O，与传统的物理、化学方法相比较，被认为是一种成本低廉、快速高效、无污染、无副作用的方法。已经报道的多菌灵降解菌有根瘤菌CN201310272243.6、微细菌 CN201510177964.8、氨鞘醇杆菌CN201810640764.5、农杆菌CN201810657242.6。通过筛选农药降解微生物来降低烟叶中的农药残留，是保证烟叶绿色安全生产最直接有效的方法。因此，分离筛选多菌灵高效降解菌株是研究多菌灵降解及其污染环境生物修复的关键所在。

发明内容

本发明的目的在于提供一株庆笙红球菌RYCS-1及其培养方法和应用。本发明所述庆笙红球菌RYCS-1能够显著降低烟叶中多菌灵残留，能够明显降低烟叶中农药多菌灵最终残留水平。

本发明提供了一株庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)RYCS-1，所述庆笙红球菌RYCS-1的保藏编号为CGMCC No.22005。

本发明还提供了上述技术方案所述庆笙红球菌RYCS-1的培养方法，包括以下步骤：

将庆笙红球菌RYCS-1接种于pH值为6.0～8.0的LB液体培养基中， 25～30℃进行培养，得到庆笙红球菌RYCS-1培养物。

优选的是，所述培养方法包括以下步骤：将庆笙红球菌RYCS-1接种于 pH值为7.0的LB液体培养基中，28℃进行培养，得到庆笙红球菌RYCS-1 培养物。

优选的是，所述庆笙红球菌RYCS-1培养物的OD₆₀₀值为1.00。

本发明还提供了上述技术方案所述庆笙红球菌RYCS-1或上述技术方案所述培养方法得到的庆笙红球菌RYCS-1培养物在降解多菌灵中的应用。

优选的是，所述应用中，当待降解的对象为液体时，OD₆₀₀值为1.0的庆笙红球菌RYCS-1培养物的使用量为液体体积的0.5～10％。

本发明还提供了上述技术方案所述庆笙红球菌RYCS-1或上述技术方案所述培养方法得到的庆笙红球菌RYCS-1培养物在降解烟叶多菌灵中的应用。

优选的是，所述应用包括将庆笙红球菌RYCS-1或庆笙红球菌RYCS-1 培养物喷施在烟草叶片上。

优选的是，所述喷施前，使用水将庆笙红球菌RYCS-1或庆笙红球菌 RYCS-1培养物稀释。

优选的是，所述稀释的倍数为20～50倍。

本发明提供了一株庆笙红球菌RYCS-1。本发明所述庆笙红球菌RYCS-1 能够显著降低烟叶中多菌灵残留，能够明显降低烟叶中农药多菌灵最终残留水平。试验结果表明，喷施菌株1.6850悬浮菌液能够显著加快田间烟叶中多菌灵降解速率，在喷施3d时，悬浮菌液对多菌灵的降解率可达71.1％，烟叶多菌灵残留量显著低于对照处理；在7d时，悬浮菌液对多菌灵的降解率达到94.1％，在21d时，悬浮菌液对多菌灵的降解率可达99.0％。

生物保藏说明

庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)RYCS-1，于2021年03月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为 CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为 CGMCCNo.22005。

附图说明

图1为本发明提供的不同培养基对菌株1.6850生长的影响图；

图2为本发明提供的温度对菌株1.6850生长的影响图；

图3为本发明提供的pH对菌株1.6850生长的影响图；

图4为本发明提供的菌株1.6850在田间对多菌灵的降解效果图。

具体实施方式

本发明提供了一株庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)RYCS-1，所述庆笙红球菌RYCS-1的保藏编号为CGMCC No.22005。本发明提供一种高效降解多菌灵的菌株庆笙红球菌RYCS-1，简称菌株1.6850。本发明所述菌株经鉴定属于Rhodococcus qingshengii，并保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22005。菌株1.6850在LB平板上的菌落形态为肉粉色、不透明、不粘稠；经16S rRNA基因序列比对分析，菌株1.6850 与Rhodococcus qingshengii JCM 15477模式菌株相似度为100％。菌株庆笙红球菌RYCS-1的16S rRNA如SEQ ID NO.1所示： aacctggctcaggacgaacgctggcggcgtgcttaacacatgcaagtcgagcggtaaggcctttcggggtacacg agcggcgaacgggtgagtaacacgtgggtgatctgccctgcacttcgggataagcctgggaaactgggtctaatac cggatatgacctcctatcgcatggtgggtggtggaaagatttatcggtgcaggatgggcccgcggcctatcagcttg ttggtggggtaatggcctaccaaggcgacgacgggtagccgacctgagagggtgaccggccacactgggactga gacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgac gccgcgtgagggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggacgaagcgcaagtgacggtacctgca gaagaagcaccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggtgcaagcgttgtccggaattactggg cgtaaagagttcgtaggcggtttgtcgcgtcgtttgtgaaaaccagcagctcaactgctggcttgcaggcgatacgg gcagacttgagtactgcaggggagactggaattcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacacc ggtggcgaaggcgggtctctgggcagtaactgacgctgaggaacgaaagcgtgggtagcgaacaggattagata ccctggtagtccacgccgtaaacggtgggcgctaggtgtgggttccttccacggaatccgtgccgtagctaacgcat taagcgccccgcctggggagtacggccgcaaggctaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggc ggagcatgtggattaattcgatgcaacgcgaagaaccttacctgggtttgacatataccggaaagctgcagagatgt ggccccccttgtggtcggtatacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgc aacgagcgcaacccctatcttatgttgccagcacgttatggtggggactcgtaagagactgccggggtcaactcgg aggaaggtggggacgacgtcaagtcatcatgccccttatgtccagggcttcacacatgctacaatggccagtacag agggctgcgagaccgtgaggtggagcgaatcccttaaagctggtctcagttcggatcggggtctgcaactcgaccc cgtgaagtcggagtcgctagtaatcgcagatcagcaacgctgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgc ccgtcacgtcatgaaagtcggtaacacccgaagccggtggcttaacccctt。

在本发明中，所述培养方法优选包括以下步骤：将庆笙红球菌RYCS-1 接种于pH值为7.0的LB液体培养基中，28℃进行培养，得到庆笙红球菌 RYCS-1培养物。本发明所述培养优选为摇床培养，转速优选为160～200 rpm/min，更优选为180rpm/min。本发明所述培养前，优选进行种子液的制备，本发明所述种子液的培养优选也使用LB液体培养基，培养基的pH值优选为6.0～8.0，更优选为7.0，培养的温度优选为25～30℃，更优选为28℃。本发明所述种子液培养优选培养至菌液OD₆₀₀值为1.0，在本发明中，所述种子液的接种量优选2～5％，更优选为3％。

在本发明中，所述庆笙红球菌RYCS-1培养物的OD₆₀₀值优选为1.00，便于后续接种时菌浓度的控制。在预实验中，培养液过0.22μm滤膜去除菌体后，得上清液，但上清液没有降解多菌灵的效果，故后续使用时，使用菌株的发酵液或者培养物破碎后的液体进行多菌灵的降解。

本发明还提供了上述技术方案所述庆笙红球菌RYCS-1或上述技术方案所述培养方法得到的庆笙红球菌RYCS-1培养物在降解多菌灵中的应用。在本发明中，所述应用中，当待降解的对象为液体时，OD₆₀₀值为1.0的庆笙红球菌RYCS-1培养物的使用量为液体体积的0.5～10％。

本发明还提供了上述技术方案所述庆笙红球菌RYCS-1或上述技术方案所述培养方法得到的庆笙红球菌RYCS-1培养物在降解烟叶多菌灵中的应用。在本发明中，所述应用优选包括将庆笙红球菌RYCS-1或庆笙红球菌 RYCS-1培养物喷施在烟草叶片上。在本发明中，所述喷施前，优选使用水将庆笙红球菌RYCS-1或庆笙红球菌RYCS-1培养物稀释。在本发明中，所述稀释的倍数优选为20～50倍，更优选为30～35倍。

下面结合具体实施例对本发明所述的一株庆笙红球菌RYCS-1及其培养方法和应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

菌株的分离与鉴定

对多菌灵残留样品进行富集筛选，对符合要求的菌株进行形态学、生理生化特征鉴定。在50.00mL含多菌灵500mg/L的富集培养液中加入5.00g 环境样品，28℃、200r/min振荡培养7d，吸取1.00mL富集液转接到100 mL多菌灵富集培养液中，继续富集培养7d，依次连续富集5次，设3次重复，在第7天测定多菌灵含量，降解效果显著的即为筛选到的降解菌。

筛选得到的菌株1.6850在LB平板上的菌落形态为肉粉色、不透明、不粘稠；经16SrRNA基因序列比对分析，菌株1.6850与Rhodococcus qingshengii JCM 15477模式菌株相似度为100％。根据以上菌落形态和16S rRNA基因序列比对结果，最终将菌株鉴定为Rhodococcus qingshengii。2021 年03月15日于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.22005，命名为庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)RYCS-1。

实施例2

不同培养基对菌株1.6850生长的影响实验

种子液的制备

配置LB液体培养基，称取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，加蒸馏水定容至1000mL。121℃高温灭菌之后挑取保存的1.6850菌体进行接种，之后于28℃、180rpm的摇床中培养至OD₆₀₀＝1.0。

选择四种不同的细菌固体培养基：酵母甘露醇肉汤(YMB)、LB液体培养基、苏通液体培养基、营养肉汤(NB)。配方为：

酵母甘露醇肉汤：酵母提取物1.0g、甘露醇10.0g、磷酸氢二钾0.5g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.1g、碳酸钙1.0g。

LB液体培养基：胰蛋白胨10.0g，酵母提取物5.0g，NaCl 10.0g。

苏通液体培养基：马铃薯浸出粉3.0g、蛋白胨10.0g、天冬酰胺4.0g、柠檬酸2.0g、磷酸氢二钾0.5g、硫酸镁·7H₂O 0.5g、柠檬酸铁铵0.05g、硫酸锌0.1mg、甘油60.0ml。

营养肉汤：牛肉粉3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g。

分别配制以上四种培养基1000ml，分别分装到250ml锥形瓶中，每种培养基设3个重复，装液量为100ml。121℃高温灭菌20min。将种子液以 3％的接种量，分别接种到每个培养基中。再将接种后的发酵培养基，放入同一摇床，于28℃、180rpm/min下培养。分别于6h、12h、24h、36h、 48h、60h、72h取样，测定其OD₆₀₀的值。由图1可知，在LB液体培养基中的降解菌株1.6850长势最好，与其他培养基有显著性的差异。因此LB液体培养基是1.6850的最佳培养基。

温度对菌株1.6850生长的影响实验

1.液体培养基的制备

配置LB液体培养基，称取胰蛋白胨20g，酵母提取物10g，NaCl 20g，加蒸馏水定容至2000mL。之后分装于8个250ml锥形瓶中，装液量为100 ml，封口后进行121℃高温灭菌。将种子液分别接种到液体培养基中，接种量为3％。

2.温度对菌株1.6850的影响实验分别将8个配制好的发酵培养基放于 10℃、15℃、20℃、25℃、28℃、30℃、35℃、42℃的摇床上进行振摇培养，转速为180rpm/min，48h后取样，测定其OD值。其结果见图2。根据结果发现，菌株的生长状况(菌浓度)随着温度的上升呈现先上升后下降的趋势，说明温度过高或过低都会影响菌株的生长，由结果可知，在25～30℃范围下，菌株生长状况较好，28℃是菌株最佳生长温度。

pH对菌株1.6850生长的影响实验

1.调节液体培养基pH

配置LB液体培养基，称取胰蛋白胨12.5g，酵母提取物6.25g，NaCl 12.5g，加蒸馏水定容至1250mL。之后分装于5个250ml锥形瓶中，装液量为100ml，分别用1.0mol·L^-1的盐酸溶液和1.0mol·L^-1的氢氧化钠溶液调节pH至5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，封口后进行121℃高温灭菌。将种子液分别接种到液体培养基中，接种量为3％。

2.pH对菌株1.6850的影响实验分别将配制好的发酵培养基放于摇床上进行振摇培养，培养条件保持一致，温度为28℃，转速为180rpm/min。 48h后取样，测定其OD值。其结果见图3。根据结果发现，菌株的生长状况(菌浓度)随着pH的增加呈现先上升后下降的趋势，说明过酸或过碱都会抑制菌株的生长，由结果可知，在pH为6.0～8.0范围下，菌株生长状况较好，选择pH7.0作为菌株最佳生长pH。

由以上图2和图3可知，菌株1.6850的培养条件为温度为25～30℃，pH 为6.0～8.0。菌株最佳培养条件为28℃、pH＝7.0。在此培养条件下，菌株能够快速高效的生长。这为进一步研发降解菌剂奠定了基础。

实施例3

实验室降解实验

1.降解菌液的制备配置LB液体培养基，称取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，加蒸馏水定容至1000mL。121℃高温灭菌之后挑取保存的1.6850菌体进行接种，之后于28℃、180rpm的摇床中培养至 OD₆₀₀＝1.0。

2.反应体系的建立将1000mg·L^-1的多菌灵液体标准品用分析纯的甲醇溶液稀释，得到100mg·L^-1的多菌灵备用。之后在50ml离心管中建立5 mg·L^-1农药和不同浓度降解菌的反应体系。菌体发酵液的接种量分别设为 0.5％、1％、3％和10％。为使农药最终浓度达到5mg·L^-1，建立10ml液体体系如下：0.5％(此处指的是OD₆₀₀＝1.0菌液的体积与10ml液体体系总体积的比值，即0.05ml/10ml，下文发酵液和上清液前的百分含量也是这个含义)发酵液0.05ml+农药0.5ml+纯水9.45ml；1％发酵液0.1ml+农药 0.5ml+纯水9.4ml；3％发酵液0.3ml+农药0.5ml+纯水9.2ml；10％发酵液1ml+农药0.5ml+纯水8.5ml；对照实验选择将菌体发酵液替换为对应浓度的菌体上清液(预实验研究了上清液没有降解效果)，其他条件保持不变。上清液通过将菌体发酵液用0.22μm的水膜进行过滤而得到。即： 0.5％上清液0.05ml+农药0.5ml+纯水9.45ml；1％上清液0.1ml+农药 0.5ml+纯水8.5ml；3％上清液0.3ml+农药0.5ml+纯水9.2ml；10％上清液1ml+农药0.5ml+纯水8.5ml。盖上盖子，将液体体系充分混匀，静置在通风处，分别于2h、6h、12h、24h、36h、48h、72h后取样进行净化提取，每次取样重复三次。

3.净化、提取在10ml试样中，加入20ml纯乙腈。2500rpm/min涡旋提取2min。加入盐包，再涡旋2min，4000r/min离心5min。取上清液 1.5ml于PSA净化小柱中，净化。再次涡旋2min，10000r/min离心3～5min，取上清液。经0.22μm过滤到样品瓶中，供HPLC-MS/MS测定。

4.超高效液相色谱检测条件ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱 (50.0mm×2.1mmi.d.，1.7μm)；温度25℃；流速1.00mL/min；检测波长280nm；进样量10μl；流动相比例及组成：流动相A：甲醇，流动相B：水。甲醇/水(7:3，V:V)。

降解率％＝(对照中多菌灵残留量-1.6850作用后多菌灵残留量)/对照中多菌灵残留量×100％

降解率结果见表1。

表1反应体系中多菌灵残留降解率

由表1可知，庆生红球菌Rhodococcus qingshengii在接种时间12h内，对多菌灵的降解效果不显著；24h后效果开始显现，3％和10％处理组对多菌灵的降解效果较好，最高可达83.66％。24～36h内，10％处理组降解效果高于3％处理组，36h后3％处理组降解效果高于0.5％、1％和10％处理组。 72h时，3％处理组对多菌灵的降解效果最高，降解率高达83.66％。

实施例4

烟叶中多菌灵降解效果

按实施例3的培养条件震荡培养得到OD₆₀₀为1.00的菌株1.6850菌液，将菌液用超声破碎仪进行细胞破碎后离心得破碎菌体悬液。每种处理菌液以 3.00％接种量溶于清水，得到稀释后的菌液，备用。

在烟叶采收前21d按照有效成分100g a.i.的多菌灵进行施药。施药后 24h，均匀喷洒上述稀释后的菌液，空白对照喷施等量清水。施药后按时随机采摘不同部位烟叶，每个处理采收上、中、下部位烟叶各10片，切碎缩分，四分法留样200g，同步采集空白烟叶作为对照，-20℃保存，用于农药残留检测。

由图4和表2可见，喷施菌株1.6850悬浮菌液能够显著加快田间烟叶中多菌灵降解速率，在喷施3d时，悬浮菌液对多菌灵的降解率可达71.1％，对照组中，多菌灵自然降解率为60.3％，烟叶多菌灵残留量显著低于对照处理；在7d时，悬浮菌液对多菌灵的降解率达到94.1％，对照组中，多菌灵自然降解率为80.4％。在21d时，悬浮菌液对多菌灵的降解率可达99.0％。可见，降解菌在施药后短期(3～7天)即可达到快速降解效果。

表2菌株1.6850在田间对多菌灵降解率的影响

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 中国农业科学院烟草研究所（中国烟草总公司青州烟草研究所）

中国烟草总公司四川省公司

山东青岛烟草有限公司

<120> 一株庆笙红球菌RYCS-1及其培养方法和应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1411

<212> DNA

<213> 庆笙红球菌RYCS-1(Rhodococcus qingshengii RYCS-1)

<400> 1

aacctggctc aggacgaacg ctggcggcgt gcttaacaca tgcaagtcga gcggtaaggc 60

ctttcggggt acacgagcgg cgaacgggtg agtaacacgt gggtgatctg ccctgcactt 120

cgggataagc ctgggaaact gggtctaata ccggatatga cctcctatcg catggtgggt 180

ggtggaaaga tttatcggtg caggatgggc ccgcggccta tcagcttgtt ggtggggtaa 240

tggcctacca aggcgacgac gggtagccga cctgagaggg tgaccggcca cactgggact 300

gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattgcaca atgggcgaaa 360

gcctgatgca gcgacgccgc gtgagggatg acggccttcg ggttgtaaac ctctttcagc 420

agggacgaag cgcaagtgac ggtacctgca gaagaagcac cggctaacta cgtgccagca 480

gccgcggtaa tacgtagggt gcaagcgttg tccggaatta ctgggcgtaa agagttcgta 540

ggcggtttgt cgcgtcgttt gtgaaaacca gcagctcaac tgctggcttg caggcgatac 600

gggcagactt gagtactgca ggggagactg gaattcctgg tgtagcggtg aaatgcgcag 660

atatcaggag gaacaccggt ggcgaaggcg ggtctctggg cagtaactga cgctgaggaa 720

cgaaagcgtg ggtagcgaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacggtggg 780

cgctaggtgt gggttccttc cacggaatcc gtgccgtagc taacgcatta agcgccccgc 840

ctggggagta cggccgcaag gctaaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg 900

cggagcatgt ggattaattc gatgcaacgc gaagaacctt acctgggttt gacatatacc 960

ggaaagctgc agagatgtgg ccccccttgt ggtcggtata caggtggtgc atggctgtcg 1020

tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ctatcttatg 1080

ttgccagcac gttatggtgg ggactcgtaa gagactgccg gggtcaactc ggaggaaggt 1140

ggggacgacg tcaagtcatc atgcccctta tgtccagggc ttcacacatg ctacaatggc 1200

cagtacagag ggctgcgaga ccgtgaggtg gagcgaatcc cttaaagctg gtctcagttc 1260

ggatcggggt ctgcaactcg accccgtgaa gtcggagtcg ctagtaatcg cagatcagca 1320

acgctgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacgtc atgaaagtcg 1380

gtaacacccg aagccggtgg cttaacccct t 1411

Claims

1.一株庆笙红球菌(Rhodococcus qingshengii)RYCS-1，所述庆笙红球菌RYCS-1的保藏编号为CGMCC No.22005。

2.权利要求1所述庆笙红球菌RYCS-1的培养方法，包括以下步骤：

将庆笙红球菌RYCS-1接种于pH值为6.0～8.0的LB液体培养基中，25～30℃进行培养，得到庆笙红球菌RYCS-1培养物。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：将庆笙红球菌RYCS-1接种于pH值为7.0的LB液体培养基中，28℃进行培养，得到庆笙红球菌RYCS-1培养物。

4.根据权利要求2或3所述的培养方法，其特征在于，所述庆笙红球菌RYCS-1培养物的OD₆₀₀值为1.00。

5.权利要求1所述庆笙红球菌RYCS-1或权利要求2～4任一项所述培养方法得到的庆笙红球菌RYCS-1培养物在降解多菌灵中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用中，当待降解的对象为液体时，OD₆₀₀值为1.0的庆笙红球菌RYCS-1培养物的使用量为液体体积的0.5～10％。

7.权利要求1所述庆笙红球菌RYCS-1或权利要求2或3所述培养方法得到的庆笙红球菌RYCS-1培养物在降解烟叶多菌灵中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括将庆笙红球菌RYCS-1或庆笙红球菌RYCS-1培养物喷施在烟草叶片上。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述喷施前，使用水将庆笙红球菌RYCS-1或庆笙红球菌RYCS-1培养物稀释。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述稀释的倍数为20～50倍。