CN113336334A - 一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用 - Google Patents

一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113336334A
CN113336334A CN202110598575.8A CN202110598575A CN113336334A CN 113336334 A CN113336334 A CN 113336334A CN 202110598575 A CN202110598575 A CN 202110598575A CN 113336334 A CN113336334 A CN 113336334A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus firmus
phenanthrene
fluorene
polycyclic aromatic
degradation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110598575.8A
Other languages
English (en)
Inventor
吴洁婷
许琪
赵若帆
朱辰琪
徐丽丽
张驰
包红旭
姜磊
邵谱蓉
周禹含
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Liaoning University
Original Assignee
Liaoning University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Liaoning University filed Critical Liaoning University
Priority to CN202110598575.8A priority Critical patent/CN113336334A/zh
Publication of CN113336334A publication Critical patent/CN113336334A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00—Nature of the contaminant
    • C02F2101/30—Organic compounds
    • C02F2101/32—Hydrocarbons, e.g. oil
    • C02F2101/327—Polyaromatic Hydrocarbons [PAH's]

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及坚强芽孢杆菌及其在四种多环芳烃降解中的应用，所述的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)，购买于“中国普通微生物菌种保藏管理中心”，保藏号为CGMCC【1.16095】。所选多环芳烃为萘、蒽、菲、芴。结果表明坚强芽孢杆菌能在有氧条件下利用四种多环芳烃作为唯一碳源进行生长，坚强芽孢杆菌对菲和芴降解性能良好，坚强芽孢杆菌菲和芴的降解率分别为54.66％和54.22％。本发明筛选的菌株可为开展多种多环芳烃降解的降解机理研究提供新的种质资源。

Description

一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用
技术领域
本发明属于环境有机污染物生物处理技术领域，尤其是涉及一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用。
背景技术
作为促进国家经济和社会发展的重要能源，石油在为人类带来利益的同时也造成了严重的环境污染，而石油芳香烃物质中以多环芳香烃(PAHs)对环境污染威胁最大，建立高效、环保的方法对其进行降解一直是一个重要的研究课题。近年来，微生物降解污染物因其良好的环境和经济效益而受到人们的关注，本发明选取了具备降解多环芳烃潜力的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)，利用其对萘、蒽、菲、芴四种多环芳烃进行降解实验以确定其降解能力，以期为开展多种多环芳烃降解的降解机理研究提供新的种质资源。
发明内容
本发明是为了克服现有多环芳烃降解菌群种类不明确及缺少降解率的问题，从中国普通微生物菌种保藏管理中心(http://www.cgmcc.net/)购买了一株分离自青海油田采油三厂的坚强芽孢杆菌Bacillus firmus)，保藏号为CGMCC【1.16095】，利用其进行多环芳烃降解实验，证实该菌株对萘、蒽、菲、芴四种多环芳烃均具有较高的降解效率，降解效果良好且环保。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种坚强芽孢杆菌在降解多环芳香烃中的应用,所述的坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)，购买于“中国普通微生物菌种保藏管理中心”，保藏号为CGMCC【1.16095】。
上述的应用，所述的多环芳香烃是萘、蒽、菲、芴中的一种或多种。
本发明所提供的多环芳烃降解菌分离自青海油田采油三厂，在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，编号为CGMCC【1.16095】，该菌为坚强芽孢杆菌Bacillus firmus，革兰氏阳性。
坚强芽孢杆菌能利用萘、蒽、菲、芴作为唯一碳源和能源生长繁殖，在纯培养条件下，坚强芽孢杆菌对无机盐培养基中50mg/L的菲和芴的降解率均在50％以上。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。
实施例1坚强芽孢杆菌在多环芳烃体系中的生长性能
①用75％酒精脱脂棉对装有坚强芽孢杆菌冻干菌体安瓿外表面进行消毒后，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热的安瓿顶端使之破裂(应避免过多水蒸汽影响菌种复苏)，用镊子敲下已经破裂的安瓿顶端，用无菌吸管吸取约0.3mL对应的牛肉膏蛋白胨液体培养基(表1，不加琼脂)，加入到安瓿内，轻轻震荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌悬液，移植于牛肉膏蛋白胨培养基(表1)试管中，置于30℃恒温培养至长出菌落，说明菌株活化成功。活化成功的菌株通过传代培养。
表1实验所用菌株及活化培养基
Figure BDA0003092096940000021
②将活化成功的菌种接入LB富集培养基，用生物封口膜包好瓶口隔绝杂菌，置于30℃、150r/min的恒温振荡培养箱内培养16-20h至对数期。
③采用分析天平准确称取50mgPAHs标准品(萘、蒽、菲、芴)，放入洁净的烧杯中，用色谱级甲醇溶解，将溶液移入100mL规格的容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，摇匀，即得到500mg/L的PAHs(萘、蒽、菲、芴)的母液。
④采用紫外分光光度计确定实验所用萘、蒽、菲、芴的吸收波长。随后用紫外分光光度计分别测得浓度为2、4、6、8和10mg/L时的四种PAHs的吸光度值，以PAHs标准溶液的浓度值为X轴、对应紫外吸光度值为Y轴得到标准曲线，萘、蒽、菲和芴标准曲线回归方程及R2分别如下：
y＝0.0111*x-0.0102，R2＝0.9971(萘)
y＝0.0076*x+0.0896，R2＝0.9952(蒽)
y＝0.0102*x+0.0028，R2＝0.9985(菲)
y＝0.0099*x-0.0056，R2＝0.9923(芴)
各式的R2均大于0.99，表明线性拟合程度良好，能准确定量分析。
⑤用0.22μm有机滤膜将四种母液过滤除菌，放置通风橱吹风至溶剂挥发完全，之后按浓度比例加入液体基础盐培养基，培养体系中四种PAHs的最终浓度为50mg/L。随后在无菌工作台用无机盐培养基对步骤②中培养至对数期(16-20h)的菌株进行稀释，测定初始OD600值并分别接种至培养体系中，放入30℃恒温摇床中150rpm震荡培养7天。其间，注意查看降解情况，若发现有黏附于三角瓶壁上的PAHs，要摇晃三角瓶使瓶壁上的PAHs溶于降解体系中，对照试验为不加入多环芳烃母液的含菌基础盐培养基。每组实验设置三组平行。
⑥培养7天后逐一取样至比色皿，用分光光度计测定OD600，通过生长量初步判断降解情况。坚强芽孢杆菌在分别含有四种PAHs的无机盐培养基中的生长量如表2。
表2坚强芽孢杆菌在含有四种PAHs的无机盐培养基中的生长量
Figure BDA0003092096940000031
由于在培养基中无机盐属于唯一碳源，PAHs属于唯一营养物质。因此坚强芽孢杆菌的生长营养来源为其中含有的多环芳烃，由表2可知，培养期间菌株在所有多环芳烃体系的OD600均有所上升。
本实施例说明坚强芽孢杆菌可利用四种多环芳烃作为唯一碳源进行生长。
实施例2坚强芽孢杆菌对体系中多环芳烃的降解率
用乙酸乙酯对实施例1中培养7天后的培养液进行萃取，4000rpm/min、4℃下离心10min，取上清液用无水硫酸钠过滤后稀释一定倍数测定对应波长下的吸光度，取三组样品的吸光度平均值分别带入标准曲线回归方程，计算得到降解后四种PAHs剩余浓度及降解率，结果如表3。由表3可知，四种多环芳烃的非生物降解作用非常小，坚强芽孢杆菌对菲和芴的降解率均在50％以上。
表3降解体系剩余PAHs浓度及其降解率
Figure BDA0003092096940000032
Figure BDA0003092096940000041
本实施例说明坚强芽孢杆菌对四种多环芳烃都具备降解能力，其中菲和芴能够得到较高水平的降解，坚强芽孢杆菌菲和芴的降解率分别为54.66％和54.22％。

Claims (2)

1.一种坚强芽孢杆菌在降解多环芳香烃中的应用,所述的坚强芽孢杆菌(Bacillusfirmus)，购买于“中国普通微生物菌种保藏管理中心”，保藏号为CGMCC【1.16095】。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的多环芳香烃是萘、蒽、菲、芴中的一种或多种。
CN202110598575.8A 2021-05-31 2021-05-31 一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用 Pending CN113336334A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110598575.8A CN113336334A (zh) 2021-05-31 2021-05-31 一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110598575.8A CN113336334A (zh) 2021-05-31 2021-05-31 一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113336334A true CN113336334A (zh) 2021-09-03

Family

ID=77472310

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110598575.8A Pending CN113336334A (zh) 2021-05-31 2021-05-31 一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113336334A (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1844361A (zh) * 2006-03-08 2006-10-11 华南理工大学 一株多环芳烃降解菌及其应用
CN102174446A (zh) * 2011-02-28 2011-09-07 北京大学 一种可高效降解苯并[a]芘的短小芽孢杆菌及其应用
WO2012160526A2 (en) * 2011-05-23 2012-11-29 Ofir Menashe Formulations of microorganism comprising particles and uses of same
CN103087948A (zh) * 2013-01-04 2013-05-08 北京化工大学 能够降解多环芳烃的巨大芽孢杆菌及其应用
CN104195090A (zh) * 2014-09-12 2014-12-10 范鸿仁 一种复合微生物制剂及其在废水处理中的应用
CN107893047A (zh) * 2018-01-03 2018-04-10 长江大学 一株石油芳香烃降解菌及其应用
CN109182202A (zh) * 2018-09-30 2019-01-11 中北大学 一种芽孢杆菌ht2及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1844361A (zh) * 2006-03-08 2006-10-11 华南理工大学 一株多环芳烃降解菌及其应用
CN102174446A (zh) * 2011-02-28 2011-09-07 北京大学 一种可高效降解苯并[a]芘的短小芽孢杆菌及其应用
WO2012160526A2 (en) * 2011-05-23 2012-11-29 Ofir Menashe Formulations of microorganism comprising particles and uses of same
CN103087948A (zh) * 2013-01-04 2013-05-08 北京化工大学 能够降解多环芳烃的巨大芽孢杆菌及其应用
CN104195090A (zh) * 2014-09-12 2014-12-10 范鸿仁 一种复合微生物制剂及其在废水处理中的应用
CN107893047A (zh) * 2018-01-03 2018-04-10 长江大学 一株石油芳香烃降解菌及其应用
CN109182202A (zh) * 2018-09-30 2019-01-11 中北大学 一种芽孢杆菌ht2及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
武凤霞: "《菲降解细菌的分离鉴定及其降解效果研究》", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士）工程科技Ⅰ辑》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102344899B (zh) 一种有机物降解复合菌剂的制备方法及应用
CN103789232B (zh) 一株高效处理含氮污水的施氏假单胞菌及其应用
CN112980746B (zh) 一株石油降解菌及其应用
CN106434470B (zh) 一种多环芳烃降解菌及其应用
CN106635908B (zh) 一种海洋石油降解菌、菌剂及其应用
CN106635909B (zh) 一种原油降解混合菌、菌剂及其应用
CN103627653A (zh) 一种赤红球菌菌株及其在含有机污染物的废水处理中的应用
CN113234634A (zh) 一种食醚红球菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用
CN114540226B (zh) 石油污染土壤中多环芳烃降解菌株ljb-25及其菌剂和应用
CN111733098B (zh) 一种芽孢杆菌在低温降解石油烃中的应用
Child et al. Pyrene mineralization by Mycobacterium sp. strain KMS in a barley rhizosphere
CN115786179A (zh) 降解邻二氯苯的菌株及其应用
CN114107092B (zh) 一株降解邻苯二甲酸酯的植物内生菌戈登氏菌l191及其应用
CN106591169A (zh) 一种n-甲基吡咯烷酮降解芽孢杆菌nmp-2及其应用
CN110317745B (zh) Ralstonia pickettii M1菌株及其在降解菲和联苯中的应用
CN101880642B (zh) 具有氯苯降解能力的皮式罗尔斯顿菌h2及其应用
CN104805018B (zh) 一株可同时降解多种邻苯二甲酸酯的壤霉菌(Agromyces sp．)MT‑E
CN101935626B (zh) 一种二甲基甲酰胺降解菌及其生产的菌剂
CN113336334A (zh) 一种坚强芽孢杆菌及其在降解萘、蒽、菲、芴中的应用
Nahar et al. Toxic effects of toluene on the growth of activated sludge bacteria
CN113755371B (zh) 菌株A.seifertii P52-1及其在降解多氯联苯中的应用
CN104195066B (zh) 一种偶氮染料金橙ii降解菌及其生产的菌剂
CN106635873B (zh) 一株接合有二噁英降解质粒的铜绿假单胞菌及其培养方法与应用
CN106434467B (zh) 一种青霉素废水高效处理菌剂及其制备方法和应用
RU2312719C1 (ru) Консорциум штаммов углеводородокисляющих бактерий pseudomonas aeruginosa нд к3-1 и pseudomonas fluorescens нд к3-2 в качестве деструктора нефтепродуктов и способ очистки нефтезагрязненных подземных вод

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210903

RJ01 Rejection of invention patent application after publication