CN113332301A - 桔梗皂苷d2在制备抗肝癌细胞转移药物中的应用 - Google Patents

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房金波
韩继成
朱羿龙
白冰
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Changchun University of Chinese Medicine
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Abstract

桔梗皂苷D2在制备抗肝癌细胞转移药物中的应用，涉及抗癌药物领域。本发明通过Transwell细胞迁移试验和划痕实验测定了桔梗皂苷D2对细胞迁移能力的影响，通过试验证实，桔梗皂苷D2能够显著抑制人肝癌细胞株HepG‑2和MHCCLM3的运动和迁移，具有显著的抑制肿瘤细胞运动和迁移的能力。桔梗皂苷D2显示出了良好的抗肝癌细胞转移活性，能够用于制备抗肝癌细胞转移药物，具有良好的开发应用前景。在本发明前，尚未见应用桔梗皂苷D2防治肝癌细胞转移方面的报道。本发明涉及的桔梗皂苷D2在制备抗肝癌细胞转移药物中的用途属于首次公开。

Description

桔梗皂苷D2在制备抗肝癌细胞转移药物中的应用
技术领域
本发明涉及抗癌药物技术领域，尤其涉及桔梗皂苷D2在制备抗肝癌细胞转移药物中的应用。
背景技术
癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一，每年有大量的人死于癌症。癌症即恶性肿瘤，是多种相关疾病的统称。癌症的形成是由于细胞发生突变后会不断的分裂，最终不受任何控制导致恶性肿瘤的形成。癌症细胞能够侵犯和破坏相邻正常的细胞和组织，并且，癌症细胞能够穿过肿瘤细胞进行人体的血液、淋巴系统等，它从原发部位转移到其他器官从而形成新的肿瘤，这就人们常说的癌细胞的转移，多数癌症是根据它们起始的器官或细胞类型来命名的。
癌症细胞转移是恶性肿瘤治疗失败和患者死亡的主要原因，而转移是恶性肿瘤的基本生物特征。癌症细胞转移过程主要包括：细胞从原发灶脱落，侵入血管或淋巴管，迁移、粘附与适宜部位诱导肿瘤血管形成，对抗宿主抗肿瘤免疫，最终在远处形成转移灶。经现有研究表明，癌症细胞的浸润与转移是多种基因、相关因子、酶类和蛋白质等的共同作用下实现的。所以说，癌症细胞转移是一个多步骤、多阶段、多途径、涉及多基因变化的一系列复杂过程。
桔梗皂苷D2是从桔梗中提取的新型皂苷类化合物(Choi CY,et al.Aqueousextract isolated from Platycodon grandiflorum elicits the release of nitricoxide and tumor necrosis factor-alpha from murine macrophages[J].International Immunopharmacology,2001,1(6):1141-1151.)。目前，已公开的桔梗皂苷D2的用途主要包括：抗炎(Wang Z,et al.Anti-InflammatoryActivities ofCompoundsIsolated from the Rhizome of Anemarrhena asphodeloides[J].Molecules,2018,23(10).)、抗丙型肝炎病毒(Kim J-W,et al.Triterpenoid Saponins Isolated fromPlatycodon grandiflorum Inhibit Hepatitis C Virus Replication[J].Evidence-Based ComplementaryAndAlternative Medicine,2013,2013.)、抗乙型肝炎病毒(Xie Y,et al.Platycodin D2 Improves Specific Cellular and Humoral Responses toHepatitis BSurfaceAntigen in Mice[J].Chemistry&Biodiversity,2010,7(1):178-185.)。而桔梗皂苷D2在抗癌领域中的应用尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种桔梗皂苷D2的新用途，具体涉及桔梗皂苷D2在制备抗肝癌细胞转移药物中的应用。
本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
本发明提供一种桔梗皂苷D2在制备抗肝癌细胞转移药物中的应用。
作为优选的实施方式，所述桔梗皂苷D2的浓度为10-20μM。
作为更优选的实施方式，所述桔梗皂苷D2的浓度为20μM。
作为优选的实施方式，所述桔梗皂苷D2的结构式如下所示：
Figure BDA0003103252000000021
作为优选的实施方式，所述桔梗皂苷D2通过抑制人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3的迁移发挥抗肝癌细胞转移活性。
本发明的有益效果是：
本发明通过Transwell细胞迁移试验和划痕实验测定了桔梗皂苷D2对细胞迁移能力的影响，通过试验证实，桔梗皂苷D2能够显著抑制人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3的运动和迁移，具有显著的抑制肿瘤细胞运动和迁移的能力。桔梗皂苷D2显示出了良好的抗肝癌细胞转移活性，能够用于制备抗肝癌细胞转移药物，具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1为实施例1中Transwell细胞迁移试验测定桔梗皂苷D2对肿瘤细胞迁移能力的影响结果。
图2为实施例1中Transwell细胞迁移试验测定桔梗皂苷D2对肿瘤细胞迁移能力的影响结果。
图3为实施例2中划痕实验检测桔梗皂苷D2对肿瘤细胞迁移能力的影响结果。
图4为实施例2中划痕实验检测桔梗皂苷D2对肿瘤细胞迁移能力的影响结果。
具体实施方式
本发明的桔梗皂苷D2在制备抗肝癌细胞转移药物中的应用。
优选的，桔梗皂苷D2的浓度为10-20μM。
更优选的桔梗皂苷D2的浓度为20μM。
优选的，桔梗皂苷D2的结构式如下所示：
Figure BDA0003103252000000041
优选的，桔梗皂苷D2通过抑制人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3的迁移发挥抗肝癌细胞转移活性。
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
材料来源：
桔梗皂苷D2购自成都普瑞法科技开发有限公司。
人肝癌细胞株HepG-2购自：北京北纳创联生物技术研究院。
人肝癌细胞株MHCCLM3购自：北京北纳创联生物技术研究院。
实施例1Transwell细胞迁移试验测定桔梗皂苷D2对肿瘤细胞迁移能力的影响
方法：消化处于对数生长期的人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3。计数并用完全细胞培养液调整细胞浓度至1×106个/ml，按500μl/孔接种于24孔细胞培养板(即5×104个/孔)，待细胞贴壁后(24h左右)，吸弃培养液，用Hank’s液洗涤2次。试验分为空白对照组和药物处理组。空白对照组更换含有10％胎牛血清的DMEM培养基；药物处理组更换含有浓度为10μM和20μM的桔梗皂苷D2培养基。培养48h后，准备一个新的24孔板，孔内加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基，将transwell小室放入孔内备用，将各个实验孔内的细胞消化并置于EP管内，3000rpm/min离心5min，弃上清，每个EP管内加入200μL无胎牛血清的DMEM培养基，将细胞轻轻吹匀后放入transwell小室内，37℃，5％CO2的温箱孵育24h。随后用棉签小心擦去陌上表面未发生迁移的细胞，迁移至膜下表面的细胞经4％多聚甲醛固定后用结晶紫染色。随机选取3个高倍镜视野技术迁移细胞数。试验重复3次。按以下公式计算细胞迁移率。
细胞迁移率＝(实验组细胞数平均值/空白对照组细胞数平均值)×100％。
结果：如图1和图2所示，桔梗皂苷D2对人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3有剂量依赖性的抑制迁移的作用。而且对MHCCLM3细胞的抑制迁移作用更明显，与空白对照组比较迁移细胞相对百分数显著降低(P＜0.05)。实验数据见表1。
表1 Transwell法检测桔梗皂苷D2对HepG-2和MHCCLM3细胞迁移的影响(n＝3x±s)
组别 HepG-2(％) MHCCLM3(％)
空白对照 100±2.74 100±2.58
10μM 57.94±0.58 24.35±1.07
20μM 39.32±1.25 1.43±0.21
结论：由上述实验证实，桔梗皂苷D2能够显著抑制人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3的迁移。由此说明，桔梗皂苷D2具有抗肝癌细胞转移活性，能够应用于制备抗肝癌细胞转移药物。
实施例2划痕实验检测桔梗皂苷D2对肿瘤细胞迁移能力的影响
方法：消化处于对数生长期的人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3。计数并用完全细胞培养液调整细胞浓度至5×105个/ml，按2ml/孔接种于6孔细胞培养板(即1×106个/孔)，待细胞贴壁后(24h左右)，吸弃培养液，用Hank’s液洗涤2次。试验分为空白对照组和药物处理组。空白对照组更换含有10％胎牛血清的DMEM培养基；药物处理组更换含浓度为10μM和20μM的桔梗皂苷D2培养基。24h后，吸净孔内的培养液，用无菌枪头在细胞层表面从上到下轻轻划一条线性痕迹，用无菌PBS轻轻冲洗，冲洗后置于显微镜下测量其划痕宽度(0h)。之后分别在12h、24h和48h后，吸出孔内的培养液，无菌PBS冲洗并置于显微镜下测量其划痕宽度。按以下公式计算细胞迁移率。
细胞迁移率＝(0h划痕宽度－各个时间点划痕宽度)/0h划痕宽度×100％
结果：如图2和图3所示，桔梗皂苷D2对人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3有剂量依赖性的抑制迁移的作用。而且对MHCCLM3细胞的抑制迁移作用更明显，与空白对照组比较迁移细胞相对百分数显著降低(P＜0.05)。实验数据见表2。
表2划痕实验检测桔梗皂苷D2对HepG-2和MHCCLM3细胞迁移的影响(n＝3x±s)
组别 HepG-2(％) MHCCLM3(％)
空白对照 19.25±3.54 25.28±4.04
10μM 6.72±0.74 6.12±0.67
20μM 5.39±0.33 4.05±0.52
结论：由上述实验证实，桔梗皂苷D2能够显著抑制人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3的迁移。由此说明，桔梗皂苷D2具有抗肝癌细胞转移活性，能够应用于制备抗肝癌细胞转移药物。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，但这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (5)

1.桔梗皂苷D2在制备抗肝癌细胞转移药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述桔梗皂苷D2的浓度为10-20μM。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述桔梗皂苷D2的浓度为20μM。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述桔梗皂苷D2的结构式如下所示：
Figure FDA0003103251990000011
。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述桔梗皂苷D2通过抑制人肝癌细胞株HepG-2和MHCCLM3的迁移发挥抗肝癌细胞转移活性。
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CN101904890A (zh) * 2009-06-02 2010-12-08 中国医学科学院药用植物研究所 桔梗活性部位的制备、应用及质量控制检测方法
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